CN107287239B - 一种用于视网膜色素变性的基因治疗载体及药物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种腺相关病毒载体，该腺相关病毒载体可用于治疗或预防由磷酸二酯酶β亚基(PDE6b)基因突变引起的视网膜色素变性。本发明的腺相关病毒载体包含编码磷酸二酯酶β亚基的核酸序列、启动子及增加基因表达的血管紧张素II型受体内含子1。本发明还涉及包含上述基因治疗载体的药物及组合物。

Description

一种用于视网膜色素变性的基因治疗载体及药物

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，更具体地，本发明涉及一种用于视网膜色素变性的基因治疗载体及相关药物。

背景技术

视网膜色素变性是一种以视网膜光感受器细胞变性凋亡为主的严重致盲性眼病。传统医疗手段对遗传性视网膜疾病没有作用，所以到目前为止这类疾病还处于无药可治的状态。近年来，随着基因检测技术的发展，已知这类隐性视网膜遗传病是由基因突变造成的相应功能性蛋白缺失导致的。

人类常染色体隐性遗传视网膜色素变性中常见的一种严重亚型是由于视杆细胞的磷酸二酯酶β亚基(PDE6b)基因突变造成的。视网膜的视细胞里有感光物质，叫视紫红质。它遇光以后发生结构变化，从而导致一系列复杂的生化反应最终导致视细胞膜上面负责细胞内外离子交换流动的膜通道关闭，造成视细胞膜内外的电位差，也就是通过所谓的光传导通路把自然界的普通光信号变成了可在人体内传导的生物电讯号。然后这个电讯号通过视神经传到大脑皮质的视中枢，在那里整合成视觉。磷酸二酯酶β亚基是视觉转导级联反应中的重要成分。PDE6b基因的突变导致了PDE6b这种酶的蛋白功能的缺陷，使得上游的cGMP发生聚积，继而造成视杆细胞的死亡及随后的继发性视锥细胞死亡，最后导致患者失明。

随着生物技术的发展，基于腺病毒载体的针对眼部特别是遗传性视网膜退行性病变的基因治疗方法受到了广泛的关注。但也有研究指出，应用重组病毒运送表达载体至眼内，同时在眼内表达治疗性的基因产物，还存在许多问题，如表达效率低，持续时间短，潜在的细胞毒性等。

因此，亟需找到一种可靠、有效的给药载体，从而能够携带治疗药物有效穿透眼屏障，达到持续、安全地治疗的目的。

发明内容

本发明提供了一种将携带正常基因的特定腺相关病毒载体转染到有基因突变的相关视杆细胞进而通过恢复病变细胞缺失的相关功能蛋白来达到恢复视功能从而让患有隐性视网膜色素变性的患者重见光明的个性化基因治疗方式。

在本发明的第一方面，提供一种腺相关病毒载体，所述载体含有增强子、启动子、血管紧张素II型受体内含子1(angiotensin II type 2receptor Intron 1，AT2R Intron1)和磷酸二酯酶β亚基(PDE6b)的基因序列，所述的PDE6b基因序列选自与SEQ ID NO:1有至少95％同源性的核苷酸序列；所述的血管紧张素II型受体内含子1选自与SEQ ID NO:2有至少90％同源性的核苷酸序列。本发明的实验中发现，在腺相关病毒载体中加入上述血管紧张素II型受体内含子1可以使PDE6b的mRNA表达水平增加一倍以上。

优选地，所述的PDE6b基因序列选自与SEQ ID NO:1有至少96％、97％、98％、99％、100％同源性的核苷酸序列；所述的血管紧张素II型受体内含子1选自与SEQ ID NO:2有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同源性的核苷酸序列。

更优选地，所述的PDE6b的核苷酸序列含有SEQ ID NO:1；所述的血管紧张素II型受体内含子1的核苷酸序列含有SEQ ID NO:2。最优选地，所述的PDE6b的核苷酸序列选自SEQ ID NO:1；所述的血管紧张素II型受体内含子1的核苷酸序列选自SEQ ID NO:2。

在一个优选例中，所述的启动子为Chicken beta-actin(CBA)的启动子，选自与SEQ ID NO:3有至少95％同源性的核苷酸序列。更优选地，所述的(CBA)的启动子选自与SEQID NO:3有至少96％、97％、98％、99％、100％同源性的核苷酸序列。最优选地，所述的CBA启动子的核苷酸序列选自SEQ ID NO:3。

在另一优选例中，增强子为CMV IE，选自与SEQ ID NO:5有至少95％同源性的核苷酸序列。更优选地，所述的CMV IE选自与SEQ ID NO:5有至少96％、97％、98％、99％、100％同源性的核苷酸序列。最优选地，所述的CMV IE增强子的核苷酸序列选自SEQ ID NO:5。

