CN107513493A - 一种用于微生物测试的系统及其制作方法 - Google Patents

一种用于微生物测试的系统及其制作方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于微生物测试的系统及其制作方法。本发明提供了本发明提供的微生物的测试片及和测试片配套使用的匀液器，测试片包括覆膜和粘附有显色培养体系的胶带；匀液器包括环形罩体、弹性薄膜和匀液板；所述弹性薄膜与环形罩体的环形端面粘接；所述匀液板与所述弹性薄膜在粘接环形罩体一面粘接，匀液板位于环形罩体的中心。本发明的实验证明，本发明的微生物测试片节省了操作人员清洗器皿、配制培养基、处置废弃物等工作，操作简便、随用随取，本发明的匀液器能有效防止样液扩散至培养区外，产品重复性好，准确性高。

Description

一种用于微生物测试的系统及其制作方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体属于微生物快速检测领域，尤其涉及一种用于微生物测试的系统及其制作方法。
背景技术
目前，我国微生物检测主要采用国标法，沿用传统的检测技术，如平板计数法，MPN法以及生化鉴定等，这些方法需要检测者做大量的准备工作，包括刷洗器皿、配制培养基、灭菌、处置废弃物等，不仅对仪器设备要求高，还对操作者的技能、经验有较高要求。由于检测环节多，易污染，检测结果的准确性不易控制。
测试片以其制作工艺简单，操作简便，结果准确，检测时间短等优点赢得了广大检测人员的青睐。测试片不需要做实验前的准备工作，节省了劳动力。直接吸取样液滴加于测试片上检测培养，省去生化鉴定环节，对操作者要求低，结果重复性好。
目前涉及微生物检测的测试片主要有3种，滤纸测试片，无纺布测试片和凝胶测试片。滤纸和无纺布基质的测试片制作简单，成本低，但这2种基质不透明，基质背面的菌落无法计数，也无法挑取菌落做进一步鉴定。凝胶基质测试片可双面计数，并且可挑取菌落做后续鉴定。3M测试片即为此类产品，但存在制作工艺繁琐，加样后样液易扩散至培养区外侧，使检测结果偏低等缺点。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种微生物测试片。
本发明提供的微生物测试片，该微生物测试片包括粘附有显色培养体系的粘附部件和覆盖在所述显色培养体系上的覆膜；
所述粘附有显色培养体系的粘附部件按照包括如下步骤的方法制备：将冷水可溶性凝胶和微生物显色培养基混合后，得到显色培养体系，再将所述显色培养体系粘附到所述粘附部件的一侧表面，形成粘附有显色培养体系的粘附部件。
上述微生物测试片中，所述粘附部件为胶带。
胶带的胶面的胶为聚丙烯酸压敏胶。
上述微生物测试片中，所述微生物显色培养基和所述冷水可溶性凝胶的质量比为1:1-3。
上述微生物测试片中，所述微生物显色培养基为平板计数显色培养基、VRB培养基、乳酸菌培养基、沙门氏菌显色培养基、阪崎肠杆菌显色培养基、金黄色葡萄球菌显色培养基、李斯特菌显色培养基或霉菌和酵母菌显色培养基；
在本发明的实施例中，采用的微生物显色培养基为平板计数显色培养基，其由细菌培养基和显色物TTC组成，所述显色物TTC和所述细菌培养基的质量比具体为0.05:1。细菌培养基由质量分数为58.8％胰蛋白胨、质量分数为29.4％酵母浸粉和质量分数为11.8％的葡萄糖组成。
所述胶带的附有显色培养体系表面的一侧边与所述覆膜的一侧边粘合，可以通过聚丙烯酸压敏胶粘合。
上述微生物测试片中，所述冷水可溶性凝胶为海藻酸钠、黄原胶、瓜尔豆胶或羟甲基纤维素钠等。
上述微生物测试片中，所述覆膜为防水薄膜；
和/或，所述防水薄膜具体为PET、PVC或PE等。
