CN107462710A - 一种胶体金的制备方法及检测铜离子的检测试纸 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种胶体金的制备方法，所述方法包括如下步骤：一种胶体金的制备方法，所述方法包括如下步骤：将lmL 1%氯金酸溶液10 mL,加入100mL超纯水，加入10mL 1%柠檬酸三钠溶液，0. lmL 25mL碳酸钾溶液，混合均匀加热到60°C，搅拌40min形成深红色溶液，回流5min形成亮红色溶液，最后冷却到室温形成柠檬酸稳定的金纳米粒子，获得直径约为20nm的小粒径胶体金溶液用于标记铜离子抗体。本发明能有效克服现有仪器检测铜离子技术缺陷，实现其重金属铜离子快速检测，具有灵敏度高、操作时间短，检测准确率高的特性。
Description
技术领域
本发明涉及免疫学技术领域，具体涉及一种胶体金的制备方法，以及利用该胶体金快速检测铜离子的检测试纸。
背景技术
铜是全球用量比较大的重金属之一，现代化工业以及农药化肥的使用所产生的铜对环境的污染日益严重。铜在土壤和农作物中累积，会造成农作 物特别是水稻和大麦根系生长不良，抑制植物的光合作用，并会污染粮食籽粒，严重的可造 成植物的死亡。过量铜在人体内富集，会出现恶心、呕吐、上腹疼痛、急性溶血和肾小管变形 等中毒现象，严重者还可导致急性肾衰等危害。铜粉尘可引起咽痛、咳嗽和咯痰，严重会导致胸闷气憋，发冷发烧。铜在动植物和人类生活中起到重要作用，高浓度的铜对水生生物和生态系统都有负面影响，抑制河流的自净能力和破坏水的生物平衡系统。当水中铜含量达0.0lmg/L时，对水体自净有明显的抑制作用；超过3.0mg/L会产生异味；超过15mg/L就无法饮用。
目前，检测铜离子的方法主要有仪器分析法和酶联免疫分析法。离子色谱、石墨炉原子吸收法、紫外-可见分光光度法、原子荧光分析法等检测方法虽然能精确测量样品中单种金属的总量，但检测相对时间长、费用高，需要进行大量的样品预处理不能用于现场检测。
发明内容
鉴于现有技术中的不足，提出了本发明，以便提供一种克服上述问题或至少部分地解决上述问题的一种胶体金的制备方法以及利用该胶体金检测铜离子的检测试纸。
根据本发明的一个方面，提供一种胶体金的制备方法，所述方法包括如下步骤：将lmL 1%氯金酸溶液10 mL,加入100mL超纯水，加入10mL 1%柠檬酸三钠溶液，0. lmL 25mL碳酸钾溶液，混合均匀加热到60°C，搅拌40min形成深红色溶液，回流5min形成亮红色溶液，最后冷却到室温形成柠檬酸稳定的金纳米粒子，获得直径约为20nm的小粒径胶体金溶液用于标记铜离子抗体。
根据本发明的另一方面，还提供一种利用上述胶体金进行铜离子检测的检测试纸，所述检测试纸包括衬板、在衬板上衔接的样品垫、金标结合垫、包被膜和吸水垫。
进一步的，所述金标结合垫为吸附铜离子金标抗体的玻璃纤维棉，在包被膜上依次有用铜离子偶联载体蛋白的溶液印制的直线式隐形检测线，用羊抗鼠IgG溶液印制的直线式隐形对照线。
进一步的，所述衬板为不吸水的硬质塑胶条，或不吸水硬纸条。
进一步的，所述吸水垫为吸水滤纸或滤油纸。
进一步的，所述样品垫为玻璃纤维棉或尼龙膜。
进一步的，所述包被膜为硝酸纤维素膜或纯纤维素膜。
进一步的，金标抗体铜离子为胶体金标记的铜离子抗体，偶联铜离子的载体蛋白为匙孔血蓝蛋白或为牛血清白蛋白BSA，螯合剂为对硫氰苄基-乙二氨四乙酸。
进一步的，所述检测试纸的检测判定结果为：如果在包被膜上仅有C线一条红线显色，表示检测结果为阳性，说明在待测样品中铜离子浓度大于10ng/mL；如果在包被膜上C线和T线两条红线都显色，表示检测结果为阴性，说明在待测样品中铜离子浓度低于10ng/mL；如果在包被膜上C线红线不显色，则表明试纸条已失效。
