CN107281283A - 一种具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，它由以下方法制备得到：取天葵子，粉碎，加入药材粉末6～12倍量的乙醇超声提取，离心，取上层液，回收至无醇味，加入HCl超声溶解，离心，得酸水液，调中性得到上样液，浓缩上样液，然后用NaOH调pH值为8～9后上大孔吸附树脂，酸性乙醇洗脱，然后用阳离子交换树脂吸附，碱水洗脱。本发明对天葵子化学成分进行深入系统研究，筛选出最佳的制备生物碱精制部位的方法，制备方法可操作性强，尤其是采用最佳的pH值进行提取和大孔树脂和阳离子交换树脂联用分离，得到的生物碱精制部位有效成分含量高达90％以上，抗肿瘤活性好，且工艺稳定，适合工业化大生产。

Description

一种具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱及其应用
技术领域
本发明涉及一种中药，具体涉及一种具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱及其应用。
背景技术
肿瘤已成为21世纪威胁人类生存的头号杀手，中国为世界癌症高发国家之一，并且每年呈快速增长趋势。临床上目前治疗肿瘤的药物主要有化学药品，但由于化疗药物毒性大，在杀死肿瘤细胞的同时也无选择性的杀死白细胞、淋巴细胞等人体自身免疫细胞，导致病人常常由于因自身免疫能力低下并发感染，患者使用不良反应大，存活率低，且费用高。
中医药在治疗肿瘤方面具有独特的优势，以中药为代表的天然类药物具有毒副作用小、作用靶点多样、耐受性好等特点，在治疗肿瘤方面愈来愈受到重视。
天葵子味甘，微苦、微辛，性寒，小毒。归肝、脾、膀胱经。目前报道的主要成分有生物碱、香豆精类和内酯等化学成分，具有清热，解毒，消肿，散结，利尿功效。用于痈肿，瘰疬，疔疮，淋浊，带下，肺虚咳嗽，疝气，癫痫，小儿惊风，痔疮，跌打损伤等。
发明内容
发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，对天葵子化学成分进行深入研究，筛选出最佳的制备生物碱精制部位的工艺方法，制备得到的天葵子总生物碱有效成分含量高，抗肿瘤活性强，不良反应低，安全性好，且对多种肿瘤具有明显活性，取得了非常好的预料不到的技术效果。
技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
一种具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，其特征在于，它由以下方法制备得到：
取天葵子，粉碎，加入药材粉末6～12倍量的乙醇超声提取1～3次，每次0.5～2小时，离心，取上层液，回收至无醇味，加入HCl超声溶解，离心，得酸水液，调中性得到上样液，浓缩上样液，然后用NaOH调pH值为8～9后上大孔吸附树脂，洗脱再通过离子交换树脂分离，得到天葵子精制生物碱。
作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，它由以下方法制备得到：
取天葵子，粉碎，加入药材粉末6倍量的体积浓度50％乙醇超声提取3次，每次1小时，离心，取上层液，回收至无醇味，加入体积浓度为0.5％的HCl超声溶解，离心，得酸水液，调中性得到上样液，浓缩上样液，然后用2mol/L的NaOH调pH值为9后上大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用体积浓度为20～40％乙醇洗脱，最后用酸性乙醇液洗脱，收集酸性乙醇洗脱液，然后上阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，然后用pH值为9～11的碱水液洗脱，收集碱水洗脱洗脱液，浓缩得到天葵子精制生物碱。
作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，所述的酸性乙醇液为含有体积浓度20～30％盐酸的乙醇溶液；所述的pH值为9～11的碱水液为pH值为9～11的的氢氧化钠或碳酸钠溶液。
本发明所述的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱在制备抗肿瘤药物中的应用。
作为优选方案，本发明所述的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱在制备抗前列腺癌、肝癌，肺癌，胃癌，结肠癌，宫颈癌，乳腺癌或脑癌药物中的应用。
一种药物制剂，它包括权利要求1或2所述的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱；制剂包括口服液、胶囊剂、丸剂、片剂或颗粒剂等剂型。
有益效果：本发明提供的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱和现有技术相比具有以下优点：
