CN107325997A - 具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌及其应用 - Google Patents

具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107325997A
CN107325997A CN201710396574.9A CN201710396574A CN107325997A CN 107325997 A CN107325997 A CN 107325997A CN 201710396574 A CN201710396574 A CN 201710396574A CN 107325997 A CN107325997 A CN 107325997A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bifidobacterium longum
cephalo
resistance
high expression
bifidobacterium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710396574.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107325997B (zh
Inventor
孙晗笑
郭晴
利时雨
刘梦鸽
陈露平
黄金群
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Hongbaoyuan Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Guangzhou Hongbaoyuan Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Hongbaoyuan Biotechnology Co ltd filed Critical Guangzhou Hongbaoyuan Biotechnology Co ltd
Priority to CN201710396574.9A priority Critical patent/CN107325997B/zh
Priority to PCT/CN2017/087285 priority patent/WO2018218694A1/zh
Publication of CN107325997A publication Critical patent/CN107325997A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107325997B publication Critical patent/CN107325997B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/78Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C12N9/80Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in linear amides (3.5.1)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • A61K35/744Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745Bifidobacteria
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51Bifidobacterium
    • A23V2400/533Longum

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明公开了一种具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16,及其在制备抗衰老、增强免疫功能或调节肠道菌群的食品或药品中的应用。本发明经实验发现,具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16可以通过改善肠道微生态环境,清除体内自由基,延缓动物的衰老过程,还可显著提高衰老器官的重量,保持机体的免疫功能,提高抗病能力,因此本发明具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16可用于制备抗衰老、增强免疫功能或调节肠道菌群的食品或药品,具有良好的应用价值。

Description

具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌及其应用
技术领域
本发明属新菌种筛选和应用领域,更具体地说,本发明涉及一种具有头孢 抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16及其在相关 食品或药品中的应用。
背景技术
