CN107254452A - 一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用 - Google Patents

一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及基因工程和生物酶技术领域，旨在提供一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用。该蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明进一步提供了该蛋白酶的制备方法，以及在制备用于抑制机体衰老和细胞凋亡的药物或保健食品中的应用。本发明的蛋白酶是一种重要的氧化还原平衡调节蛋白酶，在生物体氧化胁迫与损伤修复过程中发挥重要的作用，因此在抗衰老领域具有潜在的应用价值。可通过对ASK1和NF‑κB等因子的结合与调控，抑制机体的衰老和细胞凋亡，使细胞能够进行损伤修复并增殖，延缓细胞的衰老与凋亡，因此它也是肿瘤与癌症治疗的重要靶点之一。本发明蛋白酶的物理特征特征为可溶性形式，且保留天然活性，因而具备广泛应用场景。

Description

一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用
技术领域
本发明属于基因工程和生物酶技术领域，具体涉及一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用。
背景技术
微生物源抗氧化蛋白酶是一类广泛存在于自然界微生物体内的一种蛋白质。该蛋白质具有酶学活性，具有维持生物体内氧化还原平衡、调控生物信号传导、DNA及蛋白质损伤修复等多种功能。由于其来源丰富，容易提纯，分子量小，功能简单等特点，使得该蛋白酶在酶学研究中较早发展起来，同时也具有广泛的药物制备的参考及应用价值。目前，在研究抗氧化酶的过程中，微生物源抗氧化蛋白酶具有强大的抗氧化作用，具有维持细胞内的氧化还原稳态、抗衰老以及肠道保护生物学效应等作用。
现有的抗氧化蛋白酶多数从植物中提取，产量少。因此，研发人员把研究目标集中在微生物菌种的筛选上，希望获得微生物源的抗氧化蛋白酶。但是微生物种类繁多，到底哪种抗氧化蛋白酶更好，不得而知，而且需要进行大量实验进行证实。本发明中的微生物源抗氧化蛋白酶制备技术采用基因工程表达进行实现，克服了植物源抗氧化蛋白酶含量少的缺点，可以批量发酵；同时本发明中的抗氧化蛋白酶为可溶性表达形式避免了其他微生物源蛋白酶为包涵体的缺点。本发明中的抗氧化蛋白酶已在发明人实验室进行了测试，具有抗氧化活性。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，克服现有技术存在的不足，提供一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用。
为解决技术问题，本发明的解决方案是：
提供一种微生物源抗氧化蛋白酶，该蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明进一步提供了所述述微生物源抗氧化蛋白酶在制备用于抑制机体衰老和细胞凋亡的药物或保健食品中的应用。
本发明还提供了所述蛋白酶的制备方法，其特征在于，是以单核细胞增多性李斯特菌野生株的基因组DNA为模版进行PCR扩增反应，获得含有抗氧化蛋白酶目的基因且该基因含有酶切位点的目的片段；将目的基因与载体以限制性内切酶NdeI和XhoI进行双酶切，然后将目的基因连接入表达载体pET30a(+)；连接产物转化到感受态细胞E.coli DH5a感受态细胞中，在Kana/LB固态琼脂培养基上进行培养；将阳性克隆重组菌质粒入感受态细胞E.coli Rosetta中，取单克隆菌落进行扩大培养，经超声破碎、咪唑洗脱和镍离子树脂柱亲和层析，分离纯化得到重组蛋白，即所述微生物源抗氧化蛋白酶。
本发明中，所述制备方法的具体步骤包括：
(1)采用特异性引物对李斯特菌野生株的基因组DNA进行扩增，扩增同时在引物上设计NdeI和XhoI的酶切位点，所述引物的序列序列分别为：
上游引物：5’-TTTCATATGGTAAAAGAAATTACAGATGCAACATTTG-3’；
下游引物：5’-CCGCTCGAGAACGTATTTGTTGATGACTTCATCCAGTTC-3’；
所用PCR扩增体系为：KOD-plus-Neo 1μL，10×PCR Buffer for KOD-plus-Neo 5μL，MgSO4 3μL，dNTPs 5μL，上游引物1μL，下游引物1μL，DNA模板2μL，加ddH2O至50μL；PCR扩增条件为94℃预变性30s，98℃变性10s，60℃退火30s，68℃延伸30s，循环25～35次，最后68℃延伸8～12min；
(2)以限制性内切酶NdeI和XhoI分别双酶切pET30a(+)质粒和扩增产物，电泳后回收目的产物，然后用T4DNA连接酶16℃过夜连接，将目的基因与载体连接；将连接产物转化到感受态细胞E.coli DH5a中，涂布在Kana/LB琼脂固态培养基上，37℃过夜培养，获得重组菌株；在Kana/LB琼脂固态培养基中进行培养时，卡那霉素浓度为50mg/L，琼脂浓度为1.5％；
