CN107190030A - 在纤维二糖脱氢酶存在下增加纤维素材料水解的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及在纤维二糖脱氢酶存在下增加纤维素材料水解的方法，具体地涉及用包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽降解或转化纤维素材料的方法，产生发酵产物的方法，和发酵纤维素材料的方法。

Description

在纤维二糖脱氢酶存在下增加纤维素材料水解的方法

本发明申请是基于申请日为2009年12月17日、申请号为200980157176.5(国际申请号为PCT/US2009/068563)、名称为“在纤维二糖脱氢酶存在下增加纤维素材料水解的方法”的发明专利申请的分案申请。

涉及序列表

本申请含有通过EFS电子提交的序列表，其通过提述并入本文。

发明背景

技术领域

本发明涉及用于在纤维二糖脱氢酶存在下增加用酶组合物进行的纤维素材料水解的方法。

相关技术

纤维素是单糖葡萄糖通过β-1,4-键连接的聚合物。许多微生物产生水解β-连接葡聚糖的酶。这些酶包括内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。内切葡聚糖酶在随机位置消化纤维素聚合物，使其对纤维二糖水解酶的攻击开放。纤维二糖水解酶接着从纤维素聚合物的末端释放纤维二糖分子。纤维二糖是葡萄糖的水溶性β-1,4-连接二聚体。β-葡糖苷酶水解纤维二糖为葡萄糖。

纤维二糖脱氢酶作为多种真菌物种的纤维素降解蛋白体的组分分泌。该酶为单亚基、多域的催化纤维二糖至纤维二糖酸内酯的氧化的酶，同时还原多种底物。氧化底物很大程度上取决于具体的纤维二糖脱氢酶，并包括但不限于铁、氧化的分类、细胞色素C、金属离子和分子氧。

已提出或提示纤维二糖脱氢酶活性的几种生物功能。其包括但不限于过氧化氢自由基介导的纤维素剪切，脱木质化，木侵袭(wood invasion)，病原体防御和混合真菌群体中的选择优势。

已显示纤维二糖脱氢酶参与纤维素的解聚，其已归于在纤维二糖和Fe(II)或其他还原金属的存在下由纤维二糖脱氢酶(Mansfield等,1997,Appl.Environ.Microbiol.63(10):3804-3809)生成活性氧物质(ROS)。亦将脱木质化功能归于纤维二糖脱氢酶，同样是与漆酶或木质素过氧化物酶一同生成ROS。亦提出ROS的纤维二糖脱氢酶生成可能为针对利用木素纤维素的病原体和更具攻击性的真菌菌种的防卫机理。

尽管本领域提出当添加至纤维素酶混合物时，纤维二糖脱氢酶具有解聚作用，因此具有温和的增强作用(Mansfield等,1997,见上)，本发明观察到纤维二糖脱氢酶对于纤维素酶组合物可具抑制性。

本发明提供了用于减少纤维二糖脱氢酶对酶组合物进行的纤维素材料水解的抑制作用的方法。

发明内容

本发明涉及用于降解或转化纤维素材料的方法，包括：用包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的酶组合物处理纤维素材料。

本发明还涉及用于产生发酵产物的方法，包括：

(a)用包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的酶组合物糖化纤维素材料；

(b)用一种或多种(几种)发酵微生物发酵经糖化的纤维素材料以产生所述发酵产物；和

(c)从发酵回收所述发酵产物。

本发明进一步涉及发酵纤维素材料的方法，包括：用一种或多种(几种)发酵微生物发酵所述纤维素材料，其中所述纤维素材料经包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的酶组合物水解。

具体地，本发明涉及如下各项：

1.一种用于降解或转化纤维素材料的方法，包括：用包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的酶组合物处理所述纤维素材料。

2.项1的方法，其中所述一种或多种(几种)纤维素分解酶选自下组：内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。

3.项1或2的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：半纤维素酶、酯酶、蛋白酶、漆酶和过氧化物酶。

4.项1-3任一项的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：木聚糖酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、木糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶，及其组合。

5.项1-4任一项的方法，其中所述纤维素材料经预处理。

6.项1-5任一项的方法，进一步包括回收经降解的纤维素材料。

7.项6的方法，其中所述经降解的纤维素材料是糖。

8.一种用于产生发酵产物的方法，包括：

(a)用包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的酶组合物糖化纤维素材料；

(b)用一种或多种(几种)发酵微生物发酵所述经糖化的纤维素材料以产生所述发酵产物；和

(c)从发酵回收所述发酵产物。

9.项8的方法，其中所述一种或多种(几种)纤维素分解酶选自下组：内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。

10.项8或11的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：半纤维素酶、酯酶、蛋白酶、漆酶和过氧化物酶。

11.项8-10任一项的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：木聚糖酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、木糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶，及其组合。

12.项8-11任一项的方法，其中所述纤维素材料经预处理。

13.项8-12任一项的方法，其中所述发酵产物是醇、有机酸、酮、氨基酸或气体。

14.一种发酵纤维素材料的方法，包括：用一种或多种(几种)发酵微生物发酵所述纤维素材料，其中所述纤维素材料经包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的酶组合物水解。

15.项14的方法，其中所述纤维素材料的发酵产生发酵产物。

16.项15的方法，进一步包括从发酵回收所述发酵产物。

17.项14-16任一项的方法，其中所述纤维素材料在糖化之前或在发酵过程中经预处理。

18.项14-17任一项的方法，其中所述一种或多种(几种)纤维素分解酶选自下组：内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。

19.项14-18任一项的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：半纤维素酶、酯酶、蛋白酶、漆酶和过氧化物酶。

20.项14-19任一项的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：木聚糖酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、木糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶，及其组合。

21.项14-20任一项的方法，其中所述发酵产物是醇、有机酸、酮、氨基酸或气体。

附图简述

图1显示嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)纤维二糖脱氢酶在具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)GH61A肽存在和不存在下对里氏木霉纤维素分解酶组合物水解微晶纤维素的作用。嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶和桔橙热子囊菌GH61A多肽表示为相对于里氏木霉纤维素酶组合物的基础加载，每克纤维素蛋白mg数的百分比增加(percent addition)。显示了来自三次重复水解的误差棒。

图2显示了特异腐质霉(Humicola insolens)纤维二糖脱氢酶在具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A肽存在和不存在下对里氏木霉纤维素分解酶组合物水解微晶纤维素的作用。特异腐质霉纤维二糖脱氢酶和桔橙热子囊菌GH61A多肽表示为相对于里氏木霉纤维素酶组合物的基础加载，每克纤维素蛋白mg数的百分比增加。显示了来自三次重复水解的误差棒。

图3显示了嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(CBDH)在具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A肽存在和不存在下(GH61A)对里氏木霉纤维素分解酶组合物水解经预处理的玉米秸秆的作用。嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶和桔橙热子囊菌GH61A多肽表示为相对于里氏木霉纤维素酶组合物的基础加载，每克纤维素蛋白mg数的百分比增加。显示了来自三次重复水解的误差棒。

图4显示了特异腐质霉纤维二糖脱氢酶、具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A和米曲霉(Aspergillus oryzae)CEL3A β-葡糖苷酶的组合对微晶纤维素的水解的作用。特异腐质霉纤维二糖脱氢酶、桔橙热子囊菌GH61A多肽和米曲霉CEL3A β-葡糖苷酶表示为相对于里氏木霉纤维素酶组合物的基础加载，每克纤维素蛋白mg数的百分比增加。显示了来自三次重复水解的误差棒。

图5显示了特异腐质霉纤维二糖脱氢酶、具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A多肽和米曲霉CEL3A β-葡糖苷酶对磷酸溶胀的纤维素的水解的作用。

图6显示了特异腐质霉纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A多肽对米曲霉CEL3A β-葡糖苷酶转化细菌纤维素的作用。特异腐质霉纤维二糖脱氢酶、桔橙热子囊菌GH61A多肽和米曲霉CEL3A β-葡糖苷酶表示为每克纤维素蛋白mg数的百分比增加。显示了来自三次重复水解的误差棒。

定义

纤维素分解增强活性：术语“纤维素分解增强活性”在本文中定义为增强具有纤维素分解活性的多肽水解纤维素材料的生物学活性。就本发明而言，通过测量由纤维素酶蛋白在下述条件下水解纤维素材料所导致的还原糖增加或纤维二糖与葡萄糖的总量增加来确定纤维素分解增强活性：1-50mg总蛋白/g PCS中的纤维素，其中总蛋白包含50-99.5％w/w的纤维素分解蛋白，及0.5-50％w/w的具有纤维素分解增强活性的蛋白质，在50-65℃历时1-7天，与用相等的总蛋白加载量而无纤维素分解增强活性(1-50mg纤维素酶蛋白/g PCS中的纤维素)所进行的对照水解相比。在一个优选的方面，在总蛋白重量的3％的米曲霉β-葡糖苷酶(根据WO 02/095014在米曲霉中重组产生)或者总蛋白质量的3％的烟曲霉β-葡糖苷酶(如WO 2002/095014所述在米曲霉中重组产生)存在下使用1.5L(Novozymes A/S,Denmark)的混合物作为纤维素分解活性的来源。

具有纤维素分解增强活性的多肽通过降低达到相同水解水平所需的纤维素分解酶的量而增强由具有纤维素分解活性的多肽催化的纤维素材料的水解，优选降低至少1.01倍，更优选至少1.05倍，更优选至少1.10倍，更优选至少1.25倍，更优选至少1.5倍，更优选至少2倍，更优选至少3倍，更优选至少4倍，更优选至少5倍，甚至更优选至少10倍，并且最优选至少20倍。

家族61糖苷水解酶：术语“家族61糖苷水解酶”或“家族GH61”在本文中定义为根据Henrissat B.,1991,A classification of glycosyl hydrolases based on amino-acidsequence similarities,Biochem.J.280:309-316,及Henrissat B.,和Bairoch A.,1996,Updating the sequence-based classification of glycosyl hydrolases,Biochem.J.316:695-696属于糖苷水解酶家族61的多肽。目前，Henrissat将GH61家族列为未分类的，这表明对属于该家族的多肽，如机理，催化性亲核体/碱以及催化性质子供体等性质是未知的。

