CN107334904A - 一种治疗骨质疏松的中药颗粒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗骨质疏松的中药颗粒及其制备方法,该中药颗粒由包含以下重量份数的中药原料配制而成:淫羊藿8~15份、骨碎补8~15份、山萸肉8~12份、枸杞子8~12份、熟地6~10份、山药6~12份、龟板胶6~10份。本发明的治疗骨质疏松的中药颗粒,以淫羊藿为君药,能够补肾壮阳、祛风除湿、强筋健骨等;以骨碎补、山萸肉、枸杞子、熟地、山药和龟板胶为臣药,辅助君药补肾温阳、滋补肾阴、健脾柔肝,兼以活血止痛、祛风除湿,通过补肾、疏肝、健脾的作用来加强机体骨的质和量,以阻止和减少骨质疏松症的发生和发展,疗效显著,使用方便。
Description
技术领域
本发明涉及中药复方技术领域,具体而言,涉及一种治疗骨质疏松的中药颗粒及其制备方法。
背景技术
原发性骨质疏松症是一种全身性的骨骼代谢性疾病,是老年患者的常见多发病,病理特点以骨量减少、骨组织的微观结构退化(骨小梁变细变稀、结构断裂、各个骨小梁之间孔隙增大等)为特征,表现为骨的强度下降和脆性增加,在外力作用下容易造成骨折。该病临床症状以腰背疼痛、四肢骨骼疼痛无力、身高变矮,甚至发生骨折为主要表现。中医认为骨质疏松症病位在骨,与肝、脾、肾、气血密切相关,病性属本虚标实;以肾虚、肝郁、脾虚、血虚为本,以痰浊、血瘀为标,其中肾虚是发病根源,血瘀是重要的致病因素。
目前对骨质疏松的治疗主要依靠药物治疗,大体包括雌激素替代治疗(尼尔雌醇、利维爱)、降钙素(益钙宁、密钙息)、VD(罗钙全、阿法骨化醇)及钙制剂等。这些药物大多价格昂贵,且有较明显的副作用。且据近来国外有关报道,长期使用雌激素有诱发乳腺癌的可能。由于患者钙吸收能力的差异,降钙素、VD及钙制剂疗效并不理想,且其他疗法(光线、运动、营养疗法等)只能作为辅助性治疗。
发明内容
有鉴于此,本发明提供的一种治疗骨质疏松的中药颗粒及其制备方法,更好的克服了上述现有技术存在的问题和缺陷,该治疗骨质疏松的中药颗粒以补肾、疏肝和健脾的药物为主,以益气活血的药物为辅,强肾健体,强筋骨,强下元,达到对骨质疏松标本兼治的目的,且疗效显著,使用方便,价格低廉,无任何毒副作用。
一种治疗骨质疏松的中药颗粒,由包含以下重量份数的中药原料配制而成:淫羊藿8~15份、骨碎补8~15份、山萸肉8~12份、枸杞子8~12份、熟地6~10份、山药6~12份、龟板胶6~10份。
进一步地,所述中药原料还包括以下重量份数的组分:黄芪20~25份和当归6~10份。
进一步地,所述中药原料还包括以下重量份数的组分:怀牛膝6~10份。
本发明还提供了一种如上述治疗骨质疏松的中药颗粒的制备方法,该制备方法包括以下步骤:
(1)将各中药原料混合,加水煎煮两次,合并两次的煎液,然后过滤得到滤液,并将所述滤液静置得到第一上清液;
(2)将所述第一上清液浓缩,放至室温冷却,然后加入乙醇搅拌均匀,静置得到第二上清液,再将所述第二上清液浓缩得到清膏;
(3)在所述清膏内加入粘合剂,制成颗粒。
进一步地,步骤(1)中,每次所述加水的量各自为所述中药原料总重量的3~6倍;第一次所述煎煮的时间为1.5~2h,第二次所述煎煮的时间为1~1.5h。
进一步地,步骤(1)中,所述静置的时间为6~12h。
进一步地,步骤(2)中,将所述第一上清液浓缩至相对密度为1~1.1;将所述第二上清液浓缩至相对密度为1.1~1.2。
进一步地,步骤(2)中,加入所述乙醇至含醇量为70~85wt%,所述静置的时间为24~48h。
进一步地,步骤(3)中,所述粘合剂包括微晶纤维素、糊精、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和红糖粉的一种或几种。
进一步地,在步骤(3)之后还包括:将所述颗粒过20~50目筛,并在60~80℃下干燥。
与现有技术相比,本发明的一种治疗骨质疏松的中药颗粒组合物、治疗骨质疏松的中药颗粒及其制备方法的有益效果是:
(1)、本发明的治疗骨质疏松的中药颗粒,以淫羊藿为君药,能够补肾壮阳、祛风除湿、强筋健骨等;以骨碎补、山萸肉、枸杞子、熟地、山药和龟板胶为臣药,辅助君药补肾温阳、滋补肾阴、健脾柔肝,兼以活血止痛、祛风除湿,通过补肾、疏肝、健脾的作用来加强机体骨的质(骨所含矿物质)和量(骨密度),以阻止和减少骨质疏松症的发生和发展,疗效显著,使用方便;另外,本发明的治疗骨质疏松的中药颗粒制备方法简单,制备成本低,使用安全,无毒副作用。
