CN107266396A - 一种从红豆杉中提取10‑dab的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从红豆杉中提取10‑DAB的方法，包括初粉碎、酶解、双水萃取、大孔树脂富集、洗脱、结晶纯化等步骤，与现有技术相比，本发明简化了工艺，去掉原有的脱脂工序，并用双水萃取替代原来的乙醇提取和二次萃取两个工序，从而缩短了生产工艺，提高了工作效率，而且在双水萃取作用下，乙醇与盐水产生分离，溶于乙醇中的10‑DAB得以收集，可使收率在现有60%的基础上提高30%，而且成本也降低了50%左右，也提高了纯度。
Description
技术领域
本发明涉及中药提取分离技术领域，具体涉及一种从红豆杉中提取10-DAB的方法。
背景技术
10-DAB是从红豆杉中提取分离得到的一种具有独特性抗癌活性的二萜类天然有机化合物，用于合成紫杉醇类化合物、多西他赛等抗癌药。随着社会癌症患者数量的增加，对原料药10-DAB的需求也日益加剧。现有技术中，10-DAB主要经过醇提、萃取、层析、结晶等工序得到，其提取率不高，溶剂用量大且操作复杂，耗时长，工作效率低。
发明内容
针对上述现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种工艺设计更为合理、得率更高、成本更低的从红豆杉中提取10-DAB的方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案：
一种从红豆杉中提取10-DAB的方法，包括如下步骤：
（1）初粉碎：取一定量的红豆杉枝叶，通过粉碎机进行超细粉碎后过筛，得到粒度为100-300目的粉末；
（2）酶解：往步骤（1）中的粉末加5-10倍量的水，加入由纤维素酶、中性蛋白酶构成的混合酶进行酶解，其中混合酶中纤维素酶的用量为原料粉末总重的2%-5%，中性蛋白酶的用量为原料粉末总重的0.3%-1.0%，酶解温度45-50℃，酶解pH为6.0-7.0，酶解时间为30min，酶解完后加热杀酶，得酶解液；
（3）双水萃取：往步骤（2）得到的酶解液中先加入盐水，盐水的加入量为酶解液总重的50%-60%，盐水的盐度为3-6‰，充分搅拌3-5min后，加入90%的乙醇溶液，充分搅拌10-15min，然后静置分层，收集上层液；
（4）大孔树脂富集、洗脱：取步骤（3）的上层液，上样于上层大孔树脂柱，并用3倍上层大孔树脂体积的纯化水以38v/h的流速洗脱、再用6倍树脂体积的体积百分比浓度为80%的乙醇溶液洗脱，然后将洗脱初液送入下层大孔树脂柱，并用2倍上层大孔树脂体积的纯化水以38v/h的流速洗脱、再用4倍树脂体积的体积百分比浓度为80%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；
（5）结晶纯化：将步骤（4）得到的洗脱液在60-70℃下减压浓缩，静置析晶，然后将晶体再次溶于水中，重新结晶，干燥制得10-DAB。
优选地，在酶解进行0.5h后在酶解的同时加超声波，超声波的振动频率为20W、15kHz，超声波处理时间为10-15min。
优选地，双水萃取时的温度为50-70℃。
优选地，往双水萃取得到的下层液中加入90%乙醇，搅拌10-15min后，静置分层，取上层液，上层液混入第一次的上层液中，一起经过步骤（4）、步骤（5）从而制得。
与现有技术相比，本发明具备的有益效果是：1、简化了工艺，去掉原有的脱脂工序，并用双水萃取替代原来的乙醇提取和二次萃取两个工序，从而缩短了生产工艺，提高了工作效率；2、采用酶解的方式预先对红豆杉枝叶粉末进行酶解，使有效成分10-DAB快速溶于水，再在双水萃取作用下，乙醇与盐水产生分离，溶于乙醇中的10-DAB得以收集，可使收率在现有60%的基础上提高30%，而且成本也降低了50%左右，也提高了纯度。
具体实施方式
现结合具体实施例，来对本发明作进一步的详细描述。显然，不能因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，均应属于本发明的保护范围。下述实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例一
从红豆杉中提取10-DAB的方法，包括如下步骤：
（1）初粉碎：取一定量的红豆杉枝叶，通过粉碎机进行超细粉碎后过筛，得到粒度为100目的粉末；
（2）酶解：往步骤（1）中的粉末加5倍量的水，加入由纤维素酶、中性蛋白酶构成的混合酶进行酶解，其中混合酶中纤维素酶的用量为原料粉末总重的2%，中性蛋白酶的用量为原料粉末总重的0.3%，酶解温度45℃，酶解pH为6.0，在酶解进行0.5h后在酶解的同时加超声波，超声波的振动频率为20W、15kHz，超声波处理时间为10min，酶解时间为30min，酶解完后加热杀酶，得酶解液；
（3）双水萃取：往步骤（2）得到的酶解液中先加入盐水，盐水的加入量为酶解液总重的50%，盐水的盐度为3‰，充分搅拌3min后，加入95%的乙醇溶液，充分搅拌10min，双水萃取时的温度为50℃，然后静置分层，收集上层液；
