CN107523622A - 一种粘质沙雷氏菌的检测引物及荧光定量pcr检测方法 - Google Patents
一种粘质沙雷氏菌的检测引物及荧光定量pcr检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107523622A CN107523622A CN201710812437.9A CN201710812437A CN107523622A CN 107523622 A CN107523622 A CN 107523622A CN 201710812437 A CN201710812437 A CN 201710812437A CN 107523622 A CN107523622 A CN 107523622A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- serratia marcescens
- standard
- value
- primer
- quantitative pcr
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6851—Quantitative amplification
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供一种粘质沙雷氏菌荧光定量PCR检测引物和方法。该引物核苷酸序列分别为:TGCCTGGAAAGCGGCGATGG和CGCCAGCTCGTCGTTGTGGT;该检测方法包括:1)提取待测样品DNA;2)以该DNA为模板,使用上述引物,采用荧光定量PCR方法扩增粘质沙雷氏菌,且在61℃退火阶段收集荧光值Ct样品值;3)根据模式细菌浓度为×102、×103、×104、×105、×106、×107时对应的Ct标准值,建立粘质沙雷氏菌的细菌数lg标准与Ct标准值的标准曲线,并根据Ct样品值,在标准曲线上确定样品中的粘质沙雷氏菌的数量。本发明提供的引物特异性强、灵敏度高,其检测限可达到×102cfu/mL,检测方法快速准确、耗时短。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域,具体涉及一种检测原料乳中粘质沙雷氏菌的实时荧光定量PCR方法。
背景技术
粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),是革兰氏阴性兼性厌氧杆菌,亦称灵杆菌、神灵杆菌,属于肠杆菌科。菌体较小,约0.7um。菌株呈球形的短杆状,无荚膜,无芽孢,周边有鞭毛,具有一定运动能力。菌落整齐,一般为易流动的粘稠液体状,且多为血红色,有恶臭味。S.marcescens广泛存在于水、土壤和食品中,是一种弱毒力机会致病菌,当机体免疫功能低下时就会引起肺炎、败血症、脑膜炎等各种疾病,并且能对很多抗生素产生耐药性。作为原料乳中常见的嗜冷菌,S.marcescens能产生耐热水解酶,将原料乳进行常规热处理后,这些酶仍然能够保持很高的活性。S.marcescens分泌的蛋白酶可以分解酪蛋白,产生凝胶结构,进而导致原料乳变质。蛋白水解产物会导致原料乳变味,产生苦味、异味、酵母味等。此外S.marcescens分泌的脂肪酶最适反应温度为40-45℃,最适pH为7.0-7.5。在50℃保温1h仍能保持80%的酶活力。脂肪酶在分解原料乳脂肪的同时,会释放出一些游离脂肪酸,进而导致乳制品腐臭等不洁味。由此可见,粘质沙雷氏菌是影响食品工业发展的重要因素之一,快速、准确地检测食品中粘质沙雷氏菌含量对提高乳制品品质,加强企业经济效益有战略意义。
由于嗜冷菌的耐冷机制很复杂,所以对嗜冷菌的检测与计数还有一定困难。目前,嗜冷菌计数最常用的方法是低温培养法(李琳,冷凝,杜明等.嗜冷菌快速检测方法研究进展[J].中国乳品工业,2013,41(1):25-31.)。该方法只能对总菌数计数或者使用选择培养基对某种特定菌计数,缺少针对性和全面性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种粘质沙雷氏菌荧光定量PCR引物及检测方法,以灵敏度高、特异性强、快速准确地定量检测食品中的粘质沙雷氏菌,如原料乳中、乳制品中的粘质沙雷氏菌,为食品厂在生产上有效控制粘质沙雷氏菌的数量,减少其对产品品质的危害,提高产品质量提供理论依据,对保障食品安全具有重要意义。
本发明的基本原理是,通过基因组比对,寻找粘质沙雷氏菌中的特异性识别序列,以此设计引物,进行荧光定量PCR检测食品中的粘质沙雷氏菌。采用SYBRGreenⅠ嵌合荧光法进行检测,灵敏度及特异性好。
为了实现以上目的,本发明的技术方案如下:
本发明提供了一种粘质沙雷氏菌荧光定量PCR检测引物,其核苷酸序列如下:
SM-F:TGCCTGGAAAGCGGCGATGG;
SM-R:CGCCAGCTCGTCGTTGTGGT。
本发明提供了一种粘质沙雷氏菌荧光定量PCR检测方法,包括以下步骤:
1)提取待测样品中的DNA;
2)以步骤1)中提取的DNA为模板,采用荧光定量PCR方法扩增粘质沙雷氏菌,其中所使用的引物的核苷酸序列如下:
SM-F:TGCCTGGAAAGCGGCGATGG;
SM-R:CGCCAGCTCGTCGTTGTGGT;
在61℃退火阶段收集荧光值,即Ct样品值,并在上述扩增条件后增加60℃至95℃的融解曲线分析,以确定产物是否单一,进而反映引物的特异性;
可选地,所述的荧光定量PCR方法中使用的荧光染料为SYBR Green I。