上述测试片中，所述胶带为7.0-10.0cm×8.0-11.0cm的长方形；
所述胶带和所述覆膜厚度为0.05mm-0.50mm。
所述的覆膜宽度同胶带，长度长于胶带0.3cm-0.5cm。
本发明另一个目的是提供一种微生物检测系统，它包括上述的微生物测试片和与所述微生物测试片配套使用的匀液器；
所述匀液器包括由杯壁和杯底组成的杯状罩体，所述整个杯底或者杯底的中部由弹性膜和附着在该弹性膜朝向杯体腔一侧上的匀液板组成。
上述系统中，所述杯底由弹性膜和环面组成，所述弹性膜粘附在所述环面背离杯体腔一侧上，且与所述环面构成杯底。
上述系统中，所述杯底上的环面与所述杯壁一体成型。
上述系统中，所述杯状罩体和所述匀液板均采用透明硬质塑料片材；
和/或，所述透明硬质塑料片材具体为聚丙烯片材；
和/或，所述弹性膜具体为热塑性聚氨酯弹性体薄膜。
上述系统中，所述弹性膜为圆形，且所述弹性膜的直径与所述环面的外环直径相同；
和/或，所述匀液板粘附在所述弹性膜上；
和/或，所述匀液板为圆形，且所述匀液板直径小于所述环面的内环直径。
上述杯状罩体由深圳市康美达塑胶材料有限公司加工定做，材料为透明聚丙烯材料；杯状罩体的厚度为1.5mm；杯状罩体的杯底的环面的外环直径7.0cm，内环直径6.4mm，形成宽3.0mm的环面；杯壁高度为0.8mm，即杯壁高出环面0.8mm，匀液器高为3.3mm，由弹性膜1.0mm+环面厚1.5mm+杯壁高0.8mm组成。
上述弹性膜为热塑性聚氨酯弹性体薄膜，由东莞市建国环保塑胶薄膜有限公司提供，厚度为1.0mm；
上述匀液板为透明聚丙烯片材，可由深圳市康美达塑胶材料有限公司提供，厚度为1.5mm。
本发明还提供制备所述微生物检测系统的方法，包括如下步骤：制备所述测试片和所述匀液器；
所述制备测试片的步骤包括：
1)制备粘附有显色培养体系的粘附部件；
所述粘附有显色培养体系的粘附部件为将冷水可溶性凝胶和微生物显色培养基混合后，得到显色培养体系，再将所述显色培养体系粘附到粘附部件的胶面，形成粘附有显色培养体系的粘附部件；
2)将所述粘附有显色培养体系的粘附部件的培养基面一侧边与所述覆膜的一侧边粘合，得到测试片；
所述制备匀液器的步骤包括：
3)将所述弹性薄膜粘接在所述杯状罩体的环面背离杯体腔一侧上，且与所述环面构成杯底；
4)再将匀液板粘接在所述弹性薄膜朝向杯体腔一侧上。
上述的微生物检测系统中的匀液器也是本发明保护的范围。
上述的微生物测试片或上述的微生物检测系统在检测微生物限度或菌落总数中的应用也是本发明保护的范围；
或，上述的微生物测试片或上述的微生物检测系统进行微生物计数中的应用也是本发明保护的范围。
上述微生物为卫生指标菌或致病菌，所述卫生指标菌为菌落总数、大肠菌群、乳酸菌、霉菌和酵母菌中至少一种；所述致病菌为大肠埃希氏菌、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌和李斯特菌中至少一种。
本发明第三个目的是提供一种微生物计数的方法。
本发明提供的方法，包括如下步骤：
1)揭起上述的微生物检测系统中测试片的覆膜，再将待检微生物样液加在所述测试片的显色培养体系上，盖上所述覆膜，得到待检测测试片；
2)将所述匀液器扣在所述待检测测试片的覆膜上，一手压紧匀液器，一手轻按匀液板，使所述样液在所述匀液器的杯状罩体内均匀扩散，得到加样后测试片；
3)将所述加样后测试片置于培养箱中培养，对培养后微生物进行计数。
本发明的实验证明，本发明的微生物测试片节省了操作人员清洗器皿、配制培养基、处置废弃物等工作，操作简便、随用随取，产品重复性好，准确性高。本发明克服了同类产品的缺点，将显色培养基和凝胶直接混合后粘于胶带上，省去培养基加水调配、涂布、烘干等环节，减少制作工艺对营养成分的破坏；上层直接为防水薄膜，省去粘附冷凝胶步骤，制作工艺简单；测试片加样后配套使用本发明的匀液器，扩散均匀，本发明的匀液器可有效防止样液扩散至培养区外，检测结果准确。