纤维二糖脱氢酶：术语“纤维二糖脱氢酶”在本文中定义为纤维二糖:受体1-氧化还原酶(E.C.1.1.99.18)，其在受体存在下催化纤维二糖转化为纤维二糖酸-1,5-内酯和还原的受体。2,6-二氯靛酚可充当受体，铁，特别是Fe(SCN)₃、分子氧、泛醌或细胞色素C以及可能的许多其他多酚类亦可。该酶的底物包括纤维二糖、纤维寡糖、乳糖和D-葡糖基-1,4-β-D-甘露糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露二糖、硫代纤维二糖(thiocellobiose)、半乳糖基-甘露糖、木二糖、木糖。电子供体优选为在还原端具有葡萄糖或甘露糖的β-1-4二己糖，尽管α-1-4己糖苷、己糖、戊糖和β-1-4五邻体(pentomer)亦显示充当这些酶的底物(Henriksson等,1998,Biochimica et Biophysica Acta-Protein Structure and MolecularEnzymology；1383:48-54；和Schou等,1998,Biochem.J.330:565-571)。

纤维二糖脱氢酶包含两个家族，1和2，其差异在于纤维素结合基序(CBM)的存在。纤维二糖脱氢酶的3维结构特征在于两个球状域，每个含有两个辅酶之一：血红素或黄素。活性位点位于两个域之间的缝隙。纤维二糖脱氢酶的催化循环遵循有序的顺序机理。纤维二糖的氧化通过从纤维二糖至黄素的2电子转移发生，生成纤维二糖酸-1,5-内酯和还原的黄素。活性FAD通过电子转移至血红素基团而再生，留下还原的血红素。天然状态的血红素通过与氧化底物在第二活性位点反应来再生。

氧化底物优选为铁氰化铁(iron ferricyanide)、细胞色素C或氧化的酚类化合物如二氯靛酚(DCIP)，其为常用于色度法测定的底物。金属离子和O₂亦为底物，但对于大多数纤维二糖脱氢酶，对于这些底物的反应速率比对于铁或有机氧化剂观察到的要低几个数量级。在纤维二糖酸内酯释放之后，产物可进行自发的开环以生成纤维二糖酸(Hallberg等,2003,J.Biol.Chem.278:7160-7166)。

纤维素分解活性：术语“纤维素分解活性”在本文中定义为水解纤维素材料的生物学活性。测量纤维素分解活性的两种基本方法包括：(1)测量总纤维素分解活性，和(2)测量单独的纤维素分解活性(内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶)，如Zhang等,Outlook for cellulase improvement:Screening and selection strategies,2006,Biotechnology Advances 24:452-481所综述的。总纤维素分解活性通常是使用不溶性底物来测定的，所述底物包括Whatman No.1滤纸、微晶纤维素、细菌纤维素、藻类纤维素、棉花、经预处理的木素纤维素等。最常见的总纤维素分解活性测定法是使用Whatman No.1滤纸作为底物的滤纸测定法。该测定法是由International Union of Pure and AppliedChemistry(IUPAC)(Ghose,1987,Measurement of cellulase activities,PureAppl.Chem.59:257-68)确立的。

就本发明而言，纤维素分解活性通过测量在下述条件下由纤维素分解酶进行的纤维素材料水解的增加来确定：1-20mg的纤维素分解蛋白/g的PCS中纤维素在50-65℃进行3-7日，与未添加纤维素分解蛋白的对照水解相比较。通常条件为：1ml反应液，经洗涤或未洗涤的PCS，5％不溶性固形物，50mM乙酸钠，pH 5，1mM MnSO₄，50-65℃，72小时，通过HPX-87H柱(Bio-Rad Laboratories,Inc.,Hercules,CA,USA)进行糖分析。

内切葡聚糖酶：术语“内切葡聚糖酶”在本文中定义为内切-1,4-(1,3；1,4)-β-D-葡聚糖4-葡聚糖水解酶(endo-1,4-β-D-glucan 4-glucanohydrolase)(E.C.3.2.1.4)，其催化纤维素、纤维素衍生物(例如羧甲基纤维素和羟乙基纤维素)、地衣淀粉(lichenin)中的1,4-β-D-糖苷键、混合的β-1,3葡聚糖例如谷类β-D-葡聚糖或木葡聚糖和含有纤维素成分的其它植物材料中的β-1,4键的内水解(endohydrolysis)。内切葡聚糖酶活性可基于底物粘度的减少或由还原糖测定法(Zhang等,2006,Biotechnology Advances 24:452-481)确定的还原端增加来确定。就本发明而言，根据Ghose,1987,Pure and Appl.Chem.59:257-268的方法，使用羧甲基纤维素(CMC)水解来测定内切葡聚糖酶活性。

纤维二糖水解酶：术语“纤维二糖水解酶”在本文中定义为1,4-β-D-葡聚糖纤维二糖水解酶(1,4-beta-D-glucan cellobiohydrolase)(E.C.No.3.2.1.91)，其催化纤维素、纤维素寡糖，或任何包含β-1,4-连接葡萄糖的聚合物中的1,4-β-D-糖苷键的水解，从链的还原或非还原末端释放纤维二糖(Teeri,1997,Crystalline cellulose degradation:Newinsight into the function of cellobiohydrolases,Trends in Biotechnology 15:160-167；Teeri等,1998,Trichoderma reesei cellobiohydrolases:why so efficienton crystalline cellulose？,Biochem.Soc.Trans.26:173-178)。就本发明而言，根据vanTilbeurgh等,1982,FEBS Letters 149:152-156及van Tilbeurgh和Claeyssens,1985,FEBS Letters 187:283-288描述的方法使用荧光性二糖衍生物4-甲基伞形基-β-D-乳糖苷来测定纤维二糖水解酶活性。

β-葡糖苷酶：术语“β-葡糖苷酶”在本文中定义为β-D-葡糖苷葡糖水解酶(beta-D-glucoside glucohydrolase)(E.C.No.3.2.1.21)，其催化末端非还原β-D-葡萄糖残基的水解，并释放β-D-葡萄糖。就本发明而言，根据Venturi等,2002,Extracellular beta-D-glucosidase from Chaetomium thermophilum var.coprophilum:production,purification and some biochemical properties,J.Basic Microbiol.42:55-66描述的基本方法测定β-葡糖苷酶活性。一个单位的β-葡糖苷酶活性定义为在40℃,pH 5，以1mM对硝基苯基-β-D-葡糖吡喃糖苷为底物，在含有0.01％20的100mM柠檬酸钠中每分钟产生1.0微摩尔对硝基苯酚。

木聚糖降解活性：术语“木聚糖降解活性”或“木聚糖分解活性”在本文中定义为水解含木聚糖材料的生物学活性。两种测定木聚糖分解活性的基础方法包括：(1)测定总木聚糖分解活性，和(2)测定单独的木聚糖分解活性(内切木聚糖酶、β-木糖苷酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、α-葡糖醛酸糖苷酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶和α-葡糖醛酸酯酶)。最近在木聚糖分解酶测定法的进展总结于几个公开文献中，包括Biely和Puchard,Recent progress inthe assays of xylanolytic enzymes,2006,Journal of the Science of Food andAgriculture 86(11):1636-1647；Spanikova和Biely,2006,Glucuronoyl esterase-Novelcarbohydrate esterase produced by Schizophyllum commune,FEBS Letters 580(19):4597-4601；Herrmann,Vrsanska,Jurickova,Hirsch,Biely和Kubicek,1997,The beta-D-xylosidase of Trichoderma reesei is a multifunctional beta-D-xylanxylohydrolase,Biochemical Journal 321:375-381。

总木聚糖降解活性可通过确定从多种类型的木聚糖形成的还原糖来测量，所述木聚糖包括燕麦小麦(oat spelt)、山毛榉木(beechwood)和落叶松木(larchwood)木聚糖，或者可通过光度法确定从多种共价染色的木聚糖释放出的染色的木聚糖片段来测量。最常见的总木聚糖分解活性测定法基于从多聚的4-O-甲基葡糖醛酸木聚糖产生还原糖，如Bailey,Biely,Poutanen,1992,Interlaboratory testing of methods for assay ofxylanase activity,Journal of Biotechnology 23(3):257-270中所述。

就本发明而言，木聚糖降解活性是通过测量由木聚糖降解酶在下述通常条件下造成的桦木木聚糖(Sigma Chemical Co.,Inc.,St.Louis,MO,USA)水解的增加来确定的：1ml反应液，5mg/ml底物(总固形物)，5mg木聚糖分解蛋白质/g底物，50mM乙酸钠pH 5，50℃，24小时，如Lever,1972,A new reaction for colorimetric determination ofcarbohydrates,Anal.Biochem 47:273-279所述使用对羟基苯甲酸酰肼(PHBAH)测定法进行糖分析。

木聚糖酶活性：术语“木聚糖酶活性”在本文中定义为1,4-β-D-木聚糖-木聚糖水解酶活性(E.C.3.2.1.8)，其催化木聚糖中1,4-β-D-木糖苷键的内水解。就本发明而言，木聚糖酶活性是使用桦木木聚糖作为底物确定的。一个单位的木聚糖酶活性定义为在50℃，pH 5从每升2g桦木木聚糖作为底物在含有0.01％20的50mM乙酸钠中水解的起始期间每分钟产生1.0μmol还原糖(以葡萄糖当量(glucose equivalents)测定，如Lever,1972,A new reaction for colorimetric determination of carbohydrates,Anal.Biochem 47:273-279所述)。

β-木糖苷酶活性：术语“β-木糖苷酶活性”在本文中定义为β-D木糖苷木糖水解酶(E.C.3.2.1.37)，其催化短β(1→4)木寡糖(xylooligosaccharide)的外水解以从非还原端去除连续的D-木糖残基。就本发明而言，一个单位的β-木糖苷酶活性定义为在40℃，pH 5从作为底物的1mM对硝基苯基-β-D-木糖苷在含有0.01％20的100mM柠檬酸钠中每分钟产生1.0μmol对硝基苯酚。

乙酰木聚糖酯酶活性：术语“乙酰木聚糖酯酶活性”在本文中定义为羧酸酯酶活性(EC 3.1.1.72)，其催化乙酰基从聚合木聚糖、乙酰化木糖、乙酰化葡萄糖、乙酸α-萘酯(alpha-napthyl acetate)和乙酸对硝基苯酯(p-nitrophenyl acetate)的水解。就本发明而言，乙酰木聚糖酯酶活性是使用0.5mM乙酸对硝基苯酯作为底物，在含有0.01％TWEEN^TM20的50mM乙酸钠pH 5.0中确定的。一个单位的乙酰木聚糖酯酶活性定义为能够在pH 5,25℃每分钟释放1微摩尔对硝基苯酚阴离子(p-nitrophenolate anion)的酶量。

