CN107434844B - 季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球的合成方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球的合成方法及应用，包括以下步骤：1)溶胶‑凝胶法合成二氧化硅生物玻璃纳米微球(SBG‑NS)；2)加成反应合成一系列不同侧链烷基长度的甲基丙烯酸酯季铵盐(QAM)；3)生物玻璃表面修饰+自由基聚合反应，将聚甲基丙烯酸酯季铵盐接枝到二氧化硅生物玻璃纳米微球表面，得到季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球(SBG‑QAPMs)。本发明的有益效果是SBG‑QAPMs兼备长效抗菌作用和良好细胞相容性及生物相容性，可作为一种良好的临床根管封闭剂。

Description

季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球的合成方法及应用
技术领域
本发明属于化学合成技术领域，尤其是涉及一种季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球的合成方法及应用。
背景技术
牙髓、根尖周病的治疗首选根管治疗，根管充填是根管治疗的最后一个步骤，根管封闭剂和根管充填物将长期存在于根管内。而目前主流根管充填物为生物惰性的牙胶尖。因此，如果根管封闭剂能够具备长期稳定的抗菌作用，那无疑会有效提高牙髓治疗的远期成功率。
目前，临床常用商品根管封闭剂主要包括氧化锌丁香油酚(zinc oxide eugenol，ZOE)类根管封闭剂如Kerr Pulp Canal Sealer EWT和Canals、环氧胺树脂(epoxy amineresin)类根管封闭剂如AH Plus和Real Seal SE、氢氧化钙(calcium hydroxide)类根管封闭剂如Apexit Plus和Sealapex和三氧化矿物聚合物(mineral trioxide aggregate，MTA)类根管封闭剂如grey MTA和ProRoot MTA等等。
大量研究报道，除了良好根管封闭效果以外，不同根管封闭剂也同时对根管感染相关致病菌表现出不同程度的抑制或者杀灭作用其中，氧化锌丁香油酚类根管封闭剂和环氧胺树脂类根管封闭剂拥有相对最广的抗菌谱和最强的抗菌活性。研究显示他们对具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、变形链球菌(Streptococcus mutans)、大肠杆菌(Escherichia coli)和白色念珠菌(Candidaalbicans)都有有效的抗菌作用。与此同时，也有研究报道他们对粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)也有一定的抗菌作用，但是作用较弱。而粪肠球菌正是导致根管治疗失败的顽固致病菌之一，常常导致顽固、复发性牙髓、根尖周病的发生。此外，研究证实，只有少数新鲜配制的根管封闭剂有一定的抗菌作用，而且往往只有短效作用。
近年来，学者们进行了大量的研究与尝试，以求改善现有根管封闭剂的抗菌作用，提高其长期抗菌作用。尽管已经取得一定成果，比如将Kerr Pulp Canal Sealer EWT、AHPlus和Real Seal SE等根管封闭剂与阿莫西林、甲硝唑和多西环素等抗生素简单地进行混合后确实提高了根管封闭剂本身的抗菌作用，但是这种改善仅限于新鲜配制的根管封闭剂，而长期抗菌作用并未有所改善。与此同时，也有研究尝试将AH Plus、Apexit Plus和Canals等根管封闭剂与日扁柏素(hinokitiol)混合以提高其抗菌活性。结果证实，与根管封闭剂本身的抗菌活性相比较，混合日扁柏素的根管封闭剂的抗菌活性有所改善，但与此同时他们的细胞毒性作用也增加了。除此之外，由于具备良好的生物相容性，含硅根管封闭剂的研发也越来越得到大家的关注。但是大量研究报道其抗菌活性较弱，与氢氧化钙类根管封闭剂抗菌活性相类似。此外，将阳离子纳米颗粒或者银离子与根管封闭剂进行混合或者对其进行包被，结果证实其可以得到强的短期抗菌活性。
