CN107271666A - 检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条及其制备方法和应用。该检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法包括如下步骤：样品垫和结合垫的预处理：将样品垫和结合垫均放入预处理液中浸湿，烘干处理后，制得预处理的样品垫和预处理的结合垫；制备含有彩色微球的结合垫；处理硝酸纤维素膜：分别将浓度为1mg/mL‑3mg/mL的前列腺特异性抗原抗体、浓度为0.5mg/mL‑1mg/mL的前列腺特异性抗原抗体及浓度为1mg/mL‑1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗体以一定的间隔涂布于硝酸纤维素膜，以在所述硝酸纤维素膜上形成依次间隔设置的第一检测带、第二检测带及质控带及试纸条的组装。该方法制备的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的检测灵敏度好、准确性高且能够进行定量分析。

Description

检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及前列腺特异性抗原检测技术领域，特别是涉及一种检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

前列腺特异性抗原(Prostate Specific Antigen，PSA)是由前列腺上皮细胞产生的一种蛋白分解酶。PSA主要存在于精液中，其在精浆的浓度约为0.3mg/mL-3mg/mL，远高于其在血清中的浓度。常用的是通过检测和分析PSA来实现对精液的鉴定。如法医通过检测和分析精液中的PSA对案件进行判断和定性。传统技术采用免疫胶体金方法制备的试剂条来检测和分析精液中的PSA。但是，该方法制备的试剂条的检测灵敏度差，准确性低且只能不能进行定量分析。

发明内容

基于此，有必要提供检测灵敏度好、准确性高且能够进行定量分析的一种检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条及其制备方法和应用。

一种检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法，包括如下步骤：

样品垫和结合垫的预处理：将样品垫和结合垫均放入预处理液中浸湿，烘干处理后，制得预处理的样品垫和预处理的结合垫，其中，所述预处理液的成分包括浓度为1g/L-5g/L的牛血清蛋白、浓度为5g/L-10g/L的海藻糖、浓度为2.5g/mL-10g/L的吐温20及浓度为0.01mol/L-0.05mol/L且pH值为7-8的磷酸盐缓冲液；

制备含有彩色微球的结合垫：将浓度为2mg/mL-4mg/mL的彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体以1μL/cm-2.5μL/cm的量涂布于所述预处理的结合垫，制得含有彩色微球的结合垫；

处理硝酸纤维素膜：分别将浓度为1mg/mL-3mg/mL的前列腺特异性抗原抗体、浓度为0.5mg/mL-1mg/mL的前列腺特异性抗原抗体及浓度为1mg/mL-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗体以一定的间隔涂布于硝酸纤维素膜，以在所述硝酸纤维素膜上形成依次间隔设置的第一检测带、第二检测带及质控带；

试纸条的组装：将所述预处理的样品垫、所述含有彩色微球的结合垫、已处理的所述硝酸纤维素膜及吸水纸依次粘贴于底板，即得所述检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条。

在其中一个实施例中，所述预处理液的成分包括浓度为3g/L-4g/L的牛血清蛋白、浓度为7g/L-8g/L的海藻糖、浓度为5g/L-8g/L的吐温20及浓度为0.03mol/L-0.04mol/L的磷酸盐缓冲液。通过控制预处理液的各成分的浓度范围，确保样品垫及结合垫具备较好的性能，进而提高检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的精确度。