(2)、进一步地,本发明的治疗骨质疏松的中药颗粒以补肾、疏肝和健脾的药物为主,益气活血的药物(黄芪、当归及怀牛膝)为辅,达到对骨质疏松标本兼治的目的。
为使本发明的上述目的、特征和优点能更明显易懂,下文特举较佳实施例,作详细说明如下。
具体实施方式
为了便于理解本发明,下面结合实施例的方式对本发明的技术方案做详细说明,在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。
但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施,本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进,因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
除非另有限定,本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时,以本说明书中的定义为准。
如本文所用之术语:
“由……配制”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形,意在覆盖非排它性的包括。例如,包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素,而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中,此短语将使权利要求为封闭式,使其不包含除那些描述的材料以外的材料,但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时,其仅限定在该子句中描述的要素;其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时,这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围,而不论该范围是否单独公开了。例如,当公开了范围“1~5”时,所描述的范围应被解释为包括范围“1~4”、“1~3”、“1~2”、“1~2和4~5”、“1~3和5”等。当数值范围在本文中被描述时,除非另外说明,否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生,例如,A和/或B包括(A和B)和(A或B);
一种治疗骨质疏松的中药颗粒,由包含以下重量份数的中药原料配制而成:淫羊藿8~15份如8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份或15份等;骨碎补8~15份如8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份或15份等;山萸肉8~12份如8份、9份、10份、11份或12份等;枸杞子8~12份如8份、9份、10份、11份或12份等;熟地6~10份如6份、7份、8份、9份或10份等;山药6~12份如6份、7份、8份、9份、10份、11份或12份等;龟板胶6~10份如6份、7份、8份、9份或10份等。
优选地,一种治疗骨质疏松的中药颗粒,由包含以下重量份数的中药原料配制而成:淫羊藿13~15份、骨碎补12~15份、山萸肉10~12份、枸杞子10~12份、熟地8~10份、山药10~12份、龟板胶8~10份。
上述,中医理论认为:
淫羊藿:味辛、甘,性温,归肾、肝经。具有壮肾阳、坚筋骨、祛风湿的功效;其主治阳痿早泄、精冷不育、尿频失禁、腰酸腿痛、四肢麻木、半身不遂、神经衰弱、健忘、耳鸣目眩、筋骨挛急、风湿痹痛等症状。现代药理报道,淫羊藿具有增强并调节免疫功能、改善微循环、降压降脂、抗骨质增生、中枢镇静、清除氧自由基以抗衰老、抑制细菌病毒生长等作用。
骨碎补:味苦,性温;具有补肾强骨、续伤止痛等功效;其主治肾虚腰痛、耳鸣耳聋、牙齿松动、跌扑闪挫、筋骨折伤等。
山萸肉:味酸、涩,性味温,归肝、肾经;其能够补肝益肾、涩精固脱;用于眩晕耳鸣、腰膝酸痛、遗尿尿频、崩漏带下、大汗虚脱、内热消渴等。
枸杞子:味甘,性平,归肝、肾、肺经;其能够补肾益精、养肝明目、润肺生津;用于治疗肝肾阴虚、精血亏少、乏力怠动、健忘失眠、腰膝酸痛、眩晕耳鸣、视物不清、内热消渴及血虚萎黄等。
熟地:味甘,性微温,归肝、肾经;其具有补血滋阴功效,可用于血虚萎黄,眩晕,心悸失眠,月经不调,崩漏等症,亦可用于肾阴不足的潮热骨蒸、腰膝酸软、内热消渴等症。