双歧杆菌是一类存在于动物消化道中对宿主具有重要调节功能的专性厌氧 菌,被认为是一种革兰氏阳性益生菌,该菌在大肠中占绝对优势,次之在小肠, 口腔分布有少量。在1899年,由法国巴斯德研究院的Tissier研究员第一次在母 乳喂养的健康婴儿粪便中分离出来,该菌类属于放线菌科双歧杆菌属,形态多 样,因生长环境不同而表现出弯曲杆形、V形、L或Y形等,除此外还发现有 球形双歧杆菌,当固体培养基上培养时,其菌落为凸状圆形,乳白色,表面光 滑完整,质地柔软;最适合的生长温度为37℃~41℃,可以生长的pH值为5.0~ 8.0,最适为6.5~7.0;根据DNA的同源性和糖发酵特性来分,总共分为24个种属,而人类来源的只有12个种属,在这12个种属中,用人类健康事业并能 在人体肠道内定植的仅有5种,包括两歧双歧杆菌(Bifido.bifidum)、青春双歧杆 菌(Bifido.adolescentis)、婴儿双歧杆菌(Bifido.infantis)、短双歧杆菌(Bifido.breve)以及长双歧杆菌(Bifido.longum)。
双歧杆菌在体内不产生内毒素,也不产生致病物质和有害气体,是一种公 认的对人体无害的肠道细菌,对人体发挥许多有益生理功能。
Sir2(silence information regulator)基因是一类从细菌到高等真核生物都高度 保守的NAD+依赖的组蛋白/非组蛋白去乙酰化酶。Sir2家族基因所编码的Sir2 相关蛋白统一命名为Sirtuin。Sir2蛋白对细胞的存活、凋亡、衰老等生理活动的 调节具有重要作用。目前尚未有高表达Sir2蛋白的双歧杆菌的相关报道。
发明内容
本发明进一步对Sir2蛋白和双歧杆菌进行研究,通过筛选具有头孢抗性的 双歧杆菌,再通过免疫印迹筛选出高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌,使其在疾病 治疗或相关食品、保健品中发挥作用。
为了实现上述发明目的,本发明筛选出一种具有头孢抗性且高表 达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longum,保藏于广东省微 生物菌种保藏中心,保藏编号为GDMCC No.60191,保藏地址为广东 省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼,保藏日期为2017 年5月24日。
本发明具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longumBL16可用于制备抗衰老、增强免疫功能、抗菌的食品或药品。
为了实现上述发明目的,本发明还提供了一种抗衰老食品,其包括有效剂 量的作为活性成分的所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌 Bifidobacteriumlongum BL16。
为了实现上述发明目的,本发明还提供了一种抗衰老药品,其包括有效剂 量的作为活性成分的所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌 Bifidobacteriumlongum BL16,以及药学上可接受的载体。
为了实现上述发明目的,本发明还提供了一种增强免疫功能的食品,其包 括有效剂量的作为活性成分的所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆 菌Bifidobacterium longum BL16。
为了实现上述发明目的,本发明还提供了一种增强免疫功能的药品,其包 括有效剂量的作为活性成分的所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆 菌Bifidobacterium longum BL16,以及药学上可接受的载体。
为了实现上述发明目的,本发明还提供了一种抗菌药物,其包括有效剂量 的作为活性成分的所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌 Bifidobacterium longumBL16,以及药学上可接受的载体。
为了实现上述发明目的,本发明还提供了一种调节肠道菌群的食品,其包 括有效剂量的作为活性成分的权利要求1所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白 的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16和/或其菌体蛋白成分。该食品特别 适用于因使用抗生素导致的腹泻等肠道菌群紊乱的调节,使肠道菌群恢复平衡。
为了实现上述发明目的,本发明还提供了一种调节肠道菌群的药品,其包 括有效剂量的作为活性成分的权利要求1所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白 的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16和/或其菌体蛋白成分,以及药学上 可接受的载体。该药品特别适用于因使用抗生素导致的腹泻等肠道菌群紊乱的 调节,使肠道菌群恢复平衡。
相对于现有技术,本发明经实验发现,具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的 长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16具有一定的抑菌活性,还具有很强的头 孢抗性,可显著提高器官中的MAD含量,降低SOD、GSH-Px、NO和NOS的 活性,因此本发明具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16可通过提高机体的抗氧化能力,清除衰老机体产生的过多自由基, 抑制机体、组织、细胞的过氧化过程,最终起到延缓衰老和增强免疫的作用, 可用于制备相关的食品或药品,具有良好的应用价值。
附图说明
图1为本发明长双歧杆菌sir2基因鉴定结果。
