CN107438424A

CN107438424A - 通过减少trpa1受体、tprv1受体或上述两者的cpc活化减少cpc味觉厌恶

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Publication number: CN107438424A
Application number: CN201680020832.7A
Authority: CN
Inventors: J·C·霍特; K·T·斯里基斯纳; Y·林; C·A·海托尔; P·J-M·勒庞
Original assignee: Procter and Gamble Ltd
Current assignee: Procter and Gamble Ltd; Procter and Gamble Co
Priority date: 2015-04-09
Filing date: 2016-04-08
Publication date: 2017-12-05
Also published as: BR112017021315A2; US9993410B2; MX2017012946A; CA2981612A1; EP3381453A2; US20160296445A1; AU2016245865A8; RU2017137525A; US20170333325A1; AR104220A1; EP3381453A3; EP3280411B1; RU2017137525A3; EP3280411A1; US10111819B2; AU2016245865A1; CA2981612C; AU2016245865B2; WO2016164676A1

Abstract

本发明提供了一种用于筛选减少TRPA1受体或TRPV1受体的十六烷基氯化吡啶鎓活化的化合物和组合物的方法。

Description

通过减少TRPA1受体、TPRV1受体或上述两者的CPC活化减少 CPC味觉厌恶

技术领域

本发明涉及TRPA1和TRPV1受体活化的CPC拮抗剂。

背景技术

作为口中新鲜度的定义的一部分，相对于存在什么，更多地通过不存在什么来说明。呼吸减轻区域主要与抗菌活性物质和金属盐有关，其通常以牺牲味觉来递送。在刷牙时和不久之后的口臭控制是口腔护理产品必须具有的有益效果。抗菌剂通过减少存在的微生物的量来减少恶臭。这些抗菌剂的缺点是其拖延的余味。口臭主要由硫醇和胺构成。这些气味的来源取决于一天中的时间、个体的健康状态和个体的饮食。消化气味和代谢副产物导致一天中不同时间下的口臭(Archives of Oral Biology，第56卷，第1期，2011年1月，第29-34页；和Clinica Chimica Acta，第347卷，第1-2期，2004年9月，第25-39页；以及Journal of Chromatography B，第853卷，第1-2期，2007年6月15日，第54-61页)。口臭(半胱氨酸和甲硫氨酸代谢副产物；异戊二烯；甲基化烃；丁酸；1-丙醇；和丙酮)的主要原因具有与其相关联的变味。除了味觉受体相互作用之外，这些变味分子还可具有三叉神经效应(Food Quality and Preference，第21卷，第8期，2010年12月，第1026-1033页)

在美国公布2005/0031717中，其使用TRPV1的活化来调节咸味。在所用的TRPV1活化水平下，将CPC指定为对TRPV1无活性，并且使用CPC调节咸味。在本质上，其使用CPC的不利特性来中和高咸味组合物的不利影响。因此，其将不具有确定的对TRPV1的CPC活化的拮抗剂，因为其按原样使用CPC的特性，并且希望CPC味觉厌恶发生以便抵消咸味感知。

在WO 8806850中，其利用阳离子表面活性剂，诸如CPC，和阳离子氨基酸来增强食品和饮料的咸味。所述增强可能由于CPC对其它味觉的抑制，从而导致咸味被放大。

虽然季铵抗微生物剂如CPC已经长期被用于口腔漱口水中，但目前仍存在着对额外制剂的需要，这种制剂提供减轻在一些消费者中由这些抗微生物剂所表现的味觉厌恶不利影响，而不损害其效果的技术。本发明涉及包含CPC的组合物，所述组合物提供使用之后增加的消费者接受度，这是由于减轻了味觉不利影响。

发明内容

本发明提供了一种减少十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)TRPA1受体或TRPV1受体活化的方法，所述方法包括提供表达TRPA1受体或TRPV1受体中的至少一种的细胞；将CPC加入细胞中；添加CPC TRPA1受体拮抗剂或CPC TRPV1受体拮抗剂中的至少一种；并且测量TRPA1受体或TRPV1受体中的至少一种的受体活化。

本发明提供一种用于筛选通过十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)减少CPC TRPA1或TRPV1受体活化的化合物的方法，所述方法包括提供表达TRPA1受体或TRPV1受体中的至少一种的细胞；将CPC加入细胞中；将测试组合物加入细胞中；测量TRPA1受体或TRPV1受体中的至少一种的受体活化；并且确定与在不添加测试组合物的情况下，将CPC加入细胞中相比，TRPA1受体或TRPV1受体活化是否减少。

本发明提供一种个人护理组合物，所述个人护理组合物包含CPC；和CPC TRPA1受体拮抗剂或CPC TRPV1受体拮抗剂中的至少一种。

具体实施方式

现在已经令人惊奇地发现，TRPA1和TRPV1受体的十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)活化的拮抗剂提供对由于在口腔护理组合物中使用CPC而发生的味觉厌恶的显著减少。令人惊奇地，这些特异性针对TPRA1和TRPV1受体的拮抗剂由CPC诱发感觉，因为这些拮抗剂中的许多不阻断用于这些受体的标准激动剂，诸如特异性针对TRPA1受体的异硫氰酸烯丙基酯(不活化TRPV1受体)和特异性针对TRPV1受体的辣椒素(不活化TRPA1受体)。此外，因为CPC用作于TRPA1和TRPV1受体上以产生不利的味觉或缺乏品味的能力，所以存在提供由CPC对TRPA1或TRPV1受体的活化而产生的该味觉信号的拮抗剂的未满足的需要。

CPC可在口腔护理组合物的常规的日常使用期间改变味觉感知。这种味觉失真是由于CPC对TRPA1和TRPV1受体的活化。因此，当在口腔护理组合物中将拮抗剂与CPC组合时，这些受体的CPC活化的拮抗剂可提供在关于甜味和咸味感知的用后体验方面的改善。受TRPA1和TRPV1 CPC受体拮抗剂影响的其它味觉载体为酸味和苦味。

通过将CPC与TRPA1或TRPV1受体的CPC活化的一种或多种拮抗剂组合，可减轻TRPA1和TRPV1受体的CPC活化的不利感觉属性，诸如在使用包含CPC或金属/涩味感觉的组合物之后缺乏品尝食品的能力。拮抗剂可在相同组合物中与CPC一起递送，或可通过经由不同产品或应用，首先递送一种然后递送另一种来顺序递送，例如在一个方案中，诸如通过使用牙粉之后使用漱口液。本发明涉及个人护理组合物以及使用所述个人护理组合物的方法，在某些实施方案中，所述个人护理组合物可包含约1.2％CPC或更少，并且还可包括一种或多种针对TRPA1或TRPV1受体的拮抗剂。

不受理论的约束，据信由TRPA1或TRPV1受体的CPC活化产生的不利感觉可通过使用特异性针对CPC活化的TRPA1和TRPV1拮抗剂来减少。

SEQ ID NO	序列
		1	人TRPV1受体DNA序列
2	人TRPA1受体DNA序列

列出本文的SEQ ID NO:1和2的核苷酸序列的序列表，以题目为“13768M_TRPV1-TRPA1_ST25”的ASCII文本文件的形式与本专利申请同时提交。所述ASCII文本文件在2016年3月1日创建，并且大小为8K字节。根据MPEP§605.08和37CFR§1.52(e)，ASCII文本文件中的主题以引用方式并入本文。

如本文所用，术语“TRPV1”或“TRPV1受体”是指瞬时受体电位香草酸受体亚型1，其是优先表达在小直径的感觉神经元上的配体门控型、非选择性阳离子通道并且检测到有毒物以及其它物质。TRPV1受体以SEQ ID NO:1提供。

如本文所用，术语“TRPV1受体激动剂”是指根据本文所述的FLIPR方法，在1mM的浓度下提供比细胞中存在的基值钙含量高至少1000计数或20％的钙通量计数的任何化合物。术语“计数”定义为细胞系由于钙离子跨细胞膜流入时导致的荧光变化，所述钙离子与细胞内存在的钙离子敏感染料反应。

如本文所用，术语“CPC TRPV1受体拮抗剂”是指如通过存在于细胞中的钙的钙通量计数所测量的(在某些实施方案中，由FLIPR方法所测量的)任何化合物，所述化合物在1mM浓度时使由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致TRPV1受体活化减少至少1000个计数或低于由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPV1受体活化的20％。术语“计数”定义为细胞系由于钙离子跨细胞膜流入时导致的荧光变化，所述钙离子与细胞内存在的钙离子敏感染料反应。拮抗剂效应还可以通过在较低的受体激动剂浓度下(诸如100μM或更低的CPC)观察来测量。在某些实施方案中，如通过存在于细胞中的钙的最大钙通量计数所测量的(在某些实施方案中，由FLIPR方法所测量的)，CPC TRPV1受体拮抗剂在大于1mM的浓度时不会使由350nM辣椒素导致的TRPV1受体活化减少至少1000个计数或低于由350nM辣椒素导致的TRPV1受体活化的20％；这是指一些拮抗剂对由350nM辣椒素导致的TRPV1活化具有很少或不具有影响–从而使其成为CPC特异性拮抗剂。

其中所述CPC TRPV1受体拮抗剂可包含下列中的一种或多种：乙酸锌、2-辛烯酸、2-氨基苯甲酸萘-2-基酯、α-二甲基苯基丁酸酯、α-紫罗兰醇、4-(4-羟基-苯基)-丁-2-酮、异丁酸丁酯、4-羟基苯乙胺、β-紫罗酮、2-甲氧基肉桂醛、4-(4-甲氧基苯基)-2-丁酮、β-紫罗兰醇、N,N-二甲基邻氨基苯甲酸甲酯、4-苯基丁酸甲酯或乙酸癸酯。

如本文所用，术语“TRPV1受体减敏剂”是指示出激动剂活性并且造成已知TRPV1受体激动剂所致活化下降的任何化合物。以下TRPV1减敏剂可用于使TRPV1受体减敏以由CPC活化：β-环糊精、鞣酸、异丁子香酚、香草基乙醚、4-烯丙基-2,6-二甲氧基苯酚、2-十一碳烯醛、桃金娘烯醇；3-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-2-甲基丙醛、L-龙脑、对甲苯乙醛和磷酸氢二钠。

