CN107446908A - 分支型聚乙二醇修饰的l‑门冬酰胺酶及其制备方法 - Google Patents

分支型聚乙二醇修饰的l‑门冬酰胺酶及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种分支型聚乙二醇修饰的L‑门冬酰胺酶的制备方法，其结构式如式(I)所示，m为单甲氧基monomethoxy的缩写，R是去除n个氨基的L‑门冬酰胺酶亚基分子，n是1‑300的整数。本发明的化合物成分均一、免疫原性更低、抗肿瘤活性高、化学性质稳定。

Description

分支型聚乙二醇修饰的L-门冬酰胺酶及其制备方法
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种分支型聚乙二醇修饰的L-门冬酰胺酶及其制备方法。
技术背景
L-门冬酰胺酶广泛存在于微生物、植物和部分啮齿类动物的血清中，具有较强的抗肿瘤作用。但是，对人而言是一种外源蛋白，有较强的免疫原性，临床上经常出现进行性免疫反应和全身性过敏反应，而限制了其临床应用。为此，如何获得低免疫原性的L-门冬酰胺酶，改善该蛋白酶的药物动力学以提高耐受性及给药便利度，一直是研究的重点。
解决上述问题的方法之一就是对L-门冬酰胺酶进行聚乙二醇化修饰。专利CN1498965A公开了一种聚乙二醇修饰门冬酰胺酶的制备方法，使用聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯对门冬酰胺酶进行修饰。由于聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯属第一代活化的聚乙二醇修饰剂，具有修饰产物在体内不稳定，易水解的缺点。
因此，本领域迫切需要提供一种由新的聚乙二醇修饰的L-门冬酰胺酶化合物，具有更稳定的化学性质，更好的抗肿瘤效果和更低的免疫原性。
发明内容
本发明提供一种分支型聚乙二醇修饰的L-门冬酰胺酶化合物，具有式(I)结构
其中m为单甲氧基；PEG为聚乙二醇；R为去除n个氨基的L-门冬酰胺酶亚基分子；n为1-300的整数；L-门冬酰胺酶是天然或重组的；mPEG的分子量为1000-50000Da。
该分支型聚乙二醇修饰的L-门冬酰胺酶化合物的制备方法，包含以下步骤：
(1)在L-门冬酰胺酶溶液中，加入缓冲液，调节其pH在4-10，然后与式II所示的活化的分支型聚乙二醇衍生物进行反应，反应温度为5-35℃，反应时间为10-100分钟，得到含式I化合物的混合物，
其中，R-NH2为L-门冬酰胺酶；
(2)从混合物中分离得到式I的化合物。
在一优选的方案中，所述的n为50-200的整数。
在一优选的方案中，所述的mPEG的分子量为5000-30000Da。
在一优选的方案中，所述的pH为6-8。
在一优选的方案中，所述的反应温度为10-25℃。
在一优选的方案中，所述的反应时间为15-40分钟。
在一优选的方案中，所述的活化的分支型聚乙二醇和L-门冬酰胺酶的摩尔比为1-300。
在一优选的方案中，所述的分离纯化采用离子交换层析。
下面通过实施例对本发明作进一步的描述，这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定。本领域的技术人员应理解，对本发明的技术特征所作的等同替换，或相应的改进，仍属于本发明的保护范围之内。
具体实施例方式
实施例1
取4mg/ml的L-门冬酰胺酶溶液2ml,加入醋酸钠缓冲液调节pH＝6.0,然后与式II所示的活性分支型聚乙二醇5000固体6.875mg进行反应，反应温度为15℃，反应时间为20分钟，形成含有分支型聚乙二醇5000修饰的L-门冬酰胺酶混合物。
将干燥的柱填料加入50毫升活性聚乙二醇溶液中，搅拌，反应3小时，将填料装入层析柱中。再用0.06M醋酸钠缓冲液淋洗，以除去未反应的活性聚乙二醇及其他杂质。最后，用0～100％的梯度添加0.06MK2HPO4-KH2PO4缓冲液，得到分支型聚乙二醇5000修饰的L-门冬酰胺酶混合物。
实施例2
取4mg/ml的L-门冬酰胺酶溶液2ml,加入醋酸钠缓冲液调节pH＝8.0,然后与式II所示的活性分支型聚乙二醇10000固体9.847mg进行反应，反应温度为25℃，反应时间为30分钟，形成含有分支型聚乙二醇10000修饰的L-门冬酰胺酶混合物。
将干燥的柱填料加入100毫升活性聚乙二醇溶液中，搅拌，反应3小时，将填料装入层析柱中。再用0.06M醋酸钠缓冲液淋洗，以除去未反应的活性聚乙二醇及其他杂质。最后，用0～100％的梯度添加0.06MK2HPO4-KH2PO4缓冲液，得到分支型聚乙二醇10000修饰的L-门冬酰胺酶混合物。