在另一优选例中，所述腺相关病毒载体的序列含有

(a)SEQ ID NO:1；和

(b)SEQ ID NO:2；和

(c)SEQ ID NO:3；和

(d)SEQ ID NO:5

在另一优选例中，腺相关病毒可以选自AAV1，AAV2，AAV3，AAV4，AAV5，AAV6，AAV7，AAV8，AAV9，AAV10，AAV2-AAV3，AAVrh.10，AAVhu.14，AAV3a/3b，AAVrh32.33，AAV-HSC15，AAV-HSC17，AAVhu.37，AAVrh.8，CHt-P6，AAV2.5，AAV6.2，AAV2i8，AAV-HSC15/17，AAVM41，AAV9.45，AAV6(Y445F/Y731F)，AAV2.5T，AAV-HAE1/2，AAV clone 32/83，AAVShH10，AAV2(Y->F)，AAV8(Y733F)，AAV2.15，AAV2.4，AAVM41，AAVr3.45AAV2或AAV5。更优选地，腺相关病毒选自AAV2、AAV5和AAV8。最优选地，腺相关病毒选自AAV2。

在另一优选例中，所述的腺相关病毒载体序列含有SEQ ID NO:6。

在本发明的另一方面，提供一种腺相关病毒载体，所述载体含有增强子、启动子、缩短的嵌合内含子(Shortened chimeric Intron)、血管紧张素II型受体内含子1(angiotensin II type 2receptor Intron 1，AT2R Intron 1)和磷酸二酯酶β亚基(PDE6b)的基因序列。所述的缩短的嵌合内含子序列选自与SEQ ID NO:4有至少90％同源性的核苷酸序列；PDE6b基因序列选自与SEQ ID NO:1有至少95％同源性的核苷酸序列；所述的血管紧张素II型受体内含子1选自与SEQ ID NO:2有至少90％同源性的核苷酸序列。缩短的嵌合内含子的意义在于，AAV载体的容量较小，如果治疗基因太大，会影响包装效果。PDE6b就是一个较大的基因，为了为其留出空间，本发明将CBA启动子下方的嵌合内含子中一些不必要的序列去掉后得到了缩短的嵌合内含子。

优选地，所述的缩短的嵌合内含子序列选自与SEQ ID NO:4有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同源性的核苷酸序列；所述的PDE6b基因序列选自与SEQ IDNO:1有至少96％、97％、98％、99％、100％同源性的核苷酸序列；所述的血管紧张素II型受体内含子1选自与SEQ ID NO:2有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同源性的核苷酸序列。

更优选地，所述的缩短的嵌合内含子序列含有SEQ ID NO:4；所述的PDE6b的核苷酸序列含有SEQ ID NO:1；所述的血管紧张素II型受体内含子1的核苷酸序列含有SEQ IDNO:2。最优选地，所述的缩短的嵌合内含子序列选自SEQ ID NO:4；所述的PDE6b的核苷酸序列选自SEQ ID NO:1；所述的血管紧张素II型受体内含子1的核苷酸序列选自SEQ ID NO:2。

在一个优选例中，所述的启动子为Chicken beta-actin(CBA)的启动子，选自与SEQ ID NO:3有至少95％同源性的核苷酸序列。更优选地，所述的(CBA)的启动子选自与SEQID NO:3有至少96％、97％、98％、99％、100％同源性的核苷酸序列。最优选地，所述的CBA启动子的核苷酸序列选自SEQ ID NO:3。

在另一优选例中，增强子为CMV IE，选自与SEQ ID NO:5有至少95％同源性的核苷酸序列。更优选地，所述的CMV IE选自与SEQ ID NO:5有至少96％、97％、98％、99％、100％同源性的核苷酸序列。最优选地，所述的CMV IE增强子的核苷酸序列选自SEQ ID NO:5。

在另一优选例中，所述腺相关病毒载体的序列含有

(a)SEQ ID NO:1；和

(b)SEQ ID NO:2；和

(c)SEQ ID NO:3；和

(d)SEQ ID NO:4；和

(e)SEQ ID NO:5。

在另一优选例中，腺相关病毒可以选自AAV1，AAV2，AAV3，AAV4，AAV5，AAV6，AAV7，AAV8，AAV9，AAV10，AAV2-AAV3，AAVrh.10，AAVhu.14，AAV3a/3b，AAVrh32.33，AAV-HSC15，AAV-HSC17，AAVhu.37，AAVrh.8，CHt-P6，AAV2.5，AAV6.2，AAV2i8，AAV-HSC15/17，AAVM41，AAV9.45，AAV6(Y445F/Y731F)，AAV2.5T，AAV-HAE1/2，AAV clone 32/83，AAVShH10，AAV2(Y->F)，AAV8(Y733F)，AAV2.15，AAV2.4，AAVM41，AAVr3.45AAV2或AAV5。更优选地，腺相关病毒选自AAV2、AAV5和AAV8。最优选地，腺相关病毒选自AAV2。

在本发明的另一方面，提供一种用于治疗视网膜色素变性的药物组合物，所述的药物组合物包含腺相关病毒载体和药学上可接受的载体。

在本发明的另一方面，提供所述的腺相关病毒载体在制备治疗视网膜色素变性的药物中的应用。

在本发明的另一方面，提供一种基因治疗视网膜色素变性的方法，将所述的腺相关病毒载体眼内注射，增加正常PDE6b蛋白表达。优选地，所述的眼内注射是指视网膜下腔注射或玻璃体腔注射。

本发明的有益效果在于，采用缩短的嵌合内含子将分子量较大的PDE6b基因装载入上述的腺相关病毒载体中，且同时采用了血管紧张素II型受体内含子1使得PDE6b蛋白得以高效率的持续、稳定的表达，从而起到治疗、缓解视网膜色性变性病的作用。

