CN107287186A - 从鱼类的精液分离多脱氧核糖核苷酸的方法、由所述方法获得的多脱氧核糖核苷酸及其用途 - Google Patents

从鱼类的精液分离多脱氧核糖核苷酸的方法、由所述方法获得的多脱氧核糖核苷酸及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种从鱼类的精液分离PDRN的方法，包括：(1)将鱼类的精液进行第1次离心分离，获取包含精液细胞的沉淀物的步骤；(2)将所述沉淀物添加于细胞溶解缓冲液，制造细胞溶解物后，使所述细胞溶解物消化的步骤；(3)将经过所述(2)步骤的细胞溶解物进行第2次离心分离，获取上清液的步骤；(4)在根据所述(3)步骤而获取的上清液中投入饱和氯化钠水溶液并混合后，进行第3次离心分离，获取包含DNA的上清液的步骤；(5)在根据所述(4)步骤而获取的上清液中投入乙醇并使DNA沉淀后，收集所述沉淀的DNA并进行干燥的步骤；及(6)用物理方法破碎根据所述(5)步骤而获得的DNA，获取多脱氧核糖核苷酸的步骤。

Description

从鱼类的精液分离多脱氧核糖核苷酸的方法、由所述方法获 得的多脱氧核糖核苷酸及其用途
技术领域
本发明涉及一种从鱼类的精液分离多脱氧核糖核苷酸(polydeoxyribonucleotide；PDRN)的方法、根据所述方法而获得的PDRN及其用途。
背景技术
PDRN作为存在于生物体内的组织再生活性物质，由50个至2000个之间的碱基对结合成链状的脱氧核苷酸聚合物(deoxyribonucleotides polymers)的混合物构成。所述PDRN在欧洲等地被许可为医药品，用于伤口治愈及美容。具体而言，当将所述PDRN应用于临床时，表现出伤口治疗时间缩短和正常组织化作用以及糖尿病性足部溃疡的迅速伤口闭合作用，已知对痤疮及褥疮、伤口治愈、疤痕疾病、细丝纹、皮肤老化、日晒老化、改善皮肤弹力、整形手术后快速治愈、脱发、改善血液循环等有效。另外，所述PDRN具有亲水性特性，不引起过敏反应或体内排异反应，由于抗热性，不因高温灭菌而破坏，保持活性，因而非常容易应用于再生医学领域中使用的医药品领域及化妆品领域等多样的产业领域。
作为利用所述PDRN的以往技术，专利文献1(韩国公开专利公报第10-2014-0030605号)对将PDRN与牙齿一同构成从而提高牙槽骨再生速度的牙槽骨再生用试剂盒(kit)进行了记载，专利文献2(韩国公开专利公报第10-2015-0068647号)对含有微粒化PDRN的滴眼剂组合物进行了记载，专利文献3(韩国注册专利公报第10-1590498号)对包含芦荟提取物及PDRN的化妆品组合物进行了记载。
以往，PDRN主要是通过降低从鲑鱼或鳟鱼的精巢或精液分离的DNA的分子量的过程而制造的，这种用于获得PDRN的DNA分离法是基于曾应用于哺乳类等其它物种的技术发展而来的。具体而言，以往作为从鱼类的组织分离DNA的方法，一般使用包含使用苯酚和三氯甲烷的过程的DNA分离方法。
例如，在非专利文献1(Taggart,J.B,.et al.,J.Fish Biol.1992,40,963-65.)中，记载了使用苯酚/三氯甲烷/异戊醇(phenol/chloroform/isoamylalcohol)从鲑鱼科鱼类的骨骼肌、肝脏、鳍组织提取DNA的方法。但是，所述方法存在如下问题：即，为了回收DNA，不仅需要过多的步骤和时间，而且存在使用有害于人体的苯酚和三氯甲烷。另外，所述方法需要使用昂贵的化学物质或器具，因而在大量生产体制下，在费用方面存在不够有效的问题。
作为解决这种问题的以往方法，专利文献4(韩国公开专利公报第10-2009-0079413号)记载有，在通过酶分解、灭菌及分子量降低工序而制造特定分子量范围的DNA聚合物片断方面，在中性的pH下执行酶分解工序，从而以更环保、安全的方法获得DNA聚合物片断复合体。但是，即便是专利文献4，其在分子量降低工序时，为了匹配pH而使用盐酸和醋酸，因而不能说是100％安全、环保的方法，另外，在获得令人满意的高纯度DNA聚合物片断复合体方面也存在局限。
【现有技术文献】
【专利文献】
(专利文献1)KR1020140030605 A
(专利文献2)KR1020150068647 A
(专利文献3)KR101590498 B
(专利文献4)KR1020090079413 A
【非专利文献】
(非专利文献1)Taggart J.B.et al.,J.Fish Biol.1992,40,963-965.