3)标准曲线的绘制与检测结果判定:根据所选用的模式细菌在其浓度为×102、×103、×104、×105、×106、×107时对应的Ct标准值,建立粘质沙雷氏菌的细菌数lg标准(cfu/mL)与Ct标准值的标准曲线,并且将步骤2)所得的待测样本Ct样品值,在标准曲线上确定样品中的粘质沙雷氏菌的数量。
可选地,上述检测方法具体包括以下步骤:
1)提取待测样品中的DNA;
2)以步骤1)中提取的DNA为模板,采用基于SYBR Green I的荧光定量PCR方法扩增粘质沙雷氏菌,其中所使用的引物的核苷酸序列如下:
SM-F:TGCCTGGAAAGCGGCGATGG(SEQ ID No:1)
SM-R:CGCCAGCTCGTCGTTGTGGT(SEQ ID No:2)
在61℃退火阶段收集荧光值,即Ct样品值,并在上述扩增条件后增加60℃至95℃的融解曲线分析;
进一步地,当使用SYBR Green I荧光定量测试方法时,所述的PCR扩增反应体系为20μL:SYBR Premix Ex TaqⅡ10μL,AL-F 0.8μL,AL-R 0.8μL,DNA模板2.0μL,ddH2O 6.0μL,Rox Reference DyeⅡ0.4μL;
进一步地,所述的荧光定量PCR方法中,PCR反应条件为:95℃30s;95℃5s,55℃34s,40个循环;
3)标准曲线的绘制:选用S.marcescens ATCC14756为模式细菌,根据其浓度为6.9×102、6.9×103、6.9×104、6.9×105、6.9×106、6.9×107时对应的Ct标准值,建立粘质沙雷氏菌的细菌数lg标准(cfu/mL)与Ct标准值的标准曲线为y=-1.864x+31.32,R2=0.999;
4)检测结果判定:将步骤2)所得的待测样本Ct样品值,在标准曲线上确定样品中的粘质沙雷氏菌的数量。
本发明还提供了上述粘质沙雷氏菌荧光定量PCR检测引物,以及粘质沙雷氏菌荧光定量PCR检测方法在检测食品粘质沙雷氏菌方面的应用。
本发明的技术方案达到的有益效果是:
1)本发明根据沙雷氏菌属微生物的基因组比对,确定S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因作为粘质沙雷氏菌的特异性保守基因序列,以此设计一对特异性引物,成功建立了粘质沙雷氏菌的荧光定量PCR检测方法。该方法特异性强,对食品中常见的微生物均检测不到荧光信号,仅对粘质沙雷氏菌检测为阳性,可以快速准确地检测食品中是否存在粘质沙雷氏菌,整个检测耗时短,与常规培养检测法相比大大提高了检测效率;
2)本发明的粘质沙雷氏菌的荧光定量PCR检测方法的灵敏度较高,其灵敏度可达到6.9×102cfu/mL,可用于食品中粘质沙雷氏菌的定量检测,对保障食品安全具有重要意义。
附图说明
图1是荧光定量PCR产物琼脂糖凝胶电泳。M:1000bp Marker,1.luxS基因PCR产物,2.Control。
图2是粘质沙雷氏菌荧光定量PCR扩增标准曲线。
图3是荧光定量PCR检测粘质沙雷氏菌luxS基因的敏感性实验。其中,1-7:6.9×107~6.9×101cfu/mL。
图4是常规PCR检测粘质沙雷氏菌luxS基因的敏感性实验。其中,1-7:6.9×107~6.9×101cfu/mL。
图5是粘质沙雷氏菌luxS基因荧光定量PCR扩增特异性实验。
具体实施方式
为了阐明本发明的技术方案及技术目的,下面结合附图及具体实施方式对本发明做进一步的介绍。
实施例1
1.引物的设计与合成:
通过比对粘质沙雷氏菌及其相近菌种的基因组序列,如液化沙雷氏菌(Serratialiquefaciens)、深红沙雷氏菌(Serratia rubidaea)、普城沙雷氏菌(Serratiaplymuthica)等,找出粘质沙雷氏菌的种间特异性序列,然后将此序列进行BLAST比对,分析其与非沙雷氏菌属微生物的同源性,最终确定S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因为粘质沙雷氏菌的特异性保守基因序列。根据此基因设计特异性引物进行分析。
设计引物时,首先根据S.marcescens ATCC14756的S-核糖基高半胱氨酸酶氨基酸序列(GenBank登录号:EF164926.1),比对数据库中的各种粘质沙雷氏菌,S.marcescensWW4(GenBank:CP003959.1)、S.marcescens strain CAV1492(GenBank:CP011642.1)和S.marcescens SM39(GenBank:AP013063.1),找出种间保守序列区段;再对该段氨基酸序列的编码区序列进行DNAMAN软件同源比对,设计引物SM-F和SM-R如下:
SM-F:TGCCTGGAAAGCGGCGATGG
SM-R:CGCCAGCTCGTCGTTGTGGT
2.通过S.marcescens ATCC14756S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因序列的克隆,实现所设计引物的正确性的检测:
利用天根细菌基因组DNA提取试剂盒提取S.marcescens ATCC14756的总DNA,使用上述引物序列SM-F和SM-R进行PCR扩增:
PCR扩增反应体系为20μL:SYBR Premix Ex TaqⅡ10μL;SM-F 0.8μL,SM-R 0.8μL;DNA模板2.0μL;ddH2O 6.0μL;Rox Reference DyeⅡ50x 0.4μL;
