CN107362354A - 一种胰岛素口服纳米制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体为一种胰岛素口服纳米制剂及其制备方法。本发明提供的胰岛素口服纳米制剂，是以胆酸修饰的季铵化壳聚糖和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯作为胰岛素复合载体而制备得到载胰岛素的纳米粒子溶液。本发明将季胺基团和胆酸基团无规连接到壳聚糖上，得到胆酸修饰的季铵化壳聚糖，再与胰岛素通过静电和疏水相互作用形成纳米粒子，使得纳米粒子可以利用回肠和肝脏中的胆酸肝肠循环通道而通过肠壁细胞将胰岛素输送到肝脏发挥作用；纳米粒子中加入羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯，可以保护纳米粒子在胃部不解离、从而保护胰岛素在消化道不被降解，并且增加纳米粒子在小肠部位的停留时间，帮助纳米粒子通过肠粘膜和肠壁细胞。

Description

一种胰岛素口服纳米制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种胰岛素口服纳米制剂及其制备方法。
背景技术
糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病。目前，通过皮下注射胰岛素是糖尿病人最有效的血糖控制方法【中国实用医药,2009,4(29):220～222】。将胰岛素通过皮下给药后，胰岛素易被皮下周边组织吸收【Diabetes Technology&Therapeutics.2004,6(4):510～517】并且容易引起高胰岛素血症【中国新药杂志,2011,20(21):2095～2099】。而将胰岛素通过口服方式给药，胰岛素可由肠道吸收进入肝门静脉系统，然后通过血液循环到达肝脏部位【中国新药杂志,2015,24(22):2560～2571】。口服给药接近于生理状态下的胰岛素分泌模式，是最理想的胰岛素给药方式。但是胰岛素口服以后在消化道中被酶降解，而且胰岛素不能通过肠道粘膜和上皮细胞被人体吸收【Expert opinion on drug delivery,2014,11:1323～1335】。与皮下注射相比，目前的胰岛素口服体系均存在生物利用率较低的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供可以提高胰岛素生物利用率的胰岛素口服纳米制剂及其制备方法。
本发明提供的胰岛素口服纳米制剂，是以胆酸修饰的季铵化壳聚糖和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯作为胰岛素复合载体而制备得到载胰岛素的纳米粒子溶液。
肝脏是调节人体血糖最重要的器官，能够在胰岛素的作用下将血液中的血糖快速地转化为肝糖原或者氨基酸、脂肪酸，降低血糖水平【肝脏,2010,15(2):137～139)】。通过输送载体保护胰岛素在消化道不被降解，并且将胰岛素有效地输送至肝脏部位可以提高胰岛素口服生物利用率。目前，这样的胰岛素输送载体尚未见报道。
壳聚糖是一种正电荷多糖，在中性水溶液中由于伯胺基的去质子化而溶解性不好。在壳聚糖的伯胺基团上连接季铵基团可以增加壳聚糖在中性条件下的正电荷和水溶性。胆酸是一种由肝脏生产的天然两亲性小分子，具有促进肠道吸收和肝脏靶向的性质，可以应用于口服药物的肝脏输送【Journal of Controlled Release,2016,240:332～348】。在本发明中，通过酰胺化反应将胆酸无规连接到季铵化壳聚糖上，得到胆酸修饰的季铵化壳聚糖(记为HTCC-CA)。HTCC-CA可以与胰岛素(INS)通过静电和疏水相互作用形成纳米粒子，记为INS/HTCC-CA。无规分布的胆酸基团在INS/HTCC-CA纳米粒子的内部与表面均有分布，不仅可以增加纳米粒子的稳定性，而且使得纳米粒子可以利用回肠和肝脏中的胆酸肝肠循环通道而通过肠壁细胞将胰岛素输送到肝脏发挥作用。羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)是一种常用的肠溶衣材料，在肠道具有很好的黏附性【Biomaterials,2015,59:144～159】。在INS/HTCC-CA纳米粒子中加入HPMCP，可以保护纳米粒子在胃部不解离、从而保护胰岛素在消化道不被降解，并且增加纳米粒子在小肠部位的停留时间，帮助纳米粒子通过肠粘膜和肠壁细胞。