发明内容
技术问题
本发明要提供一种从鱼类的精液分离PDRN的方法，本发明使用蛋白质分解酶及饱和氯化钠代替诸如苯酚或三氯甲烷的有机溶剂来分离DNA，作为所述DNA的破碎方法，利用诸如超声波分解法等的物理方法，从而以高效、低费用且无毒性的安全的方法，从鱼类的精液分离PDRN。
另外，本发明想要提供一种根据所述方法而获得的高纯度的PDRN及利用其制造的医药品及化妆品。
解决问题的方案
为了解决如上所述的课题，本发明提供一种从鱼类的精液分离PDRN的方法，包括：(1)将鱼类的精液进行第1次离心分离，获取包含精液细胞的沉淀物的步骤；(2)将所述沉淀物添加于细胞溶解缓冲液，制造细胞溶解物后，使所述细胞溶解物消化的步骤；(3)将经过所述(2)步骤的细胞溶解物进行第2次离心分离，获取上清液的步骤；(4)在根据所述(3)步骤而获取的上清液中投入饱和氯化钠水溶液并混合后，进行第3次离心分离，获取包含DNA的上清液的步骤；(5)在根据所述(4)步骤而获取的上清液中投入乙醇并使DNA沉淀后，收集所述沉淀的DNA并进行干燥的步骤；及(6)将根据所述(5)步骤而获得的DNA用物理方法破碎，获取多脱氧核糖核苷酸(polydeoxyribonucleotide；PDRN)的步骤。
所述鱼类可以为鲑鱼科鱼类，优选地可以为虹鳟鱼。
在所述(2)步骤中，所述细胞溶解缓冲液可以包括选自由Tris-HCl(三(羟甲基)氨基甲烷，tris-(hydroxymethyl)-aminomethane-HCl)、NaCl及Na2EDTA(乙二胺四乙酸二钠，ethylene diamine tetra acetic acid disodium salt)组成的组中的某一种或两种以上。而且，在所述(2)步骤中，所述细胞溶解物的消化可以使用十二烷基硫酸钠溶液、Na2EDTA溶液及蛋白水解酶K溶液的混合溶液来执行，可以在30～39℃下执行12～20小时。
在所述(4)步骤中，所述上清液与所述饱和氯化钠水溶液的投入比率可以为2:1至1:2的重量比。
借助于分光光度计测量的根据所述(5)步骤而获取的DNA的纯度(260nm/280nm)可以为1.8～2.2。可以还包括：将根据所述(5)步骤而获得的干燥DNA溶解于去离子水后，进行冻结干燥的步骤。
在所述(6)步骤中，所述物理方法可以为超声波分解法。
优选地，所述(6)步骤可以包括：(i)将根据所述(5)步骤而获得的DNA溶解于选自由脱盐水、食盐水(0.9％NaCl)及磷酸盐缓冲食盐水组成的组中的某一种或两种以上的混合溶液，制造DNA溶液的步骤；及(ii)将所述DNA溶液进行超声波分解的步骤，此时的所述DNA溶液的浓度可以为2～10mg/mL。
在所述(6)步骤中，优选地，根据所述(i)步骤而制造的DNA溶液是在1～5℃下培养2～4小时后，进入所述(ii)步骤；所述超声波分解在以所述DNA溶液的浓度10mg/mL为基准时，可以在1～5℃下执行5～30分钟。
另外，本发明的从鱼类的精液分离PDRN的方法可以还包括：将根据所述(6)步骤而获得的PDRN通过精密过滤膜进行过滤的步骤；将通过所述过滤膜的PDRN进行冻结干燥的步骤；及将所述冻结干燥的PDRN溶解于食盐水的步骤。
另一方面，本发明提供一种根据所述方法从鱼类的精液分离的PDRN及利用所述PDRN而制造的医药品或化妆品。
有益效果
根据本发明，在从鱼类的精液分离DNA的过程中，代替诸如苯酚或三氯甲烷的有机溶剂，而使用蛋白质分解酶及饱和氯化钠，将获取的DNA用诸如超声波分解法等物理方法破碎并进行低分子量化，从而能够以高效、低费用且无毒性的100％安全、环保的方法来提供PDRN。
另外，根据本发明，能够提供高纯度的PDRN，所述PDRN能够用于医药品及化妆品等多样的用途。