附图说明

图1.包装进AAV2载体的质粒模式图。

图2.pTR-sCBA-AT2R Intron 1-hPDE6b质粒的特征图。

图3.应用带有Rat AT2R Intron 1的AAV2-sCBA-hPDE6b和没有Rat AT2R Intron1的AAV2-sCBA-hPDE6b载体注射同一只出生14天的rd10小鼠的右眼和左眼，1个月后hPDE6EmRNA的表达水平变化。

图4.AAV2-sCBA-AT2R Intron 1-hPDE6b注射对rd10小鼠在暗适应下的视网膜电图(杆细胞ERG)的作用。标尺：200μV，10ms。

图5.AAV2-sCBA-AT2R Intron 1-hPDE6b注射后，光学相干断层扫描(opticalcoherence tomography，OCT)测量视网膜厚度及结构变化。

图6.AAV2-sCBA-AT2R Intron 1-hPDE6b注射后，rd10小鼠视网膜切片整体光镜图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

药物组合物及药盒

为了便于临床应用，本发明的药物组合物可以包含在注射用给药器(如注射用针)中，所述的注射用给药器中，可以包含一次给药量的所述的药物组合物。所述的注射用给药器可以被包含在药盒中，以方便储存、使用。运输时需要将装有药物悬浊液的微小容器放置于干冰中。平时应保存于-80C冰箱中。

本发明所述的药盒或试剂盒中，还可包括使用说明书，以利于本领域技术人员按照正确的方式使用。

如本文所用，“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或哺乳动物而无过度不良副反应(如毒性)的，即具有合理的效益/风险比的物质。术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。

合适的药学上可接受的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington’sPharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的载体的充分说明。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、BBS(Balanced SaltSolution)磷酸盐缓冲液、ringer溶液、生理盐水、平衡盐溶液、甘油或山梨醇等。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如润滑剂、助流剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质和稳定剂，等。

基因治疗载体

本发明中的基因治疗载体是病毒表达载体。优选的，根据本发明，病毒表达载体是腺相关病毒(AVV)载体，诸如选自由血清型AAV1、2、3、4、5、6、7、8、9和10，或其衍生的嵌合AAV组成的组中的AAV载体如AAV2-AAV3，AAVrh.10，AAVhu.14，AAV3a/3b，AAVrh32.33，AAV-HSC15，AAV-HSC17，AAVhu.37，AAVrh.8，CHt-P6，AAV2.5，AAV6.2，AAV2i8，AAV-HSC15/17，AAVM41，AAV9.45，AAV6(Y445F/Y731F)，AAV2.5T，AAV-HAE1/2，AAV clone32/83，AAVShH10，AAV2(Y->F)，AAV8(Y733F)，AAV2.15，AAV2.4，AAVM41，AAVr3.45AAV2或AAV5，这能更好地适于在感兴趣的组织中进行高效率的转导。在转染时，AAV只在宿主中引起轻微的免疫反应(如果有的话)。在本发明的优选实施方式中，基因治疗载体是AAV血清型2、5或8载体。在进一步优选的实施方式中，基因治疗载体是AAV 2载体。

可根据标准技术产生重组病毒载体。例如，重组腺相关病毒载体能在人293细胞(其提供反式E1A和E1B特性)中传播，以达到在10⁷～10¹³个病毒颗粒/mL范围内的滴度。在体内应用之前，病毒载体可通过凝胶过滤方法(诸如琼脂糖柱)进行脱盐，并通过随后的过滤进行纯化。纯化降低给药载体的主体中潜在的有害作用。所给药的病毒基本上不含野生型病毒和可复制型病毒。能通过合适的方法，诸如十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，随后进行银染，来证明病毒的纯度。

用于人的AAV的合适剂量在约1×10¹⁰～1×10¹⁴个病毒颗粒的范围内。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著，分子克隆实验指南，第三版，科学出版社，2002中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

本发明中所用的实验动物、试剂和实验仪器如下所述：

实验动物：正常C57BL/6J小鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。rd10小鼠(自然产生的具有PDE6b蛋白缺失的)购自美国Jackson实验室。光照周期12h光照-12h黑暗，自由采食，自由饮水，于不同时间点对其进行视网膜下腔注射。所有的动物研究严格按照国家科学技术委员会颁发的《实验动物管理条例》进行。

主要试剂、耗材：生理盐水(浙江天瑞药业有限公司)；30^1/2gauge一次性注射针头(美国Becton Dickinson and Company公司)；荧光素钠(美国Alcon公司)；1％阿托品滴眼液(美国Alcon公司)；复方托吡卡胺滴眼液(沈阳兴齐眼药股份有限公司)；盐酸四环素氢化可的松眼膏(南京白敬宇制药有限责任公司)。2.5％羟丙基甲基纤维素(美国Akorn公司)

主要仪器：眼科实验手术显微镜(日本Nikon公司)；眼科显微器械(苏州明仁医疗器械有限公司)；微量进样器(美国Hamilton公司)；MicronⅣ视网膜影像系统(美国PhoenixResearch Labs公司)；视觉电生理检测系统(德国Roland Consult公司)；蔡司明视野显微镜(德国Carl Zesis公司)。

