CN107308215A - 一种植物源性降糖降脂药物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种植物源性降糖降脂药物,按重量百分比包括以下组份:桑叶中提取的生物碱原料粉20‑60%、苦瓜中提取的多糖原料粉20‑60%、荷叶中提取的生物碱原料粉5‑15%、石榴皮中提取的多酚原料粉5‑25%。本发明的优点是:以桑叶、苦瓜、荷叶、石榴皮等廉价中药材为原料,以降糖、降脂、清除自由基为原理,将几种植物药材中的活性物质提取并合理配比后,使其协同发挥作用,降低糖尿病患者空腹血糖、餐后血糖以及血脂,并减小自由基对胰岛β细胞的氧化损伤,改善糖尿病的并发症状。本发明所用植物材料资源丰富、价格低廉,提取制作工艺简单,提取溶剂为乙醇和水,安全环保,适宜于工业化生产。

Description

一种植物源性降糖降脂药物
技术领域
本发明涉及一种植物源性降糖降脂药物。
背景技术
糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病,其主要原因是胰岛功能障碍导致的胰岛素分泌不足。糖尿病病人持续的高血糖,导致各种组织,特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍,引起一系列的并发症。糖尿病常常伴随着高血脂,且本身高血脂就增加患糖尿病的风险,高脂饮食常被用来构建糖尿病模型。现代医学研究显示,糖尿病的形成的内在机制与氧化应激有关,氧化应激产生过量的自由基(如活性氧、活性氮)会导致分泌胰岛素的胰岛β细胞功能损伤,从而引发糖尿病,且过量自由基还会导致其他组织器官损伤,诱发及加重糖尿病并发症(Selvaraju V,Joshi M,Suresh S,Sanchez JA,MaulikN,Maulik G.Diabetes,oxidative stress,molecular mechanism,and cardiovasculardisease--an overview.ToxicolMech Methods 2012;22(5):330-335.;黄晓菲,张琼.ROS与细胞自噬在Ⅱ型糖尿病中的生物学作用[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2016,25(4):366-370)。因此对于糖尿病的治疗,降血糖是首要任务,是对病症的直接治疗,清除体内过多自由基,修复受损胰岛β细胞,是对病因的干预,同时,降低血脂则对于病因的干预起协同辅助作用。
桑叶中的生物碱业被研究证实具有显著的降血糖作用,它可显著抑制小肠α-糖苷酶活性,降低麦芽糖、蔗糖转化为葡萄糖,从而降低餐后血糖水平(李有贵,储一宁,钟石,等.59份野生桑桑叶中的DNJ含量及粗提物对α-糖苷酶的抑制活性.蚕业科学,2010,36(5):0729-0737)。此外,桑叶生物碱还可以下调肠道葡萄糖吸收相关酶的表达、提高肝脏糖酵解酶的表达(You-Gui Li,Dong-FengJi,Shi Zhong,Tian-Bao Lin,Zhi-QiangLv,Gui-YanHu&Xin Wang.1-deoxynojirimycin inhibits glucose absorption and acceleratesglucose metabolism in streptozotocin-induced diabetic mice.Scientificreports,2013;3:1377)。苦瓜多糖也被报道能够显著降低糖尿病小鼠的血糖水平,提高胰岛素分泌水平(宋金平.