在其中一个实施例中，所述烘干处理的温度为30-40℃，时间为4h-6h。

在其中一个实施例中，所述彩色微球的直径为150nm-300nm。通过控制彩色微球的直径，确保彩色微球均匀分散，进而提高了制备的试纸条的检测准确度。

在其中一个实施例中，所述预处理的样品垫、所述含有彩色微球的结合垫、已处理的所述硝酸纤维素反应膜及所述吸水纸沿所述底板的长度方向依次粘贴。

在其中一个实施例中，所述含有彩色微球的结合垫与所述第一检测带相临近，所述吸水纸与所述质控带相临近。

在其中一个实施例中，所述底板的材料是聚氯乙烯。

本发明通过将浓度为1mg/mL-3mg/mL的前列腺特异性抗原抗体、浓度为0.5mg/mL-1mg/mL的前列腺特异性抗原抗体及浓度为1mg/mL-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗体以一定的间隔分别涂布于硝酸纤维素膜，能够在所述硝酸纤维素膜上形成依次间隔设置的第一检测带、第二检测带及质控带。该第一检测带中前列腺特异性抗原抗体的浓度大于第二检测带中前列腺特异性抗原抗体的浓度，进而能够定量检测精液中前列腺特异性抗原的浓度。比如当精液中的前列腺特异性抗原的浓度为4ng/ml-200ng/ml时，第一检测带及质控带会发生颜色变化；当精液中的浓度大于200ng/ml时，第一检测带、第二检测带及质控带均会发生颜色变化。通过第一检测带及第二检测带的颜色变化能够直观准确地对精液中前列腺特异性抗原的浓度进行定量分析。而且本发明通过在硝酸纤维素膜依次设置第一检测带及第二检测带，两者共同配合减少了精液检测过程种的误差，提高了检测灵敏性及准确性。

此外，本发明还使用浓度为2mg/mL-4mg/mL的彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体以1μL/cm-2.5μL/cm的量涂布于所述预处理的结合垫，彩色微球与前列腺特异性抗原抗体能够进行化学键复合，彩色微球的免疫活性较稳定。彩色微球的颜色强度高，色彩艳丽，彩色色泽与背景色泽对比鲜明，便于检测结果的显示。并通过控制彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体的浓度及涂布量，确保结合垫上具备适量的彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体，进一步提高了检测灵敏性及准确度。

此外，还有必要提供一种检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条。

一种检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条，由上述测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法制备而成。

所述检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条包括底板和依次粘贴于所述底板的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水纸，所述样品垫上涂布有彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体，所述硝酸纤维素膜依次设置有浓度为1mg/mL-3mg/mL的前列腺特异性抗原抗体形成的第一检测带、浓度为0.5mg/mL-1mg/mL的前列腺特异性抗原抗体形成的第二检测带及浓度为1mg/mL-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗体形成的质控带。

在其中一个实施例中，所述第一检测带、所述第二检测带及所述质控带依次平行设置。

本发明的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的使用方便，检测灵敏度好、准确性高且能够进行定量分析。

此外，还有必要提供一种检测精液中前列腺特异性抗原的方法

一种检测精液中前列腺特异性抗原的方法，使上述检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条对精液进行前列腺特异性抗原检测。

本发明中检测精液中前列腺特异性抗原的方法，简单易操作，检测灵敏度好、准确性高且能够进行定量分析。

附图说明

图1为一实施例制备的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的结构示意图。

附图标记说明如下：

10.检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条；100样品垫；200.结合垫；300.硝酸纤维素膜，310.第一检测带，320.第二检测带，330.质控带；400.吸水纸。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

下列实施例中未注明具体条件的试验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书建议的调节进行选择。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过市售购买获得的常规产品。

一种检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条10的制备方法，包括如下步骤：

1)样品垫100和结合垫200的预处理：将样品垫100和结合垫200均放入预处理液中浸湿，烘干处理后，制得预处理的样品垫100和预处理的结合垫200。其中，该预处理液的成分包括：浓度为1g/L-5g/L的牛血清蛋白，例如该牛血清蛋白的浓度可以为，但不限于1g/L、2g/L、3g/L、4g/L及5g/L；浓度为5g/L-10g/L的海藻糖，例如该海藻糖的浓度可以为，但不限于5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L及10g/L；浓度为2.5g/L-10g/L的吐温20，例如该吐温20的浓度可以为，但不限于2.5g/L、5g/L、7g/L、8g/L及10g/L；浓度为0.01mol/L-0.05mol/L且pH值为7-8的磷酸盐缓冲液，例如该磷酸盐缓冲液的浓度可以为，但不限于0.01mol/L、0.02mol/L、0.03mol/L、0.04mol/L及0.05mol/L。可选地，烘干处理的温度为30-40℃，时间为4h-6h。可选地，该磷酸盐缓冲液的pH值为7.2-7.4。具体地，将结合垫200和样品垫100用预处理液进行浸湿并在37℃烘干5h，留作备用。

