CN107266607A - 一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法，包括：多糖的超声浸取、去蛋白、醇沉干燥，多糖的超声浸取的步骤为：将羊栖菜粗粉加入NaCl溶液、活性多肽，混匀后超声波处理，抽滤，抽滤液离心，取上清液，得粗蛋白液，本发明对羊栖菜进行超声浸取，利用活性肽和低盐溶液，结合溶胀法和超声波法进行细胞破碎，大大缩短了提取时间，提取效果好，粗蛋白液中蛋白含量高，有利于提高多糖的得率和活性；提取方法获得的羊栖菜水溶性多糖具有优异的抗氧化、抗凝血、抗炎、抗癌、抗肿瘤、免疫调节等生物学功能。
Description
技术领域
本发明涉及多糖提取技术领域，特别是涉及一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法。
背景技术
羊栖菜多糖((sargassum fusiforme polysaccharides, SFPS)是从全藻中提取到的一种水溶性多糖，包括褐藻酸(alginic acid)、褐藻多糖硫酸（fucoidan, FCD)及褐藻淀粉(laminaran)。褐藻酸主要是以β-1，4键相结合的D-甘露糖醛酸聚合物，在羊栖菜中含量较高，占20.8%，褐藻多糖硫酸酷主要由L-岩藻糖和硫酸根组成，其含量较少，一般在0.5~10%之间。根据组成单糖的是否一致性，多糖可分为均多糖和杂多糖两种，近年来，许多研究表明羊栖菜中含有较多的水溶性褐藻硫酸化多糖，又有不同种 属的褐藻硫酸化多糖的生物活性相继被报道多个方面的生物活性，包括抗氧化、抗凝血、抗 炎、抗癌、抗肿瘤、免疫调节等生物学功能。
目前，褐藻多糖提取技术主要有酶解法、碱解法、酸解法、水提取法、超声波辅助，但现有羊栖菜多糖的提取方法中，都存有不足，包括成本太高，操作复杂，耗能耗材较多，多糖含量和纯度不高等。
现有技术，如中国发明授权专利文献，授权公告号：CN 101250232 B，该发明设计一种羊栖菜活性多糖提取工艺，采取四步提取法，即结合了超声波提取、水提、碱提、热水提、超声波技术，不仅提高了羊栖菜多糖提取率，而且防止多糖提取过程中对羊栖菜生物活性的破坏，除了赋予提取物多糖的特性外，该工艺所制备的羊栖菜活性多糖还具有高抗氧化性，特别适合应用于化妆品领域。另外，该工艺所生产的羊栖菜多糖采用活性炭吸附及AB-8 大孔吸附树脂进行脱色、去腥相结合方法，解决了羊栖菜等海洋褐藻类多糖去腥及脱色关键技术，有效提高多糖纯度、外观品质，并保证脱腥脱色后多糖的高抗氧化性，但是细胞破壁方面还不太理想，不利于多糖的提取率。
发明内容
本发明的目的在于提供一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法，细胞破壁率高，多糖的得率高，对多糖活性的影响低，活性成分不易被破坏。
本发明为实现上述目的，所采取的技术方案为：一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法，包括：多糖的超声浸取、去蛋白、醇沉干燥，具体操作步骤为：
（1）多糖的超声浸取的步骤为：将羊栖菜粗粉加入0.7-1%NaCl溶液、为粗粉重量的0.03~0.07%活性多肽， 活性多肽的氨基酸序列为：MKGLSFVLLVLLLMMPDGEGTDPEMQYWTCGYRGLCRFCAQYFVGHHGCPRRYRCCAIRA。混匀后超声波处理，超声波处理温度为3-5℃，时间为2-3h，置于3-5℃抽滤6-8h，抽滤液在3-5℃，以4500~8000rpm下离心20-25min，取上清液，得粗蛋白液，该活性肽具有亲水性和亲脂性，亲水性使其溶于蒸馏水中，亲脂性使其与螺旋藻细胞膜结合，使细胞膜下形成小孔，致使细胞内的物质泄漏，提高粗蛋白提取的工作效率，也提高活性蛋白的得率，该步骤利用活性肽和低盐溶液，结合溶胀法和超声波法进行细胞破碎，大大缩短了提取时间，提取效果好，粗蛋白液中蛋白含量高，避免了破碎处理过程中需避免因升温及机械力引起的蛋白质变性；
