CN107337681B - 一种超氧阴离子探针及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种超氧阴离子探针及其制备方法和应用,其结构式如下:其中I*为123I、124I、125I和131I中的至少一种。本发明的超氧阴离子探针为放射性碘标记,以三氟甲磺酸基团为响应基团,利用亲核机理的核医学探针化合物,可用于体内超氧阴离子检测,其利用超氧阴离子带有孤电子的的亲核性质,可以与探针结构中的三氟甲磺酸基团迅速反应,并且具有比较高的特异性,在体内检测过程中不容易受到其他小分子的干扰。
Description
技术领域
本发明属于医学影像技术领域,具体涉及一种超氧阴离子探针及其制备方法和应用。
背景技术
活性氧(ROS)是体内重要的一类信号小分子,浓度低,半衰期短,在体内具有重要的信号传递作用。当机体代谢平衡被打破时,ROS的浓度会增加,引起一系列的生化反应,加重机体病变。超氧阴离子(O2·-)是ROS中一个重要的化合物,是一个活泼的自由基,化学性质活泼,容易与体内的大分子反应如:DNA,RNA,蛋白质等,对这些大分子结构和功能造成破坏,从而影响体内的正常代谢平衡。如果这些损伤不能及时修复则会引起病变,O2·-在很多疾病中的浓度水平要比正常组织中的浓度高很多,如神经退行性疾病、糖尿病、肿瘤、炎症等。因此,可以通过对O2·-的检测来对疾病进行检测。
此外,在肿瘤的治疗放疗化疗过程中均会产生大量的超氧阴离子,用于杀伤肿瘤组织。但是如果剂量不合适,会产生过量的超氧阴离子,这样不仅对病变组织有杀伤作用,也会对机体的正常组织造成很大的损伤。因此,需要一种方法来监测治疗过程中超氧阴离子的产生范围和浓度,保证既可以杀伤肿瘤组织又不会对正常组织造成损伤。
CN104946244A公开了一种检测超氧阴离子自由基(O2·-)的荧光分子探针,该专利提供了合成所述荧光分子探针的方法以及利用所述荧光分子探针检测超氧阴离子自由基的方法。该荧光分子探针对于低浓度、活性高及寿命短的超氧阴离子自由基可以实现快速准确的响应,同时可以应用于水相体系,具有良好的应用前景,另外,该荧光分子探针的合成工艺简单,反应条件温和,适于规模化生产,但是检测限只有222nM,这个最低浓度要比活体内超氧阴离子的浓度要高很多。
CN105985379A公开了一种线粒体靶向超氧阴离子探针及其制备方法,该发明设计和合成了一系列线粒体靶向超氧阴离子探针,探针能够定向靶向性的到达细胞的线粒体,对细胞线粒体具有高度的选择性;探针能实时和高选择性地检测出线粒体内超氧阴离子的产生,对线粒体中其他活性氧则没有反应,对超氧阴离子的检测具有专一性。
CN104371707A公开了一种荧光探针及其制备方法与在检测超氧阴离子中的应用,该荧光探针的制备方法为在惰性气体保护下,将三聚氰胺、咖啡酸溶于DMF和CH2Cl2的混合液中,再加入HOBT和EDC.HCL,室温下搅拌反应8~16小时;反应后,浓缩,除去溶剂,得荧光探针粗产品;再将荧光探针粗产品用硅胶薄层色谱板分离提纯,即得荧光探针纯品。该荧光探针结构新颖、灵敏度、选择性好、光稳定性好。
CN101012207公开了一系列用于选择性检测细胞内超氧阴离子自由基的新型荧光探针及其合成方法和用途。按照缩合剂∶芳香族邻氨基硫酚或芳香族邻氨基硫酚衍生物=1∶2-3.5重量份配比将缩合剂、芳香族邻氨基硫酚或芳香族邻氨基硫酚衍生物溶解于正丁醇∶苯=1∶0.3-0.6体积份配比的混合溶液中,得混合液;再将该混合液加热回流3-5小时,减压除去溶剂,得到荧光探针粗品;然后将该粗品用乙醇重结晶,真空干燥得荧光探针纯品。该荧光探针用于化学体系,生物体系中超氧阴离子自由基的检测,生物活细胞和活组织内的超氧阴离子自由基的荧光成像检测,以及临床医学上病变组织中超氧阴离子自由基的检测。