如本文所用，术语“TRPV1受体增强剂”是指提高直接激活TRPV1受体的激动剂的钙通量活性，但是不直接激活TRPV1受体的任何化合物。

如本文所用，术语“TRPA1”或“TRPA1受体”是指瞬时受体电位阳离子通道亚家族A成员1，其具有包含18个预测的锚蛋白重复的大的富含半胱氨酸的N末端。TRPA1是配体门控型的、非选择性阳离子通道，优先在小直径感觉神经元上表达。TRPA1受体以SEQ ID NO:2提供。

如本文所用，术语“TRPA1受体激动剂”是指根据本文所述的FLIPR方法，在1mM的浓度下提供比细胞中存在的基值钙含量高至少1000计数或20％的钙通量计数的任何化合物。术语“计数”定义为细胞系由于钙离子跨细胞膜流入时导致的荧光变化，所述钙离子与细胞内存在的钙离子敏感染料反应。

如本文所用，术语“CPC TRPA1受体拮抗剂”是指如通过存在于细胞中的钙的钙通量计数所测量的(在某些实施方案中，由FLIPR方法所测量的)任何化合物，所述化合物在1mM浓度时使由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPA1受体活化减少至少1000个计数或低于由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPA1受体活化的20％。术语“计数”定义为细胞系由于钙离子跨细胞膜流入时导致的荧光变化，所述钙离子与细胞内存在的钙离子敏感染料反应。拮抗剂效应还可以通过在较低的受体激动剂浓度下(诸如100μM或更低的CPC)观察来测量。在某些实施方案中，如通过存在于细胞中的钙的最大钙通量计数所测量的(在某些实施方案中，由FLIPR方法所测量的)，CPC TRPA1受体拮抗剂在大于1mM的浓度时不会使由50nM异硫氰酸烯丙基酯导致的TRPA1受体活化减少至少1000个计数或低于由50nM异硫氰酸烯丙基酯导致的TRPA1受体活化的20％；这是指一些拮抗剂对由50nM异硫氰酸烯丙基酯导致的TRPA1活化具有很少或不具有影响–从而使其成为CPC特异性拮抗剂。

其中所述CPC TRPA1受体拮抗剂可包括下列中的一种或多种：异戊酸丁子香酚酯、β-环糊精、异丁酸麦芽酚酯、鞣酸、葡萄糖酸锰、对薄荷-8-硫醇-3-酮、桃金娘烯醇、或柠檬酸锰。

如本文所用，术语“TRPA1受体增强剂”是指提高直接激活TRPA1受体的激动剂的钙通量活性，但是不直接激活TRPA1受体的任何化合物。

除非另外指明，下文中所用的所有百分比和比率均按总组合物的重量计。除非另外指明，本文提及的所有成分的百分比、比率和含量均基于该成分的实际含量，并且不包括在市售产品中可与这些成分一起使用的溶剂、填料或其它物质。

除非另外指明，本文提及的所有测量均在约25℃(即室温)下进行。

如本文所用，单词“包括/包含”及其变体旨在是非限制性的，使得列表中条目的叙述不排除其它也可能在本发明的材料、组合物、装置和方法中有用的类似条目。

如本文所用，字词“或”在用作两个或更多个元素的连词时，是指包括单独的所述元素或所述元素的组合；例如X或Y是指X或Y或两者。

所谓“个人护理组合物”是指在常规使用过程中被施用至身体表面或与身体表面接触以提供有益效果的产品。身体表面包括皮肤，例如表皮或粘膜；身体表面还包括与身体表面相关联的结构，例如毛发、牙齿、或指/趾甲。个人护理组合物的示例包括被施用于人体以改善外观、清洁、气味控制或整体美观的产品。个人护理组合物的非限制性示例包括毛发着色组合物、口腔护理组合物、剃须后凝胶和霜膏、剃须前准备物、剃须凝胶、霜膏或泡沫、保湿剂和洗剂、咳嗽和感冒组合物、免洗型皮肤洗剂和霜膏、洗发剂、调理剂、沐浴凝胶、条皂、盥洗室条皂、止汗剂、除臭剂、脱毛剂、口红、粉底、睫毛膏、防晒美黑霜和防晒乳液。

如本文所用，所谓“口腔护理组合物”是指在一般使用过程中不是被故意吞咽以用于特定治疗剂的全身给药的目的，而是在口腔中保留足够长的时间以接触牙齿表面或口腔组织的产品。口腔护理组合物的示例包括洁齿剂、漱口水、摩丝、泡沫、口喷剂、锭剂、咀嚼片、口香糖、口腔护理条，诸如牙贴白、口气清新可溶解条带、或敏感性条、牙线和牙线涂层、或义齿护理或粘合剂产品。所述口腔护理组合物还可掺入到条或膜上，用于直接施用或粘附到口腔表面。

如本文所用，术语“洁齿剂”包括牙齿或龈下糊剂、凝胶、粉末、或液体制剂，除非另外指明。洁齿剂组合物可以是单相组合物，或者可以是两种或更多种单独洁齿剂组合物的组合。洁齿剂组合物可呈任何期望的形式，如深条纹的、浅条纹的、多层的、糊剂周围有凝胶的、或它们的任意组合。在包括两种或更多种单独洁齿剂组合物的洁齿剂中，每种洁齿剂组合物均可被包含于物理上独立的分配器隔室中，并且并排分配。

如本文所用，术语“牙齿”是指自然牙齿以及人造牙齿或假牙。

除CPC TRPA1/TRPV1受体拮抗剂之外，本发明的口腔护理组合物还可包括下列组分中的一种或多种，诸如金属盐、甜味剂、载体材料、抗微生物剂、口臭减轻剂、不同于过氧化氢的漂白剂、表面活性剂、风味剂、抗牙垢剂、着色剂、感觉剂、研磨抛光材料、增稠材料、湿润剂和其它添加剂。

期望用于清洁和护理口腔的口腔护理组合物赋予清新和清洁的感觉，因为这种感觉为使用者提供持久清新和清洁的信号。除了清洁的感觉之外，使用者还期望例如通过他们的口腔护理方案体验口腔护理活性物质如抗牙垢剂的有益效果。然而，配制使用者可接受的口腔护理组合物的能力提出了挑战，因为许多用于赋予风味的组分可递送有益效果。相反，作为口腔护理组合物的基础的部分的组分可连同其增加的目标有益效果一起添加不期望的味道或感觉。因此，配制口腔护理组合物可为在可接受的风味和可接受的有益效果之间的平衡行为。

可用于本发明中的活性成分和其它成分可根据其美容和/或治疗有益效果或其假定的作用或运行模式来在本文中分类或描述。然而应当理解，在某些情况下，可用于本文的活性物质和其它成分可提供多于一种的美容和/或治疗有益效果或作用，或通过多于一种的作用方式起作用或运行。因此，本文的分类只是为了方便起见，而并不旨在将成分限制在所列的具体指定的功能或活性。

金属盐包括锌盐、亚锡盐、钾盐、铜盐、碱金属碳酸氢盐、以及它们的组合。金属盐具有从抗微生物剂到灵敏度剂或缓冲剂的广泛功能。本发明的口腔护理组合物可包含按所述组合物的总重量计约0.05％至约11％、约0.5％至约7％、或约1％至约5％的量的金属盐。

洁齿剂和其它口腔护理组合物中通常有足量的氟化物存在以便为组合物提供按所述口腔护理组合物的重量计约0.0025％至约5.0％或约0.005％至约2.0％的氟离子浓度，以提供防龋效果。各种各样的产生氟离子的物质可被用作本发明中的可溶性氟化物来源。代表性的氟化物离子源包括：氟化亚锡、氟化钠、氟化钾、氟化胺、单氟磷酸钠、氟化铟、胺的氟化物诸如Olaflur、以及许多其它的。产生氟离子的合适物质的示例存在于美国专利3,535,421和美国专利3,678,154中。

亚锡盐包括：氟化亚锡、氯化亚锡、碘化亚锡、氯氟化亚锡、乙酸亚锡、六氟合锆酸亚锡、硫酸亚锡、乳酸亚锡、酒石酸亚锡、葡萄糖酸亚锡、柠檬酸亚锡、苹果酸亚锡、甘氨酸亚锡、焦磷酸亚锡、偏磷酸亚锡、草酸亚锡、磷酸亚锡、碳酸亚锡、以及它们的组合。包含亚锡盐、尤其是氟化亚锡和氯化亚锡的洁齿剂描述于美国专利5,004,597中。亚锡盐的其它描述可见于美国专利5,578,293和美国专利5,281,410中。除了亚锡离子源以外，还可包括用于稳定亚锡的其它成分，诸如美国专利5,004,597和美国专利5,578,293中所描述的成分。

锌盐包括氟化锌、氯化锌、碘化锌、氯氟化锌、乙酸锌、六氟合锆酸锌、硫酸锌、乳酸锌、酒石酸锌、葡糖酸锌、柠檬酸锌、苹果酸锌、甘氨酸锌、焦磷酸锌、偏磷酸锌、草酸锌、磷酸锌、碳酸锌、以及它们的组合。

钾盐包括硝酸钾、柠檬酸钾、草酸钾、碳酸氢钾、乙酸钾、氯化钾、以及它们的组合。

在某些实施方案中，铜盐选自氟化铜、氯化铜、碘化铜、氯氟化铜、乙酸铜、六氟合锆酸铜、硫酸铜、乳酸铜、酒石酸铜、葡糖酸铜、柠檬酸铜、苹果酸铜、甘氨酸铜、焦磷酸铜、偏磷酸铜、草酸铜、磷酸铜、碳酸铜、以及它们的组合。在另一个实施方案中，铜盐选自葡糖酸铜、乙酸铜、甘氨酸铜、以及它们的组合。

碱金属碳酸氢盐是水溶性的，除非被稳定化，它在含水体系中易于释放二氧化碳。也被称为发酵粉的碳酸氢钠能够被用作碱金属碳酸氢盐。所述碱金属碳酸氢盐还可用作缓冲剂。由于碱金属碳酸氢盐缓冲的pH，碳酸氢盐可处于与亚锡离子源隔离的相中。在某些实施方案中，本发明的口腔护理组合物可包含按所述口腔护理组合物的重量计约0.5％至约50％、约0.5％至约30％、约2％至约20％、或约5％至约18％的碱金属碳酸氢盐。

