CN107252444B - 一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物,包括以下重量份数的原料药:黄芪15‑25份、党参10‑20份、灵芝10‑20份、刺五加10‑20份、女贞子5‑15份、五味子5‑15份、白术5‑15份、甘草1‑10份。所述中草药组合物对前列腺癌发生和前列腺肥大具有明显的抑制效果,且所述原料药均为中国药典收载的常见中草药种类,用药安全可靠、成本低,效果好。本发明还提供了一种上述中草药组合物的制备方法,包括:取上述重量份数的原料药,粉碎后,加入浓度为20%‑90%的乙醇进行浸泡提取或回流提取,然后过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。制备方法简单易操作。本发明还提供了所述的中草药组合物在制备治疗和/或预防前列腺疾病的药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域,具体涉及一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
前列腺疾病是成年男性的常见疾病,包括前列腺肥大及前列腺癌等。前列腺肥大(BPH)又称增生,是一种特殊的组织病理性疾病,其特征表现为基质及上皮细胞的增生。BPH可以导致良性前列腺的增大及尿动力学可以显示的良性前列腺梗阻。前列腺肥大等前列腺疾病属于慢性疾病,发病率高,发病人群广泛,患者需要长期服药,市场空间大。目前治疗前列腺疾病的西药多为外资或合资药厂所生产,价格较高,很多患者由于经济原因而无法承受颇高的治疗费用,从而延误病情;再加上西药长期服用会产生耐药性,毒副反应也比较明显,因此中成药在治疗病情拖沓冗长的前列腺疾病中具有其独特的优势。前列腺癌(PCa)是男性中最常见的癌症,也是导致癌症死亡的主要原因之一。由于前列腺中的肿瘤细胞生长缓慢,这种低风险的PCa一旦被诊断出来,在大多数情况下通常不一定立即采用具有治愈意图的确定治疗立即医治,医生指导推荐治疗的主要选择是主动监测,以作为这些患者立即干预PCa的安全替代方案。然而,这些患者的PCa可以缓慢进展为高危侵袭性癌症,最终需要一种明确的治疗方法。为了避免确定性治疗(主要是放射线或手术)的重大副作用的风险,并提高这些开始时非危及生命的PCa患者的生活质量,需要一种能防止低风险PCa进展的相对经济有效可行的方法。
在发病机制中,前列腺肥大和前列腺癌有许多共同性,例如,前列腺(癌)细胞生长。因此,有必要提供一种用于治疗和/或预防前列腺肥大和前列腺癌的新型药剂。
发明内容
为解决上述问题,本发明提供了一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物,使用所述中草药组合物会抑制前列腺(癌)细胞生长病变,对前列腺肥大和前列腺癌有治疗功效。且这些原料药均为中国药典收载的常见中草药种类,用药安全可靠、成本较低,效果良好。
本发明第一方面提供了一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物,包括以下重量份数的原料药:
黄芪15-25份
党参10-20份
灵芝10-20份
刺五加10-20份
女贞子5-15份
五味子5-15份
白术5-15份
甘草1-10份。
其中,所述中草药组合物,包括以下重量份数的原料药:
黄芪18-21份
党参13-17份
灵芝13-15份
刺五加10-15份
女贞子5-10份
五味子6-10份
白术8-12份
甘草4-7份。
其中,所述中草药组合物,包括以下重量份数的原料药:
黄芪20份
党参15份
灵芝15份
刺五加15份
女贞子10份
五味子10份
白术10份
甘草5份。
本发明第一方面提供的用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物,能够激发人体自身免疫机能来抑制前列腺肥大发展和防治前列腺癌。本发明的原料药均为中国药典收载的常见中草药种类,具有用药安全、成本较低、效果良好等优点。按照传统中草药君臣佐使原理优化种类和配比从而选定这8味中草药,既提升了药效,同时又降低了中草药种类过多所产生的副作用。
本发明第二方面提供了一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物的制备方法,包括:
取第一方面所述的重量份数的原料药,粉碎后,加入浓度为20%-90%的乙醇进行浸泡提取或回流提取,然后过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。
其中,所述浸泡提取的具体操作包括:在原料药中加入浓度为20%-90%的乙醇浸泡2-4次,每次浸泡的时间为20-30h,浸泡时的温度为4℃-80℃,合并浸出液,然后过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。
其中,在原料药中加入浓度为85%的乙醇浸泡2-4次。
其中,所述回流提取的具体操作包括:在原料药中加入浓度为20%-90%的乙醇,加热至78.5℃-80℃回流提取2-4次,每次回流提取的时间为1-3h,合并回流液,然后进行过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。
其中,在原料药中加入浓度为85%的乙醇,加热至78.5℃回流提取3次。
本发明实施例第二方面提供的用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物的制备方法,方法简单易操作,制备成本较低。
本发明第三方面提供了如第一方面所述的中草药组合物在制备治疗和/或预防前列腺疾病的药物中的应用。
其中,所述前列腺疾病包括前列腺肥大或前列腺癌。
其中,所述药物中还包括药学上可接受的载体以制成临床可接受的剂型。
附图说明
图1为正(A)、负(B)离子质谱检测模式下中药组合提取物基峰离子流色谱图;
图2为巨噬细胞吞噬作用流式细胞仪检测图(A)和全部实验数据统计分析图(B);
图3为NOS2基因表达的蛋白印迹图(A)和巨噬细胞一氧化氮产生含量图(B);
图4为提取物诱导巨噬细胞(A)和小鼠脾细胞(B)杀死肿瘤细胞反应;
图5为小鼠治疗前、未经治疗对照组、提取物治疗组的前列腺肿瘤重量称重(A)和病理分级(B)。
具体实施方式
以下所述是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
本发明实施例第一方面提供了一种治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物,包括以下重量份数的原料药:
黄芪15-25份
党参10-20份
灵芝10-20份
刺五加10-20份
女贞子5-15份
五味子5-15份
白术5-15份
甘草1-10份。
本发明实施方式中,所述中草药组合物包括以下重量份数的原料药:
黄芪18-21份
党参13-17份
灵芝13-15份
刺五加10-15份
女贞子5-10份
五味子6-10份
白术8-12份
甘草4-7份;
具体地,所述中草药组合物包括以下重量份数的原料药:
黄芪20份
党参15份
灵芝15份
刺五加15份
女贞子10份
五味子10份
白术10份
甘草5份。
本发明实施例第一方面提供的用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物,能够激发人体自身免疫机能来抑制前列腺肥大发展和防治前列腺癌。其中,本发明的中草药组合物中的原料药均为中国药典收载的常见中草药种类,具有用药安全、成本较低、效果良好等特点。按照传统中草药君臣佐使原理优化种类和配比选定这几味中草药,既提升了药效,同时又降低了中草药种类过多所产生的副作用。
本发明实施例第二方面提供了一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物的制备方法,包括:
取第一方面所述的重量份数的原料药,粉碎后,加入浓度为20%-90%的乙醇进行浸泡提取或回流提取,然后过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。
本发明实施方式中,将所述原料药粉碎至80目。
本发明实施方式中,本发明中草药组合物的提取方法可为浸泡提取或回流提取,这些提取方法简单易操作,且提取率较高。
本发明实施方式中,所述浸泡提取的具体操作包括:在原料药中加入浓度为20%-90%的乙醇浸泡2-4次,每次浸泡的时间为20-30h,浸泡时的温度为4℃-80℃,合并浸出液,然后过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。可选地,采用浓度为60%-90%的乙醇浸泡2-4次,进一步可选地,采用浓度为85%的乙醇浸泡2-4次。进一步可选地,采用浓度为85%的乙醇浸泡3次。可选地,所述乙醇为食用乙醇。采用食用乙醇作为提取溶剂,制备过程环保,制得的中草药组合物中有害成分较少。可选地,所述乙醇与原料药的液固比为1-100mL/g,即每克原料药加入1-100毫升的所述乙醇,进一步可选地,所述浸泡时的温度为4℃-25℃,本发明可在室温下甚至可在低温下进行原料药的浸泡提取,提取方法简单,制备成本较低,易于产业化生产。
本发明实施方式中,所述回流提取的具体操作包括:在原料药中加入浓度为20%-90%的乙醇,加热至78.5℃-80℃回流提取2-4次,每次回流提取的时间为1-3h,合并回流液,然后进行过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。可选地,所述乙醇与原料药的液固比为1-100mL/g。可选地,在原料药中加入浓度为85%的乙醇,加热至78.5℃进行回流提取3次,每次回流提取的时间为2h。可选地,可先将所述原料药用乙醇浸泡后,再进行回流提取。这样有助于进一步提高提取效率。
本发明实施方式中,将滤液经旋蒸浓缩后去除乙醇。
本发明实施例第二方面提供的用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物的制备方法,方法简单易操作,制备成本较低。
本发明第三方面提供了一种如第一方面所述的中草药组合物在制备治疗和/或预防前列腺疾病的药物中的应用。
本发明实施方式中,所述前列腺疾病包括前列腺肥大或前列腺癌。
所述药物中还包括药学上可接受的载体以制成临床可接受的剂型。具体地,剂型包括片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、胶丸、颗粒剂、口服液、糖浆剂、合剂、丸剂、注射剂、冻干粉针剂、乳剂、吸入剂、气雾剂或栓剂等所有药学上可接受的药物制剂,其中片剂包括普通片、包衣片、缓释片、控释片、分散片、口腔崩解片、泡腾片、含片等。
实施例1
一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物的制备方法,包括:
取以下重量份数的原料药:
黄芪20份
党参15份
灵芝15份
刺五加15份
女贞子10份
五味子10份
白术10份
甘草5份。
将上述重量份数的原料药粉碎至80目,加入浓度为85%的食用乙醇浸泡3次,每次浸泡时,乙醇与原料药的液固比为50mL/g,每次浸泡24小时,浸泡时的温度为25℃,合并浸出液进行过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。
实施例2
一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物的制备方法,包括:
取以下重量份数的原料药:
黄芪15份
党参10份
灵芝10份
刺五加10份
女贞子5份
五味子5份
白术5份
甘草1份。
将上述重量份数的原料药粉碎至80目,加入浓度为20%的食用乙醇浸泡2次,每次浸泡时,乙醇与原料药的液固比为1mL/g,每次浸泡30小时,浸泡时的温度为80℃,合并浸出液进行过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。
实施例3
一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物的制备方法,包括:
取以下重量份数的原料药:
黄芪25份
党参20份
灵芝20份
刺五加20份
女贞子15份
五味子15份
白术15份
甘草10份。
将上述重量份数的原料药粉碎至80目,加入浓度为90%的食用乙醇浸泡4次,每次浸泡时,乙醇与原料药的液固比为100mL/g,每次浸泡20小时,浸泡时的温度为4℃,合并浸出液进行过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。
实施例4
一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物的制备方法,包括:
取以下重量份数的原料药:
黄芪18份
党参13份
灵芝13份
刺五加10份
女贞子5份
五味子6份
白术8份
甘草4份。
将上述重量份数的原料药粉碎至80目,在原料药中加入浓度为20%的食用乙醇,乙醇与原料药的液固比为100mL/g,加热至79℃回流提取2次,每次回流提取的时间为3h,合并回流液,过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。
实施例5
一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物的制备方法,包括:
取以下重量份数的原料药:
黄芪21份
党参17份
灵芝15份
刺五加15份
女贞子10份
五味子10份
白术12份
甘草7份。
将上述重量份数的原料药粉碎至80目,在原料药中加入浓度为90%的食用乙醇,乙醇与原料药的液固比为1mL/g,加热至80℃回流提取4次,每次回流提取的时间为1h,合并回流液,过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。
实施例6
一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物的制备方法,包括:
取以下重量份数的原料药:
黄芪20份
党参15份
灵芝15份
刺五加15份
女贞子10份
五味子10份
白术10份
甘草5份。
