CN107278893A - 一种苹果砧木sh40快速繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于苹果苗木栽培技术领域，公开了一种苹果砧木SH40快速繁殖的方法，通过采用培养基为MS+6‑BA0.6mg/L+IBA0.1mg/L+PVP500mg/L的培养基初代培养、采用MS+6‑BA0.8mg/L+IBA0.1mg/L处理的继代培养、采用生根培养基1/2MS+IBA1.3mg/L+褪黑素0.03mg/L的生根培养、然后用纯锯末的炼苗移栽实现了苹果砧木快速的繁殖，不仅保证了较高的成活率，而且也保留了砧木的优良特性，为苹果产业的发展和进一步扩大提供了便捷的方法和途径。
Description
技术领域
本发明属于苹果苗木栽培技术领域，尤其涉及一种苹果砧木SH40快速繁殖的方法。
背景技术
SH系是由山西省农业科学院果树研究所采用杂交育种方法(国光×河南海棠)经过16年(1978-1993)研究选育而成。经多年的系统观察鉴定，其中SH40、SH6、SH1三个砧号的综合经济性状超过了国外的M、MM、P系等苹果矮化砧，在全国13个省试推广栽培表现性状突出、稳定。目前，我国的苹果生产模式由传统低效郁闭果园模式逐步的转变为现代化矮砧密植集约高效生产栽培模式、并由世界苹果生产大国逐步的转变为苹果产业强国。苹果苗木是苹果生产栽培的基础，苗木的质量直接影响着苹果树体的生长、开花、结果以及抗逆性、抗病能力和寿命。苗木受到病毒的侵染之后，树体正常的细胞增殖，就会受到破坏，严重的话会影响果树的生长势、果实品质和产量等正常生理机制，这成为中国苹果产业发展的隐患。今后一段时期是我国苹果大规模更新换代的关键时期，如何从苗木方面提供支持和保障便成为一个值得高度重视的问题。
综上所述，现有技术存在的问题是：
1.炼苗移栽后期矮化砧的适应性较差苹果矮化砧木SH系(如SH38，SH40)根系分布浅，这就要求较好的肥水条件。
2.移栽大田后，苹果矮化砧木SH40易生长不良早期生长过弱，不易形成产量，结果后疏花疏果不到位，易出现大小年，因而不能表现出矮化砧木密植的优势。
3.建立苹果矮化砧木组培苗快繁体系时间长、成本高，成本增多，加大了建园投资，会影响到一些果农的应用。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种苹果砧木SH40快速繁殖的方法。
本发明是这样实现的，一种苹果砧木SH40快速繁殖的方法，所述苹果砧木SH40快速繁殖的方法通过采用培养基为MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.1mg/L+PVP500mg/L的培养基初代培养；采用MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.1mg/L处理的继代培养；采用生根培养基1/2MS+IBA1.3mg/L+褪黑素0.03mg/L的生根培养；然后用纯锯末的炼苗移栽实现苹果砧木快速的繁殖。
进一步，所述苹果砧木SH40快速繁殖的方法包括以下步骤：
步骤一，以苹果砧木SH40为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置26℃的温室内进行水培，水培为每升水含有5g蔗糖，每隔5d换一次水并剪掉旧剪口；
步骤二，用超声波清洗机清洗3min，再用无菌水冲洗3-5次，将处理好的嫩芽接种到聚乙烯毗咯烷酮500mg/L的培养基中进行培养，每升培养基附加30g蔗糖，7g琼脂；
步骤三，将获得的无菌外植体接种到MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.1mg/L，光照2000lux的培养基中进行继代培养，SH40的最优培养处理为M5处理，即每升附加30g蔗糖，7g琼脂；
步骤四，选择继代培养获得的生长健壮，高度大于2.0cm的植株，生长时间为25天的芽子，接种于1/2MS+IBA1.3mg/L+褪黑素0.03mg/L生根培养基中进行生根培养；
步骤五，当组培苗根长度达到2cm后，移到室外遮阴炼苗10-12天，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗2-4天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为0.1％多菌灵溶液中浸泡5min，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗2-3次，然后用纯锯末移栽到的营养钵中。
进一步，所述步骤一中当水培的一年生枝条上的芽抽生为1.5-2.0cm时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗6-8h，用75％酒精处理30S，升汞处理7min。
进一步，所述步骤二中放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃条件下进行培养。
进一步，所述步骤四中每升加30g蔗糖，7g琼脂。
进一步，所述步骤五中移栽苗的管理方式为移栽后将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为0.1％多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用清水喷灌一次，保持基质湿润透气待生根苗抽生出新芽之后可移出遮阴网。
本发明的另一目的在于提供一种使用所述苹果砧木SH40快速繁殖的方法繁殖的苹果砧木SH40。