图2为本发明长双歧杆菌蛋白电泳图。
图3为本发明长双歧杆菌Sir2蛋白Western blot结果。
具体实施方式
以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。
实施例1
1.益生菌初筛
收集3个正常人粪便样品各1.0g,用LB培养基扩增培养,蒸馏水稀释至 10-8共9个稀释度,取1mL,涂布到含有8~12g/L碳酸钙的MRS分离固体培 养基和改良MRS分离固体培养基上,置于厌氧培养箱中,37℃厌氧培养48h。 培养结束后,取出平板挑选出具有可见溶钙圈或蓝色、浅蓝色的菌落,并转接 至MRS增菌肉汤培养基中在37℃厌氧培养48h,并放入4℃冰箱保存备用。
2.菌株的形态学观察。
将分离纯化的菌株纯培养物接种到增菌液体培养基中,37℃培养24h复活 后,经革兰氏染色操作后,在光学显微镜下观察其细胞形态特征,并用带有数 字成像系统的显微镜选取合适视野进行照相记录。
3.分子生物学-16S rDNA鉴定:
16S rDNA全长通用引物:引物1如SEQ ID NO:1所示;引物2如SEQ ID NO:2所示。
PCR反应体系(25μL):引物1/1.0μL;引物2/1.0μL;10×PCR Buffer/2.5 μL;dNTPmix/2.0μL;Taq酶/0.3μL;DNA模板/1.0μL;超纯水/25μL。
PCR反应条件为:先94℃-4min;再94℃-30s,55℃-40s,72℃-90s 下循环30次,最后72℃-10min。
以无菌去离子水替代模板作为阴性对照。扩增结束后取3.0μL扩增后的产 物进行琼脂糖凝胶电泳。电泳结束后,切割待测胶带送上海生工进行序列测定。 将测定菌株的序列结果与NCBI中已知的16S rDNA序列进行Blast对比分析得 到最相近的菌株,以确定实验所分离细菌的种属。
4.抑菌活性测定
待测菌为上述获得的菌,对照菌株为鼠李糖乳杆菌,分别取各菌100μL于 100mL的乳酸菌MRS增菌肉汤培养基中进行活化复苏。指示菌为Escherichia coli ATCC11105、Clostridium difficile NY-5、Staphylococcus aureus NT-12。
5.药敏试验
选择10种抗菌药物药敏纸片:头孢吡肟(FEP,20μg),头孢噻肟(CTX,20μg), 利福平(Rf,10μg),氨苄西林(AM,10μg),四环素(TE,20μg),氯霉素(CHL,20 μg),环丙沙星(CIP,10μg),阿米卡星(AK,20μg),庆大霉素(GM,10μg),甲氧 苄氨嘧啶(TMP,10μg),均购自广州市宜康生物科技有限公司(Oxoid)。
根据美国临床实验室标准化协会颁布的KB法进行药敏试验。首先用无菌 镊子分别夹取含有不同抗生素的药敏纸片,分别贴在已接种待测菌的各平板 (200μL待测菌菌悬液含菌数为3.0×108CFU/mL,分别加入到温度为50℃左右的 乳酸菌MRS增菌肉汤琼脂培养基)中,迅速混合均匀,倒平板。每个平板贴大 约5张药敏纸片,各纸片间距离大致相等,并做好标记。在37℃厌氧过夜培 养,观察平板抑菌情况,游标卡尺测定抑菌圈的大小并记录
6.sir2基因的鉴定
以待测菌的基因组DNA为模板,长双歧杆菌sir2引物:上游引物如SEQ ID NO:3所示,下游引物如SEQ ID NO:4所示
PCR反应体系:模板-1μL;上游引物-0.5μL;下游引物-0.5μL;dNTP (10mM)-0.5μL;LA Taq(5U/μL)-0.5μL;10×PCR buffer-2.5μL;灭菌 水-19.5μL。
7.Tricine-SDS-PAGE
A.蛋白多肽粗提
(a)收取DMEM缓冲培养基培养过夜之后的菌液100ml,10000rpm离心 10min,分别收集菌体沉淀及上清液;
(b)菌体沉淀转移至破壁管中,机械破壁,系数为4.0,时间为1min,重复 6次,加入适量去离子水,10000rpm离心10min,除去沉淀,收集上清;
(c)用无菌蒸馏水清洗过滤膜组件3次,洗干净保护液,流尽清洗液,将 10kDa中空纤维滤膜装上,安装好膜组件,再用PBS缓冲液冲洗组件3次;
(d)将离心后收集的上清液通过过滤膜组件,压力为0.15MPa,温度为37℃, 时间为2h,得到的残渣,用适量的无菌水溶解,重复过滤二次;
(e)取过滤液,加入固体硫酸铵至饱和度为40%,静置30min,离心除去沉 淀,离心后得到的上清液继续加入固体硫酸铵至饱和度为60%,于0℃下静放 3h,12000rpm离心10min,弃去上清,收集沉淀物,
(f)使用0.1M的醋酸铵甲醇溶液清洗沉淀两次,再用80%已预冷的的丙酮 溶液润洗三次,加入100%冷冻丙酮洗一次,低温干燥30min,加入适量蒸馏水 溶解干燥物,备用。
B.电泳
(a)先注入分离胶,待分离胶凝固45min后,再注入夹层胶,约45min待夹 层胶凝固,最后加入浓缩胶,凝固45min;
(b)在电泳槽底部加入正极缓冲液,把制好的胶板同其制胶装置一起放入电 泳槽内,在胶层间加入负极缓冲液,将整个电泳装置置于冰上,用60v的电压 先电泳30min;
(c)取少量分离得到的蛋白样品,用样品缓冲液稀释至5ml,开始加样电泳, 当染料从夹层胶进入分离胶后,电压加到120v,继续电泳,直至染料到达分离 胶顶端,停止电泳;
(d)取出电泳槽中的胶板,即刻置于固定液中浸泡固定1.5h,再将胶板取出, 于45℃的染色液中浸泡1.5h,然后用无菌蒸馏水将胶板洗涤两次,最后用变换 脱色液,清洗多次,当看到明显的条带和清晰的背景则停止冲洗;
(e)洗脱后,用凝胶成像仪成像,观察目的蛋白的表达,并拍照保存。
8.Western blotting