（2）去蛋白步骤为：将提取液调pH值到7.0，减压真空浓缩，用Sevage法去蛋白2-4次，上清液用5-10:1颗粒活性炭吸附后，离心，取上清液，过滤，收集滤液，采用Sevage法去蛋白，条件温和，不会引起多糖的变性，
（3）醇沉干燥过程为：向去除蛋白的液体内加入86%~92%的乙醇溶液，搅拌10-25min，过滤，将滤液真空干燥得多糖提取物，醇沉干燥过程中真空干燥的条件为：真空度为3000-5000Pa，温度为60-70℃，时间为25-35min，多糖溶于热水而不溶于高浓度的乙醇，在加入乙醇溶液后，羊栖菜多糖以沉淀的形式从水相中析出，所得的羊栖菜多糖纯度高，品质好，提高了产品的经济价值。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：1）本发明首先对羊栖菜进行超声浸取，利用活性肽和低盐溶液，结合溶胀法和超声波法进行细胞破碎，大大缩短了提取时间，提取效果好，粗蛋白液中蛋白含量高，有利于提高多糖的得率和活性；2）符合绿色环保的要求，且提取方法合理，操作简单，不需要特殊的仪器设备，降低了生产成本，为工业化应用提供了有利条件；3）本提取方法获得的羊栖菜水溶性多糖具有优异的抗氧化、抗凝血、抗 炎、抗癌、抗肿瘤、免疫调节等生物学功能。
具体实施方式
以下结合实施例作进一步详细描述：
实施例1：
一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法，包括：多糖的超声浸取、去蛋白、醇沉干燥，具体操作步骤为：
（1）多糖的超声浸取的步骤为：将羊栖菜粗粉加入0.8%NaCl溶液、为粗粉重量的0.04%活性多肽， 活性多肽的氨基酸序列为：MKGLSFVLLVLLLMMPDGEGTDPEMQYWTCGYRGLCRFCAQYFVGHHGCPRRYRCCAIRA。混匀后超声波处理，超声波处理温度为4℃，时间为2.5h，置于3℃抽滤6h，抽滤液在4℃，以7000rpm下离心20min，取上清液，得粗蛋白液，该活性肽具有亲水性和亲脂性，亲水性使其溶于蒸馏水中，亲脂性使其与螺旋藻细胞膜结合，使细胞膜下形成小孔，致使细胞内的物质泄漏，提高粗蛋白提取的工作效率，也提高活性蛋白的得率，该步骤利用活性肽和低盐溶液，结合溶胀法和超声波法进行细胞破碎，大大缩短了提取时间，提取效果好，粗蛋白液中蛋白含量高，避免了破碎处理过程中需避免因升温及机械力引起的蛋白质变性；
（2）去蛋白步骤为：将提取液调pH值到7.0，减压真空浓缩，用Sevage法去蛋白3次，上清液用8:1颗粒活性炭吸附后，离心，取上清液，过滤，收集滤液，采用Sevage法去蛋白，条件温和，不会引起多糖的变性，
（3）醇沉干燥过程为：向去除蛋白的液体内加入88%的乙醇溶液，搅拌20min，过滤，将滤液真空干燥得多糖提取物，醇沉干燥过程中真空干燥的条件为：真空度为5000Pa，温度为65℃，时间为28min，多糖溶于热水而不溶于高浓度的乙醇，在加入乙醇溶液后，羊栖菜多糖以沉淀的形式从水相中析出，所得的羊栖菜多糖纯度高，品质好，提高了产品的经济价值。
实施例2：
一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法，包括：多糖的超声浸取、去蛋白、醇沉干燥，具体操作步骤为：
（1）多糖的超声浸取的步骤为：将羊栖菜粗粉加入1%NaCl溶液、为粗粉重量的0.04%活性多肽， 活性多肽的氨基酸序列为：MKGLSFVLLVLLLMMPDGEGTDPEMQYWTCGYRGLCRFCAQYFVGHHGCPRRYRCCAIRA。混匀后超声波处理，超声波处理温度为3℃，时间为3h，置于5℃抽滤8h，抽滤液在5℃，以6000rpm下离心20min，取上清液，得粗蛋白液，该活性肽具有亲水性和亲脂性，亲水性使其溶于蒸馏水中，亲脂性使其与螺旋藻细胞膜结合，使细胞膜下形成小孔，致使细胞内的物质泄漏，提高粗蛋白提取的工作效率，也提高活性蛋白的得率，该步骤利用活性肽和低盐溶液，结合溶胀法和超声波法进行细胞破碎，大大缩短了提取时间，提取效果好，粗蛋白液中蛋白含量高，避免了破碎处理过程中需避免因升温及机械力引起的蛋白质变性；