附图说明
图1比较图示了根据实施例准备的虹鳟鱼的精液照片(A)及对所述精液进行第1次离心分离后的照片(B)，以及对第1次离心分离后获取的沉淀物进行冻结干燥的照片(C)。
图2比较图示了根据实施例获得的DNA(A)及PDRN(B)的照片。
图3比较图示了根据实施例(A)及对比例(B)准备的DNA的电泳实验结果。
图4比较图示了根据实施例获得的DNA(A)及PDRN(B)的电泳实验结果。
图5是显示根据实施例获得的DNA的不同波长下吸光度的图表。
图6是显示根据实施例获得的PDRN的不同波长下吸光度的图表。
图7是显示根据实施例获得的PDRN的FT-IR分析结果的图表。
具体实施方式
本发明涉及一种从鱼类的精液分离PDRN的方法、根据所述方法而获得的PDRN及其用途，所述方法包括：(1)将鱼类的精液进行第1次离心分离，获取包含精液细胞的沉淀物的步骤；(2)将所述沉淀物添加于细胞溶解缓冲液，制造细胞溶解物后，使所述细胞溶解物消化的步骤；(3)将经过所述(2)步骤的细胞溶解物进行第2次离心分离，获取上清液的步骤；(4)在根据所述(3)步骤而获取的上清液中投入饱和氯化钠水溶液并混合后，进行第3次离心分离，获取包含DNA的上清液的步骤；(5)在根据所述(4)步骤而获取的上清液中投入乙醇而使DNA沉淀后，收集所述沉淀的DNA，并进行干燥的步骤；及(6)将根据所述(5)步骤而获得的DNA用物理方法进行破碎，获取多脱氧核糖核苷酸(polydeoxyribonucleotide；PDRN)的步骤。
本发明中使用的鱼类可以为鲑鱼科鱼类。例如，作为所述鲑鱼科鱼类，可以使用鲑鱼、鳟鱼、虹鳟鱼等，更优选地，可以使用虹鳟鱼。
所述虹鳟鱼作为属于鲑鱼目鲑鱼科的淡水鱼，不同于作为回游性鱼种的鲑鱼及鳟鱼，基本上在淡水中度过一生的河流留滞型鱼，因而具有在国内容易调配的优点。另外，当利用虹鳟鱼时，与现有的从鲑鱼或鳟鱼提取DNA的方法相比，仅用少量的化学物质便能够从精液分离DNA，在DNA分离过程中也不使用有机溶剂，因而是优选的。而且，从虹鳟鱼分离的DNA可以借助于诸如超声波分解的物理方法而容易地从PDRN分离，能够以100％安全、环保的方法获得高纯度的PDRN。
下面按步骤说明根据本发明的一种实施形态的从鱼类的精液分离PDRN的方法。
(1)第1次离心分离步骤
该步骤是将鱼类的精液进行第1次离心分离，获取包含精液细胞的沉淀物的步骤。
具体而言，如果查看获取包含所述精液细胞的沉淀物的过程的一个示例，该过程可以包括：(i)从去除了血液及异物的鱼类的成熟的鱼收集精液的步骤；及(ii)将所述精液以3,000～4,000rpm速度在2～6℃下第1次离心分离10～60分钟，获取包含精液细胞的沉淀物的步骤；(ⅲ)将所述沉淀物在-80℃的温度下冷冻存储的步骤；然后，可以经过解冻过程进行下述的(2)步骤。
如果查看获取包含所述精液细胞的沉淀物的另一示例，先采取并立即冷冻存储根据所述(i)而收集的精液，然后解冻后经过如所述(ii)记载的第1次离心分离过程，可以获取包含精液细胞的沉淀物，在该情况下获取的沉淀物可以直接进入下述(2)步骤。
此时，所述沉淀物或精液的冷冻可以是利用了液态氮的急速冷冻，优选地，它们的解冻在冰上慢慢地进行。而且，所述第1次离心分离速度和时间可以因精液的容量而不同。
另一方面，在图1中图示了虹鳟鱼的精液照片(A)及将所述精液进行第1次离心分离后的照片(B)，如果查看所述图1的(B)，第1次离心分离后，在上部确认了透明的上清液，在下部观察到包含精液细胞的沉淀物。而且，图1的(C)图示了将所述沉淀物进行冻结干燥后的照片。
在该步骤中，丢弃所述第1次离心分离后上清液，获取沉淀物并进入下个步骤。
(2)细胞溶解物制造及消化步骤