视网膜下腔注射：成年小鼠经充分散瞳后全身麻醉，在眼科专用手术显微镜直视下，在角巩膜缘内侧瞳孔范围内用30^1/2gauge的一次性尖针头穿刺角膜，避免伤及虹膜和晶状体，然后用带33gauge平针头的微量进样器沿穿刺口进入，针头绕过晶体后到达玻璃体，然后逐渐进针至神经视网膜层和视网膜色素上皮(RPE)层之间的潜在视网膜腔隙并缓慢推注，注射量为1ul。注射载体悬浊液中添加0.1％荧光素钠绿色染料(安全浓度)，方便观察注射是否成功及网脱范围。注射过程中，眼表滴2.5％羟丙基甲基纤维素以便于随时观察眼底情况。手术显微镜下如清楚看到眼底局部视网膜呈圆形隆起且网膜隆起下方可见绿色，证明注射成功。一定时间后小泡消失，视网膜局部隆起变平。术中如不能看到视网膜隆起及其下方的绿色或看到视网膜有大出血等并发症，则另选小鼠重新注射。术毕涂1％阿托品滴眼液和四环素可的松眼膏，以后每隔1天重复一次，共三次，以减少炎症反应、防止感染。

实施例1、病毒载体的构建和分离纯化

包装入AAV2的质粒命名为pTR-sCBA-AT2R Intron 1-hPDE6b。pTR-sCBA-AT2RIntron 1-hPDE6b的构建方式如图1、图2所示，人类PDE6b(hPDE6b)的cDNA(SEQ ID NO:1)被克隆到sCBA(shortened chicken beta actin)启动子的下游，此外质粒中还包括pTR-sCBA-AT2R Intron 1-hPDE6b IE增强子(SEQ ID NO:5)和特有的大鼠血管紧张素II型受体内含子1(Rat AT2R Intron 1，SEQ ID NO:2)，两者都可以增强转入基因PDE6b的长期表达。hPDE6b cDNA之后是SV40聚腺苷酸化信号(SEQ ID NO:7)，表达盒两侧是反向末端重复序列TR。病毒载体还包括ITR5’(SEQ ID NO:8)，ITR3’(SEQ ID NO:9)，ColE1ori(SEQ ID NO:10)，Amp(r)(SEQ ID NO:11)和f1(+)origin(SEQ ID NO:12)。

病毒载体pTR-sCBA-AT2R Intron 1-hPDE6b的特征图谱如图1所示，各元件的起止位点如图2所示。特别重要的是，sCBA包含了CBA启动子(SEQ ID NO:3)的序列和其下游一段缩短的嵌合内含子(shortened chimeric Intron)序列(SEQ ID NO:4)。质粒的全长序列如SEQ ID NO:6所示。

病毒载体是通过质粒共转染方法获得的。将含有AAV2外壳蛋白基因和能帮助AAV复制的基因的辅助质粒和pTR-CBA-hPDE6b质粒与HEK 293T细胞共转染，初步形成重组腺相关病毒载体。经碘克丁醇初步纯化后，经过以5ml-Hitrp Q琼脂糖凝胶作为填料的快速蛋白液相色谱仪通过离子交换层析进一步纯化(使用仪器为Pharmacia AKTA FPLC system(Amersham Biosciences,Piscataway,NJ))。之后用pH8.0，215mM的NaCl淋洗琼脂糖凝胶柱，对峰值的重组病毒载体进行收集。收集的液体通过浓缩器(100K concentrater,Millipore)后，用含0.014％的吐温20淋洗浓缩器对重组病毒载体进行浓缩。再用DNase I消化掉病毒颗粒以外DNA，并通过实时荧光定量PCR的方法确定病毒的滴度。最后用硝酸银染色-SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳法确保病毒载体颗粒没被污染且不含内毒素，并分装零下80度储存。

实施例2、Rat AT2R Intron 1对hPDE6b mRNA表达水平的增强作用

一、实验方法

带有Rat AT2R Intron 1的AAV2-sCBA-hPDE6b和没有Rat AT2R Intron 1的AAV2-sCBA-hPDE6b载体注射同一只出生14天的rd10小鼠的右眼和左眼，1个月后，取眼检测hPDE6b的mRNA表达水平。

二、结果

带有Rat AT2R Intron 1的AAV2-sCBA-hPDE6b病毒载体(即AAV2-sCBA-AT2RIntron 1-hPDE6b)和没有Rat AT2R Intron 1的传统载体相比，注射眼的hPDE6b mRNA水平提高一倍以上。(图3)

实施例3、AAV2-sCBA-AT2R Intron 1-hPDE6b病毒载体注射对眼视网膜电图(杆细胞ERG)的作用

一、实验方法

小鼠视网膜下腔注射后不同时间点进行视网膜电图(electroretinogram，ERG)检测。暗适应过夜，为消除不同时间检测对ERG幅值产生的影响，检测均设在下午，在暗室内暗红光照下操作(>650nm)。小鼠放置在37℃恒温台上，眼表滴一滴复方托吡卡胺滴眼液后行全身麻醉，剪去胡须。将参考电极和接地电极插入头部和尾根部皮下，一对金制的环形电极放置在角膜表面，滴少量2.5％羟甲基纤维素滴眼液于角膜表面湿润保护角膜及降低干扰，增强导电性。全视野暗适应ERG在0.01mcd·s/m²到5cd·s/m²不同白光刺激强度下记录。