阿魏酸酯酶活性：术语“阿魏酸酯酶(feruloyl esterase)活性”在本文中定义为EC 3.1.1.73(IUBMB Enzyme Nomenclature)中的4-羟基-3-甲氧基肉桂酰糖水解酶酶活性，其催化4-羟基-3-甲氧基肉桂酰(阿魏酰)基团从酯化的糖(其在“天然”底物中通常为阿拉伯糖)的水解，以产生阿魏酸(4-羟基-3-甲基肉桂酸)。阿魏酸酯酶也称作阿魏酸酯酶(ferulic acid esterase)、FAE-III、肉桂酸酯水解酶、FAEA、cinnAE、FAE-I或FAE-II。就本发明而言，阿魏酸酯酶活性是使用50mM乙酸钠pH 5.0中的0.5mM阿魏酸对硝基苯酯作为底物确定的。一个单位的阿魏酸酯酶活性等于能够在pH 5，25℃每分钟释放出1μmol对硝基苯酚阴离子的酶量。

α-葡糖醛酸糖苷酶活性：术语“α-葡糖醛酸糖苷酶活性”在本文中定义为α-D-葡糖苷酸葡糖醛酸水解活性(alpha-D-glucosiduronate glucuronohydrolase activity)(EC3.2.1.139)，其催化α-D-葡糖苷酸水解为D-葡糖醛酸和醇。就本发明而言，α-葡糖醛酸糖苷酶活性是根据de Vries,1998,J.Bacteriol.180:243-249确定的。一个单位的α-葡糖醛酸糖苷酶活性等于能够在pH 5，40℃每分钟释放出1μmol葡糖醛酸或4-O-甲基葡糖醛酸的酶量。

α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性：术语“α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性”在本文中定义为α-L-阿拉伯呋喃糖苷阿拉伯呋喃水解酶活性(EC 3.2.1.55)，其催化对α-L-阿拉伯糖苷中的末端非还原性α-L-阿拉伯呋喃糖苷残基的水解。该酶活性对α-L-阿拉伯呋喃糖苷、含有(1,3)-和/或(1,5)-键的α-L-阿拉伯聚糖、阿拉伯木聚糖和阿拉伯半乳聚糖起作用。α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶也称为阿拉伯糖苷酶、α-阿拉伯糖苷酶、α-L-阿拉伯糖苷酶、α-阿拉伯呋喃糖苷酶、多糖α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶、α-L-阿拉伯呋喃糖苷水解酶、L-阿拉伯糖苷酶或α-L-阿拉伯聚糖酶。就本发明而言，α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性是使用总体积200μl的每ml的100mM乙酸钠pH 5中5mg的中等粘性小麦阿拉伯木聚糖(Megazyme InternationalIreland,Ltd.,Bray,Co.Wicklow)在40℃进行30分钟，接着通过HPX-87H柱层析(Bio-Rad Laboratories,Inc.,Hercules,CA,USA)的阿拉伯糖分析来确定的。

纤维素材料：纤维素材料可以是包含纤维素的任何材料。生物质初生细胞壁(primary cell wall)中的主要多糖是纤维素，其次最丰富的是半纤维素，而第三是果胶。次生细胞壁(secondary cell wall)在细胞停止生长后产生，其同样含有多糖并通过共价交联至半纤维素的聚合木质素而加强。纤维素是脱水纤维二糖的均聚物，并且因此是直链β-(1-4)-D-葡聚糖，而半纤维素包括多种化合物，例如木聚糖、木葡聚糖(xyloglucan)、阿拉伯木聚糖和甘露聚糖，具有系列取代基的复杂分支结构。尽管通常是多形的，存在于植物组织中的纤维素主要是平行葡聚糖链的不溶晶体基质。半纤维素通常与纤维素以及其它半纤维素以氢键相连，其帮助稳定细胞壁基质。

纤维素通常见于例如植物的茎、叶、壳、皮和穗轴，或树的叶、枝和木材。纤维素材料可以是，但不限于，草本材料、农业残余物、林业残余物、城市固体废物、废纸和纸浆与造纸厂残余物(参见，例如，Wiselogel等,1995,于Handbook on Bioethanol(CharlesE.Wyman编),pp.105-118,Taylor&Francis,Washington D.C.；Wyman,1994,BioresourceTechnology 50:3-16；Lynd,1990,Applied Biochemistry and Biotechnology 24/25:695-719；Mosier等,,1999,Recent Progress in Bioconversion of Lignocellulosics,于Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology,T.Scheper主编,Volume 65,pp.23-40,Springer-Verlag,New York)。在本文中应理解的是，纤维素可以是任何形式的木素纤维素，在混合基质中包含木质素、纤维素和半纤维素的植物细胞壁材料。在一个优选的方面，纤维素材料是木素纤维素。

在一个方面，纤维素材料是草本材料。在另一个方面，纤维素材料是农业残余物。在另一个方面，纤维素材料是林业残余物。在另一个方面，纤维素材料是城市固体废物。在另一个方面，纤维素材料是废纸。在另一个方面，纤维素材料是纸浆和造纸厂残余物。

在另一个方面，纤维素材料是玉米秸秆。在另一个方面，纤维素材料是玉米纤维。在另一个方面，纤维素材料是玉米穗轴。在另一个方面，纤维素材料是橙皮。在另一个方面，纤维素材料是稻杆。在另一个方面，纤维素材料是麦杆。在另一个方面，纤维素材料是柳枝稷(switch grass)。在另一个方面，纤维素材料是芒草属。在另一个方面，纤维素材料是甘蔗渣。

在另一个方面，纤维素材料是微晶纤维素。在另一个方面，纤维素材料是细菌纤维素。在另一个方面，纤维素材料是藻类纤维素。在另一个方面，纤维素材料是棉线头。在另一个方面，纤维素材料是无定形的磷酸处理的纤维素。在另一个方面，纤维素材料是滤纸。

纤维素材料可以直接使用或进行预处理，使用本领域已知的传统方法，如本文所述。在一个优选的方面，预处理纤维素材料。

预处理的玉米秸秆：术语“PCS”或“预处理的玉米秸秆“在本文中定义为通过用热和稀硫酸处理而源自玉米秸秆的纤维素材料。

分离的多肽：术语“分离的多肽”用于本文中指从来源分离的多肽。在一个优选的方面，多肽如通过SDS-PAGE测定的，为至少1％纯，优选至少5％纯，更优选至少10％纯，更优选至少20％纯，更优选至少40％纯，更优选至少60％纯，甚至更优选至少80％纯，并且最优选至少90％纯。

基本上纯的多肽：术语“基本上纯的多肽”在本文表示多肽制备物，所述多肽制备物含有按重量计至多10％，优选至多8％，更优选至多6％，更优选至多5％，更优选至多4％，更优选至多3％，甚至更优选至多2％，最优选至多1％，并且甚至最优选至多0.5％的与其天然或重组结合的(associated)的其它多肽材料。因此，优选所述基本上纯的多肽是按存在于制备物中的全部多肽材料的重量计至少92％纯，优选至少94％纯，更优选至少95％纯，更优选至少96％纯，更优选至少97％纯，更优选至少98％纯，甚至更优选至少99％纯，最优选至少99.5％纯，并且甚至最优选100％纯。所述多肽优选是基本上纯的形式。具体而言，优选所述多肽是“基本上(essentially)纯的形式”，即，所述多肽制备物基本上(essentially)不含与其天然或重组结合的其它多肽材料。例如，这能够通过以下实现：通过公知的重组方法或由经典纯化方法制备多肽。

成熟多肽：术语“成熟多肽”在本文中定义为以其在翻译和任何翻译后修饰之后的最终形式存在的多肽，所述修饰例如N-末端加工、C-末端截短、糖基化、磷酸化等。

成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”在本文中定义为编码具有纤维素分解增强活性的成熟多肽的核苷酸序列。

同一性：参数“同一性”描述两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性。

就本发明而言，两个氨基酸序列之间的同一性程度使用如EMBOSS软件包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice等,2000,Trends inGenetics 16:276-277)的Needle程序(优选3.0.0版或更高版本)中所执行的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453)来测定。使用的可选参数为缺口罚分(gap penalty)10，缺口延伸罚分(gap extension penalty)0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。使用Needle标记为“最高同一性(longest identity)”的输出结果(使用-nobrief选项获得)作为同一性百分比，并计算如下：

(同样的残基×100)/(比对长度－比对中缺口的总数)

就本发明而言，两个核苷酸序列之间的同一性程度使用如EMBOSS软件包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice等,2000,见上文)的Needle程序(优选3.0.0版或更高版本)中执行的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,见上文)来测定。使用的可选参数为缺口罚分10，缺口延伸罚分0.5和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版)取代矩阵。使用Needle标记为“最高同一性”的输出结果(使用-nobrief选项获得)作为同一性百分比，并计算如下：

(同样的脱氧核糖核苷酸×100)/(比对长度－比对中缺口的总数)

同源序列：术语“同源序列”在本文中定义为在用多肽进行的tfasty搜索(Pearson,W.R.,1999,于Bioinformatics Methods and Protocols中,S.Misener和S.A.Krawetz编,pp.185-219)中E值(或期望值)小于0.001的预测蛋白质。

多肽片段：术语“多肽片段”在本文中定义为从成熟多肽或其同源序列的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个(几个)氨基酸的多肽，其中所述片段具有生物活性。

亚序列：术语“亚序列(subsequence)”在本文中定义为从成熟编码序列或其同源序列的5’和/或3’端缺失一个或多个(几个)核苷酸的核苷酸序列，其中所述亚序列编码具有生物活性的多肽片段。

等位变体(allelic variant)：术语“等位变体”在本文中表示占据相同染色体基因座的基因的任何两种或两种以上可选形式。等位变异通过突变天然地发生，并且可导致种群内的多态性。基因突变可以是沉默的(在编码的多肽中无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位变体是由基因的等位变体编码的多肽。

分离的多核苷酸：术语“分离的多核苷酸”用于本文中指从来源分离的多核苷酸。在一个优选的方面，多核苷酸如通过琼脂糖电泳测定的，为至少1％纯，优选至少5％纯，更优选至少10％纯，更优选至少20％纯，更优选至少40％纯，更优选至少60％纯，甚至更优选至少80％纯，并且最优选至少90％纯。

