CN107347639B - 一种蓝莓组培苗的脱毒方法和培养方法 - Google Patents

一种蓝莓组培苗的脱毒方法和培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种蓝莓组培苗的脱毒方法和培养方法。该脱毒方法包括如下步骤：(1)热处理：将蓝莓组培苗在35～50℃下处理3～3.5天；(2)化学药剂处理：切取步骤(1)处理后组培苗的茎尖，并将所述茎尖置于含有病毒唑的培养基中，在21‑25℃条件下继续培养45‑55天，其中所述病毒唑的浓度为0.2～0.3mg/L。在此基础上，本发明还提供了一种含有该脱毒方法的蓝莓组培苗培养方法。本发明所述方法，通过两级脱毒处理，蓝莓组培苗脱毒率大大提高，而且基本不会影响组培苗成活率；而且脱毒后的蓝莓苗移栽至大田后，不会发生变异。因此，本发明所述方法具有广阔市场前景和重要应用推广价值。

Description

一种蓝莓组培苗的脱毒方法和培养方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，尤其涉及一种蓝莓组培苗的脱毒方法和培养方法。
背景技术
蓝莓果实皮薄，风味酸甜可口，具有独特的保健功能。蓝莓果实中含有较多的花色素苷、黄酮等生理活性成分，能有效防止脑神经衰老，糖尿病等疾病的发生，增强心脏功能，有极好的抗癌功效，是21世纪具有良好发展前景的果树品种之一。因此研究其无毒、高效繁殖有重要的价值和意义。
目前，我国种植的蓝莓在生产上通常采用组织培养和扦插的繁殖方法。应用组织培养方法扩繁速度快，适宜于优良品种的快速扩繁。但组培繁殖容易使病毒逐代传递积累，危害严重。带毒植株经高温处理后病毒浓度会降低，活性会钝化。热处理一般在35～50℃热空气中进行，处理时间从几天到几十天不等。该方法已在百合、郁金香和风信子等花卉品种成功应用。化学药剂处理是将一些抗病毒加入到培养基中，抑制植物体内或离体组织内病毒的合成。常用化学药剂有嘌呤和嘧啶类化合物、氨基酸、抗生素和病毒唑等。有报道利用病毒唑对石竹植株进行脱毒处理，脱毒率可达80％。但目前，对于蓝莓种苗脱毒技术尚未有相关报道，如何大量获得脱毒蓝莓种苗是蓝莓推广与产业化的关键。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种蓝莓组培苗的脱毒方法，其包括如下步骤：
(1)热处理：将蓝莓组培苗在35～50℃下处理3～3.5天；
(2)化学药剂处理：切取步骤(1)处理后组培苗的茎尖，并将所述茎尖置于含有病毒唑的培养基中，在21-25℃条件下继续培养45-55天，其中所述病毒唑的浓度为0.2～0.3mg/L。
本发明所述方法，通过两级脱毒处理，蓝莓组培苗脱毒率大大提高，而且基本不会影响组培苗的成活率；而且脱毒后的蓝莓苗移栽至大田后，不会发生变异，而且裸根移栽成活率高。
本发明所述热处理优选为在40～45℃下热处理3天。本发明所述方法，所述热处理为热空气处理。
本发明所述所述病毒唑的浓度优选为0.3mg/L，以确保更好的消毒效果。
本发明的步骤(2)中所述培养基为WPM+ZT 0.5～1.0mg/L+IBA 0.05mg/L培养基。
本发明步骤(1)所述蓝莓组培苗经如下步骤得到：
A、外植体消毒：取蓝莓当年生健壮枝条，剪成茎段并洗净后，将所述茎段置于无菌工作台上用75％酒精浸泡28～32s，然后置于5％的次氯酸钠溶液中消毒10～20min，并用无菌水冲洗干净；
B、启动培养：将步骤A处理后的茎段接入WPM+ZT0.5～1.0mg/L+IBA0.05mg/L培养基中进行培养，待叶芽萌发后，取所述叶芽的芽尖继续培养，即得。
在上述脱毒方法的基础上，本发明进一步提供了一种蓝莓组培苗的培养方法，其包括上述的脱毒方法。
优选的，所述蓝莓组培苗的培养方法包括如下步骤：
A、外植体消毒：取蓝莓当年生健壮枝条，剪成茎段并洗净后，将所述茎段置于无菌工作台上用75％酒精浸泡28～32s，然后置于5％的次氯酸钠溶液中消毒10～20min，并用无菌水冲洗干净；
B、启动培养：将步骤A处理后的茎段接入WPM+ZT0.5～1.0mg/L+IBA0.05mg/L培养基中进行培养，待叶芽萌发后，取所述叶芽的芽尖继续培养，即得；
C、热处理：将蓝莓组培苗在35～50℃下处理3～3.5天；
D、化学药剂处理：切取步骤C处理后组培苗的茎尖，并将所述茎尖置于含有病毒唑的培养基中，在21-25℃条件下继续培养45-55天，其中所述病毒唑的浓度为0.2～0.3mg/L；
E、继代培养：将经步骤D处理后的茎尖，在WPM+ZT3mg/L+IBA0.05mg/L培养基中进行继代培养，继代3次后，得到新的蓝莓组培苗；
F、生根培养：将步骤E所得新蓝莓组培苗在WPM+IBA0.05mg/L培养基中接种15～25天后可炼苗移栽。
本发明的上述技术方案具有以下有益效果：
