CN107365293A - 牛樟芝萃取物及化合物用于制备促进毛发增生组合物的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种牛樟芝萃取物或化合物用于制备促进毛发增生组合物的用途，其中该牛樟芝化合物如下列化学式1所示。化学式1所示的化合物由牛樟芝萃取物中所纯化，其与牛樟芝萃取物皆可作为促进毛发增生组合物中的有效成分，且该促进毛发增生组合物可被制备成液状、泡沫状、喷雾状、凝胶状或膏状，或是包括以药学上可接受的载剂等多种形态，用以施用于个体而促进个体毛发的生长。

Description

牛樟芝萃取物及化合物用于制备促进毛发增生组合物的用途
技术领域
本发明是关于一种牛樟芝萃取物，尤其是关于一种将该牛樟芝萃取物以及由其中纯化的化合物用于制备促进毛发增生组合物的用途。
背景技术
牛樟芝(Antrodia camphorata)，又称樟芝、牛樟菇或红樟芝等，属于非褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)的多年生蕈菌类，为台湾特有种真菌，仅生长于台湾保育类树种-牛樟树(Cinnamoum kanehirai Hay)的中空腐朽心材内壁上。由于牛樟树分布数量极为稀少，加上人为的盗伐，使得寄生于其中方能生长的野生牛樟芝数量更形稀少，另一方面，由于其子实体生长相当缓慢，生长期仅在六月至十月之间，因此价格非常昂贵。牛樟芝的子实体为多年生，无柄，呈木栓质至木质，其具强烈的樟树香气，且其形态多变化，有板状、钟状、马蹄状或塔状。初生时为扁平型并呈鲜红色，之后其周边会呈现放射反卷状，并向四周扩展生长，颜色亦转变为淡红褐色或淡黄褐色，并有许多细孔，此是牛樟芝药用价值最丰富的部位。
在台湾民俗医学上，牛樟芝具有解毒、减轻腹泻症状、消炎、治疗肝脏相关疾病及抗癌等功用。牛樟芝如同一般食药用的蕈菇类，具有许多复杂的成分，已知的生理活性成分中，包括：三萜类化合物(triterpenoids)、多醣体(polysaccharides，如β-D-葡聚醣)、腺苷(adenosine)、维生素(如维生素B、烟碱酸)、蛋白质(含免疫球蛋白)、超氧歧化酵素(superoxide dismutase,SOD)、微量元素(如：钙、磷、锗)、核酸、固醇类以及血压稳定物质(如antodia acid)等，这些生理活性成分被认为具有抗肿瘤、增加免疫能力、抗过敏、抗病菌、抗高血压、降血糖及降胆固醇等多种功效。
虽然由目前诸多的实验可得知牛樟芝的萃取物具有前述功效，且其所含成分亦陆续被分析出来，但牛樟芝的萃取物中是否仍有其他医疗或医美用途的有效成分或化合物未被找出，仍有待进一步的实验研究来找寻与确认。
发明内容
为了进一步寻找并确认牛樟芝的萃取物本身或/及是否有其他的有效成分及用途，以能应用于疾病治疗或医美产业，本发明最终确认了牛樟芝萃取物(以下亦称为SY-C)以及该萃取物中的一种化合物确实具有促进毛发增长的功效，因此本发明提供了一种将牛樟芝萃取物SY-C或化合物利用于制备促进毛发增生组合物的用途，其中该牛樟芝萃取物SY-C是由以下方法制得：以水或有机溶剂萃取牛樟芝菌丝体、子实体或二者的混合物，获得一粗抽物；将该粗抽物以二氯甲烷/水溶液进行分配萃取法，使其分为二氯甲烷层及水层；以及将二氯甲烷层取出，以硅胶柱层析法分别以正己烷/二氯甲烷与二氯甲烷冲提液冲提后，合并其冲提后所获得的区分并加以回收，即可获得该牛樟芝萃取物SY-C。此外，该牛樟芝化合物是如下列化学式1所示(以下亦称为SY-1)：