基本上纯的多核苷酸：术语“基本上纯的多核苷酸”用于本文指不含其它外来的或不期望的核苷酸的多核苷酸制备物，并且所述多核苷酸制备物处于适合于在遗传工程的蛋白质生产体系中使用的形式。因此，基本上纯的多核苷酸含有按重量计至多10％，优选至多8％，更优选至多6％，更优选至多5％，更优选至多4％，更优选至多3％，甚至更优选至多2％，最优选至多1％，并且甚至最优选至多0.5％的与其天然或重组结合的其它多核苷酸材料。然而，基本上纯的多核苷酸可以包括天然存在的5’和3’非翻译区，例如启动子和终止子。优选基本上纯的多核苷酸是按重量计至少90％纯，优选至少92％纯，更优选至少94％纯，更优选至少95％纯，更优选至少96％纯，更优选至少97％纯，甚至更优选至少98％纯，最优选至少99％，并且甚至最优选至少99.5％纯的。本发明所述多核苷酸优选为基本上纯的形式。具体而言，优选所述多核苷酸是“基本上(essentially)纯的形式”，即，所述多核苷酸制备物基本上不含与其天然或重组结合的其它多核苷酸材料。所述多核苷酸可以是基因组、cDNA、RNA、半合成、合成来源的，或它们的任何组合。

编码序列：当用于本文时术语“编码序列”的意思是直接指定其蛋白产物的氨基酸序列的核苷酸序列。编码序列的边界通常由开读框决定，所述开读框通常以ATG起始密码子或可供选择的起始密码子例如GTG和TTG开始，并且以终止密码子例如TAA、TAG和TGA结束。编码序列可以是DNA、cDNA或重组核苷酸序列。

cDNA：术语“cDNA”在本文中定义为能够通过反转录从得自真核细胞的成熟的、已剪接的mRNA分子制备的DNA分子。cDNA缺少通常存在于相应基因组DNA中的内含子序列。起始的(initial)、初级的RNA转录物是mRNA的前体，其通过一系列的步骤加工然后作为成熟的已剪接的mRNA出现。这些步骤包括通过称为剪接的过程去除内含子序列。因而源自mRNA的cDNA没有任何内含子序列。

核酸构建体：术语“核酸构建体”用于本文指单链或双链的核酸分子，所述核酸分子分离自天然存在的基因，或将所述核酸分子以本来不存在于(not otherwise exist)自然界中的方式修饰以含有核酸的区段。当所述核酸构建体含有表达编码序列所需的调控序列时，术语核酸构建体与术语“表达盒”同义。

调控序列(control sequence)：术语“调控序列”在本文定义为包括对编码多肽的多核苷酸表达是必需的或有利的所有成分。各个调控序列对于编码所述多肽的核苷酸序列可以是天然的或外源的，或各个调控序列对于彼此可以是天然的或外源的。这些调控序列包括但不限于前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列和转录终止子。最少的情况，调控序列包括启动子和转录和翻译的终止信号。调控序列可以和用于引入特异性限制位点的接头一起提供，所述特异性限制位点促进调控序列与编码多肽的核苷酸序列编码区的连接。

可操作地连接：术语“可操作地连接”在本文表示这样的构型，其中将调控序列置于相对于多核苷酸序列的编码序列的适当位置，使得调控序列指导多肽编码序列的表达。

表达：术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤，其包括但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰和分泌。

表达载体：术语“表达载体”在本文定义为线性的或环状的DNA分子，其包含编码多肽的多核苷酸，并且所述多核苷酸与提供用于其表达的额外核苷酸可操作地连接。

宿主细胞：如本文中所使用的术语“宿主细胞”包括任何细胞类型，所述细胞类型对于使用包含本发明多核苷酸的核酸构建体或表达载体的转化、转染、转导等是易感的(susceptible)。

修饰：术语“修饰”在本文的意思是，对多肽的任何化学修饰，以及对编码所述多肽的DNA的遗传操作。所述修饰可以是一个或多个(几个)氨基酸的取代、缺失和/或插入，以及一个或多个(几个)氨基酸侧链的置换。

人工变体：当用在本文时，术语“人工变体”的意思是由表达经修饰而编码多肽变体的核苷酸序列的生物体产生的多肽。所述修饰的核苷酸序列通过人为干预(humanintervention)，通过修饰多核苷酸序列来获得。

发明详述

本发明涉及用于降解或转化纤维素材料的方法，包括：用包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的酶组合物处理纤维素材料。在一个方面，所述方法进一步包括回收所述经降解或转化的纤维素材料。

本发明还涉及用于产生发酵产物的方法，包括：(a)用包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的酶组合物糖化纤维素材料；(b)用一种或多种(几种)发酵微生物发酵经糖化的纤维素材料以产生所述发酵产物；和(c)从发酵回收所述发酵产物。

本发明进一步涉及发酵纤维素材料的方法，包括：用一种或多种(几种)发酵微生物发酵所述纤维素材料，其中所述纤维素材料经包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的酶组合物水解。在一个方面，所述纤维素材料的发酵产生发酵产物。在另一个方面，所述方法进一步包括从发酵回收所述发酵产物。

在上述每一个方法中，纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的存在与所述纤维二糖脱氢酶存在而所述具有纤维素分解增强活性的多肽不存在相比增加了酶组合物对所述纤维素材料的水解。

本发明的方法可用于将纤维素材料糖化为可发酵的糖，并将可发酵的糖转化为许多有用物质，例如化学品和燃料。从纤维素材料产生所需发酵产物通常涉及预处理、酶水解(糖化)和发酵。

根据本发明纤维素材料的加工可使用本领域常规工艺达成。而且，本发明的方法可使用任何配置为依照本发明运作的常规生物质加工装置实施。

水解(糖化)和发酵，分别或同时，包括但不限于，分离的水解和发酵(SHF)、同步糖化和发酵(SSF)、同步糖化和共发酵(SSCF)、混合的水解和发酵(HHF)、分离的水解和共发酵(SHCF)、混合的水解和共发酵(HHCF)，和直接微生物转化(DMC)。SHF使用分离的处理步骤以首先将纤维素材料酶水解为可发酵糖，例如，葡萄糖，纤维二糖、纤维三糖和戊糖，然后将可发酵糖发酵成为乙醇。在SSF中，纤维素材料的酶水解和糖变为乙醇的发酵在一个步骤中组合(Philippidis,G.P.,1996,Cellulose bioconversion technology,于Handbook onBioethanol:Production and Utilization,Wyman,C.E编,Taylor&Francis,Washington,DC,179-212)。SSCF包括多种糖的共发酵(Sheehan,J.,和Himmel,M.,1999,Enzymes,energyand the environment:A strategic perspective on the U.S.Department of Energy’sresearch and development activities for bioethanol,Biotechnol.Prog.15:817-827)。HHF在同步糖化和水解步骤之外，还涉及单独的水解步骤，所述步骤可以在同一个反应器中进行。HHF过程中的步骤可以在不同的温度，即，高温酶糖化，然后在发酵菌株能够耐受的较低温度进行SSF。DMC在一个或多个(几个)步骤中组合了所有三个过程(酶产生、水解和发酵)，其中使用相同的生物体产生用于将纤维素材料转化成可发酵糖并将可发酵糖转化成终产物的酶(Lynd,L.R.,Weimer,P.J.,van Zyl,W.H.,和Pretorius,I.S.,2002,Microbial cellulose utilization:Fundamentals and biotechnology,Microbiol.Mol.Biol.Reviews 66:506-577)。在本文可以理解的是，本领域中任何已知的方法，包括预处理、酶水解(糖化)、发酵，或它们的组合，可用于实施本发明的方法。

常规设备包括补料批式搅拌反应器、批式搅拌反应器、具有超滤的连续流搅拌反应器和/或连续活塞流柱式反应器(Fernanda de Castilhos Corazza,Flávio Faria deMoraes,Gisella Maria Zanin和Ivo Neitzel,2003,Optimal control in fed-batchreactor for the cellobiose hydrolysis,Acta Scientiarum.Technology25:33-38；Gusakov,A.V.,和Sinitsyn,A.P.,1985,Kinetics of the enzymatic hydrolysis ofcellulose:1.A mathematical model for a batch reactor process,Enz.Microb.Technol.7:346-352)、研磨反应器(Ryu,S.K.,和Lee,J.M.,1983,Bioconversion of waste cellulose by using an attrition bioreactor,Biotechnol.Bioeng.25:53-65)，或者具有由电磁场引起的强烈搅拌的反应器(Gusakov,A.V.,Sinitsyn,A.P.,Davydkin,I.Y.,Davydkin,V.Y.,Protas,O.V.,1996,Enhancementof enzymatic cellulose hydrolysis using a novel type of bioreactor withintensive stirring induced by electromagnetic field,Appl.Biochem.Biotechnol.56:141-153)。其它反应器类型包括：流化床、升流层、固定化和用于水解和/或发酵的挤出机型的反应器。

预处理。在本发明的方法的实施中，可以使用本领域已知的任何预处理过程破坏植物细胞壁的纤维素材料成分(Chandra等,2007,Substrate pretreatment:The key toeffective enzymatic hydrolysis of lignocellulosics？Adv.Biochem.Engin./Biotechnol.108:67-93；Galbe和Zacchi,2007,Pretreatment of lignocellulosicmaterials for efficient bioethanol production,Adv.Biochem.Engin./Biotechnol.108:41-65；Hendriks和Zeeman,2009,Pretreatments to enhance thedigestibility of lignocellulosic biomass,Bioresource Technol.100:10-18；Mosier等,2005,Features of promising technologies for pretreatment oflignocellulosic biomass,Bioresource Technol.96:673-686；Taherzadeh和Karimi,2008,Pretreatment of lignocellulosic wastes to improve ethanol and biogasproduction:A review,Int.J.of Mol.Sci.9:1621-1651；Yang和Wyman,2008,Pretreatment:the key to unlocking low-cost cellulosic ethanol,BiofuelsBioproducts and Biorefining-Biofpr.2:26-40)。

纤维素材料也可以在预处理之前使用本领域中已知的方法进行预浸泡、润湿或调节。

常规的预处理包括但不限于，蒸汽预处理(伴随或不伴随爆炸)、稀酸预处理、热水预处理、碱性预处理、石灰预处理、湿氧化、湿爆炸、氨纤维爆炸、有机溶剂预处理和生物预处理。其它预处理包括氨渗滤、超声、电穿孔、微波、超临界CO₂、超临界H₂O、臭氧和γ辐射预处理。

可以在水解和/或发酵之前预处理纤维素材料。预处理优选在水解前进行。或者，预处理可以与酶水解同时进行以释放可发酵糖，如葡萄糖、木糖和/或纤维二糖。在大多数情况下，预处理步骤本身使一些生物质转化成可发酵糖(甚至在不存在酶的情况下)。