CN1837211提供一种检测超氧阴离子自由基的荧光探针及其合成方法,该方法按如下步骤进行:a.将原料按照荧光染料∶膦酰化试剂∶附酸剂=1∶2~3.5∶1~3的质量比,先将荧光染料和膦酰化试剂分别溶解于四氢呋喃中,然后混匀,加热回流0.5~1.5小时;b.再将反应混合物冷却至室温,过滤,滤液浓缩至浸膏;c.然后再加苯溶解浸膏,水洗至中性,浓缩得粗品;d.最后硅胶柱层析分离得纯品。
最近,有文献(J.Am.Chem.Soc.2015,137,6837-6843)公开了一种以三氟甲磺酸为响应基团的超氧阴离子荧光探针HKSOX-1,该探针具有很好的特异性和灵敏度,而且反应迅速。适合用于体内超氧阴离子的检测,但是穿透深度不够,只能运用于细胞组织和斑马鱼的活体成像层面。
然而,在上述的现有技术中,报道的探针几乎都是荧光探针,同时这类探针的检测波长大多位于500~800nm,在这个区域的荧光探针的穿透深度比较低,难以运用到人体层面的超氧阴离子的检测。同时,在现有技术这些报道的荧光探针中,几乎都是利用氧化还原的反应机理,这类探针容易受到体内其他还原性物质的影响,从而干扰体内超氧阴离子的检测。
在现有的放射性碘标记的化合物中,尚未有关于活体内超氧阴离子的检测探针的报道,并且已有的放射性核素标记的探针化合物是基于二氢乙锭的结构改造修饰的,如:18F标记的二氢乙锭衍生物,这类化合物与超氧阴离子的反应机理是氧化还原反应,这类机理不适用与体内超氧阴离子的检测,因为体内环境复杂,存在很多其他还原性物质会干扰探针的检测。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷,提供一种超氧阴离子探针。
本发明的另一目的在于提供上述超氧阴离子探针的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述超氧阴离子探针的应用。
本发明的技术方案如下:
一种超氧阴离子探针,由放射性碘标记,其结构式如下:
其中I*为123I、124I、125I和131I中的至少一种。
一种上述超氧阴离子探针的制备方法,其原料包括前体化合物,该前体化合物的结构式如下:
其合成路线如下:
在本发明的一个优选实施方案中,包括如下步骤:
(1)将所述前体化合物溶于乙腈中,得到浓度为50~100μg/mL的第一溶液;
(2)在第一溶液中加入等体积的浓度为0.5~1.5mg/mL氯胺T溶液,混合均匀,得到第二溶液;
(3)在第二溶液中加入活度0.1~5mCi的Na*I溶液和稀盐酸,于15~30℃反应10~30min,得到第三溶液,上述第二溶液、Na*I溶液和稀盐酸的体积比为18~22∶0.8~1.2∶8~12;
(4)在第三溶液中加入饱和偏二亚硫酸钠水溶液以淬灭反应,接着进行分离纯化,得到所述超氧阴离子探针,第三溶液与饱和偏二亚硫酸钠水溶液的体积比为3~4∶1~1.5。
在本发明的一个优选实施方案中,所述前体化合物的制备方法包括如下步骤:
a、在第一有机溶剂中,使4-溴邻苯二甲酸酐和间苯二酚以1∶1.8~2.2的摩尔比于90~130℃反应1.5~3h,生成第一化合物,该第一化合物的结构式如下:
b、在第二有机溶剂中,使第一化合物与三氟甲磺酸酐于-78~30℃以1∶3.8~4.5的摩尔比反应30~60min,生成第二化合物,该第二化合物的结构式如下:
c、在第三有机溶剂中,在反应体系总质量的0.1~0.2%的4-三苯基膦钯的催化下,第二化合物与六正丁基二锡以1∶1.8~2.2的摩尔比于100~130℃反应1.5~2.5h,生成所述前体化合物。
进一步优选的,所述第一有机溶剂为甲磺酸溶液、二氯甲烷或甲苯,所述第二有机溶剂为甲磺酸溶液、二氯甲烷或甲苯,所述第三有机溶剂为甲磺酸溶液、二氯甲烷或甲苯。
上述超氧阴离子探针在制备医学影像显像剂中的应用。
本发明的有益效果:
1、本发明的超氧阴离子探针为放射性碘标记,以三氟甲磺酸基团为响应基团,利用亲核机理的核医学探针化合物,可用于体内超氧阴离子检测,其利用超氧阴离子带有孤电子的的亲核性质,可以与探针结构中的三氟甲磺酸基团迅速反应,并且具有比较高的特异性,在体内检测过程中不容易受到其他小分子的干扰。