山药:味甘,性平。归脾、肺、肾经。能够补脾养胃,生津益肺,补肾涩精。用于脾虚食少,久泻不止,肺虚喘咳,肾虚遗精,带下,尿频,虚热消渴。
龟板胶:味咸甘,性平,入肝肾经。龟板胶具有滋阴、潜阳、补肾、健骨的功效;主治肾阴不足、骨蒸劳热、吐血久咳、腰痛、骨痿、阴虚风动及痔疮等。
由上述描述可知,本发明的治疗骨质疏松的中药颗粒,以淫羊藿为君药,能够补肾壮阳、祛风除湿、强筋健骨等;以骨碎补、山萸肉、枸杞子、熟地、山药和龟板胶为臣药,辅助君药补肾温阳、滋补肾阴、健脾柔肝,兼以活血止痛、祛风除湿,通过补肾、疏肝、健脾的作用来加强机体骨的质(骨所含矿物质)和量(骨密度),以阻止和减少骨质疏松症的发生和发展,疗效显著,使用方便。
进一步地,所述中药原料还包括以下重量份数的组分:黄芪20~25份如20份、21份、22份、23份、24份或25份等;当归6~10份如6份、7份、8份、9份或10份等。
进一步地,所述中药原料还包括以下重量份数的组分:怀牛膝6~10份如6份、7份、8份、9份或10份等。
上述,黄芪具有益元气、壮脾胃、去肌热、排脓止痛、敛疮生肌、活血生血的功效,能治水肿尿少、出汗不止、气虚乏力、食少便溏、便血崩漏、子宫脱垂、久溃不敛、内热消渴、慢性肾炎蛋白尿、糖尿病等。
当归:味甘、辛,性温。归肝、心、脾经。能够补血活血、调经止痛,润肠通便。用于血虚萎黄,眩晕心悸,月经不调,经闭痛经,虚寒腹痛,肠燥便秘,风湿痹痛,跌扑损伤,痈疽疮疡。酒当归活血通经;还可用于经闭痛经,风湿痹痛,跌扑损伤。
怀牛膝:味微苦酸,性寒,具有活血散瘀、祛湿利尿、清热解毒的功效;主治尿血、妇女经闭、症瘕、风湿关节痛、水肿、痢疾、疟疾、白喉、痈肿、跌打损伤等症。
需要理解的是,该治疗骨质疏松的中药颗粒以补肾、疏肝和健脾的药物为主,益气活血的药物(黄芪、当归及怀牛膝)为辅,达到对骨质疏松标本兼治的目的。
本发明还提供了一种如上述治疗骨质疏松的中药颗粒的制备方法,该制备方法包括以下步骤:
(1)将各中药原料混合,加水煎煮两次,合并两次的煎液,然后过滤得到滤液,并将所述滤液静置得到第一上清液;
(2)将所述第一上清液浓缩,放至室温冷却,然后加入乙醇搅拌均匀,静置得到第二上清液,再将所述第二上清液浓缩得到清膏;
(3)在所述清膏内加入粘合剂,制成颗粒。
进一步地,步骤(1)中,每次所述加水的量各自为所述中药原料总重量的3~6倍如3倍、4倍、5倍或6倍等;第一次所述煎煮的时间为1.5~2h如1.5h、1.6h、1.7h、1.8h、1.9h或2.0h,第二次所述煎煮的时间为1~1.5h如1h、1.1h、1.2h、1.3h、1.4h或1.5h。
进一步地,步骤(1)中,所述静置的时间为6~12h如6h、7h、8h、9h、10h、11h或12h等。
进一步地,步骤(2)中,将所述第一上清液浓缩至相对密度为1~1.1如1、1.02、1.05、1.08或1.1等;将所述第二上清液浓缩至相对密度为1.1~1.2如1.1、1.12、1.14、1.16、1.18或1.2等。
进一步地,步骤(2)中,加入所述乙醇至含醇量为70~85wt%如70wt%、75wt%、80wt%或85wt%等;所述静置的时间为24~48h如24h、24h、32h、36h、40h、45h或48h等。
进一步地,步骤(3)中,所述粘合剂包括微晶纤维素、糊精、羟丙基甲基纤维素、蔗糖中的一种或几种。
进一步地,在步骤(3)之后还包括:将所述颗粒过20~50目如20目、30目、40目或50目筛,并在60~80℃如60℃、65℃、70℃、75℃或80℃下干燥。
本发明的治疗骨质疏松的中药颗粒制备方法简单,制备成本低,使用安全,无毒副作用。
现收集100名骨质疏松患者,年龄为45-65岁,服用本中药颗粒,早晚各一次,温水送服。
疗效判断:
治愈:症状体征基本消失。
有效:症状体征缓解。
无效:症状体征与治疗前无改善。
10天为一个疗程,连续使用3个疗程本发明的中药颗粒后,统计结果如下:
总人数 | 治愈 | 有效 | 无效 | 总有效率 |
100 | 85 | 10 | 5 | 95% |
由上表可知,经本发明中药颗粒治疗后,治愈85例,占85%,有效10例,占10%,无效5例,占5%,总体有效率为95%。由此可见,本发明的中药颗粒对骨质疏松的治疗有较好的效果。
为了便于理解本发明,下面结合实施例及具体病例来进一步说明本发明的技术方案。
实施例1
一种治疗骨质疏松的中药颗粒,其制备方法如下:
(1)称取中药原料:淫羊藿8份、骨碎补15份、山萸肉8份、枸杞子8份、熟地6份、山药6份、龟板胶10份。