在一个实施例中，该预处理液的成分包括浓度为3g/L-4g/L的牛血清蛋白、浓度为7g/L-8g/L的海藻糖、浓度为5g/L-8g/L的吐温20及浓度为0.03mol/L-0.04mol/L的磷酸盐缓冲液。

该样品垫100主要用于减缓样品的渗透速度，以使样品在结合垫200上能够均匀分布。该样品垫100也用于去除样品中的杂质颗粒，调节样品液pH值或粘度等。该样品垫100的材料可以选用市场上通用的材料，只要满足产品的性能需求即可。可选地，该样品垫100的材料可以为聚酯纤维膜或玻璃纤维膜等纤维膜。该样品垫100的材料可以为聚酯纤维膜时，其具备良好的亲水性，纤维分布均匀整齐，纹路细腻，释放性好。

该结合垫200主要用于吸附一定量的标识结合物颗粒，保证标识结合物颗粒的稳定性，确保标识结合物颗粒定量完全释放；同时能够持续不断的将样品转移到硝酸纤维素膜300。该结合垫200的材料可以选用市场上通用的材料，只要满足产品的性能需求即可。可选地，该结合垫200的材料可以为聚酯纤维膜或玻璃纤维膜等纤维膜。

为了使样品垫100及结合垫200能够具备较好的使用性能，会通过预处理液对样品垫100及结合垫200进行预处理。常用的预处理液的成分包括合适的离子缓冲液、小分子物质、惰性蛋白及表面活性剂。其中，离子缓冲液是为了调节pH值，以能够适用于不同类别的样品。离子缓冲液为磷酸盐缓冲液(PBS)，该磷酸盐缓冲液(PBS)的pH值为7-8。磷酸盐缓冲液(PBS)易配制各种浓度的缓冲液，适用的pH值范围宽，受温度影响较小且缓冲能力强，缓冲液被稀释后pH变化小。小分子物质主要用于样品的储存稳定性。该小分子物质可以为海藻糖等低聚糖。惰性蛋白主要是用于保证抗体的活性，也维持标识结合物颗粒的稳定性。该惰性蛋白为牛血清白蛋白(BSA)。表面活性剂主要用于对溶液体系的界面状态进行调整，促进预处理液中各成分间的配合。该表面活性剂为吐温20等聚山梨醇酯类非离子型表面活性剂。

2)制备含有彩色微球的结合垫200：将浓度为2mg/mL-4mg/mL的彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体以1μL/cm-2.5μL/cm的量涂布于所述预处理的结合垫200，制得含有彩色微球的结合垫200。例如该彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体的浓度可以为，但不限于2mg/mL、3mg/mL及4mg/mL。

该彩色微球也为市售产品，该彩色微球是通过微球加入颜料制得。彩色微球具有色彩艳丽，性能稳定，粒径分布宽等特性，可广泛应用于显微测定、免疫检测等各种检测中。该彩色微球的显示的颜色可以为红色、粉色、橙色、黄色、绿色、蓝色或黑色等颜色，具体的颜色可以根据实际检测需要进行选择。可选地，该彩色微球的直径为150nm-300nm。本发明彩色微球的直径为150nm-300nm，减少了检测误差，进一步提高了检测准确度。

在一个实施例中，将浓度为2mg/mL-4mg/mL彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体，使用定量喷膜仪以1.5μL/cm-2.5μL/cm的量均匀喷到已经预处理过的结合垫200上，并在35℃-38℃的温度条件下烘干12h，加入干燥剂封存备用。

该彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体采用市售产品，其制备方法不作具体限制，只要能够进行颜料标记抗体而实现前列腺特异性抗原定位即可。如通过在彩色微球溶液中加入碳二亚胺(EDC)和前列腺特异性抗原抗体，室外反应4个小时后，离心，去除上清液后，制得彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体。