本发明提供的胰岛素口服纳米制剂的制备方法，具体步骤如下：
(1)制备胆酸修饰的季铵化壳聚糖，每100个壳聚糖糖基单元上面连接有10-70个季胺基团和3-40个胆酸基团，所连接的季胺基团和胆酸基团在壳聚糖分子链上是无规分布的；
(2)将胰岛素、胆酸修饰的季铵化壳聚糖和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯分别溶解在水溶液中，先混合胰岛素和胆酸修饰的季铵化壳聚糖溶液，然后再与羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶液混合；或者先混合胰岛素和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶液，然后再与胆酸修饰的季铵化壳聚糖溶液混合，即得到载胰岛素的纳米粒子溶液。
在纳米粒子溶液中，胰岛素的浓度为0.1-5mg/mL,胆酸修饰的季铵化壳聚糖浓度为0.1-20mg/mL，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的浓度为0.1-20mg/mL。
本发明所述的纳米粒子可以作为胰岛素的口服制剂。
附图说明
图1.纳米粒子在37℃模拟体液缓冲液中的胰岛素释放。
图2.糖尿病小鼠连续每天一次给药胰岛素和INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子的血糖变化(n＝3-5)。
具体实施方式
实施例1.季铵化壳聚糖(HTCC)的制备
将2g壳聚糖(分子量为5-50kDa，脱乙酰度为85-95％)溶解于100mL含1％(v)醋酸的水溶液中，加入50mL异丙醇后将溶液加热至60℃，逐滴加入一定体积的缩水甘油基三甲基氯化铵后将溶液加热至80℃并搅拌24小时进行季铵化反应。用丙酮对反应产物进行沉淀，然后将沉淀物溶解于去离子水中，重复三次；接着将沉淀物溶解于去离子水中并对去离子水进行透析，最后将溶液冻干得到纯化的季铵化壳聚糖。用AgNO3标准溶液测定季铵化壳聚糖溶液中的氯离子浓度，从而计算出壳聚糖的季铵化程度，参见表1，结果表明在固定壳聚糖投料量的情况下，随着缩水甘油基三甲基氯化铵投料量的增加，季铵化程度提高，ζ-电位也逐渐升高，即季铵化壳聚糖具有更强的正电性。
表1.各种季铵化壳聚糖的季铵化程度和ζ-电位。
*连接的季胺基团数目与壳聚糖糖基单元数目的比值。
实施例2.胆酸修饰的季铵化壳聚糖(HTCC-CA)的制备
将0.5g不同季铵化程度的季铵化壳聚糖溶解于100mL去离子水中。将0.1-0.5g胆酸(CA)溶解于50mL无水甲醇中，在胆酸甲醇溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)(EDC)与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，其中胆酸：EDC：NHS＝1：1.5：1.5(摩尔比)，在室温下搅拌30分钟后将甲醇溶液缓慢滴加到季铵化壳聚糖水溶液中，在37℃搅拌24小时进行反应。反应产物先对弱碱溶液进行透析，然后对去离子水进行透析，将透析后的溶液冻干即得到纯化的胆酸修饰的季铵化壳聚糖。通过1H核磁共振谱计算胆酸的修饰程度，结果见表2。
利用芘和8-苯胺基-1-萘磺酸钠(ANS)作为荧光探针对聚合物的疏水性进行表征。芘作为荧光探针可以用来表征HTCC-CA的疏水聚集行为，芘荧光发射谱中第一峰与第三峰的峰强比值(I1/I3)减小表明溶液中HTCC-CA疏水聚集的程度增加。表2的数据显示在固定HTCC-CA和芘浓度的条件下，溶液中芘的I1/I3值随着胆酸修饰程度的增加而逐渐减小，证明了所修饰的胆酸基团在水溶液中形成了疏水聚集体。ANS对所处环境的极性有响应性，当ANS与聚集体表面的疏水基团结合时，其荧光信号会大幅增强并向短波长移动。表2的数据表明在HTCC-CA溶液中ANS的荧光强度随着胆酸修饰程度的提高而逐渐增强，证明了无规修饰的胆酸基团不仅分布在HTCC-CA聚集体的内部，在聚集体表面也有一定的胆酸分布，并且聚集体表面的胆酸基团随着胆酸修饰程度的增加而增加。