，
或该化学式1药理上可接受的盐类。
在本发明的一实施例中，所述的促进毛发增生组合物可为液状、泡沫状、喷雾状、凝胶状或膏状，而能以各种型式施用于需要促进毛发生长的个体，其中，该个体可为具有毛囊的温血动物体。
在本发明的另一实施例中，所述的促进毛发增生组合物可进一步将其制备为洗发精、润发乳、发胶、慕斯、软膏、生发水或敷片(例如贴布)，因而能够在日常生活清洁、保养或造型过程中，达到促进毛发增生的目的。
在本发明的一实施例中，所述的促进毛发增生组合物可进一步包括药学上可接受的载剂，而将该牛樟芝萃取物或化合物制备成促进毛发增生的医药组合物，而进一步利用于治疗毛发无法生长或生长缓慢的个体，其中，该个体可为具有毛囊的温血动物体。
以下将配合图式进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。
附图说明
图1是显示牛樟芝萃取物等对小鼠毛发生长外观变化影响的照片比较图，其是分别以SY-1、牛樟芝萃取物SY-C、对照组以及比对组进行实验的结果比较图。
图2是显示牛樟芝萃取物等对小鼠毛发生长影响量化后的曲线图，其是分别以SY-1、牛樟芝萃取物SY-C、对照组以及比对组进行实验的结果比较图。
具体实施方式
牛樟芝萃取物SY-C与化合物SY-1的制备
取牛樟芝(Antrodia camphorata)菌丝体、子实体或二者的混合物，以水或有机溶剂进行萃取，藉以取得牛樟芝水萃取物或有机溶剂萃取物。首先，取1.0kg牛樟芝其菌丝体、子实体或二者的混合物以10倍量的酒精抽取2次后，再将其合并浓缩，可得粗抽物约230g。将前述粗抽物进一步以二氯甲烷/水(1:1)溶液进行3次分配萃取法，使其分为二氯甲烷层约102.6g及水层约127.4g，取二氯甲烷层6.0g以硅胶柱层析法经过正己烷/二氯甲烷(1:4)、二氯甲烷、甲醇/二氯甲烷(5:95)的溶媒分离后，可分离为LT-E-D-1、LT-E-D-2、LT-E-D-3、LT-E-D-4等四区分(fraction)。上述四区分的取得分别为：以正己烷/二氯甲烷(1:4)及二氯甲烷冲提液分别进行冲提后，将获得的区分合并后即为LT-E-D-1，再以甲醇/二氯甲烷(5:95)冲提液冲提，其前半部获得的区分为LT-E-D-2，后半部获得的区分则为LT-E-D-3，最后以甲醇冲提获得LT-E-D-4。其中，LT-E-D-1区分经回收即为牛樟芝萃取物SY-C。
为进一步纯化出牛樟芝萃取物SY-C其中的有效成分，是将LT-E-D-1层取出，之后可利用硅胶柱层析法或经制备型高效液相层析仪加以分离纯化，即可纯化出以下化学式1(即SY-1)所示的化合物4,7-二甲氧基-5-甲基-1,3-苯并二氧环(4,7-dimethoxy-5-methyl-l,3-benzodioxole)。
其中，有机溶剂可包括醇类(例如甲醇、乙醇或丙醇)、酯类(例如乙酸乙酯)、烷类(例如己烷)或卤烷(例如氯甲烷、氯乙烷)，但并不以此为限。其中较佳者为醇类，更佳者为乙醇。该有机溶剂与菌丝体、子实体或二者的混合物的重量比可为15:1～5:1，较佳为12:1～8:1，但并未仅限于此。此外，二氯甲烷/水溶液的比例可为2:1～1:2之间，亦并未仅限于此。