3)处理硝酸纤维素膜300：分别取浓度为1mg/mL-3mg/mL的前列腺特异性抗原抗体，例如该前列腺特异性抗原抗体的浓度可以为，但也不限于1mg/mL、2mg/mL及3mg/mL；浓度为0.5mg/mL-1mg/mL的前列腺特异性抗原抗体，该前列腺特异性抗原抗体的浓度可以为，但也不限于0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL、0.9mg/mL及1.0mg/mL；及浓度为1.0mg/mL-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗体，该羊抗鼠IgG抗体的浓度可以为，但也不限于1.0mg/mL、1.1mg/mL、1.2mg/mL、1.3mg/mL、1.4mg/mL及1.5mg/mL。并以一定的间隔分别涂布于硝酸纤维素膜300，以在该硝酸纤维素膜300上形成依次设置的第一检测带310、第二检测带320及质控带330。第一检测带310、第二检测带320及质控带330之间相间隔的宽度可以根据检测样品浓度的需要进行实时调整。可选地，在35℃-38℃的温度条件下烘干12h，加入干燥剂封存备用。其中，硝酸纤维素膜300、前列腺特异性抗原抗体、羊抗鼠IgG抗体均为市场上通用的产品。

在一个实施例中，通过控制浓度为1mg/mL-3mg/mL的前列腺特异性抗原抗体、浓度为0.5mg/mL-1mg/mL的前列腺特异性抗原抗体及浓度为1mg/mL-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗体的涂布位置，以使该第一检测带310、该第二检测带320及该质控带330依次平行设置。此时，该试条纸的检测精度和准确性相对较好。

4)试纸条的组装：将步骤1)中预处理的样品垫100、步骤2)中该含有彩色微球标记的结合垫200、步骤3)中已处理的该硝酸纤维素膜300及吸水纸400依次粘贴于底板，即得该检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条10。可选地，该底板的材料是聚氯乙烯(PVC)。PVC板具有较好的耐候性、耐腐蚀性能及防水性能，可以满足试条纸的使用需求。

可选地，该预处理的样品垫100、该含有彩色微球的结合垫200、已处理的该硝酸纤维素反应膜及该吸水纸400沿该底板的长度方向依次粘贴。进一步可选地，该彩色微球标记的结合垫200与该第一检测带310相临近，该吸水纸400与该质控带330相临近。其中，吸水纸400的主要成分是纤维素，纤维素是天然有机高分子化合物，纸张中的纤维素交错呈网状，其间有很多的空隙，这些空隙可以含住水分。

在一个实施例中，在底板中间先铺设硝酸纤维素膜300，然后在与羊抗鼠IgG抗体的质控带330相临近的一端铺设吸水纸400，该吸水纸400与硝酸纤维素膜300部分重叠；在与第一检测带310相临近的一端铺设结合垫200，使结合垫200与硝酸纤维素膜300部分重叠；结合垫200的另一端与样品垫100部分重叠，即得检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条10。

本发明通过将浓度为1mg/mL-3mg/mL的前列腺特异性抗原抗体、浓度为0.5mg/mL-1mg/mL的前列腺特异性抗原抗体及浓度为1mg/mL-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗体以一定的间隔涂布于硝酸纤维素膜300，能够在该硝酸纤维素膜300上形成依次设置的第一检测带310、第二检测带320及质控带330。该第一检测带310中前列腺特异性抗原抗体的浓度大于第二检测带320中前列腺特异性抗原抗体的浓度，能够定量检测精液中前列腺特异性抗原的浓度。

比如，当精液中的前列腺特异性抗原的浓度为4ng/ml-200ng/ml时，第一检测带310及质控带330会发生颜色变化。当精液中的浓度为大于200ng/ml时，第一检测带310、第二检测带320及质控带330均会发生颜色变化；通过第一检测带310及第二检测带320的配合，能够直观准确地对精液中前列腺特异性抗原的浓度进行定量分析。而且本发明通过在硝酸纤维素膜300依次设置第一检测带310及第二检测带320，两者共同配合减少了精液检测过程种的误差，提高了检测灵敏性及准确性。