附图说明
图1为微生物测试片的产品图。
图2为微生物测试片的侧面效果图。
图3为匀液器的产品图。
图4为匀液器的侧面剖面图。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、微生物检测系统
用于微生物检测的系统包括微生物测试片和与其配套使用的匀液器；
一、微生物测试片
本发明的微生物测试片的结构示意图如图1和图2所示。
图1和图2所示的微生物测试片，包括粘附有显色培养体系的胶带1和覆盖在显色培养体系上的覆膜2；覆膜的侧边与胶带上有显色培养体系面的侧边粘合连接。
粘附有显色培养体系的胶带为将冷水可溶性凝胶和微生物显色培养基混合后，得到显色培养体系，再将显色培养体系粘附到胶带的胶面，形成粘附有显色培养体系的胶带。
显色培养体系由微生物显色培养基和冷水可溶性凝胶组成，其中，微生物显色培养基和冷水可溶性凝胶的质量比为1:1-3。
微生物显色培养基为平板计数显色培养基、VRB培养基、乳酸菌培养基、沙门氏菌显色培养基、阪崎肠杆菌显色培养基、金黄色葡萄球菌显色培养基、李斯特菌显色培养基或霉菌和酵母菌显色培养基。
二、匀液器
1、结构
本发明的与微生物测试片配套使用的匀液器的结构示意图如图3和图4所示。
图3和图4所示的匀液器，包括由杯壁和杯底组成的杯状罩体3，整个杯底或者杯底的中部由弹性膜4和附着在该弹性膜朝向杯体腔一侧上的匀液板5组成；杯底具体由弹性膜和环面组成，弹性膜粘附在环面背离杯体腔一侧上，且与环面构成杯底；杯底上的环面与杯壁一体成型。弹性膜为圆形，且弹性膜的直径与环面的外环直径相同；匀液板为圆形，且匀液板直径小于环面的内环直径。杯状罩体和匀液板为聚丙烯片材，弹性膜为热塑性聚氨酯弹性体薄膜。
上述杯状罩体由深圳市康美达塑胶材料有限公司加工定做，材料为透明聚丙烯材料；杯状罩体的厚度为1.5mm；杯状罩体的杯底的环面的外环直径7.0cm，内环直径6.4mm，形成宽3.0mm的环面；杯壁高度为0.8mm，即杯壁高出环面0.8mm，匀液器高为3.3mm，由弹性膜1.0mm+环面厚1.5mm+杯壁高0.8mm组成。
上述弹性膜为热塑性聚氨酯弹性体薄膜，由东莞市建国环保塑胶薄膜有限公司提供，厚度为1.0mm；
上述匀液板为透明聚丙烯片材，可由深圳市康美达塑胶材料有限公司提供，厚度为1.5mm。
2、制备
裁剪：将热塑性聚氨酯弹性体薄膜裁切成直径7.0cm的圆形；将透明聚丙烯片材裁切成直径6.0cm的圆形，成为匀液板；
部件组装：将杯状罩体杯底的环面均匀涂抹透明万能胶(美国3M-77#超级万能胶，由深圳市龙岗区平湖力晟达五金商行提供)，将裁切好的热塑性聚氨酯弹性体薄膜准确粘接在环面背离杯体腔的一面上；将裁切好的匀液板一面均匀涂抹透明万能胶，粘附在热塑性聚氨酯弹性体薄膜上朝向杯体腔的一面，制作成如图3或4所示的匀液器。
上述各实施例仅用于说明本发明，其中各部件的结构、设置位置及其连接方式等都是可以有所变化的，凡是在本发明技术方案的基础上进行的等同变换和改进，均不应排除在本发明的保护范围之外。
实施例2、用于菌落总数检测的微生物检测系统的制备及应用
一、微生物检测系统中测试片的制备
1、粘附有显色培养体系的胶带的制备
将2.00g海藻酸钠(河南德旺化工实业有限公司；货号：9005-38-3)和1.05g平板计数显色培养基混合均匀，得到显色培养体系，再将显色培养体系粘附于胶带上，得到粘附有显色培养体系的胶带。