(1)制胶:配置12%的分离胶并注入玻璃板间隙至离上边缘1.5cm处,上 层加适量75%乙醇;待凝固,倒掉上层液体,注入5%浓缩胶,插入梳子,自然 晾干。
(2)上样:将蛋白质样品100℃水浴3min,在电泳槽中倒入新配置的电泳 液,分别在两边泳道加入8μl和5μl蛋白maker,用1×蛋白上样缓冲液补足体 积到10μl,其余泳道各加10μl样品,50V恒压跑电泳。
(3)转膜:电泳结束后,剪取11cm×8cm滤纸和合适大小的0.22μm的PVDF 膜,用甲醇活化5min,按照“海绵-6层滤纸-凝胶-PVDF膜-6层滤纸-海绵”组装 转印夹层,夹板组装后转移至转膜槽,200mA恒流转移60min。
(4)孵育抗体:转膜结束后,TBS液洗膜5min,5%的脱脂奶粉封闭1h, TBST液洗膜3次,每次5min,加一抗兔抗人SIRT3多克隆抗体稀释液4℃过 夜孵育;TBST液洗膜3次,每次5min,加二抗兔抗稀释液室温孵育1h。
(5)发光检测:TBST液洗膜,加发光液孵育3min,用滤纸吸干发光液, 将胶片和PVDF膜放入压片盒中压片1min,取出胶片定影30s,用水清洗,烘 干,扫描。
实验结果:
1.菌体的生长情况的检查结果见表1。
表1菌体生长情况检查结果
2.16S rDNA鉴定结果
进入NCBI核酸数据库http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi,输入待测菌株 的16S rDNA序列,点击Blast进入比对。
比对结果显示,有三种菌株的16S rDNA序列与其它多株长双歧杆菌的16S rDNA序列有99%的相似性,初步判断为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum), 将其命名为Bifidobacterium longum BL12,Bifidobacterium longum BL14, Bifidobacteriumlongum BL16。
3.抑菌活性测定
抑菌活性的试验结果,见表2,三株长双歧杆菌都有一定的抑菌能力。
表2 B.longum抑菌活性的试验结果
4.药敏试验,结果见表3所示。筛选到的三株长双歧杆菌都具有很强的头孢 抗性。
表3 B.longum的药敏试验结果
注:S-敏感;R-耐药;I-中度耐药。
5.Sir2基因PCR鉴定结果
如图1所示,在651bp处分别扩增出三条长双歧杆菌sir2基因条带。
6.Tricine-SDS-PAGE结果
如图2所示,三株长双歧杆菌Sir2蛋白分别在2.7KD处有一条明亮的条带。
7.Western blotting
如图3Western blot结果显示,长双歧杆菌中B.longum BL16的Sir2蛋白表 达量最高。因此,成功筛选到带有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌 B.longum BL16。
实施例2
本实施例通过长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16(下称B16)喂饲用 D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠为衰老动物模型,对小鼠各器官的指数和生化指 标进行测定和比较,探讨B16的作用。
1.动物分组
昆明种小鼠40只,雌雄各半,体重(20±2)g,暨南大学实验动物中心提供。 适应性饲养1W后,随机分为四组,每组10只。第一组为空白对照组、第二组 为模型对照组,第三组为双歧杆菌组。
2.药品及试剂
B16为实施例1所得;D-半乳糖购至北京鼎国生物有限公司,SOD、MDA、 GSH-Px、NO、NOS试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
3.模型建立及给药方案
模型对照组和给药组小鼠每日接受颈背部皮下注射D-半乳糖0.15mg/g体重 (生理盐水配制),对照组注射等量的生理盐水;同时给药组小鼠每日分别灌胃 B16液(双歧杆菌浓度到1010,每日灌胃给药1mL),空白对照组和模型对照 组小鼠灌胃等量的生理盐水,共40d。
4.检测指标
各组动物经连续处理40d后称重,断颈处死,取出脑,胸腺、脾、肝、肾, 用0.9%生理盐水洗净残留血液后精确称重,计算器官指数。用于切片的脑组织 置于10%甲醛中固定,其余脏器组织用锡箔纸包好,置-80℃超低温冰箱保存待 用。
5.各脏器指数的测定
准确称取小鼠全脑、胸腺、脾脏湿重后,计算各脏器指数(mg/g)〔胸腺重量 (mg)/体重(g)〕。
6.脑组织中生化指标的测定
将冻存的脑组织放入组织匀浆机配用的玻璃管中,加入9倍体积预冷的生 理盐水(蒸馏水),充分研磨后,制成10%脑组织匀浆。采用考马斯亮蓝法测定脑 组织匀浆中总蛋白含量;硫代巴比妥酸反应物法测定MDA含量;酶法检测 GSH-Px的活性;硝酸还原法检测NO具体检测方法参照试剂盒说明书。
7.统计学处理
所有数据均以x±s表示,多组间比较采用SPSS13.0统计学分析软件进行单 因素方差分析。
表4实验组对衰老小鼠脏器指数的影响
表5实验组对脑组织中生化指标的影响
结果:
1.BL16对衰老小鼠脏器指数的影响(见表4)。与空白对照组比较,模型组 小鼠脑、胸腺、脾,肝、肾指数均减小(P<0.05),实验组小鼠各器官指数明显 升高。
组织器官的重量,特别是脑、胸腺、脾、肝、肾等重要器官的重量变化是 反映生物体衰老程度的重要指标。免疫器官衰变最明显的是胸腺和脾,胸腺和 脾重量的降低、萎缩、功能衰退可使免疫功能降低,导致老年动物(人)恶性疾病 发生率增高,加速老化进程。本结果显示D-半乳糖诱导的亚急性衰老小脑、胸 腺、脾脏、肝、肾指数均显著下降,BL16治疗明显提高了衰老小鼠脑、胸腺、 脾脏、肝、肾重量,说明BL16能够有效对抗小鼠脑的衰老,保持机体的免疫功 能,提高抗病能力,从而对延缓衰老和增强免疫力具有积极的意义。