一些可被用于本发明中的金属盐，诸如氯化锌、柠檬酸锌、葡糖酸铜、和葡糖酸锌，还与被描述为恶劣、干燥、土味、金属味、酸、苦和涩的变味相关联。参见，例如Hu,Hongzhen等人在Nature Chemical Biology(2009)，5(3)，第183-190页，题目为：Zinc ActivatesDamage-Sensing TRPA1Ion Channels的文章。

甜味剂包括糖精、氯代-蔗糖(三氯蔗糖)、甜菊糖苷、莱苞迪甙A、莱苞迪甙B、莱苞迪甙C、莱苞迪甙D、莱苞迪甙E、莱苞迪甙F、杜尔可甙A、杜尔可甙B、甜茶苷、甜叶菊、蛇菊苷、丁磺氨钾、木糖醇、新橙皮苷DC、阿力甜、天冬甜素、纽甜(neotame)、阿力甜、奇甜蛋白、环磺酸盐、甘草素、罗汉果甜苷IV、罗汉果苷V、罗汉果甜味剂、赛门苷、莫纳汀(monatin)及其盐(莫纳汀(monatin)SS、RR、RS、SR)、仙茅甜蛋白、应乐果甜蛋白、马槟榔甜蛋白、布拉齐因(brazzein)、荷兰甜精、叶甘素、根皮酚苷(glycyphyllin)、根皮苷、三叶苷、贝诺苷(baiyanoside)、奥斯雷丁(osladin)、聚波朵苷(polypodoside)A、蝶卡苷(pterocaryoside)A、蝶卡苷(pterocaryoside)B、慕库若苷(mukurozioside)、弗米索苷(phlomisoside)I、甘草苷I、阿布索苷(abrusoside)A、青钱柳甙I、N-[N-[3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙基]-L-α-天冬氨酰基]-L-苯丙氨基1-甲基酯、N-[N-[3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-3-甲基丁基]-L-α-天冬氨酰基]-L-苯丙氨酸1-甲基酯、N-[N-[3-(3-甲氧基-4-羟基苯基)丙基]-L-α-天冬氨酰基]-L-苯丙氨酸1-甲基酯、它们的盐、以及它们的组合。

Rebiana是得自Cargill Corp.,Minneapolis,MN的甜菊糖苷，其是来自甜菊植物叶子中的提取物(下文称为“Rebiana”)。这是结晶的二萜配醣物，比蔗糖甜约300倍。可被组合的合适甜菊糖苷的示例包括莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷B、莱鲍迪苷C、莱鲍迪苷D、莱鲍迪苷E、莱鲍迪苷F、杜克苷A、杜克苷B、甜茶苷、蛇菊苷或甜菊双糖苷。根据本发明的尤其期望的实施方案，高效甜味剂的组合包括莱苞迪甙A与莱苞迪甙B、莱苞迪甙C、莱苞迪甙F、莱苞迪甙F、蛇菊苷、甜菊双糖苷、杜尔可甙A的组合。甜味剂一般以按所述口腔护理组合物的总重量计约0.0005％至约2％的含量包含在口腔护理组合物中。

载体材料包括水、甘油、山梨醇、分子量小于约50,000的聚乙二醇、丙二醇和其它可食用多元醇、乙醇、或它们的组合。本发明的口腔护理组合物可包含按所述组合物的重量计约5％至约80％的载体材料。在某些实施方案中，本发明的组合物可以按所述口腔护理组合物的总重量计约10％至约40％的量包含载体材料。

抗微生物剂包括季铵化合物。在本发明中有用的那些包括例如其中季氮上的一个或两个取代基具有约8至约20，通常约10至约18个碳原子的碳链长度(通常为烷基基团)，同时其余取代基(通常为烷基或苄基基团)具有较低数目碳原子如约1至约7个碳原子(通常为甲基或乙基基团)的那些。十二烷基三甲基溴化铵、十四烷基氯化吡啶鎓、杜灭芬、N-十四烷基-4-乙基氯化吡啶鎓、十二烷基二甲基(2-苯氧乙基)溴化铵、苄基二甲基硬脂基氯化铵、季铵化5-氨基-1,3-双(2-乙基-己基)-5-甲基六氢嘧啶、苯扎氯铵、苄索氯铵和甲基苄索氯铵是典型的季铵抗微生物剂的示例。

其它季铵化合物包括吡啶鎓化合物。吡啶鎓季铵化合物的示例包括双[4-(R-氨基)-1-吡啶鎓]烷烃，如美国专利4,206,215中所公开的，以及十六烷基吡啶和十四烷基吡啶卤化盐(即，氯化物、溴化物、氟化物和碘化物)。

本发明的口腔护理组合物还可包含其它抗微生物剂，包括非阳离子抗微生物剂，如卤代二苯基醚、酚类化合物(包括苯酚及其同系物)、一烷基和多烷基卤代酚以及芳族卤代酚、间苯二酚及其衍生物、木糖醇、双酚化合物和卤代N-水杨酰苯胺、苯甲酸酯和卤代N-碳酰苯胺。另外的有用的抗微生物剂是酶，包括糖苷内切酶、木瓜蛋白酶、葡聚糖酶、突变酶、以及它们的组合。此类试剂公开在美国专利2,946,725和美国专利4,051,234中。其它抗微生物剂的示例包括氯己定、以及风味油如百里酚。本发明的组合物可包含按所述口腔护理组合物的总重量计约0.035％或更多、约0.1％至约1.5％、约0.045％至约1.0％、或约0.05％至约0.10％的量的抗微生物剂。

漂白剂包括过氧化物、过硼酸盐、过碳酸盐、过氧酸、过硫酸盐、以及它们的组合。合适的过氧化物化合物包括过氧化氢、过氧化脲、过氧化钙、过氧化钠、过氧化锌、或它们的组合。过碳酸盐的一个示例是过碳酸钠。过硫酸盐的一个示例包括过硫酸氢钾。一些漂白剂在口腔护理组合物内提供冷灼烧感，例如过氧化物和过碳酸盐。本发明的组合物可包含按所述口腔护理组合物的总重量计约0.01％至约30％、约0.1％至约10％、或约0.5％至约5％的量的漂白剂。

表面活性剂可包括阴离子表面活性剂如有机磷酸酯，其包括磷酸烷基酯。这些表面活性有机磷酸酯试剂对釉质表面具有强亲和力，并且具有充分的表面结合倾向，以使表膜蛋白质解吸，并且保持附着到釉质表面上。有机磷酸酯化合物的合适示例包括单-、二-或三酯，它们由下文的通式结构表示，其中Z1、Z2或Z3可相同或不同，至少一个为有机部分，在一个实施方案中选自1至22个碳原子的直链或支链烷基或烯基基团，其任选被一个或多个磷酸酯基团、烷氧基化烷基或烯基，(多)糖、多元醇或聚醚基团取代。

一些其它有机磷酸酯剂包括由以下结构表示的烷基或烯基磷酸酯：

其中R1表示6至22个碳原子的直链或支链烷基或烯基基团，其任选地被一个或多个磷酸酯基团取代；n和m独立地且分别为2至4，并且a和b独立地且分别为0至20；Z2和Z3可以相同或不同，其各自表示氢、碱金属、铵、质子化烷基胺或质子化的官能烷基胺，例如烷醇胺，或R1─(OCnH2n)a(OCmH2m)b─基团。合适试剂的示例包括烷基磷酸酯和烷基(聚)烷氧基磷酸酯如月桂基磷酸酯；PPG5鲸蜡硬脂基聚氧乙烯醚-10磷酸酯；月桂基聚氧乙烯醚-1磷酸酯；月桂基聚氧乙烯醚-3磷酸酯；月桂基聚氧乙烯醚-9磷酸酯；三月桂基聚氧乙烯醚-4磷酸酯；C12-18PEG 9磷酸酯；二月桂基聚氧乙烯醚-10磷酸钠。在一个实施方案中，烷基磷酸酯是聚合烷基磷酸酯。聚合烷基磷酸酯的示例包括含有重复的烷氧基基团作为聚合部分的那些，具体地含有3个或更多个乙氧基、丙氧基、异丙氧基或丁氧基基团的那些。

可用于本发明的两性离子或两性表面活性剂包括脂族季铵、鏻和锍化合物的衍生物，其中所述脂族基团可以是直链或支链的，并且其中脂族取代基之一含有约8至18个碳原子，并且一个脂族取代基包含阴离子水增溶基团，诸如羧基、磺酸根、硫酸根、磷酸根或膦酸根。合适的两性表面活性剂包括甜菜碱表面活性剂，如授予Polefka等人的美国专利5,180,577中所公开的。典型的烷基二甲基甜菜碱包括癸基甜菜碱或2-(N-癸基-N,N-二甲基铵基)乙酸酯、椰油基甜菜碱或2-(N-椰油基-N,N-二甲基铵基)乙酸酯、十四烷基甜菜碱、棕榈基甜菜碱、月桂基甜菜碱、鲸蜡基甜菜碱、硬脂基甜菜碱等。本文中有用的两性表面活性剂还包括氧化胺表面活性剂。酰氨基甜菜碱由椰油酰氨基乙基甜菜碱、椰油酰氨基丙基甜菜碱(CAPB)、以及月桂酰氨基丙基甜菜碱所例示。常常与这些表面活性剂相关联的不良味道为皂味、苦味、化学品味、或人造味。

其它合适的聚合有机磷酸酯试剂包括葡聚糖磷酸酯、多葡糖苷磷酸酯、烷基多葡糖苷磷酸酯、聚甘油基磷酸酯、烷基聚甘油基磷酸酯、聚醚磷酸酯和烷氧基化多羟基醇磷酸酯。一些具体的示例为PEG磷酸酯、PPG磷酸酯、烷基PPG磷酸酯、PEG/PPG磷酸酯、烷基PEG/PPG磷酸酯、PEG/PPG/PEG磷酸酯、二丙二醇磷酸酯、PEG甘油基磷酸酯、PBG(聚丁二醇)磷酸酯、PEG环糊精磷酸酯、PEG脱水山梨糖醇磷酸酯、PEG烷基脱水山梨糖醇磷酸酯和PEG甲基葡糖苷磷酸酯。合适的非聚合磷酸酯包括烷基单甘油酯磷酸酯、烷基脱水山梨糖醇磷酸酯、烷基甲基葡糖苷磷酸酯、烷基蔗糖磷酸酯。这些磷酸酯中的杂质可引起灼热感。杂质可包括十二烷醇、十二醛、苯甲醛、和其它TRPA1或TRPV1激动剂。