(2)将上述各中药原料混合,加水煎煮2次,第一次加水为中药原料总重量的3倍量,煎煮1h,第二次加水为原料总重量的5倍量,煎煮1h,合并煎液,然后过滤得到滤液,并将滤液静置6h得到第一上清液。
(3)将第一上清液浓缩至相对密度为1,放至室温冷却,然后加入乙醇至含醇量为70wt%,搅拌均匀,静置24h得到第二上清液,再将所述第二上清液浓缩至相对密度为1.1,得到清膏。
(4)取步骤(3)得到的清膏,加入蔗糖和糊精,制成颗粒,然后过50目筛,并在60℃下干燥。
临床案例:邓某,男,64岁,一周前不慎扭伤腰部,经敷跌打药、针灸等未效。现腰背疼痛,活动困难,检查见腰椎平直,两侧腰肌紧张有轻压痛,无放射性疼痛,腰部活动受限,舌淡、苔白、脉沉细,以往常有遗精史,十二指肠球部溃疡,浅表萎缩性胃炎,X射线拍片确诊为脊椎骨质疏松、同时呈轻度肥大性退行性改变,诊断为老年性骨质疏松,使用本发明中药颗粒一周后,腰脊疼痛减轻,再继续服用本发明中药颗粒15天,腰背基本无痛,自理生活,追访多年疗效巩固。
实施例2
一种治疗骨质疏松的中药颗粒,其制备方法如下:
(1)称取中药原料:淫羊藿12份、骨碎补12份、山萸肉10份、枸杞子10份、熟地8份、山药10份、龟板胶8份。
(2)将上述各中药原料混合,加水煎煮2次,第一次加水为中药原料总重量的4倍量,煎煮1.8h,第二次加水为原料总重量的4倍量,煎煮1.2h,合并煎液,然后过滤得到滤液,并将滤液静置8h得到第一上清液。
(3)将第一上清液浓缩至相对密度为1.05,放至室温冷却,然后加入乙醇至含醇量为75wt%,搅拌均匀,静置36h得到第二上清液,再将所述第二上清液浓缩至相对密度为1.15,得到清膏。
(4)取步骤(3)得到的清膏,加入蔗糖和微晶纤维素,制成颗粒,然后过40目筛,并在65℃下干燥。
临床案例:曹某,女,70岁,腰背疼痛12天,全身乏力,无明显外伤史,来诊时需人搀扶,检查脊柱呈圆形驼背,腰及腰骶部有轻压痛,无放射性疼痛,腰活动受阻,舌淡、苔白、脉沉细,X射线拍片确诊为脊椎普遍骨质疏松,腰1、2有压缩改变,诊断为老年性骨质疏松症。服用本发明的中药颗粒一周,腰背疼痛日渐减轻,可自已行走,不用搀扶,唯腰部仍感乏力,继续服用本发明中药颗粒1个半月,腰背疼痛基本消失,精神较好,能自己行走,自理生活,随访1年未复发。
实施例3
一种治疗骨质疏松的中药颗粒,其制备方法如下:
(1)称取中药原料:淫羊藿15份、骨碎补8份、山萸肉12份、枸杞子12份、熟地10份、山药12份、龟板胶6份。
(2)将上述各中药原料混合,加水煎煮2次,第一次加水为中药原料总重量的3倍量,煎煮2h,第二次加水为原料总重量的6倍量,煎煮1.5h,合并煎液,然后过滤得到滤液,并将滤液静置12h得到第一上清液。
(3)将第一上清液浓缩至相对密度为1.1,放至室温冷却,然后加入乙醇至含醇量为85wt%,搅拌均匀,静置48h得到第二上清液,再将所述第二上清液浓缩至相对密度为1.2,得到清膏。
(4)取步骤(3)得到的清膏,加入蔗糖和糊精,制成颗粒,然后过30目筛,并在70℃下干燥。
临床案例:吴某,女,49岁,近一年来有腰膝酸软,脊背疼痛,经常感觉疲劳,不能久站。经检查,两侧腰肌紧张轻压疼痛,无放射性疼痛,腰部活动受限,X射线拍片后确诊为脊椎骨质疏松,服用本发明的中药颗粒一周后,脊背疼痛减轻,腰膝酸软缓解,继续服用本发明中药颗粒2个月,腰膝酸软和脊背疼痛症状基本消失。
实施例4
一种治疗骨质疏松的中药颗粒,其制备方法如下:
(1)称取中药原料:淫羊藿10份、骨碎补13份、山萸肉9份、枸杞子9份、熟地7份、山药8份、龟板胶9份、黄芪20份、当归6份、怀牛膝10份。
(2)将上述各中药原料混合,加水煎煮2次,第一次加水为中药原料总重量的5倍量,煎煮1.7h,第二次加水为原料总重量的5倍量,煎煮1.3h,合并煎液,然后过滤得到滤液,并将滤液静置8h得到第一上清液。
(3)将第一上清液浓缩至相对密度为1.05,放至室温冷却,然后加入乙醇至含醇量为75wt%,搅拌均匀,静置28h得到第二上清液,再将所述第二上清液浓缩至相对密度为1.14,得到清膏。
(4)取步骤(3)得到的清膏,加入蔗糖和糊精,制成颗粒,然后过20目筛,并在75℃下干燥。
临床案例:钟某,女,47岁,于半年前突然出现全身关节疼痛,失眠盗汗,口腔溃疡时有发生,无发热、畏寒,无恶心、呕吐、腹泻等症状,来就诊,确诊为骨质疏松症,服用本发明的中药颗粒10天后,全身关节疼痛稍有缓解,服用一月后,疼痛缓解较明显,继续服用本发明的中药颗粒3个月,全身关节疼痛症状基本消失。