PCR反应条件为:95℃30s;95℃5s,55℃34s,40个循环;61℃退火。
将所获得的PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳分析,结果(见图1)显示,扩增粘质沙雷氏菌S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因部分片段175bp。回收目的条带并与pUCm-T连接,转化JM109,鉴定正确后送上海生工测序。经测序分析发现,与拟克隆的基因序列一致,说明S.marcescens ATCC14756 S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因序列扩增正确。
3.荧光定量PCR标准曲线的绘制:
a)使用S.marcescens ATCC14756为绘制荧光定量PCR标准曲线的模式细菌,它可代表其它粘质沙雷氏菌。将S.marcescens ATCC14756在脑心浸液培养基(BHI)培养基中过夜培养,根据GB 4789.2-2010食品微生物学检验--菌落总数测定中的方法定量菌液,经10倍梯度稀释,得到不同浓度菌液:6.9×102、6.9×103、6.9×104、6.9×105、6.9×106、6.9×107cfu/mL。
b)采用天根细菌基因组DNA提取试剂盒提取不同浓度菌液的基因组DNA;
c)使用SYBR Green I实时定量PCR试剂盒进行PCR扩增,扩增体系和反应条件如上面2中所述;此外,在61℃退火阶段收集荧光值,即Ct标准值,并在上述扩增条件后增加60℃至95℃的融解曲线分析,每个样本3个平行;
d)进行荧光定量PCR后得到每个浓度的Ct标准值,这个值对应荧光信号初次被检测到时的循环数,可以反映模板初始量,以细菌数的lg标准值和Ct标准值制作细菌悬液的标准曲线y=-1.864x+31.32,相关系数为0.999(图2),说明本发明建立的检测方法可以准确定量检测食品中的S.marcescens;且其检测限为×102cfu/mL。
实施例2
在实施例2中,使用本发明提供的检测粘质沙雷氏菌的实时荧光定量PCR方法检测不同月份(11、12、1、2月)从江苏省扬州市8个奶牛场中取样的原料乳,以确定每个牧场的原料乳是否污染了粘质沙雷氏菌(S.marcescens),以此监控每个牧场的奶源质量。
具体方法如下:
(1)提取待测原料乳样品中的DNA:
取1mL原料乳,12000g/min离心5min,弃上层脂肪,无菌生理盐水洗涤两次,12000g/min离心2min,然后采用专利《从牛奶中提取总DNA的方法》(专利申请号:200810115822.9)中的方法提取下层沉淀中的DNA。
(2)以步骤(1)中所提取的DNA为模板,荧光定量PCR扩增粘质沙雷氏菌S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因部分片段;
PCR扩增反应体系为20μL,包括:SYBR Premix Ex TaqⅡ10μL、上游引物SM-F 0.8μL、下游引物SM-R 0.8μL、DNA模板2.0μL、ddH2O 6.0μL和RoxReference DyeⅡ0.4μL;其中,所述的上游引物SM-F与下游引物SM-R的核苷酸序列见实施例1的步骤1)引物的设计与合成。
PCR反应条件为:95℃30s;95℃5s,55℃34s,40个循环;在61℃退火阶段收集荧光值Ct样品,并在上述扩增条件后增加60℃至95℃的融解曲线分析。
(3)检测结果判定:参照实施例1中3d)所建立的粘质沙雷氏菌的细菌数lg标准(cfu/mL)与Ct标准值的标准曲线,确定细菌浓度为6.9×102、6.9×103、6.9×104、6.9×105、6.9×106、6.9×107、6.9×108、6.9×109时对应的Ct标准值。根据步骤(2)所得的待测样本Ct样品值,对照标准曲线(y=-1.864x+31.32,R2=0.999),确定原料乳中的粘质沙雷氏菌的数量。
在对32份原料乳样品进行的检测中,常规PCR并未检测出S.marcescens阳性样品,而荧光定量PCR方法检测出S.marcescens阳性样品1份,Ct值介于24-25之间,阳性率为3.13%。由此可见,本发明可用于原料乳中粘质沙雷氏菌的定量检测,对保障乳制品的安全具有重要意义。
实施例3
本实施例3中比较了本发明荧光定量PCR检测方法与常规PCR的敏感性。
以实例1中步骤4)所获得的不同浓度菌液的基因组DNA为模板,SM-F和SM-R为引物进行常规PCR扩增,其反应条件为:95℃3min,30个循环(95℃30s,55℃30s,72℃30s),72℃10min。由图4可见,常规PCR检测S.marcescens的灵敏度是6.9×103cfu/mL;将其与图3所示的本发明荧光定量PCR检测的最低菌落数(6.9×102cfu/mL)相比,本发明的灵敏度明显高于普通PCR检测。
实施例4
本实施例4中,利用本发明提供的引物及荧光定量PCR方法(见实施例2)对8种乳中的常见微生物(鲁氏不动杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、李斯特菌、阪崎杆菌、荧光假单胞菌)进行扩增,并选取S.marcescens ATCC14756作为阳性对照,检测本发明方法的特异性。
结果(见图5)显示只有S.marcescens ATCC14756样品出现了较强的荧光信号,而其余8个样品未出现相应的荧光信号,由此可见本发明的特异性强。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,本发明要求保护范围由所附的权利要求书、说明书及其等效物界定。