苦瓜多糖对糖尿病小鼠的降血糖作用和胰岛素水平的影响[J].中国实用医药,2012,07(3):250-251.)荷叶在古代就被记载有减肥功效,现代研究表明荷叶中的生物碱具有降血脂作用,可以显著降低肥胖大鼠体重增长,降低血液中甘油三酯、总胆固醇含量,此外还被报道具有清除自由基、抗氧化功能(杨菲,徐新,唐良秋,等.荷叶生物碱的研究进展[J].现代医院,2012,12(6):93-94.)。石榴皮中多酚化合物已被证实具有很强的抗氧化能力,能够体外清除多种自由基,抑制脂质过氧化,在体内石榴皮多酚能够抑制多种因素导致的氧化损伤(Sun YQ,Tao X,Men XM,Li YM,Xu ZW,W T.In vitro and in vivoantioxidant activities of three major polyphenolic compounds in pomegranatepeel:ellagic acid,punicalin,and punicalagin.Journal of IntegrativeAgriculture,2017.;唐远谋,许丽佳,蒋卫东,等.石榴皮多酚对糖尿病小鼠肾脏抗氧化防御功能的影响[J].食品工业科技,2015,36(16):370-372.)。
发明内容
本发明的目的在于提供一种植物源性降糖降脂药物,通过这几种药用活性物质的协同作用,在降低糖尿病患者餐后血糖,改善糖耐量的同时,能够修复受损的胰岛β细胞,降低血脂,治疗糖尿病综合症。
为了解决上述技术问题,本发明是通过以下技术方案实现的:一种植物源性降糖降脂药物,按重量百分比包括以下组份:桑叶中提取的生物碱原料粉20-60%、苦瓜中提取的多糖原料粉20-60%、荷叶中提取的生物碱原料粉5-15%、石榴皮中提取的多酚原料粉5-25%。
优选的,所述苦瓜中提取多糖原料粉的提取工艺流程为:依次包括以下步骤:A1、新鲜苦瓜切片,烘箱中干燥,温度不大于50℃;将干燥的苦瓜片粉碎成粉,过30-80目筛;
A2、将苦瓜粉末按照1:30-1:50(w/v)加入水,90-100℃提取12-24小时;
A3、将得到的提取液旋转蒸发,得到浓缩提取液;
A4、将浓缩提取液加3倍体积乙醇沉淀,沉淀液8000-10000rpm离心,收集沉淀,沉淀烘干即为苦瓜多糖原料粉。
优选的,所述荷叶药用活性成分的提取工艺流程为:依次包括以下步骤:
B1、荷叶烘箱干燥或晒干,干燥温度不大于50℃;
B2、粉碎:粉碎粒度30目至80目;
B3、加入50-70%酒精,料液的重量比为1:30-50,超声波提取4-6小时,提取温度30-50℃,超声功率:1000-1300W,提取完成后过滤去除滤渣,得到提取液进行8000-10000rpm离心,得到上清液
B4、将上清液旋转蒸发去除酒精,8000-10000rpm离心,收集上清液,上清液冷冻或喷雾干燥,得到荷叶生物碱的原料粉。
优选的,所述石榴皮药用活性成分的提取工艺流程为:依次包括以下步骤:
C1、成熟石榴果实,将果皮剥下,干燥,干燥温度不大于50℃;
C2、将干燥石榴皮粉碎,过30目至80目筛;
C3、提取:石榴皮粉按1:30-1:50(w/v)加入40%-80%乙醇,超声功率:1000-1300W,60℃提取2-4小时,提取完成后细筛过滤去除滤渣,得到提取液进8000-10000rpm离心,得到上清液;
C4、将上述步骤中的上清液旋蒸去除酒精,离心收集上清液,上清液用弱极性大孔树脂吸附过液,蒸馏水冲洗去除糖类等杂质,树脂用80-95%乙醇洗脱,收集洗脱液旋转蒸发去掉酒精,浓缩至小体积后烘箱烘干,干燥固体粉碎后得到石榴皮多酚的原料粉。
优选的,桑叶生物碱原料粉的提取工艺为:
D1、采摘:采摘桑叶,每年5月至10月;
D2、干燥:将采摘的桑叶干燥,干燥温度不大于50℃;
D3、粉碎:粉碎粒度30目至80目;
D4、加入酒精,然后超声波提取:酒精浓度50-70%,料液的重量比为1:30-50,提取时间4-6小时,提取温度30-50℃,超声功率:1000-1300W,提取完成后细筛过滤去除滤渣,得到提取液进行8000-10000rpm离心,得到上清液;
D5、将D4步骤产生的上清液旋蒸去除酒精,离心收集上清液,上清液用酸型阳离子交换树脂吸附12-24小时,自来水冲洗去杂后,树脂用0.25-0.5mol/L的氨水洗脱,收集洗脱液旋蒸去除氨水,浓缩至小体积后离心得上清夜;
D6、重复步骤D5,将上清液用强酸型阳离子交换树脂吸附2-4小时,自来水冲洗去杂后,树脂用0.25-0.5mol/L的氨水洗脱,收集洗脱液旋蒸去除氨水,浓缩至小体积后冷冻或喷雾干燥,得到桑叶生物碱的原料粉。
与现有技术相比,本发明的优点是:以桑叶、苦瓜、荷叶、石榴皮等廉价中药材为原料,以降糖、降脂、清除自由基为原理,将几种植物药材中的活性物质提取并合理配比后,使其协同发挥作用,降低糖尿病患者空腹血糖、餐后血糖以及血脂,并减小自由基对胰岛β细胞的氧化损伤,改善糖尿病的并发症状。本发明所用植物材料资源丰富、价格低廉,提取制作工艺简单,提取溶剂为乙醇和水,安全环保,适宜于工业化生产。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步说明:
图1为采用本工艺生产的药剂对小鼠糖耐量的影响对比图;
图2为采用本工艺生产的药剂对小鼠血清总胆固醇的影响对比图;
图3为采用本工艺生产的药剂对小鼠血清甘油三酯的影响对比图;
图4为采用本工艺生产的药剂对STZ诱导损伤的胰岛β细胞保护作用对比图;
图5本工艺生产的药剂对STZ诱导损伤的胰岛β细胞保护作用显微镜图;
图6为工艺生产的药剂对超氧阴离子自由基的清除作用。
具体实施方式
一种植物源性降糖降脂药物,按重量百分比包括以下组份:桑叶中提取的生物碱原料粉40%、苦瓜中提取的多糖原料粉40%、荷叶中提取的生物碱原料粉10%、石榴皮中提取的多酚原料粉10%。
所述苦瓜中提取多糖原料粉的提取工艺流程为:依次包括以下步骤:
A1、新鲜苦瓜切片,烘箱中干燥,温度不大于50℃;将干燥的苦瓜片粉碎成粉,过30-80目筛;
A2、将苦瓜粉末按照1:30-1:50(w/v)加入水,90-100℃提取12-24小时;
A3、将得到的提取液旋转蒸发,得到浓缩提取液;
A4、将浓缩提取液加3倍体积乙醇沉淀,沉淀液8000-10000rpm离心,收集沉淀,沉淀烘干即为苦瓜多糖原料粉。
所述荷叶药用活性成分的提取工艺流程为:依次包括以下步骤:
B1、荷叶烘箱干燥或晒干,干燥温度不大于50℃;
B2、粉碎:粉碎粒度30目至80目;
B3、加入50-70%酒精,料液的重量比为1:30-50,超声波提取4-6小时,提取温度30-50℃,超声功率:1000-1300W,提取完成后过滤去除滤渣,得到提取液进行8000-10000rpm离心,得到上清液
B4、将上清液旋转蒸发去除酒精,8000-10000rpm离心,收集上清液,上清液冷冻或喷雾干燥,得到荷叶生物碱的原料粉。
所述石榴皮药用活性成分的提取工艺流程为:依次包括以下步骤:
C1、成熟石榴果实,将果皮剥下,干燥,干燥温度不大于50℃;
C2、将干燥石榴皮粉碎,过30目至80目筛;
C3、提取:石榴皮粉按1:30-1:50(w/v)加入40%-80%乙醇,超声功率:1000-1300W,60℃提取2-4小时,提取完成后细筛过滤去除滤渣,得到提取液进8000-10000rpm离心,得到上清液;