二、结果

自然产生的具有PDE6b基因突变的rd10模式小鼠在生后14天一只眼接受视网膜下腔注射AAV-sCBA-hPDE6b载体，另一只对照眼不注射。2个月后注射眼恢复了视网膜杆细胞功能，即暗适应下视网膜电流图(ERG)在不同刺激强度下仍然存在；未注射眼无任何视网膜杆细胞功能，在最强光线刺激下ERG波形仍为直线(图4)。

实施例4、光学相干断层扫描(optical coherence tomography，OCT)测量视网膜厚度及结构变化

一、实验方法

OCT影像学检测：使用MicronⅣ视网膜影像系统进行光学相干断层扫描(opticalcoherence tomography，OCT)检察。小鼠用复方托吡卡胺滴眼液散瞳，全身麻醉后剪去胡须，放置在设备配套的动物台上。操作过程中在小鼠眼表滴2.5％羟丙基甲基纤维素湿润角膜。检查时同时开启OCT检查系统和眼底照相系统，调节动物试验台使角膜与镜头接触获取眼底图像，参考眼底图像对全视网膜区域进行线性水平扫描，再微量调节OCT图像使其处于最佳清晰状态，经降噪平均后获取OCT图像。

二、结果

自然产生的具有PDE6b基因突变的rd10模式小鼠在生后14天一只眼接受视网膜下腔注射AAV-sCBA-hPDE6b载体，另一只对照眼不注射。2个月后用光学相干断层扫描(optical coherence tomography，OCT)测量注射和未注射眼视网膜相同部位的厚度及结构，发现注射眼视网膜明显比未注射眼厚。注射眼的外核层及其外节仍然可见；未注射眼的外核层及其外节基本消失，只剩内层视网膜(图5)。

实施例6、小鼠视网膜光镜结果

一、实验方法

上述rd10小鼠做完OCT测量后立即将眼球摘除后浸没到含4％戊二醛的0.1M磷酸缓冲液的冷固定液中。移除角膜后的眼在固定液中保留24小时。晶状体在用一系列浓度递增的乙醇脱水后移除。将眼杯嵌入到环氧树脂的混合物中。在每一个样本中，0.5μm的薄片用蓝色的甲苯胺褪色后用于光学显微镜检查

二、结果

上述rd10小鼠做完OCT测量后立即做成切片后的视网膜整体光镜图。发现未注射眼的视网膜整体明显变薄，其外核层及其视细胞外节基本消失，只剩内层视网膜。注射眼的视网膜虽然比正常的略薄，其各处外核层及其视细胞外节仍然得到保留，大约为正常眼的一半(图6)。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

序列表

<110> 沈阳复明生物技术有限公司

<120> 一种用于视网膜色素变性的基因治疗载体及药物

<130> 2017

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2562

<212> DNA

<213> 人

<400> 1

atgagcctca gtgaggagca ggcccggagc tttctggacc agaaccccga ttttgcccgc 60

cagtactttg ggaagaaact gagccctgag aatgtggccg cggcctgcga ggacgggtgc 120

ccgccggact gcgacagcct ccgggacctc tgccaggtgg aggagagcac ggcgctgctg 180

gagctggtgc aggatatgca ggagagcatc aacatggagc gcgtggtctt caaggtcctg 240

cggcgcctct gcaccctcct gcaggccgac cgctgcagcc tcttcatgta ccgccagcgc 300

aacggcgtgg ccgagctggc caccaggctt ttcagcgtgc agccggacag cgtcctggag 360

gactgcctgg tgccccccga ctccgagatc gtcttcccac tggacatcgg ggtcgtgggc 420

cacgtggctc agaccaaaaa gatggtgaac gtcgaggacg tggccgagtg ccctcacttc 480

agctcatttg ctgacgagct cactgactac aagacaaaga atatgctggc cacacccatc 540

atgaatggca aagacgtcgt ggcggtgatc atggcagtga acaagctcaa cggcccattc 600

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aagatctatc acctgagcta cctccacaac tgcgagacgc gccgcggcca ggtgctgctg 720

tggtcggcca acaaggtgtt tgaggagctg acggacatcg agaggcagtt ccacaaggcc 780

ttctacacgg tgcgggccta cctcaactgc gagcggtact ccgtgggcct cctggacatg 840

accaaggaga aggaattttt tgacgtgtgg tctgtgctga tgggagagtc ccagccgtac 900

tcgggcccac gcacgcctga tggccgggaa attgtcttct acaaagtgat cgactacatc 960

ctccacggca aggaggagat caaggtcatt cccacaccct cagccgatca ctgggccctg 1020

gccagcggcc ttccaagcta cgtggcagaa agcggcttta tttgtaacat catgaatgct 1080

tccgctgacg aaatgttcaa atttcaggaa ggggccctgg acgactccgg gtggctcatc 1140

aagaatgtgc tgtccatgcc catcgtcaac aagaaggagg agattgtggg agtcgccaca 1200

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gacgagatcc agctcatcct gccaaccaga gcgcgcctgg ggaaggagcc tgctgactgc 1440