上述平板计数显色培养基由1.00g细菌培养基和0.05g指示剂TTC(Sigma公司货号T8877)混匀得到；细菌培养基由5.0g胰蛋白胨、2.5g酵母浸粉、1.0g葡萄糖组成，准确称取后混合均匀，再从混合物中称取1.00g。
2、测试片制备
将上述1制备的粘附有显色培养体系的胶带裁切成9.0cm×10.0cm的长方形；
将覆膜(PVC防水薄膜)裁切成9.0cm×10.5cm的长方形；
将上述覆膜与粘附有显色培养体系的胶带的培养基面在短边一侧以压敏胶粘合，粘合宽度1.0cm。
铝箔袋包装封口后，环氧乙烷灭菌备用，得到图1或图2所示的微生物菌落总数测试片。
二、微生物检测系统检测微生物菌落总数
1、微生物检测系统检测法
接种：分别取10份生鲜蔬菜样品，每份样品按无菌操作取25g于无菌均质袋中，加入225mL无菌生理盐水，以拍击式均质器均质1min，制成10-1菌液，再吸取1mL加入到9mL无菌生理盐水中，制成10-2菌液，以此做10倍梯度稀释。选2-3个适宜稀释度各吸取1mL滴加于上述一得到的微生物菌落总数测试片的粘附有显色培养体系的胶带表面，缓慢盖上上层覆膜，将匀液器扣在有样液部分的覆膜上，一手压紧实施例1获得的匀液器，一手轻按匀液板，使样液在环形罩体范围内均匀扩散，得到加样后测试片，凝固1min，每个稀释度2个重复，叠放每摞不超过10片，36℃±1℃培养48h±2h。同时以平板倾注法作为对照，按GB4789.2-2010标准进行操作；吸取1mL无菌生理盐水作为空白对照，空白对照2个重复。
计数：培养结束后计数红色菌落，以平均数在20-200个菌落的2个测试片平均值乘以相应稀释度作为该样品菌落总数。空白对照菌落数为0，否则实验无效。
2、平板倾注法
按GB4789.2-2010法进行计数。
统计：以测试片法和平板倾注法测得的各样品菌落总数做t-检验，以P＜0.05存在显著差异。
表1为微生物检测系统与平板倾注法检测10份生鲜蔬菜样品菌落总数结果
(单位：cfu/g)
注：1：西红柿；2：马铃薯；3：菠菜；4：山药；5：丝瓜；6：芸豆；7：绿豆芽；8：胡萝卜；9：黄瓜；10：茄子
实验证明测试片法与平板倾注法检测10份生鲜蔬菜样品菌落总数无显著差异(P＝0.339＞0.05)，可代替常规方法检验样品菌落总数。
实施例3、用于大肠菌群检测的微生物检测系统的制备及应用
一、微生物检测系统中测试片的制备
1、粘附有显色培养体系的胶带的制备
将2.00g海藻酸钠(河南德旺化工实业有限公司；货号：9005-38-3)和1.05g微生物显色培养基混合均匀，得到显色培养体系，将显色培养体系粘附于胶带上，得到粘附有显色培养体系的胶带。
上述微生物显色培养基由1.00gVRB培养基和0.05g指示剂TTC(Sigma公司货号T8877)混匀得到。VRB培养基由7.0g蛋白胨、3.0g酵母浸粉、5.0g氯化钠、10.0g乳糖、1.5g胆盐、0.03g中性红组成，准确称取后混合均匀，再从混合物中称取1.00g。
3、测试片制备
将上述1制备的粘附有显色培养体系的胶带裁切成9.0cm×10.0cm的长方形；
将覆膜(PVC防水薄膜)裁切成9.0cm×10.5cm的长方形；
将上述覆膜与粘附有显色培养体系的胶带的培养基面在短边一侧以压敏胶粘合，粘合宽度1.0cm。
铝箔袋包装封口后，环氧乙烷灭菌备用，得到图1或图2所示的大肠菌群检测测试片。
二、微生物检测系统检测大肠菌群
1、微生物检测系统检测法