关于4,7-二甲氧基-5甲基-1,3-苯并二氧环(4,7-dimethoxy-5-methyl-l,3-benzodioxole)的萃取，可参考Tu SH.,J Agric FoodChem.2012Apr 11；60(14):3612-8中所述。在先前相关研究中，无论是牛樟芝萃取物或SY-1，主要着重于其抗肿瘤效果，并无任何关于毛发增生的研究。而本发明是利用牛樟芝萃取物SY-C以及如化学式1的化合物(SY-1)及其盐类进行实验，发现并证实二者皆具有毛发增生的功效，属于前所未见的新颖用途。
动物实验条件
首先，准备实验用小鼠。本实验小鼠是购自国家实验动物中心，属C57BL/6JNarl品系，年龄为5周。将其饲养于国防医学院动物中心，饲育温度维持在18～26度，相对湿度为30％～70％，光照周期为12小时光照，12小时黑夜，并且提供充足饲料和饮水。
实施例一
试验前将小鼠以腹腔注射方式给予0.6g/kg Avertin进行麻醉。Avertin的制备是以0.6g的2,2,2-三溴乙醇(2,2,2-Tribromoethanol)加上1.5mL的2-甲基-2-丁醇(2-Methyl-2-butanol)，再加入生理食盐水定量至50ml后，以0.2μm过滤膜过滤，置于4℃下保存。
待小鼠麻醉后，将其背部毛发剃除1x2cm2的面积。使用棉花棒沾取SY-1溶液(10μM,1.96μg/mL的10％乙醇溶液)后，将其均匀涂抹在毛发增生试验区域上。试验期间，每天涂抹SY-1并每四天照相记录其毛发生长情形，试验时间共4周。相关促进毛发生长活性的测试方法可参Biol Pharm Bull 37:44-53,2014。
实施例二
试验前以同实施例一的方式对小鼠以腹腔注射方式给予0.6g/kg Avertin进行麻醉。
待小鼠麻醉后，将其背部毛发剃除1x2cm2的面积。使用棉花棒沾取牛樟芝萃取物SY-C溶液(相当于10μM的SY-1的10％乙醇溶液)后，将其均匀涂抹在毛发增生试验区域上。试验期间，每天涂抹牛樟芝萃取物并每四天照相记录其毛发生长情形，试验时间共4周。
实施例三
试验前以同实施例一的方式对小鼠以腹腔注射方式给予0.6g/kg Avertin进行麻醉。
待小鼠麻醉后，将其背部毛发剃除1x2cm2的面积。使用棉花棒沾取10％乙醇溶液，将其均匀涂抹在毛发增生试验区域上，作为对照组。试验期间，每天涂抹生理食盐水并每四天照相记录其毛发生长情形，试验时间共4周。
实施例四
试验前以同实施例一的方式对小鼠以腹腔注射方式给予0.6g/kg Avertin进行麻醉。
待小鼠麻醉后，将其背部毛发剃除1x2cm2的面积。使用棉花棒沾取3％敏诺西迪(minoxidil,6-Piperidin-1-ylpyrimidine-2,4-diamine 3-oxide的10％乙醇溶液)，将其均匀涂抹在毛发增生试验区域上，作为比对组。试验期间，每天涂抹敏诺西迪并每四天照相记录其毛发生长情形，试验时间共4周。
毛发生长结果判读
毛发生长活性的判读方式为观察小鼠背侧的皮肤是否产生变黑现象，若有，即表示其毛囊是在生长期阶段。毛发生长的判读是由三位不参与此研究的实验室人评定，所得每个分数的平均值作为毛发生长指数。给分标准：0＝没有生长，1＝20％，2＝20-40％，3＝40-60％，4＝60-80％，5＝80％以上毛发的生长指数评定:每四天一次，连续4周。