季铵盐(quaternary ammoniumsalts，QASs)是一种广谱阳离子抗菌剂，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有强的杀菌活性，目前普遍公认其杀菌机制为其表面阳离子集团可以与细菌表面的阴离子集团结合发生静电反应作用，破坏细菌细胞膜的完整性，从而杀灭细菌。自二十世纪七十年代开始，季铵盐已被广泛应用于抗生素合成、环境消毒和水消毒等领域。在过去的几年里，季铵盐也逐渐被引入口腔医学领域。
目前，有关季铵盐在口腔医学中的应用主要集中在抗菌复合树脂、抗菌底漆和抗菌粘接剂等的研制方面。其中最常研究的季铵盐包括聚乙烯亚胺季铵盐(quaternaryammonium polyethyleneimine，QPEI)、甲基丙烯酸酯聚合物季铵盐(quaternary ammoniummethacrylatepolymer，QAMP)和二甲胺基甲基丙烯酸十二烷基酯(dimethylaminododecylmethacrylate)等(36-43)。此外，也有少数关于季铵盐用于根管封闭剂研制的应用，研究报道指出混合季铵盐的根管封闭剂与根管封闭剂本身相比较，具备显著强的、快速起效的短期抗菌活性，但是其长期抗菌活性并未有所提升或者改善。
二氧化硅类生物玻璃及其与金属氧化物的混合物均具备良好的生物相容性，市场上已经出现硅氧烷类根管封闭剂并且已在临床使用。本研究拟以二氧化硅类生物玻璃为基底材料，将具备广谱有效的抗菌作用的甲基丙烯酸酯季铵盐接枝至其表面，为研发一种同时具备有效长期抗菌作用和良好生物相容性的新型根管封闭剂提供基础。
发明内容
本发明的目的是提供一种兼备长效抗菌作用和良好细胞相容性及生物相容性的季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球的合成方法及应用。
本发明的技术方案是：本发明的季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球的合成方法，包括以下步骤：
1)溶胶-凝胶法合成二氧化硅生物玻璃纳米微球(SBG-NS)：
室温下将F-127溶于四氢呋喃得F-127溶液，室温下将十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)溶于蒸馏水和氨水的混合溶剂中得CTAB溶液，将所述F-127溶液加入CTAB溶液中，室温下剧烈搅拌得到清亮均一溶液；然后分别逐滴、间隔加入磷酸三乙酯(TEP)溶液、四水硝酸钙(CN)溶液和正硅酸四乙酯(TEOS)溶液，室温搅拌，反应结束后，离心收集白色沉淀物并用无水乙醇和蒸馏水漂洗，室温干燥、烧结，得SBG-NS；
2)加成反应合成一系列不同侧链烷基长度的甲基丙烯酸酯季铵盐(QAM)：
分别将甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、溴代烷烃、无水乙醇加入带盖小玻璃瓶中，于70℃硅油浴中，磁力搅拌下进行反应，反应结束后，悬蒸去除无水乙醇，将得到的清澈粘性产物，重悬于无水酒精中，序列降温重结晶三次纯化产物，将重结晶产物冰冻干燥得到不同侧链烷基长度的QAM；
3)生物玻璃表面修饰+自由基聚合反应，将聚甲基丙烯酸酯季铵盐接枝到二氧化硅生物玻璃纳米微球表面，得到季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球(SBG-QAPMs)：