本发明的优点及积极效果为：通过采用培养基为MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.1mg/L+PVP500mg/L的培养基初代培养、采用MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.1mg/L处理的继代培养、采用生根培养基1/2MS+IBA1.3mg/L+褪黑素0.03mg/L的生根培养、然后用纯锯末的炼苗移栽实现了苹果砧木快速的繁殖，不仅保证了较高的成活率，而且也保留了砧木的优良特性，为苹果产业的发展和进一步扩大提供了便捷的方法和途径。本发明建立一种苹果砧木SH40快速繁殖的方法，对于生产优质矮化无病毒苗木，具有重要意义，市场前景广阔。
与现有技术相比的本发明的优势是：
(1)褪黑素与生长素IBA适宜的配比，有效促进组培苗生根，适应日后的大田生长。
(2)为大田提供健康的组培苗，再配合相应的管理技术，最大程度发挥矮化砧木密植的优势。
(3)建立初代时，采用75％酒精消毒30S+0.1％升汞消毒，保证了外植体的成活率，降低了污染率、褐化率，避免重复建立外植体，为整套快繁体系缩短时间与成本。
附图说明
图1是本发明实施例提供的苹果砧木SH40快速繁殖的方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的苹果砧木SH40快速繁殖的方法包括以下步骤：
S101：以苹果砧木SH40为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置26℃的温室内进行水培，水培为每升水含有5g蔗糖，每隔5d换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1.5-2.0cm时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗6-8h，用75％酒精处理30S，升汞处理7min；
S102：用超声波清洗机清洗3min，再用无菌水冲洗3-5次，将处理好的嫩芽接种到聚乙烯毗咯烷酮500mg/L的培养基中进行培养，每升培养基附加30g蔗糖，7g琼脂，然后放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃条件下进行培养；
S103：将获得的无菌外植体接种到MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.1mg/L，光照2000lux的培养基中进行继代培养，SH40的最优培养处理为M5处理，即每升附加30g蔗糖，7g琼脂；
S104：选择继代培养获得的生长健壮，高度大于2.0cm的植株，生长时间为25天的芽子，接种于1/2MS+IBA1.3mg/L+褪黑素0.03mg/L生根培养基中进行生根培养，每升加30g蔗糖，7g琼脂；
S105：当组培苗根长度达到2cm后，移到室外遮阴炼苗10-12天，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗2-4天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为0.1％多菌灵溶液中浸泡5min，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗2-3次，然后用纯锯末移栽到的营养钵中。
在步骤S105中，移栽苗的管理方式为移栽后将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为0.1％多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用清水喷灌一次，保持基质湿润透气待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮阴网。
本发明实施例提供的苹果砧木SH40快速繁殖的方法具体包括以下步骤：
步骤一，初代培养
苹果砧木SH40为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置26℃的温室内进行水培(每升水含有5g蔗糖)，每隔5d换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1.5-2.0cm时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗6-8h，用75％酒精处理8s，0.1％升汞处理7min，进行消毒处理后，用超声波清洗机清洗3min，再用无菌水冲洗3-5次，将处理好的嫩芽接种到到MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.1mg/L+不同浓度处理(0、0.3、0.6、0.7、1.0g/L)的聚乙烯毗咯烷酮(pvp)的培养基中进行培养，每升培养基附加30g蔗糖，8g琼脂，每个三角瓶接个3芽，每处理15瓶，然后放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃条件下进行培养，14d后分别调查污染率、褐化率、成活率，得出的SH40初代培养是最适宜的培养基为MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.1mg/L+PVP500mg/L(蔗糖30g/L，琼脂7g/L)；
步骤二，继代培养
将获得的无菌外植体接种到含有不同6-BA、琼脂、激素、光照的MS培养基中进行继代培养，每升附加30g蔗糖，8g琼脂，每瓶3株，每个处理10瓶，重复3次，SH38的最优培养处理为M5处理，即MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.1mg/L(琼脂7g/L，光照2000lux)；
步骤三，生根培养
选择继代培养获得的生长健壮，高度大于1.5cm的植株，生长时间为25天的芽子，接种于1/2MS+不同浓度IBA处理(0、0.6、0.8、1.2、1.4mg/L)的生根培养中进行生根培养，每瓶接种3个，每个处理10瓶，重复3次，得到SH40最适宜的生根培养基为1/2MS+IBA1.3mg/L+褪黑素0.03mg/L(蔗糖30g/L，琼脂7g/L)；