序列表
<110> 扬州大学
<120> 一种粘质沙雷氏菌的检测引物及荧光定量PCR检测方法
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列()
<400> 1
tgcctggaaa gcggcgatgg 20
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列()
<400> 1
cgccagctcg tcgttgtggt 20
Claims (6)
1.一种粘质沙雷氏菌荧光定量PCR检测引物,其特征在于,所述引物的核苷酸序列如下:
SM-F:TGCCTGGAAAGCGGCGATGG;
SM-R:CGCCAGCTCGTCGTTGTGGT。
2.一种粘质沙雷氏菌荧光定量PCR检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)提取待测样品中的DNA;
2)以步骤1)中提取的DNA为模板,采用荧光定量PCR方法扩增粘质沙雷氏菌,其中所使用引物的核苷酸序列如下:
SM-F:TGCCTGGAAAGCGGCGATGG;
SM-R:CGCCAGCTCGTCGTTGTGGT;
在61℃退火阶段收集荧光值,即Ct样品值,并在上述扩增条件后增加60℃至95℃的融解曲线分析;
3)标准曲线的绘制与检测结果判定:根据所选用的模式细菌在其浓度为×102、×103、×104、×105、×106、×107时对应的Ct标准值,建立粘质沙雷氏菌的细菌数lg标准与Ct标准值的标准曲线,并且将步骤2)所得的待测样本Ct样品值,在标准曲线上确定样品中的粘质沙雷氏菌的数量。
3.如权利要求2所述的一种粘质沙雷氏菌荧光定量PCR检测方法,其特征在于,步骤2)中,所述的荧光定量PCR方法中使用的荧光染料为SYBR Green I。
4.如权利要求3所述的一种粘质沙雷氏菌荧光定量PCR检测方法,其特征在于:步骤3)中,所述的模式细菌为S.marcescens ATCC14756,根据其浓度为6.9×102、6.9×103、6.9×104、6.9×105、6.9×106、6.9×107时对应的Ct标准值,建立粘质沙雷氏菌的细菌数lg标准与Ct标准值的标准曲线为y=-1.864x+31.32,R2=0.999。
5.如权利要求1所述的一种粘质沙雷氏菌荧光定量PCR检测引物在检测食品粘质沙雷氏菌方面的应用。
6.如权利要求2-4中任意一项所述的一种粘质沙雷氏菌荧光定量PCR检测方法在检测食品粘质沙雷氏菌方面的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710812437.9A CN107523622A (zh) | 2017-09-11 | 2017-09-11 | 一种粘质沙雷氏菌的检测引物及荧光定量pcr检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710812437.9A CN107523622A (zh) | 2017-09-11 | 2017-09-11 | 一种粘质沙雷氏菌的检测引物及荧光定量pcr检测方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107523622A true CN107523622A (zh) | 2017-12-29 |
Family
ID=60736557
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710812437.9A Pending CN107523622A (zh) | 2017-09-11 | 2017-09-11 | 一种粘质沙雷氏菌的检测引物及荧光定量pcr检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107523622A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110987717A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-04-10 | 光明乳业股份有限公司 | 一种酸奶的分析方法 |
CN115992270A (zh) * | 2022-08-30 | 2023-04-21 | 四川省亚中基因科技有限责任公司 | 一种用于呼吸道细菌病原体检测的引物探针组合物、试剂及试剂盒 |
-
2017
- 2017-09-11 CN CN201710812437.9A patent/CN107523622A/zh active Pending
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JOYNER J 等: "Use of quantitative real-time PCR for direct detection of serratia marcescens in marine and other aquatic environments", 《APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110987717A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-04-10 | 光明乳业股份有限公司 | 一种酸奶的分析方法 |