将无水甲苯加入圆底烧瓶中，再将SBG-NS以超声振荡器分散于无水甲苯中，然后加γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷(KH-570)于上述所得SBG-NS甲苯混悬液中，获得反应体系，将所述的反应体系置于130℃硅油浴中，持续磁力搅拌、回流条件下进行接枝反应，反应结束后，离心收集产物，并使用大量无水乙醇和蒸馏水交替漂洗产物以去除反应溶剂甲苯及参与反应物KH-570，冰冻干燥得到白色粉末样终产物，记为SBG-NS/KH-570；
二氧化硅生物玻璃纳米微球季铵盐化采用液体自由基聚合反应，过程如下：将SBG-NS/KH-570超声分散于正丁醇中，将QAM、过氧化苯甲酰(BPO)溶于正丁醇中，然后使用注射器分别将SBG-NS/KH-570、QAM和BPO的正丁醇溶液加入烧瓶内，氮气保护下，80℃磁力搅拌回流反应，反应结束后离心收集产物，大量无水乙醇和蒸馏水交替漂洗产物，冰冻干燥获得终产物SBG-QAPMs。
进一步的，所述SBG-QAPMs的平均直径为181±14nm。
本发明的另一方面，还包括所述季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球在制作根管封闭剂上的应用。
本发明具有的优点和积极效果是：
1、由于采用上述技术方案，季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球的合成方法简单易操作，合成条件温和，产率高。
2、季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球具备良好的细胞相容性及生物相容性，可作为一种良好的临床根管封闭剂。
附图说明
图1是本发明的季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球(SBG-QAPMs)合成流程示意图。
图2是SBG-QAPMs扫描电子显微镜观察图。
图3是SBG-QAPMs的直径分布图。
图4是不同侧碳链长度甲基丙烯酸酯季铵盐单体PAEMB、NAEMB、HAEMB、OAEMB的FTIR检测。
图5是HAEMB的NMR检测。
图6是SBG-NS，SBG-NS/KH-570及SBG-QAPMs的表征FTIR图谱。
图7是四种SBG-QAPMs和常用根管封闭剂ProRoot MTA，Endomethasone C和AHPlus的抗菌测定结果。
图8是死活细胞染色结果。
图9是MTT测试结果。
图10是大鼠头颅缺损模型测定结果。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做详细说明。
一、如图1所示，本发明的季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球的合成方法，包括以下步骤：
1)溶胶-凝胶法合成二氧化硅生物玻璃纳米微球：
室温下将2克F-127溶于10毫升THF并用磁力搅拌器搅拌至清亮溶液。室温下将400毫克CTAB溶于160毫升蒸馏水和6毫升28％氨水混合溶剂，使用磁力搅拌器搅拌获得CTAB溶液。将上述F-127溶液加入CTAB溶液中，室温下剧烈搅拌30分钟后将得到清亮均一溶液。然后向上述所得溶液中分别逐滴加入TEP溶液(124微升TEP溶于1毫升无水乙醇)、CN溶液(520毫克CN溶于1毫升蒸馏水)和TEOS溶液(2.6毫升TEOS溶于1毫升无水乙醇)，不同溶液间隔30分钟加入。然后将上述所得混合溶液在室温下搅拌24小时，在此过程中由于会有白色沉淀物生成，混合溶液会从清亮溶液逐渐变成乳白色溶液。反应结束后，离心(10000rpm)收集白色沉淀物并用大量无水乙醇和蒸馏水漂洗。室温干燥后600℃(每分钟升温1℃)条件下烧结5小时以去除反应模板与有机成分(F-127和CTAB)，所得终产物为白色粉末。
2)加成反应(带碳碳双键叔胺+卤代烷)合成一系列不同侧链烷基长度的甲基丙烯酸酯季铵盐：
