CN107349140A - 一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及护肤品领域,具体涉及一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品及其制备方法。本发明提供的一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品主要包括以下成分:活性酵母细胞衍生物、油脂、表面活性剂、保湿剂、防腐剂、去离子水。本发明中的活性酵母细胞衍生物是基于大气压低温等离子体活化水制备产生的。该护肤品具有保护细胞抵御紫外辐射、过氧化氢损伤的效果。本发明制备活性酵母细胞衍生物的方法简单、易操作、成本低廉、安全、无毒性残留,且酿酒酵母细胞来源广泛、取材便利,具有极大的市场应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域,具体涉及一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品及其制备方法。
背景技术
皮肤是人体最大的器官,总重量占体重的5%-15%,总面积为1.5-2平方米,厚度因人或因部位而异,为0.5-4毫米。皮肤覆盖全身,与人体的其它器官密切相连,起着保护人体不受外部刺激或伤害的作用。皮肤具有两个方面的屏障作用:一方面防止体内水分,电解质和其他物质的丢失;另一方面阻止外界有害物质的侵入。保持着人体内环境的稳定,在生理上起着重要的保护功能,同时皮肤也参与人体的代谢过程。如果想拥有健康漂亮的肌肤,除了要养成健康的生活习惯,还要做好防护保养工作,尤其对于平时裸露在外的皮肤,如脸部、颈部、手、臂部等,更要悉心呵护。
但是,目前市场上的各种美容护肤化妆品中大多数都含有对人体有害的化学物质,如含铅、汞等有毒有害物质,这些护肤品容易引起人们皮肤过敏,对人体器官和功能造成损伤。因此,人们对美容护肤化妆品的要求也越来越高,越来越向“天然化、营养化、疗效化”的方向发展。而从植物、微生物中提取的天然化合物作为护肤化妆品的主要添加剂已经受到人们越来越多的关注。
活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivative,LYCD)是由酿酒酵母细胞(Saccharomyces cerevisiae,S.cerevisiae)受到外界不良刺激后快速合成的大量具有自我修复功能的物质,主要由多肽、氨基酸、脂类、核酸、单糖、双糖以及酵母特有的痕量维生素和矿物质组成。现有研究表明,活性酵母细胞衍生物具有加速胶原蛋白和弹性蛋白生成的能力,可以滋润并更新皮肤细胞,增加皮肤细胞中新生蛋白质对水分的吸收和促进对氧的利用,使皮肤丰满,是奇特的保湿剂。此外,活性酵母细胞衍生物还具有强紫外吸收和促进细胞活性的能力,已经被广泛应用于配制具有消炎作用、专门用于预防晒后失水和促进防晒伤皮肤重新水合从而减少紫外伤害的新型化妆品。
传统的活性酵母细胞衍生物是从紫外光照射过的酵母细胞中提取得到的。后来人们把亚致死剂量的过氧化氢加入到酵母细胞中,处理后的酵母细胞经提取也获得了活性酵母细胞衍生物。而上述传统方法难以实现活性酵母细胞衍生物的大量生产,并且其制备方法繁琐、费时、费力、对人体有毒害作用。大气压低温等离子体活化水是由水溶液经大气压低温等离子体处理得到的一种富含活性氧自由基(如超氧阴离子、羟基、单线态氧、一氧化氮自由基等)的溶液。由于大部分活性氧自由基寿命短,不会对环境、人体造成伤害,有效避免了传统制备方法中药残问题,确保活性酵母细胞衍生物制品的安全。此外,本发明制备活性酵母细胞衍生物的工艺操作简单、成本低、便携、小型、可随用随制,并且制备过程不会对人体造成伤害,可以很好的解决传统制备活性酵母衍生物方法的弊端。本发明采取微生物发酵生产,不受环境和自然资源影响,易实现工业化、自动化。并且现有大量研究表明天然活性酵母细胞提取物,具有抗氧化、抗紫外的特性,对细胞无毒害作用,具有极大的市场应用前景。