蒸汽预处理。在蒸汽预处理中，加热纤维素材料以破坏植物细胞壁成分，包括木质素、半纤维素和纤维素，使酶可以到达纤维素和其它部分，例如，半纤维素。将纤维素材料通过或穿过反应容器，其中注入蒸汽以增加温度至需要的温度和压力，并且在其中保持期望的反应时间。蒸汽预处理优选在140-230℃，更优选160-200℃，并且最优选170-190℃进行，其中最优的温度范围依赖于任何化学催化剂的加入。蒸汽预处理的停留时间优选1-15分钟，更优选3-12分钟，并且最优选4-10分钟，其中最优的停留时间依赖于温度范围和任何化学催化剂的加入。蒸汽预处理允许相对较高的固体加载量，使得纤维素材料在预处理过程中通常仅仅变得潮湿。蒸汽预处理经常与预处理后对物质的爆炸放料(explosivedischarge)组合，这称为蒸汽爆炸，即，快速闪变至大气压和物质的湍流，以通过破碎增加可接触的表面积(Duff和Murray,1996,Bioresource Technology 855:1-33；Galbe和Zacchi,2002,Appl.Microbiol.Biotechnol.59:618-628；美国专利申请No.20020164730)。在蒸汽预处理过程中，切割半纤维素乙酰基团，并且得到的酸自催化半纤维素部分水解成单糖和寡糖。去除木质素至有限的程度。

经常在蒸汽预处理之前加入催化剂如H₂SO₄或SO₂(通常0.3至3％w/w)，其可减少时间，降低温度，增加回收率，并促进酶水解(Ballesteros等,2006,Appl.Biochem.Biotechnol.129-132:496-508；Varga等,2004,Appl.Biochem.Biotechnol.113-116:509-523；Sassner等,2006,EnzymeMicrob.Technol.39:756-762)。

化学预处理：术语“化学处理“指能促进纤维素、半纤维素和/或木质素分离和/或释放的任何化学处理。合适的化学预处理步骤的实例包括例如稀酸预处理、石灰预处理、湿氧化、氨纤维/冷冻爆炸(AFEX)、氨渗滤(APR)和有机溶剂预处理。

在稀酸预处理中，将纤维素材料与稀酸(通常是H₂SO₄)和水混合以形成浆料，由蒸汽加热至期望的温度，并在一段停留时间后闪变至大气压。可以用很多反应器设计进行稀酸预处理，例如，活塞流式反应器、逆流反应器或连续逆流收缩床反应器(Duff和Murray,1996,supra；Schell等,2004,Bioresource Technol.91:179-188；Lee等,1999,Adv.Biochem.Eng.Biotechnol.65:93-115)。

还可以使用碱性条件下的几种预处理方法。这些碱预处理包括，但不限于，石灰预处理、湿氧化、氨渗滤(APR)和氨纤维/冷冻爆炸(AFEX)。

用碳酸钙、氢氧化钠或氨，在85-150℃的低温进行石灰预处理，停留时间从1小时到几天(Wyman等,2005,Bioresource Technol.96:1959-1966；Mosier等,2005,Bioresource Technol.96:673-686)。WO 2006/110891、WO 2006/118099、WO 2006/110900和WO 2006/110901公开了使用氨的预处理方法。

湿法氧化是热预处理，通常在180-220℃进行5-15分钟，加入氧化剂如过氧化氢或过压氧(Schmidt和Thomsen,1998,Bioresource Technol.64:139-151；Palonen等,2004,Appl.Biochem.Biotechnol.117:1-17；Varga等,2004,Biotechnol.Bioeng.88:567-574；Martin等,2006,J.Chem.Technol.Biotechnol.81:1669-1677)。预处理以优选1-40％干物质，更优选2-30％干物质，并且最优性5-20％干物质进行，并且由于加入碱如碳酸钠，初始pH经常会增加。

湿法氧化预处理方法的修改方法，称为湿爆炸(湿氧化和蒸汽爆炸的组合)，能够处理高达30％的干物质。在湿爆炸中，在预处理过程中，在一定的停留时间后引入氧化剂。然后通过闪变至大气压而结束预处理(WO 2006/032282)。

氨纤维爆炸(AFEX)涉及在温和温度如90-100℃和高压如17-20bar，用液体或气体氨处理纤维素材料5-10分钟，其中干物质含量可以高达60％(Gollapalli等,2002,Appl.Biochem.Biotechnol.98:23-35；Chundawat等,2007,Biotechnol.Bioeng.96:219-231；Alizadeh等,2005,Appl.Biochem.Biotechnol.121:1133-1141；Teymouri等,2005,Bioresource Technol.96:2014-2018)。AFEX预处理导致纤维素解聚，和半纤维素的部分水解。木质素-糖复合物得到切割。

有机溶剂预处理通过用含水乙醇(40-60％乙醇)在160-200℃提取30-60分钟而将纤维素材料去木质素化(Pan等,2005,Biotechnol.Bioeng.90:473-481；Pan等,2006,Biotechnol.Bioeng.94:851-861；Kurabi等,2005,Appl.Biochem.Biotechnol.121:219-230)。通常加入硫酸作为催化剂。在有机溶剂预处理中，去除大部分半纤维素。

合适的预处理方法的其他实例如Schell等,2003,Appl.Biochem andBiotechn.Vol.105-108:p.69-85,和Mosier等,2005,Bioresource Technology 96:673-686,和美国专利公开申请2002/0164730所述。

在一个方面，化学预处理优选作为酸处理，并且更优选作为连续稀酸和/或弱酸(mild acid)处理进行。酸通常是硫酸，但也可以使用其它酸，如乙酸、柠檬酸、硝酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、氯化氢或其混合物。弱酸处理在优选1-5，更优选1-4，并且最优选1-3的pH范围内进行。在一个方面，酸浓度在优选0.01至20wt％酸，更优选0.05至10wt％酸，甚至更优选0.1至5wt％酸，并且最优选0.2至2.0wt％酸的范围内。酸与纤维素材料接触，并在优选160-220℃，和更优选165-195℃范围内的温度保持数秒到数分钟，例如1秒-60分钟的时间。

在另一个方面，预处理作为氨纤维爆炸步骤(AFEX预处理步骤)进行。

在另一个方面，预处理发生在含水浆料中。在优选的方面，在预处理过程中纤维素材料以优选10-80wt％，更优选20-70wt％，并且最优性30-60wt％，如约50wt％的量存在。预处理的纤维素材料可以不洗涤或者使用本领域任何已知的方法洗涤，例如，用水洗涤。

机械预处理：术语“机械预处理”指各种类型的研磨或碾磨(例如，干磨、湿磨或振动球磨)。

物理预处理：术语“物理预处理”指促进纤维素、半纤维素和/或木质素从纤维素材料分离和/或释放的任何处理。例如，物理预处理可涉及辐射(例如，微波辐射)、汽蒸/蒸汽爆炸、水热解(hydrothermolysis)和它们的组合。

物理预处理可以涉及高压和/或高温(蒸汽爆炸)。在一个方面，高压指优选约300至约600psi，更优选约350至约550psi，并且最优选约400至约500psi，如约450psi的压力。在另一个方面，高温指约100至300℃，优选约140至235℃的温度。在一个优选的方面，机械预处理在使用如上所定义的高温和高压的分批过程、蒸汽枪水解器系统，例如来自SundsDefibrator AB,Sweden的Sunds Hydrolyzer中进行。

组合的物理和化学预处理：可以对纤维素材料进行物理和化学预处理。例如，预处理步骤可以涉及稀酸或弱酸处理和高的温度和/或压力处理。根据需要，可以顺序或同时进行物理和化学预处理。还可以包括机械预处理。

因此，在一个优选的方面，对纤维素材料进行机械、化学或物理预处理，或者它们的任何组合，以促进纤维素、半纤维素和/或木质素的分离和/或释放。

生物预处理：术语“生物预处理”指可以促进纤维素、半纤维素和/或木质素从纤维素材料分离和/或释放的任何生物预处理。生物预处理技术可以包括应用溶解木质素的微生物(参见，例如，Hsu,1996,Pretreatment of biomass,于Handbook on Bioethanol:Production and Utilization,Wyman,C.E编,Taylor&Francis,Washington,DC,179-212；Ghosh和Singh,1993,Physicochemical and biological treatments for enzymatic/microbial conversion of lignocellulosic biomass,Adv.Appl.Microbiol.39:295-333；McMillan,1994,Pretreating lignocellulosic biomass:a review,于EnzymaticConversion of Biomass for Fuels Production,Himmel,Baker和Overend编,ACSSymposium Series 566,American Chemical Society,Washington,DC,chapter 15；Gong,Cao,Du和Tsao,1999,Ethanol production from renewable resources,于Advances inBiochemical Engineering/Biotechnology,Scheper编,Springer-Verlag BerlinHeidelberg,Germany,65:207-241；Olsson和Hahn-Hagerdal,1996,Fermentation oflignocellulosic hydrolysates for ethanol production,Enz.Microb.Tech.18:312-331；和Vallander和Eriksson,1990,Production of ethanol from lignocellulosicmaterials:State of the art,Adv.Biochem.Eng./Biotechnol.42:63-95)。

糖化。在水解(也称作糖化)步骤中，将纤维素材料例如所述经预处理的纤维素材料水解以将纤维素和任选地也将半纤维素分解成可发酵糖，如葡萄糖、纤维二糖、木糖、木酮糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和/或可溶的寡糖。水解由酶组合物在具有本发明[酶]活性的多肽存在下以酶法进行。所述组合物可进一步包含一种或多种(几种)半纤维素分解酶。组合物的酶还可以顺序加入。

酶水解优选在易于由本领域技术人员确定的条件下，在合适的含水环境中进行。在一个优选的方面，水解在适于酶的活性，即对于酶最优的条件下进行。水解可以以补料批式或连续的过程进行，其中将预处理的纤维素材料(底物)逐渐补入，例如，含酶的水解溶液中。

糖化通常在搅拌釜反应器或发酵罐中，在受控的pH、温度和混合条件下进行。合适的处理时间、温度和pH条件可以由本领域技术人员容易地确定。例如，糖化可以持续长达200小时，但是通常优选进行约12至约96小时，更优选约16至约72小时，并且最优选约24至约48小时。温度优选约25℃至约70℃，更优选约30℃至约65℃，并且最优选约40℃至约60℃，特别是约50℃。pH优选约3至约8，更优选约3.5至约7，并且最优选约4至约6，特别是约pH5。干燥固体含量优选约5至约50wt％，更优选约10至约40wt％，并且最优选约20至约30wt％。

具有纤维素分解增强活性的多肽和酶的最适量取决于几个因素，其包括但不限于，组分纤维素分解酶的混合物、含纤维素底物、含纤维素底物的浓度、含纤维素底物的预处理、温度、时间、pH和包括发酵生物体(例如，同步糖化和发酵的酵母)。

在一个优选的方面，纤维素分解蛋白对于纤维素材料的有效量是约0.5至约50mg，优选约0.5至约40mg，更优选约0.5至约25mg，更优选约0.75至约20mg，更优选约0.75至约15mg，甚至更优选约0.5至约10mg，并且最优选约2.5至约10mg每g纤维素材料。

在另一个优选的方面，具有纤维素分解增强活性的多肽对于纤维二糖脱氢酶的有效量是约0.01至约50mg，优选约0.5至约40mg，更优选约0.5至约25mg，更优选约0.75至约20mg，更优选约0.75至约15mg，甚至更优选约0.5至约10mg且最优选约2.5至约10mg每g纤维素材料。

在另一个优选的方面，具有纤维素分解增强活性的多肽对于纤维素材料的有效量是约0.01至约50.0mg，优选约0.01至约40mg，更优选约0.01至约30mg，更优选约0.01至约20mg，更优选约0.01至约10mg，更优选约0.01至约5mg，更优选约0.025至约1.5mg，更优选约0.05至约1.25mg，更优选约0.075至约1.25mg，更优选约0.1至约1.25mg，甚至更优选约0.15至约1.25mg，并且最优选约0.25至约1.0mg每g纤维素材料。

在另一个优选的方面，具有纤维素分解增强活性的多肽对于纤维素分解蛋白的有效量是约0.005至约1.0g，优选约0.01至约1.0g，更优选约0.15至约0.75g，更优选约0.15至约0.5g，更优选约0.1至约0.5g，甚至更优选约0.1至约0.5g，并且最优选约0.05至约0.2g每g纤维素分解蛋白。

发酵。可通过一种或多种(几种)能将糖直接或间接发酵成所需发酵产物的发酵微生物，发酵从经水解的纤维素材料获得的可发酵糖。“发酵”或“发酵方法”指任何发酵方法或包含发酵步骤的任何方法。发酵方法还包括用于消费品醇工业(例如，啤酒和葡萄酒)、乳品业(例如，发酵乳制品)、皮革业和烟草业的发酵方法。发酵条件依赖于期望的发酵产物和发酵生物体，并且能由本领域的技术人员容易地确定。

在发酵步骤中，作为预处理和酶水解步骤的结果从纤维素材料释放的糖，通过发酵生物体(如酵母)发酵成为产物，例如，乙醇。如上所述，水解(糖化)和发酵可以是单独或同时的。

在本发明的发酵步骤中可以使用任何合适的经水解的纤维素材料。通常根据所需发酵产品(即，要从发酵获得的物质)和使用的方法来选择底物，如本领域中所公知。

术语“发酵培养基”在本文中可理解为指加入发酵微生物之前的培养基，如，由糖化过程产生的培养基，以及同步的糖化和发酵方法(SSF)中使用的培养基。

“发酵微生物”指适用于理想的发酵方法产生发酵产物的任何微生物，包括细菌和真菌生物体。发酵生物体可以是C₆和/或C₅发酵生物体，或它们的组合。C₆和C₅发酵生物体均在本领域公知。合适的发酵微生物能将糖(如葡萄糖、木糖、木酮糖、阿拉伯糖、麦芽糖、甘露糖、半乳糖或寡糖)直接或间接地发酵(即，转化)成理想的发酵产品。

可产生乙醇的细菌和真菌发酵生物体的实例如Lin等,2006,Appl.Microbiol.Biotechnol.69:627-642所述。

能发酵C₆糖的发酵微生物的实例包括细菌和真菌生物体，如酵母。优选的酵母包括酵母属(Saccharomyces)菌种，优选酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

能发酵C₅糖的发酵生物体的实例包括细菌和真菌生物体，如酵母。优选的C₅发酵酵母包括毕赤酵母属(Pichia)，优选树干毕赤酵母(Pichia stipitis)的菌株，如树干毕赤酵母CBS 5773；假丝酵母属(Candida)，优选博伊丁假丝酵母(Candida boidinii)、芸薹假丝酵母(Candida brassicae)、休哈塔假丝酵母(Candida sheatae)、迪丹斯假丝酵母(Candida diddensii)、伪热带假丝酵母(Candida pseudotropicalis)或产朊假丝酵母(Candida utilis)的菌株。

其它发酵生物体包括发酵单胞菌属(Zymomonas)，如运动发酵单胞菌(Zymomonasmobilis)；汉逊酵母属(Hansenula)，如异常汉逊酵母(Hansenula anomala)；克鲁维酵母属(Kluyveromyces)，如脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)；裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)，如粟酒裂殖酵母(S.pombe)；和大肠杆菌(E.coli)的菌株，特别是已经经过遗传修饰而改进乙醇产量的大肠杆菌菌株。

在一个优选的方面，酵母是酵母属菌种。在一个更优选的方面，酵母是酿酒酵母。在另一个更优选的方面，酵母是糖化酵母(Saccharomyces distaticus)。在另一个更优选的方面，酵母是葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)。在另一个优选的方面，酵母是克鲁维酵母属。在另一个更优选的方面，酵母是马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)。在另一个更优选的方面，酵母是脆壁克鲁维酵母。在另一个优选的方面，酵母是假丝酵母属。在另一个更优选的方面，酵母是博伊丁假丝酵母。在另一个更优选的方面，酵母是芸薹假丝酵母。在另一个更优选的方面，酵母是迪丹斯假丝酵母。在另一个更优选的方面，酵母是假热带假丝酵母。在另一个更优选的方面，酵母是产朊假丝酵母。在另一个优选的方面，酵母是棒孢酵母属(Clavispora)。在另一个更优选的方面，酵母是葡萄牙棒孢酵母(Clavispora lusitaniae)。在另一个更优选的方面，酵母是Clavispora opuntiae。在另一个优选的方面，酵母是管囊酵母属(Pachysolen)。在另一个更优选的方面，酵母是嗜鞣管囊酵母(Pachysolen tannophilus)。在另一个优选的方面，酵母是毕赤酵母属。在另一个更优选的方面，酵母是树干毕赤酵母。在另一个优选的方面，酵母是酒香酵母属(Bretannomyces)。在另一个更优选的方面，酵母是克劳森酒香酵母(Bretannomycesclausenii)(Philippidis,G.P.,1996,Cellulose bioconversion technology,于Handbook on Bioethanol:Production and Utilization,Wyman,C.E.编,Taylor&Francis,Washington,DC,179-212)。

能有效地将己糖和戊糖发酵成乙醇的细菌包括，例如，运动发酵单胞菌和热纤维梭菌(Clostridium thermocellum)(Philippidis,1996,见上文)。

在一个优选的方面，细菌是发酵单胞菌属。在更优选的方面，细菌是运动发酵单胞菌。在另一个优选的方面，细菌是梭菌属。在另一个更优选的方面，细菌是热纤维梭菌。

商业上可得到的适合乙醇产生的酵母包括，例如ETHANOL RED^TM酵母(可从RedStar/Lesaffre,USA获得)、FALI^TM(可从Fleischmann’s Yeast,Burns Philp Food Inc.,USA的部门获得)、SUPERSTART^TM和THERMOSACC^TM新鲜酵母(可从Ethanol Technology,WI,USA获得)、BIOFERM^TMAFT和XR(可从NABC-North American Bioproducts Corporation,GA,USA获得)、GERT STRAND^TM(可从Gert Strand AB,Sweden获得)和FERMIOL^TM(可从DSMSpecialties获得)。

在一个优选的方面，发酵微生物已经经过遗传修饰，提供发酵戊糖的能力，如利用木糖、利用阿拉伯糖和共同利用木糖和阿拉伯糖的微生物。

通过将异源基因克隆入多种发酵微生物已经构建了能将己糖和戊糖转化成乙醇(共发酵)的生物体(Chen和Ho,1993,Cloning and improving the expression of Pichiastipitis xylose reductase gene in Saccharomyces cerevisiae,Appl.Biochem.Biotechnol.39-40:135-147；Ho等,1998,Genetically engineeredSaccharomyces yeast capable of effectively cofermenting glucose and xylose,Appl.Environ.Microbiol.64:1852-1859；Kotter和Ciriacy,1993,Xylose fermentationby Saccharomyces cerevisiae,Appl.Microbiol.Biotechnol.38:776-783；Walfridsson等,1995,Xylose-metabolizing Saccharomyces cerevisiae strains overexpressingthe TKL1 and TAL1 genes encoding the pentose phosphate pathway enzymestransketolase and transaldolase,Appl.Environ.Microbiol.61:4184-4190；Kuyper等,2004,Minimal metabolic engineering of Saccharomyces cerevisiae for efficientanaerobic xylose fermentation:a proof of principle,FEMS Yeast Research 4:655-664；Beall等,1991,Parametric studies of ethanol production from xylose andother sugars by recombinant Escherichia coli,Biotech.Bioeng.38:296-303；Ingram等,1998,Metabolic engineering of bacteria for ethanol production,Biotechnol.Bioeng.58:204-214；Zhang等,1995,Metabolic engineering of a pentosemetabolism pathway in ethanologenic Zymomonas mobilis,Science 267:240-243；Deanda等,1996,Development of an arabinose-fermenting Zymomonas mobilis strainby metabolic pathway engineering,Appl.Environ.Microbiol.62:4465-4470；WO 2003/062430,xylose isomerase)。

在一个优选的方面，经过遗传修饰的发酵微生物是酿酒酵母。在另一个优选的方面，经过遗传修饰的发酵微生物是运动发酵单胞菌。在另一个优选的方面，经过遗传修饰的发酵微生物是大肠杆菌。在另一个优选的方面，经过遗传修饰的发酵微生物是产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)。在另一个优选的方面，所述经遗传修饰的发酵微生物是克鲁维酵母菌种。

本领域中公知的是，上述生物体还能用于产生其它物质，如本文所述。

通常向降解的木素纤维素或水解物加入发酵微生物，并进行约8至约96小时，如约24至约60小时发酵。温度通常为约26℃至约60℃，特别是约32℃或50℃，并且在约pH 3至约pH 8，如约pH 4-5、6或7。

在一个优选的方面，对降解的纤维素材料施用酵母和/或另一种微生物，并进行约12至约96小时，如通常为24-60小时发酵。在一个优选的方面，温度优选为约20℃至约60℃，更优选约25℃至约50℃，并且最优选约32℃至约50℃，特别是约32℃或50℃，并且pH通常为约pH 3至约pH 7，优选约pH 4-7。然而，一些发酵生物体例如细菌，具有更高的最适发酵温度。酵母或另一种微生物优选以约10⁵-10¹²，优选约10⁷-10¹⁰，特别是约2x 10⁸活细胞计数每ml发酵液的量施用。关于使用酵母进行发酵的进一步指导可以在例如“The AlcoholTextbook”(K.Jacques,T.P.Lyons和D.R.Kelsall编,Nottingham University Press,United Kingdom 1999)中找到，其通过提述并入本文。

对于乙醇生产，在发酵后蒸馏浆料以提取乙醇。根据本发明的方法获得的乙醇可以用作，例如燃料乙醇；饮料乙醇，即，中性饮料酒，或工业乙醇。

发酵刺激剂可以与本文所述的任何方法组合使用，以进一步改进发酵工艺，而且特定地，改进发酵微生物的性能，如，速率增加和乙醇得率。“发酵刺激剂”指用于发酵微生物(特别是酵母)生长的刺激剂。优选的用于生长的发酵刺激剂包括维生素和矿物质。维生素的实例包括多种维生素、生物素、泛酸(盐)、烟酸、内消旋肌醇(meso-inositol)、硫胺素、吡哆醇(pyridoxine)、对氨基苯甲酸、叶酸、核黄素和维生素A、B、C、D和E。参见，例如，Alfenore等,Improving ethanol production and viability of Saccharomycescerevisiae by a vitamin feeding strategy during fed-batch process,Springer-Verlag(2002)，其通过提述并入本文。矿物质的实例包括能够提供营养物的矿物质和矿物质盐，所述营养物包括P、K、Mg、S、Ca、Fe、Zn、Mn和Cu。

发酵产物：发酵产物可以是源自发酵的任何物质。发酵产物可以是，不限于，醇(例如，阿拉伯醇、丁醇、乙醇、甘油、甲醇、1,3-丙二醇、山梨醇和木糖醇)；有机酸(例如，乙酸、醋酮酸、己二酸、抗坏血酸、柠檬酸、2,5-二酮-D-葡糖酸、甲酸、反丁烯二酸、葡糖二酸、葡糖酸、葡糖醛酸、戊二酸、3-羟基丙酸、衣康酸、乳酸、苹果酸、丙二酸、草酸、草酰乙酸、丙酸、琥珀酸和木糖酸)；酮(例如，丙酮)；氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、丝氨酸和苏氨酸)；和气体(例如，甲烷、氢气(H₂)、二氧化碳(CO₂)和一氧化碳(CO))。发酵产物还可以是作为高价值产品的蛋白质。

在一个优选的方面，发酵产物是醇。可理解的是，术语“醇”包括包含一个或多个羟基基团的物质。在更优选的方面，所述醇是阿拉伯醇。在另一个更优选的方面，所述醇是丁醇。在另一个更优选的方面，所述醇是乙醇。在另一个更优选的方面，所述醇是甘油。在另一个更优选的方面，所述醇是甲醇。在另一个更优选的方面，所述醇是1,3-丙二醇。在另一个更优选的方面，所述醇是山梨醇。在另一个更优选的方面，所述醇是木糖醇。参见，例如，Gong,C.S.,Cao,N.J.,Du,J.,和Tsao,G.T.,1999,Ethanol production from renewableresources,于Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology,Scheper,T.编,Springer-Verlag Berlin Heidelberg,Germany,65:207-241；Silveira,M.M.,和Jonas,R.,2002,The biotechnological production of sorbitol,Appl.Microbiol.Biotechnol.59:400-408；Nigam,P.,和Singh,D.,1995,Processes forfermentative production of xylitol–a sugar substitute,Process Biochemistry 30(2):117-124；Ezeji,T.C.,Qureshi,N.和Blaschek,H.P.,2003,Production of acetone,butanol and ethanol by Clostridium beijerinckii BA101 and in situ recovery bygas stripping,World Journal of Microbiology and Biotechnology 19(6):595-603。

在另一个优选的方面，所述物质是有机酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是乙酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是醋酮酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是己二酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是抗坏血酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是柠檬酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是2,5-二酮-D-葡糖酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是甲酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是反丁烯二酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是葡糖二酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是葡糖酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是葡糖醛酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是戊二酸。在另一个优选的方面，所述有机酸是3-羟基丙酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是衣康酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是乳酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是苹果酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是丙二酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是草酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是丙酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是琥珀酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是木糖酸。参见，例如，Chen,R.,和Lee,Y.Y.,1997,Membrane-mediated extractive fermentation for lactic acidproduction from cellulosic biomass,Appl.Biochem.Biotechnol.63-65:435-448。

在另一个优选的方面，所述物质是酮。可理解的是术语“酮”包括含有一个或多个酮基的物质。在另一个更优选的方面，所述酮是丙酮。参见，例如，Qureshi和Blaschek,2003，见上文。

在另一个优选的方面，所述物质是氨基酸。在另一个更优选的方面，所述有机酸是天冬氨酸。在另一个更优选的方面，所述氨基酸是谷氨酸。在另一个更优选的方面，所述氨基酸是甘氨酸。在另一个更优选的方面，所述氨基酸是赖氨酸。在另一个更优选的方面，所述氨基酸是丝氨酸。在另一个更优选的方面，所述氨基酸是苏氨酸。参见，例如，Richard,A.,和Margaritis,A.,2004,Empirical modeling of batch fermentation kinetics forpoly(glutamic acid)production and other microbial biopolymers,Biotechnologyand Bioengineering 87(4):501-515。

在另一个优选的方面，所述物质是气体。在另一个更优选的方面，所述气体是甲烷。在另一个更优选的方面，所述气体是H₂。在另一个更优选的方面，所述气体是CO₂。在另一个更优选的方面，所述气体是CO。参见，例如，Kataoka,N.,A.Miya,和K.Kiriyama,1997,Studies on hydrogen production by continuous culture system of hydrogen-producing anaerobic bacteria,Water Science and Technology 36(6-7):41-47；和Gunaseelan V.N.于Biomass and Bioenergy,Vol.13(1-2),pp.83-114,1997,Anaerobicdigestion of biomass for methane production:A review。

回收可以使用本领域已知的任何方法，任选地从发酵培养基回收发酵产物，所述方法包括，但不限于，层析、电泳方法、差示溶解度(例如，硫酸铵沉淀)、蒸馏或提取。例如，通过常规蒸馏方法从发酵的纤维素材料分离并纯化醇。可以获得纯度高达约96vol％的乙醇，其能用作，例如，燃料乙醇、饮料乙醇，即，中性饮料酒，或工业乙醇。

具有纤维素分解增强活性的多肽及其多核苷酸

在本发明的方法中，可使用任何具有纤维素分解增强活性的多肽。

在一个方面，所述具有纤维素分解增强活性的多肽包含下述基序：

[ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ]和[FW]-[TF]-K-[AIV]，

其中X为任意氨基酸，X(4,5)为在4或5个连续位置的任意氨基酸，而X(4)是在4个连续位置的任意氨基酸。

具有上述所示的基序的多肽可进一步包含：

H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV]，

[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV]或

H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV]和[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV]，

其中X为任意氨基酸，X(1,2)为在1个位置或2个连续位置的任意氨基酸，X(3)为3个连续位置的任意氨基酸，而X(2)为2个连续位置的任意氨基酸。在上述基序中，采用公认的IUPAC单字母氨基酸缩写。

在一个优选的方面，所述具有纤维素分解增强活性的多肽进一步包含H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV]。在另一个优选的方面，具有纤维素分解增强活性的分离的多肽包含[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV]。在另一个优选的方面，具有纤维素分解增强活性的多肽进一步包含H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV]和[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV]。

在第二个方面，所述具有纤维素分解增强活性的多肽具有下述基序：

[ILMV]-P-x(4,5)-G-x-Y-[ILMV]-x-R-x-[EQ]-x(3)-A-[HNQ],

其中X为任意氨基酸，X(4,5)为在4或5个连续位置的任意氨基酸，而X(3)为3个连续位置的任意氨基酸。在上述基序中，采用公认的IUPAC单字母氨基酸缩写。

在第三个方面，所述具有纤维素分解增强活性的多肽包含与SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14或SEQ IDNO:16的成熟多肽具有优选至少60％、更优选至少65％、更优选至少70％、更优选至少75％、更优选至少80％、更优选至少85％、甚至更优选至少90％、最优选至少95％且甚至最优选至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性程度的氨基酸序列(下文中称为“同源多肽”)。在一个优选的方面,所述成熟多肽序列为SEQ ID NO:2的氨基酸20至326，SEQ ID NO:4的氨基酸18至239，SEQ ID NO:6的氨基酸20至258，SEQ ID NO:8的氨基酸19至226，SEQ IDNO:10的氨基酸20至304，SEQ ID NO:12的氨基酸16至317，SEQ ID NO:14的氨基酸23至250或SEQ ID NO:16的氨基酸20至249。

具有纤维素分解增强活性的多肽优选包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:2的成熟多肽。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸20至326或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸20至326。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段的氨基酸序列组成。在一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:2的成熟多肽组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:2的氨基酸20至326或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:2的氨基酸20至326组成。

具有纤维素分解增强活性的多肽优选包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:4的成熟多肽。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸18至239或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸18至239。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:4的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段的氨基酸序列组成。在一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:4的氨基酸序列组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:4的成熟多肽组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:4的氨基酸18至239或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:4的氨基酸18至239组成。

具有纤维素分解增强活性的多肽优选包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:6的成熟多肽。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸20至258或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸20至258。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段的氨基酸序列组成。在一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:6的氨基酸序列组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:6的成熟多肽组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:6的氨基酸20至258或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:6的氨基酸20至258组成。

具有纤维素分解增强活性的多肽优选包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:8的成熟多肽。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸19至226或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸19至226。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:8的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段的氨基酸序列组成。在一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:8的氨基酸序列组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:8的成熟多肽组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:8的氨基酸19至226或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:8的氨基酸19至226组成。

具有纤维素分解增强活性的多肽优选包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:10的成熟多肽。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸20至304或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸20至304。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:10的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段的氨基酸序列组成。在一个优选的方面，所述多肽由SEQ IDNO:10的氨基酸序列组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:10的成熟多肽组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:10的氨基酸20至304或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:10的氨基酸20至304组成。

具有纤维素分解增强活性的多肽优选包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:12的成熟多肽。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸16至317或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸16至317。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:12的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段的氨基酸序列组成。在一个优选的方面，所述多肽由SEQ IDNO:12的氨基酸序列组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:12的成熟多肽组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:12的氨基酸16至317或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:12的氨基酸16至317组成。

具有纤维素分解增强活性的多肽优选包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:14的成熟多肽。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸23至250或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸23至250。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:14的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段的氨基酸序列组成。在一个优选的方面，所述多肽由SEQ IDNO:14的氨基酸序列组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:14的成熟多肽组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:14的氨基酸23至250或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:14的氨基酸23至250组成。