2.BL16对衰老小鼠组织SOD、MAD、GSH-Px、NO、NOS的影响(见表 5)。与空白对照组比较,模型组小鼠脑组织MAD含量显著提高,差异有统计学 意(P<0.01),SOD、GSH-Px、NO、NOS活性明显降低(P<0.01),差异在统计 学意义(P<0.01)。
生物体存在抗氧化系统,其中SOD是最关键的酶之一。此酶能清除超氧阴 离子自由基、保护细胞免受损伤,其活性高低间接反映了机体的抗氧化能力。 美国巴乐的摩老年医学研究中心研究证明,哺乳动物体内SOD含量与其寿命之 间呈明显正相关关系。本实验结果发现:BL16能明显增强D-半乳糖诱导衰老小 鼠的脑组织SOD活性,提高脑组织对自由基的清除能力,阻断自由基应答。
自由基是机体正常代谢产生,但过多的自由基可侵犯细胞,特别是脑组织 中的不饱和脂肪酸,引起脂质过氧化,形成代谢产物MDA,继而形成脂褐素, 通过与蛋白质、核酸等生物大分子交联,破坏正常细胞的功能。因此,MDA含 量常常可反映机体内脂质过氧化的程度,间接反映细胞的损伤程度,是老化的 重要指标。
NO由NOS利用左旋精氨酸内源性合成,是具有广泛的生物学作用的小分 子物质,能溶于水和脂质,可通过旁分泌快速扩散至邻近细胞,与细胞内鸟氨 酸环化酶上的血红素基因结合激活该酶,由鸟氨酸环化酶催化鸟氨酸生成环鸟 营(cGMP)。cGMP作为第二信使,通过信号级联放大作用,引起一系列生物学 效应。NO在神经系统中的主要作用为介导神经元对兴奋性氨基酸的反应和增强 机体的学习记忆能力等,其含量降低与衰老及许多老年性疾病如老年性痴呆、 高血压、动脉粥样硬化等的发生有关。NOS是NO合成的限速酶,含有NOS的 神经元在中枢神经系统许多部位存在,包括大脑皮层、海马、下丘脑等,NO在 这些部位的神经元活动调控中起重要作用。生理性衰老与脑组织内NOS活性降 低密切相关。NOS活性降低,使脑中NO含量下降,从而可导致巨噬细胞吞噬 能力下降;使有活性的鸟昔酸环化酶含量降低,调节多种代谢的能力减弱,可 进一走加速衰老。本实验结果显示:模型衰老小鼠的NOS活性和NO含量显著下 降,BL16能明显提高衰老模型小鼠的NOS活性和NO含量。上述结果提示BL16 能通过增强NOS活性,使NO生成量增多,其生物学效应能持久发挥,从而可延缓机体衰老。
GSH-Px是广泛存在于机体内的一种重要的催化过氧化分解的酶,它特异性 地催化GSH对过氧化氢的还原反应,抑制烟酸胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)形成 OH-,削弱对脂质过氧化作用的损伤,从而起到保护细胞膜结构和功能完整的作 用。本实验结果表明BL16可显著提高D-半乳糖致衰老小鼠脑组GSH-Px活性, 提高体内抗氧化酶活性,减轻自由基对生物大分子的伤害,而起到延缓衰老的 作用。
综上,本实验表明双歧杆菌能提高SOD、GSH-Px、NO和NOS的水平,降 低MDA的含量,提示双歧杆菌可能是通过提高机体抗氧化能力,清除衰老机体 产生过多的自由基,抑制机体、组织、细胞的过氧化过程,而起到延缓衰老作 用。
SEQ ID NO:1
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
SEQ ID NO:2
GGTTACCTTGTTACGACTT
SEQ ID NO:3
ATGAGCGTTTACGACATCG
SEQ ID NO:4
ATGCGAAACGATTTAATTCAATTG

Claims (10)

1.一种具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longumBL16,其特征在于,所述长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号为GDMCC No.60191,保藏地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼,保藏日期为2017年5月24日。
2.权利要求1所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacteriumlongum BL16在制备抗衰老的食品或药品中的应用。
3.权利要求1所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacteriumlongum BL16在制备增强免疫功能的食品或药品中的应用。
4.权利要求1所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacteriumlongum BL16在制备调节肠道菌群的食品或药品中的应用。
5.一种抗衰老食品,其特征在于,包括有效剂量的作为活性成分的权利要求1所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16和/或其菌体蛋白成分。
6.一种抗衰老药品,其特征在于,包括有效剂量的作为活性成分的权利要求1所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16和/或其菌体蛋白成分,以及药学上可接受的载体。
7.一种增强免疫功能的食品,其特征在于,包括有效剂量的作为活性成分的权利要求1所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16和/或其菌体蛋白成分。