本发明对天葵子化学成分进行深入系统研究，筛选出最佳的制备生物碱精制部位的工艺方法，提供的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱的制备方法，可操作性强，尤其是采用最佳的pH值进行提取和分离，得到的生物碱精制部位有效成分含量高，杂质少，且工艺稳定，适合工业化大生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施例1
具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，它由以下方法制备得到：
取天葵子，粉碎，加入药材粉末6倍量的体积浓度50％乙醇超声提取3次，每次1小时，离心，取上层液，回收至无醇味，加入体积浓度为0.5％的HCl超声溶解，离心，得酸水液，调中性得到上样液，浓缩上样液，然后用2mol/L的NaOH调pH值为9后上D101型大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用体积浓度为30％乙醇洗脱，最后用体积浓度30％盐酸的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，然后上阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，然后用pH值为11的氢氧化钠水液洗脱，收集碱水洗脱洗脱液，浓缩得到天葵子精制生物碱。碘化铋钾显色红色，滴定分析检测总生物碱含量91.2％。
取天葵子精制生物碱加入乳糖，玉米淀粉混合均匀，加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，整粒，然后压片制成片剂。
实施例2
具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，它由以下方法制备得到：
取天葵子，粉碎，加入药材粉末12倍量的体积浓度80％乙醇超声提取2次，每次1小时，离心，取上层液，回收至无醇味，加入体积浓度为1％的HCl超声溶解，离心，得酸水液，调中性得到上样液，浓缩上样液，然后用2mol/L的NaOH调pH值为8后上D101型大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用体积浓度为30％乙醇洗脱，最后用体积浓度20％盐酸的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，然后上强酸性阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，然后用pH值为10的碳酸钠水液洗脱，收集碱水洗脱洗脱液，浓缩得到天葵子精制生物碱。碘化铋钾显色红色，滴定分析检测总生物碱含量90.5％。
取天葵子精制生物碱加入乳糖，玉米淀粉混合均匀，造粒后，灌装胶囊，得到胶囊剂。对比例1
具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，它由以下方法制备得到：
取天葵子，粉碎，加入药材粉末6倍量的体积浓度50％乙醇超声提取3次，每次1小时，离心，取上层液，回收至无醇味，加入体积浓度为0.5％的HCl超声溶解，离心，得酸水液，调中性得到上样液，浓缩上样液，然后用2mol/L的NaOH调pH值为9后上D101大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用体积浓度为30％乙醇洗脱，最后用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，碘化铋钾显色红色，滴定分析检测总生物碱含量65％。
对比例2
具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，它由以下方法制备得到：
取天葵子，粉碎，加入药材粉末6倍量的体积浓度50％乙醇超声提取3次，每次1小时，离心，取上层液，回收至无醇味，加入体积浓度为0.5％的HCl超声溶解，离心，得酸水液，调中性得到上样液，浓缩上样液，然后用2mol/L的NaOH调pH值为9后上D101大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用体积浓度为30％乙醇洗脱，最后用纯乙醇溶液洗脱，收集纯乙醇洗脱液，然后上强酸性阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，然后用pH值为10的氢氧化钠水液洗脱，收集碱水洗脱洗脱液，浓缩得到天葵子精制生物碱。碘化铋钾显色红色，滴定分析检测总生物碱含量82％。
实施例3抗肿瘤药理实验
(1)对裸鼠体内人肝癌(SMMC-7451)细胞的抑制作用