该步骤是将根据所述(1)步骤而获得的沉淀物添加于细胞溶解缓冲液并制造细胞溶解物后，使所述细胞溶解物消化的步骤。
所述细胞溶解缓冲液是用于溶解所述精液细胞为目的的液体，可以使用选自由Tris-HCl、NaCl及Na2EDTA(ethylene diamine tetra acetic acid disodium salt)组成的组中的某一种或两种以上，优选地，可以包括调节精液细胞溶解物的酸性和渗透性的Tris-HCL和Na2EDTA。其中，所谓细胞溶解(cell lysis)，是指因细胞分解而破裂细胞膜的同时，露出细胞内容物的现象。
另外，使所述细胞溶解物消化的过程，是破坏细胞和核膜而帮助DNA能够从精液细胞分离的过程。所述细胞溶解物的消化可以使用十二烷基硫酸钠溶液、Na2EDTA溶液及蛋白水解酶K(Proteinase K)溶液的混合溶液来执行。在所述精液细胞中存在无数多被污染的蛋白质，作为丝氨酸蛋白质分解酶的所述蛋白水解酶K在从所述精液细胞分离DNA的过程中用于消化所述被污染的蛋白质成分而使用。另外，在细胞内存在核酸酶(分解核酸的酶)的可能性，而通过添加所述蛋白水解酶K，对这种核酸酶进行分解，保护核酸不受核酸酶的攻击。而且，蛋白水解酶K在广泛的pH范围内显示出稳定性。因此，当存在使蛋白质变性的化学物质时蛋白水解酶K活跃地进行作用，因而可以说非常适合本过程。即，蛋白水解酶K在分离未损伤的DNA方面，可以说非常有用。
优选地，这种细胞溶解物的消化在30℃～39℃下执行12～20小时，更优选地，可以在37℃下执行18小时。在超出所述温度及时间范围的情况下，蛋白水解酶K的活性下降，存在细胞溶解物消化过程无法顺利执行的忧虑。
(3)第2次离心分离步骤
该步骤是将经过所述(2)步骤的细胞溶解物进行第2次离心分离，获取上清液的步骤。
所述第2次离心分离速度、温度及时间可以根据所述细胞溶解物的容量而不同地应用，但优选地可以以11,000～15,000rpm的速度，在室温(room temperature)下执行30分钟～2小时。通过经过这种第2次离心分离过程，细胞溶解物内的DNA包含于上清液中，蛋白质下沉到下部的沉淀物。此时，丢弃所述沉淀物，获取上清液，进入下个步骤。
(4)第3次离心分离步骤
该步骤是在根据所述(3)步骤而获取的上清液中投入饱和氯化钠水溶液并混合后，进行第3次离心分离，获取包含DNA的上清液的步骤。
所述饱和氯化钠水溶液用于通过脱水和沉淀而析出所述上清液中包含的细胞性蛋白质，去除所述(2)步骤及(3)步骤中未去除而剩有的蛋白质，提高DNA的纯度。另外，当如本过程所示利用饱和氯化钠水溶液时，可以以低廉的费用，迅速而安全地谋求蛋白质的沉淀作用。所述上清液与饱和氯化钠水溶液的投入比率可以为2:1至1:2的重量比，优选地，可以为1:1的重量比。
所述第3次离心分离的速度、温度及时间可以根据容量而不同地应用，但优选地，所述第3次离心分离可以以11,000～15,000rpm的速度，在室温下执行30分钟～2小时。经过这种第3次离心分离过程后，获取含有遗传基因DNA的上清液，进入下个步骤。
(5)DNA的沉淀及干燥步骤
该步骤是在根据所述(4)步骤而获取的上清液中投入乙醇而使DNA沉淀后，收集所述沉淀的DNA并进行干燥的步骤。所述干燥可以使用空气干燥方式，借助于所述干燥，从所述DNA去除乙醇。
如此获得的DNA的纯度(260/280比率)可以为1.8～2.2，更优选地，可以为1.8～1.9。从所述“260/280比率”可以掌握获取的DNA的蛋白质污染度，当包含于所述“260/280比率”范围时，蛋白质污染度低，可以说是高纯度的DNA。此时，所述DNA的纯度为利用分光光度计测量的值，表示将在260nm下测量的吸光度值除以在280nm下测量的吸光度值的值。