8.一种增强免疫功能的药品,其特征在于,包括有效剂量的作为活性成分的权利要求1所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16和/或其菌体蛋白成分,以及药学上可接受的载体。
9.一种调节肠道菌群的食品,其特征在于,包括有效剂量的作为活性成分的权利要求1所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16和/或其菌体蛋白成分。
10.一种调节肠道菌群的药品,其特征在于,包括有效剂量的作为活性成分的权利要求1所述具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌Bifidobacterium longum BL16和/或其菌体蛋白成分,以及药学上可接受的载体。
CN201710396574.9A 2017-05-28 2017-05-28 具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌及其应用 Active CN107325997B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710396574.9A CN107325997B (zh) 2017-05-28 2017-05-28 具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌及其应用
PCT/CN2017/087285 WO2018218694A1 (zh) 2017-05-28 2017-06-06 具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710396574.9A CN107325997B (zh) 2017-05-28 2017-05-28 具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107325997A true CN107325997A (zh) 2017-11-07
CN107325997B CN107325997B (zh) 2020-05-01

Family

ID=60193199

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710396574.9A Active CN107325997B (zh) 2017-05-28 2017-05-28 具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌及其应用

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN107325997B (zh)
WO (1) WO2018218694A1 (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110591935A (zh) * 2018-06-13 2019-12-20 广州溯原生物科技有限公司 地衣芽孢杆菌BL3的Sir2样蛋白制备、纯化及应用
CN110616214A (zh) * 2018-06-19 2019-12-27 广州溯原生物科技有限公司 一种改善NAFLD组织病变的地衣芽孢杆菌BL3 Sir2样蛋白及其应用
CN110804562A (zh) * 2018-08-02 2020-02-18 广州溯原生物科技有限公司 一种头孢抗性且高表达Sir2样蛋白的粪肠球菌及应用
WO2020082220A1 (zh) * 2018-10-23 2020-04-30 利时雨 一种头孢抗性且高表达去乙酰化酶2样蛋白的粪肠球菌及应用
CN111826322A (zh) * 2020-08-03 2020-10-27 江西善行生物科技有限公司 一种长双歧杆菌及其在抗衰老中的应用

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4091673A4 (en) * 2020-01-17 2024-01-31 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. ANTI-AGING COMPOSITION

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105039192A (zh) * 2014-10-09 2015-11-11 广州智晟投资管理有限公司 具有头孢类药物抗性的乳酸菌及其制剂的制备与应用
CN105646679A (zh) * 2016-02-26 2016-06-08 南昌大学 一种长双歧杆菌蛋白质、其制备方法及应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030045482A1 (en) * 2000-02-16 2003-03-06 Kenyon Keith E. Using D-ribose with or without anti-microbial agents to enhance healing and subsequent recovery by both synthesizing and sparing NAD derivatives