C4、将上述步骤中的上清液旋蒸去除酒精,离心收集上清液,上清液用弱极性大孔树脂吸附过液,蒸馏水冲洗去除糖类等杂质,树脂用80-95%乙醇洗脱,收集洗脱液旋转蒸发去掉酒精,浓缩至小体积后烘箱烘干,干燥固体粉碎后得到石榴皮多酚的原料粉。
桑叶生物碱原料粉的提取工艺为:
D1、采摘:采摘桑叶,每年5月至10月;
D2、干燥:将采摘的桑叶干燥,干燥温度不大于50℃;
D3、粉碎:粉碎粒度30目至80目;
D4、加入酒精,然后超声波提取:酒精浓度50-70%,料液的重量比为1:30-50,提取时间4-6小时,提取温度30-50℃,超声功率:1000-1300W,提取完成后细筛过滤去除滤渣,得到提取液进行8000-10000rpm离心,得到上清液;
D5、将D4步骤产生的上清液旋蒸去除酒精,离心收集上清液,上清液用酸型阳离子交换树脂吸附12-24小时,自来水冲洗去杂后,树脂用0.25-0.5mol/L的氨水洗脱,收集洗脱液旋蒸去除氨水,浓缩至小体积后离心得上清夜;
D6、重复步骤D5,将上清液用强酸型阳离子交换树脂吸附2-4小时,自来水冲洗去杂后,树脂用0.25-0.5mol/L的氨水洗脱,收集洗脱液旋蒸去除氨水,浓缩至小体积后冷冻或喷雾干燥,得到桑叶生物碱的原料粉。
除了上述重量百分比外,还可以采用桑叶中提取的生物碱原料粉20%、苦瓜中提取的多糖原料粉60%、荷叶中提取的生物碱原料粉5%、石榴皮中提取的多酚原料粉15%。
或者,桑叶中提取的生物碱原料粉35%、苦瓜中提取的多糖原料粉25%、荷叶中提取的生物碱原料粉15%、石榴皮中提取的多酚原料粉25%。
或者,桑叶中提取的生物碱原料粉60%、苦瓜中提取的多糖原料粉20%、荷叶中提取的生物碱原料粉10%、石榴皮中提取的多酚原料粉10%。
或者,桑叶中提取的生物碱原料粉45%、苦瓜中提取的多糖原料粉35%、荷叶中提取的生物碱原料粉15%、石榴皮中提取的多酚原料粉5%。
将上述四种原料粉按比例充分混匀后,制成不同剂型即可。
采用上述工艺生产的原料粉可以选自以下剂型:片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、口服液、混悬剂、溶液剂。以下是对采用本工艺生产的原料进行药理药效实验。
1.试验目的
观察本工艺生产的药剂对小鼠糖耐量的影响以及对STZ诱导损伤的胰岛β细胞保护作用,为本工艺生产的药剂降糖作用提供初步的实验依据。
2.受试药物
本工艺生产的药剂片原料,形状:棕黄色粉末,批号:170320,贮存方法:避光、干燥、常温(25℃以下)保存,配制方法:临用前用无菌0.9%生理盐水溶解至所需浓度。
3.试验动物
品种品系:C57/B6小鼠,级别:SPF级,性别:雌性,体重:18-20g,数量:60只,来源:中国科学院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动物有限公司[生产许可证:SCXK(沪)2012-0005]。
4.实验条件
屏障系统实验饲养室,温度:22±1℃,湿度:50-70%,光照:150-200Lx,12小时明暗交替,噪音<50dB。饮水:自来水,置于饮水瓶中自由饮用。饲料:全价营养颗粒饲料。饲养方式:自由饮食,饲养笼中给予充足的饲料和水,每笼饲养8只小鼠。
5.试剂与仪器
5.1试剂
链脲佐菌素(STZ),sigma公司产品;蔗糖,500g/瓶,中国医药(集团)上海化学试剂公司,配制方法:临用前用生理盐水配制成浓度为0.30g/ml的蔗糖溶液;氯化钠注射液,250ml/瓶,含量0.9%,由浙江平湖莎普爱思制药有限公司生产;血糖试剂条,由美国强生公司生产;胰岛β细胞株INS-1,中国科学院上海细胞库提供。胎牛血清(杭州民康生物技术有限公司)、RPMI 1640培养基(杭州昊天生物技术有限公司);DMSO(中国医学科学院生物工程研究所);台盼蓝染色液(北京索莱宝科技有限公司);氮蓝四唑(NBT)、吩嗪硫酸甲酯(PMS)和辅酶Ⅰ(NADH),购自美国Sigma公司;水溶性维生素E,购自日本东京化工有限公司;甘油三酯试剂盒、总胆固醇试剂盒均购自南京建成生物科技有限公司。
5.2仪器设备
OneTouchR Ultra血糖仪,强生(上海)医疗器材有限公司;SpectraMax M5多功能酶标仪,美国分子仪器公司;CountStar细胞计数仪,上海睿钰生物科技有限公司;CO2培养箱,美国Therom公司;超净工作台,新加坡Esco公司。
6.试验方法
6.1小鼠筛选
取体重为18-20g的雌性C57/B6小鼠,禁食不禁水12小时,筛选空腹血糖在4-6mmol/L的糖尿病小鼠20只。
6.2糖耐量实验
试验小鼠禁食不禁水12小时后尾静脉取血,用OneTouchR Ultra血糖仪测定小鼠的空腹血糖值。本工艺生产的药剂组口服给予药剂50mg/kg,对照组口服给予相等剂量的生理盐水溶液,30分钟过后各组口服给予0.3g/ml的蔗糖溶液0.1ml/10g,测定给糖后30min、60min、120min的血糖。
6.3降血脂试验
取体重为18-20g的雌性小鼠40只,分为4组,每组10只。4组小鼠分别饲喂正常日粮、正常日粮+1mg/mL受试药剂饮水、高脂日粮、高脂日粮+1mg/mL受试药剂饮水。试验第30天禁食不禁水12小时后屠宰取血,分离血清,试剂盒测量血清中甘油三酯和总胆固醇含量。
6.4胰岛β细胞保护作用
将胰岛β细胞INS-1以1*105个/ml的密度接种于24孔板中,每孔250μl。实验组加入不同剂量本工艺生产的药剂溶液,每孔250μl使本工艺生产的药剂终浓度分别为0.125、1.25μg/ml,空白对照组加入同体积RPMI 1640完全培养液,每组设6复孔。
另外,实验孔加入16mM STZ溶液125μL,同时加入0.125、1.25μg/mL本工艺生产的药剂溶液125μL,每个浓度设6个复孔,并设正常对照组(细胞,未加STZ)、STZ损伤模型组(细胞,加STZ,不加药物)。培养箱中培养48h后,每孔弃去培养液,加入PBS洗涤细胞,0.25%胰酶消化,收集细胞,离心弃去上清液,加入500μL PBS,吹打均匀,即为细胞悬液。20μL台盼蓝染料与20μL细胞悬液混匀,用CountStar细胞计数仪进行细胞计数。
6.5自由基清除试验
以DMSO为溶剂配制受试试剂和水溶性维生素E样品待测液,浓度梯度为80、40、20、10、5、0mg/L。以0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)为溶剂,配制60μM PMS、468μM NADH以及150μM NBT。向试管中依次加入0.5mL样品待测液、1mL PMS、1mL NADH和1mL NBT,震荡混匀后室温下反应6min,测定560nm吸光度值。以浓度为0mg/mL待测液为对照,每个样品设三个重复。按照下面公式计算超氧阴离子清除率:
超氧阴离子清除率=(A对照-A样品)/A对照×100%
7.数据处理
用SPSS12软件进行统计分析,所有数据以均数±标准差表示,计量资料应用t检验评价试验结果。
8试验结果
8.1本工艺生产的药剂对小鼠糖耐量的影响
从图1结果可见,与对照组相比,本工艺生产的药剂量组小鼠在口服给予蔗糖后30min(P<0.01)和60min(P<0.05)后血糖显著下降,血糖曲下面积也明显降低(P<0.01)。
8.1本工艺生产的药剂对小鼠血脂的影响
由图2、图3可以看出,本工艺生产药剂对饲喂高脂日粮的小鼠具有显著的降脂作用,其血清总胆固醇和甘油三酯均有显著的降低(P<0.01)。
8.2本工艺生产的药剂对STZ损伤的胰岛β细胞的影响
由图4可知,注:与STZ模型组比较,**P<0.01,STZ处理的胰岛β细胞INS-1组活细胞数量显著减少(P<0.01),表明STZ对胰岛β细胞有显著的损伤作用,本工艺生产的药剂处理组活细胞数量显著高于STZ损伤组(P<0.01),表明本工艺生产药剂对STZ损伤的胰岛β细胞INS-1具有明显的保护作用,且有随着剂量增加而提高的趋势,发挥这一作用可能是因为本工艺生产的药剂具有显著的清除·OH、超氧阴离子的功能。显微观察与细胞计数测定结果基本一致,如图5所示,注:A为正常胰岛β细胞,B为STZ损伤细胞,C为本工艺生产药剂0.125μg/mL处理细胞,D为本工艺生产药剂1.25μg/mL处理细胞,正常对照组INS-1细胞贴壁生长、呈不规则多边形(A);STZ致INS-1细胞数量减少,贴壁不牢,形状变圆,细胞萎缩脱落(B);本工艺生产的药剂可减轻STZ对INS-1细胞的损伤,细胞数量增加,贴壁生长,细胞形态明显改善趋向正常(C)。
8.3本工艺生产的药剂对超氧阴离子的清除作用
由图6可以看出,本工艺生产药剂对超氧阴离子有很强的清除作用,明显优于常用的抗氧化剂水溶性维生素E。优越的清除自由基能力可能是本试剂能够保护胰岛β细胞的重要原因之一。
以上所述仅为本发明的具体实施例,但本发明的技术特征并不局限于此,任何本领域的技术人员在本发明的领域内,所作的变化或修饰皆涵盖在本发明的专利范围之中。

Claims (5)

1.一种植物源性降糖降脂药物,其特征在于:按重量百分比包括以下组份:桑叶中提取的生物碱原料粉20-60%、苦瓜中提取的多糖原料粉20-60%、荷叶中提取的生物碱原料粉5-15%、石榴皮中提取的多酚原料粉5-25%。
2.如权利要求1所述的一种植物源性降糖降脂药物,其特征在于:所述苦瓜中提取多糖原料粉的提取工艺流程为:
A1、新鲜苦瓜切片,烘箱中干燥,温度不大于50℃;将干燥的苦瓜片粉碎成粉,过30-80目筛;
A2、将苦瓜粉末按照1:30-1:50(w/v)加入水,90-100℃提取12-24小时;
A3、将得到的提取液旋转蒸发,得到浓缩提取液;
A4、将浓缩提取液加3倍体积乙醇沉淀,沉淀液8000-10000rpm离心,收集沉淀,沉淀烘干即为苦瓜多糖原料粉。
3.如权利要求1所述的一种植物源性降糖降脂药物,其特征在于:所述荷叶药用活性成分的提取工艺流程为:
B1、荷叶烘箱干燥或晒干,干燥温度不大于50℃;
B2、粉碎:粉碎粒度30目至80目;
B3、加入50-70%酒精,料液的重量比为1:30-50,超声波提取4-6小时,提取温度30-50℃,超声功率:1000-1300W,提取完成后过滤去除滤渣,得到提取液进行8000-10000rpm离心,得到上清液;
B4、将上清液旋转蒸发去除酒精,8000-10000rpm离心,收集上清液,上清液冷冻或喷雾干燥,得到荷叶生物碱的原料粉。
4.如权利要求1所述的一种植物源性降糖降脂药物,其特征在于:所述石榴皮药用活性成分的提取工艺流程为:
C1、成熟石榴果实,将果皮剥下,干燥,干燥温度不大于50℃;
C2、将干燥石榴皮粉碎,过30目至80目筛;
C3、提取:石榴皮粉按1:30-1:50(w/v)加入40%-80%乙醇,超声功率:1000-1300W,60℃提取2-4小时,提取完成后细筛过滤去除滤渣,得到提取液进8000-10000rpm离心,得到上清液;
C4、将上述步骤中的上清液旋蒸去除酒精,离心收集上清液,上清液用弱极性大孔树脂吸附过液,蒸馏水冲洗去除糖类等杂质,树脂用80-95%乙醇洗脱,收集洗脱液旋转蒸发去掉酒精,浓缩至小体积后烘箱烘干,干燥固体粉碎后得到石榴皮多酚的原料粉。
5.如权利要求1所述的一种植物源性降糖降脂药物,其特征在于:桑叶生物碱原料粉的提取工艺为:
D1、采摘:采摘桑叶,每年5月至10月;
D2、干燥:将采摘的桑叶干燥,干燥温度不大于50℃;
D3、粉碎:粉碎粒度30目至80目;
D4、加入酒精,然后超声波提取:酒精浓度50-70%,料液的重量比为1:30-50,提取时间4-6小时,提取温度30-50℃,超声功率:1000-1300W,提取完成后细筛过滤去除滤渣,得到提取液进行8000-10000rpm离心,得到上清液;
D5、将D4步骤产生的上清液旋蒸去除酒精,离心收集上清液,上清液用酸型阳离子交换树脂吸附12-24小时,自来水冲洗去杂后,树脂用0.25-0.5mol/L的氨水洗脱,收集洗脱液旋蒸去除氨水,浓缩至小体积后离心得上清夜;
D6、重复步骤D5,将上清液用强酸型阳离子交换树脂吸附2-4小时,自来水冲洗去杂后,树脂用0.25-0.5mol/L的氨水洗脱,收集洗脱液旋蒸去除氨水,浓缩至小体积后冷冻或喷雾干燥,得到桑叶生物碱的原料粉。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113455560A (zh) * 2020-11-24 2021-10-01 浙江省农业科学院 降糖降脂八宝茶及其制备方法、饮用方法和用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1872134A (zh) * 2006-04-21 2006-12-06 江苏大学 一种苦瓜多糖降血糖组合物及其制备方法
CN103041118A (zh) * 2013-01-28 2013-04-17 赵全成 一种具有降血糖降血脂作用的组合物
CN105535112A (zh) * 2015-12-29 2016-05-04 浙江省农业科学院 桑叶、桑椹降糖药用活性物质提取工艺及其配方

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1872134A (zh) * 2006-04-21 2006-12-06 江苏大学 一种苦瓜多糖降血糖组合物及其制备方法
CN103041118A (zh) * 2013-01-28 2013-04-17 赵全成 一种具有降血糖降血脂作用的组合物
CN105535112A (zh) * 2015-12-29 2016-05-04 浙江省农业科学院 桑叶、桑椹降糖药用活性物质提取工艺及其配方

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
唐鹏程等: "石榴皮多酚提取工艺及活性研究进展", 《西华大学学报(自然科学版)》 *
朱静等: "大孔吸附树脂对石榴皮多酚的分离纯化", 《食品科技》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113455560A (zh) * 2020-11-24 2021-10-01 浙江省农业科学院 降糖降脂八宝茶及其制备方法、饮用方法和用途

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