表2.各种胆酸修饰的季铵化壳聚糖样品的胆酸修饰度和疏水性表征结果。
*连接的胆酸基团数目与壳聚糖糖基单元数目的比值。
实施例3.胰岛素(INS)/HTCC-CA纳米粒子的制备—共混方法
将胰岛素溶解于0.01mol/L HCl溶液中，调节溶液pH至7.4后制成0.1-5.0mg/mL的胰岛素溶液A。将胆酸修饰的季铵化壳聚糖(HTCC-CA)溶解于去离子水中，调节溶液pH至7.4后制成0.1-20mg/mL的HTCC-CA溶液B。将一定体积的胰岛素溶液A缓慢滴加入一定体积的HTCC-CA溶液B中并进行搅拌，得到INS/HTCC-CA纳米粒子1。通过光散射测定纳米粒子的粒径(水合直径Dh)以及ζ-电位。利用超滤方法分离溶液中未包埋的自由胰岛素，通过BCA试剂盒测定超滤液中自由胰岛素的浓度，用下式计算胰岛素的包埋效率：
包埋效率(％)＝((总胰岛素质量-自由胰岛素质量)/总胰岛素质量)×100％；结果见表3。
表3.通过共混方法制备的INS/HTCC-CA纳米粒子的性质及胰岛素包埋效率。
实施例4.INS/HTCC-CA纳米粒子的制备—超声方法
按照实施例3中的方法制备胰岛素溶液A和HTCC-CA溶液B。将一定体积的胰岛素溶液A缓慢滴加入一定体积的HTCC-CA溶液B后，将混合溶液置于冰浴中，利用细胞破碎仪对混合溶液进行超声处理。超声条件为输出功率285W、频率20kHz、工作时间1秒、间歇时间1秒、累计时间1分钟。超声是一个制备纳米粒子的高能方法，超声后得到INS/HTCC-CA纳米粒子2。
表4.通过超声方法制备的INS/HTCC-CA纳米粒子的性质及胰岛素包埋效率。
实施例5.INS/HTCC-CA纳米粒子的制备—透析方法
将胰岛素溶解于0.01mol/L HCl溶液中，调节溶液pH至2.0后加入等体积无水乙醇得到胰岛素浓度为0.1-5.0mg/mL的胰岛素溶液C。将胆酸修饰的季铵化壳聚糖溶解于去离子水中，调节溶液pH至2.0后加入等体积无水乙醇得到HTCC-CA浓度为0.1-20mg/mL的HTCC-CA溶液D。将一定体积的胰岛素溶液C缓慢滴加入一定体积的HTCC-CA溶液D后搅拌均匀并静置过夜，然后将混合溶液对去离子水透析除去乙醇及过量的HCl，将透析后的溶液调节pH至7.4后得到INS/HTCC-CA纳米粒子3。
表5.通过透析方法制备的INS/HTCC-CA纳米粒子的性质及胰岛素包埋效率。
实施例6.INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子的制备—共混方法
将羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)溶解于二甲基亚砜后依次对磷酸缓冲溶液(0.01mol/L，pH 7.4)及去离子水进行透析，调节溶液pH至7.4，得到HPMCP浓度为1.0-20.0mg/mL的HPMCP水溶液E。按照实施例3制备INS/HTCC-CA纳米粒子1溶液。将一定体积的INS/HTCC-CA纳米粒子1溶液缓慢滴加到一定体积的HPMCP溶液E中并搅拌均匀，得到INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子4。
表6.INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子的性质及胰岛素包埋效率。
实施例7.INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子的制备—超声方法
按照实施例6中的方法制备INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子4后，将纳米粒子溶液置于冰浴中，利用细胞破碎仪对溶液进行超声处理，超声条件为输出功率95W或者285W、频率20kHz、工作时间1秒、间歇时间1秒、累计时间1分钟。超声后得到INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子5。