以甲基丙烯酸二甲氨乙酯(DMAEMA)与溴丙烷(BP)反应为例反应过程如下：分别将10毫摩尔DMAEMA、10毫摩尔BP和3克无水乙醇加入容积为20毫升的带盖小玻璃瓶中，其中无水乙醇为反应溶剂。配备与小瓶相匹配的磁性搅拌子并盖上瓶盖以防反应过程中溶剂挥发。将上述反应体系置于70℃硅油浴中，磁力搅拌下(350rpm)进行反应。反应24小时后，使用悬蒸法去除反应溶剂，将得到一清澈粘性产物。将反应产物重悬于无水酒精中，序列降温法(室温-4℃--20℃)重结晶三次以纯化产物。将重结晶产物冰冻干燥48小时以得到终产物，记为PAEMB【烷基链长度(alkylchainlength，CL)＝3】。其他三种QAM(分别记为NAEMB，CL＝9；HAEMB，CL＝16；OAEMB，CL＝18)合成方法同上，分别由溴壬烷(BN)、溴代十六烷(BHD)和溴代十八烷(BOD)与DMAEMA加成反应而来。如图4-5所示，FTIR显示合成成功；NMR显示合成单体纯度高。
3)两步反应法(生物玻璃表面修饰+自由基聚合反应)将聚甲基丙烯酸酯季铵盐接枝列二氧化硅生物玻璃纳米微球表面
KH-570是含有碳碳双键的硅烷偶联剂。接枝KH-570的目的在于给二氧化硅生物玻璃纳米微球表面提供碳碳双键，以与甲基丙烯酸酯季铵盐单体发生聚合反应。接枝过程如下：为提高反应效率，首先使用氢化钙和金属钠对反应溶剂甲苯进行回流出水，此过程中以二苯甲酮作为指示剂，当溶剂中水分完全出去时溶剂显蓝色。将50毫升无水甲苯加入250毫升圆底烧瓶中，再将5克SBG-NS以超声振荡器分散于无水甲苯中，然后加10毫升KH-570于上述所得SBG-NS甲苯混悬液中，获得反应体系。将上述反应体系置于130℃硅油浴中，持续磁力搅拌、回流条件下进行接枝反应。反应24小时候，离心(10000rpm)收集产物，并使用大量无水乙醇和蒸馏水交替漂洗产物以去除反应溶剂甲苯及参与反应物KH-570。冰冻干燥24小时得到白色粉末样终产物，记为SBG-NS/KH-570，如图6所示，FTIR图谱结果显示KH-570及甲基丙烯酸酯季铵盐单体接枝成功。
二氧化硅生物玻璃纳米微球季铵盐化采用液体自由基聚合反应，过程如下：反应容器使用三颈圆底烧瓶(容积为250毫升，配备磁性搅拌了)，反应前使用高纯度氮气置换反应体系内氧气三次，以在后续反应过程中提供保护。将5克SBG-NS/KH-570超声分散于50毫升正丁醇中，再将5克QAM和5毫克BPO分别溶于一定体积正丁醇中，然后使用注射器分别将SBG-NS/KH-570、QAM和BPO的正丁醇溶液加入烧瓶内，此过程注意勿将氧气送入反应体系内。80℃硅油浴、磁力搅拌(350rpm)和回流条件下进行反应，反应过程持续氮气保护。反应24小时后，离心收集产物。大量无水乙醇和蒸馏水交替漂洗产物，冰冻干燥48小时获得终产物，记为SBG-QAPMs(SBG-PA、SBG-NA、SBG-HA和SBG-OA)。如图2-3所示，扫描电子显微镜显示SBG-QAPMs为均匀单分散的纳米微球，平均直径为181±14nm，将上述SBG-QAPMs室温干燥环境下储存备用。
二、直接接触法测定SBG-QAPMs对感染根管内常见致病菌的抗菌作用
将SBG-QAPMs和几种常用根管封闭剂(ProRootMTA，EndomethasoneC和AHPlus)加入96孔培养板(20毫克/孔)，均匀铺满孔的底部。然后取10微升细菌悬液(108个/毫升)加至材料表面，使其均匀接触。37℃孵育1小时以蒸去培养基使细菌与材料充分直接接触。随后各孔加200微升培养基。此外，10微升培养基和10微升菌液分别加入未加材料的孔中并接受同上的处理，以分别作为阴性对照组和阳性对照组。将96孔板置于孵箱，37℃分别孵育0、2、4、6、8、12、24h，1、2、3和4周。在各个培养时间点，将各组(n＝10)细菌菌液混匀，十倍梯度稀释，然后取100微升各个梯度稀释液涂布各菌株对应琼脂培养板以进行活菌涂板计数。将琼脂培养板37℃孵育48小时后记录菌落形成单位数，统计分析。
如图7所示，抗菌测定结果显示四种SBG-QAPMs抗菌能力相似，其中以SBG-HA抗菌能力最强(见D、E和F)；同临床常用根管封闭剂相比较，SBG-HA也显示了最长效的抗菌效果(见A、B和C)。