发明内容
为了避免化学添加剂对皮肤的毒害作用,本发明提供了一种含有活性酵母细胞衍生物的天然护肤品,主要由活性酵母细胞衍生物、油脂、表面活性剂、保湿剂、防腐剂、去离子水。并且,为了克服传统方法利用紫外和过氧化氢制备活性酵母细胞衍生物的繁琐、费时、费力、对人体有毒害的不足,本发明提供了一种基于大气压低温等离子体活化水制备活性酵母细胞衍生物的方法,通过大气压低温等离子体活化水处理酵母细胞悬液,再经破除细胞壁、破除细胞膜提取酵母胞内的活性物质。本发明制备的含有活性酵母细胞衍生物的护肤品具有保护细胞抵御紫外辐射、过氧化氢损伤的效果。本发明制备活性酵母细胞衍生物的方法简单、易操作、成本低廉、安全、无毒性残留,且酿酒酵母细胞来源广泛、取材便利,具有极大的市场应用前景。
为了实现以上技术效果,本发明采用以下的技术方案:
一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品,主要成分为活性酵母细胞衍生物、油脂、表面活性剂、保湿剂、防腐剂、去离子水。其中,活性酵母细胞衍生物是基于大气压低温等离子体活化水制备产生的。
所述的一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品中的活性酵母细胞衍生物用量占护肤品总质量的4-10%;所述油脂选自白矿油、硬脂酸、鲸蜡硬脂醇、橄榄油、辛酸/癸酸三甘油脂、乳木果油、霍霍巴油、硅油中的一种或多种,其用量占护肤品中质量的2-12%;所述表面活性剂为吐温20、月桂酸钠、硬脂醇硫酸钠、聚氧乙烯脂肪酸酯、鲸蜡硬脂醇醚-2、鲸蜡醇磷酸酯中的一种或几种,其用量占护肤品中质量的2-12%;所述保湿剂为吡咯烷酮羧酸钠、硫酸软骨素、丙三醇、丙二醇、1,3-丁二醇、透明质酸钠、三甲基甘氨酸、甲基甘氨酸脯氨酸中的一种或几种,其用量占护肤品中质量的5-15%;所述防腐剂为尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、二羟甲基二甲基乙内酰脲中的一种或多种,其用量占护肤品中质量的0.1-0.3%。
所述的一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品制备方法,包括以下步骤:
(1)将油脂和表面活性剂置于容器中,加热到75-85℃并不断搅拌,使各组分充分溶解后,静置冷却至50℃;
(2)将保湿剂溶于少量去离子水中,加热至65-75℃并不断搅拌,使各组分充分溶解后,静置冷却至50℃;
(3)将步骤(1)的溶液与步骤(2)的溶液混合,加入去离子水后搅拌20-40min,使各组分充分混匀,静置冷却至40℃;
(4)将活性酵母细胞衍生物、防腐剂依次加入步骤(3)的混合溶液中,搅拌10-20min,使各组分充分混匀。
所述的基于大气压低温等离子体活化水制备活性酵母细胞衍生物的方法,包括以下步骤:
(1)培养酵母细胞:取酵母细胞冻存液接种于酵母液体培养基中,放置在30℃恒温震荡培养箱中进行培养;
(2)大气压低温等离子体活化水的制备:将大气压低温等离子体发生器放置于水溶液中,打开气源向大气压低温等离子体发生器中通入工作气体,调节气体流速,待气流稳定后开启高压电源,进行放电处理即得到等离子体活化水;
(3)处理酵母细胞:将步骤(1)的酵母细胞悬液与步骤(2)的大气压低温等离子体活化水充分混匀后,放置于30℃恒温培养箱中进行孵育;