可用于本发明中的阳离子表面活性剂包括具有一个长烷基链(包含约8至18个碳原子)的季铵化合物的衍生物，如月桂基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、椰油烷基三甲基亚硝酸铵、十六烷基氟化吡啶鎓等。具有洗涤剂性能的季铵卤化物能够被使用，诸如美国专利3,535,421中所描述的那些。在本文公开的口腔护理组合物中，某些阳离子表面活性剂也可用作杀菌剂。

可用于口腔护理组合物中的一些风味剂和风味剂组分的示例是薄荷油、冬青油、丁香芽油、桂皮、鼠尾草、欧芹油、牛至属植物、柠檬、橙、丙烯基乙基愈创木酚、洋茉莉醛、4-顺式-庚烯醛、二乙酰、对叔丁基苯基乙酸甲酯、水杨酸甲酯、水杨酸乙酯、乙酸1-薄荷酯、噁烷酮、α-紫罗兰酮、肉桂酸甲酯、肉桂酸乙酯、肉桂酸丁酯、丁酸乙酯、乙酸乙酯、邻氨基苯甲酸甲酯、乙酸异戊酯、丁酸异戊酯、己酸烯丙酯、丁子香酚、桉树脑、百里酚、肉桂醇、辛醇、辛醛、癸醇、癸醛、苯乙醇、苄醇、α-萜品醇、里哪醇、苧烯、橙花醛、柠檬醛、香叶醛、香叶醇橙花醇、麦芽酚、乙基麦芽酚、茴香脑、二氢茴香脑、香芹酮、薄荷酮、β-大马酮、紫罗酮、γ-癸内酯、γ-壬内酯、γ-十一烷酸内酯、或它们的组合。一般来讲，合适的风味成分是结构特征和官能团较不倾向于氧化还原反应的化学物质。这些包括是饱和的或含有稳定的芳族环或酯基团的风味剂化学物质的衍生物。

风味剂一般以按所述口腔护理组合物的总重量计约0.4％至约5％或约1％至约3％的量存在。

抗牙垢剂包括焦磷酸盐作为焦磷酸根离子的来源。可用于本发明组合物中的焦磷酸盐包括例如焦磷酸一碱金属盐、二碱金属盐和四碱金属盐、以及它们的组合。其未水合形式和水合形式的焦磷酸二氢二钠(Na2H2P2O7)、酸式焦磷酸钠、焦磷酸四钠(Na4P2O7)和焦磷酸四钾(K4P2O7)是其它物质。在本发明的组合物中，焦磷酸盐可以三种形式中的一种存在：大部分溶解、大部分不溶解、或溶解和未溶解焦磷酸盐的组合。用于制备这些组合物的焦磷酸盐的量为任何牙垢控制有效量。在不同实施方案中，焦磷酸盐的量可以是按所述口腔护理组合物的总重量计约1.5％至约15％，约2％至约10％，或约3％至约8％。

可用于口腔护理组合物中的一些着色剂的示例包括D&C Yellow No.10、FD&CBlue No.1、FD&C Red No.40、D&C Red No.33、以及它们的组合。在某些实施方案中，所述组合物以按所述口腔护理组合物的重量计约0.0001％至约0.1％或约0.001％至约0.01％的量包含着色剂。一些着色剂提供不良味道，例如，D&C Red No.33。通常与这些着色剂相关联的不良味道为金属味、辛辣味或化学物质味。着色剂一般以按所述口腔护理组合物的重量计约0.001％至约0.5％的量存在。

感觉剂也可为口腔护理组合物的一部分。感觉剂分子如清凉、温暖和麻刺感试剂可用于递送信号给使用者。感觉剂一般以按所述口腔护理组合物的重量计约0.001％至约0.8％的量存在。最熟知的凉爽感觉剂化合物为薄荷醇，尤其是L-薄荷醇，其天然存在于薄荷油，特别是野薄荷(Mentha arvensis L)和绿薄荷(Mentha viridis L)中。在薄荷醇异构体中，L-异构体最广泛存在于自然界中，并且是通常被命名为薄荷醇的物质，具有凉爽剂性质。L-薄荷醇具有特征性的胡椒薄荷气味，具有爽口清新的味道，并且当施用到皮肤和黏膜表面上时，产生凉爽的感觉。薄荷醇的其它异构体(新薄荷醇、异薄荷醇和新异薄荷醇)具有一定程度的相似性，但是气味和口味不同，例如，具有令人不悦的气味和味道，描述为泥土味、樟脑味、霉味等。异构体之间最大的差异是它们的清凉能力。L-薄荷醇提供最具效力的清凉感，具有约800ppb的最低的清凉度阈值，即可清晰辨识清凉效果时的浓度。在此含量下，其它异构体无凉爽效果。例如，据报道，d-新薄荷醇具有约25,000ppb的凉爽度阈值，并且l-新薄荷醇具有约3,000ppb的凉爽度阈值。[R.Emberger和R.Hopp，“Synthesis andSensory Characterization of Menthol Enantiomers and Their Derivatives for theUse in Nature Identical Peppermint Oils”，Specialty Chemicals(1987)，7(3)，193-201]。

在合成的冷却剂中，许多是薄荷醇的衍生物或者与薄荷醇结构上相关的，例如含有环己烷部分并且是官能团衍生的，所述官能团包括羧酰胺、缩酮、酯、醚和醇。示例包括ρ-薄荷酰胺化合物如商品名为“WS-3”的N-乙基对薄荷-3-甲酰胺，以及此系列的其它化合物如WS-5(N-乙氧基羰基甲基对薄荷-3-甲酰胺)、WS-12(1R*,2S*)-N-(4-甲氧基苯基)-5-甲基-2-(1-甲基乙基)环己甲酰胺]和WS-14(N-叔丁基对薄荷-3-甲酰胺)。薄荷烷羧基酯的示例包括WS-4和WS-30。结构上与薄荷醇不相关的合成甲酰胺凉爽剂的示例是被称为“WS-23”的N,2,3-三甲基-2-异丙基丁酰胺。合成凉爽剂的其它示例包括所有可得自TakasagoCorp.(Tokyo，Japan)的醇衍生物诸如被称为TK-10的3-(1-薄荷氧基)-丙烷-1,2-二醇、异蒲勒醇(商品名为Coolact P)和对薄荷烷-3,8-二醇(商品名为Coolact 38D)；被称为MGA的薄荷酮甘油缩酮；薄荷酯，如乙酸薄荷酯、乙酰乙酸薄荷酯、被称为的由SymriseAG(Holzminden，Germany)提供的乳酸薄荷酯、和以商品名Physcool得自V.Mane FILS(Notre Dame，France)的琥珀酸单薄荷酯。TK-10描述于美国专利4,459,425中。薄荷醇的其它醇和醚衍生物描述于GB 1,315,626和美国专利4,029,759、5,608,119和6,956,139中。WS-3和其它甲酰胺清凉剂描述于美国专利4,136,163、4,150,052、4,153,679、4,157,384、4,178,459和4,230,688中。

附加的N-取代的对薄荷烷甲酰胺描述于WO 2005/049553A1中，包括N-(4-氰甲基苯基)对薄荷烷甲酰胺、N-(4-氨磺酰苯基)对薄荷烷甲酰胺、N-(4-氰基苯基)对薄荷烷甲酰胺、N-(4-乙酰基苯基)对薄荷烷甲酰胺、N-(4-羟甲基苯基)对薄荷烷甲酰胺和N-(3-羟基-4-甲氧基苯基)对薄荷烷甲酰胺。其它N-取代的对薄荷烷甲酰胺包括氨基酸衍生物，如公开于WO 2006/103401以及美国专利4,136,163、4,178,459和7,189,760中的那些，如N-((5-甲基-2-(1-甲基乙基)环己基)羰基)甘氨酸乙酯和N-((5-甲基-2-(1-甲基乙基)环己基)羰基)丙氨酸乙酯。包括那些氨基酸如甘氨酸和丙氨酸的薄荷基酯公开在例如EP 310,299和美国专利3,111,127、3,917,613、3,991,178、5,703,123、5,725,865、5,843,466、6,365,215、6,451,844和6,884,903中。缩酮衍生物描述于例如美国专利5,266,592、5,977,166和5,451,404中。结构上与薄荷醇无关但是已报道具有类似的生理凉爽效果的其它试剂包括α-酮基烯胺衍生物，其描述于美国专利6,592,884中，包括3-甲基-2-(1-吡咯烷基)-2-环戊烯-1-酮(3-MPC)、5-甲基-2-(1-吡咯烷基)-2-环戊烯-1-酮(5-MPC)和2,5-二甲基-4-(1-吡咯烷基)-3(2H)-呋喃酮(DMPF)；icilin(也称为AG-3-5，化学名1-[2-羟基苯基]-4-[2-硝基苯基]-1,2,3,6-四氢吡啶-2-酮)，描述于Wei等人，J.Pharm.Pharmacol.(1983),35:110-112。对薄荷醇和合成凉爽剂的凉爽剂活性的综述包括H.R.Watson等人的J.Soc.Cosmet.Chem.(1978)，29，185-200和R.Eccles，J.Pharm.Pharmacol.(1994)，46，618-630。

结构上与薄荷醇无关但是已报道具有类似的生理清凉效果的其它试剂包括α-酮基烯胺衍生物，其被描述于美国专利6,592,884中，包括3-甲基-2-(1-吡咯烷基)-2-环戊烯-1-酮(3-MPC)、5-甲基-2-(1-吡咯烷基)-2-环戊烯-1-酮(5-MPC)和2,5-二甲基-4-(1-吡咯烷基)-3(2H)-呋喃酮(DMPF)；icilin(也称为AG-3-5，化学名1-[2-羟基苯基]-4-[2-硝基苯基]-1,2,3,6-四氢吡啶-2-酮)，描述于Wei等人，J.Pharm.Pharmacol.(1983),35:110–112中和如美国专利4,070,496中所报道的膦氧化物。

一些温暖感觉剂的示例包括乙醇；辣椒；烟酸酯如烟酸苄酯；多元醇；辣椒粉；辣椒酊剂；辣椒提取物；辣椒碱；同型辣椒碱；同型二氢辣椒碱；壬酰基香兰酰胺；壬酸香兰基醚；香兰醇烷基醚衍生物如香兰基乙基醚、香兰基丁基醚、香兰基戊基醚和香兰基己基醚；异香兰醇烷基醚；香兰醇乙醚；藜芦基醇衍生物；取代的苄醇衍生物；取代的苄醇烷基醚；香兰丙二醇缩醛；乙基香兰丙二醇缩醛；姜提取物；生姜油；姜醇；姜油酮；或它们的组合。温热感觉剂一般以按所述口腔护理组合物的重量计约0.05％至约2％的含量包含在口腔护理组合物中。