此外，本发明还使用浓度为2mg/mL-4mg/mL的彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体以1μL/cm-2.5μL/cm的量涂布于所述预处理的结合垫200，彩色微球与前列腺特异性抗原抗体能够进行化学键复合，彩色微球的免疫活性较稳定。彩色微球的颜色强度高，色彩艳丽，颜色色泽与背景色泽对比鲜明，便于检测结果的显示。并通过控制彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体的浓度及涂布量，确保结合垫200上具备适量的彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体，进一步提高了检测灵敏性及准确度。

此外，还有必要提供一种检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条10。

一种检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条10，由上述测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法制备而成。该检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条10包括底板和依次粘贴于该底板的样品垫100、结合垫200、硝酸纤维素膜300及吸水纸400，该样品垫100上涂布有彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体，该硝酸纤维素膜300依次设置有浓度为1mg/mL-3mg/mL的前列腺特异性抗原抗体形成的第一检测带310、浓度为0.5mg/mL-1mg/mL的前列腺特异性抗原抗体形成的第二检测带320及浓度为1mg/mL-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗体形成的质控带330。

如图1所示的实施例中，该硝酸纤维素膜300粘贴于该底板的中间部分，该硝酸纤维素膜300相间隔依次设置有第一检测带310、第二检测带320及质控带330。设有质控带330的一端与该吸水纸400部分重叠，设有第一检测带310的一端与该结合垫200部分重叠，该结合垫200的另一端与该样品垫100部分重叠。可选地，该第一检测带310、该第二检测带320及该质控带330分别平行设置。进一步可选地，第一检测带310、第二检测带320及质控带330之间相间隔的宽度可以根据检测样品浓度的需要进行实时调整。

本发明的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条10的使用方便，检测灵敏度好、准确性高且能够进行定量分析。

此外，还有必要提供一种检测精液中前列腺特异性抗原的方法

一种检测精液中前列腺特异性抗原的方法，使上述检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条10对精液进行前列腺特异性抗原检测。

在一个实施例中，将带有精液的纸巾(或其他物品)用纯水浸湿10min后，取出75ul液体直接滴加到试剂条的样品垫100中，可观察到该第一检测带310、该第二检测带320及该质控带330均出现颜色变化。将该液体样本用纯水进行稀释，随着稀释倍数的增加，第一检测带310及该第二检测带320的颜色逐渐变浅，且该第二检测带320的颜色更为明显。将未带精液的纸巾(或其他物品)同样用纯水浸湿10min后进行相同操作检测，第一检测带310及该第二检测带320没有颜色变化，只有质控带330的颜色发生变化。

本发明中检测精液中前列腺特异性抗原的方法，简单易操作，检测灵敏度好、准确性高且能够进行定量分析。

以下为具体实施例部分：

实施例1：制备检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条1

1)样品垫和结合垫的预处理：将样品垫和结合垫均放入浓度为3g/L的牛血清蛋白、浓度为8g/L的海藻糖、浓度为7g/L的吐温20及浓度为0.03mol/L且pH值为7的磷酸盐缓冲液中完全浸湿后，将样品垫和结合垫放入37℃的烘炉中，烘干5h处理，留作备用。

2)制备含有红色微球的结合垫：将浓度为3mg/mL，直径为250nm的红色微球标记的前列腺特异性抗原抗体，使用定量喷膜仪以2μL/cm的量涂布于该预处理的结合垫，并在37℃的温度条件下烘干12h，制得含有红色微球标记结合垫，加入干燥剂封存备用。

3)处理硝酸纤维素膜：分别将浓度为2mg/mL的前列腺特异性抗原抗体、浓度为0.7mg/mL的前列腺特异性抗原抗体及浓度为1.2mg/mL的羊抗鼠IgG抗体以一定的间隔涂布于硝酸纤维素膜，以在该硝酸纤维素膜上形成依次设置的第一检测带、第二检测带及质控带，并在37℃的温度条件下烘干12h，加入干燥剂封存备用。