CN115992270A (zh) * | 2022-08-30 | 2023-04-21 | 四川省亚中基因科技有限责任公司 | 一种用于呼吸道细菌病原体检测的引物探针组合物、试剂及试剂盒 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105671197B (zh) | 一种食源性致病菌单增李斯特菌的检测方法 | |
Rodrigues et al. | The Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) identification versus biochemical tests: a study with enterobacteria from a dairy cattle environment | |
Meng et al. | Identification and proteolytic activity quantification of Pseudomonas spp. isolated from different raw milks at storage temperatures | |
CN103421898B (zh) | 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光pcr检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法 | |
Gonçalves et al. | Bacterial communities in Serpa cheese by culture dependent techniques, 16S rRNA gene sequencing and high‐throughput sequencing analysis | |
CN102363815B (zh) | 运用交叉引物核酸恒温扩增技术检测沙门菌的试剂及其扩增方法和检测方法 | |
CN111378774B (zh) | 一种用于快速检测单核细胞增生李斯特氏菌的引物组、试剂盒及方法 | |
CN101712989B (zh) | 益生菌乳制品中干酪乳杆菌的快速定性、定量测定方法 | |
CN108048582A (zh) | 一种利用lamp引物组定量快速检测原料乳中产耐热蛋白酶的荧光假单胞菌方法 | |
CN107523622A (zh) | 一种粘质沙雷氏菌的检测引物及荧光定量pcr检测方法 | |
CN106282354B (zh) | 一种鲁氏不动杆菌的检测引物及荧光定量pcr检测方法 | |
Du et al. | Diversity and proteolytic activity of Pseudomonas species isolated from raw cow milk samples across China | |
Trnčíková et al. | Rapid and sensitive detection of Staphylococcus aureus in food using selective enrichment and real-time PCR targeting a new gene marker | |
CN104152546A (zh) | 一种同时检测沙门氏菌、单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的试剂盒和方法 | |
CN101712986A (zh) | 益生菌乳制品中嗜酸乳杆菌的快速定性、定量测定方法 | |
Sutejo et al. | Molecular detection of Staphylococcus aureus resistant to temperature in milk and its products | |
CN104342496A (zh) | 一种快速检测、鉴定李斯特属细菌的方法 | |
CN111057776B (zh) | 李斯特属和6种常见李斯特菌特异性新分子靶标及其快速检测方法 | |
CN101649352B (zh) | 益生菌乳制品中发酵乳杆菌的快速定性、定量测定方法 | |
CN101712988B (zh) | 益生菌乳制品中双岐杆菌的快速定性、定量测定方法 | |
CN107699514B (zh) | 一株马乳酒样乳杆菌zw3菌株及其分子检测方法 | |
CN101712990A (zh) | 益生菌乳制品中鼠李糖乳杆菌的快速定性、定量测定方法 | |
CN113373249B (zh) | 用于筛查黄杆菌属的分子靶标及其定量检测方法 | |
CN103981266A (zh) | 一种检测乳制品中大肠菌群的方法及所用引物 | |
Ye et al. | A comparison of polymerase chain reaction and international organization for standardization methods for determination of Enterobacter sakazakii contamination of infant formulas from Chinese mainland markets |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20171229 |