表7.通过超声方法制备的INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子的性质及胰岛素包埋效率。
实施例8.INS/HPMCP/HTCC-CA纳米粒子的制备
按照实施例3制备胰岛素溶液A和HTCC-CA溶液B，按照实施例6制备HPMCP溶液E。将一定体积的胰岛素溶液A缓慢滴加入一定体积的HPMCP溶液E中并搅拌均匀，然后将INS和HPMCP的混合溶液缓慢滴加入HTCC-CA溶液B中并搅拌均匀，得到INS/HPMCP/HTCC-CA纳米粒子6。
表8.INS/HPMCP/HTCC-CA纳米粒子的性质及胰岛素包埋效率。
实施例9.INS/HTCC/HPMCP纳米粒子的制备
将季铵化壳聚糖(HTCC)溶解于去离子水中，调节溶液的pH至7.4后得到HTCC浓度为0.1-20mg/mL的HTCC溶液F。按照实施例3制备胰岛素溶液A，按照实施例6制备HPMCP溶液E。将一定体积的胰岛素溶液A缓慢滴加入一定体积的HTCC溶液F中并搅拌均匀，得到INS/HTCC纳米粒子，再将INS/HTCC纳米粒子溶液缓慢滴加入一定体积的HPMCP溶液E中，得到INS/HTCC/HPMCP纳米粒子7。
表9.INS/HTCC/HPMCP纳米粒子的性质及胰岛素包埋效率。
实施例10.INS/HPMCP/HTCC纳米粒子的制备
按照实施例3制备胰岛素溶液A，按照实施例6制备HPMCP溶液E，按照实施例9制备HTCC溶液F。将一定体积的胰岛素溶液A缓慢滴加入一定体积的HPMCP溶液E中并搅拌均匀，再将INS与HPMCP的混合溶液缓慢滴加入一定体积的HTCC溶液F中，得到INS/HPMCP/HTCC纳米粒子8。
表10.INS/HPMCP/HTCC纳米粒子的性质及胰岛素包埋效率。
实施例11.纳米粒子在体外条件下的胰岛素释放
按照实施例3、表3中序号4的配方制备INS/HTCC-CA纳米粒子。
按照实施例6、表6中序号6的配方制备INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子。
按照实施例8、表8中序号5的配方制备INS/HPMCP/HTCC-CA纳米粒子。
将1mL胰岛素浓度为0.2mg/mL的胰岛素溶液或纳米粒子溶液置于透析管中，将透析管置于9mL透析液中，在0-2h期间的透析液为pH 2.0的HCl溶液，在2-24h期间的透析液为pH 7.4的PBS溶液(0.01mol/L磷酸缓冲液含0.15mol/L NaCl)，将透析装置放置于37℃水浴中，以70转/分钟的速度水平振荡。在预定的时间点取出1mL透析液然后加入1mL新鲜透析液，用BCA方法分析透析液中自由胰岛素的浓度。参见图1，结果显示，自由胰岛素在2小时的时候有90％的胰岛素通过透析膜。INS/HTCC-CA纳米粒子在pH 2.0溶液中的释放速率很快，2小时的时候有80％的胰岛素被释放出来。而两种含有HTCC-CA和HPMCP的纳米粒子：INS/HTCC-CA/HPMCP和INS/HPMCP/HTCC-CA中仅有不到30％的胰岛素被释放出来，证明这两种纳米粒子在胃酸环境(pH 2.0)中具有比较低的胰岛素释放速率，也就是说，这两种纳米粒子在消化道可以较好的保护胰岛素不被降解。
实施例12.小鼠口服纳米粒子以后胰岛素在肝脏的富集
将一定量的Cy5NHS ester荧光染料溶解于DMSO中，然后缓慢滴加入溶有1mg/mL胰岛素的0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液(pH 8.4)中，使得Cy5NHS ester与胰岛素的终浓度比为1:12(质量比)，将溶液混合均匀后于4℃避光静置4h，接着将混合溶液对pH 8.4的三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液透析24h，直至透析液中检测不到Cy5的荧光信号，对去离子水透析以后得到Cy5-INS溶液，于4℃避光储存。用Cy5-INS取代胰岛素制备如下纳米粒子，于4℃避光储存。
按照实施例3、表3中序号4的配方制备Cy5-INS/HTCC-CA纳米粒子。
按照实施例6、表6中序号6的配方制备Cy5-INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子。