磨料抛光物质可为不过分地磨损牙质的任何材料。本发明的口腔护理组合物可包含按所述口腔护理组合物的重量计约6％至约70％、或约10％至约50％的量的磨料抛光物质。典型的磨料抛光物质包括：二氧化硅，包括凝胶和沉淀；氧化铝；磷酸盐，包括正磷酸盐、聚偏磷酸盐和焦磷酸盐；以及它们的混合物。具体示例包括二碱式磷酸钙二水合物、焦磷酸钙、磷酸三钙、聚偏磷酸钙、不溶性聚偏磷酸钠、稻壳二氧化硅、水合氧化铝、β-焦磷酸钙、碳酸钙和树脂磨料诸如脲和甲醛的粒状缩合产物，以及其它物质，如美国专利3,070,510中所公开的。在某些实施方案中，如果口腔组合物或颗粒相包含平均链长为约4或更长的多磷酸盐，则含钙的研磨剂和氧化铝不是优选的研磨剂。

经常用于口腔护理组合物中的是多种类型的二氧化硅牙齿研磨剂，因为它们具有使牙齿特别清洁但又不过度磨损牙釉或牙质的磨光性能。可用于本发明中的二氧化硅磨料抛光材料以及其它研磨剂一般具有约0.1μm至约30μm或约5μm至约15μm范围的平均粒度。所述研磨剂可以是沉淀二氧化硅或硅胶，如美国专利3,538,230和美国专利3,862,307中所述的二氧化硅干凝胶。可使用以商品名“Syloid”由W.R.Grace&Company,Davison ChemicalDivision,Augusta,GA销售的二氧化硅干凝胶。还可使用沉淀二氧化硅材料，如以商品名“Zeoden”由J.M.Huber Corporation,Edison,NJ市售的那些，尤其是带有名称“Zeodent119“的二氧化硅。用于本发明的口腔护理组合物中的二氧化硅牙齿研磨剂类型更详细地描述于美国专利4,340,583和美国专利5,589,160、5,603,920、5,651,958、5,658,553和5,716,601中。

增稠材料和粘结剂可用于为本发明的口腔护理组合物提供所期望的稠度。例如，当口腔护理组合物是牙粉、局部口服凝胶、漱口水、义齿产品、口腔喷剂、锭剂、口服片剂或口香糖的形式时，增稠材料的量和类型将取决于产品的形式。增稠材料包括羧乙烯基聚合物、角叉菜胶、羟乙基纤维素和纤维素醚的水溶性盐，如羧甲基纤维素钠和羟乙基纤维素钠。也可使用天然树胶如刺梧桐树胶、黄原胶、阿拉伯树胶和黄蓍胶。胶态硅酸镁铝或细分的二氧化硅可用作增稠材料的一部分以进一步改善质地。增稠材料可以按所述口腔护理组合物的重量计约0.1％至约15％的量存在。

湿润剂防止口腔护理组合物因暴露于空气中而变硬，并且某些湿润剂还可赋予牙粉组合物以期望的甜味。适用于本发明中的湿润剂包括甘油、山梨醇、聚乙二醇、丙二醇、木糖醇和其它可食用的多元醇。本发明的口腔护理组合物可包含按所述口腔护理组合物的重量计约0％至约70％、或约15％至约55％的量的湿润剂。

实施例

实施例1

测定CPC味觉失真：

所述测定包括基础味道溶液(甜味、咸味、酸味)和通过感觉专门小组成员进行感知强度评价，如下文所述。感觉专门小组成员为11位年龄为18岁以上的女性，并且用于产生用于以下实施例的所有小组数据。每位专门小组成员完成关于产品/类别的感官属性的定义和评价方案的至少120小时的培训。培训/评价方法是Modified Spectrum^TM方法，并且符合关于选择和训练感觉小组成员的ASTM指南。基础味道溶液(甜味、咸味、酸味-表1)用于将专门小组成员校准到所述基础味道溶液(甜味、咸味、酸味)中每一种的味觉强度标准，这是在评价样品的强度并对CPC失真程度相对于由本发明化学物质导致的味觉恢复进行定量时，他们可能使用的。

通过在室温下(25℃)将确定比率的特定味觉原料溶于(将溶液混合直至在不超过20cm的距离处观察时颗粒不再可见)滤过的水中(PuR过滤器)到余量至100％来制备基础味道溶液(甜味、咸味和酸味)，如表1中所示。

表1

另外，如表2所示，具有已知和不同味道的整个食物可用于对CPC味道失真度进行定量。那些食物为：苹果片(去皮)、汤力水、香蕉、菠萝汁、薄荷糖果盘和奶油干酪。

表2

整个食物	量
		苹果片(去皮)	2.5cm片
汤力水	30ml
		香蕉	2.5cm片
菠萝汁	30ml
		薄荷糖果盘	5g盘
奶油干酪	20g

参考值

使用0(最低)至60(最高)强度分数，专门小组成员将基础味道溶液(低、中等、高)的味道与指定的参考值相关联(对于60分感觉分数为20、38和55)，以建立对每种基础味道溶液的基线参考强度值。专门小组成员选择参考值(对于60分感觉分数为20、38和55)。专家小组成员用已过滤水漱口以中和他们的口。专门小组成员自己确定中和其口所需的预漱口的水量、持续时间和频率。然后，他们用10ml的甜味、咸味或酸味浓缩物漱口30秒，然后吐出。在吐出之后，专门小组成员立即评定味道溶液的强度以将其味道体验与溶液的参考值进行比对。在每个样品之后，专门小组成员等待20分钟，之后评价下一个味道浓度(低到中等以及中等到高)。这种评估方法用于九种溶液中的每一种。

CPC味道失真测试：

每位专门小组成员用10ml的下列物质漱口30秒：可商购获得的CPC漱口水(CrestProHealth Mouthwash–Procter&Gamble Co.,Cincinnati,OH)、表1中的基础味道溶液(甜味、咸味和酸味)、或具有TRPA1或TRPV1拮抗剂的CPC漱口水(下表7中列出的漱口液)，然后吐出(在评定样品CPC溶液之前，每位专门小组成员用促味剂溶液漱口并校准至参考值(20、38、55))。专门小组成员等待20分钟，之后吐出，然后用10ml的甜味、咸味或酸味的味道溶液以所定义浓度中的一种进行漱口。然后对于60分的分数来评定样品CPC溶液的味道强度。在每种样品之间观察20分钟清洗阶段。在单次漱口变量测试阶段内，对九种基础味道溶液中的每一种均按照这种方法评价。

表3：CPC味道失真基线

表3中的数据表明由于使用CPC漱口液，甜味和咸味是呈浓度依赖性方式的最受影响的感觉信号。例如，当本身被使用时，10％基础甜味溶液对于0-60分数的参考值为38。在使用基础甜味溶液并且然后使用CPC漱口液时，甜味值下降至21。16％基础甜味对照溶液具有55的参考值并且在使用CPC漱口液时，对于该分数范围，基础甜味溶液仅被感知为39。

为理解CPC对食物环境中的味道的影响，以与味道溶液相似的方式测试整个食物。制备食物(表2中所示的制备说明)使得部分尺寸对于每次评价而言均是一致的。指示专门小组成员在其口中操纵食物30秒。如表4所示，小组在使用CPC漱口液(Crest ProHealthMouthwash)之前和之后评价食物的甜味、咸味和酸味的强度。然后，专门小组成员用10ml的已过滤水漱口并等待20分钟，然后对下一个食物进行取样。

表4：食物的CPC味道失真基线

虽然CPC味道失真的预期改善是在使用CPC漱口水之后食用食物，但使用整个食物捕集味道失真度是困难的，并且最有可能的是由于每种食品类型的复杂特性和可变性。上表4中的每个其它列示出CPC对那些食物中每一种的甜味、酸味和咸味的影响。所述困难可能与食物被烹饪不同的时间量有关，并且其具有甜味、咸味和酸味的混合物；或者水果彼此之间的成熟度不相同。

实施例2

表5描述了TRPA1受体的CPC活化的拮抗剂的评价。通过将CPC与TRPA1表达细胞混合来进行TRPA1受体的活化，以便鉴定针对由CPC导致TRPA1活化的拮抗剂。在设置为5％CO₂的37℃哺乳动物细胞培养箱中，使由人TRPA1受体(SEQ ID NO.2)稳定转染的HEK-293(人胚肾)细胞在75cm²烧瓶内的15mL生长介质[补充有10％FBS(胎牛血清)、100μg/mL青霉素/链霉素、100μg/mL G418的高糖DMEM(Dulbecco's Modification of Eagle's Medium)]内生长3天。加入10mL的PBS(磷酸盐缓冲液)，轻轻手摇振荡分离细胞。将细胞转移至50mL管中并且以850rpm离心3分钟以除去PBS。离心后，细胞沉淀物形成在管子底部，使它们与上层溶液分离。弃去上清液，并将细胞沉淀物悬浮在1mL新鲜生长介质中，其中加入5μl(12.5μg)Fluo-4AM(Molecular Probes,Inc.,Grand Island,NY)钙指示剂，并且轻轻振荡培养30分钟。Fluo-4AM是用于定量在100nM至1微摩尔范围内的细胞Ca²⁺浓度的荧光染料。在30分钟结束时，加入45mL分析缓冲液[1xHBSS(Hank平衡盐溶液)、20mM HEPES(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)]以洗涤细胞，并且然后将所得混合物在850rpm下离心3分钟以除去过量的缓冲液和Fluo-4AM钙指示剂，离心之后移除分析缓冲液。将沉淀的细胞重新悬浮在10mL分析缓冲液中，并且将90μL等分试样(约50,000个细胞)/孔递送至96-孔的包含化合物(纯化混物的终浓度为1mM，提取物为0.04％)或者缓冲液对照物的检测板上，并且在室温下温育30分钟。在30分钟后，将板置于荧光成像读板仪(FLIPR^TETRA，得自Molecular Devices，Sunnyvale，CA)中，并且记录基底的荧光(激发波长488nm，并且发射波长510nm)。FLIPR检测法是用于检测细胞内钙浓度变化的公认方法。然后加入20μl的CPC(终浓度为100uM)并记录荧光。为了确定测试化合物对TRPA1受体的直接影响，在添加每种化合物之后立即测量荧光。

