JP2023530273A - Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド及び癌の処置におけるその方法 - Google Patents

Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド及び癌の処置におけるその方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2023530273A
JP2023530273A JP2022575994A JP2022575994A JP2023530273A JP 2023530273 A JP2023530273 A JP 2023530273A JP 2022575994 A JP2022575994 A JP 2022575994A JP 2022575994 A JP2022575994 A JP 2022575994A JP 2023530273 A JP2023530273 A JP 2023530273A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
acting
long
amino acid
cnp
cancer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022575994A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2021252931A5 (ja
Inventor
宏文 立花
基文 熊添
愛健 田中
崇 野尻
ジェラルド カスティロ，
アキコ ニシモト－アシュフィールド，
エライジャー ボロティン，
ヤオ ヤオ，
Original Assignee
ファーマイン コーポレイション
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ファーマイン コーポレイション filed Critical ファーマイン コーポレイション
Publication of JP2023530273A publication Critical patent/JP2023530273A/ja
Publication of JPWO2021252931A5 publication Critical patent/JPWO2021252931A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/2242—Atrial natriuretic factor complex: Atriopeptins, atrial natriuretic protein [ANP]; Cardionatrin, Cardiodilatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/593—Polyesters, e.g. PLGA or polylactide-co-glycolide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/58—Atrial natriuretic factor complex; Atriopeptin; Atrial natriuretic peptide [ANP]; Cardionatrin; Cardiodilatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本開示は、異常な血管系を有する対象を処置する方法であって、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、この対象に投与することによる方法に関する。本開示は、さらに、細胞傷害性Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の活性を増加させることが必要な対象を処置することであって、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、この対象に投与することによる処置することに関する。

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０２０年６月１２月に出願された米国特許出願第６３／０３８，６０６号明細書及び２０２０年６月１５日に出願された米国特許出願第６３／０３９，２２５号明細書の利益を主張しており、これらのそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表に関する陳述
本願に関連する配列表は、ハードコピーの代わりにテキスト形式で提供されており、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称は、７４０４８＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ．ｔｘｔである。このテキストファイルは、１６ＫＢであり、２０２１年６月１１日に作成された。
既存の癌治療
癌は、世界で一番多い死因であり、２００４年以降、毎年７００～８００万人が死亡している（全死亡の約１３％）。世界での癌による死亡は増加し続けると予想されており、２０３０年には推定１２００万人が死亡し、肺癌、胃癌、肝癌、結腸癌、及び乳癌による死亡が最も多く見られる。２０１９年では、米国において１８０万人が癌と診断されており、肺癌、結腸癌、膵癌、乳癌、又は前立腺癌、及び肝癌が５０万例を占めていた。
既存の癌処置は、この死亡率の低下には不十分であり、そのため、革新的な処置が必要とされている。放射線又は化学療法等の既存の癌処置は、患者の苦痛を増加させるという重度の副作用を伴う。癌を処置するための最近のアプローチは、癌若しくは腫瘍組織内の細胞傷害性Ｔ細胞を活性化させることにより、及び／又はＴｒｅｇ免疫細胞を減少させるか若しくは除去して、癌又は腫瘍組織中での細胞傷害性Ｔ細胞の増殖を促進することにより、患者自身の免疫系を活性化させて腫瘍又は癌を攻撃させ、それにより癌又は腫瘍組織を損傷させるか又は除去することである。例えば、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤を使用して、免疫チェックポイントタンパク質又はその対応するリガンドに直接結合し得、その結果、癌若しくは腫瘍組織内の細胞傷害性Ｔ細胞を活性化させることにより、及び／又はＴｒｅｇ免疫細胞を減少させるか若しくは除去して癌組織若しくは腫瘍中の細胞傷害性Ｔ細胞の増殖を促進させることにより、免疫系を活性化させて腫瘍又は癌細胞を攻撃させ、それにより癌又は腫瘍組織が損傷するか、又は除去される。癌処置のための別のアプローチは、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）及び／又は細胞傷害性Ｔ細胞を活性化し、同時にＴｒｅｇ細胞及び／又は骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を抑制することである。
癌を処置するためのさらなるアプローチは、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）療法である。ＣＡＲ Ｔ細胞療法では、患者のＴ細胞（免疫系細胞の一種）を、癌細胞を攻撃するようにプログラムされ得るように実験室で変化させる。例えば、患者の血液からＴ細胞を採取し、次いで、実験室で、この患者の癌細胞上のある特定のタンパク質に結合する特殊な受容体の遺伝子を付加する。この特殊な受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と呼ばれている。実験室で、このＣＡＲ Ｔ細胞を大量に増殖させ、患者に注入する。ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、ある特定のタイプの癌の処置で研究されている。ＣＡＲ Ｔ細胞療法はまた、キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法とも呼ばれている。ＣＡＲ特異性は、腫瘍を認識するモノクローナル抗体の抗原結合部位に由来する細胞外ドメインに由来しており、細胞内ドメインは、Ｔ細胞が活性化される通常の一連の事象を繰り返し、刺激ドメイン及び同時刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２８又は４－１ＢＢ（ＣＤ１３７））を組み込んで、ＣＡＲ Ｔ細胞の生存及び増殖を増強する。ＣＡＲ Ｔ細胞は、それ自体の共刺激シグナル伝達を持つことから、理論的には、非修飾Ｔ細胞と比較して腫瘍細胞により下方制御されにくい。ＣＡＴ Ｔ細胞の副作用は、インフルエンザのような症状と類似しているサイトカイン放出症候群を含むが、重篤で致死的となることがあり得る。さらなる副作用として、神経学的事象が挙げられ、例えば、脳症（脳の疾患、損傷、機能不全）、錯乱、失語症（理解及び会話の困難）、眠気、興奮、発作、平衡感覚の喪失、及び意識変容が挙げられる。
免疫系の細胞傷害性／キラー細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞）を活性化させて腫瘍又は癌を攻撃させ得るあらゆる薬物が、多数の癌で有効であると考えられる。しかしながら、細胞傷害性Ｔ細胞免疫賦活薬又はナチュラルキラー細胞免疫賦活薬（例えば、免疫チェックポイントタンパク質又はそのリガンドに直接結合して腫瘍破壊を促進する免疫チェックポイント阻害剤）の使用により、重度の自己免疫疾患、及び／又は健康な臓器への損傷も引き起こされる可能性がある。このリスクにもかかわらず、いくつかの細胞傷害性細胞免疫賦活薬が、その高いベネフィット（例えば生存率）対リスク（例えば免疫関連の副作用）比のために、様々な癌又は悪性腫瘍の処置用に開発されて米国食品医薬品局（Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）により承認されている。
例えば、免疫チェックポイントタンパク質ＰＤ－１阻害剤（例えば、ニボルマブ及び／又はペムブロリズマブ（抗ＰＤ １抗体））が、下記の処置用にＦＤＡにより承認された：扁平細胞頭頸部癌、悪性黒色腫、メルケル細胞癌、肝細胞癌、進行腎細胞癌、高マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）又はミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）に起因する癌、子宮頚癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃がん及びＧＥＪ癌腫（食道胃接合部の腺癌）、ＰＭＢＣＬ（原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、稀なＢ細胞非ホジキンリンパ腫）、古典的なホジキンリンパ腫、並びに局所進行性又は転移性の尿路上皮癌。複数種の癌に対する有用性を有する細胞傷害性免疫賦活薬のいくつかの代表例として、下記が挙げられる：１）ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））、改訂された処方情報：０２／２０１９；２）ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））、改訂された処方情報：０２／２０１９；３）イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））、改訂された処方情報：０７／２０１８；４）アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））、改訂された処方情報：０３／２０１９；５）アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標））、改訂された処方情報：１０／２０１８；６）デュルバルマブ（Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標））、改訂された処方情報：０２／２０１８；及び７）セミピリマブ（ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）（Ｌｉｂｔａｙｏ（登録商標））、改訂された処方情報：０９／２０１８）。しかしながら、これらの免疫賦活薬の有効性は、依然として限定的であり（例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれるＦａｓｈｏｙｉｎ－Ａｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ ２０１９；２４：１０３－１０９を参照されたい）、これらの免疫賦活薬には、重篤な自己免疫副作用のリスクがある。それにもかかわらず、多くのタイプの癌の処置に対する細胞傷害性細胞免疫賦活薬の有用性により、ＦＤＡは、複数の癌に対していくつかの細胞傷害性細胞免疫賦活薬を承認しており、これらの癌として下記が挙げられる：頭頸部、皮膚（例えば、メルケル、扁平上皮、黒色腫）、肝臓（例えば、肝細胞癌）、腎臓、子宮頸部、肺（例えば、小細胞及び非小細胞）、乳房、胃、結腸、食道、リンパ節（例えば、ホジキンＰＭＢＣＬ及び非ホジキンＰＭＢＣＬ）、膵臓、胃、卵巣、並びに身体の他の臓器（例えば、高マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）又はミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）により引き起こされるもの）、尿道、膀胱、尿管、腎盂及び周辺臓器（尿路上皮癌）の癌。
ＣＮＰ及びＮＰＲＢ受容体
ＣＮＰは、１９９０年にＳｕｄｏｈ他によりブタの脳から初めて単離されており、２２個のアミノ酸残基からなるペプチドである。例えば、Ｓｕｄｏｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９８９；１５９：１４２７－１４３４を参照されたい。ＣＮＰは、環状構造を有しており、関連するナトリウム利尿ペプチドである心房ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）及びＢ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）と構造が類似しているが、カルボキシ末端の伸長を欠いている。例えば、Ｈｕｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．１９９４；７８：１４２８－１４３５を参照されたい。ＣＮＰは、様々な種間で高度に保存されたナトリウム利尿ペプチドである。例えば、Ｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１９９２；１３：２１７－２４９を参照されたい。例えば、ヒトでは、ＣＮＰ遺伝子（ＮＰＰＣ）は２番染色体に位置しているが、マウスＣＮＰ遺伝子は１番染色体に位置している。ＣＮＰ遺伝子は、２つのエクソン及び１つのイントロンで構成されている。例えば、Ｏｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．１９９４；９３：１９１１－１９２１１０；及びＯｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ．１９９４；１５（２４）：３８３－３８７を参照されたい。これは、プレプロホルモン又は１２６個アミノ酸残基親ＣＮＰペプチドとして産生され、カルボキシ末端での２３個のアミノ酸残基の除去後に１０３個アミノ酸残基プロＣＮＰへと変換され、酵素フューリンにより５３個アミノ酸残基含有ＣＮＰ－５３及び２２個アミノ酸残基含有ＣＮＰへとさらにプロセシングされる。例えば、Ｌｕｍｓｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．２０１０；１６：４０８０－４０８８；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００３；２７８：２５８４７－２５８５２；及びＣｈｏｐｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｄｉａｎ Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２０１３；１７：８３－９０を参照されたい。組織中では、比較的高分子量のＣＮＰ－５３（ＣＮＰ ５１－１０３）が優位であり、ＣＮＰ－２２（ＣＮＰ ８２－１０３）は、血漿及び脳脊髄液中で主に見出されるが、両方とも、全てのナトリウム利尿ペプチドに共通の１７個アミノ酸残基環構造を含む。ＡＮＰ及びＢＮＰと比較して、ＣＮＰの血漿中半減期は比較的短く、ヒトでは約２～３分である。例えば、Ｐｏｔｔｅｒ ＬＲ．ＦＥＢＳ Ｊ．２０１１；２７８：１８０８－１８１７を参照されたい。正常な血漿中ＣＮＰ濃度（両方の形態）は、１ミリリットル当たり低フェムトモルの範囲である。例えば、Ｄａｓ Ｂ．Ｂ．ａｎｄ Ｓｏｌｉｎｇｅｒ Ｒ．，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｈｅｍａｔｏｌ Ａｇｅｎｔｓ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２００９，７，２９－４２を参照されたい。ＣＮＰは、血管系及び男性生殖腺の内皮から主に産生されて分泌されており、弛緩ペプチドとして作用する。例えば、Ｓｕｇａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１９９８；１３９：１９２０－１９２６を参照されたい。
ＣＮＰペプチドは、２種の既知の膜受容体（即ち、ナトリウム利尿ペプチド受容体Ｂ（ＮＰＲＢ）及びナトリウム利尿ペプチド受容体Ｃ（ＮＰＲＣ））を有する。ＮＰＲＢは、ＣＮＰからのメッセージを受け取り、下流シグナル伝達経路を活性化し、ＮＰＲＣは、主に、ＣＮＰのクリアランス又は分解に主に関与するクリアランス受容体である。例えば、Ｉｔｏｈ Ｈ ａｎｄ Ｎａｋａｏ Ｋ，Ｎｉｈｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ．１９９７；５５：１９２３－１９３６；Ｋｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９１；２５２：１２０－１２３；Ｓｕｇａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１９９２；１３０：２２９－２３９；及びＰｏｔｔｅｒ ＬＲ ａｎｄ Ｈｕｎｔｅｒ Ｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００１；２７６：６０５７－６０６０を参照されたい。ＮＰＲＢはまた、グアニル酸シクラーゼＢ（ＧＣ－Ｂ）又はＢ型ナトリウム利尿ペプチド受容体２（ＮＰＲ２）等の他の名称でも既知である。
残りのナトリウム利尿ペプチド受容体であるＮＰＲＡは、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）及びＢ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）により活性化されるが、ＣＮＰにより活性化されない。ＡＮＰ及びＢＮＰは、ＮＰＲＡ及びＮＰＲＢの両方を活性化するが、ＣＮＰは、ＮＰＲＢを選択的に活性化し、３種全てのナトリウム利尿ペプチドは、ＮＰＲＣ（グアニリルシクラーゼ活性を欠いている）に結合してクリアランス及び分解を受ける。例えば、Ｋｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９１；２５２：１２０－１２３；Ｓｕｇａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１９９２；１３０：２２９－２３９；及びＰｏｔｔｅｒ ＬＲ ａｎｄ Ｈｕｎｔｅｒ Ｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００１；２７６：６０５７－６０６０を参照されたい。１種の受容体の活性化と、ＮＰＲＡ受容体及びＮＰＲＢ受容体の両方の活性化との生理学的影響の差違は、不明なままである。加えて、ＣＮＰの短い半減期（２～１３分）に起因するＣＮＰの単回ボーラス投与の困難さ、及びこのボーラス投与が血圧の急激な低下と関連しているという事実により、ＣＮＰのインビボ効果の試験には支障がある。例えば、Ｋｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｓｕｒｇ Ｒｅｓ．２０１５，１９４（２）；６３１－６３７を参照されたい。実際に、ＮＰＲＢアゴニスト又はＣＮＰをボーラスとして投与して癌を処置し得るかどうかも、ＮＰＲＢアゴニスト又はＣＮＰを、免疫チェックポイント阻害剤又はＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせてボーラス用量として投与して癌を処置し得るかどうかも、本開示以前は不明である。
細胞培養研究により、ＣＮＰは、小細胞肺癌細胞の増殖を阻害せず（例えば、Ｖｅｓｅｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２００５，３５（１），６０－６９を参照されたい）、及び乳腺癌細胞の増殖を阻害せず（例えば、Ｖｅｓｅｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２００５，３５（６），３８８－３９８を参照されたい）；並びに１μＭでは、長時間作用性ナトリウム利尿ペプチド（ＬＡＮＰ）等の他のナトリウム利尿ペプチド、血管拡張剤、カリウム利尿ペプチド、及びＡＮＰの場合の１μＭと比較して、一般的な抗癌効果を有していない（例えば、Ｖｅｓｅｌｙ，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ．，２０１０，ｐ１１５９－１１６６；米国特許第７，８４６，９００号明細書を参照されたい）ことが示されている。濃度を上昇させた場合には、あまり顕著な効果は観察しなかった。細胞培養で効果を有するためには、培養培地中で１００倍の濃度が必要であった（即ち、培養培地中に１００μＭ又は２２０μｇ／ｍｌ）。しかしながら、血液中の２００μｇ／ｍｌの濃度をインビボで使用することは不可能であり、なぜならば、インビボで投与されたほとんどのペプチドに共通のバイオアベイラビリティの減少及び分解を考慮すると、２００ｍｇ／Ｋｇ超の非現実的な用量が必要なことになるからである。
さらに、ＣＮＰを、癌細胞を破壊するか又は停止させるためのボーラス用量として使用すべきではないことが知られており、なぜならば、ＣＮＰは、細胞内環状ＧＭＰを上昇させることが知られており、細胞内環状ＧＭＰの上昇は、細胞をアポトーシス死から保護し、そのため、癌処置での目的に反しているからである。細胞内環状ＧＭＰは、効率的に細胞から排出されず、そのため、ほとんどの研究では、細胞内コンパートメント中の環状ＧＭＰが測定される。他の研究（例えば米国特許第９，７５９，７２５号明細書を参照されたい）は、癌を処置するためにＣＮＰ産生を阻害することを説明しており、そのため、癌細胞を破壊するためにＣＮＰ等のグアニル酸シクラーゼＣアゴニストを使用することに反する。
欧州特許第３１８９８３５Ｂ１号明細書では、細胞内環状ＧＭＰを増加させるための、ナトリウム利尿ペプチド受容体ＧＣ－ＢアゴニストであるネイティブＣＮＰの連続注入による、悪性腫瘍の転移の抑制が説明されていた。しかしながら、欧州特許第３１８９８３５Ｂ１号明細書では、長時間作用性ＣＮＰのボーラスの投与による血漿中環状ＧＭＰの増加は説明されていない。当業者が理解するように、連続注入は、非現実的であると見なされており、利便性が低く、且つ処置方法として使用される場合には、対応する血圧低下も引き起こすことなく血漿中環状ＧＭＰを増加させない。さらに、ＣＮＰのボーラス投与は望ましくないと理解されており、なぜならば、ＣＮＰの半減期は非常に短く（２分）、従って、ボーラス用量は、任意の効果を発揮し得る前に非常に早く分解されるからである。加えて、ＣＮＰの短いスパイクは、患者にとって危険であることが既知である急性低血圧を引き起こす可能性があり、負担となる。実際に、血圧の低下を引き起こすことなくＣＮＰのボーラス投与により癌を処置することは、知られていない。例えば、横紋筋肉腫腫瘍担持マウスのＣＮＰ処置の場合には、ＣＮＰを、ボーラス用量ではなく、４週間にわたる２．５ｕｇ／ｋｇ／分の低速での注入により投与しなければならなず（例えば、Ｚｅｎｉｔａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄ．，２０１６ ５（５）ｐ７９５－８０５を参照されたい）；有効性は限定的である。加えて、そのようは処置には大きな制約があり、且つ深刻な血圧低下の可能性を低下させるために注意深く調整しなければならない注入ポンプが必要とされる。
健康なヒトボランティアでの過去の研究から、ＣＮＰボーラス注射により、収縮期血圧及び拡張期血圧の両方が、一過性であるが有意に低下し、心拍数が有意に増加し、９０分未満の血漿中環状ＧＭＰの限定的で一過性の増加のみが存在することが実証された。Ｉｇａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ Ｒｅｓ １９９８；２１：７－１３。一般的に、全てのＣＮＰにより、マウス、非ヒト霊長類、ラット、イヌ、及びヒトでは、血行動態効果又は同様の血圧低下活性が生じる。例えば、Ｗｅｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ３５３：１３２－１４９，Ａｐｒｉｌ ２０１５を参照されたい。中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）耐性が高いＣＮＰバリアント（ＢＭＮ－１１１；配列ＰＧＱＥＨＰＮＡＲＫ ＹＫＧＡＮＫＫＧＬＳ ＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲ ＩＧＳＭＳＧＬＧＣ（配列番号１））が、現在開発中である。動物及びヒトでのＢＭＮ－１１１の研究から、用量が望まし治療レベルまで上昇すると、動脈圧（ＢＰ）が低下し且つ心拍数（ＨＲ）が増加することが実証されている。ＣＮＰの様々なバリアントの調査に加えて、ＣＮＰ部分と、ＰＥＧ又はタンパク質性化合物のいずれかとをコンジュゲートさせることにより、様々なＣＮＰコンジュゲートが得られた。これらのＰＥＧ化ＣＮＰ及びキメラＣＮＰは、非ペグ化ＣＮＰバリアントで観察されたのと同様の血行動態反応を示した。これまで研究された全てのバリアントは、同様のＢＰ低下活性を示した。例えば、Ｗｅｎｄｔ， Ｊ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ３５３：１３２－１４９，Ａｐｒｉｌ ２０１５を参照されたい。従って、理論に拘束されることを望まないが、ＣＮＰ活性を有する薬物のボーラス用量を増加して薬物曝露を増加させることは、低血圧等の許容されない心血管副作用と関連している場合があると思われる。
米国特許第７，８４６，９００号明細書 米国特許第９，７５９，７２５号明細書 欧州特許第３１８９８３５Ｂ１号明細書
Ｆａｓｈｏｙｉｎ－Ａｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ ２０１９；２４：１０３－１０９ Ｓｕｄｏｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９８９；１５９：１４２７－１４３４ Ｈｕｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．１９９４；７８：１４２８－１４３５ Ｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１９９２；１３：２１７－２４９ Ｏｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．１９９４；９３：１９１１－１９２１１０ Ｏｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ．１９９４；１５（２４）：３８３－３８７ Ｌｕｍｓｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．２０１０；１６：４０８０－４０８８ Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００３；２７８：２５８４７－２５８５２ Ｃｈｏｐｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｄｉａｎ Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２０１３；１７：８３－９０ Ｐｏｔｔｅｒ ＬＲ．ＦＥＢＳ Ｊ．２０１１；２７８：１８０８－１８１７ Ｄａｓ Ｂ．Ｂ．ａｎｄ Ｓｏｌｉｎｇｅｒ Ｒ．，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｈｅｍａｔｏｌ Ａｇｅｎｔｓ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２００９，７，２９－４２ Ｓｕｇａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１９９８；１３９：１９２０－１９２６ Ｉｔｏｈ Ｈ ａｎｄ Ｎａｋａｏ Ｋ，Ｎｉｈｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ．１９９７；５５：１９２３－１９３６ Ｋｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９１；２５２：１２０－１２３ Ｓｕｇａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１９９２；１３０：２２９－２３９ Ｐｏｔｔｅｒ ＬＲ ａｎｄ Ｈｕｎｔｅｒ Ｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００１；２７６：６０５７－６０６０ Ｋｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｓｕｒｇ Ｒｅｓ．２０１５，１９４（２）；６３１－６３７ Ｖｅｓｅｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２００５，３５（１），６０－６９ Ｖｅｓｅｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２００５，３５（６），３８８－３９８ Ｖｅｓｅｌｙ，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ．，２０１０，ｐ１１５９－１１６６] Ｚｅｎｉｔａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄ．，２０１６ ５（５）ｐ７９５－８０５ Ｉｇａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ Ｒｅｓ １９９８；２１：７－１３ Ｗｅｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ３５３：１３２－１４９，Ａｐｒｉｌ ２０１５
血液中環状ＧＭＰレベルを維持するか又は増強しつつ、低血圧等の心血管副作用を引き起こさない、有効で、安全で、且つ簡便な（例えばボーラス投与）癌処置が必要とされている。本開示は、これらのニーズを満たすことを目指すものであり、関連する利点もさらに提供する。
この要約は、詳細な説明において下記でさらに詳細に説明される概念の抜粋を簡略化した形で紹介するために記載されている。この要約は、特許請求されている主題の主要な特徴を特定することが意図されておらず、特許請求されている主題の範囲の画定の補助として使用されることも意図されていない。
一態様では、本開示は、任意の組織又は臓器中に異常な血管系を有する対象を処置する方法であって、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、この対象に投与することを含み、この組成物の治療上有効な量ボーラス用量を投与することにより、血管系の正常化、又は周皮細胞被覆指数（ｐｅｒｉｃｙｔｅ ｃｏａｔｉｎｇ ｉｎｄｅｘ）の少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％又は少なくとも２０％）の増加がもたらされ、この組成物は、血圧を、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、１０％を超えて、又は５％を超えて）低下させず、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、且つこの組成物は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、この組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベルであるか、又は健康な対象の平均血漿中環状ＧＭＰレベル（好ましくは、この対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）である、方法を特徴とする。この対象は、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、少数の活性化ＮＫ細胞、又は少数の細胞傷害性Ｔ細胞及び少数の活性化ＮＫ細胞の両方をさらに有する可能性がある。
別の態様では、本開示は、細胞傷害性Ｔ細胞及び／又は活性化ＮＫ細胞を増加させる方法であって、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することを含み、
この組成物の治療上有効なボーラス用量を投与することにより、この組成物の投与前のレベル又は健康な対象でのレベルを少なくとも１５％（例えば、少なくとも２０％又は少なくとも３０％）超える細胞傷害性Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の数の増加がもたらされ、この組成物の治療上有効なボーラス用量を投与することにより、血圧は、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、１０％を超えて、又は５％を超えて）低下せず、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、且つこの組成物は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、この組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベルであるか、又は健康な対象の平均血漿中環状ＧＭＰレベル（好ましくは、この対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）である、方法を特徴とする。
さらに別の態様では、本開示は、対象を処置する方法であって、この対象は、任意の組織又は臓器中に異常な血管系を有しており、且つこの対象は、状態（ｉ）～（ｖｉｉｉ）：（ｉ）少数の細胞傷害性Ｔ細胞、（ｉｉ）少数の活性化ＮＫ細胞、（ｉｉｉ）多数のＴｒｅｇ細胞、（ｉｖ）ＴＧＦβの高レベルの発現、（ｖ）Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、（ｖｉ）多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ、（ｖｉｉ）Ｂｖ８の高レベル若しくは発現；又は（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合わせを有するか、又はこの対象は、（ｉｘ）～（ｘｖｉ）：（ｉｘ）細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加；（ｘ）活性化ＮＫ細胞の増加；（ｘｉ）Ｔｒｅｇ細胞の数の減少；（ｘｉｉ）ＴＧＦ－β発現の減少；（ｘｉｉｉ）Ｆｏｘｐ３発現の減少；（ｘｉｖ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少；（ｘｖ）Ｂｖ８発現の減少、若しくは（ｘｖｉ）これらの任意の組合わせを必要としており、この方法は、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、この対象に投与することを含み、
この組成物の治療上有効なボーラス用量を投与することにより、血管系の正常化又は周皮細胞被覆指数の少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％又は少なくとも２０％）の増加、存在する場合には腫瘍サイズの縮小、細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加、活性化ＮＫ細胞の数の増加、Ｔｒｅｇ細胞の数の減少、ＴＧＦβのレベル若しくは発現の低下、Ｆｏｘｐ３のレベル若しくは発現の低下、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少、Ｂｖ８のレベル若しくは発現の低下、生存率／寿命の改善、又はこれらの組合わせがもたらされ；この組成物は、血圧を、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、１０％を超えて、又は５％を超えて）低下させず、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、且つこの組成物は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、この組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベルであるか、又は健康な対象の平均血漿中環状ＧＭＰレベル（好ましくは、この対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）である、方法を特徴とする。一部の実施形態では、この対象は、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、少数の活性化ＮＫ細胞、又は少数の細胞傷害性Ｔ細胞及び少数の活性化ＮＫ細胞の両方をさらに有する可能性がある。
別の態様では、本開示は、腫瘍、腫瘍組織中の異常な血管系、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、小数の活性化ＮＫ細胞、多数のＴｒｅｇ細胞、ＴＧＦβの高レベルの発現、Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、多数の骨髄由来サプレッサー細胞又はＭＤＳＣ、及びＢｖ８の高レベル若しくは発現から選択される状態の内の１つ又は複数を有している対象を処置するか、又は細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加；活性化ＮＫ細胞の増加；Ｔｒｅｇ細胞の数の減少；ＴＧＦ－β発現の減少；Ｆｏｘｐ３発現の減少；骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少；Ｂｖ８発現の減少、若しくはこれらの任意の組合わせが必要な対象を処置する方法であって、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、この対象に投与することを含み；この組成物の治療上有効なボーラス用量を投与することにより、血管系の正常化又は周皮細胞被覆指数の少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％又は少なくとも２０％）の増加（例えば、腫瘍組織内での増加）、腫瘍サイズの縮小、細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加、活性化ＮＫ細胞の数の増加、Ｔｒｅｇ細胞の数の減少、ＴＧＦβのレベル若しくは発現の低下、Ｆｏｘｐ３のレベル若しくは発現の低下、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少、Ｂｖ８のレベル若しくは発現の低下、生存率／寿命の改善、又はこれらの組合わせがもたらされ；この組成物は、血圧を、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、１０％を超えて、又は５％を超えて）低下させず、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり；且つこの組成物は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、この組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベルであるか、又は健康な対象の平均血漿中環状ＧＭＰレベル（好ましくは、この対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）である、方法を特徴とする。
別の態様では、本開示は、癌を処置するか又は異常な血管系を処置する方法であって、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号１１］、又はこれらの任意の組合わせを含む長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することを含み、Ｕを除く個々の大文字は、１文字アミノ酸命名法により表されるアミノ酸残基であり、Ｕは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の部分であり、式（Ｉ）は、
（脂肪族）ａ－（Ｘ）－ （Ｉ）
であり；式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であり、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり；Ｘは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択されるか；又はＸは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１であり、
式（ＩＩ）は、
（ポリマー）ａ－（Ｙ）－ （ＩＩ）
であり；式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；ポリマーは、セルロース、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、又はこれらの誘導体であり；Ｙは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択される、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；非アミノ酸リンカーであり、エステル、アミド、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、又はこれらの組合わせを含む非アミノ酸リンカーであるか；アミノ酸残基含有リンカーであり、アミノ酸残基は、（ポリマー）ａに共有結合的に付着している、アミノ酸残基含有リンカーであるか；又は１～１０個アミノ酸残基若しくはペプチド配列とは異なるペプチドリンカーであり、
この組成物は、血圧を、ベースライン血圧測定値の１５％を超えて低下させず、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、且つこの組成物は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、この組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベルであるか、又は健康な対象の平均血漿中環状ＧＭＰレベル（好ましくは、この対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）である、方法を特徴とする。
一部の実施形態では、Ｙは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である。一部の実施形態では、Ｕは、Ｎ末端のＧ若しくはＣ残基、及び／又はＫ残基のイプシロンアミノ基に共有結合し得る。
一態様では、本開示は、式Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ［配列番号３０］のペプチドを含む長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む組成物であって、式中、ｘは、天然又は非天然のアミノ酸残基であり、但し、ｘは、メチオニン残基ではなく；Ｕは、式（Ｉ）：
（脂肪族）ａ－（Ｘ）－ （Ｉ）
の部分であり；
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；
脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であり、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり；
Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、組成物を提供する。
別の態様では、本開示は、免疫チェックポイント阻害剤及び／又はＣＡＲ Ｔ細胞療法等の１種又は複数種の免疫賦活薬による更なる処置を伴うか又は伴わない、上記で説明されている方法を使用して対象を処置する方法を特徴とする。
本開示の前述の態様及び多くの付随する利点は、添付の図面と併せて下記の詳細な説明を参照することにより、よりよく理解されるようになることから、より容易に理解されるようになるだろう。
ネイティブＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体（ｄＣＮＰ）、及び超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）の２．０ｍｇ／Ｋｇの皮下投与後のＣＤ－１マウスにおける血漿中ＣＮＰ［平均（ＳＤ）；ｎ＝５］のグラフである。挿入図は、ネイティブＣＮＰを投与した場合のＣＮＰの低い血漿中レベル（菱形）を示す左下角の拡大スケールである。エラーバーは、ｎ＝５の血漿サンプルの標準偏差を表す。投与前のベースラインＣＮＰレベルは、１．７４（０．６）ｎｇ／ｍＬ［平均（ＳＤ）；ｎ＝１５］であった。図１Ａは、マウスでのボーラス投与後のｄＣＮＰ及びＶＬＡ－ｄＣＮＰの継続的な血漿中での存在を示す。 ネイティブＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体（ｄＣＮＰ）、及び超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）の１．０ｍｇ／Ｋｇの皮下投与後に、ＣｉｓＢｉｏ［Ｃｏｄｏｌｅｔ，Ｆｒａｎｃｅ］のｃＧＭＰキットを使用して測定した雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける血漿中ｃＧＭＰのグラフである。ベースライン血漿中ｃＧＭＰレベルは、２０（３．７）ｐｍｏｌ／ｍＬ又は７（１．３）ｎｇ／ｍＬ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝８］であった。２時間以降に、ネイティブＣＮＰの皮下投与では、ベースラインと比較して血漿中ｃＧＭＰが有意に上昇しなかったが、長時間作用性ＣＮＰ（ｄＣＮＰ及びＶＬＡ－ｄＣＮＰ）の同様の投与では、少なくとも２４時間にわたりｃＧＭＰの有意な上昇が示された。図１Ｂは、マウスにおける、ネイティブＣＮＰと比較したｄＣＮＰ及びＶＬＡ－ｄＣＮＰのボーラス投与後の環状ＧＭＰの継続的な存在を示す。 本開示の超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）が、血圧の関連する低下を伴うことなく３日にわたり血漿中ｃＧＭＰを増加させることを示すグラフである。このグラフは、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）、超長時間作用性ＢＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＢＮＰ）、又は超長時間作用性ＢＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＡＮＰ）の２５ｕｇ／Ｋｇのボーラス投与後にモニタリングした場合の、イヌ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝１２］における血漿中ｃＧＭＰ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝１２］の対応する増加を示す。ベースライン血漿中ｃＧＭＰレベルは、８（２）ｎｇ／ｍＬ［平均（ＳＤ）；ｎ＝１２］であり、このレベルは、健康なヒトと類似している（例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれるＩｇａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ Ｒｅｓ １９９８；２１：７－１３を参照されたい）。ナトリウム利尿ペプチドの超長時間作用性製剤は全て、８ｎｇ／ｍｌというベースラインを超えてｃＧＭＰを増加させる。ｃＧＭＰ ＡＵＣは、ＶＬＡ－ｄＡＮＰ ３，４８３ｎｇ＊ｈ／ｍＬ、ＶＬＡ－ｄＢＮＰ ２，５８５ｎｇ＊ｈ／ｍＬ、ＶＬＡ－ｄＣＮＰ ２，６２７ｎｇ＊ｈ／ｍＬである。超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）は、血圧の関連する低下を伴うことなく３日にわたり血漿中環状ＧＭＰを増加させた。図２Ａは、同一ファミリ由来の他の２種の超長時間作用性ナトリウム利尿ペプチドと比較して、ＶＬＡ－ｄＣＮＰのボーラス投与後の環状ＧＭＰの継続的な存在を示す。 超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）、超長時間作用性ＢＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＢＮＰ）、又は超長時間作用性ＢＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＡＮＰ）の２５ｕｇ／Ｋｇのボーラス投与後にモニタリングした場合の、イヌ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝１２］における平均動脈圧を示すグラフである。ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、非常に高い用量での投与後に、ベースライン（０時間）からの有意な血圧低下を引き起こさない。対照的に、ＶＬＡ－ｄＢＮＰ誘導体及びＶＬＡ－ｄＡＮＰ誘導体等の他の超長時間作用性ナトリウム利尿ペプチドは、血圧の１５％超の低下を引き起こした。このことは、ｃＧＭＰでの同様の増加の場合には血圧低下が５０％にもなり得るＶＬＡ－ｄＡＮＰに特に当てはまる。全く対照的に、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）は、血圧の関連する低下を伴うことなく３日にわたり血漿中環状ＧＭＰを増加させた。図２Ｂは、高用量のＶＬＡ－ｄＣＮＰのイヌでのボーラス投与後では血圧が低下しないが、同一ファミリ由来の他の２種の超長時間作用性ナトリウム利尿ペプチドは、血漿中環状ＧＭＰの同様の上昇を示したが、血圧が劇的に低下した（図２Ａ）ことを示す。このことは、血漿中環状ＧＭＰが血圧低下の原因ではないことを示す。 ＶＬＡ－ｄＣＮＰが乳癌で表面抗原分類８陽性（ＣＤ８＋）Ｔ細胞を増加させたことを示すグラフ及び関連する顕微鏡写真であり、ＶＬＡ－ｄＣＮＰが、腫瘍死滅細胞の侵入、活性化、及び／又は腫瘍に対する免疫チェックポイント阻害の抑制を促進したことを示す。図３Ａは、図３Ｂの顕微鏡写真における１つの視野当たりのＣＤ８＋Ｔ細胞の数のグラフである。図３Ｂは、一連の顕微鏡写真である。１つの視野当たりのＣＤ８陽性細胞の数を、図３Ａで計数しており、エラーバーは、ＳＥＭである。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した（ｎ＝４）。＊Ｐ＜０．０５。 ＶＬＡ－ｄＣＮＰが乳癌で活性化Ｔ細胞を増加させたことを示す一連のグラフであり、ＶＬＡ－ｄＣＮＰが、腫瘍死滅細胞の侵入、活性化、及び／又は腫瘍に対する免疫チェックポイント阻害の抑制を促進したことを示す。図４Ａは、コントロールマウス群、及びＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群におけるＣＤ８細胞の量を示す棒グラフである。図４Ｂは、コントロールマウス群、及びＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群における活性化ＣＤ８細胞の量を示す棒グラフである。図４Ｃは、コントロールマウス群、及びＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群における活性化ＮＫ細胞の量を示す棒グラフである。 ＶＬＡ－ｄＣＮＰが乳癌／腫瘍で制御性Ｔ細胞を根絶し、免疫系が腫瘍増殖を抑制することを可能にすることを示す棒グラフである。 ＶＬＡ－ｄＣＮＰが、乳癌細胞／腫瘍でＴｉｍ３を減少させたことを示す棒グラフである。 表面抗原分類８（ＣＤ８）が枯渇しているか又は枯渇していない骨腫瘍体積増加に対するＶＬＡ－ｄＣＮＰの効果を示すグラフである。 ＶＬＡ－ｄＣＮＰが、マウスでの皮下移植モデルにおいて、骨癌の増殖のサイズを抑制したことを示すグラフである。 マウスでの同所移植（大腿骨）モデルにおいて、表面抗原分類８（ＣＤ８）が枯渇しているか又は枯渇していない骨腫瘍体積増加に対するＶＬＡ－ｄＣＮＰの効果を示す棒グラフである。 図８Ｂ～８Ｄは、骨癌皮下移植マウスモデルにおける免疫の活性化に対するＶＬＡ－ｄＣＮＰの効果を示す一連の棒グラフである。図８Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群と比較した、コントロールマウス群におけるＴＧＦ－ベータ１の発現を示す棒グラフである。図８Ｃは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群と比較した、コントロールマウス群におけるＦｏｘｐ３の発現を示す棒グラフである。図８Ｄは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群と比較した、コントロールマウス群におけるＢｖ８の発現を示す棒グラフである。 図８Ｂ～８Ｄは、骨癌皮下移植マウスモデルにおける免疫の活性化に対するＶＬＡ－ｄＣＮＰの効果を示す一連の棒グラフである。図８Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群と比較した、コントロールマウス群におけるＴＧＦ－ベータ１の発現を示す棒グラフである。図８Ｃは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群と比較した、コントロールマウス群におけるＦｏｘｐ３の発現を示す棒グラフである。図８Ｄは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群と比較した、コントロールマウス群におけるＢｖ８の発現を示す棒グラフである。 図８Ｂ～８Ｄは、骨癌皮下移植マウスモデルにおける免疫の活性化に対するＶＬＡ－ｄＣＮＰの効果を示す一連の棒グラフである。図８Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群と比較した、コントロールマウス群におけるＴＧＦ－ベータ１の発現を示す棒グラフである。図８Ｃは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群と比較した、コントロールマウス群におけるＦｏｘｐ３の発現を示す棒グラフである。図８Ｄは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群と比較した、コントロールマウス群におけるＢｖ８の発現を示す棒グラフである。 図９Ａおよび９Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰが腫瘍血管構造を正常化したことを示す一連の顕微鏡写真及び棒グラフである。図９Ａは、コントロール製剤で処置されたサンプル、及びＢＬＡ－ｄＣＮＰで処置されたサンプルに関する赤色のＣＤ３１及び緑色のアルファ－ＳＭＡの蛍光顕微鏡画像を示す。図９Ｂは、周皮細胞被覆の指数％を示す棒グラフである。 図９Ａおよび９Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰが腫瘍血管構造を正常化したことを示す一連の顕微鏡写真及び棒グラフである。図９Ａは、コントロール製剤で処置されたサンプル、及びＢＬＡ－ｄＣＮＰで処置されたサンプルに関する赤色のＣＤ３１及び緑色のアルファ－ＳＭＡの蛍光顕微鏡画像を示す。図９Ｂは、周皮細胞被覆の指数％を示す棒グラフである。 図１０Ａおよび１０ＢＶＬＡ－ｄＣＮＰが腫瘍血管構造を正常化したことを示す一連の顕微鏡写真及び関連する棒グラフである。図１０Ａは、コントロール製剤で処置されたサンプル、及びＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置されたサンプルに関する赤色のＣＤ３１及び緑色のレクチンの蛍光顕微鏡画像を示す。図１０Ｂは、１つの視野当たりのＣＤ３１及びレクチン構造の総数を示す棒グラフであり；エラーバーは、ＳＥＭである。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５対コントロール群（ｎ＝３）。 図１０Ａおよび１０ＢＶＬＡ－ｄＣＮＰが腫瘍血管構造を正常化したことを示す一連の顕微鏡写真及び関連する棒グラフである。図１０Ａは、コントロール製剤で処置されたサンプル、及びＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置されたサンプルに関する赤色のＣＤ３１及び緑色のレクチンの蛍光顕微鏡画像を示す。図１０Ｂは、１つの視野当たりのＣＤ３１及びレクチン構造の総数を示す棒グラフであり；エラーバーは、ＳＥＭである。