4)试纸条的组装：在底板中间先粘贴步骤3)制备的硝酸纤维素膜，然后在与羊抗鼠IgG抗体的质控带相临近的一端铺设吸水纸，该吸水纸与硝酸纤维素膜部分重叠。在与第一检测带相临近的一端粘贴步骤2)制备的结合垫，使结合垫与硝酸纤维素膜部分重叠。最后在结合垫的另一端粘贴步骤1)制备的样品垫，即得检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条1。

实施例2：制备检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条2

1)样品垫和结合垫的预处理：将样品垫和结合垫均放入浓度为1g/L的牛血清蛋白、浓度为5g/L的海藻糖、浓度为2.5g/L的吐温20及浓度为0.01mol/L且pH值为7.4的磷酸盐缓冲液中完全浸湿后，将样品垫和结合垫放入37℃的烘炉中，烘干5h处理，留作备用。

2)制备含有红色微球的结合垫：将浓度为2mg/mL，直径为200nm的红色微球标记的前列腺特异性抗原抗体，使用定量喷膜仪以1.5μL/cm的量涂布于该预处理的结合垫，并在37℃的温度条件下烘干12h，制得含有红色微球标记结合垫，加入干燥剂封存备用。

3)处理硝酸纤维素膜：分别将浓度为1mg/mL的前列腺特异性抗原抗体、浓度为0.5mg/mL的前列腺特异性抗原抗体及浓度为1mg/mL的羊抗鼠IgG抗体以一定的间隔涂布于硝酸纤维素膜，以在该硝酸纤维素膜上形成依次设置的第一检测带、第二检测带及质控带，并在37℃的温度条件下烘干12h，加入干燥剂封存备用。

4)试纸条的组装：在底板中间先粘贴步骤3)制备的硝酸纤维素膜，然后在与羊抗鼠IgG抗体的质控带相临近的一端铺设吸水纸，该吸水纸与硝酸纤维素膜部分重叠。在与第一检测带相临近的一端粘贴步骤2)制备的结合垫，使结合垫与硝酸纤维素膜部分重叠。最后在结合垫的另一端粘贴步骤1)制备的样品垫，即得检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条2。

实施例3：制备检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条3

1)样品垫和结合垫的预处理：将样品垫和结合垫均放入浓度为5g/L的牛血清蛋白、浓度为10g/L的海藻糖、浓度为10g/L的吐温20及浓度为0.05mol/L且pH值为8的磷酸盐缓冲液中完全浸湿后，将样品垫和结合垫放入37℃的烘炉中，烘干5h处理，留作备用。

2)制备含有绿色微球的结合垫：将浓度为4mg/mL，直径为300nm的绿色微球标记的前列腺特异性抗原抗体，使用定量喷膜仪以2.5μL/cm的量涂布于该预处理的结合垫，并在37℃的温度条件下烘干12h，制得含有绿色微球标记结合垫，加入干燥剂封存备用。

3)处理硝酸纤维素膜：分别将浓度为3mg/mL的前列腺特异性抗原抗体、浓度为1mg/mL的前列腺特异性抗原抗体及浓度为1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗体以一定的间隔涂布于硝酸纤维素膜，以在该硝酸纤维素膜上形成依次设置的第一检测带、第二检测带及质控带，并在37℃的温度条件下烘干12h，加入干燥剂封存备用。

4)试纸条的组装：在底板中间先粘贴步骤3)制备的硝酸纤维素膜，然后在与羊抗鼠IgG抗体的质控带相临近的一端铺设吸水纸，该吸水纸与硝酸纤维素膜部分重叠；在与第一检测带相临近的一端粘贴步骤2)制备的结合垫，使结合垫与硝酸纤维素膜部分重叠；最后在结合垫的另一端粘贴步骤1)制备的样品垫，即得检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条3。

实施例4：检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的性能评价1

使用实施例2制备的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条2及市售的胶体金检测试条分别对10组含有精液的样品进行检测，设定10组含有精液的样品中PSA浓度分别为2ng/ml、3ng/ml、4ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml150ng/ml、200ng/ml、250ng/ml及300ng/ml，检测结果如表1所示：