三、测定SBG-QAPMs细胞相容性及生物相容性
(一)细胞相容性测定
浸提液制备：
分别将100毫克无菌SBG-QAPMs和商用根管封闭剂(ProRoot MTA，EndomethasoneC和AH Plus)加入10毫升含10％胎牛血清α-MEM，37℃孵育72小时以得到材料浸提液母液。然后将母液用含10％胎牛血清α-MEM分别稀释至10微克/毫升、100微克/毫升和1000微克/毫升。
细胞接种：
对于MTT构测，牙周膜干细胞接种于96孔培养板，接种密度为101细胞/孔。
对于LIVE/DEAD染色，牙周膜干细胞接种于6孔培养板，接种密度为8×101细胞/孔。
细胞孵育培养
先用含10％胎牛血清的α-MEM培养基孵育细胞24小时，再用无血清α-MEM培养基孵育24小时以对细胞进行同步化处理。然后再用不同浓度SBGQAM或者商用根管封闭剂浸提液培养牙周膜干细胞，培养基每三天换一次。同时，细胞单独培养于含10％胎牛血清α-MEM培养基和单独含10％胎牛血清α-MEM培养基分别作为阳性对照组和阴性对照组。
MTT分析
分别培养1、4和7天后，每孔加20微升新鲜配备MTT溶液(5mg/mL；Sigma-Aldrich)，然后37℃孵育培养。孵育4小时后去尽培养基和MTT溶液，然后每孔加150微升二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO，Sigma)，再在室温条件下摇床孵育10分钟以充分溶解生成甲瓒。酶标仪测定OD570值(BIO-TEK，Winooski，VT，USA)，记录数据并作统计分析(n＝6)。所有实验在不同的三天时间重复三次，如图9所示，MTT测试结果提示SBG-HA具备良好的细胞相容性。
LIVE/DEAD染色分析
首先配备2μM calcein AM和4μM EthD-1染液，现配现用。牙周膜干细胞分别培养1、4和7天后，去尽原培养基，D-PBS轻轻漂洗两次。然后每孔加500微升calcein AM和EthD-1溶液，室温避光放置。放置30分钟后，使用D-PBS轻轻漂洗两遍，荧光显微镜观察。此外，一组培养于未加材料浸提液只含10％胎牛血清α-MEM培养基的牙周膜干细胞首先用甲醇处理30分钟以处死细胞，然后染色(步骤同上)，此组作为阴性对照组；一组培养于未加材料浸提液只含10％胎牛血清α-MEM培养基的牙周膜干细胞不作任何处理以作为阳性对照组。所有实验在不同的三天时间重复三次。
结果如图8所示，死活细胞染色结果提示SBG-HA具备良好的细胞相容性。
(二)生物相容性测定
研究模型为SD大鼠头颅缺损模型。实验分组(n＝6)为：空白对照组、商用根管封闭剂(ProRoot MTA，Endomethasone C和AH Plus)组和SBG-QAPMs组。实验周期为2周和4周。
SD大鼠头颅缺损模型建立及实验材料种植
术前使用70％酒精浸泡SBG-QAPMs30分钟(两次)以对其进行消毒灭菌，然后用无菌PBS漂洗三次去尽残余酒精。使用盐酸氯胺酮(100mg/Kg)和甲苯噻嗪(10mg/Kg)对大鼠进行麻醉。备皮消毒，剔除前额至耳后毛发，暴露颅骨。俯卧位，使用立体定位架通过大鼠上颌及外耳道固定颅骨。置大鼠于保温垫上，以维持大鼠体温，提供术后存活率。使用碘伏和酒精消毒术区。在头颅左侧自鼻骨至枕骨作一长约三厘米达骨面的切口，分层分离软组织和骨膜瓣，暴露骨面。在顶骨右下象限近颅中缝处使用直径为五毫米的环锯钻作一直径为五毫米的圆形缺损，制备缺损过程中持续使用生理盐水进行冷却，最后使用五号尖镊子轻轻揭取钻下的骨片。将各组材料填满缺损，空白对照组不作处理直接缝合。手术过程中时刻注意保护术区血管及硬脑膜，以免出血过多造成实验动物死亡。植入材料后，牵拉骨膜使其完全覆盖缺损及材料并紧贴骨面，使用5-0可吸收缝线缝合骨膜。复位软组织及皮肤，使用5-0可吸收缝线分层缝合创口。
炎症因子释放定量检测