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５対コントロール群（ｎ＝３）。 図１１Ａ～１１Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰが腫瘍組織中での低酸素状態を低減したことを示す一連の顕微鏡写真及び関連する棒グラフである。図１１Ａは、赤色のピモニダゾールの蛍光顕微鏡画像を示す。図１１Ｂは、赤色のピモニダゾールの相対強度の割合を示す棒グラフであり；エラーバーは、ＳＥＭである。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５対コントロール群（ｎ＝４）。 図１１Ａ～１１Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰが腫瘍組織中での低酸素状態を低減したことを示す一連の顕微鏡写真及び関連する棒グラフである。図１１Ａは、赤色のピモニダゾールの蛍光顕微鏡画像を示す。図１１Ｂは、赤色のピモニダゾールの相対強度の割合を示す棒グラフであり；エラーバーは、ＳＥＭである。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５対コントロール群（ｎ＝４）。 示された薬剤での処置による様々な日数での腫瘍サイズを示す表であり、ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウス細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）抗体との併用療法により、マウスの皮下移植モデルにおいて結腸癌の増殖が抑制された。 図１３Ａおよび１３Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）ＣＴＬＡ－４抗体との併用療法により、マウスの皮下移植モデルにおいて結腸癌の増殖が抑制されたことを示すグラフ及び関連する表である。図１３Ａは、示された薬剤での処置による日数の関数として腫瘍サイズを示すグラフである。図１３Ｂは、示された薬剤での処置による選択された日数での腫瘍サイズを示す表である。 図１３Ａおよび１３Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）ＣＴＬＡ－４抗体との併用療法により、マウスの皮下移植モデルにおいて結腸癌の増殖が抑制されたことを示すグラフ及び関連する表である。図１３Ａは、示された薬剤での処置による日数の関数として腫瘍サイズを示すグラフである。図１３Ｂは、示された薬剤での処置による選択された日数での腫瘍サイズを示す表である。 示された薬剤での処置による選択された日数での腫瘍サイズを示す表であり；ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウスプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）抗体との併用療法により、マウスの皮下移植モデルにおいて結腸癌の増殖が抑制された。 示された薬剤での処置による選択された日数での腫瘍サイズを示す表であり；ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）抗体との併用療法により、マウスの同所移植モデルにおいて皮膚癌の増殖が抑制された。 示された薬剤での処置による選択された日数での腫瘍サイズを示す表であり；ＶＬＡ－ｄＣＮＰ又はｄＣＮＰと抗マウスプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）抗体との併用療法により、マウスの同所移植モデルにおいてマウス乳癌が抑制された。 示された薬剤での処置による選択された日数での腫瘍サイズを示す表であり；ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウスＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体との併用療法により、マウスの同所移植モデルにおいて乳癌の増殖（体積）が用量反応的に抑制された。 図１８Ａおよび１８Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗プログラム死リガンド（ＰＤ－Ｌ１）抗体との併用療法により、マウスの同所移植モデルにおいて乳癌の増殖（体積）が抑制されたことを示すグラフ及び関連する表である。図１８Ａは、示された薬剤での処置による日数の関数として腫瘍サイズを示すグラフである。図１８Ｂは、示された薬剤での処置による選択された日数での腫瘍サイズを示す表である。 図１８Ａおよび１８Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗プログラム死リガンド（ＰＤ－Ｌ１）抗体との併用療法により、マウスの同所移植モデルにおいて乳癌の増殖（体積）が抑制されたことを示すグラフ及び関連する表である。図１８Ａは、示された薬剤での処置による日数の関数として腫瘍サイズを示すグラフである。図１８Ｂは、示された薬剤での処置による選択された日数での腫瘍サイズを示す表である。 図１９Ａおよび１９Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗ＰＤ－１抗体との併用療法により、マウスの同所移植モデルにおいて乳癌の増殖（体積）が抑制されたことを示すグラフ及び関連する表である。図１９Ａは、示された薬剤での処置による日数の関数として腫瘍サイズを示すグラフである。図１９Ｂは、示された薬剤での処置による選択された日数での腫瘍サイズを示す表である。 図１９Ａおよび１９Ｂは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗ＰＤ－１抗体との併用療法により、マウスの同所移植モデルにおいて乳癌の増殖（体積）が抑制されたことを示すグラフ及び関連する表である。図１９Ａは、示された薬剤での処置による日数の関数として腫瘍サイズを示すグラフである。図１９Ｂは、示された薬剤での処置による選択された日数での腫瘍サイズを示す表である。 ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗ＰＤ－１抗体との併用療法により、乳癌の増殖が抑制され且つマウスの生存率が改善されたことを示すグラフである。 ＶＬＡ－ｄＣＮＰ処置により、脛骨に骨肉腫があるマウスの生存率が改善されることを示すＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ曲線である。 ｄＣＮＰが、培養されたＬＭ８マウス骨肉腫癌細胞系統に曝露された脾細胞中でのインターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）産生を用量依存的に増加させることを示すグラフである。 ６日目に開始される様々な試験組成物による１４日間処置後の２０日目での腫瘍サイズを示す棒グラフである。エラーバーは、ＳＥＭであり、個々のドットは、群中の個々の動物を表す。 ２０日目での腫瘍根絶と共に処置期間中の腫瘍増殖を示す表である。 投与がかなり遅い段階で開始された（腫瘍サイズは約７０ｍｍ３であった；１９日目）場合であってもｄＣＮＰの前立腺腫瘍除去作用を示す棒グラフである。また、ｄＣＮＰは、腫瘍の除去において細胞傷害性化学療法剤と同様に有効であることも示されている。エラーバーは、ＳＥＭであり、個々のドットは、群中の個々の動物を表す。 ３０日目での腫瘍根絶と共に処置期間中の前立腺癌の増殖を示す表である。 正常な健康マウスであっても、ｄＣＮＰは、血液中のＴ細胞（ＣＤ４）の増加により見られるように免疫系を活性化し得ることを示す棒グラフである。 正常な健康マウスであっても、ｄＣＮＰは、血液中の細胞傷害性（ＣＤ８）Ｔ細胞の増加により見られるように免疫系を活性化し得ることを示す棒グラフである。 正常な健康マウスであっても、ｄＣＮＰは、血液中のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増加により見られるように免疫系を活性化し得ることを示す棒グラフである。 正常な健康マウスであっても、ｄＣＮＰは、脾臓中でのＣＤ８遺伝子発現の増加により見られるように免疫系を活性化し得ることを示すグラフである。 正常な健康マウスであっても、ｄＣＮＰは、脾臓中でのＣＤ４遺伝子発現の増加により見られるように免疫系を活性化し得ることを示すグラフである。 正常な健康マウスであっても、ｄＣＮＰは、脾臓中でのＩＣＯＳ遺伝子発現の増加により見られるように免疫系を活性化し得ることを示すグラフである。ＩＣＯＳは、誘発性Ｔ細胞共刺激分子であり、免疫チェックポイントタンパク質であり、且つこの発現は免疫活性化を示す。 正常な健康マウスであっても、ｄＣＮＰは、脾臓中でのＣＤ８６遺伝子発現の増加により見られるように免疫系を活性化し得ることを示すグラフである。ＣＤ８６は、ＣＤ８０と一緒に、Ｔ細胞の活性化及び生存に必要な共刺激シグナルを生じ、この発現により、免疫活性化が確認される。 様々な免疫細胞、免疫活性化に関するこれらの免疫細胞の構造的相互作用、並びにＣＤ８及びＮＫ細胞の抗腫瘍活性又は癌細胞を除去するための攻撃を誘発するインターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）サイトカインの産生の図を示す。灰色の矢印は、細胞数の増加（上向き）又は減少（下向き）を示しており、暗色の矢印は、ＩＦＮｇの存在下で成長する細胞を示す。制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）細胞の免疫反応（横倒しのＴで表される）を抑制するように作用するＴ細胞の特殊な亜集団であり、それにより、恒常性及び自己寛容が維持される。Ｔｒｅｇは、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン産生を阻害して、Ｔｈ１からＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）への発達を阻害することにより免疫系を抑制し、正常な状態下では、自己免疫を予防する。加えて、Ｔｈ１細胞は、免疫系の他の細胞（特に、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えばマクロファージ、樹状細胞、及びＢ細胞）にヘルパー機能を提供し、これらの活性化及び成熟に重要である。 Ｅ０７７１マウス乳癌モデルにおけるＴｒｅｇ細胞の抑制を示す棒グラフである。 活性化Ｔｈ１細胞の増加を示す棒グラフであり、ＶＬＡ－ｄＣＮＰ単独は、抗ＰＤ１単独と比べて有意に有効である。 Ｔｈ１／Ｔｒｅｇ細胞の比を示す棒グラフであり、Ｅ０７７１マウス乳癌モデルにおいてＶＬＡ－ｄＣＮＰ単独が抗ＰＤ１単独と比べて有意に有効である。驚くべきことに、ｄＣＮＰ及び抗ＰＤ１抗体の両方を組み合わせた場合には、相乗効果が観察され、この効果は、ｄＣＮＰ単独及び抗ＰＤ１単独の投与の効果の合計と比べてはるかに高い。 マウス乳癌モデルにおける、ｄＣＮＰをアジュバントＣｐＧ ＯＤＮ－ＴＬＲ９アゴニストと組み合わせた場合の有意な腫瘍抑制を示す棒グラフである。 図２８Ａ～２８Ｄは、マウス乳癌モデルにおいて、ｄＣＮＰ、抗ＰＤ１抗体、及び両方の組合わせが、腫瘍体積及びＴｒｅｇ細胞を減少させ得且つＣＤ６９＋細胞を増加させ得る有効な免疫活性剤であることを示す棒グラフである。図２８Ａは、ｄＣＮＰ、抗ＰＤ１抗体、及び両方の組合わせが、Ｔｒｅｇを減少させ得る有効な免疫活性剤であることを示す棒グラフである。図２８Ｂは、ｄＣＮＰ、抗ＰＤ１抗体、及び両方の組合わせが、Ｂ細胞におけるＣＤ６９＋集団を増加させ得る有効な免疫活性剤であることを示す棒グラフである。図２８Ｃは、ｄＣＮＰ、抗ＰＤ１抗体、及び両方の組合わせが、全細胞におけるＣＤ６９＋集団を増加させ得る有効な免疫活性剤であることを示す棒グラフである。図２８Ｄは、ｄＣＮＰ、抗ＰＤ１抗体、及び両方の組合わせが、腫瘍重量を減少させ得る有効な免疫活性剤であることを示す棒グラフである。Ｔｒｅｇの抑制（左上）及びＣＤ６９＋細胞集団の増加（右上及び左下）は、腫瘍体積の抑制（右下）を引き起こす免疫活性化と一致する。 図２８Ａ～２８Ｄは、マウス乳癌モデルにおいて、ｄＣＮＰ、抗ＰＤ１抗体、及び両方の組合わせが、腫瘍体積及びＴｒｅｇ細胞を減少させ得且つＣＤ６９＋細胞を増加させ得る有効な免疫活性剤であることを示す棒グラフである。図２８Ａは、ｄＣＮＰ、抗ＰＤ１抗体、及び両方の組合わせが、Ｔｒｅｇを減少させ得る有効な免疫活性剤であることを示す棒グラフである。図２８Ｂは、ｄＣＮＰ、抗ＰＤ１抗体、及び両方の組合わせが、Ｂ細胞におけるＣＤ６９＋集団を増加させ得る有効な免疫活性剤であることを示す棒グラフである。図２８Ｃは、ｄＣＮＰ、抗ＰＤ１抗体、及び両方の組合わせが、全細胞におけるＣＤ６９＋集団を増加させ得る有効な免疫活性剤であることを示す棒グラフである。図２８Ｄは、ｄＣＮＰ、抗ＰＤ１抗体、及び両方の組合わせが、腫瘍重量を減少させ得る有効な免疫活性剤であることを示す棒グラフである。Ｔｒｅｇの抑制（左上）及びＣＤ６９＋細胞集団の増加（右上及び左下）は、腫瘍体積の抑制（右下）を引き起こす免疫活性化と一致する。 ドセタキセル（ＤＴＸ）又は緩衝剤コントロールではなくｄＣＮＰが、マウス癌モデルの前立腺腫瘍内でのアルファ－平滑筋アクチン遺伝子発現を阻害することを示す棒グラフである。α－ＳＭＡは、組織線維化のマーカーである。ＴＧＦβは、線維化の公知のメディエータであり、線維性疾患では上方制御され、且つ活性化される（例えば、Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ，２０１１ ２９（５），１９６－２０２を参照されたい）。 ドセタキセル（ＤＴＸ）又は緩衝剤コントロールではなくｄＣＮＰが、マウス癌モデルの前立腺腫瘍内でのＴＧＦβ遺伝子発現を阻害することを示す棒グラフである。 ドセタキセル又は緩衝剤コントロールではなくｄＣＮＰが、マウス癌モデルの前立腺腫瘍内でのＡｎｇ２遺伝子発現を阻害することを示す棒グラフである。Ａｎｇ２は、Ａｎｇ１／Ｔｉｅ２軸に拮抗することにより、腫瘍血管の安定化を阻害する。Ａｎｇ２発現の阻害により、血管系が安定化し、腫瘍へのアクセスが増強され、且つ薬物送達が改善される（例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２０１６ Ｖｏｌ ３０，９５３－９６７を参照されたい）。ｄＣＮＰは、腫瘍血管系を安定化させ（下のグラフ）、免疫系に、より良好な抗腫瘍微小環境を作り出す。 ２．０ｍｇ／ＫｇのＣＮＰ誘導体ｓ１（ｄＣＮＰ－ｓ１）及びＣＮＰ誘導体ｓ２（ｄＣＮＰ－ｓ２）の皮下投与後のＣＤ－１マウスにおける血漿中ＣＮＰ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝５］のグラフである。挿入図は、ネイティブＣＮＰを投与した場合のＣＮＰの低い血漿中レベル（菱形）を示す。エラーバーは、ｎ＝５の血漿サンプルの平均の標準誤差を表す。投与前のベースラインＣＮＰレベルは、０．３９１（０．０２）ｎｇ／ｍＬ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝１０］であった。長時間作用性ｄＣＮＰ－ｓ１及びｄＣＮＰ－ｓ２は、同様の用量重量／Ｋｇ用量で投与した場合に、ネイティブＣＮＰと比べて１０倍高いＣＮＰの血液中レベルを継続的に（少なくとも８時間）提供する。
本開示は、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することにより、任意の組織又は臓器中に異常な血管系を有する対象を処置するためにＮＰＲＢ結合免疫活性剤を使用する方法に関する。一部の実施形態では、この対象は、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、少数の活性化ＮＫ細胞、又は少数の細胞傷害性Ｔ細胞及び少数の活性化ＮＫ細胞の両方をさらに有する。一部の実施形態では、本開示は、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することにより、細胞傷害性Ｔ細胞及び／又は活性化ＮＫ細胞を増加させる方法に関する。一部の実施形態では、この対象は、状態（ｉ）～（ｖｉｉｉ）：（ｉ）少数の細胞傷害性Ｔ細胞、（ｉｉ）少数の活性化ＮＫ細胞、（ｉｉｉ）多数のＴｒｅｇ細胞、（ｉｖ）ＴＧＦβの高レベルの発現、（ｖ）Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、（ｖｉ）多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ、（ｖｉｉ）Ｂｖ８の高レベル若しくは発現；又は（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合わせを有するか；又はこの対象は、（ｉｘ）～（ｘｖｉ）：（ｉｘ）細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加；（ｘ）活性化ＮＫ細胞の増加；（ｘｉ）Ｔｒｅｇ細胞の数の減少；（ｘｉｉ）ＴＧＦ－β発現の減少；（ｘｉｉｉ）Ｆｏｘｐ３発現の減少；（ｘｉｖ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少；（ｘｖ）Ｂｖ８発現の減少、若しくは（ｘｖｉ）これらの任意の組合わせを必要としている。一部の実施形態では、この対象は、癌である。ＮＰＲＢ結合免疫活性剤は、血管新生を正常化し得るか、又は周皮細胞被覆指数の少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％又は少なくとも２０％）の増加をもたらし得る。一部の実施形態では、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することにより、ＮＰＲＢ結合免疫活性剤は、血管新生（例えば、癌組織内での血管新生）を正常化し得、腫瘍サイズを縮小し得、腫瘍組織内での低酸素状態を軽減し得、癌組織内での細胞傷害性Ｔ細胞の数を増加させ得、癌組織内での活性化ＮＫ細胞の数を増加させ得、Ｔｒｅｇ細胞を減少させ得、骨髄由来サプレッサー細胞を減少させ得、ＴＧＦβの発現を減少させ得、Ｆｏｘｐ３の発現を減少させ得、Ｂｖ８発現を減少させ得、癌組織内での免疫チェックポイント活性を阻害し得、及び／又は生存率を上昇させ得る。
一部の実施形態では、必要な対象に投与した場合には、本組成物の治療上有効なボーラス用量は、この組成物の投与前のレベル又は健康な対象でのレベルを少なくとも１５％（例えば、少なくとも２０％又は少なくとも３０％）超える細胞傷害性Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の数の増加をもたらす。対象に投与した場合には、この組成物は、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、１０％を超えて、又は５％を超えて）血圧を低下させず、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、且つこの組成物は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、この組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベルであるか、又は健康な対象の平均血漿中環状ＧＭＰレベル（好ましくは、この対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）である。この組成物は、免疫チェックポイントタンパク質活性も阻害する追加の治療薬を含み得る。一部の実施形態では、本開示の組成物を、放射線処置、化学療法処置、外科的処置、ＣＡＲ－Ｔ細胞処置、及び／又は抗体処置の前に、と同時に、及び／又はの後に投与し得る。
一態様では、本開示は、癌の処置方法であって、血漿中の環状ＧＭＰレベルを上昇させること、及び癌を縮小するか又は消失させることを含む方法を特徴とする。化合物のボーラス投与により、ナトリウム利尿ペプチド受容体Ｂ（ＮＰＲＢ又はＮＰＲ２）を継続的に活性化させ得、且つ免疫系を活性化させて腫瘍又は癌を攻撃させ得、腫瘍組織内での細胞傷害性Ｔ細胞及び／若しくは活性化ＮＫ細胞の数を増加させ得、免疫サプレッサー細胞（Ｔｒｅｇ細胞）の数を減少させ得、免疫サプレッサーサイトカイン（形質転換増殖因子ベータ若しくはＴＧＦβ）を減少させ得、Ｆｏｘｐ３（Ｔｒｅｇマーカー）発現を減少させ得、Ｂｖ８（骨髄由来サプレッサー細胞のマーカー若しくはＭＤＳＣマーカー）発現を減少させ得、及び／又は腫瘍組織中での血管系の正常化若しくは周皮細胞被覆指数の少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％又は少なくとも２０％）の増加を引き起こし得、これにより、腫瘍組織中での抗癌剤のアクセスが可能となり、且つ低酸素状態（低酸素状態は、腫瘍の増殖／悪性度及び免疫抵抗性を促進する）が軽減されることを示すものは、当該技術分野では存在していない。
加えて、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与により、癌を処置するために使用され得る血漿中環状ＧＭＰが継続的に上昇しつつ血圧が顕著に低下しないであろうということを示すものは、当該技術分野では存在していない。本開示は、血漿中環状ＧＭＰの継続的な上昇をもたらしつつ血圧の顕著な低下を引き起こさない、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストのボーラス用量を投与することを含む癌の処置を開示する。さらに、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与によるＮＰＲＢの継続的な活性化により、免疫系を活性化して腫瘍組織を攻撃させ得、及び／又は腫瘍領域への細胞傷害性Ｔ細胞の浸潤を引き起こし得る。
癌又は悪性腫瘍の処置のための他の免疫チェックポイント阻害剤又はＣＡＲ Ｔ細胞療法の有効性を改善するために、免疫チェックポイント阻害剤又はＣＡＲ Ｔ細胞療法と、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストの内のいずれかとの併用を癌の処置の当業者に示唆するものは、当該技術分野では存在していないだろう。一部の実施形態では、本開示は、一般的な他の免疫チェックポイント阻害剤、及び／又は一般的なＣＡＲ Ｔ細胞療法と組み合わせた、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストの使用を特徴とする。例えば、この免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、又はＰＤ－Ｌ１のブロッカーであり得、例えば、限定されないが、イピリムマブ、トレメリムマブ、ラブロリズマブ（ｌａｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ－２４４、ＭＥＤＩ ４７３６、及び／又はＭＰＤＬ３２８０Ａであり得る。
本開示は、内在性ペプチドの長時間作用性誘導体、又は長時間作用アゴニストの使用を特徴とする。使用時に、内在性ペプチドの長時間作用性誘導体、又は長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストは、安全であり、且つ免疫系の抗腫瘍機能及び／又は血管正常化の増強剤として作用する。本開示の方法は、特定の癌に対する使用に限定されない、一般的な免疫系を活性化させることによる癌の処置を提供する。
有効性が限定的であり重度の副作用を有する放射線処置又は化学療法処置とは異なり、本開示の長時間作用性ＮＰＲＢ活性剤は、癌患者又は悪性腫瘍を患っている患者の苦しみを悪化させる測定可能な又は観察可能な望ましくない副作用を有していない。本開示は、長時間作用性ＣＮＰ又は長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与が、様々な癌又は悪性腫瘍の処置で有効であり、且つ他の免疫チェックポイント阻害剤と併用した場合には、長時間作用性ＣＮＰ又は長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与を伴わない同一の処置と比較して、さらなる副作用が起きることなく処置における全体的な有効性が改善されることを示す。免疫チェックポイント阻害剤を、本開示の長時間作用性ＣＮＰ又は長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与と併用した場合には、免疫チェックポイント阻害剤と、この長時間作用性ＣＮＰ又は長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストとの組合わせの治療効果が、免疫チェックポイント阻害剤のみによる処置、又はこの長時間作用性ＣＮＰ若しくは長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストのみによる処置の累積治療効果と比べて大きい相乗効果が観察され得ると考えられる（例えば、図１３、１４、１６、１７、１８、１９、２０、２６Ｂ～２６Ｄ、及び２８Ａ～２８Ｄを参照されたい）。一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ又は長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与と併用した場合には、免疫チェックポイント阻害剤の投与量を減少させ得る。さらに、本開示は、長時間作用性ＣＮＰ又は長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与により、当該技術分野では全く示されてない、処置全体におけるさらなる副作用なしに様々な癌又は悪性腫瘍の処置におけるＣＡＲ Ｔ細胞療法の全体的な有効性の改善がもたらされ得ることを示す。
長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与と併せて投与した場合での、ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）、ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）、又はＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）をブロックする薬物又は抗体等の免疫チェックポイント阻害剤の有効性の改善に関しては全く知られてないと考えられる。本開示は、下記の驚くべき発見を提示する：１）ＣＮＰを、得られた製剤が、ボーラス用量として投与された場合に、治療上有効な用量以上で血圧を低下させることなく血漿中環状ＧＭＰを継続的に増加させ得るように改変し得るか、誘導体化し得るか、又は製剤化し得る；２）ＮＰＲＢアゴニスト（即ち、長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト）のボーラス投与により、血漿中環状ＧＭＰを少なくとも６時間わたり継続的に増加させ得る；３）上記で定義されたＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与により、癌組織の血管系を正常化して低酸素炎症及び免疫抵抗性を低減し得る（低酸素状態は、腫瘍の悪性度及び免疫抵抗性を促進する）；４）上記で定義されたＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与により、癌の消失を補助し得る、癌組織内での、癌を死滅させる細胞傷害性Ｔ細胞の数を増加させ得る；５）上記で定義されたＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与により、免疫系による癌の消失を妨げる免疫サプレッサー細胞（Ｔｒｅｇ細胞及び骨髄由来サプレッサー細胞）の数を減少させ得る、６）上記で定義されたＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与により、癌に対する免疫抑制が低減していることを示すＴＧＦβ、Ｆｏｘ３、及びＢｖ８（骨髄由来サプレッサー細胞又はＭＤＳＣのマーカー）の発現が抑制される、並びに７）他の免疫チェックポイント阻害剤と組み合わされた、上記で定義されたＮＰＲＢアゴニストのボーラス投与により、免疫チェックポイント阻害の有効性、及び癌に対する有効性が顕著に改善され得る。
定義
本明細書で使用される場合、「癌」という用語は、悪性組織腫瘤を指す。悪性腫瘍細胞は、血液及びリンパ系を介して身体の他の部分に「転移し」（即ち、広がり）得る。
本明細書で使用される場合、「癌腫」という用語は、皮膚で生じる癌を指すか、又は内臓を裏打ちするか若しくは覆う組織で生じる癌を指す。
本明細書で使用される場合、「肉腫」という用語は、骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、又は他の結合組織若しくは支持組織で生じる癌を指す。
本明細書で使用される場合、「リンパ腫」という用語は、リンパ系の細胞で生じる癌を指す。
本明細書で使用される場合、「中枢神経系癌又は（ＣＮＳ）癌」という用語は、中枢神経系の組織で生じる悪性腫瘍を指す。
本明細書で使用される場合、「血管正常化」という用語は、任意の組織又は臓器中における、異常な血管系と比較してパターンが規則正しい、構造的に及び機能的に正常な血管系への回復を指しており、この異常な血管系は、多数の細動脈が、毛細血管床をバイパスする細静脈に直接吻合しており、局所的な低酸素状態が引き起こされている、ランダムな血管系を特徴としている。癌等の様々な疾患では、微小血管ネットワークが生じる無秩序な新規血管形成が存在しており、この微小血管ネットワークは、微小環境を変更して癌等の疾患進行を促進させ、且つ従来の治療に対する反応を弱める重度の構造的異常及び機能的異常を伴う血管未熟を特徴とする。血管正常化（例えば、腫瘍血管での血管正常化）を、組織染色により検出し得る。例えば、周皮細胞に対するα－平滑筋アクチン（α－ＳＭＡ）、及びＣＤ３１に対する血管内皮の染色の共局在化を使用して、周皮細胞被覆指数を得ることができる（例えば、実施例及び図９を参照されたい）。一部の実施形態では、正常化は、処置前の周皮細胞被覆指数と比較して周皮細胞被覆指数の少なくとも２０％の増加と定義されるか；又は処置前に撮影されたか若しくは観察されたものと比較して１つの顕微鏡視野当たりのＣＤ３１陽性及びレクチン陽性構造の少なくとも２０％の増加により間接的に測定される腫瘍灌流の増加と定義される。一部の実施形態では、正常化は、処置前の周皮細胞被覆指数と比較して周皮細胞被覆指数の少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％又は少なくとも２０％）の増加と定義される。灌流がより高い血管は、より大きなＣＤ３１及びレクチン共染色を有する。一部の実施形態では、正常化は、処置前に撮影されたか又は観察されたものと比較して微小血管密度（ＭＶＤ）の少なくとも２０％の増加と定義される。ＭＶＤを、いくつかの方法により測定し得る。全体が参照により本明細書に組み込まれるＧｏｄｄａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ２００２；５（１－２）：１５－２０を参照されたい。一部の実施形態では、正常化を、（ガドリニウム化合物等の造影剤を使用するＭＲＩ撮像、超音波、ＰＥＴ、及びＣＴ走査による）血管の形態及び透過性により測定し得る。全体が参照により本明細書に組み込まれるＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１８：１０４１６３－４１７２を参照されたい。一部の実施形態では、血漿中ｓＶＥＧＦＲ１の一過性の減少を、腫瘍血管の正常化を予測するための候補バイオマーカーとして使用する。ある特定の実施形態では、血漿中アンジオポエチン－１／アンジオポエチン－１比は、血管正常化の程度と相関している。腫瘍組織及び血漿の両方中でのアペリン発現を、血管正常化の最中に過度的に減少させ得る。血管正常化は、本開示の組成物による処置後での上記パラメータの内の１つ又は複数における（該当する場合の）増加又は減少として示され得る。
本明細書で使用される場合、「異常な血管系」という用語は、多くの細動脈が細静脈に直接吻合しており、毛細血管床をバイパスして局所的な低酸素状態が引き起こされている、ランダムな血管パターンを特徴とする、任意の組織又は臓器中の血管系を指す。これは、無秩序な新規血管形成の結果であり、その結果、微小環境を変更して癌等の疾患進行を促進させ且つ従来の治療に対する反応を弱める重度の構造的異常及び機能的異常を伴う、血管未熟を特徴とする微小血管ネットワークが生じる。
本明細書で使用される場合、「細胞傷害性Ｔ細胞」という用語は、直接的な細胞傷害効果を有するＴリンパ球（白血球の一種）を指す。細胞傷害性Ｔ細胞は、癌細胞、（特にウイルスに）感染した細胞、又は他の方法で損傷を受けている細胞を死滅させる。細胞傷害性Ｔ細胞はまた、ＴＣ、細胞傷害性Ｔリンパ球、ＣＴＬ、Ｔキラー細胞、細胞溶解性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、又はキラーＴ細胞としても既知である。ＣＤ８（＋）Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞及び癌細胞の死滅に長けており、この反応を助けるためにサイトカイン（例えばＩＦＮ－γ）を放出する。「少数の細胞傷害性Ｔ細胞」という用語は、特に腫瘍組織中における、ＣＤ３に対しても陽性である並びに／又はＣＤ３及びＩＮＦｇに対しても陽性である全ＣＤ８陽性細胞の２％未満の割合を指す（例えば、図３、４、及び５を参照されたい）。同様に、「細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加」という用語は、同一の癌患者の処置前の数と比較した、ＣＤ３に対しても陽性である並びに／又はＣＤ３及びＩＮＦｇに対しても陽性であるＣＤ８陽性細胞の割合の少なくとも１０％の増加を指す。例えば、図３、４、及び５を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「ＴＩＭ－３」という用語は、Ｔ細胞（例えばＣＡＲ Ｔ細胞）反応を妨げる可能性がある、腫瘍及びウイルス感染細胞において上方制御されている「糖タンパク質Ｔ細胞Ｉｇ及びムチンドメイン含有タンパク質３」を指す。この上方制御により、癌、及びＨＩＶ等の慢性ウイルス感染に対する細胞傷害性Ｔ細胞反応が徐々に損なわれ、Ｔ細胞が消耗される。ＴＩＭ－３の減少は、ＣＤ８（＋）Ｔ細胞の細胞傷害性機能の回復に役立つ。例えば、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４ Ｊａｎ １５；１９２（２）：７８２－９１を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「ナチュラルキラー細胞」又は「ＮＫ細胞」という用語は、細胞傷害性Ｔ細胞に類似しているが細胞傷害性Ｔ細胞とは異なりＭＨＣ及び抗体を必要としない、自然免疫系に重要な細胞傷害性リンパ球の一種を指す。そのため、ＮＫ細胞は、ストレスを受けている細胞、腫瘍形成、及び／又はウイルス感染細胞に迅速に（約３日で）反応し得る。加えて、癌の文脈における「少数の活性化ＮＫ細胞」という用語は、特に腫瘍細胞中における、パーフォリンに対しても陽性である全ＮＫ１．１（又はヒトの場合にはＣＤ１６若しくはＣＤ５７）の１．２％未満の割合を指す。例えば、図３、４、及び５、並びにこれらの対応する下記の実施例を参照されたい。「活性化ＮＫ細胞の数を増加させる」という用語は、同一の癌患者の処置前のレベルと比較した、パーフォリンに対しても陽性である全ＮＫ１．１（又はヒトの場合にはＣＤ１６若しくはＣＤ５７）の割合の少なくとも２０％の増加を指す。
本明細書で使用される場合、「Ｔｒｅｇ細胞」又は「Ｔｒｅｇ」の用語は、自己抗原に対する寛容性を維持し且つ自己免疫疾患の可能性を低下させる制御性Ｔ細胞又は免疫サプレッサーＴ細胞を指す。Ｔｒｅｇは、免疫抑制性であり、一般的に、細胞傷害性Ｔ細胞等のエフェクターＴ細胞の誘導及び増殖を抑制するか、又は下方制御する。Ｔｒｅｇは、バイオマーカーＣＤ４、ＦＯＸＰ３、及びＣＤ２５を発現する。最近の研究から、サイトカインＴＧＦβは、ナイーブＣＤ４＋細胞からのＴｒｅｇの分化に必須であり、且つＴｒｅｇホメオスタシスの維持で重要であることが発見されている。「多数のＴｒｅｇ細胞」という用語は、特に腫瘍組織中における、ＣＤ２５及びＦｏｘ３に対しても陽性である全ＣＤ４陽性細胞の２％超を指す。「Ｔｒｅｇ細胞の数を減少させる」という用語は、同一の癌患者の処置前のレベルと比較した、ＣＤ２５及びＦｏｘ３に対しても陽性である全ＣＤ４陽性細胞の割合の少なくとも２０％の減少を指す。
本明細書で使用される場合、「ＴＧＦｂ」、「ＴＧＦβ」、又は「形質転換増殖因子ベータ」という用語は、３種の異なる哺乳類アイソフォーム（ＴＧＦβ１～３、ＨＧＮＣ記号ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３）と、多くの他のシグナル伝達タンパク質とを含む形質転換増殖因子スーパーファミリに属する多機能サイトカインを指す。ＴＧＦβは、全ての白血球系統により発現される。ＴＧＦβの発現の増加は、多くの癌における悪性度と相関している。加えて、「高レベルのＴＧＦβ発現」という用語は、正常組織で観察されるレベルと比較して少なくとも１．２倍の発現を指す。高レベルのＴＧＦβ発現は、高レベルのＴｒｅｇ細胞を示す。「ＴＧＦβ発現を減少させる」という用語は、同一の癌患者の処置前の発現と比較して発現を少なくとも２０％減少させることを指す。
本明細書で使用される場合、「Ｆｏｘｐ３」又は「フォークヘッドボックスＰ３」という用語は、免疫系反応に関与するタンパク質のことであり、一般に免疫反応を低下させる制御性Ｔ細胞の発生及び機能におけるマスター制御因子として作用する。癌では、過剰な制御性Ｔ細胞活性は、免疫系による癌細胞の破壊を阻害する可能性がある。自己免疫疾患では、制御性Ｔ細胞活性の欠乏により、他の自己免疫細胞が体内組織を攻撃することが可能になる可能性がある。「高レベルのＦｏｘｐ３発現」は、正常な非癌組織で観察されるレベルと比較して少なくとも１．２倍の発現を指す。高レベルのＦｏｘｐ３発現は、高レベルのＴｒｅｇ細胞を示す。「Ｆｏｘｐ３発現を減少させる」という用語は、同一の癌患者の処置前の発現と比較して発現を少なくとも２０％減少させることを指す。
本明細書で使用される場合、「骨髄由来サプレッサー細胞」又は「ＭＤＳＣ」という用語は、慢性感染及び癌等の病態において強く増殖する骨髄系統からの免疫細胞の異種群を指す。ＭＤＳＣの浸潤が高い癌組織は、患者の予後不良及び治療への抵抗性と関連している。ＭＤＳＣは、免疫賦活特性ではなく強い免疫抑制活性を持ち、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、及びナチュラルキラー細胞の機能を制御する。ＭＤＳＣはまた、血液中でも検出され得、そのレベルは、癌では正常と比べて最大１０倍高い可能性がある。本明細書で使用される場合、「多数の骨髄由来サプレッサー細胞」又は「多数のＭＤＳＣ」という用語は、正常な健康組織で観察されるレベルと比較して少なくとも１．５倍の数のＭＤＳＣを指す。６７例の健康な成人の血液からの平均ＭＤＳＣは、年齢２０～９３歳及び両方の性別に関して、血液１マイクロリットル当たり約５０±３０個のＭＤＳＣ細胞である。Ａｐｏｄａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（２０１９）７：２３０を参照されたい。「骨髄由来サプレッサー細胞の数を減少させる」という用語は、同一の癌患者の処置前の骨髄由来サプレッサー細胞の数と比較して、この数の少なくとも２０％（好ましくは５０％）の減少を指す。
本明細書で使用される場合、「Ｂｖ８」という用語は、組織特異的な血管新生と、造血細胞動員との両方を促進するプロキネチシン（ｐｒｏｋｉｎｅｔｉｃｉｎ）としても既知のタンパク質を指す。Ｂｖ８は、腫瘍発生中に骨髄からのＭＤＳＣの動員を調節し、局所的に血管新生を促進する。Ｂｖ８は、ＭＤＳＣの代替マーカーである。「高レベルのＢｖ８発現」という用語は、正常な健康組織で観察されるレベルと比較して少なくとも１．５倍のレベルのＢｖ８発現を指し、又は癌ではない正常な個体と比較して高いレベルのＢｖ８発現を指す。同様に、「低レベルのＢｖ８発現」という用語は、同一の癌患者の処置前に観察されるレベルと比較して低レベルのＢｖ８発現を指す。
本明細書で使用される場合、「細胞傷害性細胞免疫賦活薬」という用語は、「Ｔｒｅｇ細胞」及び／又は「ＭＤＳＣ」の数を減少させ且つ「細胞傷害性Ｔ細胞」及び／又は「ＮＫ細胞」の数を増加させる免疫賦活性を指す。細胞傷害性細胞免疫賦活薬の例として、免疫チェックポイント阻害剤が挙げられる。免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイントタンパク質に直接結合し、「Ｔｒｅｇ細胞」及び／又は「ＭＤＳＣ」の数を減少させ、且つ癌細胞又は癌組織を破壊するか損傷させる「細胞傷害性Ｔ細胞」及び／又は「ＮＫ細胞」の数を増加させることにより、免疫系を活性化させる。本明細書で使用される場合、「免疫賦活薬」又は「免疫賦活剤」という用語は、免疫系の任意の構成要素の活性化を刺激するか又は促進する物質（薬物及び栄養素）を指す。
本明細書の様々な箇所において、本開示の化合物の置換基は、群又は範囲で開示されている。本開示がそのような群及び範囲のメンバーのありとあらゆる個々の下位組合わせを含むことが、明確に意図されている。例えば、「Ｃ１～６アルキル」という用語は、メチル、エチル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、及びＣ６アルキルを個々に開示することが明確に意図されている。
本明細書では、アミノ酸の１文字コードが使用されている。例えば、アラニンは、Ａであり、アルギニンは、Ｒであり、アスパラギンは、Ｎであり、アスパラギン酸は、Ｄであり、システインは、Ｃであり、グルタミン酸は、Ｅであり、グルタミンは、Ｑであり、グリシンは、Ｇであり、ヒスチジンは、Ｈであり、イソロイシンは、Ｉであり、ロイシンは、Ｌであり、リシンは、Ｋであり、メチオニンは、Ｍであり、フェニルアラニンは、Ｆであり、プロリンは、Ｐであり、セリンは、Ｓであり、スレオニンは、Ｔであり、トリプトファンは、Ｗであり、チロシンは、Ｙであり、バリンは、Ｖであり、且つγＥは、グルタミン酸（ここで、Ｒ基（即ち側鎖）カルボニル（ガンマ、γ）は、アルファ－カルボニルではなくペプチドの一次アミノ基のいずれか又はペプチドのＮ末端部分に連結するために使用される部分である）である。本出願の目的のために、アミノ酸の１文字コードには、Ｌ及び／又はＤアミノ酸立体異性体が含まれる。アミノ酸が組み合わさってペプチドを形成する場合には、アミノ酸は、水の要素が除去されているアミノ酸残基と称されることが理解される。さらに、本開示がペプチド配列中のアミノ酸に言及する場合には、それはアミノ酸残基であることが理解される。
本明細書で使用される場合、「脂肪族」という用語は、直鎖、分岐鎖、又は非芳香環で互いに連結された炭素及び水素を含む化合物又は基を指す。脂肪族化合物又は脂肪族基は、飽和（例えば、アルカン、例えばヘキサン及び他のアルカン、アルキル、例えばヘキシル及び他のアルキル）であってもよいし、不飽和（例えば、ヘキサン及び他のアルケン、並びにアルキン、ヘキセニル、及び他のアルケニル、並びにアルキニル）であってもよい。脂肪族化合物及び脂肪族基（例えば、アルキル、アルケニル、又はアルキニル）は、例えば、１、２、３、４、５、６、７，又は８個の置換基（例えば、（＝Ｏ）、ヒドロキシル、カルボキシル、カルボニル、及び／又はエステル基）で置換され得る。例えば、脂肪族基は、ペンダント基としての置換基として及び／又は末端で、カルボキシル基を有し得る。脂肪族基が化合物の一部である場合には、この脂肪族基は、化学的連結を介してこの化合物に共有結合し得、例えば、カルボニル（Ｃ＝Ｏ、Ｃ（Ｏ）又はＣ（＝Ｏ）とも表される）（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、結合、又は同類のものを介してこの化合物に共有結合し得ることが理解される。脂肪族鎖中の炭素の数は化学的連結中の骨格炭素を含むことが理解される。例えば、Ｃ（＝Ｏ）連結を含む飽和Ｃ８脂肪族鎖は、直鎖の場合には、ＣＨ３（ＣＨ２）６Ｃ（＝Ｏ）で表され得る。別の例として、第１の末端でカルボキシル基を有しており且つ第２の末端でＣ（＝Ｏ）連結を含む飽和Ｃ８脂肪族鎖は、直鎖の場合には、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）６Ｃ（＝Ｏ）で表され得る。例えば、Ｃ（＝Ｏ）連結を含む飽和Ｃ１８脂肪族鎖は、直鎖の場合には、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）で表され得る。別の例として、第１の末端でカルボキシル基を有しており且つ第２の末端でＣ（＝Ｏ）連結を含む飽和Ｃ１８脂肪族鎖は、直鎖の場合には、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）で表され得る。脂肪族基は、脂肪酸に由来し得、及び／又は脂肪族基は、二塩基酸に由来し得る。
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、直鎖状（例えば直鎖）又は分岐状の飽和炭化水素基を指す。例示的なアルキル基として、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（例えば、ｎ－プロピル及びイソプロピル）、ブチル（例えば、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル）、ペンチル（例えば、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル）、並びに同類のものが挙げられる。アルキル基は、１～約３０、１～約２４、２～約２４，１～約２０、２～約２０、１～約１０、１～約８、１～約６、１～約４、又は１～約３個の炭素原子を含み得る。
本明細書で使用される場合、「脂肪酸」という用語は、飽和又は不飽和のいずれかである、カルボキシル基で置換されている脂肪族鎖を指す。脂肪酸の例として、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、及び／又はリグノセリン酸が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「脂肪酸エステル」という用語は、鎖の末端で－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－部分を有する長い脂肪族鎖（飽和又は不飽和）を指す。
本明細書で使用される場合、「脂肪酸アミド」という用語は、鎖の末端で－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ－部分を有する長い脂肪族鎖（飽和又は不飽和）を指す。
本明細書で使用される場合、「個体」、「対象」、又は「患者」という用語は、互換的に使用され、哺乳類（好ましくは、マウス、ラット、他の齧歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、又は霊長類、最も好ましくはヒト）等のあらゆる動物を指す。
本明細書で使用される場合、「治療上有効な量」という語句は、研究者、獣医師、医師、又は他の臨床医により組織、系、動物、個体、又はヒトにおいて求められている生物学的反応又は医学的反応を励起する治療薬（即ち、薬物、又は治療剤組成物）の量を指し、この反応として、下記の内の１つ又は複数が挙げられる：
（１）疾患を予防すること；例えば、疾患、状態、又は障害に罹りやすい素因を持っている可能性があるが、この疾患の病理又は症状を依然として経験していないか又は示していない個体において、この疾患、状態、又は障害を予防すること；
（２）疾患を抑制すること；例えば、疾患、状態、又は障害の病理又は症状を経験しているか又は示している個体において、この疾患、状態、又は障害を抑制すること；
並びに
（３）疾患を寛解させること；例えば、疾患、状態、又は障害の病理又は症状を経験しているか又は示している個体において、この疾患、状態、又は障害を寛解させること（即ち、病理及び／又は症状を反転させること）、例えば、疾患の重症度を低下させること、生存期間を延長すること、及び／又は死亡を防止すること。
本明細書で使用される場合、「ボーラス用量」とは、短時間かけて投与され、例えば、１０分未満（例えば、８分未満、５分未満、３分未満、又は１分未満）かけて投与される薬物又は他の物質の単回用量のことである。一部の実施形態では、ボーラス用量を、５分未満で投与する。一部の実施形態では、ボーラス用量を、３分未満で投与する。一部の実施形態では、ボーラス用量を、１分未満で投与する。投与として、下記の内の１つが挙げられる：身体の任意の部分での注射（例えば、限定されないが、血管、皮下、髄腔内、若しくは皮内）、経腸（例えば、剤形として経口）、吸入（例えば、医薬有効成分が下気道中に直接沈着するように対象が高エアロゾル濃度に曝される気管内吸入投与による吸入）、又は経鼻（例えば、エアロゾル、液体、又は粉末として）。
本明細書で使用される場合、「血圧低下」、「血圧の低下」、又は「低血圧」という用語は、互換的に使用され、ベースライン血圧を下回る対象の血圧の統計的に有意な低下を指す。ベースライン血圧とは、対象への処置若しくは任意の薬物の投与の前に測定される平均血圧のことであるか、又は正常な健康対象の平均血圧のことである。ほとんどの血圧測定器の標準偏差は、測定方法と、測定中の対象の体位、精神状態、又は動作とに応じて、５～１５％であり得る。本明細書の明確さのために、血圧の変化は、薬物又は試験物質の投与前の平均（ｍｅａｎ）／平均（ａｖｅｒａｇｅ）ベースライン血圧からの血圧の統計的に有意な割合の増加、減少、又は低下として表される。統計的に有意とは、統計学の当業者に既知であるようにＰ＜０．０５を意味する。
本明細書で使用される場合、「Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド」又は「ＣＮＰ」という用語は、ジスルフィド結合により形成された１７個アミノ酸残基環構造と、Ｎ末端での追加の５個アミノ酸残基伸長とを有する、２２個のアミノ酸残基を含むベプチドのことである（ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号１０］；ここで、文字は、従来のアミノ酸命名法に従っており、アミノ酸残基Ｃ－６（６位）及びＣ－２２（２２位）は、ジスルフィド結合により連結されている）。例えば、Ｓｕｄｏｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９８９；１５９：１４２７－１４３４を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「ＮＰＲＢ受容体」、「ナトリウム利尿ペプチド受容体Ｂ（ＮＰＲＢ）」、又は「ＮＰＲ２」、「グアニル酸シクラーゼＢ（ＧＣ－Ｂ）」、又は「Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド受容体２」（ＮＰＲ２）は、互換的に使用される。ヒトでは、ＮＰＲＢ受容体は、ＮＰＲ２遺伝子によりコードされており、この遺伝子は、９番染色体に位置しており、マウスでは４番染色体に位置している。例えば、Ｎｕｇｌｏｚｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ．１９９７；８：６２４－６２５を参照されたい。ＮＰＲＢの発現は、様々な臓器（例えば、心臓、脳、子宮、卵巣、腎臓、肺、肝臓、及び脂肪細胞）、並びに一部の癌で報告されている。Ｓｃｈｕｌｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．１９８９；５８：１１５５－１１６２；Ｎａｇａｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．１９９７；１５：１２３５－１２４３；Ｃｈｒｉｓｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９３；２６８：３６９８－３７０３。ＮＰＲＢは、ＣＮＰにより選択的に活性化され、ＡＮＰ又はＢＮＰ（他の既知のナトリウム利尿ペプチド）によっては活性化されない。ＮＰＲＢのユビキタス発現は、多くの生理学的機能での役割を示す。他のナトリウム利尿ペプチド受容体であるＮＰＲＡは、生理学的濃度のＡＮＰ及びＢＮＰにより活性化されるが、ＮＰＲＡは、ＣＮＰによっては活性化されない。
本明細書で使用される場合、「長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド」又は「長時間作用性ＣＮＰ」という用語は、ＣＮＰ製剤であって、哺乳類対象（ヒト、非ヒト、霊長類、イヌ、ラット、マウス等）に単回ボーラス用量として投与された場合に、結果としての、ベースラインを超える血漿中におけるＣＮＰレベルの上昇又は血漿中環状ＧＭＰレベルの上昇が、種に応じて４時間超又は６時間超の持続期間にわたり継続する、ＣＮＰ製剤を指す。長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド又は長時間作用性ＣＮＰは、超長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド又は超長時間作用性ＣＮＰを包含する。血漿中環状ＧＭＰの上昇は、ＣＮＰ構造活性自体の結果であるか、又はＣＮＰと、このＣＮＰを含む製剤の１種又は複数種の成分との組合わせに由来している。血漿中での存在（又は上昇）は、分析用ベースラインを超える検出可能な存在を意味しており、このベースラインレベルは、長時間作用性ＣＮＰ製剤投与の非存在下で測定されたレベルである。血漿中環状ＧＭＰの継続的上昇の長さとは、ＣＮＰ製剤の生物学的活性の持続時間のことである。ＣＮＰ製剤は、ＣＮＰペプチドと、１種又は複数種の賦形剤又は担体（例えば、ポリマー、タンパク質、糖、界面活性剤、及び／又は緩衝剤等）とを含む組成物を指す。ＣＮＰ製剤中のＣＮＰは、賦形剤又は担体に共有結合的に連結されていてもよいし、連結されていなくてもよい。血液中での継続的存在を、投与後の薬物動態学的／薬力学的分析により評価し得る。
本明細書で使用される場合、「超長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド」、又は「超長時間作用性ＣＮＰ」を含む製剤は、対象に単回ボーラス用量として投与された場合に、２４時間以上（例えば、最大２～３日、又は最大１～４週間）にわたる血漿中の継続的な存在又はベースラインを超える継続的な血漿中環状ＧＭＰ上昇を有するように製剤化された、２２個アミノ酸残基ＣＮＰを含む長時間作用性ＣＮＰ製剤を指す。そのため、超長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド又は超長時間作用性ＣＮＰは、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド又は長時間作用性ＣＮＰのサブセットである。血漿中での存在は、対象により通常作られる内在性天然アゴニストを超えるか又は治療用ＣＮＰ製剤の投与の非存在下での分析用ベースラインレベルを超える検出可能な存在を意味する。血漿中環状ＧＭＰ上昇、又はベースラインを超える検出可能なＣＮＰの存在の持続時間（即ち、時間の長さ）は、２４～１９２時間、又は２４～４８時間、又は４８～７２時間、又は７２～９６時間、又は９６～１２０時間、又は１２０～１４４時間、１４４～１６８時間、又は１６８～１９２時間であり得る。上記で説明したように、ＣＮＰ製剤は、ＣＮＰペプチドと、１種又は複数種の賦形剤又は担体（例えば、ポリマー、タンパク質、糖、界面活性剤、及び／又は緩衝剤）とを含む組成物である。ＣＮＰ製剤中のＣＮＰは、賦形剤又は担体に共有結合的に連結されていてもよいし、連結されていなくてもよい。血液中での継続的存在を、投与後の薬物動態学的／薬力学的分析により評価し得る。
本明細書で使用される場合、「長時間作用性ＣＮＰ誘導体」という用語は、ＣＮＰ誘導体であって、哺乳類の対象又は患者に単回ボーラス用量として投与された場合に、種に応じた４時間超又は６時間超にわたる血漿中の継続的な存在又はベースラインを超える継続的な血漿中環状ＧＭＰ上昇を有するＣＮＰ誘導体である。長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体を包含する。長時間作用性は、ＣＮＰ誘導体構造自体に由来し得るか、又はＣＮＰ誘導体と、このＣＮＰ誘導体を含む製剤の１種又は複数種の成分との組合わせに由来し得る。血漿又は血液中の存在は、哺乳類により通常作られる内在性天然アゴニストを超えるか又は治療用の化合物、ペプチド、タンパク質、若しくは製剤の投与の非存在下での分析用ベースラインレベルを超える検出可能な存在を意味する。血液中での継続的存在を、投与後の薬物動態学的／薬力学的分析により評価し得る。一部の実施形態では、このＣＮＰ誘導体は、天然ＣＮＰに対して少なくとも７２％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％）の配列相同性又は配列同一性を有する改変ＣＮＰである。一部の実施形態では、このＣＮＰ誘導体は、天然ＣＮＰが、ＣＮＰペプチド中の任意のアミノ酸残基のＮ末端での、Ｃ末端での、又はＲ基中における化学的部分（例えば、１つ又は複数の追加のアミノ酸、及び／又は脂肪酸、及び／又は任意の化学的部分）の共有結合的付加により改変されている、付加誘導体である。一部の実施形態では、このＣＮＰ誘導体として、天然ＣＮＰ中の１～６個のアミノ酸残基（又はアミノ酸残基の５～２８％）が、異なるアミノ酸残基又は非天然アミノ酸残基に置き換えられている、置換誘導体が挙げられる。ある特定の実施形態では、このＣＮＰ誘導体として、天然ＣＮＰ中の１～６個のアミノ酸残基（又はアミノ酸残基の５～２８％）が欠失している、減算誘導体が挙げられる。ある特定の実施形態では、このＣＮＰ誘導体として、天然ＣＮＰ中の１～６個のアミノ酸残基（又はアミノ酸残基の５～２８％）が欠失しており、及び／又は置換されている、減算誘導体が挙げられる。ＣＮＰ誘導体製剤は、ＣＮＰ誘導体と、１種又は複数種の賦形剤又は担体（例えば、ポリマー、タンパク質、糖、界面活性剤、又は緩衝剤）とを含む組成物を指す。