请同时参阅图1与图2，图1是SY-1、牛樟芝萃取物SY-C等对小鼠毛发生长外观变化影响的照片比较图，而图2是将小鼠毛发生长影响量化后的曲线图。当将小鼠背部毛发剃除以1cm x2cm的面积，并每日以试验化合物涂抹后，在加入具有促进毛发生长药物敏诺西迪的比对组，随着天数增加，在第12日起小鼠背部皮肤即已长出毛发，而处理以SY-1及牛樟芝萃取物SY-C者，则在第16日长出毛发，而从第16日起至28日实验结束，其毛发生成面积与毛发量，均显著高于对照组(见图1)。另一方面，从图2的量化结果亦显示与对照组相较，皆具有显著差异，尤其牛樟芝萃取物SY-C，其功效与敏诺西迪相当或更优。由以上结果显示，牛樟芝萃取物SY-C及SY-1均具有显著促进毛发生长的作用。
前述将牛樟芝萃取物SY-C或是化合物SY-1用于制备促进毛发增生的组合物时，该促进毛发增生组合物可为液状、泡沫状、喷雾状、凝胶状或膏状，但并不以此为限。且该促进毛发增生组合物，尚可依据医药目的或是美容、清洁保养等目的，进一步例如加入药学上可接受的载剂，例如适当的赋形剂、稀释剂、稳定剂等而制备成医药组成物，或是加入着色剂、香料等而制备成洗发精、润发乳、发胶、慕斯、软膏、生发水或敷片(例如贴布)。因此，通过本发明将牛樟芝萃取物SY-C或牛樟芝化合物SY-1应用于制备可促进毛发增生组合物，利用该促进毛发增生组合物，可改善或治疗具有毛囊的温血动物体，例如哺乳类动物、禽类或人类，其毛发无法生长或生长缓慢的问题。

Claims (10)

1.一种牛樟芝萃取物用于制备促进毛发增生组合物的用途，其中该牛樟芝萃取物由以下方法制得：
以水或有机溶剂萃取牛樟芝菌丝体、子实体或二者的混合物，获得粗抽物；
将所述粗抽物以二氯甲烷/水溶液进行分配萃取法，使其分为二氯甲烷层及水层；以及
将二氯甲烷层取出，以硅胶柱层析法分别以正己烷/二氯甲烷与二氯甲烷冲提液冲提后，合并其冲提后所获得的区分并加以回收，即获得该牛樟芝萃取物。
2.根据权利要求1所述牛樟芝萃取物用于制备促进毛发增生组合物的用途，其特征在于，所述促进毛发增生组合物是液状、泡沫状、喷雾状、凝胶状或膏状。
3.根据权利要求1或2所述牛樟芝萃取物用于制备促进毛发增生组合物的用途，其特征在于，所述促进毛发增生组合物进一步制备成洗发精、润发乳、发胶、慕斯、软膏、生发水或敷片。
4.根据权利要求1或2所述牛樟芝萃取物用于制备促进毛发增生组合物的用途，其特征在于，所述促进毛发增生组合物是使用于具有毛囊的温血动物体。
5.根据权利要求1或2所述牛樟芝萃取物用于制备促进毛发增生组合物的用途，其特征在于，所述促进毛发增生组合物进一步包括药学上可接受的载剂。
6.一种牛樟芝化合物用于制备促进毛发增生组合物的用途，该牛樟芝化合物如下列化学式1所示：
，
或该化学式1药理上可接受的盐类。
7.根据权利要求6所述牛樟芝化合物用于制备促进毛发增生组合物的用途，其特征在于，所述促进毛发增生组合物是液状、泡沫状、喷雾状、凝胶状或膏状。
8.根据权利要求6或7所述牛樟芝化合物用于制备促进毛发增生组合物的用途，其特征在于，所述促进毛发增生组合物进一步制备成洗发精、润发乳、发胶、慕斯、软膏、生发水或敷片。
9.根据权利要求6或7所述牛樟芝化合物用于制备促进毛发增生组合物的用途，其特征在于，所述促进毛发增生组合物是使用于具有毛囊的温血动物体。
10.根据权利要求6或7所述牛樟芝化合物用于制备促进毛发增生组合物的用途，其特征在于，所述促进毛发增生组合物进一步包括药学上可接受的载剂。
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Application publication date: 20171121

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