表1对含有不同PSA浓度的精液样品的检测结果

结论：根据表1中检测结果可知，本发明制备的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条2检测精液样品中PSA最小浓度为4ng/ml，而市售的胶体金检测试条检测的精液样品中PSA最小浓度为10ng/ml。因此，本发明制备的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的灵敏度好。

本发明制备的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条2中包括第一检测带和第二检测带，通过第一检测带和第二检测带的红色变化，能够半定量分析精液样品中PSA的浓度。如本实验中当精液中的PSA的浓度为4ng/ml-200ng/ml时，试纸条2的第一检测带及质控带会变为红色；当精液中的浓度为大于200ng/ml时，试纸条2的第一检测带、第二检测带及质控带均会变为红色。而市售的胶体金检测试条只含有一条检测带，当PSA浓度大于10ng/ml时，检测带的颜色均发生颜色变化，并不能更精确的得出PSA浓度的范围。因此，本发明制备的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条能够得出准确的检测出精液中的PSA的浓度范围，能够进行半定量分析。

实施例5：检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的性能评价2

使用实施例2制备的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条2及市售的胶体金检测试条测试同一精液样品(PSA浓度为15ng/ml)，重复十次，验证试纸条的检测结果准确性。实施例2制备的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条2检测十次，其第一检测带质控带十次均变为红色。而市售的胶体金检测试条检测十次，检测带及质控带只出现三次颜色变化。因此，本发明制备测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的准确性高。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

样品垫和结合垫的预处理：将样品垫和结合垫均放入预处理液中浸湿，烘干处理后，制得预处理的样品垫和预处理的结合垫，其中，所述预处理液的成分包括浓度为1g/L-5g/L的牛血清蛋白、浓度为5g/L-10g/L的海藻糖、浓度为2.5g/L-10g/L的吐温20及浓度为0.01mol/L-0.05mol/L且pH值为7-8的磷酸盐缓冲液；

制备含有彩色微球的结合垫：将浓度为2mg/mL-4mg/mL的彩色微球标记的前列腺特异性抗原抗体以1μL/cm-2.5μL/cm的量涂布于所述预处理的结合垫，制得含有彩色微球的结合垫；

处理硝酸纤维素膜：分别将浓度为1mg/mL-3mg/mL的前列腺特异性抗原抗体、浓度为0.5mg/mL-1mg/mL的前列腺特异性抗原抗体及浓度为1mg/mL-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗体以一定的间隔涂布于硝酸纤维素膜，以在所述硝酸纤维素膜上形成依次间隔设置的第一检测带、第二检测带及质控带；

试纸条的组装：将所述预处理的样品垫、所述含有彩色微球的结合垫、已处理的所述硝酸纤维素膜及吸水纸依次粘贴于底板，即得所述检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条。

2.根据权利要求1所述检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法，其特征在于，所述烘干处理的温度为30-40℃，时间为4h-6h。

3.根据权利要求1所述检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法，其特征在于，所述预处理液的成分包括浓度为3g/L-4g/L的所述牛血清蛋白、浓度为7g/L-8g/L的所述海藻糖、浓度为5g/L-8g/L的所述吐温20及浓度为0.03mol/L-0.04mol/L的所述磷酸盐缓冲液。

4.根据权利要求1所述的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法，其特征在于，所述彩色微球的直径为150nm-300nm。

5.根据权利要求1所述的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法，其特征在于，所述预处理的样品垫、所述含有彩色微球的结合垫、已处理的所述硝酸纤维素反应膜及所述吸水纸沿所述底板的长度方向依次粘贴。

6.根据权利要求5所述的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法，其特征在于，所述含有彩色微球的结合垫与所述第一检测带相临近，所述吸水纸与所述质控带相临近。

7.根据权利要求1-6任一项所述的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法，所述底板的材料是聚氯乙烯。

8.一种检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条，其特征在于，由如权利要求1-7任一项所述的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法制备而成。

9.根据权利要求8所述的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条，其特征在于，所述第一检测带、所述第二检测带及所述质控带依次平行设置。

10.一种检测精液中前列腺特异性抗原的方法，其特征在于，使用如权利要求8所述的检测精液中前列腺特异性抗原的试纸条对精液进行前列腺特异性抗原检测。