所述干燥的DNA在溶解于去离子水后，在50～70℃下溶解2～6小时，接着，在30～40℃下再溶解3～9小时后，可以被冻结干燥。
(6)获取PDRN的步骤
该步骤是用物理方法破碎根据所述(5)步骤而获得的DNA，获取PDRN的步骤。
所述物理方法可以为超声波分解法，优选地，所述获取PDRN步骤可以包括：(i)将根据所述(5)步骤而获得的DNA溶解于选自由脱盐水、食盐水(0.9％NaCl)及磷酸盐缓冲食盐水组成的组中的某一种或两种以上的混合溶液，制造DNA溶液的步骤；及(ii)将所述DNA溶液进行超声波分解的步骤。
此时，所述根据(i)步骤而获得的DNA溶液的浓度可以为2～10mg/mL，如此制造的DNA溶液可以在1～5℃下培养2～4小时后，进入所述(ii)步骤。
另外，在所述(ii)步骤中，当超声波分解以所述DNA溶液10mg/mL为基准时，可以在1～5℃下执行5～30分钟。
另一方面，本发明的从鱼类的精液分离PDRN的方法可以还包括：将根据所述(6)步骤而获得的PDRN通过精密过滤膜进行过滤的步骤；将通过所述过滤膜的PDRN进行冻结干燥的步骤；及将所述冻结干燥的PDRN溶解于食盐水的步骤。此时，作为所述精密过滤膜，可以使用具有0.1～0.5μm大小孔隙的过滤膜。而且，所述食盐水中溶解的PDRN可以以该状态直接用于医药品或化妆品用途。
另外，本发明提供根据所述分离方法从鱼类的精液分离的PDRN。由此提供的PDRN可以用于包括医药品或化妆品等的多样用途。
下面通过列举实施例更详细说明本发明，但本发明并非限定于实施例。
实施例
.<精液准备工序>
首先，为了防止被小便和排泄物污染而准备擦拭干净的虹鳟鱼的成熟的鱼，在所述虹鳟鱼的腹部施加轻柔的压力，采集精液。接着，将采集的所述精液在4℃、3500rpm下进行第1次离心分离30分钟，获取包含精液细胞的沉淀物后，将所述沉淀物在-80℃下冷冻保管。在图1中，图示了从所述鳟鱼采集的精液(A)及第1次离心分离后的精液(B)照片，如果查看所述(B)，则可以确认包含精液细胞的沉淀物与上清液分离的样态。
将所述冷冻保管的沉淀物在冰中解冻2小时后，进入作为下个步骤的DNA分离工序。
<从虹鳟鱼精液分离DNA的工序>
将所述解冻的沉淀物100mg(鲜重)投入盛有细胞溶解缓冲剂(10mM Tris-HCl,400nm NaCl,2mM Na2EDTA(pH 8.2))12mL的50mL容量的离心分离器管，制作了细胞溶解物。接着，所述细胞溶解物的消化，在1.5％的十二烷基硫酸钠与Na2EDTA溶液内使用蛋白水解酶K溶液(2mg/2mL)，在37℃下进行18小时。
将完成所述消化过程的细胞溶解物以13,000rpm在室温下进行第2次离心分离1小时，获取其上清液。
将借助于所述第2次离心分离而获取的上清液10mL投入另外的离心分离管，在其中添加饱和氯化钠(6M)10mL，搅拌5分钟来进行混合。将这样混合的混合物以13,000rpm速度，在室温下进行第3次离心分离1小时，获取其上清液。
将借助于所述第3次离心分离而获取的上清液10mL投入新的50mL容量的圆锥形离心分离管，在其中添加纯乙醇10mL进行混合。此时，所述离心分离管倒置，直到DNA从所述上清液沉淀时为止。用移液器收集作为结果物而获得的DNA链后，为了去除所述收集的DNA中剩有的乙醇而进行了空气干燥。如此获得的干燥DNA图示于图2的(A)中。
<从虹鳟鱼精液分离的DNA的破碎工序>
将干燥的所述DNA 50mg溶解于食盐水(0.9％NaCl)5mL，制造了DNA溶液。此时，DNA溶液在4℃下，按每5分钟间隔，打漩(vertexing)所述溶液，培养3小时。
