CN107337729A - 一种水蛭素粗提方法 - Google Patents

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甘奇超
郭平牯
颜世平
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/815—Protease inhibitors from leeches, e.g. hirudin, eglin

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Abstract

本发明公开了一种水蛭素粗提方法，包括如下步骤：(1)取水蛭粉碎成浆液；(2)按所述浆液重量，以每克浆液加入4～6ml氯化钠溶液的比例向所述浆液中加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液，静置25‑35分钟后，离心，取上层清液备用；向残液中再次加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液，静置25‑35分钟后，离心，取上层清液备用；向残液中第三次加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液，静置25‑35分钟后，离心，取上层清液备用；第二次及第三次加入的氯化钠溶液与第一次加入的氯化钠溶液体积相同；(3)将步骤(2)所得的所有上层清液混装入浓缩瓶，45℃‑55℃减压干燥得膜状成品。本发明操作简单，辅料单一，效率高，成本低，杂质少，能有效确保所提水蛭素的品质。

Description

一种水蛭素粗提方法
技术领域
本发明涉及一种从水蛭中提取水蛭素的方法,特别是涉及一种水蛭素粗提方法。
背景技术
水蛭素是水蛭及其唾液腺中提取出的多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，由65个氨基酸残基组成的单链多肽。现有研究发现，水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。水蛭素主要需从水蛭中提取，目前现有的水蛭素(抗凝血酶活性)的提取技术均较为复杂，加入辅料较多，无法保证最终产品的质量安全，且不利于大规模生产使用。
因此本领域技术人员致力于开发一种简单、高效、安全的水蛭素粗提方法。
发明内容
有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、高效、安全的水蛭素粗提方法。
为实现上述目的，本发明提供了一种水蛭素粗提方法，包括如下步骤：
(1)粉碎：取水蛭粉碎成浆液；
(2)制备提取液：按所述浆液重量，以每克浆液加入4～6ml氯化钠溶液的比例向所述浆液中加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液，静置25-35分钟后，离心，取上层清液备用；
向残液中再次加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液，静置25-35分钟后，离心，取上层清液备用；
向残液中第三次加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液，静置25-35分钟后，离心，取上层清液备用；
第二次及第三次加入的氯化钠溶液与第一次加入的氯化钠溶液体积相同；
(3)浓缩干燥：将步骤(2)所得的所有上层清液混装入浓缩瓶，45℃-55℃减压干燥得膜状成品。
较佳的，所述步骤(2)中加入氯化钠溶液的量为每克浆液加入5ml氯化钠溶液。
较佳的，所述步骤(2)中，加入氯化钠溶液后的静置时间为30分钟。
较佳的，所述步骤(3)中减压干燥的温度为50℃。
本发明的有益效果是：本发明操作简单，辅料单一，效率高，成本低，杂质少，能有效确保所提水蛭素的品质。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，此处所描述的实施例仅用以解释本发明，并不用以限定本发明：
实施例1
取干净水蛭尸体2kg粉碎成浆液，加入8L质量分数为0.9％的氯化钠溶液，静置25分钟后，离心，取上层清液备用；向残液中再次加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液8L，静置30分钟后，离心，取上层清液备用；向残液中第三次加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液8L，静置35分钟后，离心，取上层清液备用；
将三次所取得的所有上层清液混装入浓缩瓶，45℃减压干燥得膜状成品。
实施例2
取干净水蛭尸体2kg粉碎成浆液，加入10L质量分数为0.9％的氯化钠溶液，静置30分钟后，离心，取上层清液备用；向残液中再次加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液10L，静置25分钟后，离心，取上层清液备用；向残液中第三次加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液10L，静置35分钟后，离心，取上层清液备用；
将三次所取得的所有上层清液混装入浓缩瓶，50℃减压干燥得膜状成品。
实施例3
取干净水蛭尸体2kg粉碎成浆液，加入12L质量分数为0.9％的氯化钠溶液，静置35分钟后，离心，取上层清液备用；向残液中再次加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液12L，静置35分钟后，离心，取上层清液备用；向残液中第三次加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液12L，静置25分钟后，离心，取上层清液备用；
将三次所取得的所有上层清液混装入浓缩瓶，55℃减压干燥得膜状成品。
将实施例1至3所得的膜状成品用2015版中国药典(1部)-水蛭-抗凝血酶活性测定中的方法检测水蛭素含量，结果如下表：
每克水蛭可提取的水蛭素
实施例1 245u/g
实施例2 228u/g
实施例3 235u/g
采用传统方法，每克水蛭可提取的水蛭素为15-60u/g，采用本发明方法，天然水蛭中的水蛭素量得到更为充分有效的利用，节省了企业成本，大大提高了企业经济效益。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (4)

1.一种水蛭素粗提方法，其特征是：包括如下步骤：
(1)粉碎：取水蛭粉碎成浆液；
(2)制备提取液：按所述浆液重量，以每克浆液加入4～6ml氯化钠溶液的比例向所述浆液中加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液，静置25-35分钟后，离心，取上层清液备用；
向残液中再次加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液，静置25-35分钟后，离心，取上层清液备用；
向残液中第三次加入质量分数为0.9％的氯化钠溶液，静置25-35分钟后，离心，取上层清液备用；
第二次及第三次加入的氯化钠溶液与第一次加入的氯化钠溶液体积相同；
(3)浓缩干燥：将步骤(2)所得的所有上层清液混装入浓缩瓶，45℃-55℃减压干燥得膜状成品。
2.如权利要求1所述的粗提方法，其特征是：所述步骤(2)中加入氯化钠溶液的量为每克浆液加入5ml氯化钠溶液。
3.如权利要求1所述的粗提方法，其特征是：所述步骤(2)中，加入氯化钠溶液后的静置时间为30分钟。
4.如权利要求1所述的粗提方法，其特征是：所述步骤(3)中减压干燥的温度为50℃。
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