本明細書で使用される場合、「超長時間作用性ＣＮＰ誘導体」という用語は、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又はＣＮＰ誘導体であって、哺乳類の対象又は患者に単回ボーラス用量として投与された場合に、２４時間以上の継続時間にわたる血漿中の継続的な存在又はベースラインを超える継続的な血漿中環状ＧＭＰ上昇を有する長時間作用性ＣＮＰ誘導体又はＣＮＰ誘導体を指す。そのため、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、長時間作用性ＣＮＰ誘導体のサブセットである。超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＮＰ誘導体構造自体に由来し得るか、又はＣＮＰ誘導体と、このＣＮＰ誘導体を含む製剤の１種若しくは複数種の成分との組合わせに由来し得る。血漿中の存在は、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体の投与の非存在下での分析用ベースライン血漿レベルを超える検出可能な存在を指す。ベースラインを超える血漿中環状ＧＭＰ上昇又は検出可能なＣＮＰ誘導体の存在の持続時間は、２４～１９２時間、又は２４～４８時間、又は４８～７２時間、又は７２～９６時間、又は９６～１２０時間、又は１２０～１４４時間、１４４～１６８時間、又は１６８～１９２時間であり得る。血液中での継続的存在を、投与後の薬物動態学的／薬力学的分析により評価し得る。一部の実施形態では、このＣＮＰ誘導体として、天然ＣＮＰに対して７２％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％）の配列同一性を有する改変ＣＮＰが挙げられる。一部の実施形態では、このＣＮＰ誘導体は、天然ＣＮＰが、ＣＮＰペプチド中の任意のアミノ酸残基のＮ末端での、Ｃ末端での、又はＲ基中における化学的部分（例えば、追加のアミノ酸、及び／又は脂肪酸、及び／又は任意の化学的部分）の共有結合的付加により改変されている、付加誘導体である。一部の実施形態では、このＣＮＰ誘導体は、天然ＣＮＰ中の１～６個のアミノ酸残基（又はアミノ酸残基の５～２８％）が、異なるアミノ酸残基又は非天然アミノ酸残基に置き換えられている、置換誘導体である。ある特定の実施形態では、このＣＮＰ誘導体は、天然ＣＮＰ中の１～６個のアミノ酸残基（又はアミノ酸残基の５～２８％）が欠失した、減算誘導体である。ある特定の実施形態では、このＣＮＰ誘導体として、天然ＣＮＰ中の１～６個のアミノ酸残基（又はアミノ酸残基の５～２８％）が欠失しており、及び／又は置換されている、減算誘導体が挙げられる。ＣＮＰ誘導体製剤は、ＣＮＰ誘導体と、１種又は複数種の賦形剤又は担体（例えば、ポリマー、タンパク質、糖、界面活性剤、又は緩衝剤）とを含む組成物である。
本明細書で使用される場合、「ＣＮＰの製剤」又は「ＣＮＰ誘導体の製剤」は、賦形剤又は担体（例えば、ポリマー、タンパク質、及び／又は脂質）と共有結合的に連結されていてもよいし連結されていなくてもよいＣＮＰペプチド又はその誘導体を含む組成物を指す。
本明細書で使用される場合、「ＮＰＲＢアゴニスト」又は「ＮＰＲ２アゴニスト」という用語は、任意の化合物、ペプチド、又はタンパク質であって、その構造中に２２個アミノ酸残基ＣＮＰ配列を含まず、且つ細胞触媒受容体であるＮＰＲＢに結合し、その細胞内グアニリルシクラーゼ活性を刺激して細胞内環状ＧＭＰレベル又は血液中環状ＧＭＰレベルを上昇させ得るが、ＮＰＲＡ受容体に結合して刺激する能力は限定的であるか、又はこの能力はない、任意の化合物、ペプチド、又はタンパク質を指す。全ての細胞が同様のレベルのＮＰＲＢを発現するわけではないことから、ＮＰＲＢアゴニストは、ＮＰＲＢを発現している細胞に主に作用するように調整されている。この選択性を、ＮＰＲＡを発現する細胞における活性と比較して、ＮＰＲＢを発現する細胞中の活性を測定することにより、当業者により容易に測定され得る。
本明細書で使用される場合、「長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト」という用語は、上記で定義されたＮＰＲＢアゴニストであって、哺乳類の対象又は患者に単回ボーラス用量として投与され場合に、種に応じた４時間超又は６時間超にわたる血漿中の継続的な存在又はベースラインを超える継続的な血漿中環状ＧＭＰ上昇を有するＮＰＲＢアゴニストを指す。長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストは、超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを包含する。ＮＰＲＢアゴニストの長時間作用性は、ＮＰＲＢアゴニスト構造自体に由来し得るか、又はＮＰＲＢアゴニストと、このＮＰＲＢアゴニストを含む製剤の１種又は複数種の成分との組合わせに由来し得る。血漿中の存在は、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストの投与の非存在下での分析用ベースラインレベルを超える検出可能な存在を意味する。長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストの製剤、又は長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト製剤は、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む組成物であるか、又は長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストと、１種若しくは複数種の賦形剤若しくは担体（例えば、ポリマー、タンパク質、糖、脂質、若しくは緩衝剤）とを含む組成物である。長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストは、賦形剤又は担体に共有結合的に連結されていてもよいし、連結されていなくてもよい。血液中の継続的存在を、投与後の薬物動態学的／薬力学的分析により評価し得る。ベースラインを超える環状ＧＭＰの継続的な血漿中上昇を、投与後の薬力学的分析により評価し得る。
本明細書で使用される場合、「超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト」という用語は、長時間ＮＰＲＢアゴニストであって、哺乳類の対象又は患者に単回ボーラス用量として投与された場合に、２４時間以上にわたる血漿中の継続的な存在又はベースラインを超える継続的な血漿中環状ＧＭＰ上昇を有する長時間ＮＰＲＢアゴニストを指す。超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストは、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストのサブセットである。ＮＰＲＢアゴニストの超長時間作用性は、ＮＰＲＢアゴニスト構造自体に由来し得るか、又はＮＰＲＢアゴニストと、このＮＰＲＢアゴニストを含む製剤の１種又は複数種の成分との組合わせに由来し得る。血漿中の存在は、超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストの投与の非存在下での分析用ベースラインレベルを超える検出可能な存在を意味する。ベースラインを超える血漿中環状ＧＭＰ上昇又は検出可能なＮＰＲＢアゴニストの存在の持続時間は、２４～１９２時間、２４～４８時間、又は４８～７２時間、又は７２～９６時間、又は９６～１２０時間、又は１２０～１４４時間、１４４～１６８時間、又は１６８～１９２時間であり得る。超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストの製剤、又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト製剤は、超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む組成物を指すか、又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストと、１種若しくは複数種の賦形剤若しくは担体（例えば、ポリマー、タンパク質、糖、脂質、若しくは緩衝剤）とを含む組成物を指す。超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストは、賦形剤又は担体に共有結合的に連結されていてもよいし、連結されていなくてもよい。血液中の継続的存在を、投与後の薬物動態学的／薬力学的分析により評価し得る。血液中の継続的存在を、投与後の薬物動態学的／薬力学的分析により評価し得る。ベースラインを超える環状ＧＭＰの継続的な血漿中上昇を、投与後の薬力学的分析により評価し得る。
本明細書で使用される場合、「ＮＰＲＡに対するアゴニスト活性が限定的であるか又はこの活性がないＮＰＲＢアゴニスト」という語句は、ＮＰＲＡと比べてＮＰＲＢに対して５倍超の結合親和性（又は低いＥＣ５０）を有するＮＰＲＢアゴニストを指す。
本明細書で使用される場合、「ポリマー」という用語は、互いに共有結合している多くの同様の繰り返し単位で主に又は完全に形成されている巨大分子を指す。ポリマーという用語には、セルロース誘導体、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、及びポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、並びにこれらの誘導体が含まれる。これらのポリマーは、分岐状又は直鎖状であり得る。本明細書で使用される場合、ポリマーは、アミド結合、エステル結合、エーテル結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、若しくはカルバメート結合により、又はこれらの結合の内の１を含むリンカーにより、ペプチド、タンパク質、又はリンカー基に付着され得る。ポリマーを互いにグラフト化して、保護されたグラフトコポリマー賦形剤も作製し得、この賦形剤は、医薬有効成分と混合された場合に、インビボでの投与後に血液又は血漿中の存在を拡大することにより、医薬有効成分の薬物動態性能及び薬力学的性能を増強し得る。
「アミノ酸」という用語とは、本明細書で使用される場合、各アミノ酸に固有の側鎖（Ｒ基）と共にアミノ官能基（－ＮＨ２）及びカルボキシル官能基（－ＣＯＯＨ）を含む、分子量が５００Ｄａ未満である有機化合物のことである。アミノ酸の主要な要素は、炭素（Ｃ）、水素（Ｈ）、酸素（Ｏ）、及び窒素（Ｎ）であるが、ある特定のアミノ酸の側鎖では、他の要素も見出される。１９８３年の時点では、約５００種の天然に存在するアミノ酸が知られている（但し、哺乳類の遺伝暗号では２０種のみが見られ、これら２０種のアミノ酸はまた、本明細書では、「天然アミノ酸」とも称される）。アルミ酸は、アミノ基がアルファ炭素に直接結合しているアルファアミノ酸であり得る。アミノ酸は、一次アミノ基がアルファ位以外の炭素に連結されている非アルファアミノ酸であり得る。アルファ炭素は、カルボキシル基に直接隣接する炭素である。
「誘導体」又は「類似体」という用語には、本明細書で使用される場合、コア構造が親化合物と同一つであるか又は親化合物に類似しているが、異なる基又は追加の基等の化学的改変又は物理的改変を有する化合物が含まれ、この用語には、他の原子又は分子に連結され得る親化合物の共ポリマーが含まれる。この用語にはまた、親ペプチド又は親タンパク質と少なくとも７２％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％）の配列同一性を有するペプチド又はタンパク質も含まれる。この用語にはまた、親ペプチドと比較して追加の標識又はタグ等の追加の基が付着しているペプチドも含まれる。この用語にはまた、親ポリマーと比較してアルコキシ基又はメトキシ基等の追加の基が付着しているポリマーも含まれる。
本明細書で使用される場合、「付加誘導体」又は「拡大誘導体」は、ペプチド誘導体であって、ペプチドの主骨格アミノ酸配列が同一のままであるが、主アミノ酸配列中の１つ又は複数の反応性部分を使用する主アミノ酸配列への余分な官能基及び／又はアミノ酸の付加により、付加誘導体又は拡大誘導体が生じる、ペプチド誘導体を指す。付加誘導体又は拡大誘導体は、トランケーション及び／又は置換ペプチド誘導体であって、ペプチドの主骨格アミノ酸残基配列中の１つ又は複数のアミノ酸残基が、それぞれ除去されており、並びに／又は異なる官能基及び／若しくはアミノ酸残基に置き換えられている、トランケーション及び／又は置換ペプチド誘導体とは異なる。
本明細書で使用される場合、「リンカー基」、又は「連結基」、又は「リンカー」という用語は、２つの実体（例えば、２つの分子の一部）が互いに共有結合的に連結させるか又は結合する原子又は化学的部分を指す。例えば、リンカー前駆体（例えば、市販の架橋剤から得られるアミノ酸、ペプチド、又は非アミノ酸分子）を、２つの実体と反応さ得、これら２つ実体が、リンカー基を介して互いに連結される。これら２つの実体が互いに連結されると、リンカー基は、最終的な連結された実体において、リンカー前駆体から残存する部分である。例えば、分子Ａが分子Ｂに連結される場合には、リンカー基は、２つの化学的官能基を有し得、一方の官能基はＡと反応し、他方の官能基がＢと反応して、「Ａ－リンカー基－Ｂ」が得られる。この場合には、リンカー基は、Ａ及びＢの共有結合的連結後に残存する、リンカー前駆体の部分である。
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸のポリマーを指す。
本明細書で使用される場合、「ペプチド」という用語は、３個以上のアミノ酸が、アルファアミノ及びアルファカルボキシルを介するアミド結合により互いに共有結合的に連結されているポリペプチドを指す。ペプチド中のアミノ酸数は、３～約１００個の単位であり得る。
本明細書で使用される場合、「タンパク質」という用語は、β－バレル又はα－ヘリックス等の３次元構造を有するの十分な大きさのポリペプチドを指す。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、特定の抗原を認識する免疫細胞により産生されるタンパク質を指す。抗体は、血液中の特定の抗原に反応して産生され且つこの抗原に対抗するタンパク質である。抗体は、血液中の細菌、ウイルス、及び異物等の身体が異質と認識する物質と化学的に結合する。
本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト種由来の抗体であって、タンパク質配列が改変されて、ヒトで自然に産生される抗体バリアントに対する類似性が高められている、抗体を指す。
本明細書で使用される場合、「皮下投与」、「ｓ．ｃ．」、「ｓ．ｃ．投与」、「ＳＣ」、又は「ＳＣ投与」という用語は、皮膚の真下の脂肪組織への直接的な薬物（通常は液体の形態）の送達を指す。この送達は、通常は直接注射により行なわれる。この注射は、筋肉組織に注射される場合と比べて浅い。医療提供者は、緩やかに且つ着実に血流に吸収されるのに適した薬剤に皮下注射を使用することが多い。
本明細書で使用される場合、「静脈内投与」、「ＩＶ投与」、又は「ＩＶ注射」という用語は、動物又はヒトの静脈への直接的な薬物（典型的には液体の形態）の送達を指す。この送達方法は、通常は直接注射によるものである。静脈内投与経路を、比較的高圧でシリンジを使用する注射と、例えば重量により提供される圧力を使用する注入との両方に使用し得る。
本明細書で使用される場合、「筋肉内投与」、「ＩＭ投与」、又は「ＩＭ注射」という用語は、動物又はヒトの筋肉への直接的な薬物（通常は液体の形態）の筋肉内送達を指す。この送達は、通常は直接注射によるものである。これにより、薬剤の血流への急速な吸収が可能となる。場合によっては、ＩＭ注射を自己投与する場合もある。一部の実施形態では、例えば、ある特定の治療薬が静脈を刺激する場合には、又は好適な静脈を見つけることができない場合には、静脈内注射の代わりにＩＭ注射を使用し得る。
本明細書で使用される場合、「経鼻投与」という用語は、動物又はヒトの鼻への局所的な塗布、液体としての滴下、ガス注入（又は吹き込み若しくは噴霧）による治療薬（例えば、ゲル、液体、エアロゾル、ガス、又は粉末の形態）の送達を指す。この投与形態は、製剤に応じて使用されて、例えば、治療薬を（使用する機器に応じて）鼻腔若しくは肺に送達し得、及び／又は全身に吸収され得ず（純粋な局所投与）、及び／又は全身に完全に吸収され得（純粋な全身性）、及び／又はより頻繁に部分的に吸収され得る（局所及び全身の両方）。鼻腔用スプレーとして、風邪及びアレルギーの処置用のうっ血除去薬等の局所作用薬が挙げられ得、この局所作用薬の全身的作用は、典型的には最小限に抑えられている。鼻腔用スプレーとして利用可能な全身作用薬の例として、例えば、片頭痛薬、ニコチン代替薬、及びホルモン治療薬が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「非経口」又は「非消化管」投与という用語は、腸経路又は消化管経路を通らない投与経路を指す。非経口投与の例として、下記が挙げられる：皮下（皮膚の下）、静脈内（腸脈中）、動脈内（動脈中）、筋肉内（筋肉中）、腹腔内（腹腔への注入若しくは注射）、吸入（例えば、医薬有効成分が下気道中に直接沈着するように対象が高エアロゾル濃度の医薬有効成分に曝される気管内吸入投与による吸入）、経鼻投与（鼻を通る投与）、舌下及び頬側薬物適用、髄腔内（脊柱管中）、脳内（大脳中）、脳室内（脳室中）、皮内（皮膚自体中）、又は消化管を介さない任意の他の投与経路。本明細書で使用される場合、「経腸」という用語は、口（口腔）、咽頭（喉）、食道、胃、小腸、大腸、直腸、及び肛門を含む、消化管の任意の領域への投与と、これらの領域の内のいずれかでの人工的開口部を介した投与とを意味している。
本明細書で使用される場合、「治療薬」、「薬物」、又は「医薬有効成分」という用語は、疾患状態で治癒効果をもたらし得る物質又は分子を指す。
本明細書で使用される場合、「賦形剤」という用語は、長期安定化の目的のために、少量の強力な有効成分を含む製剤を増量するために（そのため、「増量剤」、「充填剤」、若しくは「希釈剤」と称されることが多い）、及び／又は最終剤形中の医薬有効成分に治療的増強を付与するために、例えば、薬物吸収及び／若しくは効力／用量を促進し、粘度を低下させ、溶解性を高め、及び／又は血液中の医薬有効成分の作用若しくは存在を延長させるために、医薬有効成分と一緒に製剤化されるか又は混合される物質を指す。適切な賦形剤の選択は、投与経路及び剤形、医薬有効成分、並びに他の因子に依存している。賦形剤として、例えば下記が挙げられる得る：糖、アミノ酸、緩衝剤、抗酸化剤、キレート剤、溶媒若しくはビヒクル、並びに／又はインビトロ及び／若しくはインビボで医薬有効成分に結合して安定化させる複合ポリマー。賦形剤は、かつては「不活性」成分であると見なされていたが、現在では、「剤形性能の重要な決定因子」の場合があり得ることが理解されている。換言すると、薬力及び薬物動態への賦形剤の影響は重要な可能性があり、広範な調査及び研究が必要な可能性がある。賦形剤が医薬有効成分の送達にどのように影響を及ぼすかは、予測不能であることが多い。
本明細書で使用される場合、「健康な対象」という用語は、当業者（医師及び／又は臨床医）により評価された場合に、健康上の問題の兆候又は他の既知の重大な健康上の問題がない個体（ヒト及び／又は哺乳類動物）を指す。本開示の目的のために、これは、当業者（医師及び／又は臨床医）により評価された場合に腫瘍癌がない個体である。例として、健康なヒト対象は、血液学的検査結果に関して下記の特徴的な検査値を示す：好中球絶対数（男性）：１７８０～５３８０／μＬ（１．７８～５．３８×１０９／Ｌ）、（女性）：１５６０～６１３０／μＬ（１．５６～６．１３×１０９／Ｌ）；活性化部分トロンボプラスチン時間：２５～３５秒；出血時間：１０分未満；赤血球数：４．２～５．９×１０６／μＬ（４．２～５．９×１０１２／Ｌ）；赤血球沈降速度（男性）０～１５ｍｍ／時間、（女性）：０～２０ｍｍ／時間；エリスロポエチン：３０ｍＵ／ｍＬ（３０単位／Ｌ）未満；Ｄ－二量体：０．５μｇ／ｍＬ未満（０．５ｍｇ／Ｌ）；フェリチン、血清：１５～２００ｎｇ／ｍＬ（１５～２００μｇ／Ｌ）；ハプトグロビン、血清：５０～１５０ｍｇ／ｄＬ（５００～１５００ｍｇ／Ｌ）；ヘマトクリット（男性）：４１％～５１％、（女性）：３６％～４７％；ヘモグロビン、血液（男性）：１４～１７ｇ／ｄＬ（１４０～１７０ｇ／Ｌ）、（女性）：１２～１６ｇ／ｄＬ（１２０～１６０ｇ／Ｌ）；白血球アルカリホスファターゼ：１０１０個の細胞当たり１５～４０ｍｇの遊離リン、スコア＝１３～１３０／１００の多形核好中球及び帯状体；白血球数：４０００～１０，０００／μＬ（４．０～１０×１０９／Ｌ）；平均赤血球ヘモグロビン：２８～３２ｐｇ；平均赤血球ヘモグロビン濃度：３２～３６ｇ／ｄＬ（３２０～３６０ｇ／Ｌ）；平均赤血球容積：８０～１００ｆＬ；血小板数：１５０，０００～３５０，０００／μＬ（１５０～３５０×１０９／Ｌ）；プロトロンビン時間：１１～１３秒；網状赤血球数：赤血球の０．５％～１．５％；絶対値：２３，０００～９０，０００／μＬ（２３～９０×１０９／Ｌ）。
健康なヒト対象は、血液、血漿、及び血清の化学的結果に関して、下記の特徴的な検査値を示す。アルブミン、血清：３．５～５．５ｇ／ｄＬ（３５～５５ｇ／Ｌ）；アルカリホスファターゼ、血清：３６～９２単位／Ｌ；α－フェトプロテイン、血清：０～２０ｎｇ／ｍＬ（０～２０μｇ／Ｌ）；アミノトランスフェラーゼ、アラニン（ＡＬＴ）：０～３５単位／Ｌ；アミノトランスフェラーゼ、アスパラギン酸（ＡＳＴ）：０～３５単位／Ｌ；アンモニア、血漿：４０～８０μｇ／ｄＬ（２３～４７μｍｏｌ／Ｌ）；アミラーゼ、血清：０～１３０単位／Ｌ 炭酸水素塩、血清：２３～２８ｍｅｑ／Ｌ（２３～２８ｍｍｏｌ／Ｌ）；ビリルビン、総血清：０．３～１．２ｍｇ／ｄＬ（５．１～２０．５μｍｏｌ／Ｌ）直接：０～０．３ｍｇ／ｄＬ（０～５．１μｍｏｌ／Ｌ）；血液ガス、動脈（周囲空気）ｐＨ：７．３８～７．４４ Ｐｃｏ２：３５～４５ｍｍＨｇ（４．７～６．０ｋＰａ）Ｐｏ２：８０～１００ｍｍ Ｈｇ（１０．６～１３．３ｋＰａ）；酸素飽和度：９５％以上；血中尿素窒素：８～２０ｍｇ／ｄＬ（２．９～７．１ｍｍｏｌ／Ｌ）；Ｃ反応性タンパク質：０．０～０．８ｍｇ／ｄＬ（０．０～８．０ｍｇ／Ｌ）；カルシウム、血清：９～１０．５ｍｇ／ｄＬ（２．２～２．６ｍｍｏｌ／Ｌ）；塩化物、血清：９８～１０６ｍｅｑ／Ｌ（９８～１０６ｍｍｏｌ／Ｌ）；コレステロール、総血漿：１５０～１９９ｍｇ／ｄＬ（３．８８～５．１５ｍｍｏｌ／Ｌ）、望ましい低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）：１３０ｍｇ／ｄＬ（３．３６ｍｍｏｌ／Ｌ）以下、望ましい；高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）：４０ｍｇ／ｄＬ（１．０４ｍｍｏｌ／Ｌ）以上、望ましい；補体、血清Ｃ３：５５～１２０ｍｇ／ｄＬ（５５０～１２００ｍｇ／Ｌ）；総（ＣＨ５０）：３７～５５Ｕ／ｍＬ（３７～５５ｋＵ／Ｌ）；クレアチンキナーゼ、血清：３０～１７０単位／Ｌ；クレアチニン、血清：０．７～１．３ｍｇ／ｄＬ（６１．９～１１５μｍｏｌ／Ｌ）；電解物、血清ナトリウム：１３６～１４５ｍｅｑ／Ｌ（１３６～１４５ｍｍｏｌ／Ｌ）、カリウム：３．５～５．０ｍｅｑ／Ｌ（３．５～５．０ｍｍｏｌ／Ｌ）、塩化物：９８～１０６ｍｅｑ／Ｌ（９８～１０６ｍｍｏｌ／Ｌ）、炭酸水素塩：２３～２８ｍｅｑ／Ｌ（２３～２８ｍｍｏｌ／Ｌ）；フィブリノーゲン、血漿：１５０～３５０ｍｇ／ｄＬ（１．５～３．５ｇ／Ｌ）；葉酸塩、赤血球：１６０～８５５ｎｇ／ｍＬ（３６２～１９３７ｎｍｏｌ／Ｌ）；葉酸塩、血清：２．５～２０ｎｇ／ｍＬ（５．７～４５．３ｎｍｏｌ／Ｌ）；グルコース、血漿：空腹時、７０～１００ｍｇ／ｄＬ（３．９～５．６ｍｍｏｌ／Ｌ）；γ－グルタミルトランスフェラーゼ、血清：０～３０単位／Ｌ；ホモシステイン、血漿 男性：０．５４～２．１６ｍｇ／Ｌ（４～１６μｍｏｌ／Ｌ）、女性：０．４１～１．８９ｍｇ／Ｌ（３～１４μｍｏｌ／Ｌ）；免疫グロブリン グロブリン、合計：２．５～３．５ｇ／ｄＬ（２５～３５ｇ／Ｌ）、ＩｇＧ：６４０～１４３０ｍｇ／ｄＬ（６．４～１４．３ｇ／Ｌ）、ＩｇＡ：７０～３００ｍｇ／ｄＬ（０．７～３．０ｇ／Ｌ）、ＩｇＭ：２０～１４０ｍｇ／ｄＬ（０．２～１．４ｇ／Ｌ）、ＩｇＤ：８ｍｇ／ｄＬ（８０ｍｇ／Ｌ）未満、ＩｇＥ：０．０１～０．０４ｍｇ／ｄＬ（０．１～０．４ｍｇ／Ｌ）；フェリチン鉄、血清：１５～２００ｎｇ／ｍＬ（１５～２００μｇ／Ｌ）、鉄、血清：６０～１６０μｇ／ｄＬ（１１～２９μｍｏｌ／Ｌ）、鉄結合能、合計、血清：２５０～４６０μｇ／ｄＬ（４５～８２μｍｏｌ／Ｌ）、トランスフェリン飽和度：２０％～５０％；乳酸デヒドロゲナーゼ、血清：６０～１００単位／Ｌ；乳酸、静脈血：６～１６ｍｇ／ｄＬ（０．６７～１．８ｍｍｏｌ／Ｌ）；リパーゼ、血清：９５単位／Ｌ未満；マグネシウム、血清：１．５～２．４ｍｇ／ｄＬ（０．６２～０．９９ｍｍｏｌ／Ｌ）；メチルマロン酸、血清：１５０～３７０ｎｍｏｌ／Ｌ；重量オスモル濃度、血漿：２７５～２９５ｍｏｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ；ホスファターゼ、アルカリ性、血清：３６～９２単位／Ｌ；リン、血清：３～４．５ｍｇ／ｄＬ（０．９７～１．４５ｍｍｏｌ／Ｌ）；カリウム、血清：３．５～５．０ｍｅｑ／Ｌ（３．５～５．０ｍｍｏｌ／Ｌ）；前立腺特異的抗原、血清－４ｎｇ／ｍＬ（４μｇ／Ｌ）未満；タンパク質、総血清：６．０～７．８ｇ／ｄＬ（６０～７８ｇ／Ｌ）、アルブミン：３．５～５．５ｇ／ｄＬ（３５～５５ｇ／Ｌ）、グロブリン、合計：２．５～３．５ｇ／ｄＬ（２５～３５ｇ／Ｌ）；リウマトイド因子：４０Ｕ／ｍＬ（４０ｋＵ／Ｌ）未満；ナトリウム、血清：１３６～１４５ｍｅｑ／Ｌ（１３６～１４５ｍｍｏｌ／Ｌ）；トランスフェリン飽和度：２０％～５０％；トリグリセリド：１５０ｍｇ／ｄＬ（１．６９ｍｍｏｌ／Ｌ）未満、望ましい；トロポニン、血清トロポニンＩ：０～０．５ｎｇ／ｍＬ（０～０．５μｇ／Ｌ）、トロポニンＴ：０～０．１０ｎｇ／ｍＬ（０～０．１０μｇ／Ｌ）；尿素窒素、血液：８～２０ｍｇ／ｄＬ（２．９～７．１ｍｍｏｌ／Ｌ）；尿酸、血清：２．５～８ｍｇ／ｄＬ（０．１５～０．４７ｍｍｏｌ／Ｌ）；ビタミンＢ１２、血清：２００～８００ｐｇ／ｍＬ（１４８～５９０ｐｍｏｌ／Ｌ）。
健康なヒト対象は、内分泌検査パネルの結果に関して、下記の特徴的な検査値を示す：副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、血清：９～５２ｐｇ／ｍＬ（２～１１ｐｍｏｌ／Ｌ）；アルドステロン、血清 臥位：２～５ｎｇ／ｄＬ（５５～１３８ｐｍｏｌ／Ｌ）立位：７～２０ｎｇ／ｄＬ（１９４～５５４ｐｍｏｌ／Ｌ）；アルドステロン、尿：５～１９μｇ／２４時間（１３．９～５２．６ｎｍｏｌ／２４時間）；カテコラミン エピネフリン、血漿（臥位）：７５ｎｇ／Ｌ（４１０ｐｍｏｌ／Ｌ）未満、ノルエピネフリン血漿（臥位）：５０～４４０ｎｇ／Ｌ（２９６～２６００ｐｍｏｌ／Ｌ）、カテコールアミン、２４時間、尿：２４時間当たり１００μｇ／ｍ２（２４時間当たり５９１ｎｍｏｌ／ｍ２）未満；コルチゾール、遊離、尿－５０μｇ／２４時間（１３８ｎｍｏｌ／２４時間）未満；デヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ＤＨＥＡ）、血漿 男性：１．３～５．５μｇ／ｍＬ（３．５～１４．９μｍｏｌ／Ｌ）女性：０．６～３．３μｇ／ｍＬ（１．６～８．９μｍｏｌ／Ｌ）；エピネフリン、血漿（臥位）：７５ｎｇ／Ｌ（４１０ｐｍｏｌ／Ｌ）未満；エストラジオール 血清 男性：１０～３０ｐｇ／ｍＬ（３７～１１０ｐｍｏｌ／Ｌ）、女性：１～１０日目、１４～２７ｐｇ／ｍＬ（５０～１００ｐｍｏｌ／Ｌ）；１１～２０日目、１４～５４ｐｇ／ｍＬ（５０～２００ｐｍｏｌ／Ｌ）；２１～３０日目、１９～４１ｐｇ／ｍＬ（７０～１５０ｐｍｏｌ／Ｌ）；卵胞刺激ホルモン、血清男性（成人）：５～１５ｍＵ／ｍＬ（５～１５単位／Ｌ）、女性：卵胞期又は黄体期、５～２０ｍＵ／ｍＬ（５～２０単位／Ｌ）；中間期ピーク、３０～５０ｍＵ／ｍＬ（３０～５０単位／Ｌ）；閉経後、３５ｍＵ／ｍＬ（３５単位／Ｌ）超；成長ホルモン、血漿：経口グルコース後：２ｎｇ／ｍＬ（２μｇ／Ｌ）未満；誘発性刺激に対する反応：７ｎｇ／ｍＬ（７μｇ／Ｌ）超；黄体ホルモン、血清 男性：３～１５ｍＵ／ｍＬ（３～１５単位／Ｌ）女性：卵胞期又は黄体期、５～２２ｍＵ／ｍＬ（５～２２単位／Ｌ）；中間期ピーク、３０～２５０ｍＵ／ｍＬ（３０～２５０単位／Ｌ）；閉経後、３０ｍＵ／ｍＬ（３０単位／Ｌ）超；メタネフリン、尿：１．２ｍｇ／２４時間（６．１ｍｍｏｌ／２４時間）未満；ノルエピネフリン、血漿（臥位）：５０～４４０ｎｇ／Ｌ（２９６～２６００ｐｍｏｌ／Ｌ）；副甲状腺ホルモン、血清：１０～６５ｐｇ／ｍＬ（１０～６５ｎｇ／Ｌ）；プロゲステロン、血液 男性（成人）：０．２７～０．９ｎｇ／ｍＬ（０．９～２．９ｎｍｏｌ／Ｌ）女性：卵胞期、０．３３～１．２０ｎｇ／ｍＬ（１．０～３．８ｎｍｏｌ／Ｌ）；黄体期、０．７２～１７．８ｎｇ／ｍＬ（２．３～５６．６ｎｍｏｌ／Ｌ）；閉経後、＜０．２～１ｎｇ／ｍＬ（０．６～３．１８ｎｍｏｌ／Ｌ）；経口避妊薬、０．３４～０．９２ｎｇ／ｍＬ（１．１～２．９ｎｍｏｌ／Ｌ）；プロラクチン、血清 男性：１５ｎｇ／ｍＬ（１５μｇ／Ｌ）未満 女性：２０ｎｇ／ｍＬ（２０μｇ／Ｌ）未満；テストステロン、血清 男性（成人）：３００～１２００ｎｇ／ｄＬ（１０～４２ｎｍｏｌ／Ｌ）女性：２０～７５ｎｇ／ｄＬ（０．７～２．６ｎｍｏｌ／Ｌ）；甲状腺機能検査、甲状腺ヨウ素（１３１Ｉ）取込み：２４時間での投与された用量の１０～３０％、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）：０．５～５．０μＵ／ｍＬ（０．５～５．０ｍＵ／Ｌ）、チロキシン（Ｔ４）、総血清：５～１２μｇ／ｄＬ（６４～１５５ｎｍｏｌ／Ｌ）女性：０．９～２．４ｎｇ／ｄＬ（１２～３１ｐｍｏｌ／Ｌ）遊離Ｔ４指標：４～１１；トリヨードチロニン、遊離（Ｔ３）：３．６～５．６ｎｇ／Ｌ（５．６～８．６）；トリヨードチロニン、樹脂（Ｔ３）：２５％～３５％；トリヨードチロニン、血清（Ｔ３）：７０～１９５ｎｇ／ｄＬ（１．１～３．０ｎｍｏｌ／Ｌ）；バニリルマンデル酸、尿：８ｍｇ／２４時間（４０．４μｍｏｌ／２４時間）未満；ビタミンＤ １，２５－ジヒドロキシ、血清：２５～６５ｐｇ／ｍＬ（６０～１５６ｐｍｏｌ／Ｌ）２５－ヒドロキシ、血清：２５～８０ｎｇ／ｍＬ（６２～２００ｎｍｏｌ／Ｌ）。
健康なヒト対象は、尿検査パネルの結果に関して、下記の特徴的な検査値を示す：アルブミンクレアチニン比：３０ｍｇ／ｇ未満；カルシウム：無制限的食事時に１００～３００ｍｇ／２４時間（２．５～７．５ｍｍｏｌ／２４時間）；クレアチニン：２４時間当たり１５～２５ｍｇ／ｋｇ（２４時間当たり１３３～２２１ｍｍｏｌ／ｋｇ）；糸球体濾過率（ＧＦＲ）正常な男性：１３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２ 女性：１２０ｍＬ／分／１．７３ｍ２；５－ヒドロキシインドール酢酸（５－ＨＩＡＡ）：２～９ｍｇ／２４時間（１０．４～４６．８μｍｏｌ／２４時間）；タンパク質・クレアチニン比－０．２ｍｇ／ｍｇ以下；ナトリウム：１００～２６０ｍｅｑ／２４時間（１００～２６０ｍｍｏｌ／２４時間）（摂取量により変動する）；尿酸：２５０～７５０ｍｇ／２４時間（１．４８～４．４３ｍｍｏｌ／２４時間）（食事量により変動する）。
健康なヒト対象は、消化管検査パネルの結果に関して、下記の特徴的な検査値を示す。ガストリン、血清：０～１８０ｐｇ／ｍＬ（０～１８０ｎｇ／Ｌ）；便中脂肪：１００ｇの脂肪食で５ｇ／ｄ未満；便重量：２００ｇ／ｄ未満。
健康なヒト対象は、肺検査に関して、下記の特徴的な値を示す。１秒間努力呼気肺活量（ＦＥＶ１）：予想の８０％超；努力肺活量（ＦＶＣ）：予想の８０％超；ＦＥＶ１／ＦＶＣ：７５％超。
健康なヒト対象は、脳脊髄液検査パネルの結果に関して、下記の特徴的な検査値を示す：細胞数：０～５／μＬ（０～５×１０６／Ｌ）；グルコース：４０～８０ｍｇ／ｄＬ（２．２～４．４ｍｍｏｌ／Ｌ）；同時血漿濃度の４０％未満が異常である；圧力（開）：７０～２００ｍｍＨ２Ｏ；タンパク質：１５～６０ｍｇ／ｄＬ（１５０～６００ｍｇ／Ｌ）。
健康なヒト対象は、下記の特徴的な血行力学的検査値を示す：心係数：２．５～４．２Ｌ／分／ｍ２；左室駆出分画：５５％超；圧力：肺動脈の収縮期：２０～２５ｍｍＨｇ、拡張期：５～１０ｍｍＨｇ 平均：９～１６ｍｍＨｇ；肺毛細血管楔：６～１２ｍｍＨｇ、右心房：平均０～５ｍｍＨｇ、右心室の収縮期：２０～２５ｍｍＨｇ、拡張期：０～５ｍｍＨｇ。
加えて、一般に正常な健康なヒト対象は、安静時脈拍数が５０～９０拍／分の範囲であるが、非ヒト対象では、より広い範囲が許容される。
本明細書で使用される場合、「処置」という用語は、状態の診断後に実施される手順を指す。
本明細書で使用される場合、「緩和」という用語は、予期される傷害又は疾患の予防又はその可能性の軽減のために実施される手順を指す。
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイントタンパク質」という用語は、正常細胞の表面上に存在しているタンパク質であって、免疫細胞中の対応するリガンドと結合して、免疫系が（アポトーシスにより）身体の正常な細胞又は組織を破壊することを阻止し、それにより自己免疫疾患が阻害され得るか又は予防され得る、タンパク質を指す。癌を処置するために阻害の標的となる公知の免疫チェックポイントタンパク質として、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２が挙げられる。これらに加えて、当該技術分野では、ＬＡＧ－３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ－３、ＭＲも、ＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１と同様に免疫チェックポイントタンパク質を構成すると認識されている（例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれるＰａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ １２：２５２－２６４；Ｍｅｌｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｎａｔｕｒｅ ４８０：４８０－４８９を参照されたい）。これらの免疫チェックポイントタンパク質は、免疫系が身体の正常な細胞又は組織を破壊するのを阻止する阻害シグナルを免疫系に提供する細胞の表面上に存在している。しかしながら、癌細胞はまた、免疫チェックポイントタンパク質も発現して免疫系を回避し、無制限な腫瘍増殖を可能にする。免疫チェックポイント阻害剤を使用して免疫チェックポイントタンパク質をマスクするか又は阻害することにより、免疫系を活性化させて癌細胞を破壊することが可能になる。
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイント阻害剤」又は「ＩＣＰＩ」という用語は、任意の化合物であって、免疫系を活性化して腫瘍又は癌を攻撃させ得；並びに／又は免疫チェックポイントタンパク質の全機能を直接的に若しくは間接的に阻害し得、それにより、組織（若しくは腫瘍）内で細胞傷害性Ｔ細胞を活性化させ、及び／又は組織（若しくは腫瘍）中でＴｒｅｇ免疫細胞を減少させて細胞傷害性Ｔ細胞を増殖させて組織（若しくは腫瘍）を損傷させるか除去する、化合物を指す。これまで開発されたＩＣＰＩのほとんどは、免疫チェックポイントタンパク質と直接結合する。免疫チェックポイントタンパク質又は細胞表面上のこのタンパク質のリガンドに直接結合して免疫系の活性化を促進し得るＩＣＰＩタンパク質又はポリペプチドの多くの例が存在している。直接的な抗体又はタンパク質結合により阻害され得る既知の免疫チェックポイントタンパク質として、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２が挙げられる。これらに加えて、当該技術分野では、ＬＡＧ－３、ＢＴＬＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＴＩＭ－３、ＭＲも、ＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１と同様に免疫チェックポイントタンパク質を構成すると認識されており（例えば、全体が本明細書に組み込まれるＰａｒｄｏｌｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ １２：２５２－２６４；Ｍｅｌｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｎａｔｕｒｅ ４８０：４８０－４８９を参照されたい）、同様の方法で阻害され得る可能性がある。これらのチェックポイントタンパク質に直接結合し得ないが、腫瘍組織内の細胞傷害性Ｔ細胞を活性化し得、及び／又は腫瘍組織中でＴｒｅｇ免疫細胞を減少させ且つ細胞傷害性Ｔ細胞を増殖させて腫瘍組織を損傷させるか又は除去するＩＣＰＩも存在している。本開示は、ＩＣＰＩの後者のカテゴリに関する。
免疫チェックポイントタンパク質の直接ブロッカーとして、ポリペプチド又は化合物であって、免疫チェックポイントタンパク質に特異的に結合するか又はこのタンパク質の作用を特異的にマスクし、それにより免疫を促進するか又は癌の破壊を促進するポリペプチド又は化合物が挙げられる。いくつかの抗体チェックポイント阻害剤が、米国食品医薬品局（Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）により癌の処置用に承認されており、この阻害剤として下記が挙げられる：ペンブロリズマブ（ＰＤ－１に対するもの；ＭｅｒｃｋによりＫｅｙｔｒｕｄａとして市販されている）、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂによりＯｐｄｉｖｏとして市販されているＰＤ－１に対するもの（例えば、Ｔｏｐａｌｉａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６６：２４４３－２４５４、米国特許第８，００８，４４９Ｂ２号明細書を参照されたい））、イピリムマブ（ＣＴＬＡ４に対するもの、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂによりＹｅｒｖｏｙとして市販されている）、アテゾリズマブ（ＰＤ－Ｌ１に対するもの、Ｒｏｃｈｅ ＆ ＧｅｎｅｎｔｅｃｈによりＴｅｃｅｎｔｒｉｑとして市販されている）、アベルマブ（ＰＤ－Ｌ１に対するもの、Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ ＆ ＰｆｉｚｅｒによりＢａｖｅｎｃｉｏとして市販されている）、デュルバルマブ（ＰＤ－Ｌ１に対するもの、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａによりＩｍｆｉｎｚｉとして市販されている）、及びセミプリマブ（ＰＤ－Ｌ１に対するもの、ＳａｎｏｆｉによりＬｉｂｔａｙｏとして市販されている）。他の免疫チェックポイント阻害剤として、下記が挙げられる：トレメリムマブ（ＣＴＬＡ－４を阻害する）（例えば、Ｒｉｂａｓ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｊ Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３１：６１６－２２を参照されたい）、ランブロリズマブ（ＰＤ－１を阻害する）（国際公開第２００８／１５６７１２号パンフレット；Ｈａｍｉｄ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｎ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６９：１３４－１４４）、ピディリズマブ（ＰＤ－１を阻害する）（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ ｅｔ ａｌ．，２０１１．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ：３４：４０９－１８を参照されたい）。他のＰＤ－１阻害剤として、Ｂ７－ＤＣ－Ｉｇｏｒ ＡＭＰ－２４４としても既知である、ＰＤ－Ｌ２ Ｆｃ融合タンパク質を無制限に含む可溶性ＰＤ－１リガンドが挙げられ得る（例えば、Ｍｋｒｔｉｃｈｙａｎ Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８９：２３３８－４７ ２０１２を参照されたい）。免疫チェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ－４７３６（例えば、国際公開第２０１１０６６３８９Ａ１号パンフレット）及びＭＰＤＬ３２８０Ａ（米国特許第８，２１７，１４９Ｂ２号明細書）等のＰＤ－Ｌ１をブロックするヒト化抗体又は完全ヒト抗体を無制限に含み得る。他のＰＤ－Ｌ１阻害剤は、現在研究中である。
本明細書で使用される場合、「液体」とは、室温で自由に流動しており、その結果、例えば水又は油のように形状が変化するが体積が一定に保持される物質のことである。
本明細書で使用される場合、「室温」は、約２５℃の典型的な室内周囲温度を示す。
別途定義されない限り、本開示の任意の態様又は実施形態内の任意の特徴は、本発明の任意の他の態様又は実施形態内の任意の特徴と組み合わされ得、そのような組合わせは、本開示に包含される。このことはまた、本明細書で開示されている範囲の端点にも当てはまるが、これに限定されない。例えば、所与の物質がＸ～Ｙ％又はＡ～Ｂ％の濃度範囲で組成物中に存在していると開示されている場合には、本開示は、範囲Ｘ～Ｙ％及びＡ～Ｂ％を明示的に開示しているだけでなく、範囲Ｘ～Ｂ％、Ａ～Ｙ％、及び数値的に可能な限りＹ～Ａ％及びＢ～Ｘ％も明示的に開示していると理解されるものとする。これらの範囲のそれぞれ、及び範囲の組合わせは、本願で直接的に且つ一義的に開示されていると理解されることが企図されており、且つ理解されるものとする。
別途明記されない限り、２つの括弧値Ｘ及びＹ又は２つの括弧比を分離するハイフン（「－」）を使用する、本願における範囲の指定は、両方の端点値Ｘ及びＹが含まれる指定の範囲を意味しており且つ開示していると理解されるものとする。同じことが、「Ｘ～Ｙ」と表現される範囲にも当てはまる。従って、「Ｘ～Ｙ（Ｘ－Ｙ）」、「Ｘ～Ｙの（ｏｆ Ｘ ｔｏ Ｙ）」、「Ｘ～Ｙ（ｆｒｏｍ Ｘ ｔｏ Ｙ）」、「Ｘ～Ｙの（ｏｆ Ｘ－Ｙ）」、及び「Ｘ～Ｙ（ｆｒｏｍ Ｘ－Ｙ）」という範囲の表現は、終了値Ｘ、ＸとＹとの間の全ての値（小数を含む）、及び終了値Ｙを包含する範囲を意味しており且つ開示していると同等に理解されるものとする。
本明細書で使用される場合、特定の値（例えば、ある範囲の端点）に言及する際の「約」という用語は、具体的に列挙された値自体に加えて、その特定の列挙された値の周りのある特定の変動を包含しており、且つ開示している。そのような変動は、例えば、通常の測定変動（例えば、当業者に既知の方法による様々な物質の秤量又は配分での測定変動）により生じ得る。「約」という用語は、±５．０％の変動を包含し得、且つ開示し得るというように、「約」という用語は、示された特定の値の上下の変動の範囲を包含しており且つ開示していると理解されるものであり、前記パーセント値は、特定の列挙された値自体に対するものである。「約」という用語は、±４．５％の変動を包含し得、且つ開示し得る。「約」という用語は、±４．０％の変動を包含し得、且つ開示し得る。「約」という用語は、±３．５％の変動を包含し得、且つ開示し得る。「約」という用語は、±３．０％の変動を包含し得、且つ開示し得る。「約」という用語は、±２．５％の変動を包含し得、且つ開示し得る。「約」という用語は、±２．０％の変動を包含し得、且つ開示し得る。「約」という用語は、±１．５％の変動を包含し得、且つ開示し得る。「約」という用語は、±１．０％の変動を包含し得、且つ開示し得る。「約」という用語は、±０．５％の変動を包含し得、且つ開示し得る。特定の言及された値に関する「約」という用語は、この正確な特定の値が含まれているといういかなる明確な言及にも関係なく、この正確な特定の値自体を包含し得、且つ開示し得、「約」という用語は特定の正確な言及された値を含むという明確な指示がない場合であっても、この正確な特定の値は依然として、「約」という用語により生じる変動の範囲に含まれており、従って本開示で開示されている。別途明記されない限り、「約」という用語が、数値範囲の第１の端点前に列挙されているが、この範囲の第２の端点前には列挙されていない場合には、この用語と、範囲及び開示においてこの用語が暗示する変動とは、この範囲の第１の端点と、この範囲の第２の端点との両方を指す。例えば、「約Ｘ～Ｙ」という列挙された範囲は、「約Ｘ～約Ｙ」と読み取られるものとする。同じことが、比の列挙された範囲にも当てはまる。例えば、「約Ｘ：Ｙ～Ａ：Ｂ」という重量比の列挙された範囲は、「（約Ｘ）：（約Ｙ）～（約Ａ）：（約Ｂ）」という重量比として読み取られるものとする。
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者により一般に理解されているのと同じ意味を有する。本開示の実施又は試験では、本明細書で説明されているものと類似の又は等価の方法及び材料を使用し得るが、好適な方法及び材料を下記で説明する。本明細書で言及されている全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。矛盾する場合には、本明細書（例えば定義）に従う。加えて、材料、方法、及び例は、例示のみを目的としており、限定することは意図されていない。本明細書で全体的に説明されており且つ図示されている本開示の態様は、多種多様な異なる構成で配置され得、置換され得、組み合わされ得、分離され得、且つ設計され得、これらの全てが本明細書で明示的に企図されていることが、容易に理解されるだろう。
さらに、図に示された特定の配置は、限定的と見なされるべきではない。他の実施形態は、所与の図に示された各要素をより多く又はより少なく含み得ることを理解すべきである。さらに、示された要素の内の一部を、組み合わせてもよいし、省略してもよい。さらに、例示的な実施形態は、図示されていない要素を含んでもよい。
処置方法
本開示の方法は、関連する有害な血圧低下を引き起こすことなく環状ＧＭＰ産生の増加及び／又は最大化を誘発し得る／引き起こし得る方法でＣＮＰを修飾し得、誘導体化し得、及び／又は製剤化し得るという驚くべき発見により可能となったものである。具体的には、ペプチドに応じて、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させる治療用ボーラス用量にて、ＣＮＰの血圧降下を最小限に抑え得るか、又は除去し得る。本開示では、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、ヒトでは４±１ｐｍｏｌ又は約１．４ｍｇ／ｍｌ（但し、種間で変動し得る）である健康な対象の血漿中レベルである、このボーラス用量の投与前の血漿中レベルと定義されている。例えば、全体が本明細書に組み込まれるＳｈｏｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｓｍａ ｃｙｃｌｉｃ ｇｕａｎｏｓｉｎｅ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ：ｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｈｏｒｍｏｎａｌ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｎｉｔｒａｔｅ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ，１９９３．５４（６）：ｐ．６３８－４４を参照されたい。好ましい実施形態では、このベースラインレベルは、処置が行なわれる同一の対象に関する薬物投与前の測定レベルであり、このレベルは、対象毎に異なり得る。本開示の実施では、処置の効果を評価するための基準パラメータとして使用される任意のベースラインパラメータは、処置前の測定により確立される。典型的には、限定されないが、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、日中の覚醒時には比較的低いレベルで就寝直後には比較的高いように一日の時間に応じて変動し、ヒトでは、一日を通して２～８ｐｍｏｌ／ｍｌで変動し得る。そのため、本組成物の投与前の測定されたベースライン血漿中環状ＧＭＰレベル、及び本開示の組成物の投与後の測定された血漿中環状ＧＭＰレベルを、毎日の同一の所定時間で得ることができる。平均ベースラインが説明されている場合には、この平均ベースラインは、所与の対象に関する２４時間以内の所与のパラメータに関して少なくとも４時間の間隔で少なくとも３回得られた平均ベースライン測定値であり得る。これにより、対象間又は個体間の変動が制御される。うっ血性心不全の患者では、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、２～３倍高くなり得、このベースラインは、各個々の対象又は対象群に関して処置前に確立される。血圧に関しても同様に、ベースラインは、薬物投与前の測定レベルであり、処置の効果を評価するための基準として使用される。あらゆる健康状態の既知の症状がない健康なマウスでのベースラインｃＧＭＰレベルは、２０（３．７）ｐｍｏｌ／ｍＬ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝８］又は７（１．３）ｎｇ／ｍＬ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝８］である。あらゆる健康状態の既知の症状がないイヌでのベースラインｃＧＭＰレベルは、５～１２ｎｇ／ｍｌである。
実施例で実証されるように、癌である対象に、長時間作用性ＣＮＰ誘導体のボーラス用量を投与した場合には、癌の増殖が停止し、及び／又は反転し、驚くべきことに血管の正常化及び癌に対する免疫系の活性化が付随した。さらに、癌である対象を、長時間作用性ＣＮＰ誘導体のボーラス用量を投与することにより処置した場合には、下記を観察した：血管系の正常化又は周皮細胞被覆指数の少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％若しくは少なくとも２０％）の増加（例えば、腫瘍組織内での増加）、腫瘍サイズの縮小、生存率の改善、腫瘍組織内での低酸素状態の軽減、癌を死滅させる細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加、活性化ＮＫ細胞の数の増加、Ｔｒｅｇ細胞の数の減少、骨髄由来サプレッサー細胞の数の減少、ＴＧＦβ発現の減少、Ｆｏｘｐ３発現の減少、腫瘍組織内での免疫チェックポイント活性の阻害、及び／又はＢｖ８発現の減少。免疫チェックポイント阻害剤に対する耐性を示すか又は部分的に耐性を示す、癌である患者を、長時間作用性ＣＮＰ誘導体及び免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物で共処置した場合には、有効性の有意な改善を観察しており、このことは、この長時間作用性ＣＮＰ誘導体が免疫チェックポイント阻害剤の有効性を増加させ得ることを示す。
本開示は、任意の組織又は臓器中に異常な血管系を有する対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）を処置する方法であって、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することにより、血管系を正常化させることによる方法を特徴とする。一部の実施形態では、本開示は、細胞傷害性Ｔ細胞及び／又は活性化ＮＫ細胞を増加させる方法であって、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することによる方法に関する。この対象は、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、少数の活性化ＮＫ細胞、多数のＴｒｅｇ細胞、ＴＧＦβの高レベルの発現、Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ；及び／又はＢｖ８の高レベル若しくは発現の内の１つ又は複数をさらに有する可能性がある。例えば、この対象は、異常な血管系、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、及び／又は少数の活性化ＮＫ細胞を有する可能性がある。一部の実施形態では、この対象は、状態（ｉ）～（ｖｉｉｉ）：（ｉ）少数の細胞傷害性Ｔ細胞、（ｉｉ）少数の活性化ＮＫ細胞、（ｉｉｉ）多数のＴｒｅｇ細胞、（ｉｖ）ＴＧＦβの高レベルの発現、（ｖ）Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、（ｖｉ）多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ、（ｖｉｉ）Ｂｖ８の高レベル若しくは発現；又は（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合わせを有するか、又はこの対象は、（ｉｘ）～（ｘｖｉ）：（ｉｘ）細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加；（ｘ）活性化ＮＫ細胞の増加；（ｘｉ）Ｔｒｅｇ細胞の数の減少；（ｘｉｉ）ＴＧＦ－β発現の減少；（ｘｉｉｉ）Ｆｏｘｐ３発現の減少；（ｘｉｖ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少；（ｘｖ）Ｂｖ８発現の減少、若しくは（ｘｖｉ）これらの任意の組合わせを必要としている。本開示はまた、癌である対象（例えば、必要な患者）を処置する方法であって、この対象の免疫系を活性化させて腫瘍又は癌を攻撃させることによる、細胞傷害性Ｔ細胞及び／又は活性化ＮＫ細胞の数を増加させることによる、免疫サプレッサー細胞（Ｔｒｅｇ細胞）の数を減少させることによる、免疫サプレッサーサイトカイン（形質転換増殖因子ベータ、若しくはＴＧＦｂ、若しくはＴＧＦβ）を減少させることによる、Ｆｏｘｐ３（Ｔｒｅｇマーカー）及び／又はＢｖ８（骨髄由来サプレッサー細胞のマーカー若しくはＭＤＳＣマーカーを減少させることによる、並びに／又は抗癌剤へのアクセスを可能にし且つ低酸素状態を軽減する腫瘍組織中の血管系を正常化させることによる（低酸素状態は、腫瘍の増殖／悪性度及び免疫抵抗性を促進する）方法も特徴とする。この方法は、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、及び／又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物の治療上有効なボーラス用量をこの対象に投与することを含む。一部の実施形態では、必要な対象に投与した場合には、この組成物の治療上有効なボーラス用量により、この組成物の投与前のレベル又は健康な対象でのレベルを少なくとも１５％（例えば、少なくとも２０％又は少なくとも３０％）超える細胞傷害性Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の数の増加がもたらされる。この治療上有効なボーラス用量は、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、９％を超えて、又は５％を超えて）血圧（又は平均動脈圧）を低下させないか又はこの低下を引き起こさない用量であり、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、しかしながら、この用量は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ得、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、このボーラス用量の投与前の平均血漿中レベルと定義されているか、又は健康な対象の平均血漿中レベルと定義されている。
