CN107212245B - 铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物领域，具体公开了铜绿假单胞菌的新用途，即铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的新应用。本发明通过实验证明铜绿假单胞菌可高效降解棒曲霉素，铜绿假单胞菌作为棒曲霉素降解的生物材料，在开发新的生物降解菌剂和生物降解无菌制剂方面都具有很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体地说，涉及铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的应用。
背景技术
棒曲霉素(patulin)，又称展青霉素，是一种具有神经毒性的真菌代谢产物，广泛存在于多种食品、饲料加工原料中，在以苹果为加工原料的产品中尤为突出。大量的研究表明，棒曲霉素具有基因毒性、细胞毒性、免疫毒性和生殖毒性，能够导致哺乳动物细胞的DNA损伤，染色体畸变和微核形成，并且会损害动物的肾脏、肝脏和肠等器官组织，严重危害人及动物的健康。随着苹果汁、苹果浓缩汁、苹果酒等在人们日常饮食中所占比例的不断增加，世界卫生组织(World Health Organization,WHO)对食品中棒曲霉素的最低限量做了严格规定(＜50μg·L-1)，并有不断降低的趋势。
棒曲霉素去毒方法可分为物理、化学和生物三大类，其中生物法因具有效率高、特异性强以及对食品、饲料和环境没有污染的特点，利用生物手段进行棒曲霉素的降解则成为近年来棒曲霉素毒素降解研究的热点。
现有技术公开了铜绿假单胞菌在降解高效氯氰菊酯、玉米赤霉烯酮、黄曲霉素、赭曲霉素等方面的应用，但尚未见到铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素方面的研究和报道。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的新应用。
为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：
本发明首先提供了一种铜绿假单胞菌的新用途，即铜绿假单胞菌在降解棒曲霉素中的应用。
本发明保护铜绿假单胞菌和/或铜绿假单胞菌发酵液和/或铜绿假单胞菌代谢产物在降解棒曲霉素中的应用。
本发明还保护铜绿假单胞菌和/或铜绿假单胞菌发酵液和/或铜绿假单胞菌代谢产物在制备产品中的应用；所述产品的用途为降解棒曲霉素。
本发明还保护一种降解棒曲霉素的方法，为使用铜绿假单胞菌和/或铜绿假单胞菌发酵液和/或铜绿假单胞菌代谢产物对棒曲霉素进行降解处理。
所述方法中，降解处理的方式为将铜绿假单胞菌和/或铜绿假单胞菌发酵液和/或铜绿假单胞菌代谢产物与含有棒曲霉素的样品混合。
本发明还保护一种产品，其活性成分为铜绿假单胞菌和/或铜绿假单胞菌发酵液和/或铜绿假单胞菌代谢产物；所述产品的用途为降解棒曲霉素。
在本发明的一个具体实施方式中，所述铜绿假单胞菌，具体为保藏编号为：CGMCCNo.8511的铜绿假单胞菌N17-1。
本发明涉及到的原料或试剂均为普通市售产品，涉及到的操作如无特殊说明均为本领域常规操作。
本发明的有益效果在于：
本发明通过实验证明，首次发现了铜绿假单胞菌可高效降解棒曲霉素。铜绿假单胞菌作为棒曲霉素降解的生物材料，在开发新的生物降解菌剂和生物降解无菌制剂方面都具有很好的应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例1中LC检测结果图。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
铜绿假单胞菌N17-1(Pseudomonas aeruginosa)：保藏编号：CGMCC No.8511。记载并保护“铜绿假单胞菌N17-1”的专利的申请号为：201410001212.1，授权公告号为CN103710292B(授权公告日为2016.01.20)。
ppb：μg/L。
棒曲霉素，标准品:Sigma-Aldrich,产品编号：P1639。
棒曲霉素的结构式如下：
实施例1、铜绿假单胞菌N17-1对棒曲霉素的降解作用
NB液体培养基：由溶剂和溶质组成；溶质为蛋白胨、牛肉膏和NaCl，溶剂为水；蛋白胨在NB液体培养基中的浓度为1g/100ml，牛肉膏在NB液体培养基中的浓度为0.3g/100ml，NaCl在NB液体培养基中的浓度为0.5g/100ml。
1、将铜绿假单胞菌N17-1接种于液体NB培养基中至初始OD600nm＝0.05，37℃条件下，200rpm(旋转半径20mm)震荡培养24h，收集全部菌液(即含有菌体和上清在内的整个培养体系)。
2、将1mg棒曲霉素标准品溶解于10ml色谱纯甲醇中获得浓度为100ppm的棒曲霉素溶液。
3、制备实验组溶液：
菌悬液充分混匀后，取1.0ml步骤1收集的菌液，置于1.5ml离心管中，10000g离心10min，弃上清，加入1ml PBS(pH4.0，0.05mol/L)，涡旋混匀，再次于10000g离心10min，反复洗涤3次。弃上清，加入0.99mL PBS溶液，涡旋混合使菌体分散开，向离心管中加入10μL步骤2得到的棒曲霉素溶液，充分混匀后于恒温振荡器中37℃，200r/min避光培养72小时，得到实验组溶液。
4、制备对照组溶液：
以0.99ml PBS加入10μL的棒曲霉素溶液(100ppm)作为对照组，记作对照组溶液。
5、效果检测：
实验组溶液和对照组溶液分别作为待测溶液，进行如下步骤：
(1)待测溶液经过10000g离心10min后，吸取上清液，0.22μm滤膜过滤，避光冻存，以备HPLC分析。
(2)取步骤(1)得到的上清液，进行LC(液相色谱)。
Waters 2695高效液相色谱系统(Waters 2478紫外检测器)，色谱柱：Agilent TC-C18，4.6×250mm，粒径5μm；流动相：乙腈/水(10:90，V/V)；检测波长：276nm；流速：1.0ml/min；柱温：室温；进样量：20μl。
用棒曲霉素标准品的梯度稀释液代替样品液进行上述步骤。
计算棒曲霉素降解率，计算方法为：
降解率(％)＝(对照组棒曲霉素含量-实验组棒曲霉素含量)/对照组棒曲霉素含量×100％。
实验重复三次，结果取平均值。
LC检测结果如图1所示。图1中，A为棒曲霉素标准品的分析结果，B为对照组溶液的分析结果，C为实验组溶液的分析结果。结果表明，铜绿假单胞菌N17-1对棒曲霉素有较好的降解效果，经过统计降解率为93.4±0.4％。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (5)
1.铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)N17-1在降解棒曲霉素中的应用，所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCC No.8511。
2.铜绿假单胞菌N17-1发酵液在降解棒曲霉素中的应用，所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCC No.8511。
3.一种降解棒曲霉素的方法，其特征在于，使用铜绿假单胞菌N17-1和/或铜绿假单胞菌N17-1发酵液对棒曲霉素进行降解处理，所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCCNo.8511。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，将铜绿假单胞菌N17-1和/或铜绿假单胞菌N17-1发酵液与含有棒曲霉素的样品混合。
5.一种降解棒曲霉素的产品，其特征在于，含有铜绿假单胞菌N17-1和/或铜绿假单胞菌发酵液，所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCC No.8511。
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