(3)挑取重组菌株单克隆至5mL Kana/LB琼脂液体培养基中，37℃过夜；培养后抽提质粒，测序；
(4)将测序正确的质粒转化至E.coli Rosetta中，过夜培养；然后挑取重组菌株单克隆至500mL Kana/LB培养基中，在37℃、150r/min下培养；待培养至OD600nm＝0.6时，加入终浓度为0.6mM的IPTG，在30℃、100～300r/min诱导8h，得到蛋白诱导表达菌液；将菌液3700r/min离心15min，弃上清，收集沉淀；然后加入30mL、50mM的PBS，用细胞超声破碎仪将细胞裂解；离心3700r/min离心15min收集上清，上清液与镍柱结合4℃、4h，然后过柱纯化；使用30mL、50mM咪唑洗脱杂蛋白，再以6-8mL、400mM咪唑洗脱目的蛋白，最终得到纯化的活性蛋白，即所述微生物源抗氧化蛋白酶。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1、本发明中的微生物源抗氧化蛋白酶属于硫氧还蛋白(Trx)家族，来源于单核细胞增多性李斯特菌。该蛋白酶是一种重要的氧化还原平衡调节蛋白酶，在生物体氧化胁迫与损伤修复过程中发挥重要的作用，因此在抗衰老领域具有潜在的应用价值。Trx一方面通过与TrxR和NADPH组成Trx系统，对机体内氧化损伤蛋白质进行还原性修复，
并对机体内其它氧化还原系统(如：还原型谷胱甘肽)进行调节，维持细胞内氧化还原稳态。另一方面Trx可作为细胞内的活性氧(ROS)清除剂。ROS是引起细胞凋亡和衰老的关键因素，因此本发明中的抗氧化蛋白酶可通过对ASK1和NF-κB等因子的结合与调控，抑制机体的衰老和细胞凋亡，使细胞能够进行损伤修复并增殖，延缓细胞的衰老与凋亡，因此它也是肿瘤与癌症治疗的重要靶点之一。
2、该方法构建的重组菌并能高效且迅速地表达出具有活性的蛋白，目的蛋白产量高且该蛋白具有很高的抗氧化酶活性，为该蛋白酶在工业化生产、医药保健和抗衰老化妆品成分的创新中提供了更好的技术支撑，具有较高的研究及潜在的应用价值。
3、该微生物源抗氧化蛋白酶的物理特征特征为可溶性形式，且保留天然活性，因而具备广泛应用场景。
附图说明
图1为重组蛋白在大肠杆菌E.coli Rosetta的诱导表达及纯化。
图示中M为蛋白Marker，1、2、3为纯化的重组蛋白。
具体实施方式
下面通过实施例结合附图来对本发明的技术方案作进一步解释，但本发明的保护范围不受实施例任何形式上的限制。
1、重组表达菌的构建
(1)采用特异的引物(SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3)对李斯特菌野生株(如：EGDe参考菌种或ATCC10403S标准菌株)的基因组DNA进行扩增，扩增的同时在引物上设计NdeI和XhoI的酶切位点，扩增引物为：
上游引物：5’-TTTCATATGGTAAAAGAAATTACAGATGCAACATTTG-3’
下游引物：5’-CCGCTCGAGAACGTATTTGTTGATGACTTCATCCAGTTC-3’
PCR扩增体系为：KOD-plus-Neo 1μL，10×PCR Buffer for KOD-plus-Neo 5μL，MgSO4 3μL，dNTPs 5μL，上游引物1μL，下游引物1μL，DNA模板2μL，加ddH2O至50μL。PCR扩增条件为：94℃预变性30s，98℃变性10s，60℃退火30s，68℃延伸30s，循环25～35次，最后68℃延伸8～12min。
(2)以限制性内切酶NdeI和XhoI分别双酶切pET30a(+)质粒和扩增产物，1％电泳后回收目的产物。然后用T4DNA连接酶16℃过夜连接，将目的基因与载体连接。最后将连接产物转化到感受态细胞E.coli DH5a中，涂布在Kana/LB琼脂固态培养基上，37℃静置，过夜培养。在Kana/LB琼脂固态培养基中进行培养，卡那霉素浓度为50mg/L，琼脂浓度为2.0％。对重组菌株用PCR、双酶切质粒和测序等方法进行鉴定。
(3)将测序正确的阳性质粒转化到大肠杆菌感受态细胞E.coli Rosetta中，获得重组蛋白表达菌株。
2、重组蛋白的表达及纯化
挑取重组菌株单克隆至5mL液体Kana/LB培养基中过夜培养，然后取1mL菌液转接入500mL Kana/LB培养基中，在37℃，150r/min下发酵培养。待培养至OD600nm＝0.6时，加入终浓度为0.6mM的IPTG，30℃，100～300r/min诱导8h，得到蛋白诱导表达菌液。将菌液3700r/min离心15min，弃上清，收集沉淀后加入30mL、50mM的PBS，用细胞超声破碎仪将细胞裂解，离心3700r/min离心15min收集上清，上清液与镍柱结合4℃，4h，然后过柱纯化。使用30mL，50mM咪唑洗脱杂蛋白，6-8mL，400mM咪唑洗脱目的蛋白，最终得到纯化的活性蛋白(即微生物源抗氧化蛋白酶)。活性蛋白的纯度用SDS-PAGE方法检测。