(4)提取活性酵母细胞衍生物:将步骤(3)经处理后的酵母细胞悬液离心收集,然后破除细胞壁,破除细胞膜,离心取上清即为活性酵母细胞衍生物,置于-80℃超低温冰箱中保存。
所述的基于大气压低温等离子体活化水制备活性酵母细胞衍生物的方法中使用的酵母细胞为酿酒酵母细胞(Saccharomyces cerevisiae,S.cerevisiae),所用酵母培养基为YPAD培养基,酵母细胞冻存液与YPAD液体培养基的比例为1:10-1:50,培养时间为16-24h。
所述的基于大气压低温等离子体活化水制备活性酵母细胞衍生物的方法中使用的水溶液可以选自纯净水、自来水、超纯水、去离子水、蒸馏水中的一种。
所述的基于大气压低温等离子体活化水制备活性酵母细胞衍生物的方法中大气压低温等离子体的工作气体选自氩气、氦气、空气中的一种或氦气/氩气与氧气两种气体以任意比例的混合气体,工作气体流速为2-5L/min,处理功率为20-60W,处理时间为10-30min。
所述的基于大气压低温等离子体活化水制备活性酵母细胞衍生物的方法中酵母细胞悬液与大气压低温等离子体活化水的比例为1:5-1:10,酵母细胞的孵育时间为2-10h。
所述的基于大气压低温等离子体活化水制备的活性酵母细胞衍生物的方法中酵母细胞的破除细胞壁的方法选自碱破壁法、外加葡聚糖酶法、表面活性剂处理法、酸碱处理法、外加蛋白酶破壁法、盐法破壁、高压均浆法、超声波法气、微波加热法挤压式破壁法、冻融法、有机溶剂法中的一种。
本发明的有益效果是:
本发明是一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品,将活性酵母细胞衍生物作为主要添加剂使用后,具有保护细胞抵御紫外辐射、过氧化氢损伤的效果。并且已有研究表明天然的活性酵母细胞衍生物对细胞无毒副作用、安全可靠;此外,本发明中采用大气压低温等离子体活化水制备活性酵母衍生物的方法易操作,仅需将酵母细胞与等离子体活化水共同孵育;加工速度快,短时间处理即可获得有活性的活性酵母提取物;有效成分活性氧自由基寿命短,对环境、人体造成伤害小;等离子体装置处理功率小,比紫外辐射处理更加节能等优点,可以很好的解决传统制备活性酵母衍生物方法的弊端。本发明采取微生物发酵生产,不受环境和自然资源影响,易实现工业化、自动化,具有极大的市场应用前景。
附图说明
图1是小鼠成纤维细胞(NIH-3T3)加入含有活性酵母细胞衍生物的护肤品前后经过紫外辐射处理后的细胞存活率图。
图2是小鼠成纤维细胞(NIH-3T3)加入含有活性酵母细胞衍生物的护肤品前后经过过氧化氢处理后的细胞存活率图。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步对本发明进行阐述,应理解,引用实施例仅用于说明本发明,而不用于限制本发明的范围。
实施例1
1、一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品配方为:10%活性酵母细胞衍生物,2%辛酸/癸酸三甘油脂、2%硬脂酸、2%橄榄油、2%硅油,2%吐温20、3%聚氧乙烯脂肪酸酯、2%月桂酸钠、2%硬脂醇硫酸钠,3%硫酸软骨素、2%丙三醇、3%丙二醇、3%透明质酸钠、3%三甲基甘氨酸,0.1%尼泊金甲酯、0.1%尼泊金乙酯,余量为去离子水。
2、一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品的制备方法如下:
(1)按照计算量,将辛酸/癸酸三甘油脂、硬脂酸、橄榄油、硅油、吐温20、聚氧乙烯脂肪酸酯、月桂酸钠、硬脂醇硫酸钠置于容器中,加热到75-85℃并不断搅拌,使各组分充分溶解后,静置冷却至50℃;