实验方法：制备SMMC-7451细胞悬液，调整细胞浓度，每鼠右前腋皮下接种SMMC-7451细胞5×106个/0.2ml，共接种20只，随机分成治疗组(本发明提供的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，实施例1，灌胃给药，2g/kg)和空白组(等容量生理盐水)，每组10只，24小时后，开始用药，每天一次，连续30天，停药后，处死动物，观察肿瘤生长情况并剖取瘤组织称重，具体实验结果见表1。抑制率＝(治疗组瘤重-空白组瘤重)/空白组瘤重×100％
表1 对裸鼠体内SMMC-7451细胞的抑制作用
(2)对裸鼠体内人胃癌细胞(MGC-803)细胞的抑制作用
实验方法：将细胞培养瓶内贴壁生长的MGC-803细胞，制备成细胞悬液，调整细胞浓度，镜下计数，于每鼠右前肢腋部皮下接种5×106个MGC-803细胞，共接种20只，将其随机分成治疗组(本发明提供的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，实施例1，灌胃给药2g/kg)，和空白组(等容量生理盐水)，每组10只。接种48小时后，用药，连续30天，停药后，处死动物观察MGC-803细胞在裸鼠体内生长情况并称瘤重，抑制率＝(治疗组瘤重-空白组瘤重)/空白组瘤重×100％。具体实验结果见表2。
表2 对裸鼠体内MGC-803细胞的抑制作用
(3)对裸鼠体内肺癌(MCF-7)细胞的抑制作用
实验方法：制备肺癌(MCF-7)细胞悬液，调整细胞浓度，每鼠右前腋皮下接种MCF-7细胞5×106个/0.2ml，共接种20只，随机分成治疗组(本发明提供的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，实施例1，灌胃给药，2g/kg)和空白组(等容量生理盐水)，每组10只，24小时后，开始用药，每天一次，连续24天，停药后，处死动物，观察肿瘤生长情况并剖取瘤组织称重，具体实验结果见表3。
表4 对裸鼠体内MCF-7细胞的抑制作用
本发明通过大量实验筛选出最佳的提取分离流程，大孔树脂和离子交换树脂联用，并采用优选的洗脱溶液洗脱，尤其是在打孔树脂洗脱时，创造性的采用酸性乙醇洗脱，可最大效率的洗脱生物碱成分，可得到高纯度的生物碱精制部位，整个工艺设计合理，可实现工业化生产，取得了非常好的预料到的技术效果。
由以上实验结果表明：本发明提供的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱对人胃癌，肝癌，和肺癌裸鼠体内移植具有明显的抑制作用，表明本发明提供的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱体内具有很强的抗人恶性肿瘤的作用，可以用于恶性肿瘤疾病的治疗。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，其特征在于，它由以下方法制备得到：
取天葵子，粉碎，加入药材粉末6～12倍量的乙醇超声提取1～3次，每次0.5～2小时，离心，取上层液，回收至无醇味，加入HCl超声溶解，离心，得酸水液，调中性得到上样液，浓缩上样液，然后用NaOH调pH值为8～9后上大孔吸附树脂，洗脱再通过离子交换树脂分离，得到天葵子精制生物碱。
2.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，其特征在于，它由以下方法制备得到：
取天葵子，粉碎，加入药材粉末6倍量的体积浓度50％乙醇超声提取3次，每次1小时，离心，取上层液，回收至无醇味，加入体积浓度为0.5％的HCl超声溶解，离心，得酸水液，调中性得到上样液，浓缩上样液，然后用2mol/L的NaOH调pH值为9后上大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用体积浓度为20～40％乙醇洗脱，最后用酸性乙醇液洗脱，收集酸性乙醇洗脱液，然后上阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，然后用pH值为9～11的碱水液洗脱，收集碱水洗脱洗脱液，浓缩得到天葵子精制生物碱。
3.根据权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱，其特征在于，所述的酸性乙醇液为含有体积浓度20～30％盐酸的乙醇溶液；所述的pH值为9～11的碱水液为pH值为9～11的的氢氧化钠或碳酸钠溶液。
4.权利要求1至3任一项所述的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱在制备抗肿瘤药物中的应用。
5.权利要求1至3任一项所述的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱在制备抗前列腺癌、肝癌，肺癌，胃癌，结肠癌，宫颈癌，乳腺癌或脑癌药物中的应用。
6.一种药物制剂，其特征在于，它包括权利要求1至3任一项所述的具有抗肿瘤活性的天葵子精制生物碱；制剂包括口服液、胶囊剂、丸剂、片剂或颗粒剂。
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