血液收集同上。1000rpm离心10分钟以收集血浆。ELISA法测定血浆促炎因子IL-6，TNF-α和IFN-γ表达变化。如图10所示，大鼠头颅缺损模型测定结果提示SBG-HA引起的炎症反应最轻，具备良好的生物相容性。
以上对本发明的一个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。

Claims (3)

1.季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球的合成方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)溶胶-凝胶法合成二氧化硅生物玻璃纳米微球：
室温下将F-127溶于四氢呋喃，并用磁力搅拌器搅拌至清亮溶液，得F-127溶液，室温下将十六烷基三甲基溴化铵溶于蒸馏水和氨水的混合溶剂中，使用磁力搅拌器搅拌得CTAB溶液，将所述F-127溶液加入CTAB溶液中，室温下剧烈搅拌得到清亮均一溶液；然后向上述所得溶液中分别逐滴加入磷酸三乙酯溶液、四水硝酸钙溶液和正硅酸四乙酯溶液，不同溶液间隔30分钟加入，然后将上述所得混合溶液室温搅拌，反应结束后，离心收集白色沉淀物并用无水乙醇和蒸馏水漂洗，室温干燥后600℃条件下烧结5小时，每分钟升温1℃，以去除反应模板与有机成分，得二氧化硅生物玻璃纳米微球；
2)加成反应(带碳碳双键叔胺+卤代烷)合成一系列不同侧链烷基长度的甲基丙烯酸酯季铵盐：
分别将甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、溴代烷烃、无水乙醇加入带盖小玻璃瓶中，于70℃硅油浴中，磁力搅拌下进行反应，反应结束后，旋蒸去除无水乙醇，将得到的清澈粘性产物，将产物重悬于无水酒精中，序列降温法，室温-4℃--20℃重结晶三次纯化产物，将重结晶产物冰冻干燥得到最终产物，记为PAEMB，烷基链长度＝3；其他三种侧链烷基长度的甲基丙烯酸酯季铵盐，分别记为NAEMB，烷基链长度＝9；HAEMB，烷基链长度＝16；OAEMB，烷基链长度＝18，合成方法同上，分别由溴壬烷、溴代十六烷和溴代十八烷与甲基丙烯酸二甲氨乙酯加成反应而来；
3)生物玻璃表面修饰+自由基聚合反应，将聚甲基丙烯酸酯季铵盐接枝到二氧化硅生物玻璃纳米微球表面，得到季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球：
将无水甲苯加入圆底烧瓶中，再将二氧化硅生物玻璃纳米微球以超声振荡器分散于无水甲苯中，然后加γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷于上述所得二氧化硅生物玻璃纳米微球甲苯混悬液中，获得反应体系，将所述的反应体系置于130℃硅油浴中，持续磁力搅拌、回流条件下进行接枝反应，反应24小时后，离心收集产物，并使用大量无水乙醇和蒸馏水交替漂洗产物以去除反应溶剂甲苯及参与反应物KH-570，冰冻干燥得到白色粉末样终产物，记为SBG-NS/KH-570；
二氧化硅生物玻璃纳米微球季铵盐化采用液体自由基聚合反应，过程如下：将SBG-NS/KH-570超声分散于正丁醇中，将甲基丙烯酸酯季铵盐、过氧化苯甲酰溶于正丁醇中，然后使用注射器分别将SBG-NS/KH-570、甲基丙烯酸酯季铵盐和过氧化苯甲酰的正丁醇溶液加入烧瓶内，氮气保护下，80℃硅油浴、磁力搅拌和回流条件下回流反应，反应结束后，离心收集产物，大量无水乙醇和蒸馏水交替漂洗产物，冰冻干燥获得终产物SBG-QAPMs，扫描电子显微镜显示SBG-QAPMs为均匀单分散的纳米微球，平均直径为181±14nm。
2.根据权利要求1所述的合成方法制备得到的季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球。
3.如权利要求2所述的季铵化二氧化硅生物玻璃纳米微球作为根管封闭剂中的应用。
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