接着，将经过培养过程的DNA溶液在4℃下，利用超声波分解仪(Q700,QSONICAUSA)，进行超声波分解10分钟，破碎所述溶液内的DNA。然后，将破碎的DNA通过具有0.2μm空隙大小的精密过滤膜进行过滤后，进行冻结干燥。于是，获得了作为获得物的干燥PDRN。如此获得的PDRN的照片图示于图2的(B)中。
对比例
通过购买并准备了鲑鱼DNA(Deoxyribonucleic acid sodium salt from salmontestes D1626,Sigma-Aldrich)。
<评价方法>
1.琼脂糖凝胶电泳实验
为了确认DNA及PDRN的大小(分子量)，利用相对于它们的浓度为1％的琼脂糖凝胶实施了电泳实验。
首先，将根据所述实施例及对比例而准备的干燥DNA分别投入至去离子水中，加热到60℃，溶解4小时后，在37℃下再溶解4小时，制造了DNA溶液，利用所述DNA溶液进行电泳实验，将其结果图示于图3中。
如果查看所述图3，可以确认，根据本发明的实施例的从虹鳟鱼分离的DNA(A)具有与从市场上购买的鲑鱼的DNA(B)类似的DNA大小(分子量)。
接着，以与上述相同的方法，利用根据实施例而制造的干燥DNA，制造DNA溶液，将根据实施例而制造的干燥PDRN溶解于食盐水(0.9％NaCl)，制造了PDRN溶液，利用这些溶液进行了电泳实验，将其结果图示于图4中。
如果查看所述图4，就PNRN而言，显示其分子量比DNA显著地低，从而可知借助于超声波粉碎，DNA被破碎而获得了低分子量化的PDRN。
2.利用分光光度法的DNA及PDRN分析
根据所述评价方法1.，将从实施例的DNA及PDRN制造的DNA溶液及PDRN溶液盛装于微量比色皿(cuvette)，利用分光光度计(OPTIZEN NANOHANDLER,Optizon Bio Korea)，测量了不同波长下的吸光度，在图5及6中图示了显示其结果的图表。
而且，利用通过所述图表而获得的值，计算了DNA及PDRN的纯度。所述纯度是以根据下述式(1)计算的值来进行评价的，其结果值记载于图5及6中。
纯度＝260nm下的吸光度/280nm下的吸光度…(1)
如果查看图5，DNA的纯度(260/280)计算为1.86，如果查看图6，PDRN的纯度(260/280)计算为1.88，可以确认两者均表现出高纯度。这证明了实施例可以提供蛋白质污染度低的高纯度DNA及PDRN。
此外，对根据实施例从虹鳟鱼分离的PDRN实施紫外线分光(Fourier TransformInfrared Spectroscopy；FT-IR)分析，在图7中图示了显示其结果的图表。
以上本发明中公开的实施例并非用于限定本发明的技术思想而是用于说明本发明的技术思想，本发明的权利范围应根据下面的权利要求书进行解释，在与其同等范围内的所有技术思想应解释为包含于本发明的权利范围。

Claims (17)

1.一种从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，包括：
(1)将鱼类的精液进行第1次离心分离，获取包含精液细胞的沉淀物的步骤；
(2)将所述沉淀物添加于细胞溶解缓冲液，制造细胞溶解物后，使所述细胞溶解物消化的步骤；
(3)将经过所述(2)步骤的细胞溶解物进行第2次离心分离，获取上清液的步骤；
(4)在根据所述(3)步骤而获取的上清液中投入饱和氯化钠水溶液并混合后，进行第3次离心分离，获取包含DNA的上清液的步骤；
(5)在根据所述(4)步骤而获取的上清液中投入乙醇并使DNA沉淀后，收集所述沉淀的DNA并进行干燥的步骤；及
(6)用物理方法破碎根据所述(5)步骤而获得的DNA，获取PDRN的步骤。
2.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