(2)将硫酸软骨素、丙三醇、丙二醇、透明质酸钠、三甲基甘氨酸溶于少量去离子水中,加热至65-75℃并不断搅拌,使各组分充分溶解后,静置冷却至50℃;
(3)将步骤(1)的溶液与步骤(2)的溶液混合,加入去离子水后搅拌30min,使各组分充分混匀,静置冷却至40℃;
(4)将活性酵母细胞衍生物、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯依次加入步骤(3)的混合溶液中,搅拌15min,使各组分充分混匀即得到含有活性酵母细胞衍生物的护肤品。
3、本发明采用大气压低温等离子体活化水制备活性酵母细胞衍生物的方法如下:
(1)取1ml酵母细胞冻存液,放置于20ml的YPAD液体培养基中,在30℃、200rpm转速下过夜培养至OD600达到0.8左右;
(2)在超净工作台中,用无菌接种环蘸取上述活化后的酵母细胞悬液,在YPAD固体平板上划线,倒置平板放置于30℃恒温培养箱中培养48h;
(3)用无菌枪头挑取YPAD固体平板上的单菌落,并放置于20mlYPAD液体培养基中,在30℃、200rpm转速下过夜培养至OD600达到0.8左右;
(4)取上述1ml酵母细胞悬液放置于20mlYPAD液体培养基中,在30℃、210rpm转速下活化1-2h后细胞达到对数生长期,OD600在0.3-0.5之间;
(5)将大气压低温等离子体发生器放置于超纯水中,工作气体为空气,气体流速为2L/min,处理功率为30W,处理时间为20min制备得到等离子体活化水;
(6)取5ml已活化后的酵母细胞悬液与40ml等离子体活化水混合,在30℃恒温培养箱中孵育6h;
(7)孵育后的酵母细胞悬液,2000rpm离心5min,吸取上清;
(8)用1ml PBS重悬酵母细胞后,2000rpm离心5min,吸取上清;
(9)用1ml山梨醇buffer重悬细胞后,加入100U Lyticase,充分混匀。在30℃下恒温培养箱中孵育2h后,4000rpm离心10min,弃上清,收集沉淀;
(10)用200μl Western及IP细胞裂解液重悬细胞,用手指轻弹以充分混匀细胞后,静置于冰上5min。酵母细胞充分裂解后,12000rpm离心5min,取上清液,此上清液即为活性酵母细胞衍生物。
实施例2.抗紫外、抗氧化能力测试
本实验采用小鼠成纤维细胞(NIH-3T3)评估含有活性酵母细胞衍生物的护肤品的抗紫外、抗氧化能力,并采用XTT法检测紫外辐射与过氧化氢处理后小鼠成纤维细胞的存活率。
1、含有活性酵母细胞衍生物的护肤品抗紫外能力检测:
(1)小鼠成纤维细胞NIH-3T3细胞系用含有10%新生胎牛血清与100U/mL青霉素与链霉素的DMEM培养基中,在37℃、5%CO2恒温培养箱中过夜培养,待细胞生长到覆盖培养皿70-80%后,用0.25%EDTA胰蛋白酶消化培养皿中的细胞,获得小鼠成纤维细胞悬液;
(2)取2ml上述小鼠成纤维细胞悬液放置于24孔板中;
(3)在2ml细胞悬液中,加入20μl含有活性酵母细胞衍生物的护肤品,在37℃、5%CO2恒温培养箱中孵育30min;
(4)30W的紫外线灯(紫外波长为254nm)距离24孔板30cm对小鼠成纤维细胞悬液进行紫外辐射处理4min;
(5)XTT溶液配制:用DEME稀释XTT母液,稀释比例为5:1;
(6)向96孔板中加入100μl XTT溶液;
(7)向100μl XTT溶液中,加入20μl上述经过大气压低温等离子体处理后的小鼠成纤维细胞悬液,每个不同处理组分别设置两个复孔;
(8)把加完样品的96孔板放置于37℃、5%CO2恒温培养箱中孵育24h后,读取OD450读数;
(9)采集数据,进行数据处理分析,计算细胞存活率。首先,所有处理组的OD450减去空白对照的OD450(即仅含100μlXTT溶液,没有加入小鼠成纤维细胞的组别)。细胞存活率的计算则以未经紫外辐射处理的细胞样品为对照,将紫外辐射处理组细胞样品的OD450值数据归一化,计算公式如下:
细胞存活率=(OD450(处理组)-OD450(空白对照组))/(OD450(未处理组)-OD450(空白对照组))
2、含有活性酵母细胞衍生物的护肤品抗氧化能力检测:
(1)小鼠成纤维细胞NIH-3T3细胞系用含有10%新生胎牛血清与100U/mL青霉素与链霉素的DMEM培养基中,在37℃、5%CO2恒温培养箱中过夜培养,待细胞生长到覆盖培养皿70-80%后,用0.25%EDTA胰蛋白酶消化培养皿中的细胞,获得小鼠成纤维细胞悬液;
(2)取2ml上述小鼠成纤维细胞悬液放置于24孔板中;
(3)在2ml细胞悬液中,加入20μl含有活性酵母细胞衍生物的护肤品,在37℃、5%CO2恒温培养箱中孵育30min;
(4)采用2mM过氧化氢溶液处理小鼠成纤维细胞悬液40min;
(5)XTT溶液配制:用DEME稀释XTT母液,稀释比例为5:1;
(6)向96孔板中加入100μl XTT溶液;
(7)向100μl XTT溶液中,加入20μl上述经过大气压低温等离子体处理后的小鼠成纤维细胞悬液,每个不同处理组分别设置两个复孔;
(8)把加完样品的96孔板放置于37℃、5%CO2恒温培养箱中孵育24h后,读取OD450读数;
(9)采集数据,进行数据处理分析,计算细胞存活率。首先,所有处理组的OD450减去空白对照的OD450(即仅含100μlXTT溶液,没有加入小鼠成纤维细胞的组别)。细胞存活率的计算则以未经紫外辐射处理的细胞样品为对照,将紫外辐射处理组细胞样品的OD450值数据归一化,计算公式如下:
细胞存活率=(OD450(处理组)-OD450(空白对照组))/(OD450(未处理组)-OD450(空白对照组))
实验结果表明:见图1-2,经大气压低温等离子体活化水处理酵母细胞3,4,5,6,7h得到的活性酵母细胞衍生物作为主要添加剂制备得到的护肤品分别记作护肤品-1、护肤品-2、护肤品-3、护肤品-4、护肤品-5。未加入含有活性酵母细胞衍生物的护肤品的小鼠成纤维细胞经过致死剂量的紫外辐射与过氧化氢处理后,细胞存活率分别降至15%与10%左右。而加入含有活性酵母细胞衍生物的护肤品后,小鼠成纤维细胞存活率显著提高,并且随着活性酵母细胞衍生物经大气压低温等离子体活化水处理时间的延长而增加,表明含有活性酵母细胞衍生物的护肤品能够有效的保护小鼠成纤维细胞抵御紫外辐射、过氧化氢的损伤。因此,含有活性酵母细胞衍生物的护肤品具有抗紫外、抗氧化的特性。
Claims (9)
1.一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品,主要成分为活性酵母细胞衍生物、油脂、表面活性剂、保湿剂、防腐剂、去离子水,其特征在于:所述活性酵母细胞衍生物是基于大气压低温等离子体活化水制备产生的。
2.根据权利要求1所述的一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品,其特征在于:所述的活性酵母衍生物用量占护肤品中质量的4-10%;所述油脂选自白矿油、硬脂酸、鲸蜡硬脂醇、橄榄油、辛酸/癸酸三甘油脂、乳木果油、霍霍巴油、硅油中的一种或多种,其用量占护肤品中质量的2-12%;所述表面活性剂为吐温20、月桂酸钠、硬脂醇硫酸钠、聚氧乙烯脂肪酸酯、鲸蜡硬脂醇醚-2、鲸蜡醇磷酸酯中的一种或几种,其用量占护肤品中质量的2-12%;所述保湿剂为吡咯烷酮羧酸钠、硫酸软骨素、丙三醇、丙二醇、1,3-丁二醇、透明质酸钠、三甲基甘氨酸、甲基甘氨酸脯氨酸中的一种或几种,其用量占护肤品中质量的5-15%;所述防腐剂为尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、二羟甲基二甲基乙内酰脲中的一种或多种,其用量占护肤品中质量的0.1-0.3%。
3.根据权利要求1至2任一项所述的一种含有活性酵母细胞衍生物的护肤品制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将油脂和表面活性剂置于容器中,加热到75-85℃并不断搅拌,使各组分充分溶解后,静置冷却至50℃;
(2)将保湿剂溶于少量去离子水中,加热至65-75℃并不断搅拌,使各组分充分溶解后,静置冷却至50℃;
(3)将步骤(1)的溶液与步骤(2)的溶液混合,加入去离子水后搅拌20-40min,使各组分充分混匀,静置冷却至40℃;
(4)将活性酵母细胞衍生物、防腐剂依次加入步骤(3)的混合.溶液中,搅拌10-20min,使各组分充分混匀。
4.根据权利要求1所述的基于大气压低温等离子体活化水制备的活性酵母细胞衍生物的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)培养酵母细胞:取酵母细胞冻存液接种于酵母液体培养基中,放置在30℃恒温震荡培养箱中进行培养;
(2)大气压低温等离子体活化水的制备:将大气压低温等离子体发生器放置于水溶液中,打开气源向大气压低温等离子体发生器中通入工作气体,调节气体流速,待气流稳定后开启高压电源,进行处理即得到等离子体活化水;
(3)处理酵母细胞:将步骤(1)的酵母细胞悬液与步骤(2)的大气压低温等离子体活化水充分混匀后,放置于30℃恒温培养箱中进行孵育;
(4)提取活性酵母细胞衍生物:将步骤(3)经处理后的酵母细胞悬液离心收集,然后破除细胞壁,破除细胞膜,离心取上清即为活性酵母细胞衍生物,置于-80℃超低温冰箱中保存。
5.根据权利要求4所述的基于大气压低温等离子体活化水制备的活性酵母细胞衍生物的方法,其特征在于:所述步骤(1)的酵母细胞为酿酒酵母细胞(Saccharomyces cerevisiae,S.cerevisiae),所用酵母培养基为YPAD培养基,酵母细胞冻存液与YPAD液体培养基的比例为1:10-1:50,培养时间为16-24h。
6.根据权利要求4所述的基于大气压低温等离子体活化水制备的活性酵母细胞衍生物的方法,其特征在于:所述步骤(2)中使用的水溶液可以选自纯净水、自来水、超纯水、去离子水、蒸馏水中的一种。
7.根据权利要求4所述的基于大气压低温等离子体活化水制备的活性酵母细胞衍生物的方法,其特征在于:所述步骤(2)的工作气体选自氩气、氦气、空气中的一种或氦气/氩气与氧气两种气体以任意比例的混合气体,工作气体流速为2-5L/min,大气压低温等离子体处理功率为20-60W,处理时间为10-30min。
8.根据权利要求4所述的基于大气压低温等离子体活化水制备的活性酵母细胞衍生物的方法,其特征在于:所述步骤(3)中酵母细胞悬液与大气压低温等离子体活化水的比例为1:5-1:10,酵母细胞的孵育时间为4-8h。
9.根据权利要求4所述的基于大气压低温等离子体活化水制备的活性酵母细胞衍生物的方法,其特征在于:所述步骤(4)中酵母细胞的破除细胞壁的方法选自碱破壁法、外加葡聚糖酶法、表面活性剂处理法、酸碱处理法、外加蛋白酶破壁法、盐法破壁、高压均浆法、超声波法气、微波加热法挤压式破壁法、冻融法、有机溶剂法中的一种。
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