将TRPA1受体的CPC活化减少多于20％的化合物被认为是针对TRPA1受体的CPC活化的拮抗剂，从而被认为是减轻与该受体的CPC活化相关联的变味的良好候选物。

表5(针对TRPA1的CPC活化的TRPA1受体拮抗剂)

表5的最后列示出来自测试的化合物的TRPA1的CPC活化的拮抗水平。例如，桃金娘烯醇具有对TRPA1受体的CPC活化的86％抑制。

表6描述了对TRPA1受体的CPC活化的拮抗剂的评价。TRPA1受体的活化通过将CPC与TRPA1受体表达细胞混合来进行，如本方法中所述。为了鉴定对由CPC导致的TRPV1受体活化的拮抗剂，测定在拮抗剂存在下CPC诱导的细胞内钙离子(Ca⁺²)含量的减少。在设置为5％CO₂下的33℃哺乳动物细胞培养箱中，由人TRPA1受体(SEQ ID NO.1)稳定转染的HEK-293(人胚胎肾)细胞在在75cm²烧瓶内的15mL生长介质[补充有10％ FBS(胎牛血清)、100μg/mL青霉素/链霉素、100μg/mL G418的高糖DMEM(Dulbecco's Modification of Eagle'sMedium)]内生长3天。加入10mL的PBS(磷酸盐缓冲液)，轻轻手摇振荡分离细胞。将细胞转移至50mL管中并且以850rpm离心3分钟以除去PBS。在离心后，细胞沉淀物形成在管子底部，使它们与上层溶液分离。弃去上清液，将细胞沉淀物悬浮在1ml新鲜培养基中，其中加入5μl(12.5μg)Fluo-4AM(Molecular Probes，Inc.)钙指示剂并轻轻振荡培养30分钟。Fluo-4AM是用于定量在100nM至1mM范围内的细胞Ca²⁺浓度的荧光染料。在30分钟结束时，加入45ml分析缓冲液[1xHBSS(Hank平衡盐溶液)、20mM HEPES(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)]以洗涤细胞，并且然后将所得混合物在850rpm下离心3分钟以除去过量的缓冲液和Fluo-4AM钙指示剂，离心之后移除分析缓冲液。将沉淀的细胞重新悬浮在10ml分析缓冲液中，并且将90μl等分试样(约50,000个细胞)/孔递送至96-孔的包含化合物(纯化混物的终浓度为1mM，提取物为0.04％)或者缓冲液对照物的检测板上，并且在室温下温育30分钟。在30分钟后，将板置于荧光成像读板仪(FLIPR^TETRA，得自Molecular Devices)中，并且记录基底的荧光(激发波长488nm，并且发射波长510nm)。FLIPR检测法是用于检测细胞内钙浓度变化的公认方法。然后加入20μl的CPC(最终浓度为100uM)并记录荧光。为了确定测试化合物对TRPV1受体的直接影响，在添加每种化合物之后立即测量荧光。

使CPC活化减少多于20％的化合物被认为是该受体的CPC活化的拮抗剂，从而被认为是减轻与该受体的CPC活化相关联的变味的良好候选物。

表6(TRPV1的CPC活化的TRPV1受体拮抗剂)

表6中的数据示出有效抑制TRPV1受体的CPC活化的化合物。例如，β-紫罗兰醇抑制TRPV1的CPC活化65.9％。

实施例3

使用本领域普通技术人员已知的常规方法来制备表7中的漱口液。

表7(包含CPC受体拮抗剂的漱口液)

*适量是指术语足够量的，是指多达足够，其中该配方剩余的缺口用这种物质补足。

每位专家组成员用10ml的对照CPC漱口液(无CPC受体拮抗剂)或样品(具有CPCTRPA1或TRPV1受体拮抗剂的1-A至1-F)漱口30秒，然后吐出。专门小组成员等待20分钟，之后吐出，然后用10ml的甜味、咸味或酸味的基础味道溶液以所限定浓度中的一种漱口。然后对于60分的分数来评定样品CPC溶液的味道强度。在每种样品之间观察20分钟清洗阶段。在单次漱口变量测试阶段内，对九种基础味道溶液中的每一种均按照这种方法评价。数字为对感觉0-60分的分数的强度评分。

表8(CPC TRPA1和TRPV1拮抗剂改善的甜味感知)

与对照甜味溶液相比，对照CPC漱口液显著减少甜味感知。CPC对味道失真的影响在最高浓度的甜味下是最大的(与甜味溶液的55相比，对照CPC漱口液为27)。在配方1-A、1-D、1-E和1-F中添加CPC TRPA1受体拮抗剂，异丁酸麦芽酚酯，示出在CPC的味道厌恶度方面的显著改善，其中甜味感知被评定为接近对照值。CPC TRPV1拮抗剂、羟苯基丁酮(样品1-B、1-D、1-和1-F)和4-苯基丁酸甲酯(样品1-C和1-E)，全部均改善甜味感知；最大影响是在将异丁基麦芽酚酯、羟苯基丁酮和4-苯基丁酸甲酯组合时(样品1-E)。与样品1-D(异丁酸麦芽酚酯和羟苯基丁酮)相比，添加δ-二氢大马酮(味道持久的特征)和TRPA1受体和TRPV1受体增强剂不示出即时影响(样品1-F)。

表9(TRPA1和TRPV1CPC拮抗剂改善咸味感知)

与对照基础咸味溶液相比，对照CPC漱口液显著减少咸味感知。不考虑对照咸味溶液的咸味浓度，对照CPC漱口液对咸味失真的影响为咸味感减少约50％。与对照CPC漱口液相比，在样品1-A中添加CPC TRPA1受体拮抗剂，异丁酸麦芽酚酯，示出在测试的较高咸味浓度下，在CPC对咸味感的味觉厌恶方面的改善。4-苯基丁酸甲酯(样品1-C和1-E)在改善CPC对咸味感的味觉厌恶方面具有较少影响。将δ-二氢大马酮加入异丁酸麦芽酚酯和羟苯基丁酮中(样品1-F)不具有如单独的组分(异丁酸麦芽酚酯，样品1-A；羟苯基丁酮，样品1-B)那样大的影响。当在最高咸味浓度下观察时，1-A和1-B两者均示出超过对照CPC漱口液的改善。其它样品不示出这种结果，因此，指示化学物质对咸味的一些特异性和对甜味的较少特异性。

表10(CPC TRPA1和TRPV1受体拮抗剂改善的酸味感知)

当与0.08％和0.15％对照基础酸味溶液相比时，对照CPC漱口液增加酸味感知，然而在对照酸味溶液的高浓度含量下降低酸味感知。与对照CPC漱口液相比，在0.08％的低浓度和0.15％的中等浓度下，加入样品1-A至1-F中的化学物质全部均阻止CPC增加酸味感知，并且在0.20％的高浓度下，将酸味感知保持接近对照酸味溶液的酸味感知，从而防止对该信号的味道失真。这种特异性酸味信号是柠檬酸并且被认为是酸的/涩味的信号。因此，增加该信号不是消费期望的特征。

实施例4

CPC味道失真时间过程曲线：

专门小组成员用如表1中定义的10ml基础甜味溶液(5％蔗糖、10％蔗糖和16％蔗糖)漱口30秒，用于味道校正。在味道校正之后，专门小组成员用对照CPC漱口液和样品1-A、1-B和1-C漱口30秒。在使用漱口水(对照或样品)之后，专门小组成员立即用10％甜味溶液漱口，并且使用0-60分描述性分析分数来对溶液的甜味强度进行评分。每5分钟重复漱口和评定溶液的过程直至30分钟的评价。

表11：甜味响应的动力学研究

由表11可见，数据表明CPC(对照CPC漱口液)在30分钟过程中持续抑制甜味，然而样品1-A、1-B和1-C(具有CPC TRPA1和TRPV1受体拮抗剂)在使用后30分钟使得甜味恢复正常，其中4-苯基丁酸甲酯(样品1-C)使得甜味恢复更快速出现。

A.一种减少十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)TRPA1受体或TRPV1受体活化的方法，所述方法包括：

a.提供表达TRPA1受体或TRPV1受体中的至少一种的细胞；

b.将CPC加入所述细胞中：

c.添加CPC TRPA1受体拮抗剂或CPC TRPV1受体拮抗剂中的至少一种；

d.测量TRPA1受体或TRPV1受体中的至少一种的受体活化。

B.根据段A所述的方法，其中所述受体活性通过如由FLIPR钙通量所测量的定量细胞内Ca²⁺含量来测量，优选地其中将荧光剂染料用于定量细胞内Ca²⁺含量。

C.根据段B所述的方法，其中CPC TRPA1受体拮抗剂在1mM的浓度时使由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPA1受体活化减少低于由375μM十六烷基氯化吡啶鎓导致的TRPA1受体活化的至少20％，优选地其中所述CPC TRPA1受体拮抗剂在大于1mM的浓度时不会使由50μM异硫氰酸烯丙酯导致的TRPA1受体活化减少低于由50μM异硫氰酸烯丙酯导致的TRPA1受体活化的至少20％。

D.根据段A至C中任一项所述的方法，其中所述CPC TRPA1受体拮抗剂包含下列中的至少一种：异戊酸丁子香醇酯、b-环糊精、异丁酸麦芽酚酯、鞣酸、葡萄糖酸锰、对薄荷-8-硫醇-3-酮、桃金娘烯醇、柠檬酸锰。

E.根据段B或C所述的方法，其中CPC TRPV1受体拮抗剂在1mM的浓度时使由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPV1受体活化减少至少1000个计数或低于由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPV1受体活化的20％，优选地其中所述CPC TRPV1受体拮抗剂在大于1mM的浓度时不会使由350nM辣椒素导致的TRPV1受体活化减少低于由350nM辣椒素导致的TRPV1受体活化的至少20％。