2、本发明提出了一种新的超氧阴离子体内检测机制,合成标记后的探针是一个脂溶性非常高的探针,与超氧阴离子反应后探针转变为一个双阴离子,水溶性非常好,难以跨过细胞膜,从而具有很好的体内滞留效果;
3、本发明的放射性碘标记的放射性探针,合成步骤少,标记简单迅速,产率高,分离简单,条件温和,有利于标记物的商业化应用和临床推广;
4、本发明提出的探针是以三氟甲磺酸为响应基团,这个基团是一个很强的吸电子基团,与超氧阴离子反应迅速,而且特异性好,不容易受到体内其他分子的干扰;
5、本发明的探针既可以用放射性碘(123I、124I、125I和131I)标记,同时进行核医学显像和肿瘤的放射性治疗,也可以进行18F和197Hg的标记,具有很好的拓展性,从而获得不同核素标记的超氧阴离子显像剂。
附图说明
图1为本发明实施例1和2制备的放射性碘标记的超氧阴离子探针的核磁分析结果图;
图2为本发明实施例1制备的放射性碘标记的超氧阴离子探针与超氧阴离子反应后的Log D变化和HPLC分析图(黑色代表反应前的探针,灰色代表探针与超氧阴离子反应后的化合物);
图3为本发明实施例1制备的放射性碘标记的超氧阴离子探针的细胞外排实验结果;
图4为本发明实施例2制备的放射性碘标记的超氧阴离子探针的SPECT/CT显像图;
图5为本发明实施例1制备的放射性碘标记的超氧阴离子探针用于炎症ICR小鼠的生物分布结果(%ID/g,mean±SD,n=4);
具体实施方式
以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
实施例1——131I标记的超氧阴离子探针的合成
以下为本发明放射性碘标记的超氧阴离子探针的结构式:
以下为放射性碘标记的超氧阴离子探针的合成路线:
(1)在5mL甲磺酸溶液中加入454mg的4-溴邻苯二甲酸酐和440mg的间苯二酚,120℃条件下搅拌反应2h.反应后冷却至室温,将混合溶液缓慢滴加到500mL纯水中,快速搅拌,得到黄色固体沉淀,过滤收集固体真空干燥48h,得到第一化合物。
(2)准确称取第一化合物.600g溶于100mL无水二氯甲烷,加入5mL的三乙胺,搅拌成均一溶液a,冷却到-78℃。2.250g的三氟甲磺酸酐溶于15的无水二氯甲烷,逐滴加入到溶液a中,滴加完后低温反应10min,室温搅拌反应20min。反应后的溶液用乙酸乙酯稀释,分别用1M盐酸、饱和食盐水、纯水洗涤三遍,溶液用无水硫酸钠干燥,除去溶剂,粗产物用乙酸乙酯和石油醚进行柱色谱纯化,得到第二化合物。
(3)准确称取第二化合物130mg,溶于5mL无水甲苯中,加入290mg,六正丁基二锡和2mg的4-三苯基膦钯作为催化剂。110℃反应1.5h,冷却至室温,过滤,除去溶剂得到粗产物。用乙酸乙酯和石油醚进行柱色谱纯化,得到前体化合物。
(4)称取前体化合物100mg溶于2mL四氢呋喃中,搅拌均匀后加入2mL纯水,室温搅拌反应2h,浓缩反应液,用乙酸乙酯和石油醚进行柱色谱纯化得到参考化合物4。
(5)前体化合物1mg溶于100μL无水乙腈中,加入1mg/mL的氯胺T溶液100μL,混合均匀加入1mCi的Na131I和1M盐酸100μL。室温反应15min,加入100μL饱和偏二亚硫酸钠水溶液淬灭反应,除去反应溶液,用乙腈溶解反应瓶得到如图1所示的放射性碘标记的超氧阴离子探针,经过HPLC分析得到放射性化学产率为70%,放射性化学纯度大于98%。
实施例2——125I标记的超氧阴离子探针的合成
以下为本发明放射性碘标记的超氧阴离子探针的结构式:
以下为放射性碘标记的超氧阴离子探针的合成路线:
(6)在5mL甲磺酸溶液中加入454mg的4-溴邻苯二甲酸酐和440mg的间苯二酚,120℃条件下搅拌反应2h.反应后冷却至室温,将混合溶液缓慢滴加到500mL纯水中,快速搅拌,得到黄色固体沉淀,过滤收集固体真空干燥48h,得到第一化合物。