1、脱毒效果好。通过本发明的脱毒处理，蓝莓组培苗的脱毒率可达95％以上，脱毒效率高；而且对蓝莓组培苗的成活影响甚微。
2、应用效果好。将本发明所述脱毒方法和培养方法得到的蓝莓组培苗种植到大田里，生长过程中没有发现变异现象；而且根系发达，植株生长健壮，抗逆性强；裸根移栽成活率高；花序形成花芽多，座果率高，果实产量高。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。以下实施例中的蓝莓当年生健壮枝条来自于丹东天赐蓝莓种植基地；实施例所用的试剂均为市售商品。
本发明提供了一种蓝莓外植体的培养方法，其包括如下步骤：
A、外植体消毒：取蓝莓当年生健壮枝条，剪成2～3cm长茎段，用洗洁精冲洗干净后，与无菌工作台上用75％酒精浸泡30s，然后用5％的次氯酸钠溶液消毒10～20min，用无菌水冲洗干净；
B、启动培养：将消毒茎段接入WPM+ZT0.5～1.0mg/L+IBA0.05mg/L培养基中，叶芽萌发后，解剖镜下取所述叶芽芽尖继续培养，即得蓝莓组培苗。
实施例1
本实施例提供了一种蓝莓组培苗的培养方法，其包括如下步骤：
(1)热处理：将蓝莓组培苗在40℃下热处理3天；
(2)化学药剂处理：切取步骤(1)处理后组培苗的茎尖，并将所述茎尖置于含有病毒唑的培养基中，在22℃条件下继续培养50天，其中所述病毒唑的浓度为0.3mg/L；
(3)继代培养：将经步骤(2)处理后的茎尖在WPM+ZT3mg/L+IBA0.05mg/L培养基中，继代3次后，得到新的蓝莓组培苗；
(4)生根培养：将步骤(3)所得新蓝莓组培苗在WPM+IBA0.05mg/L培养基中接种15天后可炼苗移栽。
实施例2
本实施例提供了一种蓝莓组培苗的培养方法，其包括如下步骤：
(1)热处理：将蓝莓组培苗在45℃下热处理3天；
(2)化学药剂处理：切取步骤(1)处理后组培苗的茎尖，并将所述茎尖置于含有病毒唑的培养基中，在25℃条件下继续培养45天，其中所述病毒唑的浓度为0.25mg/L；
(3)继代培养：将经步骤(2)处理后的茎尖在WPM+ZT3mg/L+IBA0.05mg/L培养基中，继代3次后，得到新的蓝莓组培苗；
(4)生根培养：将步骤(3)所得新蓝莓组培苗在WPM+IBA0.05mg/L培养基中接种20天后可炼苗移栽。
实施例3
本实施例提供了一种蓝莓组培苗的培养方法，其包括如下步骤：
(1)热处理：将蓝莓组培苗在35℃下热处理3.5天；
(2)化学药剂处理：切取步骤(1)处理后组培苗的茎尖，并将所述茎尖置于含有病毒唑的培养基中，在21℃条件下继续培养53天，其中所述病毒唑的浓度为0.25mg/L；
(3)继代培养：将经步骤(2)处理后的茎尖在WPM+ZT3mg/L+IBA0.05mg/L培养基中，继代3次后，得到新的蓝莓组培苗；
(4)生根培养：将步骤(3)所得新蓝莓组培苗在WPM+IBA0.05mg/L培养基中接种25天后可炼苗移栽。
对比例1
本对比例提供了一种蓝莓组培苗的培养方法，其与实施例1基本相同，相同之处不再赘述，不同之处在于：所述热处理的时间为4.5天。
对比例2
本对比例提供了一种蓝莓组培苗的培养方法，其与实施例1基本相同，相同之处不再赘述，不同之处在于：所述热处理的时间为2天。
对比例3
本对比例提供了一种蓝莓组培苗的培养方法，其与实施例1基本相同，相同之处不再赘述，不同之处在于：所述病毒唑的浓度为0.4mg/L。
对比例4
本对比例提供了一种蓝莓组培苗的培养方法，其与实施例1基本相同，相同之处不再赘述，不同之处在于：所述病毒唑的浓度为0.1mg/L。
对实施例1～3以及对比例1～4所述培养方法得到的蓝莓组培苗，按常规病毒检测方法——血清学方法进行脱毒效果检测，脱毒效果以脱毒率和组培苗成活率表示，脱毒率和成活率越高代表脱毒效果越好。各蓝莓组培苗的脱毒效果如表1所示。
对实施例1～3所述培养方法得到的蓝莓组培苗分别移栽至大田内，并记录如下生长情况：
①在第一周、第三周、第五周等三个时间节点，蓝莓植株的变异情况，以平均变异率来表示；
②第30天时蓝莓平均株高；
③第75天时蓝莓植株裸根移栽的成活率；
④盛花期的成花率和坐果期的坐果率；
结果如表2所示。
表1：蓝莓组培苗的脱毒效果
脱毒率(％) 成活率(％)
实施例1 97 90
实施例2 95.5 92
实施例3 96 90
对比例1 80 60
对比例2 67 89
对比例3 65 90
对比例4 60 88
表2：蓝莓组培苗在大田内的生长情况
本发明的实施例是为了示例和描述起见而给出的，而并不是无遗漏的或者将本发明限于所公开的形式。很多修改和变化对于本领域的普通技术人员而言是显而易见的。选择和描述实施例是为了更好说明本发明的原理和实际应用，并且使本领域的普通技术人员能够理解本发明从而设计适于特定用途的带有各种修改的各种实施例。