一部の実施形態では、本開示は、任意の組織又は臓器中に異常な血管系を有する対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）を処置する方法であって、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することにより、この血管系を正常化させることによる方法を特徴とする。一部の実施形態では、本開示は、細胞傷害性Ｔ細胞及び／又は活性化ＮＫ細胞を増加させる方法であって、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することによる方法に関する。この対象は、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、少数の活性化ＮＫ細胞、多数のＴｒｅｇ細胞、ＴＧＦβの高レベルの発現、Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ；及び／又はＢｖ８の高レベル若しくは発現の内の１つ又は複数をさらに有する可能性がある。一部の実施形態では、この対象は、状態（ｉ）～（ｖｉｉｉ）：（ｉ）少数の細胞傷害性Ｔ細胞、（ｉｉ）少数の活性化ＮＫ細胞、（ｉｉｉ）多数のＴｒｅｇ細胞、（ｉｖ）ＴＧＦβの高レベルの発現、（ｖ）Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、（ｖｉ）多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ、（ｖｉｉ）Ｂｖ８の高レベル若しくは発現；又は（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合わせをさらに有する可能性があるか、又はこの対象は、（ｉｘ）～（ｘｖｉ）：（ｉｘ）細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加；（ｘ）活性化ＮＫ細胞の増加；（ｘｉ）Ｔｒｅｇ細胞の数の減少；（ｘｉｉ）ＴＧＦ－β発現の減少；（ｘｉｉｉ）Ｆｏｘｐ３発現の減少；（ｘｉｖ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少；（ｘｖ）Ｂｖ８発現の減少、若しくは（ｘｖｉ）これらの任意の組合わせを必要としている。例えば、この対象は、異常な血管系、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、及び／又は少数の活性化ＮＫ細胞を有する可能性がある。一部の実施形態では、本開示は、下記の状態：腫瘍；腫瘍組織内での少数の若しくは存在していない細胞傷害性Ｔ細胞及び／若しくは活性化ＮＫ細胞；存在しているか若しくは多数の免疫サプレッサー細胞（例えばＴｒｅｇ細胞）；存在しているか若しくは多数の免疫サプレッサーサイトカイン（例えば、形質転換増殖因子ベータ若しくはＴＧＦβ）、Ｆｏｘｐ３（例えばＴｒｅｇマーカー）に対して陽性の高レベルの細胞、Ｂｖ８（骨髄由来サプレッサー細胞のマーカー又はＭＤＳＣマーカー）に対して陽性の高レベルの細胞、多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ、並びに／又は抗癌剤へのアクセスを可能にし且つ低酸素状態を軽減する腫瘍組織中の異常な血管系（低酸素状態は、腫瘍の増殖／悪性度及び免疫抵抗性を促進する）の内の１つ又は複数を有する、癌である対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）を処置する方法を特徴とする。この方法は、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、及び／又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む組成物（例えば、細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物）の治療上有効なボーラス用量をこの対象に投与することを含む。一部の実施形態では、必要な対象に投与した場合には、この組成物の治療上有効なボーラス用量により、この組成物の投与前のレベル又は健康な対象でのレベルを少なくとも１５％（例えば、少なくとも２０％又は少なくとも３０％）超える細胞傷害性Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の数の増加がもたらされる。この治療上有効なボーラス用量は、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、１０％を超えて、又は５％を超えて）血圧（又は平均動脈圧）を低下させないか又はこの低下を引き起こさない用量であり、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、しかしながら、この用量は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ得、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、このボーラス用量の投与前の血漿中レベルと定義されているか、又はヒトでは４±１ｐｍｏｌ／ｍｌ又は約１．４ｍｇ／ｍｌであるが種間で及び使用されるアッセイ間で変動し得る健康な対象の血漿中レベルと定義されている。例えば、全体が本明細書に組み込まれるＳｈｏｔａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｓｍａ ｃｙｃｌｉｃ ｇｕａｎｏｓｉｎｅ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ：ｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｈｏｒｍｏｎａｌ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｎｉｔｒａｔｅ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ，１９９３．５４（６）：ｐ．６３８－４４を参照されたい。この組成物で処置された対象は、この組成物の治療上有効なボーラス用量で処置されていない対象と比較して寿命が延長され得るか、又は生存率が上昇し得る（例えば図２０を参照されたい）。
好ましい実施形態では、所与のマーカー又はパラメータに関するベースラインレベルは、薬物投与前の測定レベルであり、このレベルは、対象毎に異なり得る。本開示の実施では、処置の効果を評価するための基準パラメータとして使用される任意のベースラインパラメータは、処置前の測定により確立される。典型的には、限定されないが、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、日中の覚醒時には比較的低いレベルで就寝直後には比較的高いように一日の時間に応じて変動し、ヒトでは、一日を通して２～８ｐｍｏｌ／ｍｌで変動し得る。そのため、本組成物の投与前の測定されたベースライン血漿中環状ＧＭＰレベル、及び本開示の組成物の投与後の測定された血漿中環状ＧＭＰレベルを、毎日の同一の所定時間で得ることができる。平均ベースラインが説明されている場合には、この平均ベースラインは、所与の対象に関する２４時間以内の所与のパラメータに関して少なくとも４時間の間隔で少なくとも３回得られた平均ベースライン測定値であり得る。これにより、対象間又は個体間の変動が制御される。うっ血性心不全の患者では、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、２～３倍高くなり得、このベースラインは、各個々の対象又は対象群に関して処置前に確立される。血圧に関しても同様に、ベースラインは、薬物投与前の測定レベルであり、処置の効果を評価するための基準として使用される。あらゆる健康状態の既知の症状がない健康なマウスでのベースラインｃＧＭＰレベルは、２０（３．７）ｐｍｏｌ／ｍＬ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝８］又は７（１．３）ｎｇ／ｍＬ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝８］である。あらゆる健康状態の既知の症状がないイヌでのベースラインｃＧＭＰレベルは、５～１２ｎｇ／ｍｌである。
一部の実施形態では、本開示は、任意の組織又は臓器中に異常な血管系を有する対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）を処置する方法であって、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することにより、血管系を正常化させることによる方法を特徴とする。一部の実施形態では、本開示は、細胞傷害性Ｔ細胞及び／又は活性化ＮＫ細胞を増加させる方法であって、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することによる方法に関する。この対象は、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、少数の活性化ＮＫ細胞、多数のＴｒｅｇ細胞、ＴＧＦβの高レベルの発現、Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ；及び／又はＢｖ８の高レベル若しくは発現の内の１つ又は複数をさらに有する可能性がある。例えば、この対象は、異常な血管系、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、及び／又は少数の活性化ＮＫ細胞を有する可能性がある。一部の実施形態では、この対象は、状態（ｉ）～（ｖｉｉｉ）：（ｉ）少数の細胞傷害性Ｔ細胞、（ｉｉ）少数の活性化ＮＫ細胞、（ｉｉｉ）多数のＴｒｅｇ細胞、（ｉｖ）ＴＧＦβの高レベルの発現、（ｖ）Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、（ｖｉ）多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ、（ｖｉｉ）Ｂｖ８の高レベル若しくは発現；又は（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合わせをさらに有する可能性があるか、又はこの対象は、（ｉｘ）～（ｘｖｉ）：（ｉｘ）細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加；（ｘ）活性化ＮＫ細胞の増加；（ｘｉ）Ｔｒｅｇ細胞の数の減少；（ｘｉｉ）ＴＧＦ－β発現の減少；（ｘｉｉｉ）Ｆｏｘｐ３発現の減少；（ｘｉｖ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少；（ｘｖ）Ｂｖ８発現の減少、若しくは（ｘｖｉ）これらの任意の組合わせを必要としている。一部の実施形態では、本開示は、癌である対象（例えば、必要な患者）を処置する方法であって、この対象の免疫系を活性化させて、腫瘍又は癌を攻撃させ、細胞傷害性Ｔ細胞及び／又は活性化ＮＫ細胞の数を増加させ、免疫サプレッサー細胞（例えばＴｒｅｇ細胞）の数を減少させ、免疫サプレッサーサイトカイン（形質転換増殖因子ベータ若しくはＴＧＦβ）を減少させ、Ｆｏｘｐ３（例えばＴｒｅｇマーカー）を減少させ、Ｂｖ８（骨髄由来サプレッサー細胞のマーカー若しくはＭＤＳＣマーカー）を減少させ、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数を減少させ、抗癌剤へのアクセスを可能にし且つ低酸素状態を軽減する腫瘍組織中の血管系を正常化させる（低酸素状態は、腫瘍の増殖／悪性度及び免疫抵抗性を促進する）ことによる方法を特徴とする。この処置により、この組成物の治療上有効なボーラス用量で処置されていない対象と比較して、対象の寿命が延長され得るか、又は生存率が上昇し得る。この方法は、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む組成物（例えば、細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物）の治療上有効なボーラス用量をこの対象に投与することを含む。一部の実施形態では、必要な対象に投与した場合には、この組成物の治療上有効なボーラス用量により、この組成物の投与前のレベル又は健康な対象でのレベルを少なくとも１５％（例えば、少なくとも２０％又は少なくとも３０％）超える細胞傷害性Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の数の増加がもたらされる。治療上有効なボーラス用量は、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、１０％を超えて、又は５％を超えて）血圧（又は平均動脈圧）を低下させないか又はこの低下を引き起こさない用量であり、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、しかしながら、この用量は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ得、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、このボーラス用量の投与前の平均血漿中レベルと定義されているか、又は健康な対象の平均血漿中レベル（好ましくは、対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）と定義されている。
一部の実施形態では、本開示は、任意の組織又は臓器中に異常な血管系を有する対象（例えば必要な患者）を処置する方法であって、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することにより、血管系を正常化させることによる方法を特徴とする。一部の実施形態では、本開示は、細胞傷害性Ｔ細胞及び／又は活性化ＮＫ細胞を増加させる方法であって、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することによる方法に関する。この対象は、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、少数の活性化ＮＫ細胞、多数のＴｒｅｇ細胞、ＴＧＦβの高レベルの発現、Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ；及び／又はＢｖ８の高レベル若しくは発現の内の１つ又は複数をさらに有する可能性がある。一部の実施形態では、この対象は、状態（ｉ）～（ｖｉｉｉ）：（ｉ）少数の細胞傷害性Ｔ細胞、（ｉｉ）少数の活性化ＮＫ細胞、（ｉｉｉ）多数のＴｒｅｇ細胞、（ｉｖ）ＴＧＦβの高レベルの発現、（ｖ）Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、（ｖｉ）多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ、（ｖｉｉ）Ｂｖ８の高レベル若しくは発現；又は（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合わせをさらに有する可能性があるか、又はこの対象は、（ｉｘ）～（ｘｖｉ）：（ｉｘ）細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加；（ｘ）活性化ＮＫ細胞の増加；（ｘｉ）Ｔｒｅｇ細胞の数の減少；（ｘｉｉ）ＴＧＦ－β発現の減少；（ｘｉｉｉ）Ｆｏｘｐ３発現の減少；（ｘｉｖ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少；（ｘｖ）Ｂｖ８発現の減少、若しくは（ｘｖｉ）これらの任意の組合わせを必要としている。例えば、この対象は、異常な血管系、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、及び／又は少数の活性化ＮＫ細胞を有する可能性がある。一部の実施形態では、本開示は、下記の状態：腫瘍；腫瘍組織内での少数の若しくは存在していない細胞傷害性Ｔ細胞及び／若しくは活性化ＮＫ細胞；存在しているか若しくは多数の免疫サプレッサー細胞（例えばＴｒｅｇ細胞）；存在しているか若しくは多数の免疫サプレッサーサイトカイン（例えば、形質転換増殖因子ベータ若しくはＴＧＦβ）、Ｆｏｘｐ３（例えばＴｒｅｇマーカー）に対して陽性の高レベルの細胞、Ｂｖ８（骨髄由来サプレッサー細胞のマーカー又はＭＤＳＣマーカー）に対して陽性の高レベルの細胞、多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ、並びに／又は抗癌剤へのアクセスを可能にし且つ低酸素状態を軽減する腫瘍組織中の異常な血管系（低酸素状態は、腫瘍の増殖／悪性度及び免疫抵抗性を促進する）の内の１つ又は複数を有する、癌である対象（例えば必要な患者）を処置する方法を特徴とする。この方法は、長時間作用性ＣＮＰ、及び／又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物の治療上有効なボーラス用量をこの対象に投与することを含む。一部の実施形態では、必要な対象に投与した場合には、この組成物の治療上有効なボーラス用量により、この組成物の投与前のレベル又は健康な対象でのレベルを少なくとも１５％（例えば、少なくとも２０％又は少なくとも３０％）超える細胞傷害性Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の数の増加がもたらされる。この治療上有効なボーラス用量は、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、１０％を超えて、又は５％を超えて）血圧（又は平均動脈圧）を低下させないか又はこの低下を引き起こさない用量であり、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、しかしながら、この用量は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ得、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、このボーラス用量の投与前の平均血漿中レベルと定義されているか、又は健康な対象の平均血漿中レベル（好ましくは、この対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）と定義されている。
一部の実施形態では、本開示は、腫瘍に関連する繊維症を有する対象（例えば必要な患者）を処置する方法であって、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することによる方法を特徴とする。線維症に関連するマーカー（例えば、α－ＳＭＡ、ＴＧＦβ、及び／又はＡｎｇ２）の発現を、投与後に減少させ得る。
一部の実施形態では、異常な血管系を有する対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）は、癌であり得る。一部の実施形態では、癌である対象は、下記の癌の内の１つ又は複数であり得る：マントル細胞リンパ腫、中枢神経系原発リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性赤血球増加リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、固形腫瘍、肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮細胞肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫、結腸直腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫瘍、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上咽頭癌、食道癌、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳及び中枢神経系（ＣＮＳ）癌、子宮頚部癌、絨毛癌、大腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頚部癌、胃癌、上皮内腫瘍、腎癌、喉頭癌、肝癌、肺癌（小細胞及び／又は大細胞）、黒色腫、神経芽細胞腫；口腔癌（例えば、唇、舌、口腔、及び咽頭）、卵巣癌、膵癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、並びに泌尿器系の癌。
一部の実施形態では、癌である対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）は、下記の臓器での癌の内の１つ又は複数を有する：皮膚、乳房、骨、前立腺、結腸、頭部、頸部、肝臓、腎臓、子宮頸部、肺、胃、尿道、膀胱、尿管、腎盂、直腸、食道、リンパ節、膵臓、胃、卵巣、中枢神経系、軟部組織、及び／又は内分泌腺。この対象に、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、及び／又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む組成物（例えば、細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物）の治療上有効なボーラス用量を投与する。この治療上有効なボーラス用量は、上記で説明されている用量である。
一部の実施形態では、癌である対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）は、下記の臓器での癌の内の１つ又は複数を有する：皮膚、乳房、骨、前立腺、結腸、頭部、頸部、肝臓、腎臓、子宮頸部、肺、胃、尿道、膀胱、尿管、腎盂、直腸、食道、リンパ節、膵臓、胃、卵巣、中枢神経系、軟部組織、及び／又は内分泌腺。この対象に、長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む組成物（例えば、細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物）の治療上有効なボーラス用量を投与する。この治療上有効なボーラス用量は、上記で説明されている用量である。
一部の実施形態では、癌である対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）は、下記の臓器での癌の内の１つ又は複数を有する：皮膚、乳房、骨、前立腺、及び／又は結腸。この対象に、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、及び／又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む組成物（例えば、細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物）の治療上有効なボーラス用量を投与する。この治療上有効なボーラス用量は、上記で説明されている用量である。
一部の実施形態では、癌である対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）は、下記の臓器での癌の内の１つ又は複数を有する：皮膚、乳房、骨、前立腺、及び／又は結腸。この対象に、長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む組成物（例えば、細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物）の治療上有効なボーラス用量を投与する。この治療上有効なボーラス用量は、上記で説明されている用量である。
一部の実施形態では、上記方法の内のいずれか１つでの癌として、下記の臓器の内の１つ又は複数での固形腫瘍が挙げられる：膵臓、膀胱、結腸直腸、乳房、前立腺、腎臓、肝臓、肺、卵巣、子宮頸部、胃、食道、頭部、頸部、皮膚、内分泌腺、中枢神経系、骨、及び／又は軟部組織。
長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストとして、抗体等のポリペプチドが挙げられ得る。一部の実施形態では、この長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストとして、分子量が２ｋＤａ未満である分子が挙げられる。
一部の実施形態では、上記方法の内のいずれか１つにおいて、組成物は、ＮＰＲＡに対するアゴニスト活性が限定的であるか若しくはなく、及び／又はＮＰＲＡ受容体と比べてＮＰＲＢ受容体に対して５倍超大きい結合親和性（又は５倍低いＥＣ５０）を有する。
一部の実施形態では、本開示の組成物の治療上有効なボーラス用量は、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、１０％を超えて、又は５％を超えて）血圧（又は平均動脈圧）を低下させないか又はこの低下を引き起こさない用量であり、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、しかしながら、この用量は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、このボーラス用量の投与前の平均血漿中レベルと定義されているか、又は健康な対象の平均血漿中レベル（好ましくは、対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）と定義されている。
一部の実施形態では、本開示の組成物の治療上有効なボーラス用量は、ベースライン血圧測定値の１５％を超えて血圧（又は平均動脈圧）を低下させないか又はこの低下を引き起こさない用量であり、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、しかしながら、この用量は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、このボーラス用量の投与前の平均血漿中レベルと定義されているか、又は健康な対象の平均血漿中レベル（好ましくは、対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）と定義されている。
一部の実施形態では、本開示の組成物の治療上有効なボーラス用量は、血圧を１０％超低下させず、しかしながら、この用量は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、このボーラス用量の投与前の平均血漿中レベルと定義されているか、又は健康な対象の平均血漿中レベル（好ましくは、対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）と定義されている。
一部の実施形態では、本開示の組成物の治療上有効なボーラス用量は、血圧を５％超低下させず、しかしながら、この用量は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、このボーラス用量の投与前の平均血漿中レベルと定義されているか、又は健康な対象の平均血漿中レベル（好ましくは、対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）と定義されている。
一部の実施形態では、上記方法の内のいずれか１つに関して、対象に投与することは、経腸（例えば経口）投与又は非経口投与等の投与方法を含む。非経口投与の例は、皮下、静脈内、筋肉内、吸入によるもの、経鼻、又はこれらの任意の組合わせである。一部の実施形態では、上記方法は、経腸（例えば経口）投与及び／又は皮下投与を含み得る。ある特定の実施形態では、上記方法は、静脈内投与を含む。一部の実施形態では、上記方法は、筋肉内投与を含む。一部の実施形態では、上記方法は、吸入による投与（例えば、医薬有効成分が下気道中に直接沈着するように対象が高エアロゾル濃度に曝される気管内吸入投与による投与）を含む。ある特定の実施形態では、上記方法は、経鼻投与を含む。一部の実施形態では、上記方法は、経腸（例えば経口）投与を含む。
一部の実施形態では、上記方法の内のいずれか１つに関して、対象に投与することは、ボーラス用量として本開示の組成物を投与することから本質的になるか、又はからなる。一部の実施形態では、上記方法の内のいずれか１つに関して、対象に投与することは、長期にわたる注入による（例えば連続注入による）本開示の組成物の投与を含まない。一部の実施形態では、上記方法の内のいずれかに関して、対象に投与することは、ボーラス用量として本開示の組成物を投与し、続いて長期にわたる注入を含まない。一部の実施形態では、上記方法の内のいずれか１つに関して、対象に投与することは、本開示の組成物の経腸投与又は経口投与を含まない。一部の実施形態では、上記方法の内のいずれか１つに関して、対象に投与することは、本開示の組成物の経口投与を含まない。
医薬有効成分
上記で説明されている上記方法の内のいずれかに関して、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体として、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］；Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］；ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］；及び／又はＵ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然又は非天然のアミノ酸残基である）［配列番号１２］が挙げられ得、Ｕは、Ｎ末端のＧ、Ｃに付着しており、及び／又はＫ残基のイプシロンアミノに付着している。
一部の実施形態では、上記配列中のＵは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の部分であり、式（Ｉ）は、
（脂肪族）ａ－（Ｘ）－ （Ｉ）
であり；
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；
脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり；
Ｘは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択されるか；
又は
Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、
式中、
Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；
ｍは、０、１、２、又は３であり；
ｎは、０、１、２、又は３であり；
且つ
ｍ及びｎの合計は、少なくとも１であり、
式（ＩＩ）は、
（ポリマー）ａ－（Ｙ）－ （ＩＩ）
であり；
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；
ポリマーは、セルロース、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、又はこれらの誘導体であり；
Ｙは、
１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択される、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
非アミノ酸リンカーであって、エステル、アミド、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、又はこれらの組合わせを含む非アミノ酸リンカーであるか；
アミノ酸残基含有リンカーであって、アミノ酸残基は、（ポリマー）ａに共有結合的に付着している、アミノ酸残基含有リンカーであるか；
又は
１～１０個アミノ酸残基若しくはペプチド配列とは異なるペプチドリンカーである。
一部の実施形態では、上記式（ＩＩ）において、Ｙは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である。
本開示では、小文字「ｘ」は、この小文字が出現するペプチド配列中の天然又は非天然のアミノ酸残基を指す。小文字Ｘは、式（Ｉ）及び（ＩＩ）中ではリンカーを指す。一部の実施形態では、ｘは、メチオニン残基（Ｍ）でなく、アスパラギン残基（Ｎ）でなく、又はメチオニン（Ｍ）でもアスパラギン残基（Ｎ）でもない。一部の実施形態では、ｘは、哺乳類の遺伝暗号によりコードされる２０種の天然アミノ酸残基（例えば、アミノ酸Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、及びＹ）の内のいずれか１つではない。一部の実施形態では、ｘは、非天然アミノ酸残基（即ち、哺乳類の遺伝暗号によりコードされないアミノ酸残基）である。一部の実施では、ｘは、ホモグルタミン（本明細書ではホモＱとも称される）である。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］を含み、Ｕは、ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣのＮ末端のＧに付着しており、Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり、式中、ａは、１であり、脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１０～１８鎖、又は任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり；Ｘは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択される。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ［配列番号１２］を含み、式中、ｘは、天然又は非天然のアミノ酸残基であり、Ｕは、式（脂肪族）ａ－（Ｘ）－（式Ｉ）を有しており、式中、０又は１（好ましくは、ａは、１であり）；脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１０～１８鎖、又は任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ［配列番号３０］を含み、式中、ｘは、天然又は非天然のアミノ酸残基であり、但し、ｘは、Ｍ（メチオニン）ではなく；Ｕは、式（脂肪族）ａ－（Ｘ）－（式Ｉ）を有しており、式中、０又は１（好ましくは、ａは、１であり）；脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、又は任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である。
一部の実施形態では、ｘは、メチオニン残基ではないか、アスパラギン残基ではないか、又はメチオニン残基でもアスパラギン残基でもない。一部の実施形態では、ｘは、哺乳類の遺伝暗号によりコードされる２０種の天然アミノ酸残基（例えば、アミノ酸Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、及びＹ）の内のいずれか１つではない。一部の実施形態では、ｘは、非天然アミノ酸残基（即ち、哺乳類の遺伝暗号によりコードされないアミノ酸残基）である。一部の実施では、ｘは、ホモグルタミン（本明細書ではホモＱとも称される）である。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］；Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］；ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］；及び／若しくはＵ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号１２］、又はこれらの任意の組合わせを含み得、
Ｕは、式（Ｉ）の部分であり、式（Ｉ）は、
（脂肪族）ａ－（Ｘ）－ （Ｉ）
であり、
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；
脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１２～２８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ１０～２４鎖であり；
Ｘは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択されるか；
又は
Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、
式中、
Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；
ｍは、０、１、２、又は３であり；
ｎは、０、１、２、又は３であり；
且つ
ｍ及びｎの合計は、少なくとも１である。
一部の実施形態では、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ［配列番号１２］中のｘは、メチオニン残基ではないか、アスパラギン残基ではないか、又はメチオニン残基でもアスパラギン残基でもない。一部の実施形態では、ｘは、哺乳類の遺伝暗号によりコードされる２０種の天然アミノ酸残基（例えば、アミノ酸Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、及びＹ）の内のいずれか１つではない。一部の実施形態では、ｘは、非天然アミノ酸残基（即ち、哺乳類の遺伝暗号によりコードされないアミノ酸残基）である。一部の実施では、ｘは、ホモグルタミン（本明細書ではホモＱとも称される）である。
一部の実施形態では、Ｘは、４～７個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は，独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグリシン（Ｇ）から選択される。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］を含み、
Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり；
式中、
ａは、１であり；
脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり；
Ｘは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択される。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ［配列番号１３］を含み、ｘは、ホモグルタミンであり；Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり、式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）、脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等）を介してＸに共有結合している任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり；Ｂは、Ｇｌｙであり；ｍは、０、１、又は２であり；且つｎは、１である。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ［配列番号１４］を含み、ｘは、ホモグルタミンであり；Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり、式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）、脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等）を介してＸに共有結合している任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した又は直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり；Ｂは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり；且つｎは、１である。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ［配列番号１５］を含み、ｘは、ホモグルタミンであり；Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり、式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）、脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等）を介してＸに共有結合している任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した又は直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり；ｍは、１であり；且つｎは、０である。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号１２］であり、Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり；ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）；脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である。一部の実施形態では、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ［配列番号１２］中のｘは、メチオニン残基ではないか、アスパラギン残基ではないか、又はメチオニン残基でもアスパラギン残基でもない。一部の実施形態では、ｘは、哺乳類の遺伝暗号によりコードされる２０種の天然アミノ酸残基（例えば、アミノ酸Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、及びＹ）の内のいずれか１つではない。一部の実施形態では、ｘは、非天然アミノ酸残基（即ち、哺乳類の遺伝暗号によりコードされないアミノ酸残基）である。一部の実施では、ｘは、ホモグルタミン（本明細書ではホモＱとも称される）である。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、ホモグルタミン（ホモＱ）である）［配列番号１６］を含み、Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり；式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）；脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等）を介してＸに共有結合している任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり；Ｂは、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基であり；ｍは、０であり、且つｎは、２である。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、ホモグルタミン（ホモＱ）である）［配列番号１７］を含み、Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり；式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）；脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等）を介してＸに共有結合している任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり；Ｂは、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基であり；ｍは、１であり、且つｎは、２である。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、ホモグルタミン（ホモＱ）である）［配列番号１８］を含み、Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり；式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）；脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等）を介してＸに共有結合している任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり；Ｂは、（２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸）－（２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸）－（Ｇｌｙ）であり；ｍは、０であり、且つｎは、１である。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、ホモグルタミン（ホモＱ）である）［配列番号１９］を含み、Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり；式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）；脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等）を介してＸに共有結合している任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり；Ｂは、（２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸）－（２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸）－（Ｇｌｙ）であり；ｍは、１であり、且つｎは、１である。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣは、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ（ホモＱ：ホモグルタミン；Ａｅｅａ：２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基；ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）：元のオクタデカジオン酸のカルボン酸末端の内の１つからカルボニル（Ｃ（＝Ｏ））が残るようにγＥと反応したオクタデカジオン酸；γＥ：ガンマ－カルボキシ基を介してコンジュゲートしたグルタミン酸）［配列番号２０］である。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣは、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ（ホモＱ：ホモグルタミン；Ａｅｅａ：２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基；ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６（ＣＯ）：元のオクタデカジオン酸のカルボン酸末端からカルボニル（Ｃ（＝Ｏ））が残るようにＡｅｅａのアミノ末端と反応したオクタデカジオン酸）［配列番号２１］である。
一部の実施形態では、本明細書の定義のいずれかにおいて、脂肪族は、直鎖の又は分岐した任意選択的に置換されているＣ４～９鎖（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、結合、又は同類のもの等の連結を介してペプチドに共有結合している任意選択的に置換されているＣ３～８鎖－Ｃ（＝Ｏ）－部分及び／又は任意選択的に置換されているＣ４～９鎖）を含まない。ある特定の実施形態では、脂肪族は、直鎖の又は分岐したＣ８鎖（例えば、カルボニル、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、結合、又は同類のもの等の連結を介してペプチドに共有結合している直鎖の又は分岐したＣ８鎖）ではない。
一部の実施形態では、上記で説明されているＵとして、ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧ－［配列番号２２］；ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧ－［配列番号２３］；ＣＨ３（ＣＨ２）１８Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧ－［配列番号２４］；ＣＨ３（ＣＨ２）２０Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧ－［配列番号２５］；又はＣＨ３（ＣＨ２）２２Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧ［配列番号２６］が挙げられる。
一部の実施形態では、本開示の長時間作用性ＣＮＰ誘導体として、ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号５］；ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号６］；ＣＨ３（ＣＨ２）１８Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号７］；ＣＨ３（ＣＨ２）２０Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号８］；ＣＨ３（ＣＨ２）２２Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号９］；システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２０］；及び／又はシステイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２１］が挙げられる。
ある特定の実施形態では、本開示の長時間作用性ＣＮＰ誘導体として、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号６］が挙げられる。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号２７］、又はこれらの任意の組合わせを含み；
式中、
Ｕは、式（ＩＩ）の部分であり、式（ＩＩ）は、
（ポリマー）ａ－（Ｙ）－ （ＩＩ）
であり、
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；
ポリマーは、セルロース、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、又はポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）であり；
Ｙは、
４～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグリシン（Ｇ）から選択される、４～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
非アミノ酸リンカーであって、エステル、アミド、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、又はこれらの組合わせを含む非アミノ酸リンカーであるか；
又は
リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであって、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎである。
一部の実施形態では、長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、又はこれらの任意の組合わせを含み；
式中、
Ｕは、式（ＩＩ）の部分であり、式（ＩＩ）は、
（ポリマー）ａ－（Ｙ）－ （ＩＩ）
であり、
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；
ポリマーは、セルロース、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、又はこれらの誘導体であり；
Ｙは、
１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択される、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
非アミノ酸リンカーであって、エステル、アミド、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、又はこれらの組合わせを含む非アミノ酸リンカーであるか；
アミノ酸残基含有リンカーであって、アミノ酸残基は、（ポリマー）ａに共有結合的に付着している、アミノ酸残基含有リンカーであるか；
１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列とは異なるペプチドリンカーである。
一部の実施形態では、上記式（ＩＩ）中のＹは、リンカー－（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である。
一部の実施形態では、ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）を含まないか、ＭＰＥＧを含まないか、又はポリ（エチレングリコール）及びＭＰＥＧの両方を含まない。
一部の実施形態では、Ｙは、４～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグリシン（Ｇ）から選択される、４～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；又はリンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであって、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎである。
一部の実施形態では、Ｙは、４～１０個アミノ酸残基配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグリシン（Ｇ）から選択される。
一部の実施形態では、Ｙは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である。
一部の実施形態では、本開示のＣＮＰ又はその誘導体は、配列番号１０の４位及び１０位のリシン残基にて並びに／又は配列番号１０のＣＮＰのＮ末端にてポリアルキレングリコールで改変されているＣＮＰを含まない。
一部の実施形態では、本開示の長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む製剤は、ポリエチレングリコール、脂肪酸、及び／又はアニオン性部分でグラフト化されたポリ（アミノ酸）等のポリマー賦形剤と配合された１種又は複数種のＣＮＰ又はその誘導体を含む。ポリマーは、このＣＮＰ誘導体を隔離するか又はこのＣＮＰ誘導体に非共有結合するように適合されている。
一部の実施形態では、本開示の超長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む製剤は、ポリエチレングリコール、脂肪酸、及び／又はアニオン性部分でグラフト化されたポリ（アミノ酸）を含むポリマー賦形剤と配合された１種又は複数種の長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む。このポリマーは、このＣＮＰ誘導体を隔離するか又はこのＣＮＰ誘導体に非共有結合するように適合されている。
一部の実施形態では、本開示の長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む製剤は、ポリエチレングリコール、脂肪酸、及び／又はアニオン性部分でグラフト化されたポリ（アミノ酸）を含むポリマー賦形剤と配合された１種又は複数種のＣＮＰ又はその誘導体を含む。このポリマーは、このＮＰＲＢアゴニストを隔離するか又はこのＮＰＲＢアゴニストに非共有結合するように適合されている。
一部の実施形態では、本開示の超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む製剤は、ポリエチレングリコール、脂肪酸、及び／又はアニオン性部分でグラフト化されたポリ（アミノ酸）を含むポリマー賦形剤と配合された１種又は複数種の長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む。このポリマーは、このＮＰＲＢアゴニストを隔離するか又はこのＮＰＲＢアゴニストに非共有結合するように適合されている。
ポリエチレングリコール、脂肪酸、及び／又はアニオン性部分でグラフト化されたポリ（アミノ酸）として、Ｄ－若しくはＬ－キラリティを有し得るか又は両方を有し得、且つ直鎖ホモポリマーであるポリ（アミノ酸）が挙げられ得る。具体的な一実施形態では、直鎖ホモポリマーとして、ポリリシン、ポリオルニチン、ポリアルギニン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリセリン、ポリチロシン、又はアミノ酸で形成されている任意の他のアミド連結ホモポリマーが挙げられる。別の好ましい実施形態では、直鎖疎水性ホモポリマーは、ポリアラニン、ポリバリン、ポリロイシン、ポリイソロイシン、ポリグリシン、又はポリフェニルアラニンを含む。一部の実施形態では、ポリ（アミノ酸）は、ポリリシンである。
本医薬有効成分を製造する方法
本開示のペプチド（例えば、長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、及び長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト）を、当業者に既知の方法を使用する固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）により合成し得る。例えば、Ｈ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ Ｒｅｓｉｎ （ＢＬＤＰｈａｒｍ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）等の出発固体支持体を、自動マイクロ波ペプチド合成機（例えば、ＬｉｂｅｒｔｙＢｌｕｅ ＨＴ１２，ＣＥＭ，Ｍａｔｔｈｅｗｓ，ＮＣ）等のペプチド合成機で使用する可能性がある。各アミノ酸、脂肪酸、又は保護されたアルキルカルボン酸（二酸）を、当業者に既知のＦｍｏｃ化学を使用して、ペプチド樹脂上に順次固定し得、その結果、この樹脂に連結された直鎖状の保護されたペプチドが得られる。直鎖状の粗ペプチドを、カルボカチオン捕捉剤の存在下でのトリフルオロ酢酸による酸分解及びエーテル沈殿により、脱保護してこの樹脂から遊離させ得る。得られた直鎖状ペプチドを、例えばＤＭＳＯ及びアセトニトリル水溶液に溶解させることにより、環化させ得、反応させてジスルフィド結合を形成させ得る。最後に、このペプチドを、逆相ＨＰＬＣ（例えば、１２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＬＣ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）により精製してキャラクタライズし得る。最終ペプチド生成物の純度が９０％超である画分を集め、白色粉末として乾燥させる。