按照实施例9、表9中序号2的配方制备Cy5-INS/HTCC/HPMCP纳米粒子。
将健康雌性ICR小鼠(25g±2g)自由进食进水饲养一周。将小鼠空腹12h(期间自由进水)后分为三组，每组分别以30IU/kg的胰岛素剂量灌胃一种纳米粒子溶液，在2h、6h、12h和24h将小鼠处死并取出肝脏，用PBS清洗肝脏表面三次，然后利用小动物光学活体成像仪在630nm激发、700nm发射条件下测量小鼠肝脏的总荧光强度。表11的结果显示，与INS/HTCC-CA和INS/HTCC/HPMCP纳米粒子相比，INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子明显提高了胰岛素在肝脏部位的富集，证明了HTCC-CA和HPMCP复合载体可以增加口服胰岛素在肝脏部位的富集。
表11.小鼠口服给药Cy5-INS/HTCC-CA、Cy5-INS/HTCC/HPMCP和Cy5-INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子以后在不同时间点的肝脏荧光强度(n＝3)。
实施例13.糖尿病小鼠降血糖实验
雄性ICR小鼠(约25g)禁食12h(期间可自由进水)后以200mg/kg的剂量于腹腔注射浓度为25mg/mL的四氧嘧啶溶液，三天后利用血糖仪测试小鼠空腹血糖，筛选出血糖大于300mg/dL的糖尿病小鼠进行分组实验。
按照实施例3、表3中序号4的配方制备INS/HTCC-CA纳米粒子。
按照实施例10、表10中序号2的配方制备INS/HPMCP/HTCC纳米粒子。
按照实施例9、表9中序号2的配方制备INS/HTCC/HPMCP纳米粒子。
按照实施例8、表8中序号5的配方制备INS/HPMCP/HTCC-CA纳米粒子。
按照实施例6、表6中序号6的配方制备INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子。
选出35只糖尿病小鼠，血糖水平为390±62mg/dL。将糖尿病小鼠分为7组，每组5只。作为对照组，组1口服灌胃生理盐水，组2以3IU/kg的剂量皮下注射胰岛素溶液。组3、组4、组5、组6和组7分别以30IU/kg的胰岛素剂量口服灌胃INS/HTCC-CA、INS/HPMCP/HTCC、INS/HTCC/HPMCP、INS/HPMCP/HTCC-CA和INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子。4小时后每只小鼠给食约0.2g，在2、4、6、9、12和24h用血糖仪及血糖试纸检测其尾静脉血糖浓度。表12的结果表明INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子可以显著提高胰岛素的口服生物利用度，是有效的胰岛素口服递送体系。
表12.小鼠口服灌胃生理盐水、皮下注射胰岛素及口服灌胃INS/HTCC-CA、INS/HPMCP/HTCC、INS/HTCC/HPMCP、INS/HPMCP/HTCC-CA和INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子的药理动力学数据分析(n＝5)。
*与注射胰岛素组相比较，通过0-24h血糖降低曲线上面部分的面积(AAC0-24)计算口服纳米粒子组的胰岛素药理生物利用度(PA)。
实施例14.糖尿病小鼠降血糖实验
按照实施例13造模和筛选糖尿病小鼠。
按照实施例8、表8中序号5的配方制备INS/HPMCP/HTCC-CA纳米粒子。
按照实施例6、表6中序号6的配方制备INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子。
选出28只糖尿病小鼠，血糖水平为420±94mg/dL。将糖尿病小鼠分为4组，每组7只。作为对照组，组1口服灌胃生理盐水，组2以2IU/kg的剂量皮下注射胰岛素溶液。组3和组4分别以30IU/kg的胰岛素剂量口服灌胃INS/HPMCP/HTCC-CA和INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子。12小时后每只小鼠给食约1g，在2、4、6、9、12和24h用血糖仪及血糖试纸检测其尾静脉血糖浓度。表13的结果表明INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子可以显著提高胰岛素的口服生物利用度，是有效的胰岛素口服递送体系。