Claims (8)

1.一种蓝莓组培苗的脱毒方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)热处理：将蓝莓组培苗在35～50℃下处理3～3.5天；
(2)化学药剂处理：切取步骤(1)处理后组培苗的茎尖，并将所述茎尖置于含有病毒唑的培养基中，在21-25℃条件下继续培养45-55天，其中所述病毒唑的浓度为0.2～0.3mg/L。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述热处理为在40～45℃下热处理3天。
3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述热处理为热空气处理。
4.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述病毒唑的浓度为0.3mg/L。
5.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，步骤(2)中所述培养基为WPM+ZT0.5～1.0mg/L+IBA0.05mg/L培养基。
6.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，步骤(1)所述蓝莓组培苗经如下步骤得到：
A、外植体消毒：取蓝莓当年生健壮枝条，剪成茎段并洗净后，将所述茎段置于无菌工作台上用75％酒精泡28～32s，然后置于5％的次氯酸钠溶液中消毒10～20min，并用无菌水冲洗干净；
B、启动培养：将步骤A处理后的茎段接入WPM+ZT0.5～1.0mg/L+IBA0.05mg/L培养基中进行培养，待叶芽萌发后，取所述叶芽的芽尖继续培养，即得。
7.一种蓝莓组培苗的培养方法，其特征在于，包括权利要求1～6任一项所述的脱毒方法。
8.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
A、外植体消毒：取蓝莓当年生健壮枝条，剪成茎段并洗净后，将所述茎段置于无菌工作台上用75％酒精浸泡 28～32s，然后置于5％的次氯酸钠溶液中消毒10～20min，并用无菌水冲洗干净；
B、启动培养：将步骤A处理后的茎段接入WPM+ZT0.5～1.0mg/L+IBA0.05mg/L培养基中进行培养，待叶芽萌发后，取所述叶芽的芽尖继续培养，即得；
C、热处理：将蓝莓组培苗在35～50℃下处理3～3.5天；
D、化学药剂处理：切取步骤C处理后组培苗的茎尖，并将所述茎尖置于含有病毒唑的培养基中，在21-25℃条件下继续培养45-55天，其中所述病毒唑的浓度为0.2～0.3mg/L；
E、继代培养：将经步骤D处理后的茎尖，在WPM+ZT3mg/L+IBA0.05mg/L培养基中进行继代培养，继代3次后，得到新的蓝莓组培苗；
F、生根培养：将步骤E所得新蓝莓组培苗在WPM+IBA0.05mg/L培养基中接种15～25天后可炼苗移栽。
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