JP2008195673A (ja) * 2007-02-14 2008-08-28 Nippon Meat Packers Inc 延命効果物質、および感染防御効果・ワクチン効果促進物質、前記物質の検定用コンストラクト、並びにそれらの用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105039192A (zh) * 2014-10-09 2015-11-11 广州智晟投资管理有限公司 具有头孢类药物抗性的乳酸菌及其制剂的制备与应用
CN105646679A (zh) * 2016-02-26 2016-06-08 南昌大学 一种长双歧杆菌蛋白质、其制备方法及应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
QING GUO等: "The NAD+-dependent deacetylase, Bifidobacterium longum Sir2 in response to oxidative stress by deacetylating SigH(σH) and FOXO3a in Bifidobacterium longum and HEK293T cell respectively", 《FREE RADICAL BIOLOGY AND MEDICINE》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110591935A (zh) * 2018-06-13 2019-12-20 广州溯原生物科技有限公司 地衣芽孢杆菌BL3的Sir2样蛋白制备、纯化及应用
CN110616214A (zh) * 2018-06-19 2019-12-27 广州溯原生物科技有限公司 一种改善NAFLD组织病变的地衣芽孢杆菌BL3 Sir2样蛋白及其应用
CN110804562A (zh) * 2018-08-02 2020-02-18 广州溯原生物科技有限公司 一种头孢抗性且高表达Sir2样蛋白的粪肠球菌及应用
WO2020082220A1 (zh) * 2018-10-23 2020-04-30 利时雨 一种头孢抗性且高表达去乙酰化酶2样蛋白的粪肠球菌及应用
CN111826322A (zh) * 2020-08-03 2020-10-27 江西善行生物科技有限公司 一种长双歧杆菌及其在抗衰老中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2018218694A1 (zh) 2018-12-06
CN107325997B (zh) 2020-05-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107325997A (zh) 具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的长双歧杆菌及其应用
CN102065710B (zh) 长双歧杆菌和海马bdnf表达
CN104178437B (zh) 一种卷曲乳杆菌及其在妇科疾病中的应用
US9649347B2 (en) Protective effects and application of a Lactobacillus rhamnosus on the alleviation of chronic alcoholic liver injury
CN103275905B (zh) 具有预防糖尿病作用的鼠李糖乳杆菌ccfm0528
CN114574390B (zh) 一株缓解结肠炎的长双歧杆菌婴儿亚种及应用
CN105106246A (zh) 一种植物乳杆菌zs2058及其用途
CN108076643A (zh) 用于治疗例如细菌性阴道病的鼠李糖乳杆菌细菌
CN114085792B (zh) 一种用于防治结肠癌的副干酪乳杆菌及其应用
CN107227269A (zh) 具有头孢抗性且高表达Sir2蛋白的嗜酸乳杆菌及其应用
CN114854638B (zh) 一株高效表达腺苷脱氨酶mRNA缓解结肠炎副干酪乳杆菌
CN116064326A (zh) 一株能够缓解抑郁情绪的动物双歧杆菌乳亚种gbw8051及其应用
CN116769658A (zh) 一种凝结芽孢杆菌ap15及其在肠道调节与尿酸、胆固醇代谢的应用
CN116083325A (zh) 一种改善幽门螺杆菌相关性胃肠疾病的鼠李糖乳杆菌及其应用
CN114657084B (zh) 一种缓解溃疡性结肠炎的长双歧杆菌及其应用
CN113444656B (zh) 一种具有抗衰老功能的菌株及其应用
CN117106672B (zh) 一种改善衰老相关的认知障碍的短双歧杆菌及其应用
CN107653199B (zh) 一株健康人肠道大肠杆菌及其应用
CN105733978A (zh) 一株屎肠球菌wefa23
CN106389478A (zh) 脆弱拟杆菌在治疗和/或预防肥胖症或糖尿病中的应用
CN109576165B (zh) 一种贝酵母菌及其应用
CN114933992B (zh) 一种长双歧杆菌及其复合制剂在缓解溃疡性结肠炎中的应用
CN113322213B (zh) 一种具有改善记忆障碍功能的副干酪乳杆菌Jlus66菌剂和应用
Yi et al. Amelioration effect of Lactobacillus plantarum KFY02 on low-fiber diet-induced constipation in mice by regulating gut microbiota
CN115838650A (zh) 植物乳杆菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant