CN107449837B - 利用非糖特征物质鉴别蜂蜜与糖浆 - Google Patents

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Abstract

本发明利用蜂蜜独有的、糖浆中没有的非糖特征物质鉴别蜂蜜与糖浆，其特征是以蜂蜜中特有的、掺假糖浆中没有的非糖特征物质包括丁香酸甲酯、脱落酸、山奈酚来鉴别蜂蜜与糖浆。该方法步骤：1.以20余种单花蜂蜜、10余种常见掺假糖浆为原料，分别采用XAD‑2大孔树脂制备蜂蜜非糖类物质、糖浆非糖类物质。2.对蜂蜜非糖类物质、糖浆非糖类物质在相同的条件下进行HPLC分析，采用中药色谱指纹图谱分析比较，得到蜂蜜独有的、糖浆中没有的非糖类特征物质。3.采用HPLC‑MS/MS2确定非糖特征化合物的分子量，结合标准品HPLC及紫外吸收图谱比对，确定蜂蜜独有的、糖浆中没有的非糖特征物质，以此来鉴别蜂蜜与糖浆。

Description

利用非糖特征物质鉴别蜂蜜与糖浆
技术领域
本发明涉及利用非糖特征物质鉴别蜂蜜与糖浆。蜂蜜是蜜蜂采集植物花蜜经过自身酿造而贮藏在巢脾内的甜味物质。中医认为，蜂蜜可润肺肠、治疗便秘、祛痰、止咳、补脾益肾，具有改善心肌功能、保持血压平衡、增强免疫力、、安神益智，增强记忆力等功能。现代研究表明，蜂蜜的主要成分为水分、糖类、有机酸、矿物质、酶类、黄酮类和酚酸类等，蜂蜜中这些成分的含量因植物源、产地不同而不同，因此蜂蜜的营养价值和市场价格也不同。微量的黄酮类和酚酸类化合物使得蜂蜜具有一定的抗氧化活性，能够预防氧化应激引起的疾病，因此，蜂蜜有“大自然中最完美的营养食品”的美誉，深受广大消费者的青睐。近些年来，由于蜂蜜的产量不能满足人们的需求，加之现行蜂蜜的食品安全标准无法直接判断蜂蜜的真假，导致蜂蜜掺假现象愈加严重，主要是向蜂蜜中掺入各种糖浆，近几年主要掺入的糖浆有五种：果葡糖浆(C4植物糖浆)、小麦糖浆(C4植物糖浆)、甜菜糖浆(C3植物糖浆)、大米糖浆(C3植物糖浆)、木薯糖浆(C3植物糖浆)，降低了蜂蜜的品质，损害了消费者的利益。由于蜂蜜中的果糖和葡萄糖比例与这些糖浆中的果糖和葡萄糖比例十分相似，使掺入这些糖浆后蜂蜜的各项指标完全符合国家标准，所以给检测造成了很大的困难。
背景技术
现有鉴别蜂蜜与糖浆的方式有两种：一种是传统检测技术；一种是现代检测技术。
目前传统检测技术已经逐渐成熟，但是传统检测技术存在的主要问题：一是感官检测中蜂蜜与糖浆的差异模糊，不能量化，需要有丰富的感官检测经验；二是理化技术的花粉镜检技术对于人工添加花粉粒的糖浆，该法失效。
目前现代检测技术是研究的热点领域，主要有三种：色谱技术、质谱技术、波谱技术。目前色谱技术存在的主要问题：不能同时检测多种糖浆掺假的蜂蜜。质谱技术存在主要问题：虽然能检测出蜂蜜中掺假C3或C4植物糖浆，但检出率较低。波谱技术存在主要问题：目前利用1H-NMR检测蜂蜜中葡萄糖、果糖、蔗糖的比例来判别真伪，对人工按比例调配的混合糖浆充当的假蜂蜜，该方法失效。由此可见，单纯依靠一种技术鉴别蜂蜜与糖浆具有很大局限性。
本发明的目的是分析检测蜂蜜与糖浆中彼此不同的、各自特有的非糖特征物质，利用色谱技术分析蜂蜜、糖浆的非糖物质指纹图谱，找出两者的区别，确定蜂蜜与糖浆各自特有的非糖小分子特征物质，利用质谱技术确定特征非糖物质的分子量。通过与标准品比对，确定蜂蜜特有的、糖浆没有的非糖特征物质，以此来鉴别蜂蜜与糖浆。该发明既避开了无法检出人工按比例掺假的糖浆技术瓶颈，又能解决上述方法存在的问题。
发明内容
本发明所要解决的问题是寻找蜂蜜特有的、糖浆没有的非糖特征物质及其在鉴别掺假蜂蜜中的应用。
本发明涉及蜂蜜、糖浆中非糖特征物质的分析鉴定及其在鉴别掺假蜂蜜中的应用，其特征是以蜂蜜中独有的非糖特征物质(丁香酸甲酯、脱落酸、山奈酚)来鉴别蜂蜜与糖浆。
附图说明
图1是20余种蜂蜜的HPLC指纹图谱(254nm)
图2是20余种蜂蜜的HPLC指纹图谱(280nm)
图3是10余种糖浆的HPLC指纹图谱(254nm)
图4是10余种糖浆的HPLC指纹图谱(280nm)
图5是化合物3的HPLC-MS/MS2图谱