本发明能有效克服现有仪器检测铜离子技术缺陷，实现其重金属铜离子快速检测，具有灵敏度高、操作时间短，检测准确率高的特性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例的一种检测铜离子结果的示意图。
具体实施方式
下面将参照附图更详细的描述本发明的示例性实施例。虽然附图中显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明，而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能更透彻的理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
本发明的检测方法是利用重金属免疫学检测原理，为重金属离子检测提供了另一种途径。该方法具有检测速度较快、费用低、易操作和高灵敏度的特点。这种方法能应用于产生合适抗体的任何重金属离子。
根据本发明的一个方面，提供一种胶体金的制备方法，所述方法包括如下步骤：
将浓度为0.3g/L的氯金酸溶液放入锥形瓶，用恒温电磁搅拌器加热至沸腾并持续5min，加入1%柠檬酸三钠水溶液5mL，至溶液呈透亮的酒红色。之后室温冷却，冰箱保存备用。获得直径约为 50nm的大粒径胶体金溶液用于标记羊抗鼠IgG。其中，浓度为0.3g/L的氯金酸溶液可采用1%的氯金酸溶液进行配置。
将lmL 1%氯金酸溶液10 mL,加入100mL超纯水，加入10mL 1%柠檬酸三钠溶液，0.lmL 25mL碳酸钾溶液，混合均匀加热到60°C，搅拌40min形成深红色溶液，回流5min形成亮红色溶液，最后冷却到室温形成柠檬酸稳定的金纳米粒子。获得直径约为20nm的小粒径胶体金溶液用于标记铜离子抗体。
铜与载体蛋白偶联，免疫抗原铜Cu-EDTA-KLH的制备，将10mg的1- (4-异硫氰苄基）-乙烯基二胺- N,N,N,,N,-四乙酸（ITCBE)和 4. 5mg的KLH蛋白在pH 9.4的HEPES缓冲液中反应24h后，在离心分离后，去除未偶联上的ITCBE，逐滴加入1 mg/mL的Cu2+标准溶液1000µL反应lh后，使用超滤离心管去除未鳌合上的Cu2+，再用HEPES缓冲液稀释截留物，最终得到20mL的溶液。
根据本发明的另一个方面，提供一种利用上述胶体金进行铜离子检测的检测试纸，包括衬板、在衬板上衔接的样品垫、金标结合垫、包被膜和吸水垫。其中，金标结合垫为吸附铜离子金标抗体的玻璃纤维棉，在包被膜上依次有用铜离子偶联载体蛋白的溶液印制的直线式隐形检测线，用羊抗鼠IgG溶液印制的直线式隐形对照线；衬板为不吸水的硬质塑胶条，或不吸水硬纸条；吸水垫为吸水滤纸或滤油纸。样品垫为玻璃纤维棉或尼龙膜；包被膜为硝酸纤维素膜或纯纤维素膜。金标抗体铜离子为胶体金标记的铜离子抗体，偶联铜离子的载体蛋白为匙孔血蓝蛋白或为牛血清白蛋白BSA，螯合剂为对硫氰苄基-乙二氨四乙酸。
用检测试纸进行检测结果判定。结果判定如图1所示：如果在包被膜上仅有C线一条红线显色，表示检测结果为阳性，说明在待测样品中铜离子浓度大于10ng/mL；如果在包被膜上C线和T线两条红线都显色，表示检测结果为阴性，说明在待测样品中铜离子浓度低于10ng/mL；如果在包被膜上C线红线不显色，则表明试纸条已失效。
本发明利用胶体金层析检测铜离子，由胶体金标结合为吸附铜离子金标抗体，有用铜离子偶联载体蛋白的溶液制备检测线，用羊抗鼠IgG溶液做对照线。检测试纸为不吸水的硬质塑胶条与玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜、硝酸纤维素膜、纯纤维素膜、或羧化纤维素所组成的检测组合体。
本发明胶体金铜离子检测技术可以应用在对农产品的快速检测领域。本发明的检测试纸具有下列优点：