一部の実施形態では、本開示の医薬有効成分（「ＡＰＩ」）を含む製剤は、得られる混合物が長時間作用性であるか又は超長時間作用性であるようなポリマー賦形剤とＡＰＩとの重量比を有する。例えば、ポリマー賦形剤と全ＡＰＩとの重量比は、５：１～１００：１、１０：１～５０：１、又は２０：１～５：１であり得る。このポリマー賦形剤は、ＡＰＩを隔離するか又はＡＰＩに非共有結合するように適合されている。ポリマー賦形剤の例は、例えば、Ｃａｓｔｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，（２０１２）２９（１）；ｐ３０６－１８；Ｃａｓｔｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，（２０１７）１２（２）；ｅ０１７１７０３；米国特許第１０，５０７，２４８号明細書；同第１０，０３５，８８５号明細書；及び同第１０，０１０，６１３号明細書で説明されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ポリマー賦形剤は、全イプシロンアミノの１０～５５％（例えば、１０～３５％又は３０～５５％）のレベルまでイプシロンアミノでＰＥＧによりグラフト化されており、残余のアミノ基がアルキル基及び／又はアニオン性部分（例えば、硫酸、スルホン酸、カルボキシル、リン酸、若しくはホスホン酸）でグラフト化されたポリリシンであり得るが、これに限定されない。ポリマー賦形剤を製造する方法は、当該技術分野で既知である。
簡潔に説明すると、一部の実施形態では、ポリマー賦形剤は、下記の手順により製造されたポリマーである。ポリ－Ｌ－リシン（２０ＰＬ）、臭化水素酸塩（２１μｍｏｌ又は１ｇ；Ｓｉｇｍａ、平均Ｍｗ＝２６ｋＤａ；ｄ．ｐ．１２６）を溶解させ、ＮＨ２基の量を、ＴＮＢＳ滴定により決定した。メトキシポリエチレングリコールカルボキシメチル（ＭＰＥＧ－ＣＭ；１０ｇ；Ｍｗ＝５ｋＤａ；２ｍｍｏｌ；Ｌａｙｓａｎ Ｂｉｏ）を、ＮＨＳＳ及びＥＤＣを使用してポリリシンに共役させて、ポリマー賦形剤中間体を得た。残存するアミノ基の割合を、ＴＮＢＳにより決定した。流体力学的直径を、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定した。粗生成物を、凍結乾燥させ得る。ステアリン酸をＮＨＳで活性化させることにより、ステアリル－ＮＨＳ（Ｃ１８－ＮＨＳ）を調製した。ポリマー賦形剤中間体へのステアリル－ＮＨＳのＤＣＣカップリングを、行ない得る。過剰な試薬及び副産物を、標準的な技術により除去し得る。さらなるＣ１８－ＮＨＳ（３．６ｍｍｏｌ）を添加し、ポリマー中間体と一晩反応させた。この反応混合物を、真空下での回転蒸発により濃縮して、油状物が単離されるまで揮発性成分を除去した。この油状物を、アルコール及び水に溶解させ得る。この溶液を、ろ過し、繰り返し洗浄して、ポリマー賦形剤（Ｃ１８疎水性側鎖及びＭＰＥＧ親水性側鎖を有するポリリシン）を含む保持液を得て回収し、０．２ｕｍろ過し（ポリスルホンフィルタ、Ｎａｌｇｅｎｅ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）、凍結乾燥させて、乾燥ポリマー賦形剤を得ることができる。
上記では、Ｃ１８疎水性側鎖を有するポリマー賦形剤を説明したが、他の疎水性側鎖長（例えば、Ｃ１０～２４、Ｃ１２～２０、Ｃ１２～１８、Ｃ１４～１８、Ｃ１６～１８、又はＣ１８）及び親水性側鎖（例えば、ＰＥＧ、ｍＰＥＧ）を、他の疎水性側鎖及び親水性側鎖を有するポリマー賦形剤を製造するのに適合させ得ることが理解される。
ポリエチレングリコール、脂肪酸、及び／又はアニオン性部分によりグラフト化されているポリ（アミノ酸）として、Ｄ－若しくはＬ－キラリティを有し得るか又は両方を有し得、且つ直鎖ホモポリマーであるポリ（アミノ酸）が挙げられ得る。具体的な一実施形態では、直鎖ホモポリマーとして、ポリリシン、ポリオルニチン、ポリアルギニン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリセリン、ポリチロシン、又はアミノ酸で形成されている任意の他のアミド連結ホモポリマーが挙げられる。別の好ましい実施形態では、直鎖疎水性ホモポリマーは、ポリアラニン、ポリバリン、ポリロイシン、ポリイソロイシン、ポリグリシン、又はポリフェニルアラニンを含む。一部の実施形態では、ポリ（アミノ酸）は、ポリリシンである。
親水性側鎖の例として、下記が挙げられる：ポリ（エチレングリコール）であって、ジカルボン鎖によりエステル化されてポリ（エチレングリコール）モノエステルを形成し得るポリ（エチレングリコール）；メトキシポリ（エチレングリコール）モノエステル（ＭＰＥＧ）、又はポリ（エチレングリコール）とポリ（プロピレングリコール）モノエステルとのコポリマーであって、このコポリマーの末端に、ポリ（アミノ酸）に共有結合的に連結するために使用され得るカルボキシル基を付与するジカルボン酸とのエステルの形態であるコポリマー。他の形態として、下記が挙げられる：ポリ（エチレングリコール）－カルボキシル；メトキシポリ（エチレングリコール）－カルボキシル；ポリ（エチレングリコール）－カルボキシメチル；メトキシポリ（エチレングリコール）－カルボキシメチル；ポリ（エチレングリコール）モノアミン；メトキシポリ（エチレングリコール）モノアミン；ポリ（エチレングリコール）ヒドラジド；メトキシポリ（エチレングリコール）ヒドラジド；ポリ（エチレングリコール）と、ポリアミノ酸、多糖、ポリアミドアミン、ポリエチレンイミンで表される１種又は数種のポリマーとのメトキシポリ（エチレングリコール）イミダゾリド ブロックコポリマー（これらのブロックが交互に配置されて直鎖状のブロックコポリマーが得られる）。一実施形態では、保護鎖の全分子量は、３００ダルトン超であり得るが、１０，０００ダルトンを超えない。一実施形態では、１つ又は複数の保護鎖が、単一の連結によりポリ（アミノ酸）骨格に連結されている。
理論に拘束されることを望むものではないが、ＡＰＩ組成物を対象に投与した場合には、ＡＰＩに対するポリマー賦形剤の重量比が高いほど、血漿中での存在が長く継続し、且つベースラインを超える血漿中環状ＧＭＰの上昇が長く継続すると考えられる。
一部の実施形態では、本開示の長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、及び／又は長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む製剤は、得られる混合物が、長時間作用性ＣＮＰであるような、長時間作用性ＣＮＰ誘導体であるような、及び／又は長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストであるような、ポリマー賦形剤と、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、及び／又はＮＰＲＢアゴニストとの重量比を有する。例えば、このポリマー賦形剤と、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、及び／又はＮＰＲＢアゴニストとの重量比は、５：１～１００：１、１０：１～５０：１、又は２０：１～５：１であり得る。このポリマー賦形剤は、ポリエチレングリコール、脂肪酸、及び／又はアニオン性部分でグラフト化されたポリ（アミノ酸）を含み得る。例えば、Ｃａｓｔｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，（２０１２）２９（１）；ｐ３０６－１８；Ｃａｓｔｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，（２０１７）１２（２）；ｅ０１７１７０３；米国特許第１０，５０７，２４８号明細書；同第１０，０３５，８８５号明細書；同第１０，０１０，６１３号明細書（これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。このポリマー賦形剤は、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、及び／又はＮＰＲＢアゴニストを隔離するか又はこれらに非共有結合するように適合されている。ポリマー賦形剤は、全イプシロンアミノの３０～５５％又は１０～３５％のレベルまでイプシロンアミノでＰＥＧによりグラフト化されており、残余のアミノ基がアルキル基及び／又はアニオン性部分（例えば、硫酸、スルホン酸、カルボキシル、リン酸、若しくはホスホン酸）でグラフト化されたポリリシンであり得るが、これに限定されない。ポリマー賦形剤を製造する方法は、当該技術分野で既知である。理論に拘束されることを望むものではないが、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、及び／又はＮＰＲＢアゴニスト組成物を対象に投与した場合には、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、及び／又はＮＰＲＢアゴニストに対するポリマー賦形剤の重量比が高いほど、血漿中でのＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、又はＮＰＲＢアゴニストの存在が長く継続し、且つベースラインを超える血漿中環状ＧＭＰの上昇が長く継続すると考えられる。
一部の実施形態では、超長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、及び／又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト製剤は、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、及び／又はＮＰＲＢアゴニストと、ポリマー賦形剤とを、得られる混合物が、超長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、及び／又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストであるような、ポリマー賦形剤と、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、及び／又はＮＰＲＢアゴニストとの重量比で含む。例えば、ポリマー賦形剤と、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、及び／又はＮＰＲＢアゴニストとの重量比は、５：１～１００：１、１０：１～５０：１、又は２０：１～５：１であり得る。このポリマー賦形剤として、ポリエチレングリコール、脂肪酸、及び／又はアニオン性部分でグラフト化されたポリ（アミノ酸）が挙げられ得る。例えば、Ｃａｓｔｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，（２０１２）２９（１）；ｐ３０６－１８；Ｃａｓｔｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，（２０１７）１２（２）；ｅ０１７１７０３；米国特許第１０，５０７，２４８号明細書；同第１０，０３５，８８５号明細書；同第１０，０１０，６１３号明細書（これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。このポリマー賦形剤は、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、及び／又はＮＰＲＢアゴニストを隔離するか又はこれらに非共有結合するように適合されている。ポリマー賦形剤は、全イプシロンアミノの３０～５５％又は１０～３５％のレベルまでイプシロンアミノでＰＥＧによりグラフト化されており、残余のアミノ基がアルキル基及び／又はアニオン性部分（例えば、硫酸、スルホン酸、カルボキシル、リン酸、若しくはホスホン酸）でグラフト化されたポリリシンであり得るが、これに限定されない。ポリマー賦形剤を製造する方法は、当該技術分野で既知である。理論に拘束されることを望むものではないが、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、及び／又はＮＰＲＢアゴニスト組成物を対象に投与した場合には、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、及び／又はＮＰＲＢアゴニストに対するポリマー賦形剤の重量比が高いほど、血漿中でのＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、及び／又はＮＰＲＢアゴニストの存在が長く継続し、且つベースラインを超える血漿中環状ＧＭＰの上昇が長く継続すると考えられる。
組合わせ癌処置
本開示のさらなる実施形態では、癌を処置するための上記方法の内のいずれか１つは、免疫チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む。この免疫チェックポイント阻害剤として、下記の内のいずれか１つに結合する及び／又は下記の内のいずれか１つの作用をブロックする抗体／タンパク質又は化合物が挙げられ得る：ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）、ＰＤ１（プログラム細胞死タンパク質１又はＣＤ２７９）、ＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）、ＰＤ－Ｌ２（プログラム死リガンド２）、ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子３タンパク質）、ＢＴＬＡ（Ｂ－及びＴ－リンパ球アテニュエータ）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６、Ｂ７ファミリ及びＣＤ２８ファミリの免疫チェックポイントメンバーである）、Ｂ７Ｈ４（Ｂ７ファミリの分子、Ｔ細胞免疫を負に制御する）、並びに／又はＴＩＭ－３（ＩＦＮ－γ産生Ｔ細胞上で発現される共阻害受容体）。この免疫チェックポイント阻害剤の前に、同時に、又は後に、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を投与し得る。
一部の実施形態では、本開示の癌を処置する方法の内のいずれか１つは、ＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することをさらに含む。このＣＡＲ－Ｔ細胞の静脈内投与の前に、同時に、又は後に、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、若しくはこれらの任意の組合わせ、及び／又は免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物の治療上有効なボーラス用量を投与し得る。
一部の実施形態では、本開示の癌を処置する方法の内のいずれか１つは、抗体を投与することをさらに含む。例えば、この抗体は、抗ＰＤ１抗体であり得る。一部の実施形態では、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物と、この抗体との間に、相乗効果を観察し得る。
一部の実施形態では、本開示の癌を処置する方法の内のいずれか１つは、１種又は複数種のアジュバント（例えば、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、Ｔｏｌｌ様受容体９アゴニスト；又はＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド）を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、長時間作用性Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＣＮＰ受容体（ＮＰＲＢ）アゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物と、このアジュバントとの間に、相乗効果を観察し得る。
一部の実施形態では、本開示は、下記の臓器：皮膚、乳房、骨、前立腺、結腸、頭部、頸部、肝臓、腎臓、子宮頸部、肺、胃、尿道、膀胱、尿管、腎盂、直腸、食道、リンパ節、膵臓、胃、卵巣、中枢神経系、軟部組織、及び／又は内分泌腺での癌の内の１つ又は複数を有する対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）を処置する方法を特徴とする。この方法は、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、及び／又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む組成物（例えば、細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物）の治療用有効なボーラス用量を、この対象に投与することを含む。この方法は、免疫チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含み、例えば、ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）、ＰＤ１（プログラム細胞死タンパク質１又はＣＤ２７９）、ＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）、ＰＤ－Ｌ２（プログラム死リガンド２）、ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子３タンパク質）、ＢＴＬＡ（Ｂ－及びＴ－リンパ球アテニュエータ）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６、Ｂ７ファミリ及びＣＤ２８ファミリの免疫チェックポイントメンバーである）、Ｂ７Ｈ４（Ｂ７ファミリの分子、Ｔ細胞免疫を負に制御する）、並びに／又はＴＩＭ－３（ＩＦＮ－γ産生Ｔ細胞上で発現される共阻害受容体）の内のいずれか１つに結合する及び／又はこのいずれか１つの作用をブロックする１種又は複数種の抗体／タンパク質又は化合物を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、この方法は、免疫アジュバント（この免疫アジュバントは、ｔｏｌｌ様受容体を調節する）、又はＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）、ＰＤ１（プログラム細胞死タンパク質１若しくはＣＤ２７９）、ＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）、ＰＤ－Ｌ２（プログラム死リガンド２）、ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子３タンパク質）、ＢＴＬＡ（Ｂ－及びＴ－リンパ球アテニュエータ）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６、Ｂ７ファミリ及びＣＤ２８ファミリの免疫チェックポイントメンバー）、Ｂ７Ｈ４（Ｂ７ファミリの分子、Ｔ細胞免疫を負に制御する）、並びにＴＩＭ－３（ＩＦＮ－γ産生Ｔ細胞上で発現される共阻害受容体）から選択される免疫チェックポイントタンパク質を標的とする治療薬（例えば、タンパク質及び／若しくは小分子化合物）又は抗体を含む細胞傷害性細胞免疫賦活薬を、この対象に投与することをさらに含み、この細胞傷害性細胞免疫賦活薬は、免疫チェックポイントタンパク質を阻害するか；又は免疫チェックポイントタンパク質に対する抗体若しくは抗体の一部、免疫チェックポイントタンパク質の可溶性リガンド、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、トレメリムマブ、ラムブロリズマブ、及び／若しくはピディリズマブを含む細胞傷害性細胞免疫賦活薬をさらに投与することを含むか；又はｔｏｌｌ様受容体９アゴニストである免疫アジュバントをさらに投与することを含むか；又はＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドである免疫をさらに投与することを含む。この組成物の治療上有効なボーラス用量は、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、１０％を超えて、又は５％を超えて）血圧（又は平均動脈圧）を低下させないか又はこの低下を引き起こさない用量であり、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、しかしながら、この用量は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ得、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、このボーラス用量の投与前の平均血漿中レベルと定義されているか、又は健康な対象の平均血漿中レベル（好ましくは、この対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）である。
一部の実施形態では、癌である対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）は、下記の臓器：皮膚、乳房、骨、前立腺、結腸、頭部、頸部、肝臓、腎臓、子宮頸部、肺、胃、尿道、膀胱、尿管、腎盂、直腸、食道、リンパ節、膵臓、胃、卵巣、中枢神経系、軟部組織、及び／又は内分泌腺での癌の内の１つ又は複数を有する。本方法は、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、及び／又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む組成物（例えば、細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物）の治療用有効なボーラス用量を、この対象に投与することを含む。一部の実施形態では、この方法は、免疫チェックポイントタンパク質に対する抗体若しくは抗体の一部、及び／又は免疫チェックポイントタンパク質の可溶性リガンドを投与することをさらに含む。例えば、この方法は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、トレメリムマブ、ラムブロリズマブ、及び／又はピディリズマブ等の１種又は複数種の免疫チェックポイントタンパク質抗体を投与することをさらに含み得る。治療上有効なボーラス用量は、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、１０％を超えて、又は５％を超えて）血圧（又は平均動脈圧）を低下させないか又はこの低下を引き起こさない用量であり、このベースライン血圧測定値は、この組成物の投与前の平均血圧であり、しかしながら、この用量は、投与後１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ得、このベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、このボーラス用量の投与前の平均血漿中レベルと定義されているか、又は健康な対象の平均血漿中レベル（好ましくは、この対象へのこの組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）である。
一部の実施形態では、癌である対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）は、下記の臓器：皮膚、乳房、骨、前立腺、結腸、頭部、頸部、肝臓、腎臓、子宮頸部、肺、胃、尿道、膀胱、尿管、腎盂、直腸、食道、リンパ節、膵臓、胃、卵巣、中枢神経系、軟部組織、及び／又は内分泌腺での癌の内の１つ又は複数を有する。本方法は、長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物の治療上有効なボーラス用量を、この対象に投与することを含む。この方法は、ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）、ＰＤ１（プログラム細胞死タンパク質１又はＣＤ２７９）、ＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）、ＰＤ－Ｌ２（プログラム死リガンド２）、ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子３タンパク質）、ＢＴＬＡ（Ｂ－及びＴ－リンパ球アテニュエータ）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６、Ｂ７ファミリ及びＣＤ２８ファミリの免疫チェックポイントメンバーである）、Ｂ７Ｈ４（Ｂ７ファミリの分子、Ｔ細胞免疫を負に制御する）、ＴＩＭ－３（ＩＦＮ－γ産生Ｔ細胞上で発現される共阻害受容体）の内のいずれか１つに結合する及び／又はこのいずれか１つの作用をブロックする１種又は複数種の抗体／タンパク質又は化合物から選択される免疫チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む。この治療上有効なボーラス用量は、上記で説明されている用量である。
一部の実施形態では、癌である対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）は、下記の臓器：皮膚、乳房、骨、前立腺、結腸、頭部、頸部、肝臓、腎臓、子宮頸部、肺、胃、尿道、膀胱、尿管、腎盂、直腸、食道、リンパ節、膵臓、胃、卵巣、中枢神経系、軟部組織、及び／又は内分泌腺での癌の内の１つ又は複数を有する。本方法は、長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物の治療上有効なボーラス用量を、この対象に投与することを含む。一部の実施形態では、この方法は、免疫チェックポイントタンパク質に対する抗体若しくは抗体の一部、及び／又は免疫チェックポイントタンパク質の可溶性リガンドを投与することをさらに含む。さらに、この方法は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、トレメリムマブ、ラムブロリズマブ、及び／又はピディリズマブ等の１種又は複数種の免疫チェックポイントタンパク質抗体を投与することを含み得る。この治療上有効なボーラス用量は、上記で説明されている用量である。
一部の実施形態では、癌である対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）は、下記の臓器：皮膚、乳房、骨、前立腺、及び／又は結腸での癌の内の１つ又は複数を有する。本方法は、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、及び／又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物の治療上有効なボーラス用量を、この対象に投与することを含む。この方法は、ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）、ＰＤ１（プログラム細胞死タンパク質１又はＣＤ２７９）、ＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）、ＰＤ－Ｌ２（プログラム死リガンド２）、ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子３タンパク質）、ＢＴＬＡ（Ｂ－及びＴ－リンパ球アテニュエータ）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６、Ｂ７ファミリ及びＣＤ２８ファミリの免疫チェックポイントメンバーである）、Ｂ７Ｈ４（Ｂ７ファミリの分子、Ｔ細胞免疫を負に制御する）、並びに／又はＴＩＭ－３（ＩＦＮ－γ産生Ｔ細胞上で発現される共阻害受容体）の内のいずれか１つに結合する及び／又はこのいずれか１つの作用をブロックする１種又は複数種の抗体／タンパク質又は化合物から選択される免疫チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む。この治療上有効なボーラス用量は、上記で説明されている用量である。
一部の実施形態では、癌である対象（例えば、哺乳類対象、必要な患者）は、下記の臓器：皮膚、乳房、骨、前立腺、及び／又は結腸での癌の内の１つ又は複数を有する。本方法は、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、及び／又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストを含む細胞傷害性細胞免疫賦活薬組成物の治療上有効なボーラス用量を、この対象に投与することを含む。一部の実施形態では、この方法は、免疫チェックポイントタンパク質に対する抗体若しくは抗体の一部、及び／又は免疫チェックポイントタンパク質の可溶性リガンドを投与することをさらに含む。例えば、この方法は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、トレメリムマブ、ラムブロリズマブ、及び／又はピディリズマブ等の１種又は複数種の免疫チェックポイントタンパク質抗体を投与することを含み得る。この治療上有効なボーラス用量は、上記で説明されている用量である。
上述した方法の内のいずれかでは、皮膚癌として、メルケル細胞癌、扁平上皮癌、及び／若しくは黒色腫が挙げられ得；肝癌として、肝細胞癌が挙げられ得；腎癌として、腎細胞癌が挙げられ得；肺癌として、小細胞肺癌若しくは非小細胞肺癌が挙げられ得；乳癌として、三種陰性乳癌が挙げられ得；胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）として、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、食道接合部の腺癌、及び／若しくはｄＭＭＲが挙げられ得；リンパ節として、ホジキンＰＭＢＣＬ若しくは非ホジキンＰＭＢＣＬが挙げられ得；膵癌及び／若しくは卵巣癌として、それぞれｄＭＭＲが挙げられ得；並びに／又は腎盂領域に対する周辺臓器の癌として、尿路上皮癌が挙げられ得る。
下記の実施例は、本開示を限定するためではなく説明するために記載されている。
実施例で使用される全てのペプチドを、自動マイクロ波ペプチド合成機（ＬｉｂｅｒｔｙＢｌｕｅ ＨＴ１２，ＣＥＭ，Ｍａｔｔｈｅｗｓ，ＮＣ）において、出発固体支持体としてＨ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ Ｒｅｓｉｎ（０．５４ｍｍｏｌ／ｇ）を有する固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）（ＢＬＤＰｈａｒｍ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）により合成した。ペプチドの各構成分子、例えば、アミノ酸、脂肪酸、又は保護されたアルキル二酸を、当業者に既知のＦｍｏｃ化学を使用して、このペプチド樹脂上に順次固定し、この樹脂に連結された直鎖状の保護されたペプチドを得た。直鎖状の粗ペプチドを、カルボカチオン捕捉剤の存在下でのトリフルオロ酢酸による酸分解及びエーテル沈殿により、脱保護してこの樹脂から遊離させた。得られた直鎖状ペプチドを、１０％ ＤＭＳＯ及び２０％ アセトニトリル水溶液に溶解させることにより環化させ、少なくとも２日にわたり反応させてジスルフィド結合を形成させた。最後に、このペプチドを、０．１％ トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含む水中の１０％ アセトニトリルと、０．１％ ＴＦＡを含むアセトニトリルとの勾配を使用して、逆相ＨＰＬＣ（１２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＬＣ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）により、精製してキャラクタライズした。この勾配を、室温で２４分かけて４０ｍＬ／分にて、Ｗａｔｅｒｓ ３０×１５０ｍｍ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム（Ｐ／Ｎ １８６００３２８４）及びＷａｔｅｒｓ Ｃ１８ ｐｒｅｐカラム（Ｐ／Ｎ １８６００６８９３）により実行し、２１４ｎｍで取得した。純度が９０％超であるペプチド画分を集め、白色粉体として乾燥させて、最終ペプチド生成物を得た。
実施例１：ボーラスとして投与した場合のネイティブＣＮＰと比較した長時間作用性ＣＮＰの優れたインビボ性能
この試験に使用した全てのマウスを、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本又はＰｉｃｏＬａｂ Ｒｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ２０，ＬａｂＤｉｅｔ Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。
薬物動態試験のために、雌のＣＤ－１マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ ｒｉｖｅｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙからの６～８週齢）を、肩甲骨間での皮下投与により、２．０ｍｇ／ＫｇのネイティブヒトＣＮＰ（Ｃｈｅｍｐｅｐ Ｉｎｃ．Ｗｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，ＦＬ）、長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ｄＣＮＰ，Ｃｈｅｍｐｅｐ Ｉｎｃ．Ｗｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，ＦＬ）、又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）で処置した。全ての試験品を、１００ｍＭ ソルビトール、１００ｍＭ メチオニン、２０ｍＭ ヒスチジン、ｐＨ６．０に配合したか、又は溶解させた。眼窩後出血により、様々な時間（ネイティブＣＮＰの場合には、０、０．５、１、２、３、４、５、及び２４；ｄＣＮＰ及びＶＬＡ－ｄＣＮＰの場合には、０、１、２、４、８、１２、２４、４８、及び７２）での血液サンプリングを実施し、２つの異なる時点で１匹の動物当たり２回出血させた。血液サンプルをＫ２ＥＤＴＡチューブ中で処理して、血漿を得た。血漿を、Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからの市販のＣＮＰ ＥＬＩＳＡキット（カタログ＃ ＥＫＥ－０１２－０３）で分析した。ＣＮＰは、ネイティブヒトＣＮＰ（ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号１０］）であり、ｄＣＮＰは、下記の配列ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号６］を有するヒトＣＮＰの付加誘導体の一つである。ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、１：１０のｄＣＮＰ：賦形剤重量比でのｄＣＮＰとＰＫ増量ポリマー賦形剤との共製剤である。このポリマーの詳細は、全体が参照により本明細書に組み込まれるＣａｓｔｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，（２０１２）２９（１）；ｐ３０６－１８で説明されている。
環状ＧＭＰ反応試験の薬物動態試験のために、雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（九動株式会社；佐賀，日本からの６週齢）を、肩甲骨間での皮下ボーラス投与により、１．０ｍｇ／ＫｇのネイティブヒトＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ｄＣＮＰ）、及び超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）で処置した。全ての試験品を、１００ｍＭ スクロース、１００ｍＭ メチオニン、５０ｍＭ ヒスチジン、ｐＨ７．４に配合したか、又は溶解させた。開腹後の腹部大動脈血液サンプリングにより、様々な時間（ネイティブＣＮＰ及びｄＣＮＰの場合には、０、１、４、８、１２、及び２４時間；ｄＣＮＰ及びＶＬＡ－ｄＣＮＰの場合には、０、１、２、４、８、５、２４、及び４８時間）での血液サンプリングを実施し、１つの時点当たり１匹の動物当たり１回出血させた。血漿を得るために、血液に、ＥＤＴＡ；最終濃度１．５ｍｇ／ｍＬ（同仁化学研究所，熊本，日本）、及びアプロチニン；最終濃度５００ＫＩＵ／ｍＬ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ ＭＯ）を添加し、遠心分離した（×２，０００ｇ；１５分、４Ｃ）。上清を回収した後、血漿サンプルを－８０℃で保存した。血漿サンプルを、ＣｉｓＢｉｏ（Ｃｏｄｏｌｅｔ，Ｆｒａｎｃｅ）からの市販の環状ＧＭＰキットで分析した。ＣＮＰは、ネイティブヒトＣＮＰ（ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号１０］）であり、ｄＣＮＰは、下記の配列：ＣＨ３（ＣＨ２）１６（Ｃ＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号６］によるヒトＣＮＰの付加誘導体である。ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、１：１０のｄＣＮＰ：賦形剤重量比でのｄＣＮＰとＰＫ増量ポリマー賦形剤との共製剤である。このポリマーの詳細は、全体が参照により本明細書に組み込まれるＣａｓｔｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，（２０１２）２９（１）；ｐ３０６－１８で説明されている。具体的には、このＰＫ増量賦形剤を、分子量が１５～４０ｋＤａ（２５ｋＤａのポリリシン平均分子量、多角度レーザー光散乱又はＭＡＬＬＳによる）の範囲である直鎖ポリリシン骨格のイプシロンアミノ基への付着のための５ｋＤａ ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の（０．２：１：１：０．３のイプシロンアミノ：ＮＨＳＳ：ＥＤＣ：ＰＥＧカルボキシル基モル比での）直鎖ポリリシンのイプシロンアミノに付着するためにポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のカルボキシル基を活性化するために、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミド試薬及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドを使用して製造した。この生成物を、プロセス測定において、トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）アミノによりキャラクタライズした。ＰＥＧ付加反応中にイプシロンアミノ基の５５％が使い果たされており、残余のイプシロンアミノ基は、ＮＨＳ－ステアリン酸を使用するステアリン酸付加反応中に使い果たされたと推定される。ＴＮＢＳにより測定した場合には、ステアリン酸付加の終了時に存在する測定可能なアミノ基は、ごくわずか（５％未満）であった。このＰＫ増量賦形剤を、当業者に公知の限外ろ過プロセスにより精製した。ＰＫ増量賦形剤を伴うボーラス投与及び伴わないボーラス投与に使用した緩衝製剤は、１００ｍＭ スクロース、１００ｍＭ メチオニン、５０ｍＭヒスチジンであった。
図１Ａを参照すると、ネイティブＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体（ｄＣＮＰ）、及び超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）の２．０ｍｇ／ｋｇの量での皮下投与後のＣＤ－１マウスに関する血漿中ＣＮＰ［平均（ＳＤ）；ｎ＝５］が示されている。挿入図は、ネイティブＣＮＰを投与した場合のＣＮＰの低い血漿中レベル（菱形）を示す左下角の拡大スケールである。エラーバーは、ｎ＝５の血漿サンプルの標準偏差を表す。投与前のベースラインＣＮＰレベルは、１．７４（０．６）ｎｇ／ｍＬ［平均（ＳＤ）；ｎ＝１５］であった。図１Ｂは、ネイティブＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ｄＣＮＰ）、及び超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）の１．０ｍｇ／Ｋｇの量での皮下投与後に、ＣｉｓＢｉｏ（Ｃｏｄｏｌｅｔ，Ｆｒａｎｃｅ）の環状ＧＭＰキットを使用して測定した雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける血漿中環状ＧＭＰを示すプロットである。ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、２０（３．７）ｐｍｏｌ／ｍＬ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝８］又は７（１．３）ｎｇ／ｍＬ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝８］であった。２時間以降に、ネイティブＣＮＰの皮下投与では、ベースラインと比較して血漿中環状ＧＭＰの有意な上昇が示されなかったが、長時間作用性ＣＮＰ（ｄＣＮＰ及びＶＬＡ－ｄＣＮＰ）の同様の投与では、少なくとも２４時間にわたり環状ＧＭＰの有意な上昇が示された。
実施例２：超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）の高用量のボーラス投与により、驚くべきことに血圧の対応する低下を伴うことなく血漿中環状ＧＭＰを増加させ得る
この試験のために、下記の３種の異なる長時間作用性ナトリウム利尿ペプチド（超長時間作用性ＡＮＰ誘導体又はＶＬＡ－ｄＡＮＰ；ｄＣＮＰと同様に改変されたＡＮＰ、ここで、ＶＬＡ－ＡＮＰは、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧ－ＳＬＲＲＳＳＣＦＧＧＲＭＤＲＩＧＡＱＳＧＬＧＣＮＳＦＲＹ［配列番号２８］＋ＰＫ増量賦形剤であり、ｄＡＮＰは、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧ－ＳＬＲＲＳＳＣＦＧＧＲＭＤＲＩＧＡＱＳＧＬＧＣＮＳＦＲＹ［配列番号２８］単独であった）に関して、心血管効果及び血行動態効果を評価した。ＰＫ増量賦形剤は、上記実施例１で説明されており且つ全体が参照により本明細書に組み込まれるＣａｓｔｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，（２０１２）２９（１）；ｐ３０６－１８で説明されているポリマー賦形剤であった。超長時間作用性ＢＮＰ又はＶＬＡ－ｄＢＮＰは、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧ－ＳＰＫＭＶＱＧＳＧＣＦＧＲＫＭＤＲＩＳＳＳＳＧＬＧＣＫＶＬＲＲＨ（ｄＢＮＰ）［配列番号２９］＋上記で説明されているＰＫ増量賦形剤であった。ｄＢＮＰ、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧ－ＳＰＫＭＶＱＧＳＧＣＦＧＲＫＭＤＲＩＳＳＳＳＧＬＧＣＫＶＬＲＲＨ［配列番号２９］は、上記で説明されているＰＫ増量賦形剤を含まない。ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、実施例１で説明されているｄＣＮＰ＋上記で説明されているＰＫ増量ポリマー賦形剤である。ｄＣＮＰは、実施例１で説明されている通りであり、且つＰＫ増量賦形剤を含まない。これらの製剤（１００ｍＭ スクロース、１００ｍＭ メチオニン、５０ｍＭ ヒスチジン緩衝剤中）を、ビーグル犬に投与した［ｎ＝１２動物／試験品；同一の動物を、少なくとも１週間の洗い流し期間後に、他の試験品に使用した］。これらの試験品を、２５μｇ／Ｋｇのペプチド及び１ｍｇ／ＫｇのＰＫ増量ポリマー（２．５％負荷）を含む単回皮下注射により投与した。１２匹の動物に、Ｄａｔａ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）でテレメトリ送信機を予め装着し、心拍数、平均動脈圧、収縮期動脈圧、拡張期動脈圧、ＰＲ間隔、ＱＲＳ持続時間、ＱＴ間隔、及び体温を連続的に記録した。全ての動物を、各用量に関して７日にわたりモニタリングした。各用量後４、６、８、１６、２０、２４、２８、３２、４０、４８、６６、７８、９０、１０２、１１４、１２６、１３８、１５０、１６２、及び１７４時間で、血液サンプル ３ｍＬをＫ３ＥＤＴＡ採取管に採取し、次いで、冷蔵遠心分離機で回転させるまで湿氷上で保存した。血漿を回収し、血漿保存試薬（リン酸（脱イオン水中）、１５：８５、ｖ／ｖ）で処理した。このサンプルを数回反転させ、次いでドライアイスで凍結させた。このサンプルを、冷凍庫（－８０Ｃ）で保存し、次いで、ドライアイス上で輸送して環状ＧＭＰのＬＣ－ＭＳ分析を行なった。
全てのナトリウム利尿ペプチドは、細胞質環状ＧＭＰ産生の増加を引き起こすことにより作用し、それにより、血圧の対応する低下が引き起こされると考えられる。しかしながら、図２Ａ及び２Ｂを参照すると、３種の主要なナトリウム利尿ペプチドの長時間作用性型のボーラス用量を比較した場合には、驚くべきことに、本開示の超長時間作用性ＣＮＰ誘導体の高いボーラス用量（３日にわたり血液中環状ＧＭＰを増加させるのに十分）は、血圧の危険な低下を引き起こすことなく血漿中環状ＧＭＰを増加させ得ることが見出されたが、同様に開発された超長時間作用性ＡＮＰ及びＢＮＰ誘導体は、ボーラス用量（３日わたり血液中環状ＧＭＰを増加させるのに十分）として投与した場合には、血圧の顕著な低下を引き起こした。超長時間作用性ＡＮＰ誘導体の場合には、血圧低下は４５％にもなり、超長時間作用性ＢＮＰ誘導体の場合には、血圧低下は２０％にもなった。３種全ての長時間作用性ナトリウム利尿ペプチド誘導体に関して、環状ＧＭＰの増加は、ベースラインの１．５倍超及び６倍にもなった。環状ＧＭＰ ＡＵＣは、ＶＬＡ－ｄＡＮＰ ３，４８３ｎｇ＊ｈ／ｍＬ、ＶＬＡ－ｄＢＮＰ ２，５８５ｎｇ＊ｈ／ｍＬ、ＶＬＡ－ｄＣＮＰ ２，６２７ｎｇ＊ｈ／ｍＬである。
図２Ａは、２５ｕｇ／Ｋｇの超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）、超長時間作用性ＢＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＢＮＰ）、及び超長時間作用性ＢＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＡＮＰ）のボーラス投与後にモニタリングした場合の血漿中環状ＧＭＰ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝１２］の対応する増加を示す。ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、８（０．２）ｎｇ／ｍＬ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝１２］であり、このレベルは、健康なヒトと類似している。例えば、Ｉｇａｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ Ｒｅｓ １９９８；２１：７－１３を参照されたい。ナトリウム利尿ペプチドの全ての超長時間作用性製剤は、８ｎｇ／ｍｌというベースラインを超えて環状ＧＭＰを増加させた。環状ＧＭＰ ＡＵＣ値は、ＶＬＡ－ｄＡＮＰ ３，４８３ｎｇ＊ｈ／ｍＬ、ＶＬＡ－ｄＢＮＰ ２，５８５ｎｇ＊ｈ／ｍＬ、ＶＬＡ－ｄＣＮＰ ２，６２７ｎｇ＊ｈ／ｍＬであった。超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）は、血圧の関連する低下を伴うことなく３日にわたり血漿中環状ＧＭＰを増加させた。
図２Ｂは、２５ｕｇ／Ｋｇの超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）、超長時間作用性ＢＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＢＮＰ）、又は超長時間作用性ＢＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＡＮＰ）のボーラス投与後にモニタリングした場合の、イヌ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝１２］における平均動脈圧を示す。ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、非常に高い用量での投与後に、ベースライン（０時間）からの有意な血圧低下を引き起こさなかった。対照的に、ＶＬＡ－ｄＢＮＰ誘導体及びＶＬＡ－ｄＡＮＰ誘導体等の他の超長時間作用性ナトリウム利尿ペプチドは、血圧の１５％超の低下を引き起こした。このことは、環状ＧＭＰでの同様の増加の場合には血圧低下が５０％にもなり得るＶＬＡ－ｄＡＮＰに特に当てはまった。超長時間作用性ＣＮＰ誘導体（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）は、血圧の関連する低下を伴うことなく３日にわたり血漿中環状ＧＭＰを増加させた。
実施例３：ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、乳癌で表面抗原分類８陽性（ＣＤ８＋）Ｔ細胞を増加させており、このことは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰが、腫瘍死滅細胞の侵入及び／若しくは活性化、並びに／又は腫瘍に対する免疫チェックポイント阻害の抑制を促進したことを示す
表面抗原分類８（ＣＤ８）は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の共受容体として機能する膜貫通糖タンパク質である。ＴＣＲと同様に、ＣＤ８は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に結合するが、ＭＨＣクラスＩタンパク質に特異的である（例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれるＧａｏ Ｇ，Ｊａｋｏｂｓｅｎ Ｂ（２０００）．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ．２１（１２）：６３０－６を参照されたい）。ＣＤ８は、細胞傷害性Ｔ細胞のマーカーであり、腫瘍中に富んでいるという事実は、腫瘍細胞を攻撃し得るＴ細胞が多数存在していることを意味する。ＤＡＰＩ（４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール）は、細胞タイプに関係なく核を染色することから、ＣＤ８で染色されていない細胞がいくつか存在していたことは、ＣＤ８の特異性が確保されていることを示す。このことは、免疫チェックポイント阻害剤の潜在的増強だけでなく、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法等の他の免疫療法の効果も増強する可能性を示す。
この試験では、雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雌、ｎ＝４／群）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、マウス乳癌細胞系統Ｅ０７７１を移植した（２５０，０００個の細胞／マウス、左乳腺への皮下移植）。移植後４日目から、マウスを、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／ｋｇ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又は緩衝剤（コントロール群）のボーラス用量で処置した（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。２週間で、マウスを屠殺し、腫瘍組織を回収して凍結させた。腫瘍サンプルの凍結切片を、調製した。腫瘍サンプル中のＣＤ８及び細胞核を、免疫組織化学的に染色し、蛍光顕微鏡（ＢＺ－Ｘ７００，株式会社キーエンス，東京，日本）で検出した。図３Ａを参照すると、１つの視野当たりのＣＤ８陽性細胞の数を計数しており、エラーバーは、ＳＥＭである。図３Ｂは、ＣＤ８及びＤＡＰＩの蛍光画像を示す。全ての画像に関して、倍率は、低視野出力×４であった。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した（ｎ＝４）。＊Ｐ＜０．０５。
実施例４：ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、乳癌で活性化Ｔ細胞を増加させており、このことは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰが、腫瘍死滅細胞の侵入及び／若しくは活性化、並びに／又は腫瘍に対する免疫チェックポイント阻害の抑制を促進したことを示す
図４Ａは、コントロールマウス群、及びＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）で処置された群におけるＣＤ８細胞の量を示す棒グラフであり、図４Ｂは、コントロールマウス群、及びＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群における活性化ＣＤ８細胞の量を示す棒グラフであり、図４Ｃは、コントロールマウス群、及びＶＬＡ－ｄＣＮＰで処置された群における活性化ＮＫ細胞の量を示す棒グラフである。図４Ａ～４Ｂを参照すると、腫瘍免疫の中心である表面抗原分類３／表面抗原分類８陽性（ＣＤ３＋／ＣＤ８＋）の細胞傷害性Ｔ細胞が、増加傾向を示した。加えて、活性化細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ８＋／インターフェロンガンマ陽性（ＩＦＮＧ＋））が、有意に上昇した。このことは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰが、Ｔ細胞の数を増加させており、且つＴ細胞の活性化を誘発したことを示す。同様に、図４Ｃを参照すると、腫瘍免疫で重要な活性化ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）（ＮＫ１．１）の割合が上昇することが示された。ＮＫ細胞は、標的細胞の抗原が破壊／死滅のために認識されるためにＮＫ細胞の標的細胞がＭＨＣクラスＩを有している必要はない（Ｔ細胞は細胞を死滅させ得ず、なぜならば、ＭＨＣクラスＩは、抗原の認識及び死滅のために腫瘍細胞で必要とされるからである）。このため、ＶＬＡ－ｄＣＮＰがＮＫ細胞及びＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化を誘発したことは、その免疫増強効果にわずかな死角が存在することを意味すると考えられる。理論に拘束されることを望まないが、乳腺中のＣＤ８＋細胞は、約０．２％～２．８％（健康な動物の値は、２．０（０．２；ＳＥＭは１．６～２．６％の範囲）であった）であり、乳腺中のＣＤ８＋／ＩＦＮｇ＋は、約３～４％（健康な動物の値は、４．１（０．１４；ＳＥＭ）であった）であり、乳腺中の活性化ＮＫは、０．０１～０．０５％である。
雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雌、ｎ＝４／群）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、マウス乳癌細胞系統Ｅ０７７１（ＡＴＣＣ，Ｏｌｄ Ｔｏｗｎ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を移植した（２５０，０００個の細胞／マウス、左乳腺への皮下移植）。移植後４日目から、マウスを、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／Ｋｇ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又はコントロールとしての緩衝剤単独のボーラス用量で処置した（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。２週間で、マウスを屠殺し、腫瘍組織を回収して、ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎ（商標）Ｄｒｉ Ｔｉｓｓｕｅ ＆ Ｔｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ ＮＪ）を使用することにより、単一細胞を得た。細胞を、各抗体セットで染色し、フローサイトメトリー（Ｖｅｒｓｅ，ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）で分析しており；エラーバーは、ＳＥＭである。粒径（ＦＳＣ）及び構造不規則性（ＳＳＣ）に基づくフローサイトメトリーを使用して全ての粒子（約１０，０００個）を測定して、細胞である集団をゲーティングした後、この集団を１００に設定した。次いで、ＣＤ８（ＣＤ＋３及びＣＤ８＋）、活性化ＣＤ８（ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及びＩＦＮｇ＋）、並びに活性化ＮＫ（ＮＫ１．１＋（ＣＤ１６１）、及びパーフォリン＋）を測定し、総数を算出してパーセンテージに変換した。本実施例では、ＮＫ１．１は、ナチュラルキラー細胞のマーカーであり、パーフォリンは、ＮＫ細胞を活性化し且つ標的細胞を死滅させるタンパク質である。これら２種をまとめて考えると、細胞を、活性化ＮＫ細胞として計数し得る。パーフォリン単独では、ＮＫ細胞であるかどうかは不明である。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＭａｎｎ Ｗｈｉｔｎｅｙ検定により、統計解析を実施した；＊Ｐ＜０．０５；両側；＊＊Ｐ＝０．１２；両側。
実施例５：ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、乳癌／腫瘍で制御性Ｔ細胞を根絶し、免疫系が腫瘍増殖を抑制することを可能にした
癌／腫瘍には、腫瘍免疫を抑制する多くの制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ；表面抗原分類４陽性（ＣＤ４＋）／表面抗原分類２５陽性（ＣＤ２５＋）／フォークヘッドボックスＰ３（ＦＯＸＰ３＋））が存在していることが知られている。Ｔｒｅｇは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰにより抑制されることから、図５Ａ及び５Ｂを参照すると、ＶＬＡ－ｄＣＮＰはまた、Ｔ細胞枯渇（免疫が低下した状態）の指標であるＴ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有－３（ＴＩＭ－３）の部分的な抑制も示すことが分かった。このことは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰが、免疫チェックポイント阻害剤を増強するだけでなく、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）療法等の他の免疫療法の効果も増強し得ることを示しており、なぜならば、これらの細胞は、外因的に増殖して投与されており、枯渇しやすい可能性が高いからである。加えて、ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、単独で免疫療法として使用される可能性がある。理論に拘束されることを望まないが、乳腺でのＴｒｅｇは、約３％～４．３％であり、乳腺でのＴｉｍ３は、約２９０～３５０蛍光強度であると考えられる。
雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雌、ｎ＝４／群）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、マウス乳癌細胞系統Ｅ０７７１（ＡＴＣＣ，Ｏｌｄ Ｔｏｗｎ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を移植した（２５０，０００個の細胞／マウス、左乳腺への皮下移植）。移植後４日目から、マウスを、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／Ｋｇ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又はコントロールとしての緩衝剤単独で処置した（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。２週間で、マウスを屠殺し、腫瘍組織を回収して、ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎ（商標）Ｄｒｉ Ｔｉｓｓｕｅ ＆ Ｔｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ ＮＪ）を使用することにより、単一細胞を得た。細胞を、各抗体セットで染色し、フローサイトメトリー（Ｖｅｒｓｅ，ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）で分析しており；エラーバーは、ＳＥＭである。粒径（ＦＳＣ）及び構造不規則性（ＳＳＣ）に基づくフローサイトメトリーを使用して全ての粒子（約１０，０００個）を測定した後、細胞であるように見える集団をゲーティングした。この集団を１００に設定した。次いで、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）（ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、及びＦｏｘｐ３＋；これらは、Ｔｒｅｇマーカー分子である）を測定し、総数を算出してパーセンテージに変換した。健康なマウス乳腺では、制御性Ｔ細胞は約２．５％と推定される。Ｔｉｍ３に関しては、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋集団中のＴｉｍ３の値を、蛍光強度で示す。健康なマウス乳腺では、Ｔｉｍ３は、６００蛍光強度（ＴＢＤ）を超えると推定される。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＭａｎｎ Ｗｈｉｔｎｅｙ検定により、統計解析を実施した；＊Ｐ＜０．０５；両側；＊＊Ｐ＝０．２４；両側。
実施例６：表面抗原分類８（ＣＤ８）が枯渇しているか又は枯渇していない骨腫瘍体積の増加に対するＶＬＡ－ｄＣＮＰの効果は、ＣＤ８の中和によりＶＬＡ－ｄＣＮＰの抗腫瘍作用が喪失したことから、ＶＬＡ－ｄＣＮＰの抗腫瘍作用がＣＤ８活性化に直接関連することを示した（図６）
この試験のために、雄のＢａｌｂ／ｃマウス（６週齢）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウス（ｎ＝１１、１０、及び１０）に、マウス骨肉腫細胞Ｋ７Ｍ２（ＡＴＣＣ，Ｏｌｄ Ｔｏｗｎ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を移植した（５０，０００個の細胞／マウス、右側背中への皮下移植）。移植後４日目から、マウスを、イソフルラン麻酔下での皮下注射により１週間に５回、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／Ｋｇ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又は緩衝剤（コントロール群）のボーラス用量で処置した。抗ＣＤ８群のマウスに、１週間に２回、５ｍｇ／Ｋｇの抗ＣＤ８抗体（ＹＴＳ１６９．４ ＢｉｏＸ細胞；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）のボーラス用量を腹腔内投与した。腫瘍サイズを、カリパスで測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５対コントロール群（ｎ＝１０）及び対ＶＬＡ－ｄＣＮＰ＋抗ＣＤ８群（ｎ＝１０）；エラーバーは、ＳＥＭである。
図６を参照すると、ＣＤ８の中和によりＶＬＡ－ｄＣＮＰの抗腫瘍作用が喪失したことから、ＶＬＡ－ｄＣＮＰの抗腫瘍作用は、ＣＤ８活性化に直接関連している。
実施例７：ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、マウスの皮下移植モデルにおいて骨癌の増殖のサイズを抑制した
この試験では、雄のＢａｌｂ／ｃマウス（６週齢）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウス（ｎ＝１７／群）に、マウス骨肉腫細胞Ｋ７Ｍ２（ＡＴＣＣ，Ｏｌｄ Ｔｏｗｎ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を移植した（５０，０００個の細胞／マウス、右側背中への皮下移植）。移植後４日目から、マウスを、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／Ｋｇ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又はコントロールとしての緩衝剤単独のボーラス用量で処置した（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０１対コントロール群（ｎ＝１７）；エラーバーは、ＳＥＭである。
図７を参照すると、ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、マウスの皮下移植モデルにおいて骨癌の増殖のサイズを抑制した。
実施例８Ａ：骨腫瘍体積の増加に対するＶＬＡ－ｄＣＮＰの効果
図８Ａを参照すると、マウスの同所移植（大腿骨）モデルにおける表面抗原分類８（ＣＤ８）が枯渇しているか又は枯渇していない骨腫瘍体積の増加に対するＶＬＡ－ｄＣＮＰの効果は、ＣＤ８の中和によりＶＬＡ－ｄＣＮＰの抗腫瘍作用が喪失したことから、ＶＬＡ－ｄＣＮＰの抗腫瘍作用はＣＤ８活性化に直接関連することを示した。ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、細胞傷害性Ｔ細胞の免疫刺激分子であることが示されており、骨腫瘍体積の増加が減少している。
この試験では、雄のＣＨ３Ｈｅマウス（５週齢）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウス（ｎ＝８、８、６、６）に、マウス骨肉腫細胞ＬＭ８（ＲＣＢ，筑波，日本）を移植した（１０００，０００個の細胞／マウス、大腿骨への同所移植）。移植後４日目から、マウスを、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／ｋｇ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又は緩衝剤（コントロール群）のボーラス用量で処置した（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。抗ＣＤ８群／抗ＣＤ８＋ＶＬＡ－ｄＣＮＰ群のマウスに、移植前４日から１週間に２回、５ｍｇ／ｋｇ 抗ＣＤ８抗体（ＹＴＳ １６９．４ ＢｉｏＸ細胞；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）を腹腔内投与した。１５日目に、腫瘍サイズを、カリパスで測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊＜０．０１ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（ｎ＝８）対コントロール群（ｎ＝８）、抗ＣＤ８（ｎ＝６）、又は抗ＣＤ８＋ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（ｎ＝６）；エラーバーは、ＳＥＭである。
実施例８Ｂ：骨癌皮下移植マウスモデルにおける免疫の活性化に対するＶＬＡ－ｄＣＮＰの効果
形質転換増殖因子ベータ１（ＴＧＦ－ベータ１）は、免疫抑制に関与するサイトカインである。フォークヘッドボックスＰ３（Ｆｏｘｐ３）は、腫瘍免疫の抑制に関与する制御性Ｔ細胞のマーカーであり、Ｂｖ８（プロキネクチンタンパク質）は、免疫抑制に関与する骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）により分泌される因子である（Ｎｅｏｐｌａｓｉａ ２０１４，１６ ５０１－５１０）。図８Ｂ～８Ｄを参照すると、３種全てのマーカーの発現が低く、免疫を抑制する細胞がわずかであることを示唆していた。従って、免疫系が比較的活性化されたことから、ＶＬＡ－ｄＣＮＰの投与により腫瘍増殖が抑制されたと解釈し得る。この試験では、小腸を使用した。ＶＬＡ－ｄＣＮＰ投与群での多くのマウスは、腫瘍が完全に消失していた。ＶＬＡ－ｄＣＮＰ／ＰＤ－１の組合わせにより、腫瘍のほとんどが消失しており、そのため、測定可能なサンプルはなかった。従って、代わりに、免疫パラメータを、免疫の中心である腸管で評価した。理論に拘束されることを望まないが、腸内でのＴＧＦ－ベータ１は、約８．５～９．７％であり、腸内でのＦｏｘｐ３は、約７％～１３％であり、Ｂｖ８は、８％～４８％であると考えられる。
この試験では、雄のＢａｌｂ／ｃマウス（６週齢）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウス（ｎ＝１７／群）に、マウス骨肉腫細胞Ｋ７Ｍ２（ＡＴＣＣ，Ｏｌｄ Ｔｏｗｎ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を移植した（５０，０００個の細胞／マウス、右側背中への皮下移植）。移植後４日目から、マウスを、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／Ｋｇ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又はコントロールとしての緩衝剤単独のボーラス用量で処置した（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。４週目に、マウスを屠殺し、小腸を回収してＴｒｉ－ｒｅａｇｅｎｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｉｎｃ．Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）で細分化し、分析まで－８０℃で保存した。クロロホルム－フェノール法により、回収した肺組織から全ＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ Ｇｅｒｍａｎｙ）により、抽出したｍＲＮＡから相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を合成した。プレミックスキット（タカラバイオ株式会社，滋賀，日本）により、定量ＲＴ－ＰＣＲ分析を実施した。合成したｃＤＮＡにおける標的遺伝子の発現レベルを、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法により測定した。内部標準として、Ａｃｔｂ遺伝子を使用した。内部標準を使用して、下記を算出した：発現測定値（サンプル）／ｂ－アクチン発現測定値＝個体発現量。次いで、コントロール群を１００％に正規化し、個々の群を、コントロール群に対して算出した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０１対コントロール群（ｎ＝１７）；エラーバーは、ＳＥＭである。
実施例９：ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、乳癌腫瘍の血管構造を正常化させた
表面抗原分類３１（ＣＤ３１）は、血管内皮のマーカーであり、アルファ平滑筋アクチン（アルファ－ＳＭＡ）は、周皮細胞のマーカーである。正常な血管では、この血管の近くに周皮細胞が位置しており、そのため、周皮細胞の存在を使用して、正常な血管の存在を評価し得る。図９Ａを参照すると、ＶＬＡ－ｄＣＮＰ投与群では、各蛍光の重複領域が増加していたことから、十分な機能（健康）を有する血管が形成されたことが示されている。理論的には、正常で健康な血管構造は、周皮細胞被覆指数が１００％である。
雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雌、ｎ＝４／群）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、マウス乳癌細胞系統Ｅ０７７１（ＡＴＣＣ，Ｏｌｄ Ｔｏｗｎ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を移植した（２５０，０００個の細胞／マウス、左乳腺への皮下移植）。移植後４日目から、マウスを、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業））；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／Ｋｇ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又はコントロールとしての緩衝剤単独のボーラス用量で処置した（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。２週間で、マウスを屠殺し、腫瘍組織を回収して凍結させた。腫瘍サンプルの凍結切片を、調製した。腫瘍サンプル中のＣＤ３１及びアルファ－ＳＭＡを、各抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ ＭＡ）を使用することにより免疫組織化学的に染色し、蛍光顕微鏡（ＢＺ－Ｘ７００，株式会社キーエンス，東京，日本）で検出した。
図９Ａは、赤色のＣＤ３１及び緑色のアルファ－ＳＭＡの蛍光顕微鏡画像を示す。全ての画像に関して、倍率は、低視野出力×２０であった。図９Ｂは、周皮細胞被覆の指数％を示しており；エラーバーは、ＳＥＭである。理論的には、正常で健康な血管構造は、周皮細胞被覆指数が１００％である。周皮細胞被覆指数を、指標としてアルファ－ＳＭＡを使用して下記のように算出した：（ＣＤ３１＋アルファ－ＳＭＡ＋）／ＣＤ３１＋。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５対コントロール群（ｎ＝４）。
実施例１０：ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、腫瘍の血管構造を正常化させた
表面抗原分類３１（ＣＤ３１）は、血管の存在を示す血管内皮マーカーである。レクチンは、（腫瘍組織中に存在している多くの非機能性血管を除外するために）血液が血管中を実際に流れているかどうかを示す。換言すると、これら２種の染色を使用して、機能性血管の数を決定し得る。先の実施例で示したように、ＶＬＡ－ｄＣＮＰの投与により、機能性血管の数が増加した。本実施例により、これらの血管中を血液が通ることが確認される。
雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雌、ｎ＝３／群）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、マウス乳癌細胞系統Ｅ０７７１（ＡＴＣＣ，Ｏｌｄ Ｔｏｗｎ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を移植した（２５０，０００個の細胞／マウス、左乳腺への皮下移植）。移植後４日目から、マウスを、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／Ｋｇ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又はコントロールとしての緩衝剤単独のボーラス用量で処置した（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。２週間で、マウスに、５０ｕｇ／マウス 蛍光標識トマトレクチン（ＦＬ－１１７１，ＶＥＣＴＯＲ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を静脈内注射した。レクチン注射の５分後に、マウスを屠殺し、腫瘍組織を回収して凍結させた。腫瘍サンプル中のＣＤ３１を、免疫組織化学的に染色した。染色されたＣＤ３１及びレクチンを、蛍光顕微鏡（ＢＺ－Ｘ７００，株式会社キーエンス，東京，日本）で検出した。
図１０Ａは、赤色のＣＤ３１及び緑色のレクチンの蛍光顕微鏡画像を示す。全ての画像に関して、倍率は、低視野出力×２０であった。図１０Ｂは、１つの視野当たりのＣＤ３１及びレクチン構造の総数を示しており；エラーバーは、ＳＥＭである。正常な血管構造は、１つの視野当たり比較的多い構造数を示す。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５対コントロール群（ｎ＝３）。
実施例１１：ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、腫瘍中での低酸素状態を低減した
ピモニダゾールは、低酸素タンパク質のチオール基（－ＳＨ）に結合することから、ピモニダゾールをマーカーとして使用して、組織中での酸素状態を決定し得る。図１１Ａを参照すると、解剖前に投与したピモニダゾールを抗体で染色することにより、低酸素領域を可視化した。この蛍光は、ＶＬＡ－ｄＣＮＰの投与により減少したことから、低酸素状態が解消されていることが分かった。この結果に加えて、血管が形成されて酸素が十分に輸送されていることも理解される。低酸素領域は、腫瘍悪性度、抗癌剤耐性、及び腫瘍免疫の抑制に関与していることから、ＶＬＡ－ｄＣＮＰはこれらの効果を低減し得ると考えられる。
雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雌、ｎ＝４／群）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、マウス乳癌細胞系統Ｅ０７７１（ＡＴＣＣ，Ｏｌｄ Ｔｏｗｎ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を移植した（２５０，０００個の細胞／マウス、左乳腺への皮下移植）。移植後４日目から、マウスを、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／Ｋｇ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又はコントロールとしての緩衝剤単独のボーラス用量で処置した（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。２週間で、マウスに、１５０ｕｇ／マウス ピモニダゾール（Ｈｙｐｏｘｙｐｒｏｂｅ（商標）－１，Ｈｙｐｏｘｙｐｒｏｖｅ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を静脈内注射した。ピモニダゾール注射の３０分後に、マウスを屠殺し、腫瘍組織を回収して凍結させた。腫瘍サンプルの凍結切片を、調製した。腫瘍サンプル中のピモニダゾールを、製造業者のプロトコルに従って免疫組織化学的に染色した。染色されたピモニダゾールを、蛍光顕微鏡（ＢＺ－Ｘ７００，株式会社キーエンス，東京，日本）で検出した。
図１１Ａは、赤色のピモニダゾールの蛍光顕微鏡画像を示す。全ての画像に関して、倍率は、低視野出力×２０であった。図１１Ｂは、赤色のピモニダゾールの相対強度の割合を示しており；エラーバーは、ＳＥＭである。理論的には、健康な組織には低酸素状態がなく、従って、この相対強度は０％である。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５対コントロール群（ｎ＝４）。
実施例１２：ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウス細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）抗体との併用療法により、マウスの皮下移植モデルにおいて結腸癌の増殖が抑制された
図１２を参照すると、様々な治療薬への曝露後の様々な日数での結腸腫瘍サイズが示されている。ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウス細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）抗体との併用療法により、結腸癌の増殖が大きく抑制された。
この試験では、雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雄、ｎ＝９～１０／群）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、ＭＣ３８マウス結腸癌細胞（１×１０６個の細胞／マウス）（Ｄｏｎａｔｉｏｎ）を皮下移植し、８日目に開始して、下記のボーラス用量で処置した：超長時間作用性ＣＮＰ誘導体又はＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ（ＢｉｏＸ細胞，クローン９Ｈ１０；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）又はアイソタイプコントロールＡｂ（ＢｉｏＸ細胞，ＢＥ００８７；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）、ネイティブＣ型ナトリウム利尿ペプチド又はＣＮＰ（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ、ＣＮＰ誘導体又はｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド又はＢＮＰ（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ。緩衝剤コントロール及びアイソタイプコントロールＡｂ、並びに緩衝剤及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂを含めた。マウスを、１週間に１回ｉ．ｐ．により、２．５ｍｇ／ｋｇ 抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂで処置した。腫瘍サイズを、カリパスで測定した。結果から、腫瘍体積の減少に関して、個別処置（抗マウスＣＴＬＡ－４抗体なし、又は抗マウスＣＴＬＡ－４抗体単独）は、併用処置（抗マウスＣＴＬＡ－４抗体あり）と比べて有効性が低いことが分かった。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０１対コントロール群（ｎ＝１０）；†Ｐ＜０．０５対コントロール群（ｎ＝１０）。
実施例１３：ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウス（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）ＣＴＬＡ－４抗体との併用療法により、マウスの皮下移植モデルにおいて実施例１２のコントロール群を使用して腫瘍が発生した後の結腸癌の増殖が抑制された
図１３Ａを参照すると、様々な治療薬の関数としての結腸腫瘍サイズが、グラフとして示されている。様々な治療薬への曝露後の様々な日数での腫瘍サイズの対応する表が、図１３Ｂに示されている。ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウス（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）ＣＴＬＡ－４抗体との併用療法により、結腸癌の増殖が大きく抑制された。相乗効果を観察し得る。
この試験では、雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雄、ｎ＝５～７／群）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、ＭＣ３８マウス結腸癌細胞（１×１０６個の細胞／マウス）（Ｄｏｎａｔｉｏｎ）を皮下移植した。２２日目に、コントロール群を、３つの群に分けた。２２日目以降、マウスを、下記のボーラス用量で処置した：超長時間作用性ＣＮＰ誘導体又はＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ（ＢｉｏＸ細胞，クローン９Ｈ１０；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）、ネイティブＣ型ナトリウム利尿ペプチド又はＣＮＰ（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ、ＣＮＰ誘導体又はｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ。緩衝剤コントロール及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂを含めた。マウスを、１週間に２回ｉ．ｐ．により、２．５ｍｇ／ｋｇ 抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂで処置した。腫瘍サイズを、カリパスで測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０１（ｎ＝５～７）。
実施例１４：ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウスプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）抗体との併用療法により、マウスの皮下移植モデルにおいて結腸癌の増殖（体積）が抑制された
図１４を参照すると、様々な治療薬への曝露後の様々な日数での結腸腫瘍サイズが示されている。ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウスプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）抗体との併用療法により、結腸癌の増殖（体積）が大きく抑制された。相乗効果を観察し得る。
この試験では、雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雄、ｎ＝１０／群）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、ＭＣ３８マウス結腸癌細胞（１×１０６個の細胞／マウス）（Ｄｏｎａｔｉｏｎ）を皮下移植し、８日目に開始して、下記のボーラス用量で処置した：超長時間作用性ＣＮＰ誘導体又はＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＰＤ－１抗体（ＢｉｏＸ細胞，クローンＪ４３；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ， ＮＨ）又はアイソタイプコントロールＡｂ（ＢｉｏＸ細胞，ＢＥ００９１；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）、ネイティブＣ型ナトリウム利尿ペプチド又はＣＮＰ（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＰＤ－１ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ、ＣＮＰ誘導体又はｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＰＤ－１ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド又はＢＮＰ（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＰＤ－１ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ。緩衝剤コントロール及びアイソタイプコントロールＡｂ、並びに緩衝剤及び抗ＰＤ－１ Ａｂを含めた。マウスを、１週間に１回ｉ．ｐ．により、５ｍｇ／ｋｇ 抗ＰＤ－１ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂで処置した。腫瘍サイズを、カリパスで測定した。結果から、腫瘍体積の減少に関して、個別処置（抗マウスＰＤ－１抗体なし）は、併用処置（抗マウスＰＤ－１抗体あり）と比べて有効性が低いことが分かった。例示的な群として、ＶＬＡ－ｄＣＮＰ群対ＶＬＡ－ｄＣＮＰ＋ＰＤ－１群、及びｄＣＮＰ群対ｄＣＮＰ＋ＰＤ－１群を参照されたい。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５対ＰＤ－１コントロール群（ｎ＝１０）；†Ｐ＜０．０５対コントロール群（ｎ＝１０）。
実施例１５：ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）抗体との併用療法により、マウスの同所移植モデルにおいて皮膚癌の増殖が抑制された
図１５を参照すると、様々な治療薬への曝露後の様々な日数での皮膚腫瘍サイズが示されている。ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）抗体との併用療法により、皮膚癌の増殖が大きく抑制された。
この試験では、雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雄、ｎ＝８～１０／群）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、Ｂ１６黒色腫癌細胞（２５，０００個の細胞／マウス）（ＡＴＣＣ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＭＡ）を皮下移植し、７日目に開始して、下記のボーラス用量で処置した：超長時間作用性ＣＮＰ誘導体又はＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ（ＢｉｏＸ細胞，クローン９Ｈ１０；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）又はアイソタイプコントロールＡｂ（ＢｉｏＸ細胞，ＢＥ００８７；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）、ネイティブＣ型ナトリウム利尿ペプチド又はＣＮＰ（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ、ＣＮＰ誘導体又はｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド又はＢＮＰ（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ。緩衝剤コントロール及びアイソタイプコントロールＡｂ、並びに緩衝剤及び抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂを含めた。マウスを、１週間に１回ｉ．ｐ．により、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ－４ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂで処置した。腫瘍サイズを、カリパスで測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５対ＣＴＬＡ－４群（ｎ＝８又は１０）。
実施例１６：ＶＬＡ－ｄＣＮＰ又はｄＣＮＰと抗マウスプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）抗体との療法により、マウスの同所移植モデルにおいて乳癌の増殖が抑制された
図１６を参照すると、様々な治療薬への曝露後の様々な日数での乳房腫瘍サイズを示す。ＶＬＡ－ｄＣＮＰ又はｄＣＮＰと抗マウスプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）抗体との療法により、乳癌の増殖が大きく抑制された。相乗効果を観察し得る。
この試験では、雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雌、ｎ＝７又は１０／群）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスの左乳腺に、Ｅ０７７１乳癌細胞（２５０，０００個の細胞／マウス）（コスモバイオ株式会社，東京，日本）を移植した。４日目から開始して、マウスを、下記のボーラス用量で処置した：超長時間作用性ＣＮＰ誘導体又はＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＰＤ－１ Ａｂ（ＢｉｏＸ細胞；クローンＲＭＰ１－１４，Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ， ＮＨ）又はアイソタイプコントロールＡｂ（ＢｉｏＸ細胞，ＢＥ００８９；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）、ネイティブＣ型ナトリウム利尿ペプチド又はＣＮＰ（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＰＤ－１ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ、ＣＮＰ誘導体又はｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＰＤ－１ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド又はＢＮＰ（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＰＤ－１ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ、抗腫瘍壊死因子アルファ個体又はＴＮＦａ ａｂ（ＢｉｏＸ細胞，クローンＸＴ３．１１；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＰＤ－１ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ、並びにバルデナフィル（ＶＤＮ，Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）と呼ばれるｃＧＭＰ分解阻害剤又はＰＤＥ５阻害剤（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、及び抗ＰＤ－１ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂ。緩衝剤コントロール及びアイソタイプコントロールＡｂ、並びに緩衝剤及び抗ＰＤ－１ Ａｂを含めた。マウスを、１週間に２回ｉ．ｐ．により、５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－１ Ａｂ又はアイソタイプコントロールＡｂで処置した。腫瘍サイズを、カリパスで測定した。結果から、腫瘍体積の減少に関して、個別処置（抗マウスＰＤ－１抗体なし、又は抗マウスＰＤ－１抗体単独）は、併用処置（抗マウスＰＤ－１抗体あり）と比べて有効性が低いことが分かった。例示的な群として、ＶＬＡ－ｄＣＮＰ群対ＶＬＡ－ｄＣＮＰ＋ＰＤ－１群、及びｄＣＮＰ群対ｄＣＮＰ＋ＰＤ－１を参照されたい。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０１対ＰＤ－１コントロール群（ｎ＝７又は１０）；†Ｐ＜０．０５対コントロール群（ｎ＝７又は１０）。
実施例１７：ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウスＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体との併用療法により、マウスの同所移植モデルにおける乳癌の増殖（体積）が用量反応的に抑制された
図１７を参照すると、様々な治療薬への曝露後の様々な日数での乳房腫瘍サイズが示されている。ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウスＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）抗体との併用療法により、乳癌の増殖（体積）が大きく抑制された。相乗効果を観察し得た。
この試験では、雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雌、ｎ＝７～９）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスの左乳腺に、Ｅ０７７１乳癌細胞（２５０，０００個の細胞／マウス）（コスモバイオ株式会社，東京，日本）を移植した。４日目から、マウスを、下記のボーラス用量で処置した：緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の超長時間作用性ＣＮＰ誘導体又はＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（Ｌ：０．１ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．，Ｍ：０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．，Ｈ：１．０ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、又は緩衝剤（コントロール群）（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。抗ＰＤ１ Ａｂ処置群のマウスに、１週間に２回、５ｍｇ／ｋｇ 抗ＰＤ－１ Ａｂ（ＢｉｏＸ細胞，ＲＭＰ１－１４；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）のボーラス用量を腹腔内投与した。他の群を、アイソタイプコントロールＡｂ（ＢｉｏＸ細胞，ＢＥ００８９；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）のボーラス用量で処置した。腫瘍サイズを、カリパスで測定した。図１７Ｂを参照すると、１４日目での太字のフォントは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗ＰＤ－１との併用用量反応を示しており、１４日目のイタリック体のフォントは、ＶＬＡ－ｄＣＮＰとアイソタイプコントロールＡｂとの併用用量反応を示す。結果から、腫瘍体積の減少に関して、個別処置（抗マウスＰＤ－１抗体なし、又は抗マウスＰＤ－１抗体単独）は、併用処置（抗マウスＰＤ－１抗体あり）と比べて有効性が低いことが分かった。例示的な群として、ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（Ｌ、Ｍ、又はＨ）群対ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（Ｌ、Ｍ、又はＨ）＋ＰＤ－１群を参照されたい。
実施例１８：ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウスプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）抗体との併用療法により、マウスの同所移植モデルにおける乳癌の増殖（体積）が抑制された
適応免疫系は、外来性又は内在性の危険シグナルによる免疫系の活性化に関連する抗原に反応する。次に、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ４＋ヘルパー細胞のクローン性増殖が伝播される。阻害性チェックポイント分子ＰＤ－Ｌ１へのＰＤ－Ｌ１の結合により、免疫受容体チロシンベーススイッチモチーフ（Ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ－Ｂａｓｅｄ Ｓｗｉｔｃｈ Ｍｏｔｉｆ）（ＩＴＳＭ）を介して、ホスファターゼ（ＳＨＰ－１又はＳＨＰ－２）との相互作用に基づく阻害性シグナルが伝達される。これにより、リンパ節における抗原特異的Ｔ細胞の増殖が減少し、同時に、制御性Ｔ細胞（抗炎症性、抑制性Ｔ細胞）のアポトーシスが減少し、遺伝子Ｂｃｌ－２のより低い制御によりさらに媒介される。
ＰＤ－Ｌ１の上方制御により、癌が宿主の免疫系を回避することが可能になり得る。腎細胞癌の患者からの１９６例の腫瘍標本の分析により、ＰＤ－Ｌ１の高い腫瘍発現は、腫瘍の攻撃性の増加、及び死亡リスクの４．５倍の増加と関連していることが分かった。ＰＤ－Ｌ１阻害剤の臨床的に利用可能な例として、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、及びアベルマブが挙げられる。
図１８Ａを参照すると、様々な治療薬の関数としての乳房腫瘍サイズが、グラフとして示されている。様々な治療薬への曝露後の様々な日数での腫瘍サイズの対応する表を、図１８Ｂに示す。ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗マウスプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）抗体との併用療法により、乳癌の増殖（体積）が抑制された。相乗効果を観察し得た。
この試験では、雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雌、ｎ＝８～９）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスの左乳腺に、Ｅ０７７１マウス乳癌細胞（２５０，０００個の細胞／マウス）（コスモバイオ株式会社，東京，日本）を移植した。４日目から、マウスを、下記のボーラス用量で処置した：緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／ｋｇ 超長時間作用性ＣＮＰ誘導体又はＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又は緩衝剤（コントロール群）（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。抗ＰＤＬ１ Ａｂ処置群のマウスに、１週間に２回、５ｍｇ／ｋｇ 抗ＰＤＬ１ Ａｂ（ＢｉｏＸ細胞，１０Ｆ．９Ｇ２；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）のボーラス用量を腹腔内投与した。他の群を、アイソタイプコントロールＡｂ（ＢｉｏＸ細胞，ＢＥ００９０；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）のボーラス用量で処置した。腫瘍サイズを、カリパスで測定した。結果から、腫瘍体積の減少に関して、個別処置（抗マウスＰＤＬ－１抗体なし、又は抗マウスＰＤＬ－１抗体単独）は、併用処置（抗マウスＰＤ－１抗体あり）と比べて有効性が低いことが分かった。ＶＬＡ－ｄＣＮＰ群とＶＬＡ－ｄＣＮＰ＋ＰＤ－１との間の群を参照されたい。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０１対コントロール又はＰＤ－Ｌ１群（ｎ＝８～９）。
実施例１９：ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗ＰＤ－１抗体との併用療法により、マウスの同所移植モデルにおける乳癌の増殖（体積）が抑制された
同系マウスでは、ＥＭＴ－６細胞は、腫瘍を形成し、主に肺へと自然転移する。さらに最近では、ＥＭＴ－６は、三種陰性乳癌の免疫腫瘍学的研究の貴重な前臨床モデルとして登場している。ＥＭＴ－６腫瘍は、ＰＤ－Ｌ１を発現し、免疫療法に対して中程度の反応性を示す。個々のチェックポイント阻害剤（抗ＣＴＬＡ－４又は抗ＰＤ－Ｌ１）は、一般的に、腫瘍増殖に対する効果がわずかであるが、併用療法は、より大きな成功を示しており、これにより、ＥＭＴ６は、併用療法研究の有益なモデルとなっている。
図１９Ａを参照すると、様々な治療薬の関数としての乳房腫瘍サイズが、グラフとして示されている。様々な治療薬への曝露後の様々な日数での腫瘍サイズの対応する表が、図１９Ｂに示されている。ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗ＰＤ－１抗体との併用療法により、乳癌の増殖（体積）が大きく抑制された。相乗効果を観測し得た。
この試験では、雌のＢａｌｂ／ｃマウス（６週齢、雌、ｎ＝７～９）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、ＥＭＴ－６乳癌細胞（ＡＴＣＣ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を移植した（２００，０００個の細胞／マウス、左乳腺への皮下移植）。移植後４日目に、マウスを、下記のボーラス用量で処置した：緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．１ｍｇ／ｋｇ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又は緩衝剤（コントロール群）（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。抗ＰＤ１ Ａｂ処置群のマウスに、１週間に２回、５ｍｇ／ｋｇ 抗ＰＤ１ Ａｂ（ＢｉｏＸ細胞，ＲＭＰ１－１４；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）のボーラス用量を腹腔内投与した。他の群を、アイソタイプコントロールＡｂ（ＢｉｏＸ細胞，ＢＥ００８９；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）のボーラス用量で処置した。腫瘍サイズを、カリパスで測定した。結果から、腫瘍体積の減少に関して、個別処置（抗マウスＰＤ－１抗体なし、又は抗マウスＰＤ－１抗体単独）は、併用処置（抗マウスＰＤ－１抗体あり）と比べて有効性が低いことが分かった。ＶＬＡ－ｄＣＮＰ群とＶＬＡ－ｄＣＮＰ＋ＰＤ－１又はＰＤ－１群との間の群を参照されたい。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を使用することによる両側ＡＮＯＶＡ及びＴｕｋｅｙの事後検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５。
実施例２０：ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗ＰＤ－１抗体との併用療法により、マウスにおいて、乳癌の増殖が抑制され、且つ生存率が改善された
この試験では、雌のＢａｌｂ／ｃマウス（６週齢、雌、ｎ＝７～９）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、ＥＭＴ－６乳癌細胞（ＡＴＣＣ Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を移植した（２００，０００個の細胞／マウス、左乳腺への皮下移植）。移植後４日目に、マウスを、下記のボーラス用量で処置した：緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．１ｍｇ／ｋｇ ＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又は緩衝剤（コントロール群）（イソフルラン麻酔下での皮下注射、５回／週）。抗ＰＤ１ Ａｂ処置群のマウスに、１週間に２回、５ｍｇ／ｋｇ 抗ＰＤ１ Ａｂ（ＢｉｏＸ細胞，ＲＭＰ１－１４；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）のボーラス用量を腹腔内投与した。他の群を、アイソタイプコントロールＡｂ（ＢｉｏＸ細胞，ＢＥ００８９；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）のボーラス用量で処置した。結果から、生存率に関して、個別処置（抗マウスＰＤ－１抗体なし、又は抗マウスＰＤ－１抗体単独）は、併用処置（抗マウスＰＤ－１抗体あり）と比べて有効性が低いことが分かった。ＶＬＡ－ｄＣＮＰ対ＶＬＡ－ｄＣＮＰ＋抗ＰＤ１ ａｂ Ｐ＜０．０５。
図２０を参照すると、ＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗ＰＤ－１抗体との併用療法により、マウスにおいて、乳癌の増殖が大きく抑制され、且つ生存率が改善された。相乗効果を観察し得た。
実施例２１：超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト（ＶＬＡ－ｄＣＮＰ）単独での処置により、脛骨に骨肉腫があるマウスの、この疾患の終末期での生存率が改善される
図２１は、ＶＬＡ－ｄＣＮＰ処置により、脛骨に骨肉腫があるマウスの生存率が改善されたことを示すＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ曲線である。
この試験では、雄のＣＨ３ＨｅＮマウス（４週齢、雄、ｎ＝８）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。０日目に、マウスの脛骨に、ＬＭ８マウス骨肉腫細胞（寄贈、日本）（１，０００，０００個の細胞／マウス）を移植した（同所移植）。１５日目から、この疾患の「終末期」と考えられるものが始まり、マウスを、下記のボーラス用量を皮下投与することにより処置した：緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の超長時間作用性ＣＮＰ誘導体若しくはＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又は緩衝剤単独（コントロール群）。１週間に５回、イソフルラン麻酔下で皮下注射を実施した。生存率又は死亡数を、モニタリングして記録した。
図２１は、２７日にわたるＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ曲線であり、ＶＬＡ－ｄＣＮＰ単独での処置により、脛骨に骨肉腫があるマウスの生存率が改善されたことを示す。ＬＭ８細胞の移植は、０日目であった。終末期を、１５日目以降（黒色の矢印）と考えた。
実施例２２：長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト（ｄＣＮＰ）は、脾細胞中でのＬＭ８誘発性ＩＦＮｇ産生を増強する
インターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）は、細胞性免疫の活性化、及びその後の抗腫瘍反応の刺激において、重要な役割を果たす。ＩＦＮ－ｇは、腫瘍組織中での血管新生を阻害し得、制御性Ｔ細胞（免疫反応のサプレッサー）のアポトーシスを誘発し得、及び／又はＭ１炎症促進性マクロファージの活性を刺激して腫瘍進行を抑制し得る。
この試験では、マウス骨肉腫癌細胞系統ＬＭ８（九州からの寄贈）を、１０％ ウシ胎児血清（ＦＣＳ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）が補充されているアルファＭＥＭ（富士フイルム株式会社、東京、日本）中で維持し、９６ウェルプレートに接種し（同所性ＬＭ８担持マウスに由来する１，０００，０００個の脾細胞が補充されたＲＰＭＩ １６４０（富士フイルム株式会社、東京、日本）中の１０，０００個の細胞／ウェル）、細胞を、９６時間にわたり、様々な濃度の長時間作用性ＣＮＰ誘導体又はｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０、０．５（１．６ｎｇ／ｍＬ）、及び５ｎＭ（１６ｎｇ／ｍＬ））で処置した。本試験での陰性コントロールは、脾細胞のみを有していてｄＣＮＰを有しておらず、コントロールは、ＬＭ８及び脾細胞の両方を有しているが、ベースラインを決定するためのｄＣＮＰを有していない。上清を回収し、ＩＦＮｇレベルを、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）で測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０１対コントロール（ｎ＝３又は４）。
図２２は、ｄＣＮＰが、培養されたＬＭ８マウス骨肉腫癌細胞系統に曝露された脾細胞中でのインターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）産生を用量依存的に増加させたことを示す。
実施例２３：長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト（ｄＣＮＰ）抗腫瘍効果は、マウス前立腺癌モデルにおいてＣＤ８活性により媒介されており、非ＣＤ８媒介性細胞傷害性化学療法剤と同程度に有効である
図２３Ａは、６日目に開始される様々な試験品による１４日間の処置後の２０日目での腫瘍サイズのグラフを示す。図２３Ｂは、２０日目での腫瘍根絶と共に処置期間中の腫瘍増殖の進行を示す。エラーバーは、ＳＥＭであり、個々のドットは、群中の個々の動物を表す。図２３Ａ及び２３Ｂは、０．３及び１．０ｍｇ／ｋｇでのｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）は、マウスでの前立腺癌の増殖の抑制で有意に有効であり、２０日目で評価した場合には、細胞傷害性化学療法剤（ドセタキセル）と同程度に有効であったことを示す。しかしながら、抗ＣＤ８抗体（Ａｂ）の非存在下では、ドセタキセルの腫瘍増殖抑制効果は残存していたが、ｄＣＮＰの効果は中和されており、このことは、ｄＣＮＰの抗腫瘍活性の機序が細胞傷害性ＣＤ８ Ｔ細胞により主に媒介されたことを示す。ＣＤ８は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の共受容体として作用する。ＴＣＲと一緒に、ＣＤ８共受容体は、腫瘍を排除するためのＴ細胞シグナル伝達及び細胞傷害性Ｔ細胞抗原相互作用の支援において役割を果たす。ＣＤ８により媒介される場合には、抗ＣＤ８は、ｄＣＮＰの場合に見られるように、この効果を中和するが、ドセタキセルの場合には中和しないと予想される。そのため、図２３Ａ及び２３Ｂは、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト（ｄＣＮＰ）の抗腫瘍効果は、マウス前立腺癌モデルではＣＤ８活性により媒介されており、非免疫媒介性細胞傷害性化学療法剤として有効であったことを示す。
この試験では、雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雄、ｎ＝１０）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、ＴＲＡＭＰＣ－１マウス前立腺癌細胞（１，０００，０００個の細胞／マウス）（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を皮下移植した。６日目（腫瘍増殖の初期）から、マウスを、下記のボーラス用量で処置した：Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中にメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業）を含む緩衝剤中の、抗ＣＤ８抗体（ａ－ＣＤ８；５ｍｇ／Ｋｇ ｉ．ｐ．；ＢｉｏＸ細胞，Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）を伴うか又は伴わないｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．又は１．０ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、基準コントロールとしての、抗ＣＤ８ Ａｂ（５ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）を伴うか又は伴わない生理食塩水中のドセタキセル（１ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）、及び又はコントロールとしてのｉ．ｐ．によるリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）単独。マウスを、合計１４日間（１日１回で５日間、２日間の休息、１日１回の処置で５日間、及び２日間の休息）処置した。－２日目、１日目、４日目、７日目、１０日目、及び１３日目に、抗ＣＤ８ Ａｂ（ａ－ＣＤ８）を投与した。腫瘍サイズを、カリパスで測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０００１対コントロール又はａ－ＣＤ８群（ｎ＝１０）。ＣＤ８は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の共受容体として作用する。ＴＣＲと一緒に、ＣＤ８共受容体は、腫瘍を排除するためのＴ細胞シグナル伝達及び細胞傷害性Ｔ細胞抗原相互作用の支援において役割を果たす。ＣＤ８により媒介される場合には、抗ＣＤ８は、この効果を中和すると予想される。
実施例２４：かなり遅い段階で投与された長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト（ｄＣＮＰ）は、はるかに大きいか又は重度の前立腺癌に対して腫瘍除去効果を有しており、細胞傷害性化学療法剤（ドセタキセル）と同程度に有効であり、さらに、ドセタキセルとは異なるＣＤ８細胞により媒介される作用機序を有していた
図２４Ａは、（投与がかなり遅い段階で開始された（腫瘍サイズは、約７０ｍｍ３である；１９日目）場合であっても）ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）の前立腺腫瘍除去作用のグラフを示している。同様に示されているのは、ｄＣＮＰが、腫瘍の除去において細胞傷害性化学療法剤と同程度に有効であったことである。図２４Ｂは、３０日目での腫瘍根絶（下のパネル）と共に処置期間中の前立腺癌の増殖を示す表である。エラーバーは、ＳＥＭであり、個々のドットは、群中の個々の動物を表す。ｄＣＮＰの作用機序は、抗ＣＤ８抗体により中和され得、一方、毒性化学療法剤の抗腫瘍効果は、癌細胞に対する化学療法剤の直接的な細胞傷害効果と一致して抗ＣＤ８により中和され得なかったことから、細胞傷害性ＣＤ８ Ｔ細胞により媒介されていた。加えて、ｄＣＮＰは、細胞傷害性化学療法剤（ドセタキセル）と比べて致死率が低かった。ＣＤ８は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の共受容体として作用する。ＴＣＲと一緒に、ＣＤ８共受容体は、腫瘍を排除するためのＴ細胞シグナル伝達及び細胞傷害性Ｔ細胞抗原相互作用の支援において役割を果たす。ＣＤ８により媒介される場合には、抗ＣＤ８抗体は、この効果を中和すると予想される。
この試験では、雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雄、ｎ＝１０）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、ＴＲＡＭＰＣ－１マウス前立腺癌細胞（１，０００，０００個の細胞／マウス）（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を皮下移植した。１９日目（平均腫瘍サイズは、７０ｍｍ３であった）から、マウスを、下記のボーラス用量で処置した：緩衝剤［Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業）］中の長時間作用性ＣＮＰ誘導体若しくはｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．若しくは１．０ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、生理食塩水中のドセタキセル（ＤＴＸ １ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）（全て、抗ＣＤ８（５ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．；Ｂｉｏｘ細胞；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）を伴うか又は伴わない）、又はｉ．ｐ．によるリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）単独。全てのドセタキセル群を、作用機序のコンパレータ化学療法剤として使用した。マウスを、合計２週間（１日１回で５日間、２日間の休息、１日１回の処置で５日間、及び２日間の休息）処置した。１９日目に開始して、抗ＣＤ８ Ａｂを３日毎に投与した。腫瘍サイズを、カリパスで測定した。
実施例２５：健康な正常マウスであっても、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト（ｄＣＮＰ）は、投与後での、血液中のＴ細胞（特に、細胞傷害性（ＣＤ８）Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）の増加により見られるように、並びに脾臓中におけるＣＤ８遺伝子、ＣＤ４遺伝子、ＩＣＯＳ遺伝子、及びＣＤ８６遺伝子の発現により見られるように、免疫系を活性化し得た
図２５Ａ～２５Ｃは、正常な健康マウスであっても、ｄＣＮＰが、血液中のＴ細胞（ＣＤ４）、細胞傷害性（ＣＤ８）Ｔ細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増加により見られるように、免疫系を活性化し得たことを示す。図２５Ｄ～２５Ｇは、脾臓中において、免疫系の活性化を示す、有意に上昇したＣＤ４遺伝子、Ｃｄ８遺伝子、ＩＣＯＳ遺伝子、及びＣＤ８６遺伝子の発現の対応する増加が存在していたことを示す。ＩＣＯＳは、誘発性Ｔ細胞共刺激分子であり、免疫チェックポイントタンパク質であり、且つこの発現は免疫活性化を示す。ＣＤ８６は、ＣＤ８０と一緒に、Ｔ細胞の活性化及び生存に必要な共刺激シグナルを生じ、この発現により、免疫活性化が確認される。
この試験では、雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、ｎ＝３）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスを、下記のボーラス用量で処置した：緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０、０．１、０．３、及び１．０ｍｇ／ｋｇ ＣＮＰ誘導体若しくはｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）、又は緩衝剤単独（コントロール群）。投与を、１、２、３、４、及び５日目に、イソフルラン麻酔下でのボーラス皮下注射により行なう。５日目に、イソフルラン蒸気下で採血し、ＥＤＴＡ添加により血漿を得、ｐｈａｒｍａ ｌｙｓｅ（ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）により赤血球を除去した。細胞を、ＦＡＣＳ（ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ ｌａｋｅｓ，ＮＪ）により分析した。５日目に、イソフルラン蒸気下で脾臓を回収し、さらなる分析のためにＴｒｉ試薬（コスモバイオ株式会社，東京，日本）中に入れた。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５対コントロール、＊＊Ｐ＜０．０１対コントロール（ｎ＝５）。
実施例２６：乳癌であるマウスにおける抗腫瘍免疫を促進する免疫系のＴｈ１細胞の増加及びＴｒｅｇ細胞の減少におけるＶＬＡ－ｄＣＮＰと抗ＰＤ１抗体との組合わせの驚くべき相乗効果。加えて、ＶＬＡ－ｄＣＮＰは、同じことを行なう上で、抗ＰＤ１抗体と比べて有意に有効であった
図２６Ａは、様々な免疫細胞、免疫活性化に関するこれらの免疫細胞の構造的相互作用、並びにＣＤ８及びＮＫ細胞の抗腫瘍活性又は癌細胞を除去するための攻撃を誘発するインターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）サイトカインの産生の図を示す。灰色の矢印は、細胞数の増加（上向き）又は減少（下向き）を示しており、暗色の矢印は、ＩＦＮｇの存在下で成長する細胞を示す。制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）細胞の免疫反応（横倒しのＴで表される）を抑制するように作用するＴ細胞の特殊な亜集団であり、それにより、恒常性及び自己寛容が維持される。Ｔｒｅｇは、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン産生を阻害して、Ｔｈ１からＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）への発達を阻害することにより免疫系を抑制し、正常な状態下では、自己免疫を予防する。加えて、Ｔｈ１細胞は、免疫系の他の細胞（特に、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えばマクロファージ、樹状細胞、及びＢ細胞）にヘルパー機能を提供し、これらの活性化及び成熟に重要である。
図２６Ｂ～２６Ｄは、Ｔｒｅｇ細胞の抑制、ＶＬＡ－ｄＣＮＰ単独が抗ＰＤ１単独と比べて有意に有効であった活性化Ｔｈ１細胞の増加（右上のグラフ）、及びＥ０７７１マウス乳癌モデルにおいてＶＬＡ－ｄＣＮＰ単独が抗ＰＤ１単独と比べて有意に有効であったＴｈ１／Ｔｒｅｇ細胞の比を示す。驚くべきことに、ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）及び抗ＰＤ１抗体の両方を組み合わせた場合には、この組合わせは、ｄＣＮＰ単独及び抗ＰＤ１単独の投与の効果の合計と比べてはるかに大きい相乗効果を有していた。これらのグラフは、ｄＣＮＰ及び抗ＰＤ１抗体が、Ｔｈ１細胞、ＣＤ８＋細胞、及びＮＫ細胞を増加させてＴｒｅｇ細胞を減少させることにより、驚くほど相乗的に抗腫瘍免疫を増強することを示した。
この試験では、雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雌、ｎ＝６）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスの左乳腺に、Ｅ０７７１マウス乳癌細胞（２５０，０００個の細胞／マウス）（コスモバイオ株式会社，東京，日本）を移植した。８日目から、マウスを、５日わたり毎日ＳＣにより、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／ｋｇ 超長時間作用性ＣＮＰ誘導体若しくはＶＬＡ－ｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）のボーラス用量で処置し、及び／又は２回ＩＰにより（８日目及び１１日目）、５ｍｇ／Ｋｇ 抗ＰＤ１ Ａｂのボーラス用量で処置した。１２日目に、腫瘍を回収し、Ｔｈ１細胞及びＴｒｅｇ細胞に関してＦＡＣＳにより分析し、比を算出した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５対コントロール、又は＊＊Ｐ＜０．０１対コントロール（ｎ＝６）。
実施例２７：Ｔｏｌｌ様受容体－９アゴニストであるＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）等のアジュバントは、乳癌に対するｄＣＮＰ腫瘍体積抑制活性を増強した
ＣｐＧ ＯＤＮアジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体９に結合して活性化し、後の適応免疫の発達を支持する自然免疫反応を開始させる。ＴＬＲ９アゴニストは、抗原提示を改善し、且つワクチン特異的な細胞性反応及び体液性反応の誘発を改善する。ＣｐＧ ＯＤＮを用いる臨床試験が行なわれており、アレルギー、感染性疾患、特に癌の予防又は処置での有用性が評価されている（Ｉｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒｙ ｉｎ Ｍｏｄｅｒｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ，２０１７ １６３－１９８；Ｃｈａｐｔｅｒ ９；Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ ｕｒｏｌｏｇｙ ２０１３ １０ ５３７－５４５；Ｎｐｊ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ２０２０ ｖｏｌ ５ Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ５０）。
図２７は、マウス乳癌モデルにおける、ｄＣＮＰをアジュバントＣｐＧ ＯＤＮ－ＴＬＲ９アゴニストと組み合わせた場合の有意な腫瘍抑制を示す。マウスモデルにおいて、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、Ｔｏｌｌ様受容体－９アゴニスト等のアジュバントは、乳癌に対するｄＣＮＰ腫瘍体積抑制活性を増強した。
この試験では、雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雌、ｎ＝６）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスの左乳腺に、Ｅ０７７１マウス乳癌細胞（２５０，０００個の細胞／マウス）（コスモバイオ株式会社，東京，日本）を移植した。６日目から、マウスを、５日わたり毎日ＳＣにより、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中のｄＣＮＰ誘導体若しくはｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）のボーラス用量で処置したか、又は２回ＩＰにより（６日目及び９日目）、ｄＣＮＰ（０．３ｍｇ／ｋｇ Ｓ．Ｃ．）及び２ｍｇ／Ｋｇ ＣｐＧ ＯＤＮ（ＯＤＮ １８２６；Ｔｙｐｅ Ｂ：Ａｄｉｐｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）のボーラス用量で処置した。１４日目に、動物を屠殺した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０１対コントロール群（ｎ＝５）。ＣｐＧ ＯＤＮは、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む短い合成一本鎖ＤＮＡ分子である。
実施例２８：マウス乳癌モデルにおいて、ｄＣＮＰ、抗ＰＤ１抗体、及び両方の組合わせは、腫瘍体積及びＴｒｅｇ細胞を減少させ得且つＣＤ６９＋細胞を増加させ得る有効な免疫活性剤である
ＣＤ６９は、細胞表面の糖タンパク質であり、様々な免疫細胞の活性化マーカーである。Ｔ細胞の一般的な活性化と一致して、活性化された腫瘍浸潤Ｂ細胞（ＴＩＬ－Ｂ）は、ＣＤ６９＋であり、且つエフェクターＴ細胞（ＩＦＮｇ＋ＣＤ４＋ＴＩＬ）反応増加と関連している（Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ． ２０１７ Ｏｃｔ ５（１０）８９８－９０７）。加えて、ＣＤ６９＋Ｂ細胞は、ＮＳＣＬＣ患者の長期生存と相関する三次リンパ様構造（ＴＬＳ）と関連していた（Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２０１７ Ｏｃｔ ５（１０）８９８－９０７）。Ｔリンパ球及びＮＫ細胞の活性化は、インビボ及びインビトロの両方で、ＣＤ６９の発現を誘発する（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２０１８ ４８ ４ ７０２－７１５）。
図２８Ａ～２８Ｄは、マウス乳癌モデルにおいて、ｄＣＮＰ、抗ＰＤ１抗体、及び両方の組合わせが、腫瘍体積及びＴｒｅｇ細胞を減少させ得且つＣＤ６９＋細胞を増加させ得る有効な免疫活性剤であったことを示す。Ｔｒｅｇの抑制及び同時のＣＤ６９＋細胞集団の増加は、腫瘍体積の抑制を引き起こす免疫活性化と一致していた。
この試験では、雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雌、ｎ＝６）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスの左乳腺に、Ｅ０７７１マウス乳癌細胞（２５０，０００個の細胞／マウス）（コスモバイオ株式会社，東京，日本）を移植した。８日目から、マウスを、５日わたり毎日ＳＣにより、緩衝剤（Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業））中の０．３ｍｇ／ｋｇ ＣＮＰ誘導体若しくはｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）のボーラス用量で処置し、並びに／又は２回ＩＰにより（８日目及び１１日目）、５ｍｇ／Ｋｇ 抗ＰＤ－１抗体のボーラス用量で処置した。１２日目に、動物を屠殺した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０１対コントロール群（ｎ＝６）。
実施例２９：ｄＣＮＰは、はるかに大きい又はより進行したマウス前立腺癌で評価した場合に、腫瘍内の繊維症関連遺伝子及び血管破壊遺伝子の発現を抑制したが、細胞傷害性化学療法剤（ドセタキセル）は抑制しなかった
癌関連線維芽細胞による細胞外マトリックスの過剰産生、及び繊維症は、癌増殖の増加を示す。繊維症は、細胞傷害性Ｔ細胞の排除及び阻害、並びに骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の活性化を通じて、腫瘍微小環境下で免疫抑制を引き起こす可能性がある（Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，Ａｕｇ ２０１９）。加えて、繊維症はまた、固体ストレス及び灌流の抑制を通じて、化学療法抵抗性も誘発した（ＰＮＡＳ Ｆｅｂ ２０１９ １１６（６）２２１０－２２１９）。アンジオポエチン－２（Ａｎｇ２）は、Ａｎｇ１／Ｔｉｅ２軸への拮抗を通じて、腫瘍血管の安定化を阻害する。Ａｎｇ２発現の阻害により、血管系が安定化し、腫瘍へのアクセスが増強され、且つ薬物送達が改善される（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２０１６ Ｖｏｌ ３０ ９５３－９６７）。
図２９Ａ～２９Ｃは、ドセタキセル又は緩衝剤コントロールではなくｄＣＮＰが、マウス癌モデルの前立腺腫瘍内でのアルファ－平滑筋アクチン（α－ＳＭＡ；左上のグラフ）、ＴＧＦβ（右上のグラフ）、及びＡｎｇ２遺伝子発現を阻害したことを示す。これらの遺伝子の発現の減少は、線維化プロセスの低下を示しており、そのような低下により、免疫系の抗腫瘍活性が改善される。α－ＳＭＡは、組織線維化のマーカーであり、ＴＧＦβは、線維化の公知のメディエータであり、線維性疾患では上方制御され、且つ活性化される（Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ，２０１１ ２９（５）１９６－２０２）。Ａｎｇ２は、Ａｎｇ１／Ｔｉｅ２軸への拮抗を通じて腫瘍血管の安定化を阻害する。Ａｎｇ２発現の阻害により、血管系が安定化し、腫瘍へのアクセスが増強され、且つ薬物送達が改善される（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２０１６ Ｖｏｌ ３０，９５３－９６７）。図２９Ｃに示すように、ｄＣＮＰは、腫瘍血管系を安定化させ、免疫系にとってより良好な抗腫瘍の腫瘍微小環境を作り出した。
この試験では、雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６週齢、雄、ｎ＝１０）を、九動株式会社（佐賀，日本）から購入し、水及び標準マウス飼料（ＭＦ飼料，オリエンタル酵母工業，東京，日本）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。マウスに、ＴＲＡＭＰＣ－１マウス前立腺癌細胞（１，０００，０００個の細胞／マウス）（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を皮下移植した。１９日目（平均腫瘍サイズは、７０ｍｍ３であった）から、マウスを、下記のボーラス用量で処置した：緩衝剤［Ｈ２Ｏ（大塚製薬株式会社，徳島，日本）中のメチオニン １００ｍＭ（東京化成工業，東京，日本）；スクロース １００ｍＭ（東京化成工業）；ヒスチジン ５０ｍＭ（東京化成工業）］中の長時間作用性ＣＮＰ誘導体若しくはｄＣＮＰ（実施例１で説明されている）（０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．若しくは１．０ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）、生理食塩水中のドセタキセル（ＤＴＸ １ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）（全て、抗ＣＤ８（５ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．；ＢｉｏＸ細胞；Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）を伴うか又は伴わない）、又はｉ．ｐ．によるリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）単独。全てのドセタキセル群を、作用機序のコンパレータ化学療法剤として使用した。マウスを、２週間（１日１回で５日間、２日間の休息、１日１回の処置で５日間、及び２日間の休息）処置した。１９日目に開始して、抗ＣＤ８ Ａｂを３日毎に投与した。３０日目に、腫瘍を回収し、ＲＮＡを抽出し、次いで定量ＲＴ－ＰＣＲを実施し；エラーバーは、ＳＥＭである。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用することによるＳｔｕｄｅｎｔ ｔ検定により、統計解析を実施した。＊Ｐ＜０．０５又は＊＊Ｐ＜０．０１対コントロール群（ｎ＝３～６）。
実施例３０：ボーラス投与からの長時間作用性ＣＮＰ誘導体ｓ１（ｄＣＮＰ－ｓ１）及びＣＮＰ誘導体ｓ２（ｄＣＮＰ－ｓ２）の薬物動態プロファイルは、経時的に、血液中での継続的な存在を示した
図３０を参照すると、示されているのは、２．０ｍｇ／ＫｇのＣＮＰ誘導体ｓ１（ｄＣＮＰ－ｓ１）及びＣＮＰ誘導体ｓ２（ｄＣＮＰ－ｓ２）の皮下ボーラス投与後のＣＤ－１マウスにおける血漿中ＣＮＰ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝５］のグラフである。比較のために、挿入図は、ネイティブＣＮＰを投与した場合のＣＮＰの低い血漿中レベル（菱形）を示す。エラーバーは、ｎ＝５の血漿サンプルの平均の標準誤差を表す。投与前のベースラインＣＮＰレベルは、０．３９１（０．０２）ｎｇ／ｍＬ［平均（ＳＥＭ）；ｎ＝１０］であった。長時間作用性ｄＣＮＰ－ｓ１及びｄＣＮＰ－ｓ２は、同様の用量重量／Ｋｇ用量で投与した場合に、ネイティブＣＮＰと比べて１０倍高いＣＮＰの血液中レベルを継続的に（少なくとも８時間）提供する。
この薬物動態試験のために、この試験用の全ての動物（マウス）を、水及び標準マウス飼料（Ｌａｂ Ｐｉｃｏ Ｒｏｄｅｎｔ ＃５０５３；Ａｎｉｍａｌ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ，Ｗｏｏｄｂｕｒｎ，ＯＲ）への自由なアクセスでの１２時間明／１２時間暗サイクル下にて維持した。雄のＣＤ－１マウス（６～８週齢；Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）を、肩甲骨間での皮下ボーラス投与により、２．０ｍｇ／ＫｇのＣＮＰ誘導体ｓ１（ｄＣＮＰ－ｓ１；ＰｈａｒｍａＩＮ Ｃｏｒｐ，Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ）及びＣＮＰ誘導体ｓ２（ｄＣＮＰ－ｓ２；ＰｈａｒｍａＩＮ Ｃｏｒｐ，Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ）で処置した。全ての試験品を、１００ｍＭ スクロース、１００ｍＭ メチオニン、５０ｍＭ ヒスチジン、ｐＨ７．４に配合したか、又は溶解させた。眼窩後出血により、様々な時間（０時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、及び２４時間）での血液サンプリングを実施し、２つの異なる時点で１匹の動物当たり２回出血させた。血液サンプルをＫ２ＥＤＴＡチューブ中で処理して、血漿を得た。血漿を、Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからの市販のＣＮＰ ＥＬＩＳＡキット（カタログ＃ ＥＫＥ－０１２－０３）で分析した。ＣＮＰは、ネイティブヒトＣＮＰ（ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号１０］であり、ｄＣＮＰ－ｓ１及びｄＣＮＰ－ｓ２は、下記の配列：ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２１］及びＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２０］を有するヒトＣＮＰの誘導体であり、それぞれは、２つのシステイン残基の間にジスルフィド結合を有しており、ホモＱ：ホモグルタミン残基；Ａｅｅａ：２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基（式中、アミノ及びカルボン酸基は、ＣＮＰ誘導体を得るためのアミド結合の形成で使用される）；ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－は、オクタデカジオン酸に由来しており；γＥ：ガンマグルタミン酸残基。
限定ではなく例として、実施形態は、下記の列挙された段落に従って開示されている：
Ａ１．任意の組織又は臓器中に異常な血管系を有する対象を処置する方法であって、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、対象に投与することを含み、
組成物の治療上有効な量ボーラス用量を投与することにより、血管系の正常化、又は周皮細胞被覆指数の少なくとも１０％の増加がもたらされ、
組成物は、血圧を、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて（例えば、１５％を超えて、１０％を超えて、又は５％を超えて）低下させず、ベースライン血圧測定値は、組成物の投与前の平均血圧であり、
且つ
組成物は、投与後１時間～１２時間での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超まで上昇させ、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベルであるか、又は健康な対象の平均血漿中環状ＧＭＰレベル（好ましくは、対象への組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）である、
方法。
Ａ２．細胞傷害性Ｔ細胞の数、及び／又は活性化ＮＫ細胞の数を増加させる方法であって、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することを含み、
組成物の治療上有効なボーラス用量により、組成物の投与前のレベル又は健康な対象での前ベルを少なくとも１５％超える細胞傷害性Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の数の増加がもたらされ、
組成物の治療上有効なボーラス用量を投与することにより、血圧は、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて低下せず、ベースライン血圧測定値は、組成物の投与前の平均血圧であり、
且つ
組成物は、投与後１時間～１２時間での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超まで上昇させ、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベルであるか、又は健康な対象の平均血漿中環状ＧＭＰレベル（好ましくは、対象への組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）である、
方法。
Ａ３．対象は、状態（ｉ）～（ｖｉｉｉ）：
（ｉ）少数の細胞傷害性Ｔ細胞、
（ｉｉ）少数の活性化ＮＫ細胞、
（ｉｉｉ）多数のＴｒｅｇ細胞、
（ｉｖ）ＴＧＦβの高レベルの発現、
（ｖ）Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、
（ｖｉ）多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ、
（ｖｉｉ）Ｂｖ８の高レベル若しくは発現；
又は
（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合わせ
を有するか、
又は
対象は、（ｉｘ）～（ｘｖｉ）：
（ｉｘ）細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加；
（ｘ）活性化ＮＫ細胞の増加；
（ｘｉ）Ｔｒｅｇ細胞の数の減少；
（ｘｉｉ）ＴＧＦ－β発現の減少；
（ｘｉｉｉ）Ｆｏｘｐ３発現の減少；
（ｘｉｖ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少；
（ｘｖ）Ｂｖ８発現の減少、
若しくは
（ｘｖｉ）これらの任意の組合わせ
を必要としており、
組成物の治療上有効なボーラス用量を投与することにより、存在する場合には腫瘍サイズの縮小、細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加、活性化ＮＫ細胞の数の増加、Ｔｒｅｇ細胞の数の減少、ＴＧＦβのレベル若しくは発現の低下、Ｆｏｘｐ３のレベル若しくは発現の低下、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少、Ｂｖ８のレベル若しくは発現の低下、生存率／寿命の改善、又はこれらの組合わせがもたらされる、
段落Ａ１又は段落Ａ２に記載の方法。
Ａ４．対象は、組成物の治療上有効なボーラス用量の投与前に、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、少数の活性化ＮＫ細胞、又は少数の細胞傷害性Ｔ細胞及び少数の活性化ＮＫ細胞の両方をさらに有する、段落Ａ１～Ａ３のいずれか一つに記載の対象を処置する方法。
Ａ５．長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号１１］、又はこれらの任意の組合わせを含み
式中、
Ｕは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の部分であり、式（Ｉ）は、
（脂肪族）ａ－（Ｘ）－ （Ｉ）
であり；
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；
脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり；
Ｘは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択されるか；
又は
Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、
式中、
Ｂは、１～８個アミノ酸残基配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；
ｍは、０、１、２、又は３であり；
ｎは、０、１、２、又は３であり；
且つ
ｍ及びｎの合計は、少なくとも１であり、
式（ＩＩ）は、
（ポリマー）ａ－（Ｙ）－ （ＩＩ）
であり；
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；
ポリマーは、セルロース、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、又はこれらの誘導体であり；
Ｙは、
１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択される、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
非アミノ酸リンカーであって、エステル、アミド、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、又はこれらの組合わせを含む非アミノ酸リンカーであるか；
アミノ酸残基含有リンカーであって、アミノ酸残基は、（ポリマー）ａに共有結合的に付着している、アミノ酸残基含有リンカーであるか；
又は
１～１０個アミノ酸残基若しくはペプチド配列とは異なるペプチドリンカーである、
段落Ａ１～Ａ４のいずれか一つに記載の方法。
Ａ６．Ｙは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、段落５に記載の方法。
Ａ７．長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号１２］、又はこれらの任意の組合わせを含み、
式中、
Ｕは、式（Ｉ）の部分であり、式（Ｉ）は、
（脂肪族）ａ－（Ｘ）－ （Ｉ）
であり；
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；
脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１２～２８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており、好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ１０～２４鎖であり、
Ｘは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択されるか；
又は
Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、
式中、
Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；
ｍは、０、１、２、又は３であり；
ｎは、０、１、２、又は３であり；
且つ
ｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、
段落Ａ５又はＡ６に記載の方法。
Ａ８．Ｘは、４～７個アミノ酸配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグリシン（Ｇ）から選択されるか、
又は
Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、
段落Ａ５～Ａ７のいずれか一つに記載の方法。
Ａ９．長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］を含み、
式中、
Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり；
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；
脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり、
Ｘは、１～１０個アミノ酸残基であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択されるか；
又は
Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、
段落Ａ５～Ａ８のいずれか一つに記載の方法。
Ａ１０．脂肪族は、直鎖の又は分岐した任意選択的に置換されているＣ４～９鎖（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、結合、又は同類のもの等の連結を介してペプチドに共有結合している任意選択的に置換されているＣ３～８アルキル－Ｃ（＝Ｏ）－部分及び／又は任意選択的に置換されているＣ４～９アルキル）を含まない、段落Ａ５～Ａ９のいずれか一つに記載の方法。
Ａ１１．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、
ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号５］；
ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号６］；
ＣＨ３（ＣＨ２）１８Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号７］；
ＣＨ３（ＣＨ２）２０Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号８］；
ＣＨ３（ＣＨ２）２２Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号９］；
システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２０］；
及び
システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２１］
から選択される、段落Ａ１～Ａ１０のいずれか一つに記載の方法。
Ａ１２．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号５］である、段落Ａ１～Ａ１１のいずれか一つに記載の方法。
Ａ１３．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号６］である、段落Ａ１～Ａ１１のいずれか一つに記載の方法。
Ａ１４．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）１８Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号７］である、段落Ａ１～Ａ１１のいずれか一つに記載の方法。
Ａ１５．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）２０Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号８］である、段落Ａ１～Ａ１１のいずれか一つに記載の方法。
Ａ１６．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）２２Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号９］である、段落Ａ１～Ａ１１のいずれか一つに記載の方法。
Ａ１７．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２０］である、段落Ａ１～Ａ１１のいずれか一つに記載の方法。
Ａ１８．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２１］である、段落Ａ１～Ａ１１のいずれか一つに記載の方法。
Ａ１９．長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号２７］、又はこれらの任意の組合わせを含み；
式中、
Ｕは、式（ＩＩ）の部分であり、式（ＩＩ）は、
（ポリマー）ａ－（Ｙ）－ （ＩＩ）
であり、
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；
ポリマーは、セルロース、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、又はポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）であり；
Ｙは、
４～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグリシン（Ｇ）から選択される、４～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
非アミノ酸リンカーであって、エステル、アミド、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、又はこれらの組合わせを含む非アミノ酸リンカーであるか；
又は
リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであって、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎである、
段落Ａ１～Ａ６のいずれか一つに記載の方法。
Ａ２０．長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号２７］、又はこれらの任意の組合わせを含み；
式中、
Ｕは、式（ＩＩ）の部分であり、式（ＩＩ）は、
（ポリマー）ａ－（Ｙ）－ （ＩＩ）
であり、
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは１であり）；
ポリマーは、セルロース、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、又はこれらの誘導体であり；
Ｙは、
１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択される、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
非アミノ酸リンカーであって、エステル、アミド、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、又はこれらの組合わせを含む非アミノ酸リンカーであるか；
アミノ酸残基含有リンカーであって、アミノ酸残基は、（ポリマー）ａに共有結合的に付着している、アミノ酸残基含有リンカーであるか；
１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列とは異なるペプチドリンカーであるか；
又は
リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであって、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎである、
段落Ａ１～Ａ６及びＡ１９のいずれか一つに記載の方法。
Ａ２１．ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）を含まないか、ＭＰＥＧを含まないか、又はポリ（エチレングリコール）及びＭＰＥＧの両方を含まない、段落Ａ１～Ａ６、Ａ１９、及びＡ２０のいずれか一つに記載の方法。
Ａ２２．Ｙは、
４～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグリシン（Ｇ）から選択される、４～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
又は
リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであって、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎである、
段落Ａ１～Ａ６及びＡ１９～Ａ２１のいずれか一つに記載の方法。
Ａ２３．ボーラス用量の投与を、１日に最大２回行ない、投与経路は、皮下、静脈内、吸入によるもの、筋肉内、経鼻、経腸、若しくはこれらの任意の組合わせを含むか；又は
投与経路は、皮下であるか；又は
投与経路は、静脈内であるか；又は
投与経路は、筋肉内であるか：又は
投与経路は、吸入によるものであるか；又は
投与経路は、経鼻であるか；又は
投与の経腸経路は、経口である、
段落Ａ１～Ａ２２のいずれか一つに記載の方法。
Ａ２４．対象は、癌である、段落Ａ１～Ａ２３のいずれか一つに記載の方法。
Ａ２５．癌は、乳癌：骨癌（例えば骨肉腫）；前立腺癌（例えば、初期前立腺癌、後期前立腺癌）；結腸癌、頭部癌、頸部癌、肝癌、腎癌、子宮頸癌、肺癌、胃癌、尿道癌、膀胱癌、尿管の癌、腎盂癌、直腸の癌、食道癌、リンパ節の癌、膵癌、胃癌、卵巣癌；中枢神経系の癌、軟部組織癌、内分泌腺癌、若しくはこれらの任意の組合わせから選択されるか；又は
対象は、皮膚癌であるか；又は
対象は、結腸癌であるか；又は
対象は、乳癌であるか；又は
対象は、骨癌（例えば骨肉腫）であるか；又は
対象は、前立腺癌である、
段落Ａ２４に記載の方法。
Ａ２６．癌は、細胞傷害性細胞免疫賦活薬に反応する、段落Ａ２４又はＡ２５に記載の方法。
Ａ２７．癌は、頭頸部癌、皮膚癌、肝癌、腎癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、胃癌、結腸癌、リンパ節癌、膵癌、ｄＭＭＲ等の卵巣、尿道、膀胱、尿管、腎盂、及び周辺臓器の癌から選択される、段落Ａ２４～Ａ２６のいずれか一つに記載の方法。
Ａ２８．皮膚癌は、メルケル細胞癌、扁平上皮癌、黒色腫、又はこれらの任意の組合わせを含み；
肝癌は、肝細胞癌を含み；
腎癌は、腎細胞癌を含み；
肺癌は、小細胞肺癌又は非小細胞肺癌を含み；
乳癌は、三種陰性乳癌を含み；
胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）は、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、食道接合部の腺癌、又はｄＭＭＲ）を含み；
リンパ節癌は、ホジキンＰＭＢＣＬ又は非ホジキンＰＭＢＣＬを含み；
膵癌及び卵巣癌は、それぞれ独立して、ｄＭＭＲを含み；
腎盂領域に対する周辺臓器の癌は、尿路上皮癌を含む、
段落Ａ２５～Ａ２７のいずれか一つに記載の方法。
Ａ２９．免疫アジュバントであって、ｔｏｌｌ様受容体を調節する免疫アジュバントを、対象に投与するか、又はＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）、ＰＤ１（プログラム細胞死タンパク質１若しくはＣＤ２７９）、ＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）、ＰＤ－Ｌ２（プログラム死リガンド２）、ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子３タンパク質）、ＢＴＬＡ（Ｂ－及びＴ－リンパ球アテニュエータ）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６、Ｂ７ファミリ及びＣＤ２８ファミリの免疫チェックポイントメンバー）、Ｂ７Ｈ４（Ｂ７ファミリの分子、Ｔ細胞免疫を負に制御する）、並びにＴＩＭ－３（ＩＦＮ－γ産生Ｔ細胞上で発現される共阻害受容体）から選択される免疫チェックポイントタンパク質を標的とする治療薬（例えば、タンパク質及び／若しくは小分子化合物）又は抗体を含む細胞傷害性細胞免疫賦活薬を、対象に投与することをさらに含み、細胞傷害性細胞免疫賦活薬は、免疫チェックポイントタンパク質を阻害するか；
又は
細胞傷害性細胞免疫賦活薬は、免疫チェックポイントタンパク質に対する抗体若しくは抗体の一部、免疫チェックポイントタンパク質の可溶性リガンド、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、トレメリムマブ、ラムブロリズマブ、及び／若しくはピディリズマブを含むか；
又は
免疫アジュバントは、ｔｏｌｌ様受容体９アゴニストを含むか；
又は
免疫アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドを含む、
段落Ａ１～Ａ２８のいずれか一つに記載の方法。
Ａ３０．ＣＡＲ Ｔ細胞を対象に投与することをさらに含む段落Ａ１～Ａ２９のいずれか一つに記載の方法。
Ａ３１．組成物は、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、又は長時間作用性ＣＮＰ誘導体と、ポリマー賦形剤であって、ポリエチレングリコール、脂肪酸、アニオン性部分、又はこれらの任意の組合わせでグラフト化されたポリ（アミノ酸）を含むポリマー賦形剤とを含む長時間作用性ＣＮＰ組成物又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体組成物を含み、ポリマー賦形剤は、ＣＮＰ若しくはＣＮＰ誘導体の内のいずれかを隔離するか又はＣＮＰ若しくはＣＮＰ誘導体の内のいずれかに非共有結合するように適合されている、段落Ａ１～Ａ２８のいずれか一つに記載の方法。
Ａ３２．組成物は、長時間作用性ＣＮＰ誘導体と、ポリマー賦形剤であって、ポリエチレングリコール、脂肪酸、アニオン性部分、又はこれらの任意の組合わせでグラフト化されたポリ（アミノ酸）を含むポリマー賦形剤とを含む超長時間作用性ＣＮＰ誘導体組成物を含み、ポリマー賦形剤は、長時間作用性ＣＮＰ誘導体を隔離するか又は長時間作用性ＣＮＰ誘導体に非共有結合するように適合されている、段落Ａ１～Ａ３１のいずれか一つに記載の方法。
Ａ３３．長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストは、ポリペプチドを含む、段落Ａ１～Ａ４及びＡ２３～Ａ３０のいずれか一つに記載の方法。
Ａ３４．ポリペプチドは、抗体を含む、段落Ａ３３に記載の方法。
Ａ３５．長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト又は超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストは、分子量が２ｋＤａ未満である分子を含む、段落Ａ１～Ａ４及びＡ２３～Ａ３３のいずれか一つに記載の方法。
Ａ３６．組成物は、血圧を、ベースライン血圧測定値の１５％を超えて低下させない、段落Ａ１～Ａ３５のいずれか一つに記載の方法。
Ａ３７．組成物は、血圧を、ベースライン血圧測定値の１０％を超えて低下させない、段落Ａ１～Ａ３５のいずれか一つに記載の方法。
Ａ３８．癌である対象を処置する方法であって、
Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号１１］、又はこれらの任意の組合わせを含む長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することを含み、
式中、
Ｕは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の部分であり、式（Ｉ）は、
（脂肪族）ａ－（Ｘ）－ （Ｉ）
であり；
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）；
脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であり、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり、
Ｘは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択されるか；
又は
Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１であり、
式（ＩＩ）は、
（ポリマー）ａ－（Ｙ）－ （ＩＩ）
であり；
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）；
ポリマーは、セルロース、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、又はこれらの誘導体であり、
Ｙは、
１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択される、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
非アミノ酸リンカーであり、エステル、アミド、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、又はこれらの組合わせを含む非アミノ酸リンカーであるか；
アミノ酸残基含有リンカーであり、アミノ酸残基は、（ポリマー）ａに共有結合的に付着している、アミノ酸残基含有リンカーであるか；
又は
１～１０個アミノ酸残基若しくはペプチド配列とは異なるペプチドリンカーであり；
組成物は、血圧を、ベースライン血圧測定値の１５％を超えて（例えば、１５％を超えて、又は１０％を超えて）低下させず、ベースライン血圧測定値は、組成物の投与前の平均血圧であり；
且つ
組成物は、１時間～１２時間（例えば、２～１２時間、４～１２時間、１時間～２４時間、２～２４時間、４～２４時間、１時間～８４時間、２～８４時間、４～８４時間、１２～８４時間、１時間～１６８時間、２～１６８時間、４～１６８時間、又は１２～１６８時間）での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超（例えば、２倍超、３倍超、４倍超、又は５倍超）まで上昇させ、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベルであるか、又は健康な対象の平均血漿中環状ＧＭＰレベル（好ましくは、対象への組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベル）である、
方法。
Ａ３９．Ｙは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、段落Ａ３８に記載の方法。
Ａ４０．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、
ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号５］；
ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号６］；
ＣＨ３（ＣＨ２）１８Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号７］；
ＣＨ３（ＣＨ２）２０Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号８］；
ＣＨ３（ＣＨ２）２２Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号９］；
システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２０］；
及び
システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２１］
から選択される、段落Ａ３８又はＡ３９に記載の方法。
Ａ４１．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号５］である、段落Ａ３８～Ａ４０のいずれか一つに記載の方法。
Ａ４２．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号６］である、段落Ａ３８～Ａ４０のいずれか一つに記載の方法。
Ａ４３．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）１８Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号７］である、段落Ａ３８～Ａ４０のいずれか一つに記載の方法。
Ａ４４．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）２０Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号８］である、段落Ａ３８～Ａ４０のいずれか一つに記載の方法。
Ａ４５．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）２２Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号９］である、段落Ａ３８～Ａ４０のいずれか一つに記載の方法。
Ａ４６．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２０］である、段落Ａ３８～Ａ４０のいずれか一つに記載の方法。
Ａ４７．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２１］である、段落Ａ３８～Ａ４０のいずれか一つに記載の方法。
Ａ４８．組成物は、長時間作用性ＣＮＰ誘導体と、ポリマー賦形剤であって、ポリエチレングリコール、脂肪酸、アニオン性部分、又はこれらの任意の組合わせでグラフト化されたポリ（アミノ酸）を含むポリマー賦形剤とを含む超長時間作用性ＣＮＰ誘導体組成物を含み、ポリマー賦形剤は、長時間作用性ＣＮＰ誘導体を隔離するか又は長時間作用性ＣＮＰ誘導体に非共有結合するように適合されている、段落Ａ３８～Ａ４７のいずれか一つに記載の方法。
Ａ４９．対象は、腫瘍を有しており、組成物の治療上有効なボーラス用量を対象に投与することにより、腫瘍組織内で、血管系の正常化が増加するか、又は周皮細胞被覆指数が少なくとも２０％増加する、段落Ａ１～Ａ４８のいずれか一つに記載の方法。
Ａ５０．対象は、腫瘍を有しており、組成物の治療上有効なボーラス用量を対象に投与することにより、腫瘍サイズが縮小する、段落Ａ１～Ａ４９のいずれか一つに記載の方法。
Ａ５１．対象は、腫瘍を有しており、組成物の治療上有効なボーラス用量を対象に投与することにより、対象の生存率が改善される、段落Ａ１～Ａ５０のいずれか一つに記載の方法。
Ａ５２．対象は、腫瘍を有しており、組成物の治療上有効なボーラス用量を対象に投与することにより、腫瘍内の細胞傷害性Ｔ細胞の数が増加する、段落Ａ１～Ａ５１のいずれか一つに記載の方法。
Ａ５３．対象は、腫瘍を有しており、組成物の治療上有効なボーラス用量を対象に投与することにより、腫瘍内の活性化ＮＫ細胞の数が増加する、段落Ａ１～Ａ５２のいずれか一つに記載の方法。
Ａ５４．対象は、腫瘍を有しており、組成物の治療上有効なボーラス用量を対象に投与することにより、腫瘍内での血管の正常化が増加し、腫瘍サイズが縮小し、生存率が改善され、腫瘍内の細胞傷害性Ｔ細胞の数が増加し、及び／又は腫瘍内の活性化ＮＫ細胞の数が増加する、段落Ａ１～Ａ５３のいずれか一つに記載の方法。