接种：分别取10份生鲜蔬菜样品，每份样品按无菌操作取25g于无菌均质袋中，加入225mL无菌生理盐水，以拍击式均质器均质1min，制成10-1菌液，再吸取1mL加入到9mL无菌生理盐水中，制成10-2菌液，以此做10倍梯度稀释。选2-3个适宜稀释度各吸取1mL滴加于上述一得到的大肠菌群检测测试片的粘附有显色培养体系的胶带表面，缓慢盖上上层覆膜，将匀液器扣在有样液部分的覆膜上，一手压紧实施例1获得的匀液器，一手轻按匀液板，使样液在环形罩体范围内均匀扩散，得到加样后测试片，凝固1min，每个稀释度2个重复，叠放每摞不超过10片，36℃±1℃培养24h±2h。同时以MPN法作为对照，按GB4789.3-2010标准进行操作。
计数：培养结束后计数红点带泡菌落，以平均数在20-200个菌落的2个测试片平均值乘以相应稀释度作为该样品大肠菌群数。
2、平板倾注法
MPN法按GB4789.3-2010标准进行计数。
统计：以测试片法和MPN法测得的各样品大肠菌群数做t-检验，以P＜0.05存在显著差异。
表2为微生物检测系统法与MPN法检测10份生鲜蔬菜样品大肠菌群结果
(测试片单位：cfu/g，MPN法单位：MPN/g)
注：1：西红柿；2：马铃薯；3：菠菜；4：山药；5：丝瓜；6：芸豆；7：绿豆芽；8：胡萝卜；9：黄瓜；10：茄子
实验证明测试片法与MPN法检测10份生鲜蔬菜样品大肠菌群数无显著差异(P＝0.243＞0.05)。

Claims (10)

1.一种微生物测试片，该微生物测试片包括粘附有显色培养体系的粘附部件和覆盖在所述显色培养体系上的覆膜；
所述粘附有显色培养体系的粘附部件按照包括如下步骤的方法制备：将冷水可溶性凝胶和微生物显色培养基混合后，得到显色培养体系，再将所述显色培养体系粘附到所述粘附部件的一侧表面，形成粘附有显色培养体系的粘附部件。
2.根据权利要求1所述的微生物测试片，其特征在于：所述微生物显色培养基和所述冷水可溶性凝胶的质量比为1:1-3；
和/或，所述冷水可溶性凝胶具体为海藻酸钠、黄原胶、瓜尔豆胶或羟甲基纤维素钠。
3.根据权利要求1或2所述的微生物测试片，其特征在于：
所述粘附部件一侧边与所述覆膜的一侧边粘合连接；
和/或，所述粘附部件具体为胶带；
和/或，所述覆膜具体为防水薄膜；
和/或，所述防水薄膜的材质具体为PET、PVC或PE。
4.一种微生物检测系统，它包括权利要求1-3任一所述的微生物测试片和与所述微生物测试片配套使用的匀液器；
所述匀液器包括由杯壁和杯底组成的杯状罩体，所述整个杯底或者杯底的中部由弹性膜和附着在该弹性膜朝向杯体腔一侧上的匀液板组成。
5.根据权利要求4所述的微生物检测系统，其特征在于：所述杯底由弹性膜和环面组成，所述弹性膜粘附在所述环面背离杯体腔一侧上，且与所述环面构成杯底。
6.根据权利要求5所述的微生物检测系统，其特征在于：所述杯底上的环面与所述杯壁一体成型。
7.根据权利要求4-5中任一所述的微生物检测系统，其特征在于：
所述杯状罩体和所述匀液板均采用透明硬质塑料片材；
和/或，所述透明硬质塑料片材具体为聚丙烯片材；
和/或，所述弹性膜具体为热塑性聚氨酯弹性体薄膜。
8.权利要求4-7中任一所述的微生物检测系统中的匀液器。
9.权利要求1-3任一所述的微生物测试片或权利要求4-7中任一所述的微生物检测系统在检测微生物限度中的应用；
或，权利要求1-3任一所述的微生物测试片或权利要求4-7中任一所述的微生物检测系统进行微生物计数中的应用。
10.一种微生物计数的方法，包括如下步骤：
1)揭起权利要求1-8中任一所述的微生物检测系统中测试片的覆膜，再将待检微生物样液加在所述测试片的显色培养体系上，盖上所述覆膜，得到待检测测试片；
2)将所述匀液器扣在所述待检测测试片的覆膜上，一手压紧匀液器，一手轻按匀液板，使所述样液在所述匀液器的杯状罩体内均匀扩散，得到加样后测试片；
3)将所述加样后测试片置于培养箱中培养，对培养后微生物进行计数。
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