初始LB培养基，以质量分数计，包括0.9～1.6％的胰蛋白胨，0.8～1.4％的氯化钠，0.5～0.7％的酵母提取物，余量为去离子水。
3、蛋白酶活性测定
经测序，抗氧化蛋白酶的氨基酸序列如下：(1-103aa)
MVKEITDATFEQETSEGLVLTDFWATWCGPCRMVAPVLEEIQEERGEALKIVKMDVDENPETPGSFGVMSIPTLLIKKDGEVVETIIGYRPKEELDEVINKYV
该氨基酸序列的三联密码子格式如SEQ ID NO.1所示。
抗氧化蛋白酶的还原酶酶活性采用还原氧化态胰岛素的方法进行。
具体方法是：在96孔板中，采用200μl反应体系，分别加入终浓度为10mM PBS溶液，10μM纯化的抗氧化蛋白酶，0.15mM胰岛素，2mM EDTA，1mM DTT，利用酶标仪在OD650nm处检测吸光度值，每个反应设置3个平行实验，酶标仪读数间隔为5min，连续读30分钟。经反复测定获知，发明中的抗氧化蛋白酶利用米氏方程获得酶活动力学参数Km、Vmax和kcat/Km值分别为9.9μM、39.3μM/min和7.94×103min-1M-1。这说明本发明中的抗氧化蛋白酶具有强还原酶活性，符合经典的米氏方程酶学活性特征，即具有抗氧化活性。
本发明所述微生物源抗氧化蛋白酶可用于制备用于抑制机体衰老和细胞凋亡的药物或化妆品。在化妆品或药品中，微生物源抗氧化蛋白酶的添加终浓度为10μM，发挥活性时应以液体形式呈现，建议外用。其作用原理是：该抗氧化蛋白酶可以修复因紫外线、氧化物或衰老因素造成的机体细胞内二硫键的损伤，可以将已被氧化的二硫键重新还原成还原态的二硫键，维持细胞内蛋白的正常生理功能。
<110> 浙江农林大学
<120> 一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用
<160> 3
SEQ ID NO：1
<210> 1
<211> 111
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 微生物源抗氧化蛋白酶
<400> 1
Met Val Lys Glu Ile Thr Asp Ala Thr Phe Glu Gln Glu Thr Ser Glu
1 5 10 15
Gly Leu Val Leu Thr Asp Phe Trp Ala Thr Trp Cys Gly Pro Cys Arg
20 25 30
Met Val Ala Pro Val Leu Glu Glu Ile Gln Glu Glu Arg Gly Glu Ala
35 40 45
Leu Lys Ile Val Lys Met Asp Val Asp Glu Asn Pro Glu Thr Pro Gly
50 55 60
Ser Phe Gly Val Met Ser Ile Pro Thr Leu Leu Ile Lys Lys Asp Gly
65 70 75 80
Glu Val Val Glu Thr Ile Ile Gly Tyr Arg Pro Lys Glu Glu Leu Asp
85 90 95
Glu Val Ile Asn Lys Tyr Val Leu Glu His His His His His His
100 105 110
SEQ ID NO：2
<210> 1
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于对李斯特菌野生株的基因组DNA进行扩增的上游引物
<400> 2 H
TTTCATATGG TAAAAGAAAT TACAGATGCA ACATTTG 37
SEQ ID NO：3
<210> 3
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于对李斯特菌野生株的基因组DNA进行扩增的下游引物
<400> 3
CCGCTCGAGA ACGTATTTGT TGATGACTTC ATCCAGTTC 39

Claims (4)

1.一种微生物源抗氧化蛋白酶，其特征在于，该蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.权利要求1所述微生物源抗氧化蛋白酶在制备用于抑制机体衰老和细胞凋亡的药物或化妆品中的应用。
3.权利要求1所述蛋白酶的制备方法，其特征在于，是以单核细胞增多性李斯特菌野生株的基因组DNA为模版进行PCR扩增反应，获得含有抗氧化蛋白酶目的基因且该基因含有酶切位点的目的片段；将目的基因与载体以限制性内切酶NdeI和XhoI进行双酶切，然后将目的基因连接入表达载体pET30a(+)；连接产物转化到感受态细胞E.coli DH5a感受态细胞中，在Kana/LB固态琼脂培养基上进行培养；将阳性克隆重组菌质粒入感受态细胞E.coliRosetta中，取单克隆菌落进行扩大培养，经超声破碎、咪唑洗脱和镍离子树脂柱亲和层析，分离纯化得到重组蛋白，即所述微生物源抗氧化蛋白酶。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其具体步骤包括：