将上述重量份数的原料药粉碎至80目,在原料药中加入浓度为85%的食用乙醇,乙醇与原料药的液固比为50mL/g,加热至78.5℃回流提取3次,每次回流提取的时间为2h,合并回流液,过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。
对本发明实施例1制得的中草药组合物采用液质联用方法进行成分检测,检测结果如图1所示,图1为实施例1制得的中草药组合物的正(A)、负(B)离子质谱检测模式下中药组合提取物基峰离子流色谱图;其中,A图为正离子质谱检测模式下中药组合提取物基峰离子流色谱图,B图为负离子质谱检测模式下中药组合物提取物基峰离子流色谱图,质谱色谱数据经UNIFI软件分析与中药成分库比对和鉴别,本发明制得的中草药组合物中含有五味子醇甲、葛杜宁(gedunin)、风藤素(Kadsurenin)、五味子乙素、甘草酸、灵芝酸H、紫草素、乙酰异蛇床素B等多种成分,这些成分有助于中草药组合物抑制前列腺肥大和前列腺癌发生。
为了验证该中草药组合制剂对前列腺肥大和前列腺癌发生具有明显的抑制效果,本发明设置了前列腺癌细胞和前列腺癌活体老鼠试验。
1)本配方提取物可在体外激活巨噬细胞发挥吞噬作用。
细胞吞噬是巨噬细胞杀伤肿瘤机制之一。如图2所示,图2为巨噬细胞吞噬作用流式细胞仪检测图(A)和全部实验数据统计分析图(B)。本发明制得的中草药组合物可激活巨噬细胞(RAW264.7细胞)发挥吞噬作用。RAW264.7细胞是小鼠巨噬细胞,与不同浓度的纯净水溶解的中草药组合物(0,25,50或100μg/mL,即取实施例1制得的中草药组合物提取物溶解在纯净水中从而得到浓度为0,25,50或100μg/mL的提取物)培养24小时。通过吞噬FITC共轭珠来测定吞噬作用,并使用流式细胞仪进行定量。图2A为典型的流式细胞仪检测图,显示每组细胞内的吞噬珠数量。图2B全部实验数据表示为每组平均值±标准差(n=6个决定因素)。结果表明,与未处理巨噬细胞相比,所有测试浓度的提取物都能促进RAW264.7巨噬细胞的吞噬作用(P=0.0288,单因素方差分析,n=6),在浓度为25μg/mL时吞噬作用达到最高水平(12.32±0.75%),而未处理对照组的吞噬作用为9.64±0.3%(P<0.0001,t检验,n=6)。
2)提取物可在体外刺激巨噬细胞产生TNF-α、一氧化氮和其他炎症介质
表1.提取物诱导RAW264.7巨噬细胞中基因表达
RAW264.7巨噬细胞无提取物处理或用100μg/ml提取物处理24h。使用PCR芯片测定与“炎症反应和自身免疫”相关的84个基因表达。从表1中可以看出,表1中所列经提取物处理的基因表达变化具有统计意义。
图3为NOS2基因表达的蛋白印迹图(A)和巨噬细胞一氧化氮产生含量图(B)。图3显示提取物可对巨噬细胞中NOS2基因表达上调并促进一氧化氮生产。蛋白质提取物(诱导型一氧化氮合成酶和β-肌动蛋白)是从培养的RAW264.7巨噬细胞用100μg/mL提取物处理24h后制备,对照组是没有提取物处理细胞。图3A为NOS2蛋白表达的蛋白印迹分析。图3B为用不同浓度提取物(0、25、50或100μg/mL)处理RAW264.7巨噬细胞培养中一氧化氮的产生含量图。
上述结果表明,本发明制得的提取物可在体外刺激巨噬细胞产生TNF-α、一氧化氮和其他炎症介质。
3)提取物可促进体外免疫细胞的肿瘤杀伤活性
为了评价提取物激活免疫细胞的抗肿瘤活性,使用共同细胞培养方法进行了细胞毒性测定。图4为提取物诱导巨噬细胞(A)和脾细胞(B)杀死肿瘤细胞反应。图4显示提取物可激活免疫细胞(巨噬细胞或脾细胞)杀伤肿瘤细胞活性。
图4A中,将小鼠前列腺肿瘤细胞(TRAMP-C2)与RAW264.7细胞(1:1)共同培养。图3B中,来自6只不同TRAMP小鼠的脾细胞与小鼠前列腺肿瘤细胞(TRAMP-C2)共同培养(1:1,n=5),加不同浓度(0,25,50或100μg/mL)的提取物培养24小时(图中6条折线分别代表6只不同小鼠的脾细胞)。采用Calcein-AM释放试验测定细胞死亡率。
如图4A所示,在没有巨噬细胞状况下(即图中0:1表示的折线),提取物没有单独对TRAMP-C2肿瘤细胞有任何细胞杀伤作用,而在TRAMP-C2肿瘤细胞与RAW264.7细胞的共培养物中,加入提取物诱导肿瘤细胞死亡,从没有提取物的共培养物中的35.53±5.33%细胞死亡率增加到用100μg/mL提取物处理共培养物的64.5±4.17%(P<0.0001,单因素方差分析,n=17-20)。提取物诱导抗肿瘤免疫反应进一步在TRAMP小鼠脾细胞得到了证实。如图4B所示,在不同TRAMP小鼠中,提取物对脾细胞杀伤肿瘤功能有不同程度的促进,并以剂量依赖的方式增加。来自6只小鼠的全部累积数据的统计学分析显示,在没有提取物处理的共培养物中,肿瘤细胞死亡率为8.96±2.75%,用25μg/mL提取物处理的共培养物增加至13.49±3.19%,用50μg/mL提取物处理增加至40.65±10.9%,用100μg/mL提取物处理为31.27±7.99%(P=0.0152,单因素方差分析,n=6)。综合起来,该数据显示了共培养物中提取物对免疫细胞(包括巨噬细胞)的前列腺癌细胞杀伤有促进作用。