gatgaggacg agctgggcga aatcctgaag gaggagctgc cagggcccac cacatttgac 1500

atctacgaat tccacttctc tgacctggag tgcaccgaac tggacctggt caaatgtggc 1560

atccagatgt actacgagct gggcgtggtc cgaaagttcc agatccccca ggaggtcctg 1620

gtgcggttcc tgttctccat cagcaaaggg taccggagaa tcacctacca caactggcgc 1680

cacggcttca acgtggccca gacgatgttc acgctgctca tgaccggcaa actgaagagc 1740

tactacacgg acctggaggc cttcgccatg gtgacagccg gcctgtgcca tgacatcgac 1800

caccgcggca ccaacaacct gtaccagatg aagtcccaga accccttggc taagctccac 1860

ggctcctcga ttttggagcg gcaccacctg gagtttggga agttcctgct ctcggaggag 1920

accctgaaca tctaccagaa cctgaaccgg cggcagcacg atcacgtgat ccacctgatg 1980

gacatcgcca tcatcgccac ggacctggcc ctgtacttca agaagagagc gatgtttcag 2040

aagatcgtgg atgagtccaa gaactaccag gacaagaaga gctgggtgga gtacctgtcc 2100

ctggagacga cccggaagga gatcgtcatg gccatgatga tgacagcctg cgacctgtct 2160

gccatcacca agccctggga agtccagagc aaggtcgcac ttctcgtggc tgctgagttc 2220

tgggagcaag gtgacttgga aaggacagtc ttggatcagc agcccattcc tatgatggac 2280

cggaacaagg cggccgagct ccccaagctg caagtgggct tcatcgactt cgtgtgcaca 2340

ttcgtgtaca aggagttctc tcgtttccac gaagagatcc tgcccatgtt cgaccgactg 2400

cagaacaata ggaaagagtg gaaggcgctg gctgatgagt atgaggccaa agtgaaggct 2460

ctggaggaga aggaggagga ggagagggtg gcagccaaga aaggcacaga aatttgcaat 2520

ggcggcccag cacccaagtc ttcaacctgc tgtatcctgt ag 2562

<210> 2

<211> 156

<212> DNA

<213> 大鼠

<400> 2

taagtcagaa caatttacac atgcttgact cgggaagggg aacattcagc aataaaaagg 60

tttgtatgtg tgcatgtatg aatgttttct ttttcctgtt tttaacactg ccttttgcag 120

aatgccttaa ttctttaacc gctgtttctc ttacag 156

<210> 3

<211> 283

<212> DNA

<213> 鸡

<400> 3

catggtcgag gtgagcccca cgttctgctt cactctcccc atctcccccc cctccccacc 60

cccaattttg tatttattta ttttttaatt attttgtgca gcgatggggg cggggggggg 120

gggggggcgc gcgccaggcg gggcggggcg gggcgagggg cggggcgggg cgaggcggag 180

aggtgcggcg gcagccaatc agagcggcgc gctccgaaag tttcctttta tggcgaggcg 240

gcggcggcgg cggccctata aaaagcgaag cgcgcggcgg gcg 283

<210> 4

<211> 202

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 缩短的嵌合内含子

<400> 4

ggtgagcggg cgggacggcc cttctcctcc gggctgtaat tagcgcttgg tttaatgacg 60

gcttgtttct tttctgtggc tgcgtgaaag ccttgagggg ctccgggagc tagagcctct 120

gctaaccatg ttcatgcctt cttctttttc ctacagctcc tgggcaacgt gctggttatt 180

gtgctgtctc atcattttgg ca 202

<210> 5

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CMV

<400> 5

gaattcggta ccctagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat 60

atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg 120

acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt 180

tccattgacg tcaatgggtg gactatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag 240

tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc 300

attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag 360

tcatcgctat ta 372

<210> 6

<211> 7113

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223>

<400> 6

aggggggggg gggggggggt tggccactcc ctctctgcgc gctcgctcgc tcactgaggc 60

cgggcgacca aaggtcgccc gacgcccggg ctttgcccgg gcggcctcag tgagcgagcg 120

agcgcgcaga gagggagtgg ccaactccat cactaggggt tcctcagatc tgaattcggt 180

accctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt 240

tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 300

cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgcc aatagggact ttccattgac 360