（4）大孔树脂富集、洗脱：取步骤（3）的上层液，上样于上层大孔树脂柱，并用3倍上层大孔树脂体积的纯化水以38v/h的流速洗脱、再用6倍树脂体积的体积百分比浓度为80%的乙醇溶液洗脱，然后将洗脱初液送入下层大孔树脂柱，并用2倍上层大孔树脂体积的纯化水以38v/h的流速洗脱、再用4倍树脂体积的体积百分比浓度为80%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；
（5）结晶纯化：将步骤（4）得到的洗脱液在60℃下减压浓缩，静置析晶，然后将晶体再次溶于水中，重新结晶，干燥制得10-DAB。
实施例二
从红豆杉中提取10-DAB的方法，包括如下步骤：
（1）初粉碎：取一定量的红豆杉枝叶，通过粉碎机进行超细粉碎后过筛，得到粒度为300目的粉末；
（2）酶解：往步骤（1）中的粉末加10倍量的水，加入由纤维素酶、中性蛋白酶构成的混合酶进行酶解，其中混合酶中纤维素酶的用量为原料粉末总重的5%，中性蛋白酶的用量为原料粉末总重的01.0%，酶解温度50℃，酶解pH为7.0，在酶解进行0.5h后在酶解的同时加超声波，超声波的振动频率为20W、15kHz，超声波处理时间为15min，酶解时间为30min，酶解完后加热杀酶，得酶解液；
（3）双水萃取：往步骤（2）得到的酶解液中先加入盐水，盐水的加入量为酶解液总重的60%，盐水的盐度为6‰，充分搅拌5min后，加入95%的乙醇溶液，充分搅拌15min，双水萃取时的温度为70℃，然后静置分层，收集上层液，为第一次的上层液；往双水萃取的下层液中加入90%乙醇，搅拌15min后，静置分层，取上层液，上层液混入第一次的上层液中；
（4）大孔树脂富集、洗脱：取步骤（3）的上层液，上样于上层大孔树脂柱，并用3倍上层大孔树脂体积的纯化水以38v/h的流速洗脱、再用6倍树脂体积的体积百分比浓度为80%的乙醇溶液洗脱，然后将洗脱初液送入下层大孔树脂柱，并用2倍上层大孔树脂体积的纯化水以38v/h的流速洗脱、再用4倍树脂体积的体积百分比浓度为80%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；
（5）结晶纯化：将步骤（4）得到的洗脱液在70℃下减压浓缩，静置析晶，然后将晶体再次溶于水中，重新结晶，干燥制得10-DAB。
Claims (4)
1.一种从红豆杉中提取10-DAB的方法，包括如下步骤：
（1）初粉碎：取一定量的红豆杉枝叶，通过粉碎机进行超细粉碎后过筛，得到粒度为100-300目的粉末；
（2）酶解：往步骤（1）中的粉末加5-10倍量的水，加入由纤维素酶、中性蛋白酶构成的混合酶进行酶解，其中混合酶中纤维素酶的用量为原料粉末总重的2%-5%，中性蛋白酶的用量为原料粉末总重的0.3%-1.0%，酶解温度45-50℃，酶解pH为6.0-7.0，酶解时间为30min，酶解完后加热杀酶，得酶解液；
（3）双水萃取：往步骤（2）得到的酶解液中先加入盐水，盐水的加入量为酶解液总重的50%-60%，盐水的盐度为3-6‰，充分搅拌3-5min后，加入90%的乙醇溶液，充分搅拌10-15min，然后静置分层，收集上层液；
（4）大孔树脂富集、洗脱：取步骤（3）的上层液，上样于上层大孔树脂柱，并用3倍上层大孔树脂体积的纯化水以38v/h的流速洗脱、再用6倍树脂体积的体积百分比浓度为80%的乙醇溶液洗脱，然后将洗脱初液送入下层大孔树脂柱，并用2倍上层大孔树脂体积的纯化水以38v/h的流速洗脱、再用4倍树脂体积的体积百分比浓度为80%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；
（5）结晶纯化：将步骤（4）得到的洗脱液在60-70℃下减压浓缩，静置析晶，然后将晶体再次溶于水中，重新结晶，干燥制得10-DAB。
2.根据权利要求1所述的从红豆杉中提取10-DAB的方法，其特征在于，在酶解进行0.5h后在酶解的同时加超声波，超声波的振动频率为20W、15kHz，超声波处理时间为10-15min。
3.根据权利要求1或2所述的从红豆杉中提取10-DAB的方法，其特征在于，双水萃取时的温度为50-70℃。
4.根据权利要求3所述的从红豆杉中提取10-DAB的方法，其特征在于，往双水萃取得到的下层液中加入90%乙醇，搅拌10-15min后，静置分层，取上层液，上层液混入第一次的上层液中，一起经过步骤（4）、步骤（5）从而制得。
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| CN105671089A (zh) * | 2016-03-03 | 2016-06-15 | 重庆市碚圣医药科技股份有限公司 | 利用红豆杉联产紫杉烷类有效成分和乙醇的方法 |
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