实施例5
一种治疗骨质疏松的中药颗粒,其制备方法如下:
(1)称取中药原料:淫羊藿13份、骨碎补9份、山萸肉11份、枸杞子11份、熟地9份、山药11份、龟板胶7份、黄芪22份、当归8份、怀牛膝8份。
(2)将上述各中药原料混合,加水煎煮2次,第一次加水为中药原料总重量的3倍量,煎煮1.5h,第二次加水为原料总重量的5倍量,煎煮1.5h,合并煎液,然后过滤得到滤液,并将滤液静置11h得到第一上清液。
(3)将第一上清液浓缩至相对密度为1.08,放至室温冷却,然后加入乙醇至含醇量为70wt%,搅拌均匀,静置24h得到第二上清液,再将所述第二上清液浓缩至相对密度为1.18,得到清膏。
(4)取步骤(3)得到的清膏,加入蔗糖和糊精,制成颗粒,然后过50目筛,并在80℃下干燥。
临床案例:李某,男,58岁,腰背疼痛两个月,全身乏力,无明显外伤史,来诊时需人搀扶,检查腰及腰骶部有轻压痛,无放射性疼痛,腰活动受阻,X射线拍片确诊为脊椎普遍骨质疏松,腰1有压缩性改变,双能X线检查提示重度骨质疏松,诊断为重度骨质疏松症伴骨折。服用本发明的中药颗粒1个月,腰背疼痛日渐减轻,可自已行走,不用搀扶,唯腰部仍感乏力,继续服用本发明中药颗粒5个月,腰背疼痛基本消失,精神较好,能自己行走,自理生活,随访2年未复发。
实施例6
一种治疗骨质疏松的中药颗粒,其制备方法如下:
(1)称取中药原料:淫羊藿15份、骨碎补18份、山萸肉11份、枸杞子12份、熟地10份、山药10份、龟板胶8份、黄芪25份、当归10份、怀牛膝6份。
(2)将上述各中药原料混合,加水煎煮2次,第一次加水为中药原料总重量的4倍量,煎煮2h,第二次加水为原料总重量的6倍量,煎煮1h,合并煎液,然后过滤得到滤液,并将滤液静置1.2h得到第一上清液。
(3)将第一上清液浓缩至相对密度为1.1,放至室温冷却,然后加入乙醇至含醇量为80wt%,搅拌均匀,静置40h得到第二上清液,再将所述第二上清液浓缩至相对密度为1.2,得到清膏。
(4)取步骤(3)得到的清膏,加入蔗糖和糊精,制成颗粒,,然后过50目筛,并在60℃下干燥。
临床案例:林某,男,67岁,于半年前突然出现腰背部疼痛,全身乏力,无明显外伤史,来诊检查,腰及腰骶部有轻压痛,无放射性疼痛,舌淡、苔白、脉沉细,X射线拍片提示脊椎普遍骨质疏松,腰段多个椎体呈楔形改变,骨密度检查提示重度骨质疏松,诊断为老年性重度骨折疏松症伴骨折。服用本发明的中药颗粒3周,腰背疼痛日渐减轻,可自已行走,不用搀扶,唯腰部仍感乏力,继续服用本发明中药颗粒3月,腰背疼痛基本消失,精神较好,能自己行走,自理生活,随访2年未复发。
以下为本发明实施例1制备的治疗骨质疏松的中药颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松模型促骨形成的作用。
本实验拟通过建立大鼠绝经后骨质疏松症模型,借助现代病理组织学检查、双线X线骨密度测定仪、生物化学、分子生物学等方法与手段,系统观察该中药颗粒对绝经后骨质疏松症的作用途径及作用机理,初步探索该药防治绝经后骨质疏松症的机理(如促进骨形成等)。
1、绝经期大鼠模型的建立
参照文献方法,取体重150-200g的清洁型雌性SD大鼠50只,禁食12小时,腹部去毛2*4cm,常规75%酒精或者0.5%碘伏消毒,用2%的利多卡因注射液原液腹腔注射麻醉,麻醉起效后沿腹中线向下行2~3cm的纵行切口,切开皮肤后潜行向下分离腰肌,腹腔内可见两个粉红色的卵巢,结扎子宫角并切除卵巢。另取10只SD大鼠,从两侧卵巢皮下位置处切除少量脂肪组织,造成和卵巢切除大鼠想类似的创伤作为伪手术组。两组术后均予以连续肌注头孢呋辛30mg/Kg/d预防感染。正常饲养3个月,造成骨质疏松模型。
2、分组及给药方法
将骨质疏松模型大鼠采用随机数字表法随机分为5组,每组10只,即空白组(生理盐水),阳性对照组(仙灵骨葆胶囊),本发明的中药颗粒低、中、高剂量组。另取10只设立伪手术组(生理盐水)。阳性对照组予以仙灵骨葆胶囊6g/Kg/d,低中高剂量组4g/kg/d、6g/kg/d、8g/kg/d,空白组和伪手术组予以等量生理盐水,连续给药3个月。
3、检测指标
实验前、术后1个月、术后3个月分别采集静脉血,于离心机中以3000r/min转数离心15min后,收集上清液得血清,置于-80℃低温冰箱保存待测。术后1个月、术后3个月均以2%利多卡因腹腔过量麻醉处死大鼠。取双侧股骨干髓端剔净软组织,股骨干置于-20℃冰箱冻存,以10%甲醛溶液固定。
3.1、骨密度及生物力学指标检测
造模前将分为6组的60只大鼠2%利多卡因腹腔麻醉,麻醉满意后,取仰卧位,采用我院放射科的德国进口双能X线骨密度仪检测并记录数据,药物于预1个月后再次检测骨密度,3个月后处死后检测股骨骨密度(bone mineraldensity,BMD)。
3.2、血清生化指标检测
样品采集方法:上述大鼠,麻醉成功后,腹主动脉采血,常温下静置1h后放置离心机中以3000r/min转数离心15min,取血清,置于-20℃冰箱保存。
血清钙(s-Ca):使用专用试剂盒利用反射免疫分析进行测定,分别用浓度为1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml的BGP标准品作标准曲线。另取100ul样品血清,依次加入100ul抗血清、100ul125I-BGP,震荡5min使其充分混合,4℃冰箱内静置24h,再加入分离剂500ul。常温静置30min后,以3000r/min转数离心30min,去除上清液,使用特定计算器测定沉淀的放射性计数(cpm),在标准曲线上计算样品浓度。
碱性磷酸酶(ALP):采用对硝基苯磷酸二钠法检测。标准管中加入50ul的0.1mg/ml的酚标准液,样品管中加入50ul样品血清,空白管加入50ul去离子水,各管依次加入500ul缓冲液,500ul基质液,摇匀,37℃水浴30min使其充分反应,再加入1.5ml的显色剂,摇匀,采用波长520nm,1cm光径的紫外分光光度计测量,测定各管的吸光度,再计算出含酶量。
雌二醇(E2):用专用试剂盒采用放射免疫分析法进行测定。用0pg/ml、5pg/ml、20pg/ml、50pg/ml、100pg/ml、250pg/ml、500pg/ml浓度的雌二醇标准品作出标准曲线,另取100ul的样品血清,依次加入100ul 125I-E2,100ul抗体,震荡5min混匀,在37℃条件下CO2含量为5%的恒温箱中温育2h,再加入500ul的分离剂,摇匀,常温静置30min,放入离心机以3000r/min离心30min,弃上清,计数器测定沉淀的放射性技术(cpm),用标准曲线测定样品浓度。
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP-5b):运用固相夹心法酶联免疫吸附试验。按试剂盒说明书操作,加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内,立即加入50ul的生物素标记的抗体;盖上膜板,轻轻振荡混匀,在37℃条件温育1小时。甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干,重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
人1型前胶原氨基端前肽(PINP):本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人PINP抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的PINP会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人PINP抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人PINP抗体与结合在包被抗体上的人PINP结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物,TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色,加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值,PINP浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线求出标本中PINP的浓度。
结果:空白组造模后随着时间推长,骨密度下降明显,阳性对照组及高剂量组造模后骨密度虽然下降,但下降不明显(P>0.05),中剂量及低剂量骨密度下降超过高剂量组(见表1);空白组血清钙、碱性磷酸酶升高明显,阳性对照组升高不明显(P>0.05),中药组方组随着剂量降低血清钙、碱性磷酸酶浓度升高明显(P<0.05)(见表2、表3);空白组雌二醇下降明显,阳性对照组升高明显(P>0.05),中药组方组随着剂量升高雌二醇浓度升高明显(P<0.05)(见表4);空白组TRACP-5b、PINP升高明显,阳性对照组浓度明显降低(P>0.05),中药组方组随着剂量升高TRACP-5b、PINP浓度降低明显(P<0.05)(见表5、表6)。