gtcaatgggt ggactattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 420

tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 480

agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 540

ttaccatggt cgaggtgagc cccacgttct gcttcactct ccccatctcc cccccctccc 600

cacccccaat tttgtattta tttatttttt aattattttg tgcagcgatg ggggcggggg 660

gggggggggg gcgcgcgcca ggcggggcgg ggcggggcga ggggcggggc ggggcgaggc 720

ggagaggtgc ggcggcagcc aatcagagcg gcgcgctccg aaagtttcct tttatggcga 780

ggcggcggcg gcggcggccc tataaaaagc gaagcgcgcg gcgggcggga gtcgctgcga 840

cgctgccttc gccccgtgcc ccgctccgcc gccgcctcgc gccgcccgcc ccggctctga 900

ctgaccgcgt tactcccaca ggtgagcggg cgggacggcc cttctcctcc gggctgtaat 960

tagcgcttgg tttaatgacg gcttgtttct tttctgtggc tgcgtgaaag ccttgagggg 1020

ctccgggagc tagagcctct gctaaccatg ttcatgcctt cttctttttc ctacagctcc 1080

tgggcaacgt gctggttatt gtgctgtctc atcattttgg caaagaattc ctcgaagatc 1140

taagtcagaa caatttacac atgcttgact cgggaagggg aacattcagc aataaaaagg 1200

tttgtatgtg tgcatgtatg aatgttttct ttttcctgtt tttaacactg ccttttgcag 1260

aatgccttaa ttctttaacc gctgtttctc ttacagtagg caacgcgtct cgaggcggcc 1320

gccaccatga gcctcagtga ggagcaggcc cggagctttc tggaccagaa ccccgatttt 1380

gcccgccagt actttgggaa gaaactgagc cctgagaatg tggccgcggc ctgcgaggac 1440

gggtgcccgc cggactgcga cagcctccgg gacctctgcc aggtggagga gagcacggcg 1500

ctgctggagc tggtgcagga tatgcaggag agcatcaaca tggagcgcgt ggtcttcaag 1560

gtcctgcggc gcctctgcac cctcctgcag gccgaccgct gcagcctctt catgtaccgc 1620

cagcgcaacg gcgtggccga gctggccacc aggcttttca gcgtgcagcc ggacagcgtc 1680

ctggaggact gcctggtgcc ccccgactcc gagatcgtct tcccactgga catcggggtc 1740

gtgggccacg tggctcagac caaaaagatg gtgaacgtcg aggacgtggc cgagtgccct 1800

cacttcagct catttgctga cgagctcact gactacaaga caaagaatat gctggccaca 1860

cccatcatga atggcaaaga cgtcgtggcg gtgatcatgg cagtgaacaa gctcaacggc 1920

ccattcttca ccagcgaaga cgaagatgtg ttcttgaagt acctgaattt tgccacgttg 1980

tacctgaaga tctatcacct gagctacctc cacaactgcg agacgcgccg cggccaggtg 2040

ctgctgtggt cggccaacaa ggtgtttgag gagctgacgg acatcgagag gcagttccac 2100

aaggccttct acacggtgcg ggcctacctc aactgcgagc ggtactccgt gggcctcctg 2160

gacatgacca aggagaagga attttttgac gtgtggtctg tgctgatggg agagtcccag 2220

ccgtactcgg gcccacgcac gcctgatggc cgggaaattg tcttctacaa agtgatcgac 2280

tacatcctcc acggcaagga ggagatcaag gtcattccca caccctcagc cgatcactgg 2340

gccctggcca gcggccttcc aagctacgtg gcagaaagcg gctttatttg taacatcatg 2400

aatgcttccg ctgacgaaat gttcaaattt caggaagggg ccctggacga ctccgggtgg 2460

ctcatcaaga atgtgctgtc catgcccatc gtcaacaaga aggaggagat tgtgggagtc 2520

gccacatttt acaacaggaa agacgggaag ccctttgacg aacaggacga ggttctcatg 2580

gagtccctga cacagttcct gggctggtca gtgatgaaca ccgacaccta cgacaagatg 2640

aacaagctgg agaaccgcaa ggacatcgca caggacatgg tcctttacca cgtgaagtgc 2700

gacagggacg agatccagct catcctgcca accagagcgc gcctggggaa ggagcctgct 2760

gactgcgatg aggacgagct gggcgaaatc ctgaaggagg agctgccagg gcccaccaca 2820

tttgacatct acgaattcca cttctctgac ctggagtgca ccgaactgga cctggtcaaa 2880

tgtggcatcc agatgtacta cgagctgggc gtggtccgaa agttccagat cccccaggag 2940

gtcctggtgc ggttcctgtt ctccatcagc aaagggtacc ggagaatcac ctaccacaac 3000

tggcgccacg gcttcaacgt ggcccagacg atgttcacgc tgctcatgac cggcaaactg 3060

aagagctact acacggacct ggaggccttc gccatggtga cagccggcct gtgccatgac 3120

atcgaccacc gcggcaccaa caacctgtac cagatgaagt cccagaaccc cttggctaag 3180

ctccacggct cctcgatttt ggagcggcac cacctggagt ttgggaagtt cctgctctcg 3240

gaggagaccc tgaacatcta ccagaacctg aaccggcggc agcacgatca cgtgatccac 3300

ctgatggaca tcgccatcat cgccacggac ctggccctgt acttcaagaa gagagcgatg 3360

tttcagaaga tcgtggatga gtccaagaac taccaggaca agaagagctg ggtggagtac 3420

ctgtccctgg agacgacccg gaaggagatc gtcatggcca tgatgatgac agcctgcgac 3480

ctgtctgcca tcaccaagcc ctgggaagtc cagagcaagg tcgcacttct cgtggctgct 3540

gagttctggg agcaaggtga cttggaaagg acagtcttgg atcagcagcc cattcctatg 3600

atggaccgga acaaggcggc cgagctcccc aagctgcaag tgggcttcat cgacttcgtg 3660

tgcacattcg tgtacaagga gttctctcgt ttccacgaag agatcctgcc catgttcgac 3720

cgactgcaga acaataggaa agagtggaag gcgctggctg atgagtatga ggccaaagtg 3780

aaggctctgg aggagaagga ggaggaggag agggtggcag ccaagaaagg cacagaaatt 3840

tgcaatggcg gcccagcacc caagtcttca acctgctgta tcctgtaggc ggccgcgcgg 3900

atccagacat gataagatac attgatgagt ttggacaaac cacaactaga atgcagtgaa 3960

aaaaatgctt tatttgtgaa atttgtgatg ctattgcttt atttgtaacc attataagct 4020

gcaataaaca agttaacaac aacaattgca ttcattttat gtttcaggtt cagggggagg 4080

tgtgggaggt tttttagtcg actggggaga gatctgagga acccctagtg atggagttgg 4140

ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 4200

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 4260

accccccccc ccccccccct gcagccctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag 4320

gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg 4380

ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat 4440

caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta 4500

aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa 4560

atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc 4620

cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt 4680

ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcaatg ctcacgctgt aggtatctca 4740

gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg 4800

accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat 4860

cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta 4920

cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aaggacagta tttggtatct 4980

gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac 5040

aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa 5100

aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa 5160

actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt 5220

taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca 5280

gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca 5340

tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc 5400

ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa 5460

accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc 5520

agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca 5580

acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat 5640

tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag 5700

cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac 5760

tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt 5820

ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt 5880

gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc 5940

tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat 6000

ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca 6060

gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga 6120

cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg 6180

gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg 6240

ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta agaaaccatt attatcatga 6300

cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg tctcgcgcgt ttcggtgatg 6360

acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc cggagacggt cacagcttgt ctgtaagcgg 6420

atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg tgttggcggg tgtcggggct 6480

ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt gcaccatatg cggtgtgaaa 6540

taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggaa attgtaaacg ttaatatttt 6600

gttaaaattc gcgttaaatt tttgttaaat cagctcattt tttaaccaat aggccgaaat 6660

cggcaaaatc ccttataaat caaaagaata gaccgagata gggttgagtg ttgttccagt 6720

ttggaacaag agtccactat taaagaacgt ggactccaac gtcaaagggc gaaaaaccgt 6780

ctatcagggc gatggcccac tacgtgaacc atcaccctaa tcaagttttt tggggtcgag 6840

gtgccgtaaa gcactaaatc ggaaccctaa agggagcccc cgatttagag cttgacgggg 6900

aaagccggcg aacgtggcga gaaaggaagg gaagaaagcg aaaggagcgg gcgctagggc 6960

gctggcaagt gtagcggtca cgctgcgcgt aaccaccaca cccgccgcgc ttaatgcgcc 7020

gctacagggc gcgtcgcgcc attcgccatt caggctacgc aactgttggg aagggcgatc 7080

ggtgcgggcc tcttcgctat tacgccaggc tgc 7113

<210> 7

<211> 199

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> SV40

<400> 7

cggggatcca gacatgataa gatacattga tgagtttgga caaaccacaa ctagaatgca 60

gtgaaaaaaa tgctttattt gtgaaatttg tgatgctatt gctttatttg taaccattat 120

aagctgcaat aaacaagtta acaacaacaa ttgcattcat tttatgtttc aggttcaggg 180

ggaggtgtgg gaggttttt 199

<210> 8

<211> 143

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> ITR5’

<400> 8

ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60

cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120

gccaactcca tcactagggg ttc 143

<210> 9

<211> 142

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> ITR3'

<400> 9

acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc 60

ccgggcaaag cccgggcgtc gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc 120

gcgcagagag ggagtggcca ac 142

<210> 10

<211> 226

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> ColE1 ori

<400> 10

tttctcaatg ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg 60

gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc 120

ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga 180

ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtg 226

<210> 11

<211> 1001

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Amp (r)

<400> 11

gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc 60

aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc 120

acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta 180

gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga 240

cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg 300

cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc 360

tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat 420

cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag 480

gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat 540

cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa 600

ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa 660

gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga 720

taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg 780

gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc 840

acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg 900

aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact 960

cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat t 1001

<210> 12

<211> 460

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> f1(+) origin

<400> 12

gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa tcagctcatt ttttaaccaa 60

taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat agaccgagat agggttgagt 120

gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg tggactccaa cgtcaaaggg 180

cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac catcacccta atcaagtttt 240

ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta aagggagccc ccgatttaga 300

gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag ggaagaaagc gaaaggagcg 360

ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg taaccaccac acccgccgcg 420

cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcgcgc cattcgccat 460

Claims (9)

1.一种重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述病毒载体含有增强子、启动子、磷酸二酯酶β亚基(PDE6b)和血管紧张素II型受体内含子1的基因序列，

所述的PDE6b基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述的血管紧张素II型受体内含子1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.如权利要求1所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述的启动子为CBA(Chickenbeta-actin)启动子，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

3.如权利要求2所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述的增强子为CMV IE，其核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

4.如权利要求1所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述载体还含有一段缩短的嵌合内含子，所述的嵌合内含子的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

5.如权利要求4所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述的启动子为CBA(Chickenbeta-actin)启动子，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

6.如权利要求5所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述的增强子为CMV IE，其核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

7.一种重组腺相关病毒载体，其特征在于，所述载体含有SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。

8.一种如权利要求1-7所述的任一重组腺相关病毒载体在制备用于治疗视网膜色素变性药剂中的用途。

9.一种用于治疗视网膜色素变性的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括：

权利要求1-7所述的任一重组腺相关病毒载体；和药学上可接受的载体。

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