4)通过口服提取物可抑制TRAMP小鼠的肿瘤生长
TRAMP小鼠是前列腺癌的临床前模型,用提取物口服给药12周。图5为雄性TRAMP小鼠(8-12周龄)给予含有提取物(0.5mg/mL)的饮用水12周。图5A为治疗前、未治疗对照组和用提取物治疗后的每只小鼠的肿瘤重量称重。图5B为提取物治疗组与对照组相比较的每只小鼠前列腺肿瘤的病理分级。
如图5A所示,在没有任何处理时(对照组),小鼠的肿瘤重量从治疗前或开始时的0.07617±0.02313g(n=6)增加到1.671±0.5124g(n=12)实验结束(P=0.0456,双尾t检验),但通过饮用水中含提取物治疗的小鼠中肿瘤并没有生长,在提取物处理的小鼠中肿瘤重量为(0.4823±0.2836g,n=18),这个重量与治疗前组比(P=0.4242,双尾t检验)没有显着差异,或者与对照组或未治疗组相比,肿瘤生长有显著抑制(P=0.0368,双尾t-测试)。这也可以说明本发明的中草药组合物也可以抑制前列腺肿瘤肥大的发展。
在治疗结束时,对这些小鼠的前列腺肿瘤分化进行组织学分级。图5B显示,在提取物处理组,肿瘤分级组织学评分为(2.944±0.2291,n=18)显著低于对照组(3.887±0.3836,n=12)(P=0.0364,双尾t检验)。总之,口服中草药提取物可以显著抑制TRAMP小鼠中的前列腺癌病变。
本发明还对其他实施例进行了上述类似的试验,结果均能表明该中草药组合物对前列腺肥大和前列腺癌病变具有明显的抑制效果。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (9)
1.一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物,其特征在于,由以下重量份数的原料药组成:
黄芪 15-25份
党参 10-20份
灵芝 10-20份
刺五加 10-20份
女贞子 5-15份
五味子 5-15份
白术 5-15份
甘草 1-10份;
其中,所述前列腺疾病为前列腺肥大或前列腺癌。
2.如权利要求1所述的中草药组合物,其特征在于,由以下重量份数的原料药组成:
黄芪 18-21份
党参 13-17份
灵芝 13-15份
刺五加 10-15份
女贞子 5-10份
五味子 6-10份
白术 8-12份
甘草 4-7份。
3.如权利要求1所述的中草药组合物,其特征在于,由以下重量份数的原料药组成:
黄芪 20份
党参 15份
灵芝 15份
刺五加 15份
女贞子 10份
五味子 10份
白术 10份
甘草 5份。
4.一种用于治疗和/或预防前列腺疾病的中草药组合物的制备方法,其特征在于,包括:
取如权利要求1-3任一项所述的重量份数的原料药,粉碎后,加入浓度为20%-90%的乙醇进行浸泡提取或回流提取,然后过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物;其中,所述前列腺疾病为前列腺肥大或前列腺癌。
5.如权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述浸泡提取的具体操作包括:在原料药中加入浓度为20%-90%的乙醇浸泡2-4次,每次浸泡的时间为20-30h,浸泡时的温度为4℃-80℃,合并浸出液,然后过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。
6.如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,在原料药中加入浓度为85%的乙醇浸泡2-4次。
7.如权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述回流提取的具体操作包括:在原料药中加入浓度为20%-90%的乙醇,加热至78.5℃-80℃回流提取2-4次,每次回流提取的时间为1-3h,合并回流液,然后进行过滤,将滤液经旋蒸浓缩和冷冻干燥后,制得所述中草药组合物。
8.如权利要求7所述的制备方法,其特征在于,在原料药中加入浓度为85%的乙醇,加热至78.5℃回流提取3次。
9.如权利要求1所述的中草药组合物在制备治疗和/或预防前列腺疾病的药物中的应用,所述前列腺疾病为前列腺肥大或前列腺癌。
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