Ａ５５．式Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ［配列番号３０］を含む長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む組成物であって、
式中、
ｘは、天然又は非天然のアミノ酸残基であり、但し、ｘは、メチオニン残基ではなく：
Ｕは、式（Ｉ）：
（脂肪族）ａ－（Ｘ）－ （Ｉ）
の部分であり；
式中、
ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）；
脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であり、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり；
Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、
組成物。
Ａ５６．ｘは、ホモグルタミンであり、脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等）を介してＸに共有結合しているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；ａは、１であり；Ｂは、Ｇｌｙであり；ｍは、０、１、又は２であり、且つｎは、１である、段落Ａ５５に記載の組成物。
Ａ５７．ｘは、ホモグルタミンであり、脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等）を介してＸに共有結合しているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；ａは、１であり；Ｂは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり、且つｎは、１である、段落Ａ５５に記載の組成物。
Ａ５８．ｘは、ホモグルタミンであり、脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等）を介してＸに共有結合しているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；ａは、１であり；ｍは、１であり、且つｎは、０である、段落Ａ５５に記載の組成物。
Ａ５９．ｘは、ホモグルタミン（ホモＱ）［配列番号１６］であり、Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり；式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）；脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等）を介してＸに共有結合しているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり；Ｂは、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基であり；ｍは、０であり、且つｎは、２である、段落Ａ５５に記載の組成物。
Ａ６０．ｘは、ホモグルタミン（ホモＱ）［配列番号１７］であり、Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり；式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）；脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等）を介してＸに共有結合しているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり；Ｂは、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基であり；ｍは、１であり、且つｎは、２である、段落Ａ５５に記載の組成物。
Ａ６１．ｘは、ホモグルタミンであり、脂肪族は、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）又はＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｂは、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基であり、ｍは、０であり、且つｎは、２である、段落Ａ５５に記載の組成物。
Ａ６２．ｘは、ホモグルタミンであり、脂肪族は、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）又はＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｂは、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基であり、ｍは、１であり、且つｎは、２である、段落Ａ５５に記載の組成物。
Ａ６３．ｘは、ホモグルタミンであり、脂肪族は、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）又はＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｂは、（２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸）－（２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸）－（Ｇｌｙ）であり、ｍは、１であり、且つｎは、１である、段落Ａ５５に記載の組成物。
Ａ６４．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２０］である、段落Ａ５５に記載の組成物。
Ａ６５．長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２１］である、段落Ａ５５に記載の組成物。
Ａ６６．ａは、１である、段落Ａ５～Ａ５４のいずれか一つに記載の方法。
Ａ６７．ａは、１である、段落Ａ５５～Ａ６５のいずれか一つに記載の組成物。
例示的実施形態が図示されており且つ説明されているが、本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく、この実施形態に様々な変更を加え得ることが理解されるだろう。
排他的所有権又は特権が主張される本開示の実施形態は、下記のように画定される。

Claims (65)

  1. 任意の組織又は臓器中に異常な血管系を有する対象を処置する方法であって、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、前記対象に投与することを含み、
    前記組成物の治療上有効な量ボーラス用量を投与することにより、血管系の正常化、又は周皮細胞被覆指数の少なくとも１０％の増加がもたらされ、
    前記組成物は、血圧を、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて低下させず、
    且つ
    前記組成物は、投与後１時間～１２時間での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超まで上昇させ、前記ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、前記組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベルであるか、又は健康な対象の平均血漿中環状ＧＭＰレベルである、
    方法。
  2. 細胞傷害性Ｔ細胞の数、及び／又は活性化ＮＫ細胞の数を増加させる方法であって、長時間作用性ＣＮＰ、超長時間作用性ＣＮＰ、長時間作用性ＣＮＰ誘導体、超長時間作用性ＣＮＰ誘導体、長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト、又はこれらの任意の組合わせを含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することを含み、
    前記組成物の治療上有効なボーラス用量により、前記組成物の投与前のレベル又は健康な対象でのレベルを少なくとも１５％超える細胞傷害性Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞の数の増加がもたらされ、
    前記組成物の治療上有効なボーラス用量を投与することにより、血圧は、ベースライン血圧測定値の２０％を超えて低下せず、
    且つ
    前記組成物は、投与後１時間～１２時間での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超まで上昇させ、前記ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、前記組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベルであるか、又は健康な対象の平均血漿中環状ＧＭＰレベルである、
    方法。
  3. 前記対象は、状態（ｉ）～（ｖｉｉｉ）：
    （ｉ）少数の細胞傷害性Ｔ細胞、
    （ｉｉ）少数の活性化ＮＫ細胞、
    （ｉｉｉ）多数のＴｒｅｇ細胞、
    （ｉｖ）ＴＧＦβの高レベルの発現、
    （ｖ）Ｆｏｘｐ３の高レベル若しくは発現、
    （ｖｉ）多数の骨髄由来サプレッサー細胞若しくはＭＤＳＣ、
    （ｖｉｉ）Ｂｖ８の高レベル若しくは発現；
    又は
    （ｖｉｉｉ）これらの任意の組合わせ
    を有するか、
    又は
    前記対象は、（ｉｘ）～（ｘｖｉ）：
    （ｉｘ）細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加；
    （ｘ）活性化ＮＫ細胞の増加；
    （ｘｉ）Ｔｒｅｇ細胞の数の減少；
    （ｘｉｉ）ＴＧＦ－β発現の減少；
    （ｘｉｉｉ）Ｆｏｘｐ３発現の減少；
    （ｘｉｖ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少；
    （ｘｖ）Ｂｖ８発現の減少、
    若しくは
    （ｘｖｉ）これらの任意の組合わせ
    を必要としており、
    前記組成物の治療上有効なボーラス用量を投与することにより、存在する場合には腫瘍サイズの縮小、細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加、活性化ＮＫ細胞の数の増加、Ｔｒｅｇ細胞の数の減少、ＴＧＦβのレベル若しくは発現の低下、Ｆｏｘｐ３のレベル若しくは発現の低下、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の数の減少、Ｂｖ８のレベル若しくは発現の低下、生存率／寿命の改善、又はこれらの組合わせがもたらされる、
    請求項１又は２に記載の方法。
  4. 前記対象は、前記組成物の治療上有効なボーラス用量の投与前に、少数の細胞傷害性Ｔ細胞、少数の活性化ＮＫ細胞、又は少数の細胞傷害性Ｔ細胞及び少数の活性化ＮＫ細胞の両方をさらに有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の対象を処置する方法。
  5. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は前記超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号１１］、又はこれらの任意の組合わせを含み、
    式中、
    Ｕは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の部分であり、式（Ｉ）は、
    （脂肪族）ａ－（Ｘ）－ （Ｉ）
    であり；
    式中、
    ａは、１であり；
    脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり、
    Ｘは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択されるか；
    又は
    Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、
    式中、
    Ｂは、１～８個アミノ酸残基配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；
    ｍは、０、１、２、又は３であり；
    ｎは、０、１、２、又は３であり；
    且つ
    ｍ及びｎの合計は、少なくとも１であり、
    式（ＩＩ）は、
    （ポリマー）ａ－（Ｙ）－ （ＩＩ）
    であり；
    式中、
    ａは、１であり；
    ポリマーは、セルロース、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、又はこれらの誘導体であり、
    Ｙは、
    １～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択される、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
    非アミノ酸リンカーであって、エステル、アミド、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、又はこれらの組合わせを含む非アミノ酸リンカーであるか；
    アミノ酸残基含有リンカーであって、前記アミノ酸残基は、（ポリマー）ａに共有結合的に付着している、アミノ酸残基含有リンカーであるか；
    又は
    前記１～１０個アミノ酸残基若しくはペプチド配列とは異なるペプチドリンカーである、
    請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  6. Ｙは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、請求項５に記載の方法。
  7. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は前記超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号１２］、又はこれらの任意の組合わせを含み、
    式中、
    Ｕは、式（Ｉ）の部分であり、式（Ｉ）は、
    （脂肪族）ａ－（Ｘ）－ （Ｉ）
    であり；
    式中、
    ａは、１であり；
    脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１２～２８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており、好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ１０～２４鎖であり、
    Ｘは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択されるか；
    又は
    Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、
    式中、
    Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；
    ｍは、０、１、２、又は３であり；
    ｎは、０、１、２、又は３であり；
    且つ
    ｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、
    請求項５に記載の方法。
  8. Ｘは、４～７個アミノ酸配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグリシン（Ｇ）から選択されるか、
    又は
    Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、
    請求項５に記載の方法。
  9. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は前記超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］を含み、
    式中、
    Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり；
    式中、
    ａは、１であり；
    脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であって、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり、
    Ｘは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択されるか；
    又は
    Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、
    請求項５に記載の方法。
  10. 脂肪族は、直鎖の又は分岐した任意選択的に置換されているＣ４～９鎖（例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、結合、又は同類のもの等の連結を介して前記ペプチドに共有結合している任意選択的に置換されているＣ３～８アルキル－Ｃ（＝Ｏ）－部分及び／又は任意選択的に置換されているＣ４～９鎖）を含まない、請求項５に記載の方法。
  11. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、
    ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号５］；
    ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号６］；
    ＣＨ３（ＣＨ２）１８Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号７］；
    ＣＨ３（ＣＨ２）２０Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号８］；
    ＣＨ３（ＣＨ２）２２Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号９］；
    システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２０］；
    及び
    システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２１］
    から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号５］である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号６］である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）１８Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号７］である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）２０Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号８］である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）２２Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号９］である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２０］である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２１］である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は前記超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号２７］、又はこれらの任意の組合わせを含み；
    式中、
    Ｕは、式（ＩＩ）の部分であり、式（ＩＩ）は、
    （ポリマー）ａ－（Ｙ）－ （ＩＩ）
    であり、
    式中、
    ａは、１であり；
    ポリマーは、セルロース、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、又はポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）であり；
    Ｙは、
    ４～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグリシン（Ｇ）から選択される、４～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
    非アミノ酸リンカーであって、エステル、アミド、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、又はこれらの組合わせを含む非アミノ酸リンカーであるか；
    又は
    リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであって、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎである、
    請求項５に記載の方法。
  20. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は前記超長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、又はこれらの任意の組合わせを含み；
    式中、
    Ｕは、式（ＩＩ）の部分であり、式（ＩＩ）は、
    （ポリマー）ａ－（Ｙ）－ （ＩＩ）
    であり、
    式中、
    ａは、１であり；
    ポリマーは、セルロース、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、又はこれらの誘導体であり；
    Ｙは、
    １～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択される、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
    非アミノ酸リンカーであって、エステル、アミド、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、又はこれらの組合わせを含む非アミノ酸リンカーであるか；
    アミノ酸残基含有リンカーであって、前記アミノ酸残基は、（ポリマー）ａに共有結合的に付着している、アミノ酸残基含有リンカーであるか；
    前記１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列とは異なるペプチドリンカーであるか；
    又は
    リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであって、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎである、
    請求項１９に記載の方法。
  21. 前記ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）を含まないか、ＭＰＥＧを含まないか、又はポリ（エチレングリコール）及びＭＰＥＧの両方を含まない、請求項１９に記載の方法。
  22. Ｙは、
    ４～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であって、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグリシン（Ｇ）から選択される、４～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
    又は
    リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであって、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎである、
    請求項５に記載の方法。
  23. 前記ボーラス用量の投与を、１日に最大２回行ない、投与経路は、皮下、静脈内、吸入によるもの、筋肉内、経鼻、経腸、若しくはこれらの任意の組合わせを含むか；又は
    前記投与経路は、皮下であるか；又は
    前記投与経路は、静脈内であるか；又は
    前記投与経路は、筋肉内であるか：又は
    前記投与経路は、吸入によるものであるか；又は
    前記投与経路は、経鼻であるか；又は
    前記投与の経腸経路は、経口である、
    請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  24. 前記対象は、癌である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  25. 前記癌は、乳癌：骨癌；前立腺癌；結腸癌、頭部癌、頸部癌、肝癌、腎癌、子宮頸癌、肺癌、胃癌、尿道癌、膀胱癌、尿管の癌、腎盂癌、直腸の癌、食道癌、リンパ節の癌、膵癌、胃癌、卵巣癌；中枢神経系の癌、軟部組織癌、内分泌腺癌、若しくはこれらの任意の組合わせから選択されるか；又は
    前記対象は、皮膚癌であるか；又は
    前記対象は、結腸癌であるか；又は
    前記対象は、乳癌であるか；又は
    前記対象は、骨癌であるか；又は
    前記対象は、前立腺癌である、
    請求項２４に記載の方法。
  26. 前記癌は、細胞傷害性細胞免疫賦活薬に反応する、請求項２４に記載の方法。
  27. 前記癌は、頭頸部癌、皮膚癌、肝癌、腎癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、胃癌、結腸癌、リンパ節癌、膵癌、ｄＭＭＲ等の卵巣、尿道、膀胱、尿管、腎盂、及び周辺臓器の癌から選択される、請求項２４に記載の方法。
  28. 前記皮膚癌は、メルケル細胞癌、扁平上皮癌、黒色腫、又はこれらの任意の組合わせを含み；
    前記肝癌は、肝細胞癌を含み；
    前記腎癌は、腎細胞癌を含み；
    前記肺癌は、小細胞肺癌又は非小細胞肺癌を含み；
    前記乳癌は、三種陰性乳癌を含み；
    前記胃癌は、胃癌、食道接合部の腺癌、又はｄＭＭＲ）を含み；
    前記リンパ節癌は、ホジキンＰＭＢＣＬ又は非ホジキンＰＭＢＣＬを含み；
    前記膵癌及び卵巣癌は、それぞれ独立して、ｄＭＭＲを含み；
    前記腎盂領域に対する周辺臓器の癌は、尿路上皮癌を含む、
    請求項２５に記載の方法。
  29. 免疫アジュバントであって、ｔｏｌｌ様受容体を調節する免疫アジュバントを、前記対象に投与するか、又はＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）、ＰＤ１（プログラム細胞死タンパク質１若しくはＣＤ２７９）、ＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）、ＰＤ－Ｌ２（プログラム死リガンド２）、ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子３タンパク質）、ＢＴＬＡ（Ｂ－及びＴ－リンパ球アテニュエータ）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６、Ｂ７ファミリ及びＣＤ２８ファミリの免疫チェックポイントメンバー）、Ｂ７Ｈ４（Ｂ７ファミリの分子、Ｔ細胞免疫を負に制御する）、並びにＴＩＭ－３（ＩＦＮ－γ産生Ｔ細胞上で発現される共阻害受容体）から選択される免疫チェックポイントタンパク質を標的とする治療薬又は抗体を含む細胞傷害性細胞免疫賦活薬を、前記対象に投与することをさらに含み、前記細胞傷害性細胞免疫賦活薬は、免疫チェックポイントタンパク質を阻害するか；
    又は
    細胞傷害性細胞免疫賦活薬は、免疫チェックポイントタンパク質に対する抗体若しくは抗体の一部、免疫チェックポイントタンパク質の可溶性リガンド、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、イピリムマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ、トレメリムマブ、ラムブロリズマブ、及び／若しくはピディリズマブを含むか；
    又は
    前記免疫アジュバントは、ｔｏｌｌ様受容体９アゴニストを含むか；
    又は
    前記免疫アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドを含む、
    請求項２４に記載の方法。
  30. ＣＡＲ Ｔ細胞を前記対象に投与することをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
  31. 前記組成物は、ＣＮＰ、ＣＮＰ誘導体、又は長時間作用性ＣＮＰ誘導体と、ポリマー賦形剤であって、ポリエチレングリコール、脂肪酸、アニオン性部分、又はこれらの任意の組合わせでグラフト化されたポリ（アミノ酸）を含むポリマー賦形剤とを含む長時間作用性ＣＮＰ組成物又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体組成物を含み、前記ポリマー賦形剤は、前記ＣＮＰ若しくはＣＮＰ誘導体の内のいずれかを隔離するか又は前記ＣＮＰ若しくはＣＮＰ誘導体の内のいずれかに非共有結合するように適合されている、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記組成物は、長時間作用性ＣＮＰ誘導体と、ポリマー賦形剤であって、ポリエチレングリコール、脂肪酸、アニオン性部分、又はこれらの任意の組合わせでグラフト化されたポリ（アミノ酸）を含むポリマー賦形剤とを含む超長時間作用性ＣＮＰ誘導体組成物を含み、前記ポリマー賦形剤は、前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体を隔離するか又は前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体に非共有結合するように適合されている、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト又は前記超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストは、ポリペプチドを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記ポリペプチドは、抗体を含む、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記長時間作用性ＮＰＲＢアゴニスト又は前記超長時間作用性ＮＰＲＢアゴニストは、分子量が２ｋＤａ未満である分子を含む、請求項３３に記載の方法。
  36. 前記組成物は、血圧を、ベースライン血圧測定値の１５％を超えて低下させない、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  37. 前記組成物は、血圧を、ベースライン血圧測定値の１０％を超えて低下させない、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  38. 癌である対象を処置する方法であって、
    Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号２］、Ｕ－ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号３］、ＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫ（Ｕ）ＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号４］、Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ（式中、ｘは、天然若しくは非天然のアミノ酸残基である）［配列番号１１］、又はこれらの任意の組合わせを含む長時間作用性ＣＮＰ誘導体又は超長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む組成物の治療上有効なボーラス用量を、必要な対象に投与することを含み、
    式中、
    Ｕは、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の部分であり、式（Ｉ）は、
    （脂肪族）ａ－（Ｘ）－ （Ｉ）
    であり；
    式中、
    ａは、１であり；
    脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であり、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり、
    Ｘは、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択されるか；
    又は
    Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１であり、
    式（ＩＩ）は、
    （ポリマー）ａ－（Ｙ）－ （ＩＩ）
    であり；
    式中、
    ａは、１であり；
    ポリマーは、セルロース、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、メトキシポリ（エチレングリコール）（ＭＰＥＧ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、又はこれらの誘導体であり、
    Ｙは、
    １～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアスパラギン酸（Ｄ）から選択される、１～１０個アミノ酸残基又はペプチド配列であるか；
    非アミノ酸リンカーであり、エステル、アミド、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、又はこれらの組合わせを含む非アミノ酸リンカーであるか；
    アミノ酸残基含有リンカーであり、前記アミノ酸残基は、（ポリマー）ａに共有結合的に付着している、アミノ酸残基含有リンカーであるか；
    又は
    前記１～１０個アミノ酸残基若しくはペプチド配列とは異なるペプチドリンカーであり；
    前記組成物は、血圧を、ベースライン血圧測定値の１５％を超えて低下させず；
    且つ
    前記組成物は、１時間～１２時間での血漿中環状ＧＭＰレベルを、ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルの１．５倍超まで上昇させ、前記ベースライン血漿中環状ＧＭＰレベルは、前記組成物の投与前の平均血漿中環状ＧＭＰレベルであるか、又は健康な対象の平均血漿中環状ＧＭＰレベルである、
    方法。
  39. Ｙは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、
    ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号５］；
    ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号６］；
    ＣＨ３（ＣＨ２）１８Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号７］；
    ＣＨ３（ＣＨ２）２０Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号８］；
    ＣＨ３（ＣＨ２）２２Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号９］；
    システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２０］；
    及び
    システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２１］
    から選択される、請求項３８又は３９に記載の方法。
  41. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号５］である、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号６］である、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）１８Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号７］である、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
  44. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）２０Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号８］である、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、ＣＨ３（ＣＨ２）２２Ｃ（＝Ｏ）ＫＫＫＫＧＧＧＧＬＳＫＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳＭＳＧＬＧＣ［配列番号９］である、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２０］である、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２１］である、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
  48. 前記組成物は、長時間作用性ＣＮＰ誘導体と、ポリマー賦形剤であって、ポリエチレングリコール、脂肪酸、アニオン性部分、又はこれらの任意の組合わせでグラフト化されたポリ（アミノ酸）を含むポリマー賦形剤とを含む超長時間作用性ＣＮＰ誘導体組成物を含み、前記ポリマー賦形剤は、前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体を隔離するか又は前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体に非共有結合するように適合されている、請求項３４～４７のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記対象は、腫瘍を有しており、前記組成物の治療上有効なボーラス用量を前記対象に投与することにより、腫瘍組織内で、血管系の正常化が増加するか、又は周皮細胞被覆指数が少なくとも２０％増加する、請求項１～４８のいずれか一項に記載の方法。
  50. 前記対象は、腫瘍を有しており、前記組成物の治療上有効なボーラス用量を前記対象に投与することにより、前記腫瘍サイズが縮小する、請求項１～４９のいずれか一項に記載の方法。
  51. 前記対象は、腫瘍を有しており、前記組成物の治療上有効なボーラス用量を前記対象に投与することにより、前記対象の生存率が改善される、請求項１～５０のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記対象は、腫瘍を有しており、前記組成物の治療上有効なボーラス用量を前記対象に投与することにより、前記腫瘍内の細胞傷害性Ｔ細胞の数が増加する、請求項１～５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. 前記対象は、腫瘍を有しており、前記組成物の治療上有効なボーラス用量を前記対象に投与することにより、前記腫瘍内の活性化ＮＫ細胞の数が増加する、請求項１～５２のいずれか一項に記載の方法。
  54. 前記対象は、腫瘍を有しており、前記組成物の治療上有効なボーラス用量を前記対象に投与することにより、前記腫瘍内での血管の正常化が増加し、前記腫瘍サイズが縮小し、生存率が改善され、前記腫瘍内の細胞傷害性Ｔ細胞の数が増加し、及び／又は前記腫瘍内の活性化ＮＫ細胞の数が増加する、請求項１～５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. 式Ｕ－ＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳｘＳＧＬＧＣ［配列番号３０］を含む長時間作用性ＣＮＰ誘導体を含む組成物であって、
    式中、
    ｘは、天然又は非天然のアミノ酸残基であり、但し、ｘは、メチオニン残基ではなく：
    Ｕは、式（Ｉ）：
    （脂肪族）ａ－（Ｘ）－ （Ｉ）
    の部分であり；
    式中、
    ａは、１であり；
    脂肪族は、任意選択的に置換されているＣ４～２４鎖（例えば、任意選択的に置換されているＣ１０～２４鎖、任意選択的に置換されているＣ１２～１８鎖）であり、化学的連結を介してＸに共有結合しており、例えば、カルボニル（例えば、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニル）、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しており；好ましくは、アミド又はエステル連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しており；より好ましくは、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニルを介してＸに共有結合しているＣ４～２４鎖であり；
    Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり、式中、Ｂは、１～８個アミノ酸残基又はペプチド配列であり、各アミノ酸残基は、独立して、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、及びＬｙｓから選択され；ｍは、０、１、２、又は３であり；ｎは、０、１、２、又は３であり；且つｍ及びｎの合計は、少なくとも１である、
    組成物。
  56. ｘは、ホモグルタミンであり、脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結、例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；ａは、１であり；Ｂは、Ｇｌｙであり；ｍは、０、１、又は２であり、且つｎは、１である、請求項５５に記載の組成物。
  57. ｘは、ホモグルタミンであり、脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結、例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；ａは、１であり；Ｂは、Ｇｌｙであり；ｍは、１であり、且つｎは、１である、請求項５５に記載の組成物。
  58. ｘは、ホモグルタミンであり、脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結、例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；ａは、１であり；ｍは、１であり、且つｎは、０である、請求項５５に記載の組成物。
  59. ｘは、ホモグルタミン（ホモＱ）［配列番号１６］であり、Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり；式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）；脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結、例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり；Ｂは、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基であり；ｍは、０であり、且つｎは、２である、請求項５５に記載の組成物。
  60. ｘは、ホモグルタミン（ホモＱ）［配列番号１７］であり、Ｕは、（脂肪族）ａ－（Ｘ）－であり；式中、ａは、０又は１であり（好ましくは、ａは、１であり）；脂肪族は、カルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は化学的連結、例えば、チオエーテル、エーテル、チオエーテル、カルバメート部分、Ｘとの結合等を介してＸに共有結合しているＣ１８鎖であり；好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド若しくはエステル連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であり；より好ましくは、脂肪族は、Ｘとのアミド連結の一部としてのカルボニル（例えばＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ））を介してＸに共有結合している分岐した若しくは直鎖の任意選択的に置換されているＣ１８鎖であるか、又は脂肪族は、ＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｘは、リンカー（γＥ）ｍ－（Ｂ）ｎであり；Ｂは、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基であり；ｍは、１であり、且つｎは、２である、請求項５５に記載の組成物。
  61. ｘは、ホモグルタミンであり、脂肪族は、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）又はＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｂは、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基であり、ｍは、０であり、且つｎは、２である、請求項５５に記載の組成物。
  62. ｘは、ホモグルタミンであり、脂肪族は、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）又はＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｂは、２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸残基であり、ｍは、１であり、且つｎは、２である、請求項５５に記載の組成物。
  63. ｘは、ホモグルタミンであり、脂肪族は、ＣＨ３（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）又はＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）であり；Ｂは、（２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸）－（２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸）－（Ｇｌｙ）であり、ｍは、１であり、且つｎは、１である、請求項５５に記載の組成物。
  64. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－γＥ－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２０］である、請求項５５に記載の組成物。
  65. 前記長時間作用性ＣＮＰ誘導体は、システイン残基間にジスルフィド結合を含むＨＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）１６Ｃ（＝Ｏ）－Ａｅｅａ－Ａｅｅａ－ＧＣＦＧＬＫＬＤＲＩＧＳホモＱＳＧＬＧＣ［配列番号２１］である、請求項５５に記載の組成物。
JP2022575994A 2020-06-12 2021-06-11 Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド及び癌の処置におけるその方法 Pending JP2023530273A (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063038606P 2020-06-12 2020-06-12
US63/038,606 2020-06-12
US202063039225P 2020-06-15 2020-06-15
US63/039,225 2020-06-15
PCT/US2021/037061 WO2021252931A2 (en) 2020-06-12 2021-06-11 C-type natriuretic peptides and methods thereof in treating cancer

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2023530273A true JP2023530273A (ja) 2023-07-14
JPWO2021252931A5 JPWO2021252931A5 (ja) 2024-06-18

Family

ID=78845937

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022575994A Pending JP2023530273A (ja) 2020-06-12 2021-06-11 Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド及び癌の処置におけるその方法

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20230241164A1 (ja)
EP (1) EP4164672A4 (ja)
JP (1) JP2023530273A (ja)
KR (1) KR20230024353A (ja)
CN (1) CN115968296A (ja)
AU (1) AU2021288045A1 (ja)
CA (1) CA3184150A1 (ja)
IL (1) IL298992A (ja)
WO (1) WO2021252931A2 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20240118914A (ko) 2021-01-20 2024-08-05 바이킹 테라퓨틱스 인코포레이티드 대사 및 간 질환 치료를 위한 조성물 및 방법
US12077561B2 (en) 2022-11-02 2024-09-03 Novo Nordisk A/S CNP compounds

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL142118A0 (en) * 2001-03-20 2002-03-10 Prochon Biotech Ltd Method and composition for treatment of skeletal dysplasias
US7488713B2 (en) * 2004-03-18 2009-02-10 University Of South Florida Cancer treatment using C-type natriuretic peptides
CA2707840A1 (en) * 2007-08-20 2009-02-26 Allozyne, Inc. Amino acid substituted molecules
EP2658979B1 (en) * 2010-12-27 2018-02-14 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising natriuretic peptides and methods of use thereof
WO2012118042A1 (ja) * 2011-02-28 2012-09-07 独立行政法人国立循環器病研究センター 悪性腫瘍転移抑制用医薬
US9233143B2 (en) * 2011-08-19 2016-01-12 National Cerebral And Cardiovascular Center Medicinal agent for preventing exacerbation of malignant tumor, comprising combination of natriuretic peptide receptor GC-A and GC-B agonists
WO2016110577A1 (en) * 2015-01-09 2016-07-14 Ascendis Pharma A/S Cnp prodrugs
CN108472336B (zh) * 2015-07-30 2022-05-31 生物马林药物股份有限公司 C型利尿钠肽变体在治疗骨骼发育不良中的用途
JP6782932B2 (ja) * 2015-11-12 2020-11-11 国立研究開発法人国立循環器病研究センター Ｎｐｒ−ａアゴニストの新規用途
AU2017205268B2 (en) * 2016-01-08 2022-02-17 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S CNP prodrugs with large carrier moieties
CA3056433A1 (en) * 2017-03-22 2018-09-27 Pharmain Corporation Npra agonists, compositions, and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
AU2021288045A1 (en) 2023-02-09
WO2021252931A3 (en) 2022-02-03
EP4164672A4 (en) 2024-10-09
CN115968296A (en) 2023-04-14
CA3184150A1 (en) 2021-12-16
EP4164672A2 (en) 2023-04-19
WO2021252931A2 (en) 2021-12-16
IL298992A (en) 2023-02-01
KR20230024353A (ko) 2023-02-20
US20230241164A1 (en) 2023-08-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3510044B1 (en) Amylin analogues
EP3271381B1 (en) Amylin analogues
EP3061459B1 (en) Composition for treating and preventing benign prostatic hyperplasia
EP3046573B1 (en) Amylin analogues
JP2015078208A (ja) 治療用ペプチド模倣大環状分子
JP2023530273A (ja) Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド及び癌の処置におけるその方法
JP2023524530A (ja) 免疫原性が低い癌の癌細胞死滅を増強するための３剤併用療法
US20230263729A1 (en) Poly(ethylene glycol)-block-poly(propylene sulfide) nanocarrier platform for enhanced efficacy of immunosuppressive agents
EP3046570A1 (en) Compositions and methods for protecting the kidney from ischemia reperfusion injury
US11896642B2 (en) Bioconjugates with chemically modified backbones
JP2018058879A (ja) 線維症性疾患の処置のためのＴｒａｉｌレセプターアゴニスト
WO2017082186A1 (ja) Ｎｐｒ－ａアゴニストの新規用途
CA3109702A1 (en) Peptides and compositions for targeted treatment and imaging
AU2016287787B2 (en) B1SP fusion protein therapeutics, methods, and uses
KR102017973B1 (ko) 항-b형 간염 바이러스 x 단백질 폴리펩티드 약제
CN116134138A (zh) 靶向细胞内诱瘤蛋白的抗体、或其单链可变片段与癌细胞穿透肽的融合蛋白、及其用途
US20030199441A1 (en) Procollagen (III) Propeptides and Related Substances for Treating Fibrotic Diseases
JP6038795B2 (ja) ナトリウム利尿ペプチド受容体ｇｃ−ａアゴニスト及びｇｃ−ｂアゴニストを組み合わせてなる悪性腫瘍の増悪防止用医薬
CN118076382A (zh) 用于治疗或预防癌症的药用组合物和方法
JPWO2006132245A1 (ja) 腫瘍増殖抑制剤

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240610

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20240610