敏感性高。该胶体金检测技术以胶体金标记高亲和力的抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记对抗体的特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，具有较强的较高的敏感性，检出最低限量可达到10ppb。
简便、快速。使用胶体金检测铜离子，无需任何其它试剂和仪器，操作简单，可在12min确定检测结果。结果显示直观、准确。检测结果均以显示检测线为准。
以上所述仅为本发明之较佳实施例，并非用以限定本发明的权利要求保护范围。同时以上说明，对于相关技术领域的技术人员应可以理解及实施，因此其他基于本发明所揭示内容所完成的等同改变，均应包含在本权利要求书的涵盖范围内。
Claims (9)
1. 一种胶体金的制备方法，所述方法包括如下步骤：将lmL 1%氯金酸溶液10 mL,加入100mL超纯水，加入10mL 1%柠檬酸三钠溶液，0. lmL 25mL碳酸钾溶液，混合均匀加热到60°C，搅拌40min形成深红色溶液，回流5min形成亮红色溶液，最后冷却到室温形成柠檬酸稳定的金纳米粒子，获得直径约为20nm的小粒径胶体金溶液用于标记铜离子抗体。
2.一种利用如权利要求1所述的胶体金进行铜离子检测的检测试纸，所述检测试纸包括衬板、在衬板上衔接的样品垫、金标结合垫、包被膜和吸水垫。
3.如权利要求2所述的检测试纸，其特征在于：所述金标结合垫为吸附铜离子金标抗体的玻璃纤维棉，在包被膜上依次有用铜离子偶联载体蛋白的溶液印制的直线式隐形检测线，用羊抗鼠IgG溶液印制的直线式隐形对照线。
4.如权利要求2所述的检测试纸，其特征在于：所述衬板为不吸水的硬质塑胶条，或不吸水硬纸条。
5.如权利要求2所述的检测试纸，其特征在于：所述吸水垫为吸水滤纸或滤油纸。
6.如权利要求2所述的检测试纸，其特征在于：所述样品垫为玻璃纤维棉或尼龙膜。
7.如权利要求2所述的检测试纸，其特征在于：所述包被膜为硝酸纤维素膜或纯纤维素膜。
8.如权利要求2所述的检测试纸，其特征在于：金标抗体铜离子为胶体金标记的铜离子抗体，偶联铜离子的载体蛋白为匙孔血蓝蛋白或为牛血清白蛋白BSA，螯合剂为对硫氰苄基-乙二氨四乙酸。
9.如权利要求2所述的检测试纸，其特征在于，所述检测试纸的检测判定结果为：如果在包被膜上仅有C线一条红线显色，表示检测结果为阳性，说明在待测样品中铜离子浓度大于10ng/mL；如果在包被膜上C线和T线两条红线都显色，表示检测结果为阴性，说明在待测样品中铜离子浓度低于10ng/mL；如果在包被膜上C线红线不显色，则表明试纸条已失效。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108717122A (zh) * | 2018-06-02 | 2018-10-30 | 暨南大学 | 一种检测铜离子的免疫荧光层析试纸条及其应用 |
| CN109459570A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-03-12 | 重庆市职业病防治院（重庆市第六人民医院） | 一种快速检测人体血液中铅离子的胶体金免疫试纸条制备方法 |
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2016
- 2016-06-03 CN CN201610388195.0A patent/CN107462710A/zh active Pending
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Application publication date: 20171212 |
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |