CN107405409B

CN107405409B - Cnp前药

Info

Publication number: CN107405409B
Application number: CN201680014717.9A
Authority: CN
Inventors: K·斯普罗格; U·赫泽尔; H·拉乌; T·韦格; F·佛汀各; F·克利曼; N·卡鲁扎; A·伯恩哈德; A·布巴; T·伍兹
Original assignee: Ascendis Pharma Growth Disorders AS
Current assignee: Ascendis Pharma Endocrinology Division AS
Priority date: 2015-01-09
Filing date: 2016-01-08
Publication date: 2022-03-22
Anticipated expiration: 2036-01-08
Also published as: SG11201705521YA; CN107405409A; BR112017014560A2; US20190255183A1; RU2017128291A; IL253153A0; IL278970B1; IL278970B2; US20170368189A1; RU2017128291A3; JP2021008515A; RU2728656C2; JP2022095919A; WO2016110577A1; AU2021203717A1; MX2022005466A; AU2016205968A8; KR102599552B1; AU2023204227A1; JP2024016208A

Abstract

本发明涉及C‑型利钠肽(CNP)的前药，包含所述CNP前药的药物组合物和它们的用途。在一个实施方案中，所述CNP前药是CNP肽通过可逆连接体与聚(乙二醇)的缀合物。

Description

CNP前药

本发明涉及CNP前药、其药学上可接受的盐、包含所述CNP前药或其药学上可接受的盐的药物组合物和它们的用途。

FGFR3中的功能获得性突变导致软骨发育不全(achondroplasia，ACH)、软骨发育不良(hypochondroplasia，HCH)和致死性发育不良(thanatophoric dysplasia，TD)。由于成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)的增加的信号传导，这些病症的特征是不成比例的肢根型(rhizomelic)侏儒症并且严重程度不同，其范围从轻度(HCH)到严重(ACH)和致死性(TD)。FGFR3是软骨内骨生长的关键调节因子，通过几种细胞内通路发出信号，包括信号转导子和转录激活子(STAT)和丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)的那些。FGFR3组成型激活损害生长板软骨细胞的增殖和终末分化以及细胞外基质的合成。FGFR3激活与STAT和MAPK通路的磷酸化增加有关。MAPK信号通路由C型利钠肽(CNP)调节。CNP与其受体利钠肽受体B(NPR-B)的结合抑制FGFR3下游信号传导，从而触发软骨内生长和骨骼过度生长，如在过度表达CNP的小鼠和人类中所观察到的。CNP在软骨中的过度产生或通过静脉内(iv)输注连续输送CNP使软骨发育不全的小鼠的侏儒症正常化，表明CNP在超生理水平的施用是治疗ACH的策略。

然而，考虑到其半衰期短(静脉内(iv)施用后2分钟)，CNP作为治疗剂在儿科人群中具有挑战性，因为它需要连续输注。此外，由于CNP在皮下组织中被广泛灭活，因此需要静脉内输注。

Potter(FEBS Journal 278(2011)1808–1817)描述了CNP通过两种降解途径发生清除：受体介导的降解和由细胞外蛋白酶的降解。CNP通过中性肽链内切酶24.11(NEP)的作用降解，并通过利钠肽清除受体NPR-C的全身循环去除，NPR-C与CNP结合并将其沉积到溶酶体中，在溶酶体中CNP被降解。

通过提取比率描述个体器官从循环中除去分子的能力，提取比率通过从动脉浓度中减去静脉浓度并将该值除以分子的动脉血液浓度来计算。这种所谓的A/V差异量化器官如何有效地去除或降解所关注的分子。在人类中，CNP A/V梯度对于肾、肝和肺组织是负的，与在这些组织中发生的CNP降解一致。

通过这些清除途径中的一个或两个减少降解将有助于延长CNP的半衰期。

由于其活性位点腔的尺寸有限，NEP优选识别小于约3kDa的底物。US 8,377,884B2描述CNP的变体，其任选地与PEG聚合物永久缀合以增加对NEP切割的抗性。然而，发现向野生型CNP添加甚至小至0.6kDa的PEG降低CNP活性，并且向CNP或其变体添加大于约2或3kDa的PEG以尺寸依赖的方式降低CNP的功能活性。因此，用于降低NEP降解的大于2至3kDa的PEG分子的连接伴随着活性的丧失，这可能降低这些分子的治疗潜力。

除了负面影响肽的活性之外，PEG或另一种大分子与CNP的缀合也可能阻止有效分布至生长板。Farnum等(Anat Rec A Discov Mol Cell Evol Biol.2006January；288(1):91–103)证明分子从系统血管系统到生长板的分布是尺寸依赖性的，并且小分子(最高10kDa)可以分布至生长板，而40kDa以上的分子尺寸阻止进入生长板。

国际申请WO 2009/156481涉及BNP的可逆PEG-缀合物，该BNP术语定义为包括利钠肽家族的所有成员。该申请仅关注通过利钠肽受体A(NPR-A)介导的这类肽的心血管作用。WO 2009/156481A1未能公开CNP关于通过激活利尿钠肽受体B(NPR-B)介导的软骨生长板软骨细胞的生长、增殖和分化调节的具体性质。

The American Journal of Human Genetics 91,1108–1114中描述了创建NEP抗性CNP分子并能够进行皮下施用的不同方法。BMN-111是经修饰的重组人C型利钠肽(CNP)，其中已加入17个氨基酸以形成39个氨基酸的CNP药理学类似物。BMN-111模拟CNP在生长板上的药理活性，并且由于中性-肽链内切酶(NEP)抗性而具有延长的半衰期，允许每日一次皮下(SC)施用。由于BMN-111是非天然存在的肽，与天然肽相比，诱导免疫应答的风险增加，并且如Martz在“sFGFR for achondroplasia”(SciBx，Biocenture 2013年10月)中所述，在动物研究中观察到对BMN-111的免疫应答，存在不影响药物的药理活性的抗体。然而，BMN-111仅具有20分钟的半衰期，当每天施用时与暴露在有效的药物水平的短持续时间相关。

为了增加至有效药物水平的暴露，可以增加具有CNP活性的药物的剂量。由于利钠肽是可能影响血容量和血压的激素家族，剂量的增加可能与心血管不良反应有关。BMN-111在动物和人类中的研究表明，随着剂量的增加，动脉血压下降和心率增加。高达15μg/kg的BMN-111剂量与健康志愿者轻度低血压有关。因此，增加具有CNP活性的药物的剂量以增加药物暴露可能与不可接受的心血管副作用相关。

总之，需要更方便和/或有效的CNP治疗。

因此，本发明的目的是至少部分地克服上述缺点。

该目的通过CNP前药或其药学上可接受的盐来实现，其中前药具有式(Ia)或(Ib)结构

其中

-D是CNP部分(moiety)；

-L¹-是可逆的前药连接体部分；

-L²-是单一化学键或间隔体部分；

-Z是水溶性载体部分；

x是选自下列的整数：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16；且

y是选自下列的整数：1、2、3、4和5。

在另一方面，本发明涉及CNP前药或其药学上可接受的盐，其包含缀合物D-L，其中

-D是CNP部分；且

-L包含可逆的前药连接体部分-L¹-；

其中-L¹-被-L²-Z’取代并且任选被进一步取代；其中

-L²-是单一化学键或间隔体部分；且

-Z’是水不溶性载体部分。

应理解，多个-L²-L¹-D部分与水不溶性载体-Z’连接。

令人惊奇地发现，本发明的CNP前药和其药学上可接受的盐提供了CNP在血流中延长的循环时间，其导致更方便和患者友好的施用方式，例如每周一次或高达每月一次SC注射。同时，释放未经修饰的CNP，其确保活性剂有效分布至生长板。由于本发明的CNP前药具有低残留活性，即与NPR-B结合，心血管副作用如低血压的风险明显减少。

此外令人惊奇地发现，本发明的化合物获得比在每日推注注射后观察到的更稳定的血液水平，其更接近于模拟内源性CNP的生理暴露。这些更稳定的血液水平适用于各种剂量方案，例如适用于每日施用；每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次，每六天一次；每周施用；双周施用和每月施用。

此外令人惊奇地发现CNP的持续释放，例如来自本发明的前药的控制释放系统比每日一次推注更有效。

在本发明中，使用具有如下含义的术语。

如本文所用，术语“CNP”是指所有CNP多肽，优选来自哺乳动物物种的，更优选来自人和哺乳动物物种的，更优选来自人和鼠物种的，以及它们的变体、类似物、直系同源物、同系物(homolog)和衍生物和片段，其特征在于调节软骨生长板软骨细胞的生长、增殖和分化。优选地，术语“CNP”是指SEQ ID NO:1的CNP多肽以及其具有基本相同的生物活性即调节软骨生长板软骨细胞的生长、增殖和分化的变体、同系物和衍生物。更优选地，术语“CNP”是指SEQ ID NO:1的多肽。同样优选的是，术语“CNP”是指SEQ ID NO:24，即由38个氨基酸组成的CNP部分，以及其表现出基本上相同生物活性即调节软骨生长板软骨细胞的生长、增殖和分化的变体、同系物和衍生物。

SEQ ID NO:1具有下面的序列：

GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC，

其中6位和22位的半胱氨酸通过二硫桥连接，如图1所示。

SEQ ID NO:24具有下面的序列：

LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC，

其中22位和38位的半胱氨酸通过二硫桥连接。

术语“CNP”还包括在WO 2009/067639A2和WO 2010/135541A2中公开的所有CNP变体、类似物、直系同源物、同系物及其衍生物和片段，将其通过引用并入本文。

因此，术语“CNP”也优选地指以下肽序列：

SEQ ID NO：2(CNP-53)：

DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：3(G-CNP-53)：

GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：4(M-CNP-53)：

MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：5(P-CNP-53)：

PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO.6(CNP-53M48N)：

DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC；

SEQ ID NO：7(CNP-53Δ15-31)：

DLRVDTKSRAAWARGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：8(CNP-52)：

LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：9(CNP-51)：

RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：10(CNP-50)：

VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：11(CNP-49)：

DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：12(CNP-48)：

TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：13(CNP-47)：

KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：14(CNP-46)：

SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：15(CNP-45)：

RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：16(CNP-44)：

AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：17(CNP-44Δ14-22)：

AAWARLLQEHPNAGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：18(CNP-44Δ15-22)：

AAWARLLQEHPNARGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：19(CNP-43)：

AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：20(CNP-42)：

WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：21(CNP-41)：

ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：22(CNP-40)：

RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：23(CNP-39)：

LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：24(CNP-38)：

LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：25(CNP-37)：

QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：26(CNP-37Q1pQ，其中pQ＝焦谷氨酸)：

pQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：27(G-CNP-37)：

GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：28(P-CNP-37)：

PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：29(M-CNP-37)：

MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：30(PG-CNP-37)：

PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：31(MG-CNP-37)：

MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：32(CNP-37M32N)：

QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC；

SEQ ID NO：33(G-CNP-37M32N)：

GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC；

SEQ ID NO：34(G-CNP-37K14Q)：

GQEHPNARKYKGANQKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：35(G-CNP-37K14P)：

GQEHPNARKYKGANPKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：36(G-CNP-37K14Q，Δ15)：

GQEHPNARKYKGANQGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：37(G-CNP-37K14Q，K15Q)：

GQEHPNARKYKGANQQGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：38(CNP-36)：

EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：39(CNP-35)：

HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：40(CNP-34)：

PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：41(CNP-33)：

NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：42(CNP-32)：

ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：43(CNP-31)：

RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：44(CNP-30)：

KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：45(CNP-29)：

YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：46(CNP-28)：

KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：47(GHKSEVAHRF-CNP-28)：

GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：48(CNP-27)：

GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：49(CNP-27K4Q，K5Q)：

GANQQGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：50(CNP-27K4R，K5R)：

GANRRGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：51(CNP-27K4P，K5R)：

GANPRGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：52(CNP-27K4S，K5S)：

GANSSGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：53(CNP-27K4P，K5R)：

GANGANPRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：54(CNP-27K4R，K5R，K9R)：

GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：55(CNP-27K4R，K5R，K9R，M22N)：

GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC；

SEQ ID NO：56(P-CNP-27K4R，K5R，K9R)：

PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：57(M-CNP-27K4R，K5R，K9R)：

MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：58(HSA片段-CNP-27)：

GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLG；

SEQ ID NO：59(HSA片段-CNP-27M22N)：

GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC；

SEQ ID NO：60(M-HSA片段-CNP-27)：

MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：61(P-HSA片段-CNP-27)：

PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：62(CNP-26)：

ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：63(CNP-25)：

NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：64(CNP-24)：

KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：65(CNP-23)：

KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：66(R-CNP-22)：

RGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：67(ER-CNP-22)：

ERGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：68(R-CNP-22K4R)：

RGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：69(ER-CNP-224KR)：

ERGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：70(RR-CNP-22)：

RRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：71(HRGP片段-CNP-22)：

GHHSHEQHPHGANQQGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO.72(HRGP片段-CNP-22)：

GAHHPHEHDTHGANQQGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：73(HRGP片段-CNP-22)：

GHHSHEQHPHGANPRGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：74(IgG_l(F_c)片段-CNP-22)：

GQPREPQVYTLPPSGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：75(HSA片段-CNP-22)：

GQHKDDNPNLPRGANPRGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：76(HSA片段-CNP-22)：

GERAFKAWAVARLSQGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：77(人骨织素NPR C抑制剂片段-CNP22)：

FGIPMDRIGRNPRGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：78(FGF2肝素结合域片段-CNP22)：

GKRTGQYKLGSKTGPGPKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：79(IgG_l(F_e)片段-CNP-22K4R)：

GQPREPQVYTGANQQGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：80(HSA片段-CNP-22K4R)：

GVPQVSTSTGANQQGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：81(纤连蛋白片段-GNP-22K4R)：

GQPSSSSQSTGANQQGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：82(纤连蛋白片段-CNP-22K4R)：

GQTHSSGTQSGANQQGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：83(纤连蛋白片段-CNP-22K4R)：

GSTGQWHSESGANQQGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：84(锌指片段-CNP-22K4R)：

GSSSSSSSSSGANQQGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：85(CNP-21)：

LSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：86(CNP-20)：

SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：87(CNP-19)：

KGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：88(CNP-18)：

GCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：89(CNP-17)：

CFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：90(BNP片段-CNP-17-BNP片段)：

SPKMVQGSGCFGLKLDRIGSMSGLGCKVLRRH；

SEQ ID NO：91(CNP-38L1G)：

GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

SEQ ID NO：92(Ac-CNP-37；其中Ac＝乙酰基)

Ac-QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC；

应理解，SEQ ID NO：1的位置6和22中的半胱氨酸的等同物在SEQ ID NOs：2至92中也通过二硫桥连接。

更优选地，术语“CNP”是指SEQ ID：NOs 2、19、20、21、22、23、24、25、26、30、32、38、39、40、41、42、43、91、92的序列。甚至更优选地，术语“CNP”是指SEQ ID：NOs 23、24、25、26、38、39、91和92的序列。在特别优选的实施方案中，术语“CNP”是指SEQ ID NO：24的序列。

在一特别优选的实施方案中，术语“CNP”是指SEQ ID NO：23、24、25和38的序列，甚至更优选SEQ ID NO：24和25的序列，最优选SEQ ID NO：25的序列。在同样优选的实施方案中，术语“CNP”是SEQ ID NO：24的序列。

在另一个优选的实施方案中，术语“CNP”是指SEQ ID NO：93的序列

QEHPNARX₁YX₂GANX₃X₄GLSX₅GCFGLX₆LDRIGSMSGLGC，

其中X₁、X₂、X₃、X₄、X₅和X₆相互独立地选自K、R、P、S和Q，前提是至少X₁、X₂、X₃、X₄、X₅和X₆中的一个选自R、P、S和Q；优选地X₁、X₂、X₃、X₄、X₅和X₆选自K和R，前提是至少X₁、X₂、X₃、X₄、X₅和X₆中的一个是R；

甚至更优选地是指SEQ ID NO:94的序列

QEHPNARKYKGANX₁X₂GLSX3GCFGLX₄LDRIGSMSGLGC，

其中X₁、X₂、X₃和X₄相互独立地选自K、R、P、S和Q，前提是至少X₁、X₂、X₃和X₄中的一个选自R、P、S和Q；优选地X₁、X₂、X₃和X₄选自K和R，前提是至少X₁、X₂、X₃和X₄中的一个是R；

并且最优选地是指SEQ ID NO:95的序列

QEHPNARKYKGANX₁X₂GLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC，

其中X₁X₂选自KR、RK、KP、PK、SS、RS、SR、QK、QR、KQ、RQ、RR和QQ。

应当理解，在本说明书中给出的所有CNP序列中，SEQ ID NO:1的位置6和22的半胱氨酸的等同物在SEQ ID NO:93至95中也通过二硫桥连接。

应当理解，本发明还包括CNP变体，其中任何一个或多个直至所有易受脱酰胺或脱酰胺样反应(例如，异构化)影响的残基可以通过脱酰胺或脱酰胺样反应以任何程度(高至100％转化/被转化的残基)转化为其它残基。在某些实施方案中，本公开包括CNP变体，其中：

(1)任何一个或多个直至全部的天冬酰胺(Asn/N)残基可通过脱酰胺转化为天冬氨酸或天冬氨酸盐，和/或异天冬氨酸或异天冬氨酸盐，高达约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％转化/被转化的残基；或

(2)任何一个或多个直至全部的谷氨酰胺(Gln/Q)残基可通过脱酰胺转化为谷氨酸或谷氨酸盐，和/或异谷氨酸或异谷氨酸盐，高达约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％转化/被转化的残基；或

(3)任何一个或多个直至全部的天冬氨酸或天冬氨酸盐(Asp/D)残基可以通过脱酰胺样反应(也称为异构化)转化为异天冬氨酸或异天冬氨酸盐，高达约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％转化/被转化的残基；或

(4)任何一个或多个直至全部的谷氨酸或谷氨酸盐(Glu/E)残基可以通过脱酰胺样反应(也称为异构化)转化为异谷氨酸或异谷氨酸盐，高达约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％转化/被转化的残基；

(5)N-末端谷氨酰胺(如果存在)可以转化为焦谷氨酸，高达约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％转化；或

(5)上述的组合。

如本文所用，术语“CNP多肽变体”是指与参考CNP多肽不同的来自相同物种的多肽。优选地，这样的参考CNP多肽序列是SEQ ID NO:1的序列。在同样优选的实施方案中，参考CNP多肽序列是SEQ ID NO:24的序列。通常，差异受到限制，从而参考和变体的氨基酸序列在整体上是相似的，并且在许多区域中是相同的。优选地，CNP多肽变体与参考CNP多肽优选SEQ ID NO:1的CNP多肽是至少70％、80％、90％或95％相同的。在同样优选的实施方案中，CNP多肽变体与参考CNP多肽优选SEQ ID NO:24的CNP多肽至少是70％、80％、90％或95％相同的。对于具有与查询(query)氨基酸序列至少95％“相同”的氨基酸序列的多肽，意指主题多肽的氨基酸序列与查询序列相同，只是主题多肽序列可以包括查询氨基酸序列每100个氨基酸多达5个氨基酸的改变。参考序列的这些改变可以发生在参考氨基酸序列的氨基(N-末端)或羧基末端(C-末端)位置或这些末端位置之间的任何位置，分别地散布在参考序列的残基间或在参考序列内的一个或多个连续基团中。查询序列可以是参考序列的全部氨基酸序列或本文所述的任何指定片段。优选地，查询序列是SEQ ID NO:1的序列。在同样优选的实施方案中，查询序列是SEQ ID NO:24的序列。

这样的CNP多肽变体可以是天然存在的变体，例如由占据染色体或生物体上的给定基因座的几种可替代形式的CNP之一编码的天然存在的等位基因变体，或由源自单一初级转录的天然存在的剪接变体编码的同种型。或者，CNP多肽变体可以是不知道天然存在并且可以由本领域已知的诱变技术制备的变体。

本领域已知，可以从生物活性肽或蛋白质的N-末端或C-末端缺失一个或多个氨基酸，而不会显著丧失生物学功能。这种N-和/或C-末端缺失也包括在术语CNP多肽变体中。

本领域普通技术人员还认识到，可以改变CNP多肽的一些氨基酸序列，而不显著影响肽的结构或功能。这样的突变体包括根据本领域已知的一般规则选择的缺失、插入、倒置、重复和取代，从而对活性几乎没有影响。例如，Bowie等人(1990),Science 247:1306-1310提供了关于如何进行表型沉默的氨基酸取代的指导，其全部内容通过引用并入本文，其中作者指出研究改变氨基酸序列的耐受性的两个主要方法。

术语CNP多肽还包括由CNP类似物、直系同源物和/或物种同系物编码的所有CNP多肽。如本文所用，术语“CNP类似物”是指在各生物体中执行相同功能但不源自生物祖先共有的祖先结构的不同和不相关的生物的CNP。代替地，类似的CNP单独出现，然后逐渐演变为执行相同或相似的功能。换句话说，类似的CNP多肽是具有完全不同的氨基酸序列但执行相同生物活性即调节软骨生长板软骨细胞的生长、增殖和分化的多肽。

如本文所用，术语“CNP直系同源物”是指两种不同物种(species)内的CNP，其序列通过祖先物种中的共同同源CNP彼此相关，但已经进化为彼此不同。

如本文所用，术语“CNP同系物”是指在各生物体中执行相同功能并且起源于生物祖先共有的祖先结构的不同生物体的CNP。换句话说，同系CNP多肽是具有非常相似的氨基酸序列(其执行相同的生物活性，即调节软骨生长板软骨细胞的生长、增殖和分化)的多肽。优选地，CNP多肽同系物可以被定义为与参考CNP多肽优选SEQ ID NO:1的CNP多肽呈现至少40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％同一性的多肽。在同样优选的实施方案中，参考CNP多肽是SEQ ID NO:24的CNP多肽。

因此，根据本发明的CNP多肽可以是例如：(i)其中至少一个氨基酸残基被保守或非保守的氨基酸残基优选保守的氨基酸残基取代的CNP多肽，并且所述取代的氨基酸残基可以是或可以不是由遗传密码编码的残基；和/或(ii)其中至少一个氨基酸残基包含取代基的CNP多肽；和/或(iii)其中CNP多肽与另一种化合物(例如增加多肽的半衰期的化合物(例如聚乙二醇))融合的CNP多肽；和/或(iv)其中另外的氨基酸与CNP多肽融合的CNP多肽，例如IgG Fc融合区肽或前导序列或分泌序列或用于纯化上述形式的多肽的序列或前体蛋白序列。

如本文所用，术语“CNP多肽片段”是指包含CNP多肽优选SEQ IDNO:1的多肽的氨基酸序列的一部分的连续跨度的任何肽。在同样优选的实施方案中，术语“CNP多肽片段”是指包含SEQ ID NO:24的多肽的氨基酸序列的一部分的连续跨度的任何肽。

更具体地，CNP多肽片段包含CNP多肽更优选SEQ ID NO:1的多肽的至少6个、例如至少8个、至少10个或至少17个连续的氨基酸。同样优选地，CNP多肽片段包含SEQ ID NO:24的CNP多肽的至少6个、例如至少8个、至少10个或至少17个连续的氨基酸。CNP多肽片段可另外被描述为包含至少6个氨基酸的CNP多肽的亚属，其中“至少6”定义为6与表示CNP多肽的C末端氨基酸的整数之间的任何整数，所述CNP多肽优选SEQ ID NO:1的多肽，或同样优选SEQID NO:24的多肽。还包括如上所述长度至少为6个氨基酸的CNP多肽片段的种类(species)，其进一步就它们的N-末端和C-末端位置被指定。术语“CNP多肽片段”作为个体种类也包括如上所述长度至少为6个氨基酸的所有CNP多肽片段，其可以特别地由N-末端和C-末端位置指定。也就是说，在CNP多肽的任何给定的氨基酸序列上可以占据长度为至少6个连续氨基酸残基的片段的N-末端和C-末端位置的每个组合包括在本发明中，所述CNP多肽优选SEQID NO:1的CNP多肽，同样优选SEQ ID NO:24的CNP多肽。

术语“CNP”还包括具有如上所述的序列但具有包含酰胺键和非酰胺联接(linkage)例如酯联接的主链的聚(氨基酸)缀合物，例如缩肽。缩肽是氨基酸残基的链，其中主链包含酰胺(肽)和酯键。因此，如本文所用，术语“侧链”是指连接于氨基酸部分的α-碳的部分，如果氨基酸部分通过诸如多肽中的胺键连接，或者是指连接到聚(氨基酸)缀合物的主链上的任何包含碳原子的部分，例如在缩肽的情况下。优选地，术语“CNP”是指具有通过酰胺(肽)键形成的主链的多肽。

术语CNP包括上述的CNP变体、类似物、直系同源物、同系物、衍生物和片段，所有参考序列中特定位置的援用也包括CNP部分的变体、类似物、直系同源物、同系物、衍生物和片段中的等同位置，即使没有特别提及。

如本文所用，术语“环部分”是指位于形成分子内二硫化物桥的两个半胱氨酸残基之间或通过化学连接体连接的同系氨基酸残基之间的CNP药物或部分的连续氨基酸残基的延伸。优选地，环部分位于形成分子内二硫化物桥的两个半胱氨酸残基之间。这两个半胱氨酸对应于CNP-38(SEQ ID NO:24)序列中22位和38位的半胱氨酸。因此，如果CNP药物或部分具有CNP-38的序列，则氨基酸23至37位于所述环部分。

与CNP部分的长度无关，野生型CNP的环部分的序列是FGLKLDRIGSMSGLG(SEQ IDNO:96)。

如上所述，术语“CNP”涉及具有不同数目氨基酸的CNP药物或部分。本领域技术人员理解，在不同长度的CNP药物或部分中，等同氨基酸的位置不同，本领域技术人员将不难确定形成二硫化物桥的两个半胱氨酸或在更长、更短和/或以其他方式修饰的CNP版本中通过化学连接体(linker)彼此连接的它们的两个同系氨基酸残基。

术语CNP包括上述的CNP变体、类似物、直系同源物、同系物、衍生物和片段，术语“环部分”还包括SEQ ID NO:96的序列的相应变体、类似物、直系同源物、同系物、衍生物和片段。因此，参考序列中特定位置的所有援用也包括CNP部分的变体、类似物、直系同源物、同系物、衍生物和片段中的等同位置，即使没有特别提及。

如本文所用，术语“药物组合物”是指组合物，其包含一种或多种活性成分，例如药物或前药，本文特别是本发明的CNP前药；以及任选的一种或多种赋形剂；以及直接或间接地由组合物的任何两种或更多种成分组合、络合或聚集导致的、或由一种或多种成分的解离导致的、或由一种或多种成分的其它类型的反应或相互作用导致的任何产品。因此，本发明的药物组合物包括通过混合本发明的一种或多种CNP前药和任选的药学上可接受的赋形剂制备的任何组合物。

如本文所用，术语“液体组合物”是指包含水溶性CNP前药和一种或多种溶剂例如水的混合物。

术语“混悬液组合物”涉及混合物，其包含水不溶性CNP前药，其中例如载体Z’是水凝胶，以及一种或多种溶剂，例如水。由于水不溶性聚合物，聚合物前药不能溶解并使前体药物呈微粒状态。

如本文所用，术语“干组合物”是指以干燥形式提供的药物组合物。合适的干燥方法是喷雾干燥和冻干，即冷冻干燥。这种前药的干组合物具有根据卡尔费休(KarlFischer)确定的最多为10％、优选小于5％、更优选小于2％的残留含水量。优选地，本发明的药物组合物通过冻干干燥。

本文所用的术语“药物”是指用于治疗、治愈、预防或诊断疾病或用于以其它方式增强身体或精神健康的物质。如果一种药物与另一部分(moiety)缀合，则得到的产物的源自药物的部分被称为“生物活性部分”。

如本文所用，术语“前药”是指通过可逆的前药连接体部分可逆地和共价连接到专门的保护基的生物活性部分，所述的可逆的前药连接体部分是包含与生物活性部分的可逆联接(linkage)的连接体部分，并且其中专门的保护基团改变或消除母体分子中不期望的特性。这还包括增加药物中期望的性质和抑制不期望的性质。专门的无毒保护基团称为“载体”。前药以其相应药物的形式释放可逆和共价结合的生物活性部分。换句话说，前药是包含通过可逆的前药连接体部分共价和可逆地与载体部分缀合的生物活性部分的缀合物，载体与可逆前药连接体部分的共价和可逆缀合直接或通过间隔体(spacer)进行。这种缀合物以游离药物的形式释放先前缀合的生物活性部分。

“可生物降解的联接”或“可逆的联接”是在生理条件下(水性缓冲液，pH 7.4，37℃)下不存在酶的情况下可水解降解的(即可切割的)联接，半衰期为1小时至6个月，优选1小时至4个月，甚至更优选1小时至3个月，甚至更优选1小时至2个月，甚至更优选1小时至1个月。因此，稳定的联接是在生理条件(pH7.4，37℃的水性缓冲液)下半衰期超过6个月的联接。

因此，“可逆的前药连接体部分”是这样的部分：其通过可逆联接共价缀合至生物活性部分例如CNP并且还共价缀合至载体部分例如-Z或-Z'，其中与所述载体部分的共价缀合直接或通过间隔体部分例如-L²-实现。优选地，-Z或-Z'和-L²-之间的联接是稳定的联接。

如本文所用，术语“无痕前药连接体”是指可逆的前药连接体，其一旦切割以其游离形式释放药物。如本文所用，术语“游离形式”的药物是指其未修饰的、药理学活性形式的药物。

如本文所用，术语“赋形剂”是指与治疗剂例如药物或前药一起施用的稀释剂、辅助剂或溶媒。这样的药物赋形剂可以是无菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，包括但不限于花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当口服施用药物组合物时，水是优选的赋形剂。当静脉内施用药物组合物时，盐水和葡萄糖水溶液是优选的赋形剂。盐水溶液和葡萄糖水溶液和甘油溶液优选用作可注射溶液的液体赋形剂。合适的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、海藻糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、干脱脂乳、甘油、丙二醇、水、乙醇等。如果需要，药物组合物还可以含有少量的润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等，例如乙酸盐、琥珀酸盐、tris、碳酸盐、磷酸盐、HEPES(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)、MES(2-(N-吗啉代)乙磺酸)、或可以含有洗涤剂例如吐温、泊洛沙姆、泊洛沙胺、CHAPS、Igepal或氨基酸例如甘氨酸、赖氨酸或组氨酸。这些药物组合物可以采取溶液、混悬液、乳剂、片剂、丸剂、胶囊、散剂、持续释放制剂等的形式。药物组合物可以与传统的粘合剂和赋形剂如甘油三酯配制成栓剂。口服制剂可以包括标准赋形剂，例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。这样的组合物将含有治疗有效量的药物或生物活性部分，以及合适量的赋形剂，以便为患者提供适当的施用形式。制剂应符合施用方式。

如本文所用，术语“试剂”是指包含至少一个用于与另一种化合物或药物的官能团反应的官能团的化合物。应理解，包含官能团(例如伯胺或仲胺或羟基官能团)的药物也是试剂。

如本文所用，术语“部分(moiety)”是指与相应试剂相比缺少一个或多个原子的分子的一部分(part)。例如，如果式“H-X-H”的试剂与另一试剂反应并成为反应产物的一部分(part)，则反应产物的相应部分(moiety)具有结构“H–X–”或“–X–”，而每个“-”表示连接至另一部分(moiety)。因此，生物活性部分作为药物从前药中释放出来。

应当理解，如果提供了一组原子的序列或化学结构，该组原子连接至两个部分或将部分(moiety)中断，则所述序列或化学结构可以以任一取向连接到两个部分，除非另外明确地说明。例如，部分“-C(O)N(R¹²)-”可以作为“-C(O)N(R¹²)-”或“-N(R¹²)C(O)-”连接到两个部分或将部分中断。类似地，部分

可以作为

连接到两个部分或可将部分中断。

如本文所用，术语“官能团”是指可以与其他原子基团反应的原子基团。官能团包括但不限于以下基团：羧酸(–(C＝O)OH)、伯或仲胺(–NH₂,–NH–)、马来酰亚胺、硫醇(SH)、磺酸(–(O＝S＝O)OH)、碳酸酯、氨基甲酸酯(–O(C＝O)N<)、羟基(–OH)、醛(–(C＝O)H)、酮(–(C＝O)–)、(>N-N<)、异氰酸酯、异硫氰酸酯、磷酸(–O(P＝O)OHOH)、膦酸(–O(P＝O)OHH)、卤代乙酰基、烷基卤、丙烯酰基、芳基氟、羟胺、二硫化物、磺酰胺、硫酸、乙烯基砜、乙烯基酮、重氮烷、环氧乙烷和氮丙啶。

在本发明的前药包含一个或多个酸性或碱性基团的情况下，本发明还包括其相应的药学上或毒理学上可接受的盐，特别是其药学上可用的盐。因此，根据本发明，可以使用包含酸性基团的本发明的前药，例如作为碱金属盐、碱土金属盐或铵盐。这些盐的更精确的实例包括钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或与氨或有机胺例如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸的盐。包含一个或多个碱性基团即可被质子化的基团的本发明的前药可以存在并可根据本发明以其与无机或有机酸的加成盐的形式使用。合适的酸的实例包括氯化氢、溴化氢、磷酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、新戊酸、二乙基酸乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富马酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯基丙酸、葡萄糖酸、抗坏血酸、异烟酸、柠檬酸、己二酸和本领域技术人员已知的其它酸。对于本领域技术人员，还已知有将碱性基团转化为阳离子的其它方法，如胺基团的烷基化，得到带正电荷的铵基团和盐的适当抗衡离子。如果本发明的前药同时包含酸性和碱性基团，除了所提及的盐形式外，本发明还包括内盐或甜菜碱(betaine)(两性离子)。各盐可以通过本领域技术人员已知的常规方法获得，例如通过将这些前药与有机或无机酸或碱在溶剂或分散剂中接触，或通过与其它盐进行阴离子交换或阳离子交换。本发明还包括本发明前药的所有盐，由于低生理相容性，其不直接适用于药物，但可用于例如化学反应的中间体或用于制备药学上可接受的盐。

术语“药学上可接受的”是指当对患者施用时造成危害的物质，并且优选是由管理机构例如EMA(欧洲)和/或FDA(US)和/或任何其他国家管理机构批准的，用于动物，优选用于人。

如本文所用，术语“约”与数值的组合用于指示从数值加上和减去不超过所述数值的10％的范围并包括端点，更优选不超过所述数值的8％，甚至更优选不超过所述数值的5％，最优选不超过所述数值的2％。例如，短语“约200”用于表示200+/-10％的范围并包括端点，即180至220的范围并包括端点；优选为200+/-8％，即184至216的范围并包括端点；甚至更优选范围为200+/-5％，即190至210的范围并包括端点；最优选为200+/-2％，即196至204的范围并包括端点。可以理解，以“约20％”表示的百分比不表示“20％+/-10％”即从10％至30％，“约20％”而是意指18至22％并包括端点，即数值20的加和减10％。

如本文所用，术语“聚合物”是指包含以线性、圆形、支化、交联或树枝状方式或其组合方式通过化学键连接的重复结构单元即单体的分子，其可以是合成的或生物来源的或两者的组合。应当理解，聚合物还可以包含一个或多个其它化学基团和/或部分，例如一个或多个官能团。优选地，可溶性聚合物具有至少0.5kDa的分子量，例如至少1kDa的分子量，至少2kDa的分子量，至少3kDa的分子量或至少5kDa的分子量。如果聚合物是可溶的，则其优选具有至多为1000kDa、例如至多750kDa、例如至多500kDa、例如至多300kDa、例如至多200kDa、例如至多100kDa的分子量。应当理解，对于不溶性聚合物，例如水凝胶，不能提供有意义的分子量范围。

如本文所用，术语“聚合物的(polymeric)”意指包含一个或多个聚合物或聚合物部分的试剂或部分。聚合物试剂或部分可以任选地还包含一个或多个其它部分，其优选选自：

●C_1-50烷基、C_2-50烯基、C_2-50炔基、C_3-10环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂二环基、苯基、萘基、茚基、茚满基和四氢化萘基；且

●选自以下的联接(linkage)

其中

虚线指示连接至所述部分或试剂的其余部分，且

-R和-R^a相互独立地选自-H、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基。

本领域技术人员理解，从聚合反应获得的聚合产物并不都具有相同的分子量，而是表现出分子量分布。因此，本文所用的分子量范围、分子量、聚合物中单体数目的范围和聚合物中的单体数目是指数均分子量和单体的平均数目，即聚合物或聚合物部分的分子量的算数平均值和聚合物或聚合物部分的单体数目的算术平均值。

因此，在包含“x”单体单元的聚合物部分中，对于“x”给出的任何整数对应于单体的算术平均数。对于“x”给定的任意整数范围提供单体的算术平均数位于其中的整数范围。作为“约x”给定的“x”的整数表示单体的算术平均数位于x+/-10％、优选x+/-8％、更优选x+/-5％、最优选x+/-2％的整数范围内。

如本文所用，术语“数均分子量”是指个体聚合物的分子量的普通算术平均值。

本文所用的与载体相关的术语“水溶性”是指当所述载体为本发明的CNP前药的一部分时，在20℃至少1g的包含这种水溶性载体的CNP前药可以溶解在1升的水中，形成均匀溶液。因此，与载体相关的术语“水不溶性”是指当所述载体为本发明的CNP前药的一部分时，在20℃少于1g的包含这种水不溶性载体的CNP前药可以溶解在1升的水中，形成均匀溶液。

如本文所用，术语“水凝胶”是指由均聚物或共聚物组成的亲水或两亲聚合物网络，其由于存在共价化学交联而是不溶的。所述交联提供网络结构和物理完整性。

如本文所用，术语“热凝胶”是指在低温(该低温范围为约0℃至约10℃)下在约0.1/秒的剪切速率在25℃下具有小于500cps粘度的为液体或低粘度溶液，但是在较高温度(该较高温度为约30℃至约40℃，例如约37℃)在约0.1/秒的剪切速率下在25℃下具有小于10000cps的较高粘度的化合物。

如本文所用，与部分或试剂相关的术语“基于PEG的”表示所述部分或试剂包含PEG。优选地，基于PEG的部分或试剂包含至少10％(w/w)PEG，例如至少20％(w/w)PEG，例如至少30％(w/w)PEG，例如至少40％(w/w)PEG，例如至少50％(w/w)，例如至少60(w/w)PEG，例如至少70％(w/w)PEG，至少80％(w/w)PEG，例如至少90％(w/w)PEG，例如至少95％。基于PEG的部分或试剂的剩余重量百分比是优选选自以下部分和联接的其它部分：

●C_1-50烷基、C_2-50烯基、C_2-50炔基、C_3-10环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂二环基、苯基、萘基、茚基、茚满基和四氢化萘基；和

●选自以下的联接

其中

虚线指示连接至所述部分或试剂的其余部分，且

如本文所用，与部分或试剂相关的术语“包含至少X％PEG的基于PEG的”意味着所述部分或试剂包含至少X％(w/w)乙二醇单元(-CH₂CH₂O–)，其中乙二醇单元可以在部分或试剂内嵌段化(blockwise)、交替排列或可以随机分布，优选所述部分或试剂的所有乙二醇单元存在于一个嵌段中；基于PEG的部分或试剂的剩余重量百分比是其它部分，优选选自以下部分和联接：

●选自以下的联接

其中

虚线指示连接至所述部分或试剂的其余部分，且

相应地使用术语“至少包含X％透明质酸的基于透明质酸的”。

本文所用的术语“取代的”是指分子或部分的一个或多个H原子被称为“取代基”的不同原子或原子基团替换。

优选地，一个或多个进一步的任选取代基彼此独立地选自：卤素、-CN、-COOR^x1、-OR^x1、-C(O)R^x1、-C(O)N(R^x1R^x1a)、-S(O)₂N(R^x1R^x1a)、-S(O)N(R^x1R^x1a)、-S(O)₂R^x1、-S(O)R^x1、-N(R^x1)S(O)₂N(R^x1aR^x1b)、-SR^x1、-N(R^x1R^x1a)、-NO₂、-OC(O)R^x1、-N(R^x1)C(O)R^x1a、-N(R^x1)S(O)₂R^x1a、-N(R^x1)S(O)R^x1a、-N(R^x1)C(O)OR^x1a、-N(R^x1)C(O)N(R^x1aR^x1b)、-OC(O)N(R^x1R^x1a)、-T⁰、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基；其中-T⁰、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被相同或不同的一个或多个-R^x2取代，并且其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：

-T⁰-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^x3)-、-S(O)₂N(R^x3)-、-S(O)N(R^x3)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^x3)S(O)₂N(R^x3a)-、-S-、-N(R^x3)-、-OC(OR^x3)(R^x3a)-、-N(R^x3)C(O)N(R^x3a)-和-OC(O)N(R^x3)-；

-R^x1、-R^x1a、-R^x1b相互独立地选自-H、-T⁰、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基；其中-T⁰、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被相同或不同的一个或多个-R^x2取代，并且其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T⁰-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^x3)-、-S(O)₂N(R^x3)-、-S(O)N(R^x3)-；-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^x3)S(O)₂N(R^x3a)-、-S-、-N(R^x3)-、-OC(OR^x3)(R^x3a)-、-N(R^x3)C(O)N(R^x3a)-和-OC(O)N(R^x3)-；

各T⁰独立地选自：苯基、萘基、茚基、茚满基、四氢化萘基、C_3-10环烷基、3-至10-元杂环基和8-至11-元杂二环基；其中各T⁰独立地任选被一个或多个相同或不同的-R^x2取代；

各-R^x2独立地选自：卤素、-CN、氧代(＝O)、-COOR^x4、-OR^x4、-C(O)R^x4、-C(O)N(R^x4R^x4a)、-S(O)₂N(R^x4R^x4a)、-S(O)N(R^x4R^x4a)、-S(O)₂R^x4、-S(O)R^x4、-N(R^x4)S(O)₂N(R^x4aR^x4b)、-SR^x4、-N(R^x4R^x4a)、-NO₂、-OC(O)R^x4、-N(R^x4)C(O)R^x4a、-N(R^x4)S(O)₂R^x4a、-N(R^x4)S(O)R^x4a、-N(R^x4)C(O)OR^x4a、-N(R^x4)C(O)N(R^x4aR^x4b)、-OC(O)N(R^x4R^x4a)和C_1-6烷基；其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；

各-R^x3、-R^x3a、-R^x4、-R^x4a、-R^x4b独立地选自：-H和C_1-6烷基；其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代。

更优选地，所述一个或多个进一步的任选取代基相互独立地选自卤素、-CN、-COOR^x1、-OR^x1、-C(O)R^x1、-C(O)N(R^x1R^x1a)、-S(O)₂N(R^x1R^x1a),-S(O)N(R^x1R^x1a)、-S(O)₂R^x1、-S(O)R^x1、-N(R^x1)S(O)₂N(R^x1aR^x1b)、-SR^x1、-N(R^x1R^x1a)、-NO₂、-OC(O)R^x1、-N(R^x1)C(O)R^x1a、-N(R^x1)S(O)₂R^x1a、-N(R^x1)S(O)R^x1a、-N(R^x1)C(O)OR^x1a、-N(R^x1)C(O)N(R^x1aR^x1b)、-OC(O)N(R^x1R^x1a)、-T⁰、C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基；其中-T⁰、C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基任选被相同或不同的一个或多个-R^x2取代，并且其中C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T⁰-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^x3)-、-S(O)₂N(R^x3)-、-S(O)N(R^x3)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^x3)S(O)₂N(R^x3a)-、-S-、-N(R^x3)-、-OC(OR^x3)(R^x3a)-、-N(R^x3)C(O)N(R^x3a)-和-OC(O)N(R^x3)-；

各-R^x1、-R^x1a、-R^x1b、-R^x3、-R^x3a独立地选自：-H、卤素、C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基；

各-R^x4、-R^x4a、-R^x4b独立地选自：-H、卤素、C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基；

甚至更优选地，所述一个或多个进一步的任选取代基相互独立地选自卤素、-CN、-COOR^x1、-OR^x1、-C(O)R^x1、-C(O)N(R^x1R^x1a)、-S(O)₂N(R^x1R^x1a),-S(O)N(R^x1R^x1a)、-S(O)₂R^x1、-S(O)R^x1、-N(R^x1)S(O)₂N(R^x1aR^x1b)、-SR^x1、-N(R^x1R^x1a)、-NO₂、-OC(O)R^x1、-N(R^x1)C(O)R^x1a、-N(R^x1)S(O)₂R^x1a、-N(R^x1)S(O)R^x1a、-N(R^x1)C(O)OR^x1a、-N(R^x1)C(O)N(R^x1aR^x1b)、-OC(O)N(R^x1R^x1a)、-T⁰、C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基；其中-T⁰、C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基任选被相同或不同的一个或多个-R^x2取代，并且其中C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T⁰-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^x3)-、-S(O)₂N(R^x3)-、-S(O)N(R^x3)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^x3)S(O)₂N(R^x3a)-、-S-、-N(R^x3)-、-OC(OR^x3)(R^x3a)-、-N(R^x3)C(O)N(R^x3a)-和-OC(O)N(R^x3)-；

各-R^x1、-R^x1a、-R^x1b、-R^x2、-R^x3、-R^x3a独立地选自：-H、卤素、C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基；

各T⁰独立地选自：苯基、萘基、茚基、茚满基、四氢化萘基、C_3-10环烷基、3-至10-元杂环基和8-至11-元杂二环基；其中各T⁰独立地任选被一个或多个相同或不同的-R^x2取代。

优选地，任选取代的分子的最多6个-H原子独立地被取代基替代，例如5个-H原子独立地被取代基替代，4个-H原子独立地被取代基替代，3个-H原子独立地被取代基替代，2个-H原子独立地被取代基替代，或者1个-H原子被取代基替代。

术语“中断”是指将部分(moiety)插在两个碳原子之间，或者如果插入位于部分的一个末端，则插在碳原子或杂原子与氢原子之间，优选插在碳原子和氢原子之间。

如本文所用，单独或组合的术语“C_1-4烷基”表示具有1至4个碳原子的直链或支链烷基部分。如果存在于分子末端，则直链或支链C_1-4烷基的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。当分子的两个部分被C_1-4烷基连接时，这些C_1-4烷基的实例是-CH₂-、-CH₂-CH₂-、-CH(CH₃)-、-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH(C₂H₅)-、-C(CH₃)₂-。C_1-4烷基碳的每个氢可以任选地被如上定义的取代基替代。任选地，C_1-4烷基可以被下面定义的一个或多个部分中断。

如本文所用，单独或组合的术语“C_1-6烷基”表示具有1至6个碳原子的直链或支链烷基部分。如果存在于分子末端，则直链和支链C_1-6烷基的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、2,2-二甲基丙基、正己基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基和3,3-二甲基丙基。当分子的两个部分被C_1-6烷基连接时，这些C_1-6烷基的实例是-CH₂-、-CH₂-CH₂-、-CH(CH₃)-、-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH(C₂H₅)-和-C(CH₃)₂-。C_1-6碳的每个氢可以任选地被如上定义的取代基替代。任选地，C_1-6烷基可以被下面定义的一个或多个部分中断。

因此，“C_1-10烷基”、“C_1-20烷基”或“C_1-50烷基”分别表示具有1至10、1至20或1至50个碳原子的烷基链，其中C_1-10、C_1-20或C_1-50碳的各氢原子可以任选地被如上定义的取代基替代。任选地，C_1-10或C_1-50烷基可以被下面定义的一个或多个部分中断。

如本文所用，单独或组合的术语“C_2-6烯基”表示具有2至6个碳原子、包含至少一个碳-碳双键的直链或支链烃部分。如果存在于分子的末端，则实例是-CH＝CH₂、-CH＝CH-CH₃、-CH₂-CH＝CH₂、-CH＝CHCH₂-CH₃和-CH＝CH-CH＝CH₂。当分子的两个部分被C_2-6烯基连接时，这样的C_2-6烯基的实例是-CH＝CH-。C_2-6烯基部分的每个氢原子可以任选地被如上定义的取代基替代。任选地，C_2-6烯基可以被下面定义的一个或多个部分中断。

因此，单独或组合的术语“C_2-10烯基”、“C_2-20烯基”或“C_2-50烯基”是指具有2至10、2至20或2至50个碳原子、包含至少一个碳-碳双键的直链或支链烃部分。C_2-10烯基、C_2-20烯基或C_2-50烯基的每个氢原子可以任选地被如上定义的取代基替代。任选地，C_2-10烯基、C_2-20烯基或C_2-50烯基可以被下面定义的一个或多个部分中断。

如本文所用，单独或组合的术语“C_2-6炔基”是指具有2至6个碳原子、包含至少一个碳-碳叁键的直链或支链烃部分。如果存在于分子的末端，则实例是-C≡CH、-CH₂-C≡CH、CH₂-CH₂-C≡CH和CH₂-C≡C-CH₃。当分子的两个部分被炔基连接时，则实例例如是-C≡C-。C_2-6炔基的每个氢原子可以任选地被如上定义的取代基替代。任选地，可以存在一个或多个双键。任选地，C_2-6炔基可以被下面定义的一个或多个部分中断。

因此，如本文所用，单独或组合的术语“C_2-10炔基”、“C_2-20炔基”和“C_2-50炔基”表示分别具有2至10个、2至20个或2至50个碳原子、包含至少一个碳-碳叁键的直链或支链烃部分。C_2-10炔基、C_2-20炔基或C_2-50炔基的每个氢原子可以任选地被如上定义的取代基替代。任选地，可以存在一个或多个双键。任选地，C_2-10炔基、C_2-20炔基或C_2-50炔基可以被下面定义的一个或多个部分中断。

如上所述，C_1-4烷基、C_1-6烷基、C_1-10烷基、C_1-20烷基、C_1-50烷基、C_2-6烯基、C_2-10烯基、C_2-20烯基、C_2-50烯基、C_2-6炔基、C_2-10炔基、C_2-20烯基或C_2-50炔基可任选地被一个或多个部分中断，所述部分优选选自：

其中

虚线指示连接至部分或试剂的其余部分(remainder)；且

如本文所用，术语“C_3-10环烷基”是指具有3至10个碳原子的环状烷基链，其可以是饱和或不饱和的，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基。C_3-10环烷基碳的每个氢原子可以被如上定义的取代基替代。术语“C_3-10环烷基”还包括桥连的二环如降冰片烷或降冰片烯。

术语“8-至30-元碳多环基”或“8-至30-元碳多环”是指具有8至30个环原子的两个或更多个环的环部分，其中两个相邻环共享至少一个环原子，并且可以含有至多最大数量的双键(芳香族或非芳香族环，其是完全饱和的、部分饱和的或不饱和的)。优选地，8-至30-元的碳多环基是指2、3、4或5个环的环部分，更优选2、3或4个环的环部分。

本文所用的术语“3-至10-元杂环基”或“3-至10-元杂环”是指具有3、4、5、6、7、8、9或10个环原子的环，其可含有至多最大数量的双键(芳香族或非芳香族环，其是完全饱和的、部分饱和的或不饱和的)，其中至少一个环原子直到4个环原子被选自硫(包括-S(O)-、-S(O)₂-)、氧和氮(包括＝N(O)-)的杂原子替代，并且其中所述环通过碳或氮原子与分子的其余部分连接。3-至10-元杂环的实例包括但不限于氮丙啶、环氧乙烷、环硫乙烷、吖丙因、环氧乙烯、硫杂丙烯环(thiirene)、氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、硫杂环丁烷(thietane)、呋喃、噻吩、吡咯、吡咯啉、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、

唑、

唑啉、异

唑、异

唑啉、噻唑、噻唑啉、异噻唑、异噻唑啉、噻二唑、噻二唑啉、四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、

唑烷、异

唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、噻二唑烷、环丁砜、吡喃、二氢吡喃、四氢吡喃、咪唑烷、吡啶、哒嗪、吡嗪、嘧啶、哌嗪、哌啶、吗啉、四唑、三唑、三唑烷、四唑烷、二氮杂环庚烷、氮杂

和高哌嗪。3-至10-元杂环基或3-至10-元杂环基团的每个氢原子可以被下面定义的取代基替代。

本文所用的术语“8-至11-元杂二环基”或“8-至11-元杂二环”是指具有8至11个环原子的两个环的杂环部分，其中至少一个环原子被两个环共享并且其可以含有至多最大数量的双键(芳香族或非芳香族环，其是完全饱和的、部分饱和的或不饱和的)，其中至少一个环原子直到6个环原子被选自硫(包括-S(O)-、-S(O)₂-)、氧和氮(包括=N(O)-)的杂原子替代，并且其中环通过碳或氮原子连接到分子的其余部分。8-至11-元杂二环的实例是吲哚、吲哚啉、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并

唑、苯并异

唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并嘧唑、苯并咪唑啉、喹啉、喹唑啉、二氢喹唑啉、喹啉、二氢喹啉、四氢喹啉、十氢喹啉、异喹啉、十氢异喹啉、四氢异喹啉、二氢异喹啉、苯并氮杂

嘌呤和蝶啶。术语8-至11-元杂二环还包括两个环的螺接结构诸如1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷或桥连杂环如8-氮杂-二环[3.2.1]辛烷。8-至11-元杂二环基或8-至11-元杂二环碳的每个氢原子可以被如下定义的取代基替代。

类似地，术语“8-至30-元杂多环基”或“8至30元杂多环”是指具有8至30个环原子、多于两个环优选3个、4个或5个环的杂环部分，其中两个相邻的环共享至少一个环原子，并且可以含有至多最大数量的双键(芳香族或非芳香族环，其是完全饱和的、部分饱和的或不饱和的)，其中至少一个环原子直到10个环原子被选自硫(包括–S(O)-、-S(O)₂-)、氧和氮(包括=N(O)-)的杂原子替代，并且其中所述环通过碳或氮原子与分子的其余部分连接。

应当理解，与结构部分

相关的短语“R^x/R^y对与它们所连接的原子一起形成C_3-10环烷基或3-至10-元杂环基”意指Rx和Ry形成下面的结构：

其中R是C_3-10环烷基或3-至10-元杂环基。

应当理解，与结构部分

相关的短语“R^x/R^y对与它们所连接的原子一起形成环A”意指R^x和R^y形成下面的结构：

如文中所用，术语“末端炔”意指

部分。

如文中所用，"卤素"意指氟、氯、溴或碘。一般优选地，卤素是氟或氯。

通常，术语“包括”或“包含”还涵盖“由…组成”。

优选地，-D具有SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:30的序列，甚至更优选SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25的序列。

在一个实施方案中，-D具有SEQ ID NO:25的序列。

在另一个实施方案中，-D具有SEQ ID NO:30的序列。

在一个优选的实施方案中，-D具有SEQ ID NO:24的序列。

所述部分-L¹-是可逆的前药连接体，药物即CNP以它的游离形式从其释放，即其为无痕前药连接体。合适的前药连接体是本领域已知的，例如公开在WO 2005/099768 A2、WO2006/136586 A2、WO 2011/089216 A1和WO 2013/024053 A1中的可逆的前药连接体部分，其通过引用并入本文。

在另一个实施方案中，-L¹-是WO 2011/012722 A1、WO 2011/089214 A1、WO 2011/089215 A1、WO 2013/024052 A1和WO 2013/160340 A1中所述的可逆的前药连接体，其通过引用并入本文。

部分-L¹-可以通过任何类型的联接(linkage)连接到-D，前提是它是可逆的。优选地，-L¹-通过选自酰胺、酯、氨基甲酸酯、缩醛、缩醛胺、亚胺、肟、腙、二硫化物和酰基胍的联接连接到-D上。甚至更优选地，-L¹-通过选自酰胺、酯、氨基甲酸酯和酰基胍的联接连接到-D。

在一优选的实施方案中，部分-L¹-通过酰胺联接与-D连接。应当理解，酰胺联接通常不可逆，但是在本发明中，包含在-L¹-中的相邻基团使得酰胺联接可逆。

特别优选的部分-L¹-公开在WO 2009/095479 A2中。因此，在一个优选的实施方案中，部分-L¹-具有式(II)结构：

其中虚线指示通过形成酰胺键连接至为CNP部分的-D的氮上；

-X-是-C(R⁴R^4a)-；-N(R⁴)-；-O-；-C(R⁴R^4a)-C(R⁵R^5a)-；-C(R⁵R^5a)-C(R⁴R^4a)-；-C(R⁴R^4a)-N(R⁶)-；-N(R⁶)-C(R⁴R^4a)-；-C(R⁴R^4a)-O-；-O-C(R⁴R^4a)-；或-C(R⁷R^7a)-；

X¹是C；或S(O)；

-X²-是-C(R⁸R^8a)-；或-C(R⁸R^8a)-C(R⁹R^9a)-；

＝X³是＝O；＝S；或＝N-CN；

-R¹、-R^1a、-R²、-R^2a、-R⁴、-R^4a、-R⁵、-R^5a、-R⁶、-R⁸、-R^8a、-R⁹、-R^9a独立地选自-H；和C_1-6烷基；

-R³、-R^3a独立地选自-H；和C_1-6烷基，前提是如果-R³、-R^3a之一或两者不是-H，则它们通过SP³-杂化的碳原子连接至它们所连接的N上；

-R⁷是-N(R¹⁰R^10a)；或-NR¹⁰-(C＝O)-R¹¹；

-R^7a、-R¹⁰、-R^10a、-R¹¹相互独立地是-H；或C_1-6烷基；

任选地，一个或多个-R^1a/-R^4a、-R^1a/-R^5a、-R^1a/-R^7a、-R^4a/-R^5a、-R^8a/-R^9a对形成化学键；

任选地，一个或多个-R¹/-R^1a、-R²/-R^2a、-R⁴/-R^4a、-R⁵/-R^5a、-R⁸/-R^8a、-R⁹/-R^9a对与它们所连接的原子一起形成C_3-10环烷基；或3-至10-元杂环基；

任选地，一个或多个-R¹/-R⁴、-R¹/-R⁵、-R¹/-R⁶、-R¹/-R^7a、-R⁴/-R⁵、-R⁴/-R⁶、-R⁸/-R⁹、-R²/-R³对与它们所连接的原子一起形成环A；

任选地，R³/R^3a与它们所连接的氮原子一起形成3-至10-元杂环；

A选自苯基；萘基；茚基；茚满基；四氢化萘基；C_3-10环烷基；3-至10-元杂环基；和8-至11-元杂二环基；且

其中-L¹-被-L²-Z或-L²-Z’取代，并且其中-L¹-任选被进一步取代，前提是式(II)中的用星号标记的氢不被-L²-Z或-L²-Z’或取代基替换；

其中

-L²-是单一化学键或间隔体；

-Z是水溶性载体；且

-Z’是水不溶性载体。

优选地，式(II)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

在一个实施方案中，式(II)的-L¹-未被进一步取代。

应理解，如果式(II)的-R³/-R^3a与它们所连接的氮原子一起形成3-至10-元杂环，仅其中直接连接至氮的原子是SP³-杂化的碳原子时可形成此类3-至10-元杂环。换句话讲，由-R³/-R^3a与它们所连接的氮原子一起形成的此类3-至10-元杂环具有下面的结构：

其中

虚线指示连接至-L¹-的其余部分(rest)；

该环包含3至10个原子，包括至少一个氮；且

R^#和R^##代表SP³-杂化的碳原子。

还应当理解，3-至10-元杂环可以进一步被取代。

由式(II)的-R³/-R^3a与它们所连接的氮原子一起形成的合适的3-至10-元杂环的示例性实施方案是如下的:

其中

虚线指示连接至分子的其余部分；且

-R选自-H和C_1-6烷基。

式(II)的-L¹-可以任选地被进一步取代。一般来讲，可以使用任何取代基，只要裂解原理不被影响，即式(II)中的用星号标记的氢未被替换并且式(II)的部分

的氮保持为伯、仲或叔胺的部分(part)，即-R³和-R^3a相互独立地是-H或通过SP³-杂化的碳原子连接至–N<。

在一个实施方案中，式(II)的-R¹或-R^1a被-L²-Z或-L²-Z’取代。在另一个实施方案中，式(II)的-R²或-R^2a被-L²-Z或-L²-Z’取代。在另一个实施方案中，式(II)的-R³或-R^3a被-L²-Z或-L²-Z’取代。在另一个实施方案中，式(II)的-R⁴被-L²-Z或-L²-Z’取代。在另一个实施方案中，式(II)的-R⁵或-R^5a被-L²-Z或-L²-Z’取代。在另一个实施方案中，式(II)的-R⁶被-L²-Z或-L²-Z’取代。在另一个实施方案中，式(II)的-R⁷或-R^7a被-L²-Z或-L²-Z’取代。在另一个实施方案中，式(II)的-R⁸或-R^8a被-L²-Z或-L²-Z’取代。在另一个实施方案中，式(II)的-R⁹或-R^9a被-L²-Z或-L²-Z’取代。

最优选地，式(II)的-R⁴被-L²-Z或-L²-Z’取代。

优选地，式(II)的-X-是-C(R⁴R^4a)-或-N(R⁴)-。最优选地，式(II)的-X-是-C(R⁴R^4a)-。

优选地，式(II)的X¹是C。

优选地，式(II)的＝X³是＝O。

优选地，式(II)的-X²-是-C(R⁸R^8a)-。

优选地，式(II)的-R⁸和-R^8a独立地选自-H、甲基和乙基。更优选地式(II)的-R⁸和-R^8a中的至少一个是-H。甚至更优选地，式(II)的-R⁸和-R^8a都是-H。

优选地，式(II)的-R¹和-R^1a独立地选自-H、甲基和乙基。更优选地,式(II)的-R¹和-R^1a中的至少一个是-H。甚至更优选地，式(II)的-R¹和-R^1a都是-H。

优选地，式(II)的-R²和-R^2a独立地选自-H、甲基和乙基。更优选地，式(II)的-R²和-R^2a中的至少一个是-H。甚至更优选地，式(II)的-R²和-R^2a都是H。

优选地，式(II)的-R³和-R^3a独立地选自-H、甲基、乙基、丙基和丁基。甚至更优选地，式(II)的-R³和-R^3a中的至少一个是甲基。在一同样优选的实施方案中，式(II)的-R³和-R^3a都是-H。在另一同样优选的实施方案中，式(II)的-R³和-R^3a都是甲基。

优选地，式(II)的-R³是-H，且式(II)的-R^3a是甲基。

优选地，式(II)的-R⁴和-R^4a独立地选自-H、甲基和乙基。更优选地，式(II)的-R⁴和-R^4a中的至少一个是-H。甚至更优选地，式(II)的-R⁴和-R^4a都是-H。

优选地，部分-L¹-具有式(IIa)结构:

其中虚线指示通过形成酰胺键连接至为CNP部分(moiety)的-D的氮上；

-R¹、-R^1a、-R²、-R^2a、-R³、-R^3a、-R⁴、-R^4a和-X²-如式(II)中所定义那样使用；且

其中-L¹-被-L²-Z或-L²-Z’取代并且其中-L¹-任选被进一步取代，前提是式(IIa)中用星号标记的氢不被-L²-Z或-L²-Z’或取代基替换。

优选地，式(IIa)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

优选地，式(IIa)的部分-L¹-未被进一步取代。

优选地，式(IIa)的-R¹和-R^1a独立地选自-H、甲基和乙基。更优选地，式(IIa)的-R¹和-R^1a中的至少一个是-H。甚至更优选地，式(IIa)的-R¹和-R^1a都是-H。

优选地，式(IIa)的-R⁴和-R^4a独立地选自-H、甲基和乙基。更优选地，式(IIa)的-R⁴和-R^4a中的至少一个是-H。甚至更优选地，式(IIa)的-R⁴和-R^4a都是-H。

优选地，式(IIa)的-X²-是-C(R⁸R^8a)-。

优选地，式(IIa)的-R⁸和-R^8a独立地选自-H、甲基和乙基。更优选地，式(IIa)的-R⁸和-R^8a中的至少一个是-H。甚至更优选地，式(IIa)的-R⁸和-R^8a都是-H。

优选地，式(IIa)的-R²和-R^2a独立地选自-H、甲基和乙基。更优选地,式(IIa)的-R²和-R^2a中的至少一个是-H。甚至更优选地，式(IIa)的-R²和-R^2a都是H。

优选地，式(IIa)的-R³和-R^3a独立地选自-H、甲基、乙基、丙基和丁基。甚至更优选地，式(IIa)的-R³和-R^3a中的至少一个是甲基。在一同样优选的实施方案中，式(IIa)的-R³和-R^3a都是-H。在另一同样优选的实施方案中，式(IIa)的-R³和-R^3a都是甲基。

优选地，式(IIa)的-R³是-H，且式(IIa)的-R^3a是甲基。

优选地，部分-L¹-具有式(IIb)结构:

其中虚线指示通过形成酰胺键连接至为CNP部分的-D的氮上；

-R²、-R^2a、-R³、-R^3a和-X²-如式(II)中所定义那样使用；且

其中-L¹-被-L²-Z或-L²-Z’取代并且其中-L¹-任选被进一步取代，

前提是式(IIb)中的星号标记的氢不被-L²-Z或-L²-Z’或取代基替换。

优选地，式(IIb)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

优选地，式(IIb)的部分-L¹-未被进一步取代。

优选地，式(IIb)的-X²-是-C(R⁸R^8a)-。

优选地，式(IIb)的-R⁸和-R^8a独立地选自-H、甲基和乙基。更优选地，式(IIb)的-R⁸和-R^8a中的至少一个是-H。甚至更优选地，式(IIb)的-R⁸和-R^8a都是-H。

优选地，式(IIb)的-R²和-R^2a独立地选自-H、甲基和乙基。更优选地,式(IIb)的-R²和-R^2a中的至少一个是-H。甚至更优选地，式(IIb)的-R²和-R^2a都是H。

优选地，式(IIb)的-R³和-R^3a独立地选自-H、甲基、乙基、丙基和丁基。甚至更优选地，式(IIb)的-R³和-R^3a中的至少一个是甲基。在一同样优选的实施方案中，式(IIb)的-R³和-R^3a都是-H。在另一同样优选的实施方案中，式(IIb)的-R³和-R^3a都是甲基。

最优选地，式(IIb)的-R³是-H，且式(IIb)的-R^3a是甲基。

甚至更优选地，部分-L¹-具有式(IIb’)结构:

其中

其中虚线指示通过形成酰胺键连接至为CNP部分的D的氮上；

用星号标记的虚线指示连接至-L²-；

-R²、-R^2a、-R³、-R^3a和-X²-如式(II)中所定义那样使用；且

其中-L¹-任选被进一步取代，前提是式(IIb’)中用星号标记的氢不被取代基替换。

优选地，式(IIb’)的部分-L¹-未被进一步取代。

优选地，式(IIb’)的-X²-是-C(R⁸R^8a)-。

优选地，式(IIb’)的-R⁸和-R^8a独立地选自-H、甲基和乙基。更优选地，式(IIb’)的-R⁸和-R^8a中的至少一个是-H。甚至更优选地，式(IIb’)的-R⁸和-R^8a都是-H。

优选地，式(IIb’)的-R²和-R^2a独立地选自-H、甲基和乙基。更优选地,式(IIb’)的-R²和-R^2a中的至少一个是-H。甚至更优选地，式(IIb’)的-R²和-R^2a都是H。

优选地，式(IIb’)的-R³和-R^3a独立地选自-H、甲基、乙基、丙基和丁基。甚至更优选地，式(IIb’)的-R³和-R^3a中的至少一个是甲基。在一同样优选的实施方案中，式(IIb’)的-R³和-R^3a都是-H。在另一同样优选的实施方案中，式(IIb’)的-R³和-R^3a都是甲基。

最优选地，式(IIb’)的-R³是-H，且式(IIb’)的-R^3a是甲基。

优选地，部分-L¹-具有式(IIc)结构：

其中虚线指示通过形成酰胺键连接至为CNP部分的-D的氮上；且

其中-L¹-被-L²-Z或-L²-Z’取代并且其中-L¹-任选被进一步取代，前提是式(IIc)中用星号标记的氢不被-L²-Z或-L²-Z’或取代基替换。

优选地，式(IIc)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

优选地，式(IIc)的部分-L¹-未被进一步取代。

在另一个优选的实施方案中，部分-L¹-具有式(IIc-a)结构:

优选地，式(IIc-a)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

优选地，式(IIc-a)的部分-L¹-未被进一步取代。

在另一个优选的实施方案中，部分-L¹-具有式(IIc-b)结构:

优选地，式(IIc-b)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

优选地，式(IIc-b)的部分(moiety)-L¹-未被进一步取代。

甚至更优选地，部分-L¹-选自式(IIc-i)、(IIc-ii)、(IIc-iii)、(IIc-iv)和(IIc-v):

其中

未标记的虚线指示通过形成酰胺键连接至为CNP部分的-D的氮上；且

用星号标记的虚线指示连接至-L²-Z或-L²-Z’；且

-L¹-任选被进一步取代，前提是式(IIc-i)、(IIc-ii)、(IIc-iii)、(IIc-iv)和(IIc-v)中用星号标记的氢不被取代基替换。

优选地，式(IIc-i)、(IIc-ii)、(IIc-iii)、(IIc-iv)和(IIc-v)的部分-L¹-未被进一步取代。

在一特别优选的实施方案中，部分-L¹-是

其中

用星号标记的虚线指示连接至-L²-Z或-L²-Z’。

优选地，式(IIc-ii)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

在一同样优选的实施方案中，部分-L¹-选自式(IIc-i’)、(IIc-ii’)、(IIc-iii’)、(IIc-iv’)和(IIc-v’):

其中

用星号标记的虚线指示连接至-L²-Z或-L²-Z’；且

-L¹-任选被进一步取代，前提是式(IIc-i’)、(IIc-ii’)、(IIc-iii’)、(IIc-iv’)和(IIc-v’)中用星号标记的氢不被取代基替换。

优选地，式(IIc-i’)、(IIc-ii’)、(IIc-iii’)、(IIc-iv’)和(IIc-v’)的部分-L¹-未被进一步取代。

在另一特别优选的实施方案中，部分-L¹-是

其中

用星号标记的虚线指示连接至-L²-Z或-L²-Z’。

优选地，式(IIc-ii’)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

在一同样优选的实施方案中，部分-L¹-选自式(IIc-i”)、(IIc-ii”)、(IIc-iii”)和(IIc-iv”):

其中

用星号标记的虚线指示连接至-L²-Z或-L²-Z’；且

-L¹-任选被进一步取代，前提是式(IIc-i”)、(IIc-ii”)、(IIc-iii”)和(IIc-iv”)中用星号标记的氢不被取代基替换。

优选地，式(IIc-i”)、(IIc-ii”)、(IIc-iii”)和(IIc-iv”)的部分-L¹-未被进一步取代。

在另一特别优选的实施方案中，部分-L¹-是

其中

用星号标记的虚线指示连接至-L²-Z或-L²-Z’。

优选地，式(IIc-ii”)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

式(II)、(IIa)、(IIb)、(IIb’)、(IIc)、(IIc-i)、(IIc-ii)、(IIc-iii)、(IIc-iv)、(IIc-v)、(IIc-i')、(IIc-ii’)、(IIc-iii’)、(IIc-iv’)、(IIc-v’)、(IIc-i”)、(IIc-ii”)、(IIc-iii)和(IIc-iv”)的-L¹-的任选的进一步取代基优选如上所述。

另一特别优选的部分-L¹-记录在未公开的欧洲专利申请14180004中，其对应于申请号为PCT/EP2015/067929的国际申请。因此，在另一个优选的实施方案中，部分-L¹-具有式(III)结构：

其中

虚线指示分别通过形成酰胺或酯联接而连接至D的伯或仲胺或羟基；

-R¹、-R^1a、-R²、-R^2a、-R³和-R^3a相互独立地选自-H、-C(R⁸R^8aR^8b)、-C(＝O)R⁸、-C≡N、-C(＝NR⁸)R^8a、-CR⁸(＝CR^8aR^8b)、-C≡CR⁸和-T；

-R⁴、-R⁵和-R^5a相互独立地选自-H、-C(R⁹R^9aR^9b)和-T；

a1和a2相互独立地是0或1；

各-R⁶、-R^6a、-R⁷、-R^7a、-R⁸、-R^8a、-R^8b、-R⁹、-R^9a、-R^9b相互独立地选自-H、卤素、-CN、-COOR¹⁰、-OR¹⁰、-C(O)R¹⁰、-C(O)N(R¹⁰R^10a)、-S(O)₂N(R¹⁰R^10a)、-S(O)N(R¹⁰R^10a)、-S(O)₂R¹⁰、-S(O)R¹⁰、-N(R¹⁰)S(O)₂N(R^10aR^10b)、-SR¹⁰、-N(R¹⁰R^10a)、-NO₂、-OC(O)R¹⁰、-N(R¹⁰)C(O)R^10a、-N(R¹⁰)S(O)₂R^10a、-N(R¹⁰)S(O)R^10a、-N(R¹⁰)C(O)OR^10a、-N(R¹⁰)C(O)N(R^10aR^10b)、-OC(O)N(R¹⁰R^10a)、-T、C_1-20烷基、C_2-20烯基和C_2-20炔基；其中-T、C_1-20烷基、C_2-20烯基和C_2-20炔基任选被一个或多个相同或不同的-R¹¹取代并且其中C_1-20烷基、C_2-20烯基和C_2-20炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R¹²)-,-S(O)₂N(R¹²)-、-S(O)N(R¹²)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R¹²)S(O)₂N(R^12a)-、-S-、-N(R¹²)-、-OC(OR¹²)(R^12a)-、-N(R¹²)C(O)N(R^12a)-和-OC(O)N(R¹²)-；

各-R¹⁰、-R^10a、-R^10b独立地选自：-H、-T、C_1-20烷基、C_2-20烯基和C_2-20炔基；其中-T、C_1-20烷基、C_2-20烯基和C_2-20炔基任选被一个或多个相同或不同的-R¹¹取代并且其中C_1-20烷基、C_2-20烯基和C_2-20炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R¹²)-、-S(O)₂N(R¹²)-、-S(O)N(R¹²)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R¹²)S(O)₂N(R^12a)-、-S-、-N(R¹²)-、-OC(OR¹²)(R^12a)-、-N(R¹²)C(O)N(R^12a)-和-OC(O)N(R¹²)-；

各T相互独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、四氢化萘基、C_3-10环烷基、3-至10-元杂环基和8-至11-元杂二环基；其中各T独立地任选被一个或多个相同或不同的-R¹¹取代；

各-R¹¹相互独立地选自卤素、-CN、氧代(＝O)、-COOR¹³、-OR¹³、-C(O)R¹³、-C(O)N(R¹³R^13a)、-S(O)₂N(R¹³R^13a)、-S(O)N(R¹³R^13a)、-S(O)₂R¹³、-S(O)R¹³、-N(R¹³)S(O)₂N(R^13aR^13b)、-SR¹³、-N(R¹³R^13a)、-NO₂、-OC(O)R¹³、-N(R¹³)C(O)R^13a、-N(R¹³)S(O)₂R^13a、-N(R¹³)S(O)R^13a、-N(R¹³)C(O)OR^13a、-N(R¹³)C(O)N(R^13aR^13b)、-OC(O)N(R¹³R^13a)和C_1-6烷基；其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；

各-R¹²、-R^12a、-R¹³、-R^13a、-R^13b独立地选自：-H和C_1-6烷基；其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；

任选地，一个或多个-R¹/-R^1a、-R²/-R^2a、-R³/-R^3a、-R⁶/-R^6a、-R⁷/-R^7a对与它们所连接的原子一起形成C_3-10环烷基或3-至10-元杂环基；

任选地，一个或多个-R¹/-R²、-R¹/-R³、-R¹/-R⁴、-R¹/-R⁵、-R¹/-R⁶、-R¹/-R⁷、-R²/-R³、-R²/-R⁴、-R²/-R⁵、-R²/-R⁶、-R²/-R⁷、-R³/-R⁴、-R³/-R⁵、-R³/-R⁶、-R³/-R⁷、-R⁴/-R⁵、-R⁴/-R⁶、-R⁴/-R⁷、-R⁵/-R⁶、-R⁵/-R⁷、-R⁶/-R⁷对与它们所连接的原子一起形成环A；

A选自苯基；萘基；茚基；茚满基；四氢化萘基；C_3-10环烷基；3-至10-元杂环基；和8-至11-元杂二环基；

其中-L¹-被-L²-Z或-L²-Z’取代并且其中-L¹-任选被进一步取代；

其中

-L²-是单一化学键或间隔体；

-Z是水溶性载体；且

-Z’是水不溶性载体。

式(III)的-L¹-的任选的进一步取代基优选如上所述。

优选地，式(III)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

在一个实施方案中，式(III)的-L¹-未被进一步取代。

-L¹-的其它优选实施方案公开在EP1536334B1、WO2009/009712A1、WO2008/034122A1、WO2009/143412A2、WO2011/082368A2和US8618124B2中，其全部内容通过引用并入本文。

-L¹-的其它优选实施方案公开在US8946405B2和US8754190B2中，其全部内容通过引用并入本文。因此，优选的部分-L¹-具有式(IV)结构：

其中

虚线指示连接至为CNP部分的-D并且其中连接是通过选自-OH、-SH和-NH₂的-D的官能团进行的；

m是0或1；

-R¹和-R²中的至少一个或两者相互独立地选自-CN、-NO₂、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、-C(O)R³、-S(O)R³、-S(O)₂R³和-SR⁴，

R¹和-R²中的一个且仅一个选自-H、任选取代的烷基、任选取代的芳基烷基和任选取代的杂芳基烷基；

-R³选自-H、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳基烷基、-OR⁹和-N(R⁹)₂；

-R⁴选自任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂芳基烷基；

各-R⁵独立地选自：-H、任选取代的烷基、任选取代的烯基烷基、任选取代的炔基烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂芳基烷基；

-R⁹选自-H和任选取代的烷基；

-Y-不存在，且–X-是-O-或-S-；或

-Y-是-N(Q)CH₂-，且-X-是-O-；

Q选自任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂芳基烷基；

任选地，-R¹和-R²可以连接在一起形成3至8-元环；且

任选地，两个-R⁹与它们所连接的氮一起形成杂环；

其中

-L²-是单一化学键或间隔体；

-Z是水溶性载体；且

-Z’是水不溶性载体。

只有在式(IV)的上下文中，使用的术语具有以下含义：

文中所用的术语“烷基”包括1至8个碳原子或在一些实施方案中包括1至6个或1至4个碳原子的直链、支链或环状饱和烃基团。

术语“烷氧基”包括与氧键合的烷基，包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙氧基、环丁氧基等。

术语“烯基”包括具有碳-碳双键的非芳族不饱和烃。

术语“炔基”包括具有碳-碳叁键的非芳族不饱和烃。

术语“芳基”包括6至18个碳，优选6至10个碳的芳族烃基，包括例如苯基、萘基和蒽基(anthracenyl)的基团。术语“杂芳基”包括含有至少一个N、O或S原子、包含3至15个碳的芳环，优选含有至少一个N、O或S原子、包含3至7个碳的芳环，包括如吡咯基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、

唑基、异

唑基、噻唑基、异噻唑基、喹啉基、吲哚基、茚基等基团。

在一些情况下，烯基、炔基、芳基或杂芳基部分可以通过亚烷基联接与分子的其余部分连接。在这些情况下，取代基将被称为烯基烷基、炔基烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，表明亚烷基部分是在烯基、炔基、芳基或杂芳基部分和与该烯基、炔基、芳基或杂芳基相连的分子之间。

术语“卤素”包括溴、氟、氯和碘。

术语“杂环”是指包含3至7个碳原子和至少一个N、O或S原子的4至8元芳族或非芳族环。实例是哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、吡咯烷和四氢呋喃基、以及为上述术语“杂芳基”提供的示例性基团。

当环系任选被取代时，合适的取代基选自烷基、烯基、炔基或另外的环，各自任选地进一步被取代。任何基团(包括上述的)上的任选取代基包括卤素、硝基、氰基、-OR、-SR、-NR₂、-OCOR、-NRCOR、-COOR、-CONR₂、-SOR、-SO₂R、-SONR₂、-SO₂NR₂，其中每个R独立地为烷基、烯基、炔基、芳基或杂芳基，或两个R基团与它们所连接的原子一起形成环。

优选地，式(IV)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

-L¹-的其它优选的实施方案公开在WO2013/036857A1中，将其全部引入文中作为参考。因此，优选的部分-L¹-具有式(V)结构:

其中

虚线指示连接至为CNP部分的-D并且其中连接是通过-D的胺官能团进行的；

-R¹选自任选取代的C₁-C₆直链、支链或环状烷基；任选取代的芳基；任选取代的杂芳基；烷氧基；和-NR⁵ ₂；

-R²选自-H；任选取代的C₁-C₆烷基；任选取代的芳基；和任选取代的杂芳基；

-R³选自-H；任选取代的C₁-C₆烷基；任选取代的芳基；和任选取代的杂芳基；

-R⁴选自-H；任选取代的C₁-C₆烷基；任选取代的芳基；和任选取代的杂芳基；

各-R⁵相互独立地选自-H；任选取代的C₁-C₆烷基；任选取代的芳基；和任选取代的杂芳基；或当连接在一起时两个-R⁵可以是环烷基或环杂烷基；

其中

-L²-是单一化学键或间隔体；

-Z是水溶性载体；且

-Z’是水不溶性载体。

只有在式(V)的上下文中，使用的术语具有以下含义：

“烷基”、“烯基”和“炔基”包括1-8个碳原子或1-6个碳原子或1-4个碳原子的直链、支链或环状烃基，其中烷基是饱和烃，烯基包含一个或多个碳-碳双键，且炔基包含一个或多个碳-碳叁键。除非另有说明，这些含有1-6个C。

“芳基”包括6-18个碳原子，优选6-10个碳原子的芳烃基团，包括例如苯基、萘基和蒽的基团。“杂芳基”包括含有至少一个N、O或S原子、包含3至15个碳的芳环，优选含有至少一个N、O或S原子、包含3至7个碳的芳环，包括如吡咯基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、

唑基、异

唑基、噻唑基、异噻唑基、喹啉基、吲哚基、茚基等基团。

术语“取代的”是指包含一个或多个取代基代替一个或多个氢原子的烷基、烯基、炔基、芳基或杂芳基。取代基通常可以选自：卤素，包括F、Cl、Br和I；低级烷基，包括直链、支链和环状的；低级卤代烷基，包括氟代烷基、氯代烷基、溴代烷基和碘代烷基；OH；低级烷氧基，包括直链、支链和环状的；SH；低级烷硫基，包括直链、支链和环状的；氨基、烷基氨基、二烷基氨基、甲硅烷基，包括烷基甲硅烷基、烷氧基甲硅烷基和芳基甲硅烷基；硝基；氰基；羰基；羧酸、羧酸酯、羧酸酰胺、氨基羰基；氨基酰基；氨基甲酸酯；脲；硫代氨基甲酸酯；硫脲；ketne；砜；磺酰胺；芳基，包括苯基、萘基和蒽基；杂芳基，其包括：5-元杂芳基，包括吡咯、咪唑、呋喃、噻吩、

唑、噻唑、异

唑、异噻唑、噻二唑、三唑、

二唑和四唑，6-元杂芳基，包括吡啶、嘧啶、吡嗪，和稠合杂芳基，包括苯并呋喃、苯并噻吩、苯并

唑、苯并咪唑、吲哚、苯并噻唑、苯并异

唑和苯并异噻唑。

优选地，式(V)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

-L¹-的另一优选实施方案公开在US7585837B2中，其全部内容通过引用并入本文。因此，优选的部分-L¹-具有式(VI)结构：

其中

R¹和R²独立地选自氢、烷基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、烷芳基、芳烷基、卤素、硝基、-SO₃H、-SO₂NHR⁵、氨基、铵、羧基、PO₃H₂和OPO₃H₂；

R³、R⁴和R⁵独立地选自氢、烷基和芳基；

其中

-L²-是单一化学键或间隔体；

-Z是水溶性载体；且

-Z’是水不溶性载体。

式(VI)的合适的取代基是烷基(例如C_1-6烷基)、烯基(例如C_2-6烯基)、炔基(例如C_2-6炔基)、芳基(例如苯基)、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基(例如芳香的4至7元杂环)或卤素部分。

只有在式(VI)的上下文中，使用的术语具有以下含义：

术语“烷基”、“烷氧基”、“烷氧基烷基”、“芳基”、“烷芳基”和“芳烷基”表示1-8个碳原子、优选1-4个碳原子的烷基例如甲基、乙基、丙基、异丙基和丁基，和6-10个碳原子的芳基，例如苯基和萘基。术语“卤素”包括溴、氟、氯和碘。

优选地，式(VI)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

-L¹-的另一优选实施方案公开在WO2002/089789A1中，其全部内容通过引用并入本文。因此，优选的部分-L¹-具有式(VII)结构：

其中

L₁是双功能连接基团，

Y₁和Y₂独立地是O、S或NR⁷；

R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷独立地选自氢、C_1-6烷基、C_3-12支链烷基、C_3-8环烷基、C_1-6取代的烷基、C_3-8取代的环烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、C_1-6杂烷基、取代的C_1-6杂烷基、C_1-6烷氧基、苯氧基和C_1-6杂烷氧基；

Ar是这样的部分，当包括在式(VII)中时其形成多取代的芳香烃或多取代的杂环基团；

X是化学键或被主动转运到靶细胞中的部分、疏水部分或其组合，

y是0或1；

其中

-L²-是单一化学键或间隔体；

-Z是水溶性载体；且

-Z’是水不溶性载体。

只有在式(VII)的上下文中，使用的术语具有以下含义：

术语“烷基”应理解为包括，例如直链、支链取代的C_1-12烷基，包括烷氧基、C_3-8环烷基或取代的环烷基等。

术语“取代的”应理解为包括用一个或多个不同原子添加或替换官能团或化合物中包含的一个或多个原子。

取代的烷基包括羧基烷基、氨基烷基、二烷基氨基、羟基烷基和巯基烷基；取代的环烷基包括部分(moieties)例如4-氯环己基；芳基包括部分例如萘基；取代的芳基包括部分例如3-溴-苯基；芳烷基包括部分例如甲苯酰基；杂烷基包括部分例如乙基噻吩；取代的杂烷基包括部分例如3-甲氧基thiophone；烷氧基包括部分例如甲氧基；且苯氧基包括部分例如3-硝基苯氧基。卤素应理解为包括包括氟、氯、碘和溴。

优选地，式(VII)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

在另一个优选实施方案中，-L¹-包含式(VIII)的亚结构，

其中

用星号标记的虚线指示通过形成酰胺键连接至为CNP部分的-D氮上；

未标记的虚线指示连接至-L¹-的其余部分；且

其中

-L²-是单一化学键或间隔体；

-Z是水溶性载体；且

-Z’是水不溶性载体。

优选地，式(VIII)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

在一个实施方案中，式(VIII)的-L¹-未被进一步取代。

在另一个优选的实施方案中，-L¹-包含式(IX)的亚结构

其中

用星号标记的虚线指示通过形成氨基甲酸酯键连接至为CNP部分的-D氮上；

未标记的虚线指示连接至-L¹-的其余部分；且

其中

-L²-是单一化学键或间隔体；

-Z是水溶性载体；且

-Z’是水不溶性载体。

优选地，式(IX)的-L¹-被一个部分-L²-Z或-L²-Z’取代。

在一个实施方案中，式(IX)的-L¹-未被进一步取代。

部分-L¹-可通过-D的任何官能团连接至-D，并且优选地，通过-D的胺官能团连接至-D。这可以是N-末端胺官能团或由赖氨酸侧链提供的胺官能团，即由位置4或10的赖氨酸提供的，当CNP具有SEQ ID NO:1的序列时；由位置7、9、13、14、18和24的赖氨酸提供的，当CNP具有SEQ ID NO:38的序列时；由位置8、10、14、15、19或25的赖氨酸提供的，当CNP具有SEQ ID NO:25的序列时；由位置9、11、15、16、20和26的赖氨酸提供的，当CNP具有SEQ IDNO:24的序列时；和由位置10、12、16、17、21和27的赖氨酸提供的，当CNP部分具有SEQ IDNO:23时。

在一个实施方案中，CNP部分通过CNP部分的N-末端胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:1的序列，CNP部分通过位置4的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:1的序列，CNP部分通过位置10的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:25的序列，CNP部分通过位置8的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:25的序列，CNP部分通过位置10的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:25的序列，CNP部分通过位置14的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:25的序列，CNP部分通过位置15的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:25的序列，CNP部分通过位置19的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:25的序列，CNP部分通过位置25的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过位置9的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过位置11的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过位置15的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过位置16的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过位置20的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过位置26的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

最优选地，CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列，并且通过位置26的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

令人惊讶地发现，与在N-末端的连接或与CNP的非环部分(part)的连接相比，-L¹-连接到CNP的环上显著降低CNP前药对NPR-B的亲和力，该降低的与NPR-B的亲和力又降低心血管副作用的风险，如低血压。

因此，-L¹-优选缀合至所述-D的环部分的氨基酸残基的侧链或所述-D的环部分的主链。甚至更优选地，-L¹-共价和可逆地缀合至所述-D的环部分的氨基酸残基的侧链。

位于-D的环部分的所述氨基酸残基优选为具有官能团的任何氨基酸。

优选地，-L¹-与其缀合的-D的环部分的氨基酸残基包含选自以下的官能团：羧酸、伯胺和仲胺、马来酰亚胺、硫醇、磺酸、碳酸酯、氨基甲酸酯、羟基、醛、酮、肼、异氰酸酯、异硫氰酸酯、磷酸、膦酸、卤代乙酰基、烷基卤、丙烯酰基、芳基氟、羟胺、硫酸酯、二硫化物、乙烯基砜、乙烯基酮、重氮烷烃、环氧乙烷、胍和氮丙啶。最优选地，-L¹-与其缀合的-D的环部分的氨基酸残基包含选自羟基、伯胺和仲胺和胍的官能团。

部分-L¹-可以通过任何类型的联接连接到-D，前提是它是可逆的。优选地，-L¹-通过选自酰胺、酯、氨基甲酸酯、缩醛、缩胺醛、亚胺、肟、腙、二硫化物和酰基胍的联接连接到-D上。甚至更优选地，-L¹-通过选自酰胺、酯、氨基甲酸酯和酰基胍的联接连接到-D。

在一个实施方案中，-L¹-通过酯联接与-D连接。

在另一个实施方案中，-L¹-通过氨基甲酸酯联接与-D连接。

在另一个实施方案中，-L¹-通过酰基胍与-D连接。

在一个优选的实施方案中，-L¹-通过酰胺联接与-D连接。

与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基选自蛋白(proteinogenic)氨基酸残基和非蛋白氨基酸残基。

在一个实施方案中，与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基是非蛋白氨基酸。

在一优选的实施方案中，与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基是蛋白氨基酸。甚至更优选地，所述氨基酸选自组氨酸、赖氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸和精氨酸。甚至更优选地，所述氨基酸选自赖氨酸、天冬氨酸、精氨酸和丝氨酸。甚至更优选地，所述氨基酸选自赖氨酸、精氨酸和丝氨酸。

在一个实施方案中，与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基是组氨酸。应理解，所述组氨酸不存在于SEQ ID NO:96序列中并且它只可能存在于其变体、类似物、直系同源物、同系物和衍生物中。

在一个实施方案中，与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基是色氨酸。应理解，所述色氨酸不存在于SEQ ID NO:96序列中并且它只可能存在于其变体、类似物、直系同源物、同系物和衍生物中。

在一个实施方案中，与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基是苏氨酸。应理解，所述苏氨酸不存在于SEQ ID NO:96序列中并且它只可能存在于其变体、类似物、直系同源物、同系物和衍生物中。

在一个实施方案中，与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基是酪氨酸。应理解，所述酪氨酸不存在于SEQ ID NO:96序列中并且它只可能存在于其变体、类似物、直系同源物、同系物和衍生物中。

在一个实施方案中，与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基是谷氨酸。应理解，所述谷氨酸不存在于SEQ ID NO:96序列中并且它只可能存在于其变体、类似物、直系同源物、同系物和衍生物中。

在一个实施方案中，与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基是赖氨酸。优选地，所述氨基酸是在SEQ ID NO:96的位置4的赖氨酸，其对应于在SEQ ID NO:24的位置26的赖氨酸。

在另一个实施方案中，与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基是天冬氨酸。优选地，所述氨基酸是在SEQ ID NO:96的位置6的天冬氨酸，其对应于在SEQ ID NO:24的位置28的天冬氨酸。

在另一个实施方案中，与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基是精氨酸。优选地，所述氨基酸是在SEQ ID NO:96的位置7的精氨酸，其对应于在SEQ ID NO:24的位置29的精氨酸。

在另一个实施方案中，与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基是丝氨酸。优选地，所述氨基酸是在SEQ ID NO:96的位置10或12的丝氨酸。在一个实施方案中，所述氨基酸是在SEQ ID NO:96的位置10的丝氨酸，其对应于在SEQ ID NO:24的位置32的丝氨酸。在另一个实施方案中，所述氨基酸是在SEQ ID NO:96的位置12的丝氨酸，其对应于在SEQ ID NO:24的位置34的丝氨酸。

在一个优选的实施方案中，与-L¹-缀合的-D的环部分的氨基酸残基是赖氨酸。最优选地，-D具有SEQ ID NO:24的序列，且-L¹-缀合至位置26的赖氨酸。

还令人惊讶地发现CNP序列的长度增加对于NEP稳定性是有益的：CNP-22比CNP-34更易于NEP降解，而CNP-34又比CNP-38更易感。

在本发明的前药中，-L²-是化学键或间隔体部分。

在一个实施方案中，-L²-是化学键。

在另一个实施方案中，-L²-是间隔体部分。

当-L²-不是单一化学键时，-L²-优选选自-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^y1)-、-S(O)₂N(R^y1)-、-S(O)N(R^y1)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^y1)S(O)₂N(R^y1a)-、-S-、-N(R^y1)-、-OC(OR^y1)(R^y1a)-、-N(R^y1)C(O)N(R^y1a)-、-OC(O)N(R^y1)-、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基；其中-T-、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个相同或不同的-R^y2取代，并且其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^y3)-、-S(O)₂N(R^y3)-、-S(O)N(R^y3)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^y3)S(O)₂N(R^y3a)-、-S-、-N(R^y3)-、-OC(OR^y3)(R^y3a)-、-N(R^y3)C(O)N(R^y3a)-和-OC(O)N(R^y3)-；

-R^y1和-R^y1a相互独立地选自-H、-T、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基；其中-T、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个相同或不同的-R^y2取代，并且其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^y4)-、-S(O)₂N(R^y4)-、-S(O)N(R^y4)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^y4)S(O)₂N(R^y4a)-、-S-、-N(R^y4)-、-OC(OR^y4)(R^y4a)-、-N(R^y4)C(O)N(R^y4a)-和-OC(O)N(R^y4)-；

各T独立地选自：苯基、萘基、茚基、茚满基、四氢化萘基、C_3-10环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂二环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；其中各T独立地任选被一个或多个相同或不同的-R^y2取代；

各-R^y2独立地选自：卤素、-CN、氧代(＝O)、-COOR^y5、-OR^y5、-C(O)R^y5、-C(O)N(R^y5R^y5a)、-S(O)₂N(R^y5R^y5a)、-S(O)N(R^y5R^y5a),-S(O)₂R^y5、-S(O)R^y5、-N(R^y5)S(O)₂N(R^y5aR^y5b)、-SR^y5、-N(R^y5R^y5a)、-NO₂、-OC(O)R^y5,-N(R^y5)C(O)R^y5a、-N(R^y5)S(O)₂R^y5a、-N(R^y5)S(O)R^y5a、-N(R^y5)C(O)OR^y5a、-N(R^y5)C(O)N(R^y5aR^y5b)、-OC(O)N(R^y5R^y5a)和C_1-6烷基；其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；且

各-R^y3、-R^y3a、-R^y4、-R^y4a、-R^y5、-R^y5a和-R^y5b独立地选自：-H和C_1-6烷基，其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代。

当-L²-不是单一化学键时，-L²-甚至更优选选自-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^y1)-、-S(O)₂N(R^y1)-、-S(O)N(R^y1)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^y1)S(O)₂N(R^y1a)-、-S-、-N(R^y1)-、-OC(OR^y1)(R^y1a)-、-N(R^y1)C(O)N(R^y1a)-、-OC(O)N(R^y1)-、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基；其中-T-、C_1-20烷基、C_2-20烯基和C_2-20炔基任选被一个或多个相同或不同的-R^y2取代，并且其中C_1-20烷基、C_2-20烯基和C_2-20炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^y3)-、-S(O)₂N(R^y3)-、-S(O)N(R^y3)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^y3)S(O)₂N(R^y3a)-、-S-、-N(R^y3)-、-OC(OR^y3)(R^y3a)-、-N(R^y3)C(O)N(R^y3a)-和-OC(O)N(R^y3)-；

-R^y1和-R^y1a相互独立地选自-H、-T、C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基；其中-T、C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基任选被一个或多个相同或不同的-R^y2取代，并且其中C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^y4)-、-S(O)₂N(R^y4)-、-S(O)N(R^y4)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^y4)S(O)₂N(R^y4a)-、-S-、-N(R^y4)-、-OC(OR^y4)(R^y4a)-、-N(R^y4)C(O)N(R^y4a)-和-OC(O)N(R^y4)-；

-R^y2选自卤素、-CN、氧代(＝O)、-COOR^y5、-OR^y5、-C(O)R^y5、-C(O)N(R^y5R^y5a)、-S(O)₂N(R^y5R^y5a)、-S(O)N(R^y5R^y5a)、-S(O)₂R^y5、-S(O)R^y5、-N(R^y5)S(O)₂N(R^y5aR^y5b)、-SR^y5、-N(R^y5R^y5a)、-NO₂、-OC(O)R^y5、-N(R^y5)C(O)R^y5a、-N(R^y5)S(O)₂R^y5a、-N(R^y5)S(O)R^y5a、-N(R^y5)C(O)OR^y5a、-N(R^y5)C(O)N(R^y5aR^y5b)、-OC(O)N(R^y5R^y5a)和C_1-6烷基；其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；且

各-R^y3、-R^y3a、-R^y4、-R^y4a、-R^y5、-R^y5a和-R^y5b相互独立地选自-H和C_1-6烷基；其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代。

当-L²-不是单一化学键时，-L²-甚至更优选选自-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^y1)-、-S(O)₂N(R^y1)-、-S(O)N(R^y1)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^y1)S(O)₂N(R^y1a)-、-S-、-N(R^y1)-、-OC(OR^y1)(R^y1a)-、-N(R^y1)C(O)N(R^y1a)-、-OC(O)N(R^y1)-、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基；其中-T-、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个相同或不同的-R^y2取代，并且其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^y3)-、-S(O)₂N(R^y3)-、-S(O)N(R^y3)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^y3)S(O)₂N(R^y3a)-、-S-、-N(R^y3)-、-OC(OR^y3)(R^y3a)-、-N(R^y3)C(O)N(R^y3a)-和-OC(O)N(R^y3)-；

-R^y1和-R^y1a独立地选自-H、-T、C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基；

各T独立地选自：苯基、萘基、茚基、茚满基、四氢化萘基、C_3-10环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂二环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；

各-R^y2独立地选自：卤素和C_1-6烷基；且

甚至更优选地，-L²-是C_1-20烷基链，其任选被一个或多个独立选自以下的基团中断：-O-、-T-和-C(O)N(R^y1)-；且该C_1-20烷基链任选被一个或多个独立选自以下的基团取代：-OH、-T和-C(O)N(R^y6R^y6a)；其中-R^y1、-R^y6、-R^y6a独立地选自H和C_1-4烷基，且其中T选自苯基、萘基、茚基、茚满基、四氢化萘基、C_3-10环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂二环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基。

优选地，-L²-具有14g/mol至750g/mol的分子量。

优选地，-L²-包括选自以下的部分：

其中

虚线指示分别连接至-L²-、-L¹-、-Z和/或-Z'的其余部分；且

在一个优选的实施方案中，-L²-具有1至20个原子的链长。

如文中所用，与部分-L²-相关的术语“链长”是指在-L¹-和-Z之间最短连接中存在的-L²-的原子数。

优选地，-L²-具有式(i)结构

其中

用星号标记的虚线指示连接至-L¹-；

未标记的虚线指示连接至-Z或-Z'；

-R¹选自-H、C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基；

n选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18；且

其中式(i)的部分任选被进一步取代。

优选地，式(i)的-R¹选自-H、甲基、乙基、丙基和丁基。甚至更优选地，式(i)的-R¹选自-H、甲基、乙基和丙基。甚至更优选地，式(i)的-R¹选自-H和甲基。最优选地，式(i)的-R¹是甲基。

优选地，式(i)的n选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。甚至更优选地，式(i)的n选自0、1、2、3、4和5。甚至更优选地，式(i)的n选自0、1、2和3。甚至更优选地，式(i)的n选自0和1。最优选地，式(i)的n是0。

在一个优选的实施方案中，-L²-是选自以下的部分：

其中

用星号标记的虚线指示连接至-L¹-；

未标记的虚线指示连接至-Z或-Z'；且

其中部分(ii)、(iii)、(iv)、(v)、(vi)、(vii)、(viii)、(ix)、(x)、(xi)、(xii)、(xiii)、(xiv)、(xv)、(xvi)和(xvii)任选地被进一步取代。

在一个优选的实施方案中，-L²-选自

其中

用星号标记的虚线指示连接至-L¹-；且

未标记的虚线指示连接至-Z或-Z'。

甚至更优选的-L²-选自

其中

用星号标记的虚线指示连接至-L¹-；且

未标记的虚线指示连接至-Z或-Z'。

甚至更优选地，-L²-是

其中

用星号标记的虚线指示连接至-L¹-；且

未标记的虚线指示连接至-Z或-Z'。

在一个优选的实施方案中，部分-L¹-L²-选自

其中

用星号标记的虚线指示连接至-Z或-Z’。

在一甚至更优选的实施方案中，部分-L¹-L²-是

其中

用星号标记的虚线指示连接至-Z或-Z’。

在一最优选的实施方案中，部分-L¹-L²-具有式(IId-ii’)结构

其中

用星号标记的虚线指示连接至-Z或-Z’。

在另一个优选的实施方案中，部分-L¹-L²-选自

其中

用星号标记的虚线指示连接至-Z或-Z’。

在一甚至更优选的实施方案中，部分-L¹-L²-是

其中

用星号标记的虚线指示连接至-Z或-Z’。

在一最优选的实施方案中，部分-L¹-L²-具有式(IId-iia’)结构

其中

用星号标记的虚线指示连接至-Z或-Z’。

在另一个优选的实施方案中，部分-L¹-L²-选自

其中

用星号标记的虚线指示连接至-Z或-Z’。

在一甚至更优选的实施方案中，部分-L¹-L²-是

其中

用星号标记的虚线指示连接至-Z或-Z’。

在一最优选的实施方案中，部分-L¹-L²-具有式(IId-iib’)结构

其中

用星号标记的虚线指示连接至-Z或-Z’。

部分-L²-可以通过替换任何存在的-H连接至-L¹-。

优选地，由式(II)的-R¹、-R^1a、-R²、-R^2a、-R³、-R^3a、-R⁴、-R^4a、-R⁵、-R^5a、-R⁶、-R⁷、-R^7a、-R⁸、-R^8a、-R⁹、-R^9a、-R¹⁰、-R^10a和/或-R¹¹提供的氢中的1至5个优选1个被-L²-替换。优选地，由式(III)的-R¹、-R^1a、-R²、-R^2a、-R³、-R^3a、-R⁴、-R⁵、-R^5a、-R⁶、-R^6a、-R⁷、-R^7a、-R⁸、-R^8a、-R^8b、-R⁹、-R^9a、-R^9b、-R¹⁰、-R^10a、-R^10b、-R¹¹、-R¹²、-R^12a、-R¹³、-R^13a和/或-R^13b提供的氢中的1至5个优选1个被-L²-替换。

优选地，-Z具有5至200kDa的分子量。甚至更优选地，-Z具有8至100kDa，甚至更优选地10至80kDa，甚至更优选地12至60，甚至更优选地15至40的分子量，并且最优选地，-Z具有约20kDa的分子量。在另一同样优选的实施方案中，-Z具有约40kDa的分子量。

载体-Z包含C_8-24烷基或聚合物。优选地，-Z包含聚合物，优选选自以下的聚合物：2-甲基丙烯酰基-氧基乙基磷酰胆碱、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰氨基胺)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(天冬酰胺)、聚(丁酸)、聚(乙醇酸)、聚对苯二甲酸丁二酯、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸乙酯)、聚(乙基

唑啉)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯酸羟基乙基酯)、聚(羟基乙基-

唑啉)、聚(羟基甲基丙烯酸酯)、聚(羟基丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟基丙基酯)、聚(羟基丙基

唑啉)、聚(亚氨基碳酸酯)、聚(乳酸)、聚乳酸-乙醇酸共聚物、聚(甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(甲基

唑啉)、聚(有机膦腈)、聚(原酸酯)、聚(

唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯基醇)、聚(乙烯基胺)、聚(乙烯基甲基醚)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、硅酮、纤维素、羧甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、壳质、壳聚糖、葡聚糖、糊精、明胶、透明质酸和衍生物、功能化的透明质酸、甘露聚糖、果胶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖(rhamnogalacturonan)、淀粉、羟基烷基淀粉、羟基乙基淀粉和其他基于碳水化合物的聚合物、木聚糖及其共聚物。

在一个实施方案中，所述水溶性载体-Z包含蛋白质。优选的蛋白质选自US 2012/0035101 A1中描述的绒毛膜促性腺激素的羧基末端肽，其通过引用并入本文；白蛋白；如WO2011123813 A2中所述的XTEN序列，其通过引用并入本文；如WO 2011/144756 A1中所述的脯氨酸/丙氨酸随机卷曲序列，其通过引用并入本文；如WO 2008/155134 A1和WO 2013/024049 A1中所述的脯氨酸/丙氨酸/丝氨酸随机卷曲序列，其通过引用并入本文；和Fc融合蛋白。

在另一个优选的实施方案中，-Z包含脂肪酸衍生物。优选的脂肪酸衍生物是WO2005/027978 A2和WO 2014/060512 A1中公开的那些，其通过引用并入本文。

在另一个优选的实施方案中，-Z是基于透明质酸的聚合物。

在一个实施方案中，-Z是WO 2012/02047 A1中公开的载体，其通过引用并入本文。

在另一个实施方案中，-Z是WO 2013/024048 A1中公开的载体，其通过引用并入本文。

在另一个优选的实施方案中，-Z是基于PEG的聚合物。甚至更优选地，-Z是支链或多臂的基于PEG的聚合物。最优选地，-Z是多臂的基于PEG的聚合物。甚至更优选地，-Z是多臂的基于PEG的聚合物，其具有至少4个基于PEG的臂。

优选地，所述支链或多臂的基于PEG的聚合物-Z，优选多臂的基于PEG的聚合物-Z连接至多个部分-L²-L¹-D,其中每个部分-L²-L¹-D优选连接至支链或臂的末端，优选至臂的末端。优选地，所述支链或多臂的基于PEG的聚合物-Z，优选多臂的基于PEG的聚合物-Z连接至2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16个部分-L²-L¹-D。甚至更优选地，所述支链或多臂的基于PEG的聚合物-Z，优选多臂的基于PEG的聚合物-Z连接至2、3、4、6或8个部分-L²-L¹-D。甚至更优选地，所述支链或多臂的基于PEG的聚合物-Z，优选多臂的基于PEG的聚合物-Z连接至2、4或6个部分-L²-L¹-D，甚至更优选地，所述支链或多臂的基于PEG的聚合物-Z，优选多臂的基于PEG的聚合物-Z连接至4或6个部分-L²-L¹-D，并且最优选地，所述支链或多臂的基于PEG的聚合物-Z，优选多臂的基于PEG的聚合物-Z连接至4个部分-L²-L¹-D。

如果多于一个部分-L²-L¹-D连接到一个部分-Z是有利的，因为这确保足够高的药物负载，其允许以小体积提供药学有效剂量的CNP，这又增加了患者的便利性。

优选的水溶性基于PEG的载体-Z是多臂PEG衍生物，例如在JenKem Technology,USA的产品列表(可从http://www.jenkemusa.com/Pages/PEGProducts.aspx，Dec 18,2014下载获得)中详细描述的，例如4-臂-PEG衍生物，特别是包含季戊四醇核心的4-臂-PEG，包含六甘油核心的8-臂-PEG衍生物，以及含有三季戊四醇核心的8-臂-PEG衍生物。更优选地，水溶性基于PEG的载体-Z包含选自以下的部分：

包含季戊四醇核心的4-臂PEG胺：

其中n范围为20至500；

包含六甘油核心的8-臂PEG胺：

其中n范围为20至500；且

R＝六甘油或三季戊四醇核心结构；且

包含山梨醇或二季戊四醇核心的6-臂PEG胺:

其中n范围为20至500；且

R＝包含山梨醇或二季戊四醇核心；

并且其中虚线指示连接至CNP前药的其余部分。

式(Ia)的x是选自下列的整数：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15和16。优选地，x是选自下列的整数：2、3、4、6和8。更优选地，x是选自下列的整数：2、4和6。甚至更优选地，x是选自下列的整数：4和6，且最优选地，x是4。

式(Ib)的y是选自下列的整数：1、2、3、4或5。优选地，y是选自下列的整数：1、2或3。在一个优选的实施方案中，y是1。在一同样优选的实施方案中，y是2。

在另一个优选的实施方案中，一个部分-L²-L¹-D连接至一个部分-Z。

在一特别优选的实施方案中，-Z是支链聚合物。在一个实施方案中，-Z是具有一个、两个、三个、四个、五个或六个分支点的支链聚合物。优选地，-Z是具有一个、两个或三个分支点的支链聚合物。在一个实施方案中，-Z是具有一个分支点的支链聚合物。在另一个实施方案中，-Z是具有两个分支点的支链聚合物。在另一个实施方案中，-Z是具有三个分支点的支链聚合物。

分支点优选选自-N<、-CH<和>C<。

优选地，所述支链部分-Z是基于PEG的。

优选地，所述支链部分-Z具有至少10kDa的分子量。

在一个实施方案中，所述支链部分-Z具有10kDa至500kDa的分子量并且包括端点，更优选10kDa至250Da并包括端点，甚至更优选10kDa至150kDa并包括端点，甚至更优选12kDa至100kDa并包括端点，并且最优选15kDa至80kDa并包括端点。

优选地，所述支链部分-Z具有10kDa至80kDa的分子量并且包括端点。在一个实施方案中，分子量是约10kDa。在另一个实施方案中，所述支链部分-Z的分子量是约20kDa。在另一个实施方案中，所述支链部分-Z的分子量是约30kDa。在另一个实施方案中，所述支链部分-Z的分子量是约40kDa。在另一个实施方案中，所述支链部分-Z的分子量是约50kDa。在另一个实施方案中，所述支链部分-Z的分子量是约60kDa。在另一个实施方案中，所述支链部分-Z的分子量是约70kDa。在另一个实施方案中，所述支链部分-Z的分子量是约80kDa。最优选地，所述支链部分-Z具有约40kDa的分子量。

申请人惊奇地发现，部分-L¹-L²-Z的N-末端连接在增加NEP稳定性方面比在内部部位连接显著更有效，并且关于增加NEP-稳定性的最低效连接部位在CNP部分的环部分。然而，申请人惊奇地发现，通过使用具有至少10kDa、例如至少12kDa、例如至少15kDa、例如至少18kDa、例如至少20kDa、例如至少24kDa、例如至少25kDa、例如至少27kDa、例如至少30kDa的支链部分-Z可以补偿关于提高NEP稳定性的环连接的这一缺点。优选地，所述支链部分-Z具有不超过500kDa，优选不超过250kDa，优选不超过200Da，优选不超过150kDa并且最优选不超过100kDa的分子量。最优选地，所述支链部分-Z具有约40kDa的分子量。因此，在CNP部分的环部分使用所述支链部分-Z不仅导致增加的NEP稳定性，而且使增加的NEP-稳定性和与连接在环上相关的降低的NPR-B结合组合在一起。

优选地，-Z或-Z'包含部分

在一个实施方案中，-Z包含式(a)部分

其中

虚线指示连接至-L²-或至-Z的其余部分；

BP^a是选自以下的分支点：-N<、-CR<和>C<；

-R选自-H和C_1-6烷基；

如果BP^a是-N<或-CR<，a是0，且如果BP^a是>C<，n是1；

-S^a-、-S^a’-、-S^a”-和-S^a”’-相互独立地是化学键或选自C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基；其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个相同或不同的-R¹取代，并且其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R²)-、-S(O)₂N(R²)-、-S(O)N(R²)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R²)S(O)₂N(R^2a)-、-S-、-N(R²)-、-OC(OR²)(R^2a)-、-N(R²)C(O)N(R^2a)-和-OC(O)N(R²)-；

各-T-独立地选自：苯基、萘基、茚基、茚满基、四氢化萘基、C_3-10环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂二环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；其中各-T-独立地任选被一个或多个相同或不同的-R¹取代；

各-R¹独立地选自：卤素、-CN、氧代(＝O)、-COOR³、-OR³、-C(O)R³、-C(O)N(R³R^3a)、-S(O)₂N(R³R^3a)、-S(O)N(R³R^3a)、-S(O)₂R³、-S(O)R³、-N(R³)S(O)₂N(R^3aR^3b)、-SR³、-N(R³R^3a)、-NO₂、-OC(O)R³、-N(R³)C(O)R^3a、-N(R³)S(O)₂R^3a、-N(R³)S(O)R^3a、-N(R³)C(O)OR^3a、-N(R³)C(O)N(R^3aR^3b)、-OC(O)N(R³R^3a)和C_1-6烷基；其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；

各-R²、-R^2a、-R³、-R^3a和-R^3b独立地选自：-H和C_1-6烷基，其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；且

-P^a’、-P^a”和-P^a”’独立地是聚合物部分。

在一个实施方案中，式(a)的BP^a是-N<。

在另一个实施方案中，式(a)的BP^a是-CR<。优选地，-R是-H。因此，式(a)的a优选是0。

在另一个实施方案中，式(a)的BP^a是>C<。

在一个实施方案中，式(a)的-S^a-是化学键。

在另一个实施方案中，式(a)的-S^a-选自C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基，该C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基任选被选自以下的一个或多个化学基团中断：-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R⁴)-、-S(O)₂N(R⁴)-、-S(O)N(R⁴)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R⁴)S(O)₂N(R^4a)-、-S-、-N(R⁴)-、-OC(OR⁴)(R^4a)-、-N(R⁴)C(O)N(R^4a)-和-OC(O)N(R⁴)-；其中-R⁴和-R^4a独立地选自-H、甲基、乙基、丙基和丁基。优选地，式(a)的-S^a-选自甲基、乙基、丙基、丁基，其任选被选自以下的一个或多个化学基团中断：-O-、-C(O)-和-C(O)N(R⁴)-。

在一个实施方案中，式(a)的-S^a’-是化学键。

在另一个实施方案中，式(a)的-S^a’-选自C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基，该C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基任选被选自以下的一个或多个化学基团中断：-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R⁴)-、-S(O)₂N(R⁴)-、-S(O)N(R⁴)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R⁴)S(O)₂N(R^4a)-、-S-、-N(R⁴)-、-OC(OR⁴)(R^4a)-、-N(R⁴)C(O)N(R^4a)-和-OC(O)N(R⁴)-；其中-R⁴和-R^4a独立地选自-H、甲基、乙基、丙基和丁基。优选地，式(a)的-S^a’-选自甲基、乙基、丙基、丁基，其任选被选自以下的一个或多个化学基团中断：-O-、-C(O)-和-C(O)N(R⁴)-。

在一个实施方案中，式(a)的-S^a”-是化学键。

在另一个实施方案中，式(a)的-S^a”-选自C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基，该C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基任选被选自以下的一个或多个化学基团中断：-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R⁴)-、-S(O)₂N(R⁴)-、-S(O)N(R⁴)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R⁴)S(O)₂N(R^4a)-、-S-、-N(R⁴)-、-OC(OR⁴)(R^4a)-、-N(R⁴)C(O)N(R^4a)-和-OC(O)N(R⁴)-；其中-R⁴和-R^4a独立地选自-H、甲基、乙基、丙基和丁基。优选地，式(a)的-S^a”-选自甲基、乙基、丙基、丁基，其任选被选自以下的一个或多个化学基团中断：-O-、-C(O)-和-C(O)N(R⁴)-。

在一个实施方案中，式(a)的-S^a”’-是化学键。

在另一个实施方案中，式(a)的-S^a”’-选自C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基，该C_1-10烷基、C_2-10烯基和C_2-10炔基任选被选自以下的一个或多个化学基团中断：-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R⁴)-、-S(O)₂N(R⁴)-、-S(O)N(R⁴)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R⁴)S(O)₂N(R^4a)-、-S-、-N(R⁴)-、-OC(OR⁴)(R^4a)-、-N(R⁴)C(O)N(R^4a)-和-OC(O)N(R⁴)-；其中-R⁴和-R^4a独立地选自-H、甲基、乙基、丙基和丁基。优选地，式(a)的-S^a”’-选自甲基、乙基、丙基、丁基，其任选被选自以下的一个或多个化学基团中断：-O-、-C(O)-和-C(O)N(R⁴)-。

优选地，式(a)的-P^a’、-P^a”和-P^a”’独立地包含选自以下的聚合物：2-甲基丙烯酰基-氧基乙基磷酰胆碱、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰氨基胺)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(天冬酰胺)、聚(丁酸)、聚(乙醇酸)、聚对苯二甲酸丁二酯、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸乙酯)、聚(乙基

唑啉)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯酸羟基乙基酯)、聚(羟基乙基-

唑啉)、聚(有机膦腈)、聚(原酸酯)、聚(

唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯基醇)、聚(乙烯基胺)、聚(乙烯基甲基醚)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、硅酮、纤维素、羧甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、壳质、壳聚糖、葡聚糖、糊精、明胶、透明质酸和衍生物、功能化的透明质酸、甘露聚糖、果胶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖、淀粉、羟基烷基淀粉、羟基乙基淀粉和其他基于碳水化合物的聚合物、木聚糖及其共聚物。

更优选地，式(a)的-P^a’、-P^a”和-P^a”’独立地包含基于PEG的部分。甚至更优选地，式(a)的-P^a’、-P^a”和-P^a”’独立地包含基于PEG的部分，其包含至少20％PEG，甚至更优选至少30％，甚至更优选至少40％PEG，甚至更优选至少50％PEG，甚至更优选至少60％PEG，甚至更优选至少70％PEG，甚至更优选至少80％PEG和最优选至少90％PEG。

优选地，式(a)的-P^a’、-P^a”和-P^a”’独立地具有5kDa至50kDa的分子量并包括端点，更优选地具有5kDa至40kDa的分子量并包括端点，甚至更优选7.5kDa至35kDa的分子量并包括端点，甚至更优选7.5至30kDa的分子量，甚至更优选10至30kDa的分子量并包括端点。

在一个实施方案中，式(a)的-P^a’、-P^a”和-P^a”’具有约5kDa的分子量。

在另一个实施方案中，式(a)的-P^a’、-P^a”和-P^a”’具有约7.5kDa的分子量。

在另一个实施方案中，式(a)的-P^a’、-P^a”和-P^a”’具有约10kDa的分子量。

在另一个实施方案中，式(a)的-P^a’、-P^a”和-P^a”’具有约12.5kDa的分子量。

在另一个实施方案中，式(a)的-P^a’、-P^a”和-P^a”’具有约15kDa的分子量。

在另一个实施方案中，式(a)的-P^a’、-P^a”和-P^a”’具有约20kDa的分子量。

在一个实施方案中，-Z包含一个式(a)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含两个式(a)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含三个式(a)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含四个式(a)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含五个式(a)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含六个式(a)的部分。

在一个优选的实施方案中，-Z包含两个式(a)的部分。

在一个优选的实施方案中，-Z包含式(b)的部分

其中

虚线指示连接至-L²-或至-Z的其余部分；

b1选自0、1、2、3、4、5、6、7和8；

b2选自1、2、3、4、5、6、7和8；

b3是150至1000的整数并包括端点；优选150至500的整数并包括端点；且最优选200至460的整数并包括端点；且

b4是150至1000的整数并包括端点；优选150至500的整数并包括端点；且最优选200至460的整数并包括端点。

优选地，式(b)的b3和b4是相同的整数。

在一个优选的实施方案中，b3和b4都是范围200至250中的整数，并且最优选，式(b)的b3和b4是约225。

在另一个优选的实施方案中，b3和b4都是范围400至500中的整数，并且最优选地，式(b)的b3和b4是约450。

优选地，式(b)的b1选自0、1、2、3和4。更优选地，式(b)的b1选自1、2和3。最优选地，式(b)的b1是2。

优选地，式(b)的b2选自1、2、3、4和5。更优选地，式(b)的b2选自2、3和4。最优选地，式(b)的b2是3。

在一个特别优选的实施方案中，式(b)的b1是2，式(b)的b2是3，且b3和b4都是约450。

在另一特别优选的实施方案中，式(b)的b1是2，式(b)的b2是3，且b3和b4都是约225。

在一个实施方案中，-Z包含一个式(b)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含两个式(b)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含三个式(b)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含四个式(b)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含五个式(b)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含六个式(b)的部分。

在一个优选的实施方案中，-Z包含两个式(b)的部分。

在一甚至更优选的实施方案中，-Z包含式(c)的部分

其中

虚线指示连接至-L²-或至-Z的其余部分；

c1和c2独立地是150至500的整数并包括端点；优选200至460的整数并包括端点。

优选地，式(c)的c1和c2是相同的整数。

在一个优选的实施方案中，式(c)的c1和c2是200至250并包括端点，并且最优选地，是约225。在另一个优选的实施方案中，式(c)的c1和c2是400至500并包括端点，并且最优选地，是约450。

在一个优选的实施方案中，部分-Z是包含至少10％PEG的基于PEG的支链聚合物，具有一个分支点和两个基于PEG的聚合物臂，且具有约40kDa的分子量。因此，两个基于PEG的聚合物臂的每一个具有约20kDa的分子量。优选地，分支点是-CH<。

在一个实施方案中，-Z包含一个式(c)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含两个式(c)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含三个式(c)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含四个式(c)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含五个式(c)的部分。

在另一个实施方案中，-Z包含六个式(c)的部分。

在一个优选的实施方案中，-Z包含两个式(c)的部分。

在一个优选的实施方案中，部分-Z具有式(d)结构

其中

虚线指示连接至-L²-；

-Z^b-选自C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基；其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个相同或不同的-R¹取代，并且其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R²)-、-S(O)₂N(R²)-、-S(O)N(R²)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R²)S(O)₂N(R^2a)-、-S-、-N(R²)-、-OC(OR²)(R^2a)-、-N(R²)C(O)N(R^2a)-和-OC(O)N(R²)-；

各–T-独立地选自：苯基、萘基、茚基、茚满基、四氢化萘基、C_3-10环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂二环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；其中各-T-独立地任选被一个或多个相同或不同的-R¹取代；

各-R²、-R^2a、-R³、-R^3a和-R^3b独立地选自：-H和C_1-6烷基，其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；

且

-Z^a是

其中

BP^a、-S^a-、-S^a’-、-S^a”-、-S^a”’-、-P^a’、-P^a”、-P^a”’和a如对式(a)所定义那样使用。

式(d)的BP^a、-S^a-、-S^a’-、-S^a”-、-S^a”’-、-P^a’、-P^a”、-P^a”’的优选的实施方案如上面对式(a)所定义。

在一甚至更优选的实施方案中，部分-Z具有式(e)的结构

其中

虚线指示连接至-L²-；

e选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14和15；且

-Z^a是

其中

b1选自0、1、2、3、4、5、6、7和8；

b2选自1、2、3、4、5、6、7和8；

式(e)的b1、b2、b3和b4的优选的实施方案如上面对式(b)所定义。

在一个实施方案中，式(e)的e是1。在另一个实施方案中，式(e)的e是2。在另一个实施方案中，式(e)的e是3。在另一个实施方案中，式(e)的e是4。在另一个实施方案中，式(e)的e是5。在另一个实施方案中，式(e)的e是6。在另一个实施方案中，式(e)的e是7。在另一个实施方案中，式(e)的e是8。在另一个实施方案中，式(e)的e是9。在另一个实施方案中，式(e)的e是10。在另一个实施方案中，式(e)的e是11。在另一个实施方案中，式(e)的e是12。在另一个实施方案中，式(e)的e是13。在另一个实施方案中，式(e)的e是14。在另一个实施方案中，式(e)的e是15。

优选地，式(e)的e选自2、3、4、5、6、7、8和9。甚至更优选地，式(e)的e选自3、4、5和6。最优选地，式(e)的e是5。

优选地，式(e)的e是5，式(e)的b1是2，式(e)的b2是3，且式(e)的b3和b4都是约450。

在另一个优选的实施方案中，部分-Z是包含至少10％PEG的基于PEG的支链聚合物，其具有三个分支点和4个基于PEG的聚合物臂，并且具有约40kDa的分子量。因此，该四个基于PEG的聚合物臂的每一个具有约10kDa的分子量。优选地，三个分支点的每一个是-CH<。

在一个优选的实施方案中，部分-Z具有式(f)结构

其中

虚线指示连接至-L²-；

BP^f是选自以下的分支点：-N<、-CR<和>C<；

-R选自-H和C_1-6烷基；

如果BP^f是-N<或-CR<，f是0，且如果BP^f是>C<，f是1；

-S^f-、-S^f’-、-S^f”-和-S^f”’-独立地是化学键或独立地选自C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基；其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个相同或不同的-R¹取代并且其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R²)-、-S(O)₂N(R²)-、-S(O)N(R²)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R²)S(O)₂N(R^2a)-、-S-、-N(R²)-、-OC(OR²)(R^2a)-、-N(R²)C(O)N(R^2a)-和-OC(O)N(R²)-；

各-T-独立地选自：苯基、萘基、茚基、茚满基、四氢化萘基、C_3-10环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂二环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；其中各–T-独立地任选被一个或多个相同或不同的-R¹取代；

各R¹独立地选自：卤素、-CN、氧代(＝O)、-COOR³、-OR³、-C(O)R³、-C(O)N(R³R^3a)、-S(O)₂N(R³R^3a)、-S(O)N(R³R^3a)、-S(O)₂R³、-S(O)R³、-N(R³)S(O)₂N(R^3aR^3b)、-SR³、-N(R³R^3a)、-NO₂、-OC(O)R³、-N(R³)C(O)R^3a、-N(R³)S(O)₂R^3a、-N(R³)S(O)R^3a、-N(R³)C(O)OR^3a、-N(R³)C(O)N(R^3aR^3b)、-OC(O)N(R³R^3a)和C_1-6烷基；其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；

且

-Z^a’、-Z^a‘’和-Z^a”’独立地是

其中

式(f)的BP^a、-S^a-、-S^a’-、-S^a”-、-S^a”’-、-P^a’、-P^a”和-P^a”’的优选的实施方案如上面对式(a)所定义。

优选地，式(f)的BP²是-CR<，且r是0。优选地，-R是-H。

优选地，式(f)的-S^f-是化学键。

优选地，式(f)的-Z^a’、-Z^a‘’和-Z^a”’具有相同的结构。优选地，式(f)的-Z^a’、--Z^a‘’和-Z^a”’是式(b)的。

优选地，式(f)的-S^f-是化学键，式(f)的BP^a是-CR<，其中-R为-H。甚至更优选地，式(f)的-S^f-是化学键，式(f)的BP^a是-CR<，其中-R为-H，且式(f)的-Z^a’、-Z^a‘’和-Z^a”’是式(b)的。

甚至更优选地，-Z是式(g)的

其中

虚线指示连接至-L²-；

-S^g-、-S^g’-和–S^g”-独立地选自C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基；其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个相同或不同的-R¹取代并且其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R²)-、-S(O)₂N(R²)-、-S(O)N(R²)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R²)S(O)₂N(R^2a)-、-S-、-N(R²)-、-OC(OR²)(R^2a)-、-N(R²)C(O)N(R^2a)-和-OC(O)N(R²)-；

且

-Z^a和-Z^a‘独立地是

其中

式(g)的BP^a、-S^a-、-S^a’-、-S^a”-、-S^a”’-、-P^a’、-P^a”和-P^a”’的优选的实施方案如上面对式(a)所定义。

优选地，式(g)的-S^g-选自C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基，其任选被一个或多个相同或不同-R¹的取代

其中

-R¹选自卤素、氧代(＝O)、-COOR³、-OR³、-C(O)R³、-C(O)N(R³R^3a)、-S(O)₂N(R³R^3a)、-S(O)N(R³R^3a)、-S(O)₂R³、-S(O)R³、-N(R³)S(O)₂N(R^3aR^3b)、-SR³、-N(R³R^3a)、-NO₂、-OC(O)R³、-N(R³)C(O)R^3a、-N(R³)S(O)₂R^3a、-N(R³)S(O)R^3a、-N(R³)C(O)OR^3a、-N(R³)C(O)N(R^3aR^3b)、-OC(O)N(R³R^3a)和C_1-6烷基；其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；且

-R³、-R^3a和-R^3b独立地选自-H、甲基、乙基、丙基和丁基。

甚至更优选地，式(g)的-S^g-选自C_1-6烷基。

优选地，式(g)的-S^g’-选自C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基，其任选被一个或多个相同或不同-R¹的取代，

其中

-R³、-R^3a和-R^3b独立地选自-H、甲基、乙基、丙基和丁基。

甚至更优选地，式(g)的-S^g’-选自C_1-6烷基。

优选地，式(g)的-S^g”-选自C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基，其任选被一个或多个相同或不同-R¹的取代，

其中

-R³、-R^3a和-R^3b独立地选自-H、甲基、乙基、丙基和丁基。

甚至更优选地，式(g)的-S^g”-选自C_1-6烷基。

优选地，式(g)的-Z^a和-Z^a‘具有相同的结构。优选地，式(g)的-Z^a和-Z^a‘是式(b)的。

甚至更优选地，-Z是式(h)的

其中

虚线指示连接至-L²-；且

各-Z^c是部分

其中

各c1独立地是约200至250范围中的整数。

优选地，式(h)的两个c1是相同的。

优选地，式(h)的两个c1是约225。

在一甚至更优选的实施方案中，部分-Z是式(h-i)的

其中

虚线指示连接至-L²-；且

各-Z^c是部分

各c1独立地是200至250范围中的整数。

优选地，式(h-i)的两个c1是相同的。

优选地，式(h-i)的两个c1是约225。

优选地，本发明的CNP前药是式(Ia)的。

优选地，本发明的CNP前药是式(Ia)的，其中x＝1。

在一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药是式(IIe)的

其中

用星号标记的虚线指示连接至部分

其中

各c1独立地是400至500范围中的整数。

优选地，式(IIe)的c1是约450。

在一同样优选的实施方案中，本发明的CNP前药是式(IIe-i)的

其中

用星号标记的虚线指示连接至部分

其中

各c1独立地是400至500范围中的整数。

优选地，式(IIe-i)的c1是约450。

在另一同样优选的实施方案中，本发明的CNP前药是式(IIe-ii)的

其中

用星号标记的虚线指示连接至部分

其中

各c1独立地是400至500范围中的整数。

优选地，式(IIe-ii)的c1是约450。

在一个实施方案中，式(IIe)、(IIe-i)和(IIe-ii)的CNP前药的CNP部分具有SEQID NO:25的序列。

在另一个实施方案中，式(IIe)、(IIe-i)和(IIe-ii)的CNP前药的CNP部分具有SEQID NO:30的序列。

在一个优选的实施方案中，式(IIe)、(IIe-i)和(IIe-ii)的CNP前药的CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列。

在一个实施方案中，CNP部分通过CNP的N-末端胺官能团的氮连接至式(IIe)、(IIe-i)和(IIe-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在一个优选的实施方案中，CNP部分通过CNP的赖氨酸侧链的胺官能团提供的氮连接至式(IIe)、(IIe-i)和(IIe-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:24，该赖氨酸侧链不是在位置22和38的半胱氨酸残基间的二硫化物桥形成的环的一部分(part)。

因此，在一个实施方案中，如果CNP具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过在位置9的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至式(IIe)、(IIe-i)和(IIe-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过在位置11的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至式(IIe)、(IIe-i)和(IIe-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过在位置15的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至式(IIe)、(IIe-i)和(IIe-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过在位置16的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至式(IIe)、(IIe-i)和(IIe-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过在位置20的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至式(IIe)、(IIe-i)和(IIe-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在一个优选的实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:24，用于连接至式(IIe)、(IIe-i)和(IIe-ii)的CNP前药的其余部分的赖氨酸侧链是由在位置22和38的半胱氨酸残基间的二硫化物桥形成的环的一部分。

因此，在一个优选的实施方案中，如果CNP具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过在位置26的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至式(IIe)、(IIe-i)和(IIe-ii)的CNP前药中的-L¹-。

应当理解，上述半胱氨酸和赖氨酸的位置根据CNP部分的长度而变化，并且本领域技术人员将容易地在更长或更短版本的CNP部分中识别相应的半胱氨酸和赖氨酸，也可以理解，例如，一些赖氨酸可能不存在于较短的CNP部分中。还应理解，作为例如定点诱变的结果，在CNP部分(moiety)的非环形成部分(part)和/或环形成部分(part)中可能存在更多的赖氨酸残基。

在一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIe)，其中c1是约450，CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列且通过在位置26的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIe-i)，其中c1是约450，CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列且通过在位置26的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIe-ii)，其中c1是约450，CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列且通过在位置26的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

因此，在一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIe’)

其中

未标记的虚线指示通过形成酰胺键连接至SEQ ID NO:24的CNP部分的在位置26的赖氨酸的侧链提供的氮；且

用星号标记的虚线指示连接至部分

其中

各c1独立地是400至500范围中的整数。

优选地，式(IIe')的各c1是约450。

在另一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIe-i’)

其中

用星号标记的虚线指示连接至部分

其中

各c1独立地是400至500范围中的整数。

优选地，式(IIe-i')的各c1是约450。

在另一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIe-ii’)

其中

用星号标记的虚线指示连接至部分

其中

各c1独立地是400至500范围中的整数。

优选地，式(IIe-ii')的各c1是约450。

在另一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIf)

其中

用星号标记的虚线指示连接至具有下面结构的-Z

其中

各-Z^a是

其中

各c1独立地是200至250范围中的整数；优选地各n是约225。优选地，式(IIf)的各c1是约225。

在另一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIf-i)

其中

用星号标记的虚线指示连接至具有下面结构的-Z

其中

各-Z^a是

其中

各c1独立地是200至250范围中的整数；优选地各n是约225。优选地，式(IIf-i)的各c1是约225。

在另一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIf-ii)

其中

用星号标记的虚线指示连接至具有下面结构的-Z

其中

各-Z^a是

其中

各c1独立地是200至250范围中的整数；优选地各n是约225。优选地，式(IIf-ii)的各c1是约225。

在一个实施方案中，式(IIf)、(IIf-i)和(IIf-ii)的CNP前药的CNP部分具有SEQID NO:25的序列。

在一个优选的实施方案中，式(IIf)、(IIf-i)和(IIf-ii)的CNP前药的CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列。

在一个实施方案中，CNP部分通过CNP的N-末端胺官能团的氮连接至式(IIf)、(IIf-i)和(IIf-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在一个优选的实施方案中，CNP部分通过CNP的赖氨酸侧链的胺官能团提供的氮连接至式(IIf)、(IIf-i)和(IIf-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在一个实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:24，该赖氨酸侧链不是由在位置22和38的半胱氨酸残基间的二硫化物桥形成的环的一部分。

因此，在一个实施方案中，如果CNP具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过在位置9的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至式(IIf)、(IIf-i)和(IIf-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过在位置11的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至式(IIf)、(IIf-i)和(IIf-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过在位置15的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至式(IIf)、(IIf-i)和(IIf-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过在位置16的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至式(IIf)、(IIf-i)和(IIf-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在另一个实施方案中，如果CNP具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过在位置20的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至式(IIf)、(IIf-i)和(IIf-ii)的CNP前药中的-L¹-。

在一个优选的实施方案中，如果CNP部分具有SEQ ID NO:24，用于连接至式(IIf)、(IIf-i)和(IIf-ii)的CNP前药的其余部分的赖氨酸侧链是由在位置22和38的半胱氨酸残基间的二硫化物桥形成的环的一部分。

因此，在一个优选的实施方案中，如果CNP具有SEQ ID NO:24的序列，CNP部分通过在位置26的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至式(IIf)、(IIf-i)和(IIf-ii)的CNP前药中的-L¹-。

应当理解，上述半胱氨酸和赖氨酸的位置根据CNP部分的长度而变化，并且本领域技术人员将容易地在更长或更短版本的CNP部分中识别相应的半胱氨酸和赖氨酸，也可以理解，例如，一些赖氨酸可能不存在于较短的CNP部分中。还应理解，作为例如定点诱变的结果，在CNP部分的非环形成部分和/或环形成部分中可能存在更多的赖氨酸残基。

在一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIf)，其中c1是约225，CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列且通过在位置26的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIf-i)，其中c1是约225，CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列且通过在位置26的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIf-ii)，其中c1是约225，CNP部分具有SEQ ID NO:24的序列且通过在位置26的赖氨酸的侧链提供的胺官能团连接至-L¹-。

在另一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIf’)

其中

用星号标记的虚线指示连接至具有下面结构的-Z

其中

各Z^a是

其中

各c1独立地是200至250范围中的整数。

优选地，式(IIf’)的各c1是约225。

在另一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIf-i’)

其中

用星号标记的虚线指示连接至具有下面结构的-Z

其中

各Z^a是

其中

各c1独立地是200至250范围中的整数。

优选地，式(IIf-i’)的各c1是约225。

在另一个优选的实施方案中，本发明的CNP前药具有式(IIf-ii’)

其中

用星号标记的虚线指示连接至具有下面结构的-Z

其中

各Z^a是

其中

各c1独立地是200至250范围中的整数。

优选地，式(IIf-ii’)的各c1是约225。

总之，发现-L¹-通过位于CNP的环部分中的氨基酸的侧链可逆连接至CNP部分、具有至少10kDa的分子量的支链部分-Z的应用和大于CNP-22的CNP部分的应用的组合导致具有意想不到的长的体内半衰期的CNP前药。

载体-Z’是水不溶性聚合物，甚至更优选水凝胶。优选地，所述水凝胶包含选自以下的聚合物：2-甲基丙烯酰基-氧基乙基磷酰胆碱、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰氨基胺)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(天冬酰胺)、聚(丁酸)、聚(乙醇酸)、聚对苯二甲酸丁二酯、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸乙酯)、聚(乙基

唑啉)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯酸羟基乙基酯)、聚(羟基乙基-

唑啉)、聚(有机膦腈)、聚(原酸酯)、聚(

如果载体-Z’是水凝胶，优选地，水凝胶包含PEG或透明质酸。最优选地，所述水凝胶包含PEG。

甚至更优选地，载体-Z’是WO 2006/003014 A2、WO 2011/012715 A1或WO 2014/056926 A1中所述的水凝胶，将其以全部内容在此引入作为参考。

在另一个实施方案中，-Z'是通过聚合物链的物理聚集形成的聚合物网络，该物理聚集优选由氢键、结晶、螺旋形成或络合引起。在一个实施方案中，这种聚合物网络是热凝胶聚合物。

优选地，本发明的CNP前药的总质量为至少10kDa、例如至少12kDa、例如至少15kDa、例如至少20kDa或例如至少30kDa。优选地，本发明的CNP前药的总质量为至多250kDa、例如至多200kDa、180kDa、150kDa或100kDa。

在一优选的实施方案中，本发明的CNP前药的残留活性小于10％，更优选小于1％，甚至更优选小于0.1％，甚至更优选小于0.01％，甚至更优选小于0.001％，最优选小于0.0001％。

如本文所用，术语“残留活性”是指相对于相应游离CNP显示的活性，具有与载体结合的CNP部分的本发明的CNP前体药物显示的活性。在这种语境下，术语“活性”是指NPR-B结合。应当理解，测量本发明的CNP前药的残留活性需要时间，在此期间本发明CNP前药将释放出一定量的CNP，并且这种释放的CNP将扭曲对于CNP前药的测定结果。因此，被接受的做法是用其中药物部分(在该案例中是CNP)不可逆地即稳定地结合到载体上的缀合物测试前药的残留活性，其尽可能模拟用于测量残留活性的CNP前药的结构。

WO 2010/135541 A1，第143/144页实施例4中描述了用于测量CNP活性和本发明的CNP前体药物(优选稳定类似物形式的)的残留活性的合适的测定法。

本发明的另一方面是包含至少一种本发明的CNP前药和至少一种赋形剂的药物组合物。

在一个实施方案中，包含本发明的CNP前药分子的药物组合物包含CNP前药的混合物，其中CNP部分通过不同官能团连接到-L¹-，优选通过由CNP提供的胺官能团，即通过N-末端胺官能团，通过由位置4处的赖氨酸的侧链和/或位置10的赖氨酸的侧链提供的胺官能团，当CNP具有SEQ ID NO:1的序列时；通过N-末端胺官能团，通过在位置8、10、14、15、19和/或25的赖氨酸的侧链提供的胺官能团，当CNP具有SEQ ID NO:25的序列时；或通过N-末端胺官能团，通过在位置9、11、15、16、20和/或26的赖氨酸的侧链提供的胺官能团，当CNP具有SEQ ID NO:24的序列时。

在一个优选的实施方案中，包含在药物组合物中的所有CNP前药分子的CNP部分通过CNP提供的相同的胺官能团连接至-L¹-，即通过N-末端胺官能团或者在位置4的赖氨酸的侧链提供的胺官能团或在位置10的赖氨酸的侧链提供的胺官能团，当CNP具有的序列SEQID NO:1时；通过在位置8、10、14、15、19或25的赖氨酸的侧链提供的胺官能团，当CNP具有SEQ ID NO:25的序列时；或通过在位置9、11、15、16、20或26的赖氨酸的侧链提供的胺官能团，当CNP具有SEQ ID NO:24的序列时。最优选地，包含在药物组合物中的所有CNP前药分子的CNP部分通过相同的胺官能团连接到-L¹-，所述胺官能团是由赖氨酸26的侧链提供的胺官能团，当CNP部分具有SEQ ID:NO 24的序列时。

优选地，包含本发明的至少一种CNP前药的药物组合物的pH范围为pH 3至pH 8并包括端点。更优选地，药物组合物的pH范围为pH 4至pH6并包括端点。最优选地，该药物组合物的pH范围为pH 4至pH 5并包括端点。

在一个实施方案中，包含至少一种本发明的CNP前药和至少一种赋形剂的药物组合物是液体或混悬液制剂。应当理解，如果本发明的CNP前药包含水不溶性载体-Z'，则药物组合物是混悬液制剂。

在另一个实施方案中，包含至少一种本发明的CNP前药和至少一种赋形剂的药物组合物是干燥制剂。

所述液体、混悬液或干燥药物组合物包含至少一种赋形剂。肠胃外制剂中使用的赋形剂可分为例如缓冲剂、等渗改性剂、防腐剂、稳定剂、抗吸附剂、氧化保护剂、增粘剂/粘度增强剂或其它辅助剂。然而，在一些情况下，一种赋形剂可具有双重或三重功能。优选地，包含在本发明的药物组合物中的至少一种赋形剂选自：

(i)缓冲剂：将pH保持在所需范围内的生理学耐受的缓冲剂，例如磷酸钠、碳酸氢盐、琥珀酸盐、组氨酸、柠檬酸盐和乙酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氯化物、丙酮酸盐；还可以使用抗酸剂例如Mg(OH)₂或ZnCO₃；

(ii)等渗改性剂：减少可由于注射贮库处渗透压差导致的细胞损伤引起的疼痛；甘油和氯化钠是实例；有效浓度可以通过渗透法，使用285-315mOsmol/kg的血清的假定渗透压浓度确定；

(iii)防腐剂和/或抗微生物剂：多剂量肠胃外制剂需要添加足够的浓度的防腐剂以最大限度地减少注射后感染患者的风险，并已建立相应的管理要求；典型的防腐剂包括间甲酚、苯酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、氯丁醇、苄醇、硝酸苯汞、硫柳汞(thimerosol)、山梨酸、山梨酸钾、苯甲酸、氯甲酚和苯扎氯铵。

(iv)稳定剂：通过加强蛋白质稳定力，通过使变性状态不稳定，或通过将赋形剂直接结合到蛋白质来实现稳定化；稳定剂可以是氨基酸，例如丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、脯氨酸，糖如葡萄糖、蔗糖、海藻糖，多元醇如甘油、甘露醇、山梨醇，盐如磷酸钾、硫酸钠，螯合剂诸如EDTA、六磷酸盐，配体诸如二价金属离子(锌、钙等)，其它盐或有机分子如酚衍生物；此外，可以使用低聚物或聚合物如环糊精、葡聚糖、树枝状大分子、PEG或PVP或鱼精蛋白或HAS；

(v)抗吸附剂：主要使用离子或非离子表面活性剂或其他蛋白质或可溶性聚合物来涂覆或竞争地吸附到制剂的容器的内表面；例如泊洛沙姆(Pluronic F-68)、PEG十二烷基醚(Brij 35)、聚山梨醇酯20和80、葡聚糖、聚乙二醇、PEG-多组氨酸、BSA和HSA以及明胶；选择的赋形剂的浓度和类型取决于要避免的效果，但通常在刚好高于CMC值在界面处形成表面活性剂单层；

(vi)氧化保护剂：抗氧化剂，例如抗坏血酸、依克多因(ectoine)、甲硫氨酸、谷胱甘肽、单硫代甘油、morin、聚乙烯亚胺(PEI)、没食子酸丙酯和维生素E；还可以使用螯合剂如柠檬酸、EDTA、六磷酸和巯基乙酸；

(vii)增粘剂或粘度增强剂：阻止颗粒在小瓶和注射器中的沉降，并且用于促进颗粒的混合和再混悬并使混悬液更易于注射(即，针筒柱塞上的低的力)；合适的增粘剂或粘度增强剂是例如卡波姆增粘剂如Carbopol 940、Carbopol Ultrez 10、纤维素衍生物如羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素，HPMC)或二乙基氨基乙基纤维素(DEAE或DEAE-C)、胶体硅酸镁(Veegum)或硅酸钠、羟基磷灰石凝胶、磷酸三钙凝胶、黄原胶、角叉菜胶如SatiagumUTC 30、脂肪族聚(羟基酸)例如聚(D,L-或L-乳酸)(PLA)和聚(乙醇酸)(PGA)和它们的共聚物(PLGA)、D,L-丙交酯、乙交酯和己内酯的三元共聚物、泊洛沙姆、亲水性聚(氧乙烯)嵌段和疏水性聚(氧丙烯)嵌段以构成聚(氧乙烯)-聚(氧丙烯)-聚(氧乙烯)的三嵌段(例如

)、聚醚酯共聚物例如聚对苯二甲酸乙二醇酯/聚对苯二甲酸丁二酯共聚物、蔗糖乙酸异丁酸酯(SAIB)、葡聚糖或其衍生物、葡聚糖和PEG的组合、聚二甲基硅氧烷、胶原、壳聚糖、聚乙烯醇(PVA)及衍生物、聚烷基酰亚胺、聚(丙烯酰胺-共-二烯丙基二甲基铵(DADMA))、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、糖胺聚糖(GAGs)如硫酸皮肤素、硫酸软骨素、硫酸角质素、肝素、硫酸乙酰肝素、透明质酸、由疏水性A嵌段(例如聚丙交酯(PLA)或聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA))和亲水性B嵌段如聚乙二醇(PEG)或聚乙烯吡咯烷酮组成的ABA三嵌段或AB嵌段共聚物；这种嵌段共聚物以及上述泊洛沙姆可以表现出反向热凝胶化行为(室温下的流体状态以便于施用，注射后在体温溶胶-凝胶转变温度以上的凝胶状态)；

(viii)扩散剂或分散剂：通过水解在细胞内空间中细胞外基质的组分来修饰结缔组织的渗透性，例如但不限于透明质酸、在结缔组织的细胞间隙中发现的多糖；扩散剂，例如但不限于透明质酸酶暂时降低细胞外基质的粘度并促进注射药物的扩散；和

(ix)其他辅助剂：如润湿剂、粘度调节剂、抗生素、透明质酸酶；酸和碱如盐酸和氢氧化钠是制造期间pH调节所必需的辅助剂。

本发明的另一方面是CNP前药或其药学上可接受的盐或包含本发明的至少一种CNP前药的药物组合物作为药物的用途。

本发明的另一方面是CNP前药或其药学上可接受的盐或包含至少一种本发明的CNP前药的药物组合物，其用于治疗可用CNP治疗的疾病的方法。

优选地，所述疾病选自软骨发育不全、软骨发育不良、身材矮小,侏儒症、骨软骨发育不良(osteochondrodysplasias)、致死性发育不良、成骨不全(osteogenesisimperfecta)、软骨成长不全(achondrogenesis)、点状软骨发育不全(chondrodysplasiapunctata)、纯合子软骨发育不全(homozygous achondroplasia)、屈肢骨发育不良(camptomelic dysplasia)、先天性致死性低磷酸酯酶症、围产期致死型成骨不全、短肋多指综合症、肢根型点状软骨发育不全、詹森(Jansen)型干骺端发育不良(metaphysealdysplasia)、先天性椎体骨骺结构不良(spondyloepiphyseal dysplasia congenita)、骨发育不全症(atelosteogenesis)、扭曲性骨发育不全(diastrophic dysplasia)、先天性短股骨、兰格(Langer)型肢中骨发育不良(mesomelic dysplasia)、Nievergelt型肢中骨发育不良、Robinow综合征、Reinhardt综合征、肢端发育不全(acrodysostosis)、周围性骨发育障碍(peripheral dysostosis)、Kniest发育不良、纤维软骨发生(fibrochondrogenesis)、Roberts综合征、肢端肢中骨发育不良(acromesomelic dysplasia)、短肢症(micromelia)、Morquio综合征、Kniest综合征、后生营养性发育不良、脊椎骨骺干骺端发育不良(spondyloepimetaphyseal dysplasia)、神经纤维瘤病(neurofibromatosis)、Legius综合征、LEOPARD综合征、Noonan综合征、遗传性牙龈纤维瘤病(hereditary gingivalfibromatosis)、1型神经纤维瘤病、Legius综合征、Cardiofaciocutaneous综合征、Costello综合征、SHOX缺乏症、特发性身材矮小、生长激素缺乏症、骨关节炎、颅骨锁骨发育不良(cleidocranial dysostosis)、颅缝早闭(例如Muenke综合征、Crouzon综合征、Apert综合征、Jackson-Weiss综合征、Pfeiffer综合征或Crouzonodermoskeletal综合征)、指/趾型(dactyly)、短指/趾(brachydactyly)、屈曲指/趾(camptodactyly)、多指/趾(polydactyly)、并指/趾(syndactyly)、Dyssegmental发育不良、内生软骨瘤、纤维性发育不良、遗传性多发性外生骨疣(hereditary multiple exostoses)、低磷酸盐血症性佝偻病(hypophosphatemic rickets)、Jaffe-Lichtenstein综合征、Marfan综合征、McCune-Albright综合征、骨硬化病和脆弱性骨硬化。

优选地，所述疾病选自软骨发育不全、软骨发育不良、身材矮小、侏儒症、骨软骨发育不良、致死性发育不良、成骨不全、软骨成长不全、点状软骨发育不全、纯合子软骨发育不全、屈肢骨发育不良、先天性致死性低磷酸酯酶症、围产期致死型成骨不全、短肋多指综合症、肢根型点状软骨发育不全、詹森型干骺端发育不良、先天性椎体骨骺结构不良、骨发育不全症、扭曲性骨发育不全、先天性短股骨、兰格型肢中骨发育不良、Nievergelt型肢中骨发育不良、Robinow综合征、Reinhardt综合征、肢端发育不全、周围性骨发育障碍、Kniest发育不良、纤维软骨发生、Roberts综合征、肢端肢中骨发育不良、短肢症、Morquio综合征、Kniest综合征、后生营养性发育不良、脊椎骨骺干骺端发育不良、神经纤维瘤病、Legius综合征、LEOPARD综合征、Noonan综合征、遗传性牙龈纤维瘤病、1型神经纤维瘤病、Legius综合征、Cardiofaciocutaneous综合征、Costello综合征、SHOX缺乏症、特发性身材矮小、生长激素缺乏症和骨关节炎。

在另一个实施方案中，所述疾病是眼科疾病,例如青光眼和/或升高的眼内压。

在另一个实施方案中，所述疾病与癌症中FGFR3的过度活化有关，例如多发性骨髓瘤、骨髓增殖综合征、白血病、浆细胞白血病、淋巴瘤、成胶质细胞瘤、前列腺癌、膀胱癌或乳腺癌。

在另一个实施方案中，所述疾病是血管平滑肌病，优选选自高血压、再狭窄、动脉硬化、急性失代偿性心力衰竭、充血性心力衰竭、心脏水肿、肾盂积水、肝水肿、急性肾功能不全和慢性肾功能不全。

优选地，所述疾病是选自以下的软骨发育不全表型：生长迟缓、颅骨畸形、正畸缺陷、颈髓压迫、脊柱狭窄、脑积水、由慢性耳炎引起的听力损失、心血管疾病、神经疾病和肥胖。

最优选地，所述疾病是软骨发育不全。

在一个实施方案中，经历本发明治疗方法的患者是哺乳动物患者，优选人类患者。在一个实施方案中，该人类患者是成年人。在一个优选的实施方案中，人类患者是儿科患者。

本发明的另一方面是CNP前药或其药学上可接受的盐或包含本发明的至少一种CNP前药的药物组合物在制备用于治疗可用CNP治疗的疾病的药物中的用途。

优选地，所述疾病选自软骨发育不全、软骨发育不良、身材矮小、侏儒症、骨软骨发育不良、致死性发育不良、成骨不全、软骨成长不全、点状软骨发育不全、纯合子软骨发育不全、屈肢骨发育不良、先天性致死性低磷酸酯酶症、围产期致死型成骨不全、短肋多指综合症、肢根型点状软骨发育不全、詹森型干骺端发育不良、先天性椎体骨骺结构不良、骨发育不全症、扭曲性骨发育不全、先天性短股骨、兰格型肢中骨发育不良、Nievergelt型肢中骨发育不良、Robinow综合征、Reinhardt综合征、肢端发育不全、周围性骨发育障碍、Kniest发育不良、纤维软骨发生、Roberts综合征、肢端肢中骨发育不良、短肢症、Morquio综合征、Kniest综合征、后生营养性发育不良、脊椎骨骺干骺端发育不良、神经纤维瘤病、Legius综合征、LEOPARD综合征、Noonan综合征、遗传性牙龈纤维瘤病、1型神经纤维瘤病、Legius综合征、Cardiofaciocutaneous综合征、Costello综合征、SHOX缺乏症、特发性身材矮小、生长激素缺乏症、骨关节炎、颅骨锁骨发育不良、颅缝早闭(例如Muenke综合征、Crouzon综合征、Apert综合征、Jackson-Weiss综合征、Pfeiffer综合征或Crouzonodermoskeletal综合征)、指/趾型、短指/趾、屈曲指/趾、多指/趾、并指/趾、Dyssegmental发育不良、内生软骨瘤、纤维性发育不良、遗传性多发性外生骨疣、低磷酸盐血症性佝偻病、Jaffe-Lichtenstein综合征、Marfan综合征、McCune-Albright综合征、骨硬化病和脆弱性骨硬化。

在另一个实施方案中，所述疾病是眼科疾病，例如青光眼和/或升高的眼内压。

最优选地，所述疾病是软骨发育不全。

在一个实施方案中，用CNP前药或其药学上可接受的盐或包含本发明的至少一种CNP前药的药物组合物治疗的疾病发生在哺乳动物患者中，优选在人类患者中。在一个实施方案中，该人类患者是成年人。在一个优选的实施方案中，人类患者是儿科患者。

本发明的另一方面是在需要治疗可以用CNP治疗的一种或多种疾病的哺乳动物患者优选人类患者中治疗、控制、延迟或预防的方法，包括向所述有需要的患者施用治疗有效量的CNP前药或其药学上可接受的盐或包含本发明CNP前药的药物组合物的步骤。在一个实施方案中，人类患者是成年人。在一个优选的实施方案中，人类患者是儿科患者。

优选地，可以用CNP治疗的一种或多种疾病选自软骨发育不全、软骨发育不良、身材矮小、侏儒症、骨软骨发育不良、致死性发育不良、成骨不全、软骨成长不全、点状软骨发育不全、纯合子软骨发育不全、屈肢骨发育不良、先天性致死性低磷酸酯酶症、围产期致死型成骨不全、短肋多指综合症、肢根型点状软骨发育不全、詹森型干骺端发育不良、先天性椎体骨骺结构不良、骨发育不全症、扭曲性骨发育不全、先天性短股骨、兰格型肢中骨发育不良、Nievergelt型肢中骨发育不良、Robinow综合征、Reinhardt综合征、肢端发育不全、周围性骨发育障碍、Kniest发育不良、纤维软骨发生、Roberts综合征、肢端肢中骨发育不良、短肢症、Morquio综合征、Kniest综合征、后生营养性发育不良、脊椎骨骺干骺端发育不良、神经纤维瘤病、Legius综合征、LEOPARD综合征、Noonan综合征、遗传性牙龈纤维瘤病、1型神经纤维瘤病、Legius综合征、Cardiofaciocutaneous综合征、Costello综合征、SHOX缺乏症、特发性身材矮小、生长激素缺乏症、骨关节炎、颅骨锁骨发育不良、颅缝早闭(例如Muenke综合征、Crouzon综合征、Apert综合征、Jackson-Weiss综合征、Pfeiffer综合征或Crouzonodermoskeletal综合征)、指/趾型、短指/趾、屈曲指/趾、多指/趾、并指/趾、Dyssegmental发育不良、内生软骨瘤、纤维性发育不良、遗传性多发性外生骨疣、低磷酸盐血症性佝偻病、Jaffe-Lichtenstein综合征、Marfan综合征、McCune-Albright综合征、骨硬化病和脆弱性骨硬化。

在另一个实施方案中，可以用CNP治疗的一种或多种疾病是眼科疾病，例如青光眼和/或升高的眼内压。

在另一个实施方案中，可以用CNP治疗的一种或多种疾病与癌症中FGFR3的过度活化有关，例如多发性骨髓瘤、骨髓增殖综合征、白血病、浆细胞白血病、淋巴瘤、成胶质细胞瘤、前列腺癌、膀胱癌或乳腺癌。

在另一个实施方案中，可以用CNP治疗的一种或多种疾病是血管平滑肌病，优选选自高血压、再狭窄、动脉硬化、急性失代偿性心力衰竭、充血性心力衰竭、心脏水肿、肾盂积水、肝水肿、急性肾功能不全和慢性肾功能不全。

优选地，可以用CNP治疗的一种或多种疾病是选自以下的软骨发育不全表型：生长迟缓、颅骨畸形、正畸缺陷、颈髓压迫、脊柱狭窄、脑积水、由慢性耳炎引起的听力损失、心血管疾病、神经疾病和肥胖。

最优选地，可以用CNP治疗的一种或多种疾病是软骨发育不全。

本发明的另一方面是施用CNP前药、其药学上可接受的盐或本发明的药物组合物的方法，其中所述方法包括施用CNP前药、其药学上可接受的盐或本发明的药物组合物的步骤，所述施用通过下述进行：局部、肠内或胃肠外施用或外部应用、注射或输注的方法，包括关节内、关节周围、皮内、皮下、肌肉内、静脉内、骨内、腹膜内、鞘内、囊内、眶内、玻璃体内、鼓室内、膀胱内、心脏内、经气管、皮下、囊下、蛛网膜下、脊柱内、心室内、胸骨内注射和输注，通过允许将本发明等运送到脑组织或脑液的植入装置(例如Ommaya Reservoir)直接递送至脑，直接脑室内注射或输注，注射或输注入脑或脑相关区域，注射到脉络膜下空间，眶后注射和眼睛滴注，优选通过皮下注射。

在一优选的实施方案中，本发明涉及CNP前药或其药学上可接受的盐或本发明的药物组合物，其用于经皮下注射治疗软骨发育不全。

本发明的另一方面是式(IVa)和(IVb)的不可逆的缀合物：

其中

-D是CNP部分；

-L²-是单一化学键或间隔体部分；

-Z是水溶性载体部分；

y是选自下列的整数：1、2、3、4和5。

-D、-L²-、-Z、x和y的优选的实施方案如上所述。

图1:根据SEQ ID NO:1的CNP的结构。

实施例

材料和方法

CNP SEQ ID No:1获自Bachem AG,Bubendorf,瑞士(CNP-22，人类，目录号H-1296)。CNP-34SEQ ID No:40和CNP-38SEQ ID No:24得自CASLO ApS,Kongens Lyngby,丹麦。

具有Boc保护的N-末端和ivDde保护的Lys26侧链的在TCP树脂上的侧链保护的CNP-38(通过Fmoc策略合成)得自CASLO ApS,Kongens Lyngby,丹麦。

具有Boc保护的N-末端和ivDde保护的Lys12、Lys16或Lys22侧链的TCP Tentagel树脂上的侧链保护的CNP-34(由Fmoc策略合成)获自Peptide Specialty LaboratoriesGmbH,Heidelberg,德国。具有游离N末端的TCP tentagel树脂上的侧链保护的CNP-38(由Fmoc策略合成)得自Peptide Specialty Laboratories GmbH,Heidelberg,德国。

甲氧基PEG胺5kDa得自Rapp Rapp Polymere GmbH，Tuebingen，德国。本工作中使用的所有其他PEG均从NOF Europe N.V.,Grobbendonk,比利时获得。

FmocN-Me-Asp(OtBu)-OH得自Bachem AG,Bubendorf,瑞士。S-三苯甲基-6-巯基己酸购自Polypeptide,Strasbourg,法国。HATU获自Merck Biosciences GmbH,Schwalbach/Ts,德国。

2,4-二甲基苄醇得自abcr GmbH,Karlsruhe,德国。

Fmoc-N-Me-Asp(OBn)-OH得自Peptide International Inc.,Louisville,KY,USA。

中性肽链内切酶(NEP)得自Enzo Life Sciences GmbH,

德国。

所有其他化学品和试剂均购自Sigma Aldrich GmbH,Taufkirchen,德国。

配备聚乙烯玻璃料的注射器(MultiSynTech GmbH,Witten,德国)用作反应容器或用于肽树脂的洗涤步骤。

从树脂上侧链保护的CNP上去除ivDde保护基的一般程序

将树脂在DMF中预溶胀30分钟，弃去溶剂。通过用DMF/水合肼4/1(v/v，2.5mL/g树脂)孵育树脂8x 15min除去ivDde基团。对于每一步骤，使用新鲜的DMF/水合肼溶液。最后，用DMF(10x)、DCM(10x)洗涤树脂并真空干燥。

RP-HPLC纯化：

对于制备型RP-HPLC，使用Waters 600控制器和2487双重吸光度检测器，配备以下柱：Waters XBridge^TM BEH300Prep C18 5μm，150x 10mm，流速6mL/min或Waters XBridge^TMBEH300Prep C18 10μm，150x 30mm，流速40mL/min。使用溶剂系统A(含有0.1％TFA v/v或0.01％浓HCl v/v的水)和溶剂系统B(含有0.1％TFA v/v或0.01％浓HCl v/v的乙腈)的线性梯度。

如果没有另外说明，合并含有产物的HPLC级分，并将其冷冻干燥。

快速色谱

使用Biotage KP-Sil硅胶柱以及正庚烷和乙酸乙酯作为洗脱剂，在瑞典BiotageAB的Isolera One系统上进行快速色谱纯化。产物在254nm检测。

分析方法

在装有Waters BEH300C18柱的Waters Acquity系统上进行分析型超性能LC(UPLC)-MS(2.1×50mm，1.7μm粒度，流速：0.25mL/min；溶剂A：含有0.04％TFA(v/v)的水，溶剂B：含有0.05％TFA(v/v)的乙腈)，所述Waters Acquity系统与Thermo Scientific的LTQOrbitrap Discovery质谱仪联合或与Waters Micromass ZQ联合。

如果没有另外说明，使用装备有Superdex 200 5/150GL柱(AmershamBioscience/GE Healthcare)(其装备有0.45μm入口过滤器)的Amersham BioscienceAEKTAbasic系统进行尺寸排阻色谱法(SEC)。使用20mM磷酸钠、140mM NaCl，pH 7.4作为流动相。

由于-L¹-至-D的连接的可逆性质，使用本发明的CNP前药的稳定类似物进行NEP稳定性和受体亲和力的测定，即它们是使用与本发明的CNP前药具有相似的结构(其具有稳定的连接而不是-Z至-D的可逆连接)进行的。

这是必要的，因为本发明的CNP前药将在实验过程中释放CNP，并且所述释放的CNP将影响结果。

血浆总CNP-38浓度的定量

通过定量胰蛋白酶消化后的N-末端标签肽(signature peptide)(序列：LQEHPNAR)和C-末端标签肽(序列：IGSMSGLGC)来测定血浆总CNP-38浓度。

通过使用与Agilent 6550iFunnel Q-TOF质谱仪联合的Agilent 1290UPLC通过ESI探针进行LC-MS分析。在具有预过滤器的Waters Acquity BEH300C18分析柱(50×2.1mmI.D.，1.7μm粒度)上以0.25mL/min(T＝25℃)的流速进行色谱分析。使用含有0.2％甲酸(v/v)的水(UPLC等级)作为流动相A和含有0.2％甲酸的乙腈(UPLC级)作为流动相B。梯度系统包括在初始参数0.1％B处3.0分钟的短等度步骤，然后在17分钟内从0.1％B线性增加至16％B。在单离子监测(SIM)模式下进行质谱分析，监测离子m/z482.75[M+2H]²⁺(N-末端)和m/z 824.36[M+H]¹⁺(C-末端)。使用氘代CNP-38肽作为内标。

空白血浆中CNP-38缀合物的校准标准品如下制备：首先将解冻的Li-肝素食蟹猴血浆匀浆，然后离心5分钟。将CNP-38缀合物制剂稀释至在DMSO中的10μg/mL(缀合物CNP-38当量)工作溶液，并以9.3ng/100μL(缀合物CNP-38当量)和139.5ng/100μL(缀合物CNP-38当量)间的浓度加入空白血浆中。这些溶液用于产生校准曲线。对于两种标签肽(N-和C-末端)，校准曲线加权1/x²。对于质量控制，相应地制备了三个质量控制样品，其含量为116.2ng/100μL(高QC，缀合物CNP-38当量)、69.75ng/100μL(中间QC，缀合物CNP-38当量)和23.25ng/100μL(低QC，缀合物CNP-38当量)。

对于样品制备，通过向100μL的血浆样品中加入300μL预冷(0℃)甲醇进行蛋白质沉淀。将200μL上清液转移到新的孔板中并蒸发至干(在35℃的温和氮气流下)。使用100μL重构溶剂(Thermo消化缓冲液，订货号60109-101，Thermo Fisher Scientific GmbH，Dreieich，德国)溶解残余物。将20μg胰蛋白酶(订货号V5111，Promega GmbH，Mannheim，德国)溶解在20μL的10mM乙酸中。将2μL胰蛋白酶溶液加入每个空腔。

在37℃(水浴)下孵育4小时后，向每个空腔加入5μL的0.5M TCEP溶液，并在96℃下再孵育5分钟。样品冷却至室温后，加入3μL乙腈。将洗脱液转移到小瓶中。将10μL注射到UPLC-MS系统中。

实施例1

连接体试剂1f的合成

根据下面的流程合成连接体试剂1f：

向N-甲基-N-Boc-乙二胺(2g,11.48mmol)和NaCNBH₃(819mg,12.63mmol)的MeOH(20mL)溶液中分次加入2,4,6-三甲氧基苯甲醛(2.08g,10.61mmol)。将混合物在rt搅拌90min，用3M HCl(4mL)酸化并再搅拌15min。将反应混合物加至饱和NaHCO₃溶液(200mL)中，并用CH₂Cl₂提取5x。将合并的有机相用Na₂SO₄干燥，并在真空中蒸发溶剂。将得到的N-甲基-N-Boc-N’-Tmob-乙二胺1a在高真空中干燥，并没有进一步纯化用于下一反应步骤中。

产量:3.76g(11.48mmol,89％纯度,1a:双Tmob保护的产物＝8:1)

MS:m/z 355.22＝[M+H]⁺,(计算的单一同位素质量＝354.21.

向1a(2g,5.65mmol)的CH₂Cl₂(24mL)溶液中，加入COMU(4.84g,11.3mmol)、N-Fmoc-N-Me-Asp(OBn)-OH(2.08g,4.52mmol)和2,4,6-三甲基吡啶(2.65mL,20.34mmol)。将反应混合物在rt搅拌3h，用CH₂Cl₂(250mL)稀释，并且用0.1M H₂SO₄(100mL)洗涤3x，并用盐水(100mL)洗涤3x。将水相用CH₂Cl₂(100mL)再萃取。将合并的有机相用Na₂SO₄干燥，过滤并将残留物浓缩至24mL体积。采用快速色谱法纯化1b。

产量:5.31g(148％，6.66mmol)

MS:m/z 796.38＝[M+H]⁺,(计算的单一同位素质量＝795.37).

向1b(5.31g,对于N-Fmoc-N-Me-Asp(OBn)-OH最多4.52mmol)的THF(60mL)溶液中，加入DBU(1.8mL,3％v/v)。将溶液在rt搅拌12min，用CH₂Cl₂(400mL)稀释并用0.1M H₂SO₄(150mL)洗涤3x，并用盐水(150mL)洗涤3x。将水相用CH₂Cl₂(100mL)再萃取。将合并的有机相用Na₂SO₄干燥并过滤。蒸发溶剂后分离1c并没有进一步纯化即在下一反应中使用。

MS:m/z 574.31＝[M+H]⁺,(计算的单一同位素质量＝573.30).

将1c(5.31g,4.52mmol,粗品)溶解在乙腈(26mL)中，加入COMU(3.87g,9.04mmol)、6-三苯甲基巯基己酸(2.12g,5.42mmol)和2,4,6-三甲基吡啶(2.35mL,18.08mmol)。将反应混合物在rt搅拌4h，用CH₂Cl₂(400mL)稀释并用0.1M H₂SO₄(100mL)洗涤3x，并用盐水(100mL)洗涤3x。将水相用CH₂Cl₂(100mL)再萃取。将合并的有机相用Na₂SO₄干燥，过滤，蒸发溶剂后分离1d。采用快速色谱法纯化产物1d。

产量:2.63g(62％，94％纯度)

MS:m/z 856.41＝[M+H]⁺,(计算的单一同位素质量＝855.41).

向1d(2.63g,2.78mmol)的i-PrOH(33mL)和H₂O(11mL)溶液中加入LiOH(267mg,11.12mmol)，并将反应混合物在rt搅拌70min。将混合物用CH₂Cl₂(200mL)稀释并用0.1MH₂SO₄(50mL)洗涤3x，并用盐水(50mL)洗涤3x。将水相用CH₂Cl₂(100mL)再萃取。将合并的有机相用Na₂SO₄干燥，过滤，并蒸发溶剂后分离1e。采用快速色谱法纯化1e。

产量:2.1g(88％)

MS:m/z 878.4＝[M+Na]⁺,(计算的单一同位素质量＝837.40).

向1e(170mg,0.198mmol)的无水DCM(4mL)溶液中加入DCC(123mg,0.59mmol)和催化量的DMAP。5min后，加入N-羟基-琥珀酰亚胺(114mg,0.99mmol)并将反应混合物在rt搅拌1h。将反应混合物过滤，在真空中除去溶剂并将残留物溶取在90％乙腈+0.1％TFA(3.4mL)中。将粗混合物通过RP-HPLC纯化。将产物级分用0.5M pH 7.4磷酸盐缓冲液中和并浓缩。将剩余的水相用DCM萃取，并蒸发溶剂后分离1f。

产量:154mg(81％)

MS:m/z 953.4＝[M+H]⁺,(计算的单一同位素质量＝952.43).

实施例2

N^εK4/εK10-CNP单-连接体硫醇2、N^εK4-CNP单-连接体硫醇2c和N^εK10-CNP单-连接体硫醇2d的合成

通过将CNP-22(5.2μmol)溶解在0.6mL DMSO中制备N^εK4/εK10-CNP单-连接体硫醇(具有缀合在Lys4或Lys10的侧链氨基的连接体的区域异构体的混合物)2。加入0.15mL 0.375M硼酸盐缓冲液，用四丁基氢氧化铵水合物调节至pH 8.5，加入60μL DIPEA和0.34mL DMSO中的1f(6.1mg,7.1μmol)，将混合物在室温下搅拌30分钟。反应混合物用2mL乙腈/水1/1(v/v)和200μL AcOH稀释，通过RP-HPLC从反应混合物中分离保护的N^εK4/εK10-CNP单-连接体缀合物。

优化的RP-HPLC梯度可用于分离N^εK4-CNP单-连接体硫醇2a和N^εK10-CNP单-连接体硫醇2b。

通过在室温下用0.6mL的90/10/2/2(v/v/v/v)HFIP/TFA/TES/水处理冻干的产物级分1小时来实现保护基团的去除。通过RP-HPLC纯化去保护的N^εK4/εK10-CNP单-连接体硫醇2。通过ESI-LCMS确定产物的身份和纯度。

脱保护的N^εK4-CNP单-连接体硫醇2c和N^εK10-CNP单-连接体硫醇2d可以分别从2a和2b同样地获得。

实施例3

N^αG1-CNP单-连接体硫醇3的合成

通过溶解CNP-22(5.2μmol)在0.6mL DMSO中制备N^αG1-CNP单-连接体硫醇3。加入0.25mL 0.5M磷酸盐缓冲液pH 7.4和在0.34mL DMSO中的1f(6.1mg,7.1μmol)，并将混合物在rt搅拌数小时。将反应混合物用2mL乙腈/水1/1(v/v)和200μL AcOH稀释，并通过RP-HPLC从反应混合物中分离保护的N^αG1-CNP单-连接体硫醇。

通过在室温下用0.6mL的90/10/2/2(v/v/v/v)HFIP/TFA/TES/水处理冻干的产物级分1小时来实现保护基团的去除。通过RP-HPLC纯化去保护的N^αG1-CNP单-连接体硫醇3。通过ESI-LCMS确定产物的身份和纯度。

实施例4

CNP单-连接体硫醇2c、2d和3的PEG化

将1μmol CNP单-连接体硫醇2c溶解在0.5mL乙腈/0.2M琥珀酸盐缓冲液pH 3.8 1/1(v/v)中，加入1.2μmol线性的40kDa PEG-马来酰亚胺，并将混合物在rt搅拌。通过加入20μL AcOH将反应淬灭，并通过制备RP-HPLC纯化CNP缀合物4。

CNP缀合物5和6由1μmol CNP单-连接体硫醇2d和3同样地制备。

CNP含量通过在酸性条件下全部水解后的定量氨基酸分析来确定。

实施例5

体外释放动力学

将CNP缀合物4、5和6以约2mg/mL的浓度溶解于60mM磷酸钠、3mM EDTA、0.01％吐温-20,pH 7.4中，并无菌过滤。将混合物在37℃下孵育。在时间点取出等分试样并通过RP-HPLC和ESI-MS分析。将与释放的CNP相关的UV-信号积分并相对于孵育时间作图。

应用曲线拟合软件来估计相应的释放半场(halftime of release)。

实施例6

大鼠中的药代动力学和cGMP生成

在正常大鼠中iv和sc注射等剂量的CNP-22、CNP缀合物4、5或6。随着时间推移的血浆CNP和cGMP水平如文献中所述确定(美国专利8,377,884 B2)。

实施例7

Dmb保护的6-巯基己酸7的合成

根据下面的流程合成化合物7:

向6-巯基己酸(7.10g,47.90mmol)的三氟乙酸(20mL)溶液中，加入2,4-二甲基苄醇(13.5g,95.80mmol)。将混合物在RT搅拌60min，然后在真空中除去三氟乙酸。将残留物溶解在95.8mL LiOH(3M)和THF(81mL)的混合物中，并在rt搅拌60min。在真空中除去溶剂并将水性残留物用EtOAc(200mL)萃取3x。将合并的有机相用MgSO₄干燥，并在真空中除去溶剂。通过RP-HPLC纯化7。

产量:2.27g(8.52mmol,18％)

MS:m/z 267.01＝[M+H]⁺,(计算的单一同位素质量＝266.13).

实施例8

连接体试剂8c的合成

根据下面的流程合成连接体试剂8c:

向1c(21.6g,27.18mmol)的异丙醇(401mL)溶液中加入水(130mL)和LiOH(3.90g,163.06mmol)。将反应混合物在rt搅拌3h，然后将其用甲苯(300mL)稀释，并用0.1M HCl(200mL)洗涤3x。将合并的水相用甲苯(100mL)洗涤3x。将水相用4M NaOH(4mL)碱化至pH8.5并用CH₂Cl₂(200mL)提取8x。将合并的CH₂Cl₂相用盐水(50mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂后分离8b，没有进一步纯化即在下一反应中使用。

产量:11.89g(24.59mmol,90％)

MS:m/z 484.16＝[M+H]⁺,(计算的单一同位素质量＝483.26).

在N₂-气氛下，向7(293mg,1.10mmol)和PyBOP(572mg,1.10mmol)的THF(10mL)溶液中加入DIEA(0.52mL,3.00mmol)。将反应混合物在rt搅拌60min。加入8b(484mg,1.00mmol)的THF(2mL)溶液，并将反应再搅拌60min。将反应用2M柠檬酸溶液(10mL)淬灭并在真空下除去THF。然后将得到的水相用EtOAc(15mL)萃取2x，并将合并的有机层用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤，并用MgSO₄干燥。在真空中除去溶剂，并通过RP HPLC纯化8c。

产量:330mg(0.451mmol,45％)

MS:m/z 732.34＝[M+H]⁺,(计算的单一同位素质量＝731.38).

实施例9

连接体试剂9的合成

根据下面的流程合成连接体试剂9:

向8b(2.00g,4.14mmol)和Fmoc-Cl(1.07g,4.14mmol)的二氧六环(20mL)溶液中加入1M Na₂CO₃溶液(20mL)。将反应混合物在rt搅拌40min。加入水(100mL)和乙醚(100mL)，并将水相用乙醚(100mL)萃取2x。将水相用浓HCl酸化直到pH 1，并再次用乙醚萃取3x。将合并的有机相用Na₂SO₄干燥，并在真空中除去溶剂。没有进一步纯化在下一步骤中使用9。

产量:2.63g(3.73mmol,90％)

MS:m/z 728.32＝[M+Na]⁺,(计算的单一同位素质量＝705.33).

实施例10

可逆的Lys26CNP-38PEG2x20kDa缀合物10f的合成

根据下面的流程合成缀合物10f:

将2.00g(0.21mmol)具有Boc保护的N-末端和ivDde保护的Lys26侧链的TCP树脂上的侧链保护的CNP-38按照材料和方法中给出的程序除去ivDde保护，得到10a。将连接体试剂8c(336mg,0.46mmol)、PyBOP(239mg,0.46mmol)和DIEA(182μL,1.04mmol)的DMF(5mL)溶液在rt下孵育10min，然后加入到树脂10a中。将混悬液在室温下摇动2小时。将残留物用DMF(10mL)洗涤10x，用DCM(10mL)洗涤10x，真空干燥15min。通过用15mL预冷却(-18℃)裂解混合物68.5/10/10/5/3.5/1(v/w/v/v/v/v)TFA/DTT/茴香硫醚/苯酚/水/TIPS处理树脂来实现肽从树脂的裂解和保护基团的去除。将混合物升温至室温并搅拌60min。将粗10c在预冷乙醚(-18℃)中沉淀。将沉淀物溶于ACN/水中，并通过RP-HPLC纯化。将合并的HPLC级分直接用于下一步骤。

MS:m/z 1124.60＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝1124.59)

向10c的合并的HPLC级分(250mL)中，加入40mL的0.5M柠檬酸缓冲液(pH＝5.00)和7mL的0.01M 2,2’-二硫双(吡啶-N-氧化物)的1/1(v/v)乙腈/水溶液。在室温下孵育5min后，反应完成。将混合物用含有0.1％TFA(v/v)的500mL水稀释，并用AcOH(20mL)酸化至约pH2。通过RP-HPLC纯化10d。

产量:101mg(17.3μmol,9％)CNP-38-连接体-Dmb*10TFA

MS:m/z 1124.10＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝1124.09)。

通过加入30mL预冷(-18℃)的裂解混合物100/5/3/2/1(v/v/w/v/v)TFA/MSA/DTT/水/茴香硫醚至10d(101mg,17.3μmol)，并在0℃下搅拌3小时，来实现Dmb保护基团的裂解。将粗10e在预冷(-18℃)乙醚中沉淀。将沉淀物溶于含有0.1％TFA(v/v)的水中，并孵育10min以水解任何TFA酯。通过RP-HPLC纯化10e。

产量:46mg(8.34μmol,48％)CNP-38-连接体-硫醇*10TFA

MS:m/z 1094.58＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝1094.57).

向10e(46mg,8.43μmol)的在含有0.1％TFA(v/v)的1.15mL水中的溶液中加入PEG2x20kDa马来酰亚胺(Sunbright GL2-400MA,870mg,21.75μmol)的在4.35mL含有0.1％TFA(v/v)水中的溶液，然后加入0.5M乳酸缓冲液(1.07mL，pH＝4.20)。将混合物在室温下搅拌4小时。通过RP-HPLC纯化缀合物10f。

产量:233mg(5.21μmol,62％)缀合物10f*10HCl

实施例11

可逆的Lys26CNP-38PEG4x10kDa缀合物缀合物11i的合成

根据下面的流程合成缀合物11i:

向9(353mg,0.50mmol)和PyBOP(260mg,0.50mmol)的DMF(9mL)溶液中加入DIEA(105μL,0.60mmol)。将该混合物加至Lys26-侧链脱保护的CNP-38树脂10a(2.00g,0.21mmol)，并将混悬液在室温下摇动2小时，得到树脂11a。用DMF(7mL)将树脂洗涤10次。用HOBt(0.68g,5.03mmol)和哌嗪(3.00g,34.83mmol)的DMF(47mL)溶液进行11a中Fmoc保护基的裂解。因此，将树脂与10mL的裂解混合物一起温育5次，每次在rt进行15min。然后，用DMF(7mL)将树脂洗涤7次。

制备Fmoc-Lys(Fmoc)-OH(449mg,0.76mmol)、COMU(325mg,0.76mmol)和DIEA(165μL,0.95mmol)的DMF(9mL)溶液，并将其加至树脂上。将混合物在室温下摇动2小时。重复该过程两次，每次用新鲜制备的偶联混合物进行1小时。用DMF(7mL)将树脂洗涤10x，剩余的游离氨基用8mL 1/1/2(v/v/v)Ac₂O/吡啶/DMF封端。

用HOBt(0.68g,5.03mmol)、哌嗪(3.00g,34.83mmol)的DMF(47mL)溶液进行11c中Fmoc保护基的裂解。因此，将树脂与10mL的裂解混合物一起温育5次，每次在rt进行15min。用DMF(7mL)将树脂洗涤7次。

向7(266mg,1.00mmol)and PyBOP(520mg,1.00mmol)的DMF(9mL)溶液中加入DIEA(209μL,1.20mmol)。将该混合物加至树脂上，并在室温下摇动2小时。树脂用DMF(7mL)洗涤7次，得到树脂11e。通过用15mL预冷(-18℃)的裂解混合物68.5/10/10/5/3.5/1(v/w/v/v/v/v)TFA/DTT/茴香硫醚/苯酚/水/TIPS处理树脂，实现肽从树脂的裂解和保护基的去除。将混合物温热至室温，并搅拌3小时。将粗11f在预冷(-18℃)乙醚中沉淀并通过RP-HPLC纯化。合并的HPLC级分直接用于下一步骤。

MS:m/z 1218.66＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝1218.65).

向11f的合并的HPLC产物级分(1L)中，加入160mL 0.5M柠檬酸缓冲液(pH＝5.00)和100mL 50mM 2,2’-二硫双(吡啶-N-氧化物)的在9/1(v/v)乙腈/水中的溶液。将混合物在室温下搅拌4小时，然后用含有0.1％TFA(v/v)的1L水稀释。通过RP-HPLC纯化11g。

产量:64.3mg(10.7μmol,6％)CNP-38-连接体-DMB*10TFA

MS:m/z 1218.15＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝1218.14).

通过加入45mL预冷(-18℃)的裂解混合物100/5/3/2/1(v/v/w/v/v)TFA/MSA/DTT/水/茴香硫醚至11g(61.8mg,10.3μmol)，然后在0℃下搅拌4小时，来实现Dmb保护基的裂解。将粗11h在预冷(-18℃)的乙醚中沉淀。将沉淀物溶解在含有0.1％TFA(v/v)的1/1(v/v)乙腈/水溶液中，并在室温下孵育4小时，以水解任何TFA酯。通过RP-HPLC纯化11h。

产量:38.4mg(6.65μmol,65％)CNP-38-连接体-硫醇*10TFA

MS:m/z 1159.11＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝1159.10).

向11h(34.6mg,5.99μmol)的在含有0.1％TFA(v/v)的1mL水中的溶液中加入PEG2x10kDa马来酰亚胺(Sunbright GL2-200MA,1.12g,56.03μmol)的在6.1mL含有0.1％TFA(v/v)的水中的溶液，然后加入0.5M乳酸缓冲液(1.46mL，pH＝4.00)。将混合物在rt搅拌4h。通过RP-HPLC纯化缀合物11i。

产量:227mg(4.96μmol,83％)缀合物11i*10HCl

实施例12

永久的Lys26CNP-38PEG4x10kDa缀合物12g的合成

根据下面的流程合成缀合物12g：

向Fmoc-Lys(Fmoc)-OH(365mg,0.62mmol)和PyBOP(322mg,0.62mmol)的DMF(4.6mL)溶液中加入DIEA(0.11mL,0.62mmol)。将该混合物加至树脂10a(2.0g,0.21mmol)。并将混悬液在室温下摇动2小时。用DMF(7mL)将树脂洗涤10次。用HOBt(1.35g,9.99mmol)、哌嗪(6.00g,69.66mmol)的DMF(94mL)溶液进行12a中Fmoc保护基的裂解。因此，将树脂与裂解混合物一起温育5次，每次在rt进行15min，得到树脂12b。然后，用DMF(7mL)将树脂洗涤7次。

向7(283mg,1.06mmol)和PyBOP(552mg,1.06mmol)的DMF(6.5mL)溶液中，加入DIEA(185μL,1.06mmol)，并加至树脂12b(2.07g,0.10mmol/g,0.21mmol)。将混合物在rt摇动2h。然后将树脂用DMF(7mL)和CH₂Cl₂(7mL)洗涤10x，并在真空中干燥。

通过用15mL预冷(-18℃)的裂解混合物68.5/10/10/5/3.5/1(v/w/v/v/v/v)TFA/DTT/茴香硫醚/苯酚/水/TIPS处理树脂，实现肽从树脂的裂解和保护基的去除。将混合物温热至室温，并搅拌2.5h。将粗12d在预冷(-18℃)乙醚中沉淀并通过RP-HPLC纯化。将合并的HPLC级分直接用于下一步骤。

MS:m/z 1172.37＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝1172.37).

向12d的合并的HPLC产物级分(390mL)中，加入58.5mL 0.5M柠檬酸缓冲液(pH＝5.00)和8.9mL 10mM 2,2’-二硫双(吡啶-N-氧化物)的在1/1(v/v)乙腈/水中的溶液。将混合物在室温下搅拌10min，然后用含有0.1％TFA(v/v)的400mL水稀释。通过RP-HPLC纯化12e。

产量:100mg(17.5μmol,8％，历经6步)CNP-38-连接体-Dmb*9TFA

MS:m/z 1171.87＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝1171.86).

通过加入65mL预冷(-18℃)的裂解混合物100/5/3/2/1(v/v/w/v/v)TFA/MSA/DTT/水/茴香硫醚至12e(100mg,17.5μmol)，然后在0℃下搅拌3.5h，来实现Dmb保护基的裂解。将粗12f在预冷(-18℃)的乙醚中沉淀。将沉淀物溶解在含有0.1％TFA(v/v)的水中，并在室温下孵育2小时，以水解任何TFA酯。通过RP-HPLC纯化12f。

产量:43.4mg(7.92μmol,45％)CNP-38-连接体-硫醇*9TFA

MS:m/z 1112.83＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝1112.82).

向12f(39.6mg,7.22μmol)的在含有0.1％TFA(v/v)的1mL水中的溶液中加入PEG2x10kDa马来酰亚胺(Sunbright GL2-200MA,1.22g,59.94μmol)的在6.16mL含有0.1％TFA(v/v)的水中的溶液，然后加入0.5M乳酸缓冲液(1.41mL,pH＝4.20)。将混合物在rt搅拌4h。通过RP-HPLC纯化缀合物12g。

产量:204mg(4.48μmol,57％)缀合物12g*9HCl

实施例13

PEG5kDa硫醇13c的合成

根据下面的流程合成PEG5kDa硫醇13c:

向13b(58.6mg,0.15mmol)、HOBt(22.9mg,0.15mmol)和EDC盐酸盐(28.8mg,0.15mmol)的DCM(1.00mL)溶液中，加入2,4,6-三甲基吡啶(121mg,1.00mmol)。然后加入甲氧基PEG胺5kDa 13a(500mg,0.10mmol)的DCM(4.00mL)溶液，并将混合物在rt搅拌16h。蒸发溶剂，将混合物溶解在ACN/水中，并通过RP-HPLC纯化。在真空中减少溶剂的量，并将水性残留物用DCM(1x 100mL,2x 50mL)萃取。将合并的有机层在真空中减少至20mL。加入TFA(1.6mL)和TES(3.5mL)，并将混合物在rt搅拌4.5h。在乙醚中沉淀13c，在-20℃贮存过夜，并在真空中干燥。

产量:372mg(72μmol,72％)

实施例14

永久的N-末端CNP-34PEG 5kDa缀合物14e的合成

根据下面的流程合成缀合物14e:

在具有游离N-末端的TCP tentagel树脂上的侧链保护的CNP-34 14a(0.78g,70μmol)在DMF中预溶胀30min。将马来酰亚氨基己酸(85.3mg,0.40mmol)、DIC(50.9mg,0.40mmol)和Oxyma(57.4mL,0.40mmol)的DMF(6mL)溶液加至树脂上，将混合物在rt摇动30min。然后用新制备的偶联溶液重复偶联一次。将树脂用DMF和CH₂Cl₂洗涤10x，并真空干燥得到14b。

通过在室温下用6mL裂解混合物100/3/2/1(v/v/v/v)TFA/TES/水/茴香硫醚处理树脂1.5小时，实现肽从树脂的裂解和保护基的去除。将粗肽在预冷(-18℃)的乙醚中沉淀。

MS:m/z 937.77＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝937.74).

将沉淀溶解在15mL TFA中。加入二苯基亚砜(68.06mg,0.34mmol)和苯甲醚(0.18mL,1.68mmol)的5mL TFA溶液。加入三氯甲基硅烷(0.47mL,4.17mmol)，将混合物在室温下搅拌15min。加入氟化铵(0.38g,10.3mmol)，将溶液再搅拌2min。将粗物质在预冷(-18℃)的乙醚中沉淀，并通过RP-HPLC纯化，得到14d。

产量:8.30mg(1.78μmol,82％纯度,1.4％，历经3步)CNP-34-Malhx*8TFA

MS:m/z 937.26＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝937.23).

向14d(7.34mg,1.57μmol)的在含有0.1％TFA(v/v)的200μL 1/1(v/v)乙腈/水中的溶液中加入13c(20mg,3.90μmol)的在含有0.1％TFA(v/v)的200μL水中的溶液，然后加入200μL 0.5M乙酸盐缓冲液(pH＝5.00)。将混合物在室温下孵育30min。通过RP-HPLC纯化缀合物14e。

产量:9.92mg(1.01μmol,57％)缀合物14e*8TFA

实施例15

永久的N-末端CNP-38PEG 5kDa缀合物15e的合成

根据下面的流程合成缀合物15e：

如对14d所述那样合成化合物15d，除了将具有游离N-末端在TCP tentagel树脂上的侧链保护的CNP-38 15a(1.34g,0.12mmol)用作起始原料。

产量:15.6mg(2.94μmol,6.6％)CNP-38-Malhx*9TFA

MS:m/z 1064.05＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝1064.04).

如对14e所述那样合成缀合物15e，除了将15d(8.34g,1.58mmol)用作起始原料。

产量:9.47mg(0.91μmol,31％)缀合物15e*9TFA

实施例16

永久的Lys12CNP-34PEG 5kDa缀合物16e的合成

根据下面的流程合成缀合物16e:

根据材料和方法中给出的程序，将1.00g(0.10mmol)具有Boc保护的N-末端和ivDde保护的Lys12侧链的在TCP tentagel树脂上的侧链保护的CNP-34进行ivDde脱保护，获得16a。

如对14d所述那样合成化合物16d，除了将树脂16a(1.00g,0.10mmol)用作起始原料。

产量:17.0mg(3.65μmol,3.7％)CNP-34-Lys12-Malhx*8TFA

MS:m/z 937.25＝[M+4H]⁴⁺,([M+4H]⁴⁺的计算的单一同位素质量＝937.23).

如对14e所述那样合成缀合物16e，除了将16d(17mg,3.65μmol)用作起始原料。

产量:12.2mg(1.25μmol,34％)缀合物16e*8TFA

实施例17

永久的Lys16CNP-34PEG 5kDa缀合物17e的合成

根据下面的流程合成缀合物17e:

根据材料和方法中给出的程序，将0.78g(0.07mmol)具有Boc保护的N-末端和ivDde保护的Lys16侧链的在TCP tentagel树脂上的侧链保护的CNP-34进行ivDde脱保护，获得17a。

如对14d所述那样合成化合物17d，除了将树脂17a(0.78g,0.13mmol)用作起始原料。

产量:5.39mg(1.16μmol,1.7％)CNP-34-Lys16-Malhx*8TFA

如对14e所述那样合成缀合物17e，除了将17d(5.39mg,1.16μmol)用作起始原料。

产量:10.7mg(1.09μmol,94％)缀合物17e*8TFA

实施例18

永久的Lys22CNP-34PEG 5kDa缀合物18e的合成

根据下面的流程合成缀合物18e:

根据材料和方法中给出的程序，将1.07g(0.11mmol)具有Boc保护的N-末端和ivDde保护的Lys12侧链的在TCP tentagel树脂上的侧链保护的CNP-34进行ivDde脱保护，获得18a。

如对14d所述那样合成化合物18d，除了将树脂18a(1.07g,0.11mmol)用作起始原料。

产量:5.20mg(1.12μmol,1.0％)CNP-34-Lys22-Malhx*8TFA

如对14e所述那样合成缀合物18e，除了将18d(5.2mg,1.12μmol)用作起始原料。

产量:4.20mg(0.43μmol,38％)缀合物18e*8TFA

实施例19

永久的Lys26CNP-38PEG 5kDa缀合物19e的合成

根据下面的流程合成缀合物19e:

根据材料和方法中给出的程序，将(0.865g,0.10mmol)具有Boc保护的N-末端和ivDde保护的Lys26侧链的在TCP tentagel树脂上的侧链保护的CNP-38进行ivDde脱保护，获得19a。

如对14d所述那样合成化合物19d，除了将树脂19a(0.865g,0.10mmol)用作起始原料。

产量:10.3mg(1.95μmol,2.0％)CNP-38-Lys26-Malhx*9TFA

MS:m/z 1064.05＝[M+4H]⁴⁺,(的计算的单一同位素质量[M+4H]⁴⁺＝1064.04).

如对14e所述那样合成缀合物19e，除了将19d(4.70mg,1.10μmol)用作起始原料。

产量:3.20mg(0.31μmol,28％)缀合物19e*9TFA

实施例20

体外释放动力学

CNP缀合物10f和11i以约1mg缀合物/mL的浓度溶于含有3mM EDTA和10mM甲硫氨酸(pH 7.4)的PBS缓冲液中。将溶液无菌过滤，并在37℃下孵育。在时间点取出等分试样并通过RP-HPLC和ESI-MS分析。将与释放的CNP相关的UV-信号积分并相对于孵育时间作图。

应用曲线拟合软件来估计相应的释放半场。

结果：

对于缀合物10f，获得8.5d(±1d)的释放半衰期。

对于缀合物11i，获得9.5d(±1.5d)的释放半衰期。

实施例21

中性肽链内切酶在体外消化CNP变体

为了确定在中性肽链内切酶(NEP)存在下各种CNP变体(包括不同肽链长度和使用不同聚乙二醇化位点和PEG分子的PEG化)的体外稳定性，建立了NEP消化测定法。该测定法参照t₀-时间点监测随时间推移的未消化的CNP变体(用内标PFP标准化)的降低。

具体来讲，将重组人NEP(2.5μg/mL终浓度)和标准五氟苯酚(PFP；40μg/mL终浓度)加至在消化缓冲液(50mM Tris-HCl,pH 7.4,10mM NaCl)中的CNP变体(100μg CNP当量/mL)中。将溶液在37℃和500rpm下孵育长达4天。以不同的时间间隔采取样品。通过加入TCEP((三(2-羧基乙基)膦；25mM终浓度)并将混合物在95℃、500rpm下孵育5min的还原和热变性组合来终止反应。使用HPLC-MS确定所得反应产物。各CNP变体的半衰期通过CNP和PFP的HPLC-UV峰面积随时间推移的比率变化计算。为了补偿蛋白酶活性的变化，在每批次测量中进行CNP-38或CNP-34消化作为参考。

表1列出了基于体外NEP裂解测定的不同长度的和具有连接到不同侧链的各种PEG分子的各种CNP变体的半衰期。

1)由于实验之间NEP催化活性的变化，所有CNP-34半衰期测量形成平均值(4.15h)，并且使用系数将CNP-34缀合物的半衰期测量值相对该平均值标准化，以计算调整后的t_1/2。

2)由于实验之间NEP催化活性的变化，所有CNP-38半衰期测量形成平均值(12.10h)，并且使用系数对CNP-38缀合物的半衰期测量值相对该平均值标准化，以计算调整后的t_1/2。

对NEP的抵抗等级顺序如下：较长的CNP-变体(CNP-38)比较短的CNP变体(CNP-34)更稳定，CNP-34又比更短的CNP-22稳定。PEG-连接位点的顺序如下：N-末端>紧临环>环。因此，对于所测试的缀合物，N末端PEG连接赋予对于NEP的蛋白水解消化的最高稳定性。在Lys26的PEG化的CNP-38的稳定性可以随PEG尺寸的增加而增加。

实施例22

具有CNP变体的在NIH-3T3细胞中功能性cGMP刺激

在使用NIH-3T3细胞(小鼠胚胎成纤维细胞系)的基于细胞的测定中测定CNP变体的功能活性。这些细胞在细胞表面表达内源性NPR-B。用CNP刺激NPR-B导致被市售的cGMP测定法检测到的第二信使cGMP的胞内产生。将NIH-3T3细胞在含有5％FBS和5mM谷氨酰胺的DMEM F-12培养基中在37℃和5％CO₂下常规培养。对于每个测定，将50,000个细胞重新混悬于刺激缓冲液(具有IBMX的Dulbecco’s PBS)中，并与不同浓度的CNP变体一起孵育。CNP(用0.2％BSA在PBS中稀释)。在37℃和5％CO₂下孵育30min后，将细胞裂解，并用市售的cGMPTR-FRET测定(Cisbio,cGMP试剂盒，目录号62GM2PEB)测定cGMP水平。聚乙二醇化CNP变体总是在相同实验批次中与非PEG化版本相比较表征。如果可能，通过所得的剂量-反应曲线的EC50-参数(具有共同斜率的限制模型)进行残留活性的评价。

表2：相对于非聚乙二醇化CNP变体测定的基于细胞的测定法中聚乙二醇化CNP变体的残留NPR-B活性

化合物	CNP变体	PEG化	残留活性[％]
				15e	CNP-38	5kDa PEG,N-末端	14
19e	CNP-38	5kDa PEG,Lys26	<1
				12g	CNP-38	4x10kDa PEG,Lys26	<<1

比较测试的PEG连接位点，Lys26(环-赖氨酸)处的连接显示出最高的功能活性降低，而N-末端连接显示相对高的残留功能活性值。增加PEG尺寸导致CNP分子更好的屏蔽和更低的残留功能活性。

实施例23

通过每日皮下推注或连续皮下输注用CNP-38治疗5周后，FVB小鼠的生长研究

进行这项研究以测试CNP-38的每日皮下推注vs.连续皮下输注对动物生长的影响。通过每日皮下推注或通过在肩胛骨区域连续皮下输注超过35天，向21天至22天龄的野生型FVB雄性小鼠(n＝9/组)给予50nmol/kg/d CNP-38或溶媒(含有5％蔗糖和1％苄醇的30mM乙酸盐pH 4)。连续输注通过Alzet渗透泵1002型进行第1-2周，其后为1004型，持续3-5周。在研究第7天(泵1002型)或研究第25天(泵1004型)，对于平均动物体重调节泵中的CNP-38浓度。通过全身长度测量和右股骨和胫骨的X射线测量，在第35天测定生长。

通过每日皮下推注治疗的动物的结果：在第35天，与溶媒处理的动物相比，CNP-38处理的动物的总身体长度为110.2％，右股骨长度为105.6％，右胫骨长度为104.0％。

通过连续皮下输注治疗的动物的结果：在第35天，与溶媒处理的动物相比，CNP-38处理的动物的总身体长度为121.7％，右股骨长度为107.5％，右胫骨长度为112.2％。

结论是CNP-38的连续皮下输注或相关缓释制剂(例如缓释CNP-38前药)比每日皮下推注更有效地引发垂直和轴向骨骼生长。

实施例24

永久的Lys26CNP-38PEG4x10kDa缀合物12g在食蟹猴中的药代动力学研究

进行这项研究以显示12g作为食蟹猴中缓释CNP-38前药的模型化合物的适用性。雄性食蟹猴(2-4岁，3.5-4.1kg)接受单次静脉注射(n＝3动物)或单次皮下(n＝2动物)的12g施用，剂量为0.146mg CNP-38eq/kg。施用后采集血样高达168小时，产生血浆。如材料和方法所述，通过定量胰蛋白酶消化后的N-末端标签肽(序列：LQEHPNAR)和C-末端标签肽(序列：IGSMSGLGC)来测定血浆CNP-38浓度。

结果：剂量施用被良好耐受，施用期间和施用后无明显的不适征象。整个研究中任何时候都没有观察到施用位点的反应。在静脉内注射后，在15min(分析的最早时间点)观察到CNP-38t_max，随后CNP-38含量缓慢衰减，半衰期约为24小时。皮下注射后，CNP-38浓度达到峰值，t_max为48h。在168小时，CNP-38浓度仍然高达约50％c_max。生物利用度约为50％。

在施用后直到168小时，获得了N-和C-末端标签肽的相似PK曲线，表明缀合物中存在完整的CNP-38。

在数天内有利的持久的PK和缀合物中CNP-38的稳定性表示永久性模型化合物Lys26CNP-38PEG 4x10kDa缀合物12g在皮下注射后作为缓释CNP-38前药的适用性。可以得出结论，具有暂时的Lys26连接的CNP-38(例如11i)的相似缀合物是在数天内提供持久水平的释放生物活性CNP-38的合适的CNP-38前药。

实施例25

暂时的Lys26CNP-38PEG4x10kDa缀合物11i在食蟹猴中的药代动力学研究

进行这项研究是为了显示11i在食蟹猴中作为缓释CNP-38前药的适用性。如实施例24所述进行研究。如实施例24所述分析总CNP-38含量(缀合和释放的CNP-38)的血浆水平。为了分析游离CNP-38的血浆含量，血液样品必须在取出后酸化(例如通过加入20体积％的0.5M柠檬酸钠缓冲液pH 4)以停止从缀合物中进一步释放CNP-38。血浆中的游离CNP-38水平可以例如使用结合CNP环区的CNP抗体通过ELISA确定，如文献(美国专利8,377,884B2)所述，或通过LC-MS/MS测定。

实施例26

在食蟹猴中暂时的Lys26CNP-38PEG4x10kDa缀合物11i的药效学研究

使用暂时的Lys26CNP-38PEG4x10kDa缀合物11i每周治疗对骨生长和骨生长相关生物标志物水平的影响在食蟹猴中进行评估。每周以16或56nmol/kg/周皮下注射8只正常的雄性少年食蟹猴(大约2岁，在研究开始时)。四只猴子以8nmol/kg/天的CNP-38每日剂量皮下注射，导致56nmol/kg/周的每周累积剂量。另外四只猴子施用溶媒作为对照。治疗的总长度为6个月。通过数字X射线和磁共振成像以及外部测量肢体和体长进行生长板扩张和骨生长的各种测量。定期收集血液和尿液样本进行临床病理学和测量。在研究结束时，进行大体病理学、组织样本在组织学上进行评估以评估疗效和安全性。

缩写:

ACH 软骨发育不全

ACN 乙腈

AcOH 乙酸

Bn 苄基

Boc 叔丁氧羰基

BSA 牛血清白蛋白

cGMP 环鸟苷酸单磷酸

CNP C型利钠肽

COMU (1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨

基-吗啉代-碳正离子六氟磷酸盐

conc. 浓的

d 天

DBU 1,3-二氮杂二环[5.4.0]十一碳烯

DCC N,N’-二环己基碳二亚胺

DCM 二氯甲烷

DIC N,N’-二异丙基碳二亚胺

DIEA N,N-二异丙基乙基胺

DIPEA N,N-二异丙基乙基胺

DMAP 二甲基氨基-吡啶

DMEM Dulbecco改良的Eagle培养基

Dmb 2,4-二甲基苄基

DMEM Dulbecco改良的eagle培养基

DMF N,N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

DTT 二硫苏糖醇

EC50 半数最大有效浓度

EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺

EDTA 乙二胺四乙酸

ELISA 酶联免疫吸附测定

eq 当量化学计量当量

ESI-MS 电喷雾离子化质谱法

Et 乙基

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

FBS 胎牛血清

FGFR3 成纤维细胞生长因子受体3

Fmoc 9-芴基甲基氧基羰基

h 小时

HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲

六

氟磷酸盐

HCH 软骨发育不良

HFIP 六氟异丙醇

HPLC 高效液相色谱

HOBt N-羟基苯并三唑

IBMX 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤

iPrOH 2-丙醇

iv 静脉内

ivDde 4,4-二甲基-2,6-二氧代环己基-1-亚基)-3-甲基丁基

LC 液相色谱

LTQ 线性阱四极杆

Mal 3-马来酰亚氨基丙基

Me 甲基

MeOH 甲醇

min 分钟

Mmt 单甲氧基三苯甲基

MS 质谱/质谱法

MSA 甲磺酸

MW 分子量

m/z 质荷比

NEP 中性肽链内切酶

NHS N-羟基琥珀酰亚胺

NPR 利钠肽受体

OtBu 叔丁基氧基

PBS 磷酸盐缓冲盐水

PEG 聚(乙二醇)

PFP 五氟苯酚

pH 氢离子浓度(potentia Hydrogenii)

Pr 丙基

PyBOP 苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐

Q-TOF 四极杆飞行时间

RP-HPLC 反相高效液相色谱

rpm 每分钟转数

rt 室温

SIM 单离子监测

SEC 尺寸排阻色谱

sc 皮下

t_1/2 半衰期

TCEP 三(2-羧基乙基)膦

TCP 三苯甲基氯聚苯乙烯

TD 致死性发育不良

TES 三乙基硅烷

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

TIPS 三异丙基硅烷

TMEDA N,N,N′N′-四甲基乙二胺

Tmob 2,4,6-三甲氧基苄基

TR-FRET 时间分辨荧光能量转移

Trt 三苯基甲基，三苯甲基

UPLC 超高效液相色谱

UV 紫外线

vs. 相比

ZQ 单四极杆

Claims

1.CNP前药或其药学上可接受的盐，其中所述前药具有式(Ia)或(Ib)

其中

-D是CNP部分；

-L¹-是可逆的前药连接体部分，其在生理条件下不存在酶的情况下是可切割的，半衰期为1小时至6个月，并且以其游离形式释放药物，其中所述生理条件为水性缓冲液，pH 7.4，37℃；

其中-L¹-缀合至-D的环部分的氨基酸残基的侧链或至-D的环部分的主链，并且-L¹-缀合至在-D的位置26的赖氨酸，其中-D具有SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:24的序列，并且所述环部分具有SEQ ID NO:96的氨基酸序列，所述环位于形成二硫化物桥的两个半胱氨酸残基之间；

-L²-是单一化学键或间隔体部分；

-Z是具有至少10kDa分子量的水溶性支链基于PEG的聚合物部分；

x是选自下列的整数：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15和16；且

y是选自下列的整数：1、2、3、4和5；

其中所述CNP前药的总质量为至少30kDa；

其中部分-L¹-具有式(II):

其中虚线指示通过形成酰胺键连接至为CNP部分的-D的氮上；

-X-是-C(R⁴R^4a)-；or-N(R⁴)-；

X¹是C；或S(O)；

-X²-是-C(R⁸R^8a)-；或-C(R⁸R^8a)-C(R⁹R^9a)-；

＝X³是＝O；＝S；或＝N-CN；

-R³、-R^3a独立地选自-H；和C_1-6烷基，前提是如果-R³、-R^3a中的一个或两个不是-H，则它们通过SP³-杂化的碳原子连接至它们所连接的N上；

任选地，一个或多个-R^1a/-R^4a、-R^8a/-R^9a对形成化学键；

任选地，一个或多个-R¹/-R^1a、-R²/-R^2a、-R⁴/-R^4a、-R⁸/-R^8a、-R⁹/-R^9a对与它们所连接的原子一起形成C_3-10环烷基；或3-至10-元杂环基；

任选地，一个或多个-R¹/-R⁴、-R⁸/-R⁹、-R²/-R³对与它们所连接的原子一起形成环A；

任选地，-R³/-R^3a与它们所连接的氮原子一起形成3-至10-元杂环；

其中-L¹-被-L²-Z取代，前提是式(II)中的用星号标记的氢不被-L²-Z替换。

2.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中所述CNP前药具有式(Ia)。

3.权利要求1或2的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中x是1。

4.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-D具有SEQ ID NO:24的序列。

5.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-R⁴被-L²-Z取代。

6.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中X¹是C。

7.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中＝X³是＝O。

8.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-X²-是-C(R⁸R^8a)-。

9.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-R¹和-R^1a是-H。

10.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-R²和-R^2a是-H。

11.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-R³是-H，且-R^3a是甲基。

12.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-R⁴和-R^4a是-H。

13.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-R⁸和-R^8a是-H。

14.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-L²-选自-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^y1)-、-S(O)₂N(R^y1)-、-S(O)N(R^y1)-、-S(O)₂-、-S(O)-；-N(R^y1)S(O)₂N(R^y1a)-、-S-、-N(R^y1)-、-OC(OR^y1)(R^y1a)-、-N(R^y1)C(O)N(R^y1a)-、-OC(O)N(R^y1)-、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基；其中-T-、C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个相同或不同的-R^y2取代，并且其中C_1-50烷基、C_2-50烯基和C_2-50炔基任选被一个或多个选自以下的基团中断：-T-、-C(O)O-、-O-、-C(O)-、-C(O)N(R^y3)-、-S(O)₂N(R^y3)-、-S(O)N(R^y3)-、-S(O)₂-、-S(O)-、-N(R^y3)S(O)₂N(R^y3a)-、-S-、-N(R^y3)-、-OC(OR^y3)(R^y3a)-、-N(R^y3)C(O)N(R^y3a)-和-OC(O)N(R^y3)-；

各-R^y2独立地选自：卤素、-CN、氧代(＝O)、-COOR^y5、-OR^y5、-C(O)R^y5、-C(O)N(R^y5R^y5a)、-S(O)₂N(R^y5R^y5a)、-S(O)N(R^y5R^y5a)、-S(O)₂R^y5、-S(O)R^y5、-N(R^y5)S(O)₂N(R^y5aR^y5b)、-SR^y5、-N(R^y5R^y5a)、-NO₂、-OC(O)R^y5、-N(R^y5)C(O)R^y5a、-N(R^y5)S(O)₂R^y5a、-N(R^y5)S(O)R^y5a、-N(R^y5)C(O)OR^y5a、-N(R^y5)C(O)N(R^y5aR^y5b)、-OC(O)N(R^y5R^y5a)和C_1-6烷基；其中C_1-6烷基任选被一个或多个相同或不同的卤素取代；且

15.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-L²-是C_1-20烷基链，其任选被一个或多个独立选自以下的基团中断：-O-、-T-和-C(O)N(R^y1)-；且该C_1-20烷基链任选被一个或多个独立选自以下的基团取代：-OH、-T和-C(O)N(R^y6R^y6a)；其中-R^y1、-R^y6、-R^y6a独立地选自H和C_1-4烷基，且其中T选自苯基、萘基、茚基、茚满基、四氢化萘基、C_3-10环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂二环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基。

16.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-L²-具有式(i)

其中

用星号标记的虚线指示连接至-L¹-；

未标记的虚线指示连接至-Z；

-R¹选自-H、C_1-6烷基、C_2-6烯基和C_2-6炔基；

其中式(i)的部分任选被进一步取代。

17.权利要求1的前药或其药学上可接受的盐，其中-Z具有约40kDa的分子量。

18.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-Z包含部分

19.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐，其中-Z包含式(a)的部分

其中

虚线指示连接至-L²-或至-Z的其余部分；

BP^a是选自以下的分支点：-N<、-CR<和>C<；

-R选自-H和C_1-6烷基；

如果BP^a是-N<或-CR<，则a是0，且如果BP^a是>C<，则a是1；

-P^a’、-P^a”和-P^a”’独立地是聚合物部分。

20.权利要求1的前药或其药学上可接受的盐，其中所述CNP前药的残留活性小于10％。

21.药物组合物，其包含权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐和至少一种赋形剂。

22.权利要求21的药物组合物，其中所述药物组合物具有pH 4至pH 6的pH范围，并包括端点。

23.权利要求1的CNP前药或其药学上可接受的盐或权利要求21或22的药物组合物用于制备用于治疗可用CNP治疗的疾病的药物中的用途。

24.权利要求23的用途，其中所述疾病选自软骨发育不全、软骨发育不良、身材矮小、侏儒症、骨软骨发育不良、致死性发育不良、成骨不全、软骨成长不全、点状软骨发育不全、纯合子软骨发育不全、屈肢骨发育不良、先天性致死性低磷酸酯酶症、围产期致死型成骨不全、短肋多指综合症、肢根型点状软骨发育不全、詹森型干骺端发育不良、先天性椎体骨骺结构不良、骨发育不全症、扭曲性骨发育不全、先天性短股骨、兰格型肢中骨发育不良、Nievergelt型肢中骨发育不良、Robinow综合征、Reinhardt综合征、肢端发育不全、周围性骨发育障碍、Kniest发育不良、纤维软骨发生、Roberts综合征、肢端肢中骨发育不良、短肢症、Morquio综合征、Kniest综合征、后生营养性发育不良、脊椎骨骺干骺端发育不良、神经纤维瘤病、Legius综合征、LEOPARD综合征、Noonan综合征、遗传性牙龈纤维瘤病、1型神经纤维瘤病、Legius综合征、Cardiofaciocutaneous综合征、Costello综合征、SHOX缺乏症、特发性身材矮小、生长激素缺乏症、骨关节炎、颅骨锁骨发育不良、颅缝早闭、短指/趾、屈曲指/趾、多指/趾、并指/趾、Dyssegmental发育不良、内生软骨瘤、纤维性发育不良、遗传性多发性外生骨疣、低磷酸盐血症性佝偻病、Jaffe-Lichtenstein综合征、Marfan综合征、McCune-Albright综合征、骨硬化病和脆弱性骨硬化。

25.权利要求23的用途，其中所述疾病是眼科疾病。

26.权利要求23的用途，其中所述疾病是软骨发育不全。

27.权利要求23的用途，其中颅缝早闭选自由以下项组成的组：Muenke综合征、Crouzon综合征、Apert综合征、Jackson-Weiss综合征、Pfeiffer综合征或Crouzonodermoskeletal综合征。