表1中药组方药物对去势大鼠骨密度的影响(n=10)
注:与空白组相比伪手术组造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;阳性对照组与空白组相比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;高剂量组与空白组相比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05,高剂量组与阳性对照组相比较造模后1个月、3个月##P>0.05,###P>0.05;中剂量组与阳性对照组及空白组比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;低剂量组与阳性对照组及空白组比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05。
表2中药组方药物对去势大鼠血清钙的影响(n=10)
注:与空白组相比伪手术组造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;阳性对照组与空白组相比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;高剂量组与空白组相比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05,高剂量组与阳性对照组相比较造模后1个月、3个月##P>0.05,###P>0.05;中剂量组与阳性对照组及空白组比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;低剂量组与阳性对照组及空白组比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05。
表3中药组方药物对去势大鼠血清碱性磷酸酶的影响(n=10)
注:与空白组相比伪手术组造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;阳性对照组与空白组相比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;高剂量组与空白组相比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05,高剂量组与阳性对照组相比较造模后1个月、3个月##P>0.05,###P>0.05;中剂量组与阳性对照组及空白组比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;低剂量组与阳性对照组及空白组比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05。
表4中药组方药物对去势大鼠血清雌二醇的影响(n=10)
注:与空白组相比伪手术组造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;阳性对照组与空白组相比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;高剂量组与空白组相比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05,高剂量组与阳性对照组相比较造模后1个月、3个月##P>0.05,###P>0.05;中剂量组与阳性对照组及空白组比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;低剂量组与阳性对照组及空白组比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05。
表5中药组方药物对去势大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)的影响(n=10)