表13.小鼠口服灌胃生理盐水、皮下注射胰岛素及口服灌胃INS/HPMCP/HTCC-CA和INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子的药理动力学数据分析(n＝7)。
*与注射胰岛素组相比较，通过0-24h血糖降低曲线上面部分的面积(AAC0-24)计算口服纳米粒子组的胰岛素药理生物利用度(PA)。
实施例15.糖尿病小鼠连续降血糖实验
按照实施例13造模和筛选糖尿病小鼠。
按照实施例6、表6中序号6的配方制备INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子。
选出15只糖尿病小鼠，血糖水平为315±137mg/dL。将糖尿病小鼠分为3组，每组5只。组1口服灌胃生理盐水，组2以2IU/kg的胰岛素剂量皮下注射INS溶液，组3口服灌胃30IU/kg的INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子。每天固定时间(以0h开始计时)给药，在给药后2h、6h和24h检测血糖；小鼠在6-12h期间自由进水进食，其余时间禁食仍自由进水。在治疗期间，胰岛素注射组有2只小鼠、纳米粒子组有1只小鼠由于血糖过低而死亡。图2的结果显示连续每天口服INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子可以将小鼠的血糖水平控制在较低的水平，且比皮下注射胰岛素组的血糖水平控制得更加平稳。与皮下注射胰岛素(2IU/kg)相比，口服INS/HTCC-CA/HPMCP纳米粒子(30IU/kg)的药理生物利用率达到了36.7％。

Claims (4)

1.一种胰岛素口服纳米制剂，其特征在于，是以胆酸修饰的季铵化壳聚糖和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯作为胰岛素复合载体而制备得到载胰岛素纳米粒子溶液。
2.根据权利要求1所述的胰岛素口服纳米制剂，其特征在于，在纳米粒子溶液中，胰岛素的浓度为0.1-5 mg/mL, 胆酸修饰的季铵化壳聚糖浓度为0.1-20 mg/mL，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的浓度为0.1-20 mg/mL。
3.一种如权利要求1所述的胰岛素口服纳米制剂的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
（1）制备胆酸修饰的季铵化壳聚糖，每100个壳聚糖糖基单元上面连接10-70个季胺基团和3-40个胆酸基团，所连接的季胺基团和胆酸基团在壳聚糖分子链上是无规分布的；
（2）将胰岛素、胆酸修饰的季铵化壳聚糖和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯分别溶解在水溶液中，先混合胰岛素和胆酸修饰的季铵化壳聚糖溶液，然后再与羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶液混合；或者先混合胰岛素和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶液，然后再与胆酸修饰的季铵化壳聚糖溶液混合，得到载胰岛素的纳米粒子溶液。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在纳米粒子溶液中，胰岛素的浓度为0.1-5 mg/mL，胆酸修饰的季铵化壳聚糖浓度为0.1-20 mg/mL，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的浓度为0.1-20 mg/mL。
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