(1)采用特异性引物对李斯特菌野生株的基因组DNA进行扩增，扩增同时在引物上设计NdeI和XhoI的酶切位点，所述引物的序列序列分别为：
上游引物：5’-TTTCATATGGTAAAAGAAATTACAGATGCAACATTTG-3’；
下游引物：5’-CCGCTCGAGAACGTATTTGTTGATGACTTCATCCAGTTC-3’；
所用PCR扩增体系为：KOD-plus-Neo 1μL，10×PCR Buffer for KOD-plus-Neo 5μL，MgSO4 3μL，dNTPs 5μL，上游引物1μL，下游引物1μL，DNA模板2μL，加ddH2O至50μL；PCR扩增条件为：94℃预变性30s，98℃变性10s，60℃退火30s，68℃延伸30s，循环25～35次，最后68℃延伸8～12min；
(2)以限制性内切酶NdeI和XhoI分别双酶切pET30a(+)质粒和扩增产物，电泳后回收目的产物，然后用T4 DNA连接酶16℃过夜连接，将目的基因与载体连接；将连接产物转化到感受态细胞E.coli DH5a中，涂布在Kana/LB琼脂固态培养基上，37℃过夜培养，获得重组菌株；在Kana/LB琼脂固态培养基中进行培养时，卡那霉素浓度为50mg/L，琼脂浓度为1.5％；
(3)挑取重组菌株单克隆至5mL Kana/LB琼脂液体培养基中，37℃过夜；培养后抽提质粒，测序；
(4)将测序正确的质粒转化至E.coli Rosetta中，过夜培养；然后挑取重组菌株单克隆至500mL Kana/LB培养基中，在37℃、150r/min下培养；待培养至OD600nm＝0.6时，加入终浓度为0.6mM的IPTG，在30℃、100～300r/min诱导8h，得到蛋白诱导表达菌液；将菌液3700r/min离心15min，弃上清，收集沉淀；然后加入30mL、50mM的PBS，用细胞超声破碎仪将细胞裂解；离心3700r/min离心15min收集上清，上清液与镍柱结合4℃、4h，然后过柱纯化；使用30mL、50mM咪唑洗脱杂蛋白，再以6-8mL、400mM咪唑洗脱目的蛋白，最终得到纯化的活性蛋白，即所述微生物源抗氧化蛋白酶。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110699341A (zh) * 2019-10-08 2020-01-17 浙江农林大学 一种微生物源氨基肽酶及其制备与应用
CN110699340A (zh) * 2019-10-08 2020-01-17 浙江农林大学 一种来源于单增李斯特菌的重组氨基肽酶t及应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030235902A1 (en) * 2001-12-13 2003-12-25 Kazuhiko Ishikawa Heat-resistant thioredoxin and related enzymes
CN1694726A (zh) * 2002-09-10 2005-11-09 国家杰威什医疗及研究中心 用于液化粘液或痰液的产品和方法
CN103232979A (zh) * 2013-05-21 2013-08-07 中国人民解放军第二军医大学 一种发形霞水母硫氧还蛋白及其编码基因与应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030235902A1 (en) * 2001-12-13 2003-12-25 Kazuhiko Ishikawa Heat-resistant thioredoxin and related enzymes
CN1694726A (zh) * 2002-09-10 2005-11-09 国家杰威什医疗及研究中心 用于液化粘液或痰液的产品和方法
CN103232979A (zh) * 2013-05-21 2013-08-07 中国人民解放军第二军医大学 一种发形霞水母硫氧还蛋白及其编码基因与应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TOLEDO-ARANA,A等: "登录号NP_464758.1", 《NCBI_GENPEPT》 *
马宇光等: "硫氧还蛋白的结构及在生物抗氧化中的功能", 《生命的化学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110699341A (zh) * 2019-10-08 2020-01-17 浙江农林大学 一种微生物源氨基肽酶及其制备与应用
CN110699340A (zh) * 2019-10-08 2020-01-17 浙江农林大学 一种来源于单增李斯特菌的重组氨基肽酶t及应用

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