(7)准确称取第一化合物.600g溶于100mL无水二氯甲烷,加入5mL的三乙胺,搅拌成均一溶液a,冷却到-78℃。2.250g的三氟甲磺酸酐溶于15的无水二氯甲烷,逐滴加入到溶液a中,滴加完后低温反应10min,室温搅拌反应20min。反应后的溶液用乙酸乙酯稀释,分别用1M盐酸、饱和食盐水、纯水洗涤三遍,溶液用无水硫酸钠干燥,除去溶剂,粗产物用乙酸乙酯和石油醚进行柱色谱纯化,得到第二化合物。
(8)准确称取第二化合物130mg,溶于5mL无水甲苯中,加入290mg,六正丁基二锡和2mg的4-三苯基膦钯作为催化剂。110℃反应1.5h,冷却至室温,过滤,除去溶剂得到粗产物。用乙酸乙酯和石油醚进行柱色谱纯化,得到前体化合物。
(9)称取前体化合物100mg溶于2mL四氢呋喃中,搅拌均匀后加入2mL纯水,室温搅拌反应2h,浓缩反应液,用乙酸乙酯和石油醚进行柱色谱纯化得到参考化合物4。
(10)前体化合物1mg溶于100μL无水乙腈中,加入1mg/mL的氯胺T溶液100μL,混合均匀加入1mCi的Na125I和1M盐酸100μL。室温反应15min,加入100μL饱和偏二亚硫酸钠水溶液淬灭反应,除去反应溶液,用乙腈溶解反应瓶得到如图1所示的放射性碘标记的超氧阴离子探针,经过HPLC分析得到放射性化学产率为70%,放射性化学纯度大于98%。
实施例3——131I标记的超氧阴离子显像剂的脂水分配系数的测定
以下是本发明上述方法制备的131I标记的超氧阴离子显像剂的性能测定描述:
131I标记的超氧阴离子显像剂和该探针与超氧阴离子反应后的化合物的脂水分配系数(Log D)的测定通过以下步骤完成:
将100μL稀释后的放射性注射液加入到含有0.9mL PBS(0.05mol/L,pH=7.4)和1ml正辛醇混合液的离心管中(PBS和正辛醇在实验前一天混合并静置,以供第二天进行实验时使用),涡旋震荡2min之后,6000rpm离心5min,从PBS相及正辛醇相中各取100μL液体并通过γ-counter放射性计数。实验重复三次取平均值。脂水分布系数(log P)的计算公式为:
P=(Ia-I)/(Ib-I)
其中Ia代表油相中测定的放射性计数、Ib代表水相中测定的放射性计数、I代表背景计数。
通过计算,最终测定各放射性标记的靶向探针的脂水分布系数。
此外,我们分别对131I标记的超氧阴离子显像剂和与超氧阴离子反应后的化合物进行HPLC反向色谱柱分析,HPLC条件为乙腈∶水=75%∶25%,流速为1.5mL/min。
由图可知,131I标记的超氧阴离子显像剂是一个脂溶性非常好的分子,这有利于探针进入机体后容易跨过细胞膜进入细胞内,与细胞内的超氧阴离子反应。而探针与超氧阴离子反应后则转变成了一个水溶性比较好的分子,该分子是一个双阴离子,带有负电荷,难以跨出细胞膜,从而将放射性信号滞留在细胞内。同时HPLC分析结果也证明了这个探针反应前后的记性变化,这个检测滞留机理是后面疾病模型显像的基础和关键,也是本发明的创新之一。
具体结果参见图2
实施例4——131I标记的超氧阴离子显像剂的细胞外排实验
实验所选取的细胞为巨噬细胞。将其培养于DMEM高糖培养基中,(含有10%灭活的胎牛血清,L-谷氨酸以及抗生素)。培养箱恒温37℃且处于5%CO2的环境中以利于细胞生长。实验前24h,将细胞培养于24孔板中(约5×105细胞/孔),用DMEM高糖培养基进行培养。细胞外排实验的步骤为:
(1)将放射性标记液加入到处理好的DMEM高糖培养基中,使放射性量稀释为大约1~2μCi/mL。
(2)讲细胞分成两组,一组加入LPS溶液进行刺激细胞产生超氧阴离子,另一组作为正常组参考。放在培养箱中培养4h。
(3)将已经形成贴壁细胞的24孔板取出,吸走培养基,再向每个孔中加入约0.5mL的DMEM高糖培养基,随后吸出以洗去死去或是脱落的细胞。
(4)依次向每孔加入100μL含有标记探针的培养基,再补充约400μLDMEM高糖培养基,加盖后放置于培养箱中培养90min。
(5)培养结束以后,及时将孔中的培养基吸出,重新加入500μL的DMEM高糖培养基放在培养箱中培养。
(6)培养结束以后,到达每个实验时间点时,及时将孔中的培养基吸出,加入约0.5mLPBS(含0.2%BSA)洗两次,再加入0.5mLpH值为4.0的stripping buffer洗1次,收集stripping buffer洗液于试管中;最后再用0.5mL 1M NaOH将细胞洗脱,室温下放置5-10min,然后用移液器吸头轻刮板孔底部,使细胞完全脱离,吸取孔板内所有NaOH溶液和细胞于小试管中。测量计数。
(7)取3份100μL含有标记物的binding medium作为total added activity,在计数器上进行计数。
从实验结果可以看出,131I标记的超氧阴离子显像剂在LPS刺激的细胞组释放的速度小于在正常组的释放速度。这就说明,探针在超氧阴离子比较多的细胞内具有更好的滞留效果。这进一步验证了我们探针检测机理是有效可行的。
具体结果详见图3
实施例5——125I标记的超氧阴离子显像剂在炎症模型小鼠的SPECT/CT显像
实验选取20g左右的ICR小鼠用来做实验模型。在小鼠的右脚注射50μL弗氏佐剂,引起小鼠关节炎反应。在注射弗氏佐剂后的第7天,每只小鼠通过尾静脉注射的注射计量约为18.5MBq。在注射放射性标记物之后的不同时间点进行成像。
从显像结果可以看出,探针可以在短时间内富集到炎症部位,准确区分炎症部位和正常部位,在1h的时候炎症部位的摄取大概是正常部位摄取的两倍左右。同时,通过SPECT/CT显像图可以发现探针大多集中在小鼠腿的关节部位,这说明关节炎的发生过程中会产生很多的超氧阴离子。这一实验结果表面,该探针可以准确检测到疾病中超氧阴离子的产生位置,从而可以检测治疗过程中产生超氧阴离子的浓度和范围。
具体结果详见图4
实施例6——131I标记的超氧阴离子显像剂在炎症模型小鼠的生物分布
实验选取20g左右的ICR小鼠用来做实验模型。在小鼠的右脚注射50μL弗氏佐剂,引起小鼠关节炎反应。在注射弗氏佐剂后的第7天,每只小鼠通过尾静脉注射的注射计量约为10μCi/100μL。在给药后的2min,10min,30min,60min和120min处死小鼠,取脑、心、肝、脾、肺、肾、正常肌肉和炎症部位等主要脏器,称重并计数。
从实验结果可以看出,在2min的时候探针大多集中在血液中以及血液丰富的器官中如心肺等,在10min,探针开始在炎症部位富集,并且摄取量约为正常对照的两倍,这一差异可以保持到60min。此外,生物分布的结果与SPECT/CT显像结果一致。
表1放射性碘标记的超氧阴离子探针用于炎症ICR小鼠的生物分布结果(%ID/g,mean±SD,n=4)
具体结果详见图5
以上数据表明,本发明制备的超氧阴离子显像剂具有合成简单,标记率高,检测特异性好,可以反映疾病中产生的超氧阴离子的浓度与产生范围。
在之前的研究中,大多数针对超氧阴离子的探针都是荧光探针,鲜有放射性核素标记的探针,本发明提出了一种新的放射性碘标的核医学探针用于体内超氧阴离子的检测。克服了穿透深度的问题,同时具有很好的体内特异性,实现了良好的生物评价效果。这类探针合成简单,标记分离迅速,具有很大的应用潜力,适合临床推广。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,比如用18F和197Hg核素进行标记的超氧阴离子探针等。
以下四类化合物是本发明所述的放射性标记的超氧阴离子探针的拓展,应属本发明的涵盖范围:
备注:X=131I125I18F197Hg
本领域普通技术人员可知,本发明的技术方案在下述范围内变化时,仍然能够得到与上述实施例相同或相近的技术效果,仍然属于本发明的保护范围:
一种超氧阴离子探针,由放射性碘标记,其结构式如下:
其中I*为123I、124I、125I和131I中的至少一种。
上述超氧阴离子探针的制备方法的原料包括前体化合物,该前体化合物的结构式如下:
制备方法具体包括如下步骤:
(1)将所述前体化合物溶于乙腈中,得到浓度为50~100μg/mL的第一溶液;
(2)在第一溶液中加入等体积的浓度为0.5~1.5mg/mL氯胺T溶液,混合均匀,得到第二溶液;
(3)在第二溶液中加入活度0.1~5mCi的Na*I溶液和稀盐酸,于15~30℃反应10~30min,得到第三溶液,上述第二溶液、Na*I溶液和稀盐酸的体积比为18~22∶0.8~1.2∶8~12;
(4)在第三溶液中加入饱和偏二亚硫酸钠水溶液以淬灭反应,接着进行分离纯化,得到所述超氧阴离子探针,第三溶液与饱和偏二亚硫酸钠水溶液的体积比为3~4∶1~1.5。
上述前体化合物的制备方法包括如下步骤:
a、在第一有机溶剂中,使4-溴邻苯二甲酸酐和间苯二酚以1∶1.8~2.2的摩尔比于90~130℃反应1.5~3h,生成第一化合物,该第一化合物的结构式如下:
b、在第二有机溶剂中,使第一化合物与三氟甲磺酸酐于-78~30℃以1∶3.8~4.5的摩尔比反应30~60min,生成第二化合物,该第二化合物的结构式如下:
c、在第三有机溶剂中,在反应体系总质量的0.1~0.2%的4-三苯基膦钯的催化下,第二化合物与六正丁基二锡以1∶1.8~2.2的摩尔比于100~130℃反应1.5~2.5h,生成所述前体化合物。
所述第一有机溶剂为甲磺酸溶液、二氯甲烷或甲苯,所述第二有机溶剂为甲磺酸溶液、二氯甲烷或甲苯,所述第三有机溶剂为甲磺酸溶液、二氯甲烷或甲苯。
以上所述,仅为本发明的较佳实施例而已,故不能依此限定本发明实施的范围,即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰,皆应仍属本发明涵盖的范围内。
Claims (6)
1.一种超氧阴离子探针,其特征在于:由放射性碘标记,其结构式如下:
其中I*为123I、124I、125I和131I中的至少一种。
2.一种权利要求1所述的超氧阴离子探针的制备方法,其特征在于:其原料包括前体化合物,该前体化合物的结构式如下:
3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)将所述前体化合物溶于乙腈中,得到浓度为50~100μg/mL的第一溶液;
(2)在第一溶液中加入等体积的浓度为0.5~1.5mg/mL氯胺T溶液,混合均匀,得到第二溶液;
(3)在第二溶液中加入活度0.1~5mCi的NaI*溶液和稀盐酸,于15~30℃反应10~30min,得到第三溶液,上述第二溶液、NaI*溶液和稀盐酸的体积比为18~22∶0.8~1.2∶8~12;
(4)在第三溶液中加入饱和偏二亚硫酸钠水溶液以淬灭反应,接着进行分离纯化,得到所述超氧阴离子探针,第三溶液与饱和偏二亚硫酸钠水溶液的体积比为3~4∶1~1.5。
4.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述前体化合物的制备方法包括如下步骤:
a、在第一有机溶剂中,使4-溴邻苯二甲酸酐和间苯二酚以1∶1.8~2.2的摩尔比于90~130℃反应1.5~3h,生成第一化合物,该第一化合物的结构式如下:
b、在第二有机溶剂中,使第一化合物与三氟甲磺酸酐于-78~30℃以1∶3.8~4.5的摩尔比反应30~60min,生成第二化合物,该第二化合物的结构式如下:
c、在第三有机溶剂中,在反应体系总质量的0.1~0.2%的4-三苯基膦钯的催化下,第二化合物与六正丁基二锡以1∶1.8~2.2的摩尔比于100~130℃反应1.5~2.5h,生成所述前体化合物。
5.如权利要求4所述的制备方法,其特征在于:所述第一有机溶剂为甲磺酸溶液、二氯甲烷或甲苯,所述第二有机溶剂为甲磺酸溶液、二氯甲烷或甲苯,所述第三有机溶剂为甲磺酸溶液、二氯甲烷或甲苯。
6.权利要求1所述的超氧阴离子探针在制备医学影像显像剂中的应用。
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