图6是化合物5HPLC-MS/MS2图谱
图7是化合物6的HPLC-MS/MS2图谱
图8是化合物3丁香酸甲酯结构式
图9是化合物5脱落酸结构式
图10是化合物6山奈酚结构式
1、蜂蜜植物源分类
实验用20余种单花蜂蜜的植物源见表1。
表1蜂蜜样品植物源归属
Figure GSB0000164398140000031
2、脱糖制备非糖物质
表2、表3分别给出蜂蜜、糖浆的非糖提取物得率。
表2蜂蜜的非糖物质得率(mg/100g)
Figure GSB0000164398140000032
表3糖浆的非糖物质得率(mg/100g)
Figure GSB0000164398140000041
3、HPLC双波长分析蜂蜜、糖浆的特征物质
采用HPLC双波长254nm、280nm下分析20余种不同种类蜂蜜的非糖提取物、10余中不同糖浆的非糖提取物，得到6个蜂蜜中独有的、糖浆中没有的特征化合物(见附图1、图2、图3、图4)。
4、HPLC-MS/MS2分析特征化合物
利用HPLC-MS/MS2技术分析鉴定出蜂蜜中3个相对含量较高的特征化合物，分别为化合物3、5、6，其相关谱图见附图5、图6、图7。通过Scifinder检索及查阅相关文献，结合标准品对照，确定蜂蜜中化合物3、5、6分别为丁香酸甲酯、脱落酸、山奈酚，其结构式见附图8、图9、图10。
该方法的主要过程是：
采用层析柱吸附脱糖，分别得到蜂蜜非糖提取物、糖浆非糖提取物，进行HPLC指纹图谱分析，比较蜂蜜非糖提取物、糖浆非糖提取物HPLC图谱的异同，寻找蜂蜜独有的、糖浆中没有的的非糖类特征物质，HPLC-MS/MS2确定其分子量，通过与标准品对照比较，确定蜂蜜的非糖特征物质，以此来鉴别蜂蜜与糖浆。
本发明解决了现有蜂蜜与糖浆鉴别的缺点，主要优点在于：
1、本发明采用蜂蜜特有的、糖浆中没有的非糖类物质作为特征标志物，避开了当前蜂蜜中按比例掺假糖浆、现有技术易出现假阳性的技术缺陷。
2、所选用的蜂蜜非糖特征标志物在不同植物源蜂蜜中均存在，但在常见掺假糖浆中均不存在，扩大了技术检测适用范围。
具体实施方式
本发明涉及的非糖物质鉴别蜂蜜与糖浆方法，将通过下面的实施例而得到更具体的描述。
实施实例利用非糖特征物质鉴别蜂蜜与糖浆
分别取蜂蜜、糖浆(调至pH＝2)，按照蜂蜜料液比＝1∶10(g∶mL)、糖浆料液比＝1∶8(g∶mL)充分溶解后，分别用XAD-2大孔树脂层析柱进行吸附、脱糖处理，得到的甲醇洗脱物，旋蒸，冷冻干燥，分别得到蜂蜜非糖提取物、糖浆非糖提取物。
将蜂蜜非糖提取物、糖浆非糖提取物分别用甲醇和酸水1∶1(v∶v)进行复溶，在相同条件下进行HPLC分析，进行色谱指纹图谱分析，在254nm、280nm下找到20余种单花蜜均含有的6个化合物，按照出峰的先后顺序分别标记为化合物1、2、3、4、5、6，实验用各种蜂蜜中皆含有这6个非糖特征物质，其中化合物3、5、6相对含量较高；同样的方法发现，糖浆中均不存在上述6种化合物。
对蜂蜜中的化合物3、5、6进行HPLC-MS/MS2分析，得到各个化合物的分子量及相应的碎片离子峰。通过Scifinder检索及查阅相关文献，结合标准品对照，确定蜂蜜中化合物3、5、6分别为丁香酸甲酯、脱落酸、山奈酚。

Claims (5)

1.非糖特征物质在鉴别蜂蜜与糖浆中的应用，其特征是：所述非糖特征物质为丁香酸甲酯、脱落酸和山奈酚。
2.根据权利要求1所述的非糖特征物质在鉴别蜂蜜与糖浆中的应用，其特征在于：所述蜂蜜的蜂蜜花是指双子叶植物中的茄科、桔梗科、马鞭草科、唇形科、菊科、鼠李科、八角科或十字花科。
3.根据权利要求2所述的非糖特征物质在鉴别蜂蜜与糖浆中的应用，其特征在于：所述糖浆为C4植物糖浆、C3植物糖浆或混合糖浆。
4.根据权利要求3所述的非糖特征物质在鉴别蜂蜜与糖浆中的应用，其特征在于：所述C4植物糖浆为果葡糖浆和小麦糖浆。
5.根据权利要求3所述的非糖特征物质在鉴别蜂蜜与糖浆中的应用，其特征在于：所述C3植物糖浆为大米糖浆和甜菜糖浆。
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