Claims (6)

1.一种分支型聚乙二醇修饰的L-门冬酰胺酶化合物，其特征在于，具有式(I)结构
其中m为单甲氧基；PEG为聚乙二醇；R为去除n个氨基的L-门冬酰胺酶亚基分子；n为1-300的整数。
2.如权利要求1所述，其特征在于，L-门冬酰胺酶是天然或重组的。
3.如权利要求1所述，其特征在于，式中mPEG的分子量为1000-50000Da。
4.一种如权利要求1所述的分支型聚乙二醇修饰的L-门冬酰胺酶化合物的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
(1)在L-门冬酰胺酶溶液中，加入缓冲液，调节其pH在4-10，然后与式II所示的活化的分支型聚乙二醇衍生物进行反应，反应温度为5-35℃，反应时间为10-100分钟，得到含式I化合物的混合物，
其中，R-NH2为L-门冬酰胺酶；
(2)从混合物中分离得到式I的化合物。
5.如权利要求4所述，其特征在于，活化的分支型聚乙二醇衍生物与L-门冬酰胺酶的摩尔比为0.5-300。
6.如权利要求4所述，其特征在于，分离式I化合物采用离子交换层析。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003076490A1 (fr) * 2002-03-13 2003-09-18 Beijing Jiankai Technology Co., Ltd. Derive polymere hydrophile a ramification de type y et procede de preparation d'un composite medical contenant le compose precite
CN101082043A (zh) * 2006-05-29 2007-12-05 上海医药工业研究院 聚乙二醇修饰的l－门冬酰胺酶
WO2009086656A1 (zh) * 2007-12-29 2009-07-16 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd. Y型聚乙二醇修饰的g-csf及其制备方法和应用
WO2009121210A1 (zh) * 2008-04-03 2009-10-08 厦门伯赛基因转录技术有限公司 双链聚乙二醇修饰的生长激素及其制备方法和应用
CN104892927A (zh) * 2015-05-18 2015-09-09 湖南华腾制药有限公司 一种分枝型mPEG的制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003076490A1 (fr) * 2002-03-13 2003-09-18 Beijing Jiankai Technology Co., Ltd. Derive polymere hydrophile a ramification de type y et procede de preparation d'un composite medical contenant le compose precite
CN101082043A (zh) * 2006-05-29 2007-12-05 上海医药工业研究院 聚乙二醇修饰的l－门冬酰胺酶
WO2009086656A1 (zh) * 2007-12-29 2009-07-16 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd. Y型聚乙二醇修饰的g-csf及其制备方法和应用
WO2009121210A1 (zh) * 2008-04-03 2009-10-08 厦门伯赛基因转录技术有限公司 双链聚乙二醇修饰的生长激素及其制备方法和应用
CN104892927A (zh) * 2015-05-18 2015-09-09 湖南华腾制药有限公司 一种分枝型mPEG的制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
庞梦婷等: "聚乙二醇修饰门冬酰胺酶的研究进展", 《药物生物技术》 *

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