（2）去蛋白步骤为：将提取液调pH值到7.0，减压真空浓缩，用Sevage法去蛋白3次，上清液用10:1颗粒活性炭吸附后，离心，取上清液，过滤，收集滤液，采用Sevage法去蛋白，条件温和，不会引起多糖的变性，
（3）醇沉干燥过程为：向去除蛋白的液体内加入90%的乙醇溶液，搅拌15min，过滤，将滤液真空干燥得多糖提取物，醇沉干燥过程中真空干燥的条件为：真空度为4000Pa，温度为65℃，时间为30min，多糖溶于热水而不溶于高浓度的乙醇，在加入乙醇溶液后，羊栖菜多糖以沉淀的形式从水相中析出，所得的羊栖菜多糖纯度高，品质好，提高了产品的经济价值。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 浦江县欧立生物技术有限公司
<120> 一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 60
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 1
Met Lys Gly Leu Ser Phe Val Leu Leu Val Leu Leu Leu Met Met Pro
1 5 10 15
Asp Gly Glu Gly Thr Asp Pro Glu Met Gln Tyr Trp Thr Cys Gly Tyr
20 25 30
Arg Gly Leu Cys Arg Phe Cys Ala Gln Tyr Phe Val Gly His His Gly
35 40 45
Cys Pro Arg Arg Tyr Arg Cys Cys Ala Ile Arg Ala
50 55 60
Claims (6)
1.一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法，包括：多糖的超声浸取、去蛋白、醇沉干燥，其特征在于：所述多糖的超声浸取的步骤为：将羊栖菜粗粉加入NaCl溶液、活性多肽，混匀后超声波处理，抽滤，抽滤液离心，取上清液，得粗蛋白液。
2.根据权利要求1所述的一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法，其特征在于：所述羊栖菜粗粉细胞破碎步骤中的NaCl溶液的浓度为0.7-1%，超声波处理温度为3-5℃，时间为2-3h。
3.根据权利要求1所述的一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法，其特征在于：所述羊栖菜粗粉细胞破碎步骤中的活性多肽的添加量为粗粉重量的0.03~0.07%，活性多肽的氨基酸序列为：MKGLSFVLLVLLLMMPDGEGTDPEMQYWTCGYRGLCRFCAQYFVGHHGCPRRYRCCAIRA。
4.根据权利要求1所述的一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法，其特征在于：所述去蛋白步骤为：将提取液调pH值到7.0，减压真空浓缩，用Sevage法去蛋白2-4次，上清液用5-10:1颗粒活性炭吸附后，离心，取上清液，过滤，收集滤液。
5.根据权利要求1所述的一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法，其特征在于：所述醇沉干燥过程为：向去除蛋白的液体内加入86%~92%的乙醇溶液，搅拌10-25min，过滤，将滤液真空干燥得多糖提取物。
6.根据权利要求5所述的一种羊栖菜水溶性多糖的制备方法，其特征在于：所述醇沉干燥过程中真空干燥的条件为：真空度为3000-5000Pa，温度为60-70℃，时间为25-35min。
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2017
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