注:与空白组相比伪手术组造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;阳性对照组与空白组相比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;高剂量组与空白组相比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05,高剂量组与阳性对照组相比较造模后1个月、3个月##P>0.05,###P>0.05;中剂量组与阳性对照组及空白组比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;低剂量组与阳性对照组及空白组比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05。
表6中药组方药物对去势大鼠人1型前胶原氨基端前肽(PINP)的影响(n=10)
注:与空白组相比伪手术组造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;阳性对照组与空白组相比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;高剂量组与空白组相比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05,高剂量组与阳性对照组相比较造模后1个月、3个月##P>0.05,###P>0.05;中剂量组与阳性对照组及空白组比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05;低剂量组与阳性对照组及空白组比较造模后1个月、3个月##P<0.05,###P<0.05。
上述本发明实施例1制备的治疗骨质疏松的中药颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松模型促骨形成的作用实验中,将本发明实施例1制备的治疗骨质疏松的中药颗粒替换为本发明实施例2~6制备的治疗骨质疏松的中药颗粒,可达到上述同样的实验效果。
上述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,对于本领域的技术人员来说,本发明配方及制备工艺可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种治疗骨质疏松的中药颗粒,其特征在于:由包含以下重量份数的中药原料配制而成:淫羊藿8~15份、骨碎补8~15份、山萸肉8~12份、枸杞子8~12份、熟地6~10份、山药6~12份、龟板胶6~10份。
2.根据权利要求1所述的治疗骨质疏松的中药颗粒,其特征在于:所述中药原料还包括以下重量份数的组分:黄芪20~25份和当归6~10份。
3.根据权利要求2所述的治疗骨质疏松的中药颗粒,其特征在于:所述中药原料还包括以下重量份数的组分:怀牛膝6~10份。
4.一种如权利要求1-3任一项所述的治疗骨质疏松的中药颗粒的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)将各中药原料混合,加水煎煮两次,合并两次的煎液,然后过滤得到滤液,并将所述滤液静置得到第一上清液;
(2)将所述第一上清液浓缩,放至室温冷却,然后加入乙醇搅拌均匀,静置得到第二上清液,再将所述第二上清液浓缩得到清膏;
(3)在所述清膏内加入粘合剂,制成颗粒。
5.根据权利要求4所述的治疗骨质疏松的中药颗粒的制备方法,其特征在于:步骤(1)中,每次所述加水的量各自为所述中药原料总重量的3~6倍;第一次所述煎煮的时间为1.5~2h,第二次所述煎煮的时间为1~1.5h。
6.根据权利要求4所述的治疗骨质疏松的中药颗粒的制备方法,其特征在于:步骤(1)中,所述静置的时间为6~12h。
7.根据权利要求4所述的治疗骨质疏松的中药颗粒的制备方法,其特征在于:步骤(2)中,将所述第一上清液浓缩至相对密度为1~1.1;将所述第二上清液浓缩至相对密度为1.1~1.2。
8.根据权利要求4所述的治疗骨质疏松的中药颗粒的制备方法,其特征在于:步骤(2)中,加入所述乙醇至含醇量为70~85wt%,所述静置时间为24~48h。
9.根据权利要求4所述的治疗骨质疏松的中药颗粒的制备方法,其特征在于:步骤(3)中,所述粘合剂包括微晶纤维素、糊精、羟丙基甲基纤维素、蔗糖中的一种或几种。
10.根据权利要求4所述的治疗骨质疏松的中药颗粒的制备方法,其特征在于:在步骤(3)之后还包括:将所述颗粒过20~50目筛,并在60~80℃下干燥。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20171110 |