所述鱼类为鲑鱼科鱼类。
3.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
所述鱼类为虹鳟鱼。
4.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
在所述(2)步骤中，所述细胞溶解缓冲液包括选自由Tris-HCl、NaCl及Na2EDTA组成的组中的某一种或两种以上。
5.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
在所述(2)步骤中，所述细胞溶解物的消化使用十二烷基硫酸钠溶液、Na2EDTA溶液及蛋白水解酶K溶液的混合溶液来执行。
6.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
在所述(2)步骤中，所述细胞溶解物的消化在30～39℃下执行12～20小时。
7.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
在所述(4)步骤中，所述上清液与所述饱和氯化钠水溶液的投入比率为2:1至1:2的重量比。
8.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
借助于分光光度计测量的根据所述(5)步骤而获取的DNA的纯度(260nm/280nm)为1.8～2.2。
9.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
还包括：将在所述(5)步骤中获得的干燥DNA溶解于去离子水后进行冻结干燥的步骤。
10.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
在所述(6)步骤中，所述物理方法为超声波分解法。
11.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
所述(6)步骤包括：
(i)将根据所述(5)步骤而获得的DNA溶解于选自由脱盐水、食盐水(0.9％NaCl)及磷酸盐缓冲食盐水组成的组中的某一种或两种以上的混合溶液，制造DNA溶液的步骤；及
(ii)将所述DNA溶液进行超声波分解的步骤。
12.根据权利要求11所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
所述DNA溶液的浓度为2～10mg/mL。
13.根据权利要求11所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
根据所述(i)步骤而制造的DNA溶液是在1～5℃下培养2～4小时后，进入所述(ii)步骤。
14.根据权利要求11所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，
所述超声波分解在以所述DNA溶液的浓度10mg/mL为基准时，在1～5℃下执行5～30分钟。
15.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，还包括：
将根据所述(6)步骤而获得的PDRN通过精密过滤膜进行过滤的步骤；
将通过所述过滤膜的PDRN进行冻结干燥的步骤；及
将所述冻结干燥的PDRN溶解于食盐水的步骤。
16.一种根据权利要求1至15中任一项所述的方法从鱼类的精液分离的PDRN。
17.一种利用权利要求16所述的PDRN制造的医药品或化妆品。
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