F.根据段A至E中任一项所述的方法，其中所述CPC TRPV1受体拮抗剂包含下列中的至少一种：乙酸锌、2-辛烯酸、2-氨基苯甲酸萘-2-基酯、α-二甲基苯基丁酸酯、α-紫罗兰醇、4-(4-羟基-苯基)-丁-2-酮、异丁酸丁酯、4-羟基苯乙胺、β-紫罗兰醇、2-甲氧基肉桂醛、4-(4-甲氧基苯基)-2-丁酮、β-紫罗酮、N,N-二甲基邻氨基苯甲酸甲酯、4-苯基丁酸甲酯或乙酸癸酯。

G.一种用于筛选减少由十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的CPC TRPA1或TRPV1受体活化的化合物的方法，所述方法包括：

a.提供表达TRPA1受体或TRPV1受体中的至少一种的细胞；

b.将CPC加入所述细胞中；

c.将测试组合物加入所述细胞中；

d.测量TRPA1受体或TRPV1受体中的至少一种的受体活化；

e.确定与在不添加测试组合物的情况下将CPC加入细胞中相比，TRPA1受体或TRPV1受体活化是否减少。

H.根据段G所述的方法，其中所述受体活性通过如由FLIPR钙通量所测量的定量细胞内Ca²⁺含量来测量，优选地其中将荧光剂染料用于定量细胞内Ca²⁺含量。

I.一种个人护理组合物，所述个人护理组合物包含：

a.CPC；和

b.CPC TRPA1受体拮抗剂或CPC TRPV1受体拮抗剂中的至少一种。

J.根据段I所述的个人护理组合物，其中所述CPC TRPA1受体拮抗剂在1mM的浓度时使由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPA1受体活化减少低于由375μM十六烷基氯化吡啶鎓导致的TRPA1受体活化的至少20％，优选地所述CPC TRPA1受体拮抗剂在大于1mM的浓度时不会使由50μM异硫氰酸烯丙酯导致的TRPA1受体活化减少低于由50μM异硫氰酸烯丙酯导致的TRPA1受体活化的至少20％。

K.根据段I或J所述的个人护理组合物，其中CPC TRPV1受体拮抗剂在1mM的浓度时使由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPV1受体活化减少至少1000个计数或低于由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPV1受体活化的20％，优选地其中所述CPC TRPV1受体拮抗剂在大于1mM的浓度时不会使由350nM辣椒素导致的TRPV1受体活化减少低于由350nM辣椒素导致的TRPV1受体活化的至少20％。

L.根据段I至K中任一项所述的个人护理组合物，其中所述CPC TRPA1受体拮抗剂包含下列中的至少一种：异戊酸丁子香醇酯、b-环糊精、异丁酸麦芽酚酯、鞣酸、葡萄糖酸锰、对薄荷-8-硫醇-3-酮、桃金娘烯醇、柠檬酸锰。

M.根据段I至L中任一项所述的个人护理组合物，其中所述CPC TRPV1受体拮抗剂包含下列中的至少一种：乙酸锌、2-辛烯酸、2-氨基苯甲酸萘-2-基酯、α-二甲基苯基丁酸酯、α-紫罗兰醇、4-(4-羟基-苯基)-丁-2-酮、异丁酸丁酯、4-羟基苯乙胺、β-紫罗兰醇、2-甲氧基肉桂醛、4-(4-甲氧基苯基)-2-丁酮、β-紫罗酮、N,N-二甲基邻氨基苯甲酸甲酯、4-苯基丁酸甲酯或乙酸癸酯。

N.根据段I至M中任一项所述的个人护理组合物，其中所述CPC TRPA1受体拮抗剂为异丁酸麦芽酚酯，并且CPC TRPV1受体拮抗剂为4-(4-羟基-苯基)-丁-2-酮或4-苯基丁酸甲酯中的至少一种。

本文所公开的量纲和值不应理解为严格限于所引用的精确数值。相反，除非另外指明，否则每个这样的量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。

除非明确地排除或换句话讲有所限制，本文中引用的每一篇文献，包括任何交叉引用或相关专利或专利申请以及本申请对其要求优先权或其有益效果的任何专利申请或专利，均据此全文以引用方式并入本文。任何文献的引用不是对其相对于任何本发明所公开的或本文受权利要求书保护的现有技术的认可，或不是对其单独地或以与任何其它参考文献或多个参考文献的组合提出、建议或公开了任何此类发明的认可。此外，如果此文献中术语的任何含义或定义与以引用方式并入本文的文献中相同术语的任何含义或定义相冲突，将以此文献中赋予该术语的含义或定义为准。

虽然已经举例说明和描述了本发明的具体实施方式，但是对于本领域技术人员而言显而易见的是，在不脱离本发明的实质和范围的情况下可作出多个其他改变和修改。因此，本文旨在于所附权利要求中涵盖属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

序列表

<110> 宝洁公司(The Procter & Gamble Company)