步骤四，炼苗移栽
当组培苗根长度达到2cm后，移到室外遮阴炼苗10-12天左右，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗2-4天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为0.1％多菌灵溶液中浸泡5min，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗2-3次，然后移栽到容量相同的不同基质处理(蛭石、纯锯末、田间土、3/5田间土+上部2/5蛭石、3/5田间土+2/5珍珠岩)的营养钵中，移栽苗的管理方式为将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为0.1％多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气。于14天后统计炼苗移栽成活率，得出用纯锯末炼苗移栽成活率最好。
下面结合实验和数据对本发明的应用效果作详细的说明。
1、参考表1不同浓度PVP处理对外植体生长的影响；
表1 不同浓度PVP处理对外植体生长的影响
| PVP浓度 | SH40 |
| 污染率/％ | 褐化率/％ | 成活率/％ | |
| 0 | 73.1±2.35a | 14.34±1.25bc | 18.34±1.34b |
| 300mg/L | 70.34±2.25a | 14.45±1.01bc | 17.35±1.12c |
| 500mg/L | 60.83±2.13c | 12.14±1.23c | 36.45±1.10a |
| 700mg/L | 81.05±2.44b | 20.56±1.02a | 15.45±1.13b |
| 1.0mg/L | 84.06±2.81a | 17.24±0.87b | 13.53±0.81c |
注同列数相同字母表示差异不显著(p>0.05)，不同字母表示差异显著(p<0.05)。数据为Mean±SE(平均值±标准误)；下同。
2、不同6-BA浓度处理对SH40继代培养的影响：
表2 不同6-BA浓度对SH40继代培养的影响
| 基本培养基 | 6-BA(mg/L) | IBA(mg/L) | 扩繁系数 |
| MS | 0 | 0.1 | 1.22±0.02c |
| MS | 0.3 | 0.1 | 1.06±0.03c |
| MS | 0.5 | 0.1 | 2.37±0.34b |
| MS | 0.6 | 0.1 | 5.01±0.08a |
| MS | 0.8 | 0.1 | 5.24±0.11a |
3、不同IBA浓度处理SH40生根的影响
表3 不同工浓度处理生根的影响
4、不同炼苗基质对生根苗生长的影响：
表4 不同栽培基质处理对移栽苗生长的影响
| 基质处理 | SH40移栽成活率 |
| 蛭石 | 72.50±4.20a |
| 纯锯末 | 81.00±3.33a |
| 田间土 | 66.50±3.42b |
| 3/5田间土+2/5蛭石 | 65.00±2.33a |
| 3/5田间土+2/5珍珠岩 | 71.00±3.45bc |
5、苹果砧木SH40增殖培养基的筛选
将的SH40组培苗接种在含有不同6-BA浓度激素的培养基(蔗糖浓度30g/L，琼脂浓度7g/L，PH5.8)中，观察不同浓度激素下的扩繁系数，玻璃化程度及生长情况，每个处理30瓶，每瓶3株。
6、琼脂浓度对SH40组培苗玻璃化的影响：
观察方法②的试验结果，根据组培苗的扩繁系数等综合表现，选出相对较好的继代培养基作为对照，研究琼脂浓度对组培苗玻璃化的影响。将SH40的组培苗接种含有不同的琼脂浓度(5.0、6.0、7.0g/L)，观察不同浓度琼脂下组培苗的分化系数、玻璃化程度及生长情况，每个处理30瓶，每瓶3株。
7、BA对SH40组培苗玻璃化的影响：
观察方法③的试验结果，根据组培苗的扩繁系数等综合表现，选出相对合适的继代培养基，并以此作对照，研究6-BA与不同浓度IBA配比对玻璃化程度的影响。观察组培苗的分化系数、玻璃化程度及生长情况，每个处理30瓶，每瓶3株。
8、结果与分析：
8.1、苹果砧木SH40增殖培养基的筛选：
如表5所示，M5处理培养基即MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.1mg/L中SH40组培苗扩繁系数最高为3.74，玻璃化率为31％。各个处理的玻璃化程度直接无显著差异，但都比较高。以扩繁系数为指标来筛选，则M5处理培养基是较好的增殖培养基。
表5 增殖培养基筛选结果统计
| 编号 | 培养基 | IBA(mg/L) | 6-BA(mg/L) | 扩繁系数 | 玻璃化程度 |
| M1 | MS | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M2 | MS | 0.1 | 0.3 | 2.68 | 0.31 |
| M3 | MS | 0.1 | 0.4 | 3.1 | 0.34 |
| M4 | MS | 0.1 | 0.5 | 3.32 | 0.37 |
| M5 | MS | 0.1 | 0.5 | 3.74 | 0.31 |
8.2、琼脂浓度对SH40组培苗玻璃化的影响
如表6所示，以处理培养基M5为对照得出，提高琼脂浓度对组培苗玻璃化有一定的抑制作用，并一定程度上提高了扩繁系数，但是差异无显著性差异。
综合考虑，M5处理培养基要优于其它处理，其扩繁系数为3.74，玻璃化率为31％。
表6 琼脂浓度对SH40组培苗的影响
8.3、IBA对SH40组培苗玻璃化的影响
以M12处理培养基为对照，研究不同IBA浓度对SH40组培苗玻璃化的影响，如表7所示，提高IBA浓度可以对扩繁系数有较大影响，处理M7、M9、M10与对照有显著差异，并且提高IBA浓度能够明显的降低玻璃化程度，但是扩繁系数却有所下降，综合考虑M7为较优培养基
表7 IBA对组培苗玻璃化的影响
| 编号 | 6-BA(mg/L) | IBA(mg/L) | 扩繁系数 | 玻璃化程度 |
| M7 | 0.8 | 0.1 | 3.8 | 0.302 |
| M9 | 0.8 | 0.3 | 3.61 | 0.301 |
| M10 | 0.8 | 0.5 | 3.53 | 0.235 |
| M11 | 0.8 | 0.7 | 3.43 | 0.231 |
| M12 | 0.8 | 0.9 | 3.42 | 0.229 |
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种苹果砧木SH40快速繁殖的方法，其特征在于，所述苹果砧木SH40快速繁殖的方法通过采用培养基为MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.1mg/L+PVP500mg/L的培养基初代培养；采用MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.1mg/L处理的继代培养；采用生根培养基1/2MS+IBA1.3mg/L+褪黑素0.03mg/L的生根培养；然后用纯锯末的炼苗移栽实现苹果砧木快速的繁殖。
2.如权利要求1所述的苹果砧木SH40快速繁殖的方法，其特征在于，所述苹果砧木SH40快速繁殖的方法包括以下步骤：
步骤一，以苹果砧木SH40为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置26℃的温室内进行水培，水培为每升水含有5g蔗糖，每隔5d换一次水并剪掉旧剪口；
步骤二，用超声波清洗机清洗3min，再用无菌水冲洗3-5次，将处理好的嫩芽接种到聚乙烯毗咯烷酮500mg/L的培养基中进行培养，每升培养基附加30g蔗糖，7g琼脂；
步骤三，将获得的无菌外植体接种到MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.1mg/L，光照2000lux的培养基中进行继代培养，SH40的最优培养处理为M5处理，即每升附加30g蔗糖，7g琼脂；
步骤四，选择继代培养获得的生长健壮，高度大于2.0cm的植株，生长时间为25天的芽子，接种于1/2MS+IBA1.3mg/L+褪黑素0.03mg/L生根培养基中进行生根培养；
步骤五，当组培苗根长度达到2cm后，移到室外遮阴炼苗10-12天，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗2-4天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为0.1％多菌灵溶液中浸泡5min，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗2-3次，然后用纯锯末移栽到的营养钵中。
3.如权利要求2所述的苹果砧木SH40快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤一中当水培的一年生枝条上的芽抽生为1.5-2.0cm时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗6-8h，用75％酒精处理30S，升汞处理7min。
4.如权利要求2所述的苹果砧木SH40快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤二中放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃条件下进行培养。
5.如权利要求2所述的苹果砧木SH40快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤四中每升加30g蔗糖，7g琼脂。
6.如权利要求2所述的苹果砧木SH40快速繁殖的方法，其特征在于，所述步骤五中移栽苗的管理方式为移栽后将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为0.1％多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用清水喷灌一次，保持基质湿润透气待生根苗抽生出新芽之后可移出遮阴网。
7.一种使用权利要求1～6任意一项所述苹果砧木SH40快速繁殖的方法繁殖的苹果砧木SH40。
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Inventor after: Han Mingyu Inventor after: Zhou Li Inventor after: Zhang Dong Inventor after: Fan Sheng Inventor after: Li Ke Inventor after: Lei Chao Inventor before: Han Mingyu Inventor before: Zhou Li Inventor before: Zhang Dong Inventor before: Li Ke Inventor before: Qi Siyan Inventor before: Liu Zhen Inventor before: Fan Sheng |
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Application publication date: 20171024 |
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