<120> 通过减少TRPA1受体、TPRV1受体或上述两者的CPC活化

减少CPC味觉厌恶

<130> 13768M

<160> 2

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 2520

<212> DNA

<213> 智人

<400> 1

atgaagaaat ggagcagcac agacttgggg gcagctgcgg acccactcca aaaggacacc 60

tgcccagacc ccctggatgg agaccctaac tccaggccac ctccagccaa gccccagctc 120

tccacggcca agagccgcac ccggctcttt gggaagggtg actcggagga ggctttcccg 180

gtggattgcc ctcacgagga aggtgagctg gactcctgcc cgaccatcac agtcagccct 240

gttatcacca tccagaggcc aggagacggc cccaccggtg ccaggctgct gtcccaggac 300

tctgtcgccg ccagcaccga gaagaccctc aggctctatg atcgcaggag tatctttgaa 360

gccgttgctc agaataactg ccaggatctg gagagcctgc tgctcttcct gcagaagagc 420

aagaagcacc tcacagacaa cgagttcaaa gaccctgaga cagggaagac ctgtctgctg 480

aaagccatgc tcaacctgca cgacggacag aacaccacca tccccctgct cctggagatc 540

gcgcggcaaa cggacagcct gaaggagctt gtcaacgcca gctacacgga cagctactac 600

aagggccaga cagcactgca catcgccatc gagagacgca acatggccct ggtgaccctc 660

ctggtggaga acggagcaga cgtccaggct gcggcccatg gggacttctt taagaaaacc 720

aaagggcggc ctggattcta cttcggtgaa ctgcccctgt ccctggccgc gtgcaccaac 780

cagctgggca tcgtgaagtt cctgctgcag aactcctggc agacggccga catcagcgcc 840

agggactcgg tgggcaacac ggtgctgcac gccctggtgg aggtggccga caacacggcc 900

gacaacacga agtttgtgac gagcatgtac aatgagattc tgatcctggg ggccaaactg 960

cacccgacgc tgaagctgga ggagctcacc aacaagaagg gaatgatgcc gctggctctg 1020

gcagctggga ccgggaagat cggggtcttg gcctatattc tccagcggga gatccaggag 1080

cccgagtgca ggcacctgtc caggaagttc accgagtggg cctacgggcc cgtgcactcc 1140

tcgctgtacg acctgtcctg catcgacacc tgcgagaaga actcggtgct ggaggtgatc 1200

gcctacagca gcagcgagac ccctaatcgc cacgacatgc tcttggtgga gccgctgaac 1260

cgactcctgc aggacaagtg ggacagattc gtcaagcgca tcttctactt caacttcctg 1320

gtctactgcc tgtacatgat catcttcacc atggctgcct actacaggcc cgtggatggc 1380

ttgcctccct ttaagatgga aaaaactgga gactatttcc gagttactgg agagatcctg 1440

tctgtgttag gaggagtcta cttctttttc cgagggattc agtatttcct gcagaggcgg 1500

ccgtcgatga agaccctgtt tgtggacagc tacagtgaga tgcttttctt tctgcagtca 1560

ctgttcatgc tggccaccgt ggtgctgtac ttcagccacc tcaaggagta tgtggcttcc 1620

atggtattct ccctggcctt gggctggacc aacatgctct actacacccg cggtttccag 1680

cagatgggca tctatgccgt catgatagag aagatgatcc tgagagacct gtgccgtttc 1740

atgtttgtct acatcgtctt cttgttcggg ttttccacag cggtggtgac gctgattgaa 1800

gacgggaaga atgactccct gccgtctgag tccacgtcgc acaggtggcg ggggcctgcc 1860

tgcaggcccc ccgatagctc ctacaacagc ctgtactcca cctgcctgga gctgttcaag 1920

ttcaccatcg gcatgggcga cctggagttc actgagaact atgacttcaa ggctgtcttc 1980

atcatcctgc tgctggccta tgtaattctc acctacatcc tcctgctcaa catgctcatc 2040

gccctcatgg gtgagactgt caacaagatc gcacaggaga gcaagaacat ctggaagctg 2100

cagagagcca tcaccatcct ggacacggag aagagcttcc ttaagtgcat gaggaaggcc 2160

ttccgctcag gcaagctgct gcaggtgggg tacacacctg atggcaagga cgactaccgg 2220

tggtgcttca gggtggacga ggtgaactgg accacctgga acaccaacgt gggcatcatc 2280

aacgaagacc cgggcaactg tgagggcgtc aagcgcaccc tgagcttctc cctgcggtca 2340

agcagagttt caggcagaca ctggaagaac tttgccctgg tccccctttt aagagaggca 2400

agtgctcgag ataggcagtc tgctcagccc gaggaagttt atctgcgaca gttttcaggg 2460

tctctgaagc cagaggacgc tgaggtcttc aagagtcctg ccgcttccgg ggagaagtga 2520

<210> 2

<211> 3360

<212> DNA

<213> 智人

<400> 2

atgaagtgca gcctgaggaa gatgtggcgc cctggagaaa agaaggagcc ccagggcgtt 60

gtctatgagg atgtgccgga cgacacggag gatttcaagg aatcgcttaa ggtggttttt 120

gaaggaagtg catatggatt acaaaacttt aataagcaaa agaaattaaa aacatgtgac 180

gatatggaca ccttcttctt gcattatgct gcagcagaag gccaaattga gctaatggag 240

aagatcacca gagattcctc tttggaagtg ctgcatgaaa tggatgatta tggaaatacc 300

cctctgcatt gtgctgtaga aaaaaaccaa attgaaagcg ttaagtttct tctcagcaga 360

ggagcaaacc caaacctccg aaacttcaac atgatggctc ctctccacat agctgtgcag 420

ggcatgaata atgaggtgat gaaggtcttg cttgagcata gaactattga tgttaatttg 480

gaaggagaaa atggaaacac agctgtgatc attgcgtgca ccacaaataa tagcgaagca 540

ttgcagattt tgcttaacaa aggagctaag ccatgtaaat caaataaatg gggatgtttc 600

cctattcacc aagctgcatt ttcaggttcc aaagaatgca tggaaataat actaaggttt 660

ggtgaagagc atgggtacag tagacagttg cacattaact ttatgaataa tgggaaagcc 720

acccctctcc acctggctgt gcaaaatggt gacttggaaa tgatcaaaat gtgcctggac 780

aatggtgcac aaatagaccc agtggagaag ggaaggtgca cagccattca ttttgctgcc 840

acccagggag ccactgagat tgttaaactg atgatatcgt cctattctgg tagcgtggat 900

attgttaaca caaccgatgg atgtcatgag accatgcttc acagagcttc attgtttgat 960

caccatgagc tagcagacta tttaatttca gtgggagcag atattaataa gatcgattct 1020

gaaggacgct ctccacttat attagcaact gcttctgcat cttggaatat tgtaaatttg 1080

ctactctcta aaggtgccca agtagacata aaagataatt ttggacgtaa ttttctgcat 1140

ttaactgtac agcaacctta tggattaaaa aatctgcgac ctgaatttat gcagatgcaa 1200

cagatcaaag agctggtaat ggatgaagac aacgatgggt gtactcctct acattatgca 1260

tgtagacagg ggggccctgg ttctgtaaat aacctacttg gctttaatgt gtccattcat 1320

tccaaaagca aagataagaa atcacctctg cattttgcag ccagttatgg gcgtatcaat 1380

acctgtcaga ggctcctaca agacataagt gatacgaggc ttctgaatga aggtgacctt 1440

catggaatga ctcctctcca tctggcagca aagaatggac atgataaagt agttcagctt 1500

cttctgaaaa aaggtgcatt gtttctcagt gaccacaatg gctggacagc tttgcatcat 1560

gcgtccatgg gcgggtacac tcagaccatg aaggtcattc ttgatactaa tttgaagtgc 1620

acagatcgct tggatgaaga cgggaacact gcacttcact ttgctgcaag ggaaggccac 1680

gccaaagccg ttgcgcttct tctgagccac aatgctgaca tagtcctgaa caagcagcag 1740

gcctcctttt tgcaccttgc acttcacaat aagaggaagg aggttgttct tacgatcatc 1800

aggagcaaaa gatgggatga atgtcttaag attttcagtc ataattctcc aggcaataaa 1860

tgtccaatta cagaaatgat agaatacctc cctgaatgca tgaaggtact tttagatttc 1920

tgcatgttgc attccacaga agacaagtcc tgccgagact attatatcga gtataatttc 1980

aaatatcttc aatgtccatt agaattcacc aaaaaaacac ctacacagga tgttatatat 2040

gaaccgctta cagccctcaa cgcaatggta caaaataacc gcatagagct tctcaatcat 2100

cctgtgtgta aagaatattt actcatgaaa tggttggctt atggatttag agctcatatg 2160

atgaatttag gatcttactg tcttggtctc atacctatga ccattctcgt tgtcaatata 2220

aaaccaggaa tggctttcaa ctcaactggc atcatcaatg aaactagtga tcattcagaa 2280

atactagata ccacgaattc atatctaata aaaacttgta tgattttagt gtttttatca 2340

agtatatttg ggtattgcaa agaagcgggg caaattttcc aacagaaaag gaattatttt 2400

atggatataa gcaatgttct tgaatggatt atctacacga cgggcatcat ttttgtgctg 2460

cccttgtttg ttgaaatacc agctcatctg cagtggcaat gtggagcaat tgctgtttac 2520

ttctattgga tgaatttctt attgtatctt caaagatttg aaaattgtgg aatttttatt 2580

gttatgttgg aggtaatttt gaaaactttg ttgaggtcta cagttgtatt tatcttcctt 2640

cttctggctt ttggactcag cttttacatc ctcctgaatt tacaggatcc cttcagctct 2700

ccattgcttt ctataatcca gaccttcagc atgatgctag gagatatcaa ttatcgagag 2760

tccttcctag aaccatatct gagaaatgaa ttggcacatc cagttctgtc ctttgcacaa 2820

cttgtttcct tcacaatatt tgtcccaatt gtcctcatga atttacttat tggtttggca 2880

gttggcgaca ttgctgaggt ccagaaacat gcatcattga agaggatagc tatgcaggtg 2940

gaacttcata ccagcttaga gaagaagctg ccactttggt ttctacgcaa agtggatcag 3000

aaatccacca tcgtgtatcc caacaaaccc agatctggtg ggatgttatt ccatatattc 3060

tgttttttat tttgcactgg ggaaataaga caagaaatac caaatgctga taaatcttta 3120

gaaatggaaa tattaaagca gaaataccgg ctgaaggatc ttacttttct cctggaaaaa 3180

cagcatgagc tcattaaact gatcattcag aagatggaga tcatctctga gacagaggat 3240

gatgatagcc attgttcttt tcaagacagg tttaagaaag agcagatgga acaaaggaat 3300

agcagatgga atactgtgtt gagagcagtc aaggcaaaaa cacaccatct tgagccttag 3360

Claims

1.一种减少十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)TRPA1受体或TRPV1受体活化的方法，所述方法包括：

a.提供表达TRPA1受体或TRPV1受体中的至少一种的细胞；

b.将CPC加入所述细胞中：

d.测量TRPA1受体或TRPV1受体中的至少一种的受体活化。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述受体活性通过如由FLIPR钙通量所测量的定量细胞内Ca²⁺含量来测量，优选地其中将荧光剂染料用于定量细胞内Ca²⁺含量。

3.根据权利要求2所述的方法，其中CPC TRPA1受体拮抗剂在1mM的浓度时使由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPA1受体活化减少低于由375μM十六烷基氯化吡啶鎓导致的TRPA1受体活化的至少20％，优选地其中所述CPC TRPA1受体拮抗剂在大于1mM的浓度时不会使由50μM异硫氰酸烯丙酯导致的TRPA1受体活化减少低于由50μM异硫氰酸烯丙酯导致的TRPA1受体活化的至少20％。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述CPC TRPA1受体拮抗剂包含下列中的至少一种：异戊酸丁子香醇酯、b-环糊精、异丁酸麦芽酚酯、鞣酸、葡萄糖酸锰、对薄荷-8-硫醇-3-酮、桃金娘烯醇、柠檬酸锰。

5.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述CPC TRPV1受体拮抗剂在1mM的浓度时使由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPA1受体活化减少至少1000个计数或低于由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPV1受体活化的20％，优选地其中所述CPC TRPV1受体拮抗剂在大于1mM的浓度时不会使由350nM辣椒素导致的TRPV1受体活化减少低于由350nM辣椒素导致的TRPV1受体活化的至少20％。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述CPC TRPV1受体拮抗剂包含下列中的至少一种：乙酸锌、2-辛烯酸、2-氨基苯甲酸萘-2-基酯、α-二甲基苯基丁酸酯、α-紫罗兰醇、4-(4-羟基-苯基)-丁-2-酮、异丁酸丁酯、4-羟基苯乙胺、β-紫罗酮、N,N-二甲基邻氨基苯甲酸甲酯、14-苯基丁酸甲酯或乙酸癸酯。

7.一种用于筛选由十六烷基氯化吡啶鎓减少CPC TRPA1或TRPV1受体活化的化合物的方法，所述方法包括：

a.提供表达TRPA1受体或TRPV1受体中的至少一种的细胞；

b.将CPC加入所述细胞中；

c.将测试组合物加入所述细胞中；

d.测量所述TRPA1受体或TRPV1受体中的至少一种的受体活化；

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述受体活化通过如由FLIPR钙通量所测量的定量细胞内Ca²⁺含量来测量，优选地其中将荧光剂染料用于定量细胞内Ca²⁺含量。

9.一种个人护理组合物，所述个人护理组合物包含：

a.CPC；和

b.CPC TRPA1受体拮抗剂或CPC TRPV1受体拮抗剂中的至少一种。

10.根据权利要求9所述的个人护理组合物，其中所述CPC TRPA1受体拮抗剂在1mM的浓度时使由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPA1受体活化减少低于由375μM十六烷基氯化吡啶鎓导致的TRPA1受体活化的至少20％，优选地其中所述CPC TRPA1受体拮抗剂在大于1mM的浓度时不会使由50μM异硫氰酸烯丙酯导致的TRPA1受体活化减少低于由50μM异硫氰酸烯丙酯导致的TRPA1受体活化的至少20％。

11.根据权利要求9或10所述的个人护理组合物，其中CPC TRPV1受体拮抗剂在1mM的浓度时使由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPA1受体活化减少至少1000个计数或低于由375μM十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)导致的TRPA1受体活化的20％，优选地其中所述CPCTRPV1受体拮抗剂在大于1mM的浓度时不会使由350nM辣椒素导致的TRPV1受体活化减少低于由350nM辣椒素导致的TRPV1受体活化的至少20％。

12.根据权利要求9至11中任一项所述的个人护理组合物，其中所述CPC TRPA1受体拮抗剂包含下列中的至少一种：异戊酸丁子香醇酯、b-环糊精、异丁酸麦芽酚酯、鞣酸、葡萄糖酸锰、对薄荷-8-硫醇-3-酮、桃金娘烯醇、柠檬酸锰。

13.根据权利要求9至12中任一项所述的个人护理组合物，其中所述CPC TRPV1受体拮抗剂包含下列中的至少一种：乙酸锌、2-辛烯酸、2-氨基苯甲酸萘-2-基酯、α-二甲基苯基丁酸酯、α-紫罗兰醇、4-(4-羟基-苯基)-丁-2-酮、异丁酸丁酯、4-羟基苯乙胺、β-紫罗兰醇、2-甲氧基肉桂醛、4-(4-甲氧基苯基)-2-丁酮、β-紫罗酮、N,N-二甲基邻氨基苯甲酸甲酯、4-苯基丁酸甲酯或乙酸癸酯。

14.根据权利要求9至13中任一项所述的个人护理组合物，其中所述CPC TRPA1受体拮抗剂为异丁酸麦芽酚酯，并且所述CPC TRPV1受体拮抗剂为4-(4-羟基-苯基)-丁-2-酮或4-苯基丁酸甲酯中的至少一种。