具有纤维素分解增强活性的多肽优选包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:16的成熟多肽。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸20至249或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段。在另一个优选的方面，所述多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸20至249。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:16的氨基酸序列或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段的氨基酸序列组成。在一个优选的方面，所述多肽由SEQ IDNO:16的氨基酸序列组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:16的成熟多肽组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:16的氨基酸20至249或其等位变体，或其具有纤维素分解增强活性的片段组成。在另一个优选的方面，所述多肽由SEQ ID NO:16的氨基酸20至249组成。

优选地，SEQ ID NO:2的成熟多肽的片段含有至少277个氨基酸残基，更优选至少287个氨基酸残基，且最优选至少297个氨基酸残基。优选地，SEQ ID NO:4的成熟多肽的片段含有至少185个氨基酸残基，更优选至少195个氨基酸残基，且最优选至少205个氨基酸残基。优选地，SEQ ID NO:6的成熟多肽的片段含有至少200个氨基酸残基，更优选至少212个氨基酸残基，且最优选至少224个氨基酸残基。优选地，SEQ ID NO:8的成熟多肽的片段含有至少175个氨基酸残基，更优选至少185个氨基酸残基，且最优选至少195个氨基酸残基。优选地，SEQ ID NO:10的成熟多肽的片段含有至少240个氨基酸残基，更优选至少255个氨基酸残基，且最优选至少270个氨基酸残基。优选地，SEQ ID NO:12的成熟多肽的片段含有至少255个氨基酸残基，更优选至少270个氨基酸残基，且最优选至少285个氨基酸残基。优选地，SEQ ID NO:14的成熟多肽的片段含有至少175个氨基酸残基，更优选至少190个氨基酸残基，且最优选至少205个氨基酸残基。优选地，SEQ ID NO:16的成熟多肽的片段含有至少200个氨基酸残基，更优选至少210个氨基酸残基，且最优选至少220个氨基酸残基。

优选地，SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列的亚序列含有至少831个核苷酸，更优选至少861个核苷酸，且最优选至少891个核苷酸。优选地，SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列的亚序列含有至少555个核苷酸，更优选至少585个核苷酸，且最优选至少615个核苷酸。优选地，SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列的亚序列含有至少600个核苷酸，更优选至少636个核苷酸，且最优选至少672个核苷酸。优选地，SEQ ID NO:7的成熟多肽编码序列的亚序列含有至少525个核苷酸，更优选至少555个核苷酸，且最优选至少585个核苷酸。优选地，SEQID NO:9的成熟多肽编码序列的亚序列含有至少720个核苷酸，更优选至少765个核苷酸，且最优选至少810个核苷酸。优选地，SEQ ID NO:11的成熟多肽编码序列的亚序列含有至少765个核苷酸，更优选至少810个核苷酸，且最优选至少855个核苷酸。优选地，SEQ ID NO:13的核苷酸67至796的成熟多肽编码序列的亚序列含有至少525个核苷酸，更优选至少570个核苷酸，且最优选至少615个核苷酸。优选地，SEQ ID NO:15的成熟多肽编码序列的亚序列含有至少600个核苷酸，更优选至少630个核苷酸，且最优选至少660个核苷酸。

在第四个方面，具有纤维素分解增强活性的多肽由在至少非常低严格条件，优选至少低严格条件，更优选至少中严格条件，更优选至少中-高严格条件，甚至更优选至少高严格条件，且最优选至少非常高严格条件下与下述杂交的多核苷酸编码：(i)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15的成熟多肽编码序列，(ii)包含于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列中的cDNA序列，或包含SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:15的基因组DNA序列，(iii)(i)或(ii)的亚序列，或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链(J.Sambrook,E.F.Fritsch和T.Maniatus,1989,见上)。SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15的成熟多肽编码序列的亚序列含有至少100个连续的核苷酸，或优选至少200个连续的核苷酸。而且，所述亚序列可编码具有纤维素分解增强活性的多肽片段。在一个优选的方面，所述成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:1的核苷酸388至1332，SEQ ID NO:3的核苷酸98至821，SEQ ID NO:5的核苷酸126至978，SEQ ID NO:7的核苷酸55至678，SEQ IDNO:9的核苷酸58至912，SEQ ID NO:11的核苷酸46至951，SEQ ID NO:13的核苷酸67至796或SEQ ID NO:15的核苷酸77至766。

SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15的核苷酸序列或其亚序列，以及SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14或SEQ IDNO:16的氨基酸序列或其片段，可用于设计核酸探针，以根据本领域内公知的方法从不同属和种的菌株鉴定和克隆编码具有纤维素分解增强活性的多肽的DNA。具体而言，根据标准的Southern印迹方法，可将这些探针用于与感兴趣的属或种的基因组或cDNA杂交，以鉴定和分离其中相应的基因。这些探针可明显短于完整序列，但长度上应为至少14，优选至少25，更优选至少35，并且最优选至少70个核苷酸。然而，优选所述核酸探针是至少100个核苷酸长度。例如，所述核酸探针的长度可为至少200个核苷酸，优选至少300个核苷酸，更优选至少400个核苷酸，或最优选至少500个核苷酸。可使用甚至更长的探针，例如优选至少600个核苷酸，更优选至少700个核苷酸，甚至更优选至少800个核苷酸，或最优选至少900个核苷酸长度的核酸探针。DNA和RNA探针二者均可使用。通常标记探针以探测相应的基因(例如，用³²P、³H、³⁵S、生物素或抗生物素蛋白(avidin)标记)。本发明涵盖此类探针。

因而，可从由此类其他菌株制备的基因组DNA或cDNA文库中筛选与上述探针杂交并且编码具有纤维素分解增强活性的多肽的DNA。可以通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳，或通过其它分离技术分离来自此类其他菌株的基因组或其它DNA。可以将来自文库的DNA或分离的DNA转移至硝化纤维素(nitrocellulose)或其它合适的载体材料并且固定于其上。为了鉴定与SEQ ID NO:1或其亚序列同源的克隆或DNA，将所述载体材料优选用在Sounthern印迹中。

就本发明而言，杂交表示核苷酸序列在如上文所述非常低至非常高的严格条件下与标记的核酸探针杂交，所述核酸探针对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15的成熟多肽编码序列；包含于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列中的cDNA序列，或包含SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:15的基因组DNA序列，其全长互补链，或它们的亚序列。

在一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:1的核苷酸388至1332。在另一个优选的方面，核酸探针是编码SEQ ID NO:2的多肽的多核苷酸序列，或其亚序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQID NO:1。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30699中的质粒pEJG120中含有的多核苷酸序列，其中其多核苷酸序列编码具有纤维素分解增强活性的多肽。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30699中的质粒pEJG120中含有的成熟多肽编码序列。

在一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:3的核苷酸98至821。在另一个优选的方面，核酸探针是编码SEQ ID NO:4的多肽的多核苷酸序列，或其亚序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQID NO:3。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30813中的质粒pTter61C中含有的多核苷酸序列，其中其多核苷酸序列编码具有纤维素分解增强活性的多肽。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30813中的质粒pTter61C中含有的成熟多肽编码序列。

在一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:5的核苷酸126至978。在另一个优选的方面，核酸探针是编码SEQ ID NO:6的多肽的多核苷酸序列，或其亚序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQID NO:5。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30812中的质粒pTter61D中含有的多核苷酸序列，其中其多核苷酸序列编码具有纤维素分解增强活性的多肽。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30812中的质粒pTter61D中含有的成熟多肽编码序列。

在一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:7的成熟多肽编码序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:7的核苷酸55至678。在另一个优选的方面，核酸探针是编码SEQ ID NO:8的多肽的多核苷酸序列，或其亚序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQID NO:7。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30814中的质粒pTter61E中含有的多核苷酸序列，其中其多核苷酸序列编码具有纤维素分解增强活性的多肽。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30814中的质粒pTter61E中含有的成熟多肽编码序列。

在一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:9的核苷酸58至912。在另一个优选的方面，核酸探针是编码SEQ ID NO:10的多肽的多核苷酸序列，或其亚序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQID NO:9。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30811中的质粒pTter61G中含有的多核苷酸序列，其中其多核苷酸序列编码具有纤维素分解增强活性的多肽。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30811中的质粒pTter61G中含有的成熟多肽编码序列。

在一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:11的成熟多肽编码序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:11的核苷酸46至951。在另一个优选的方面，核酸探针是编码SEQ ID NO:12的多肽的多核苷酸序列，或其亚序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:11。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-50044中的质粒pTter61F中含有的多核苷酸序列，其中其多核苷酸序列编码具有纤维素分解增强活性的多肽。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-50044中的质粒pTter61F中含有的成熟多肽编码区。

在一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:13的核苷酸67至796。在另一个优选的方面，核酸探针是编码SEQ ID NO:14的多肽的多核苷酸序列，或其亚序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:13。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30704中的质粒pDZA2-7中含有的多核苷酸序列，其中其多核苷酸序列编码具有纤维素分解增强活性的多肽。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30704中的质粒pDZA2-7中含有的成熟多肽编码序列。

在一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:15的成熟多肽编码序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:15的核苷酸77至766。在另一个优选的方面，核酸探针是编码SEQ ID NO:16的多肽的多核苷酸序列，或其亚序列。在另一个优选的方面，核酸探针是SEQ ID NO:15。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30878中的质粒pTr333中含有的多核苷酸序列，其中其多核苷酸序列编码具有纤维素分解增强活性的多肽。在另一个优选的方面，核酸探针是包含在大肠杆菌NRRL B-30878中的质粒pTr333中含有的成熟多肽编码序列。

对于长度至少100个核苷酸的长探针，将非常低至非常高的严格条件定义为在42℃，在5X SSPE、0.3％SDS、200μg/ml已剪切并且变性的鲑精DNA中，并且对于非常低和低严格性为25％的甲酰胺、对于中和中-高严格性为35％的甲酰胺、或对于高和非常高严格性为50％的甲酰胺，根据标准的Southern印迹法进行预杂交和杂交最佳12至24小时。

对于长度为至少100个核苷酸的长探针，使用2X SSC、0.2％SDS优选至少在45℃(非常低严格性)，更优选至少在50℃(低严格性)，更优选至少在55℃(中严格性)，更优选至少在60℃(中-高严格性)，甚至更优选至少在65℃(高严格性)，并且最优选至少在70℃(非常高严格性)将载体材料最终洗涤三次，每次15分钟。

对于长度大约15个核苷酸至大约70个核苷酸的短探针，将严格条件定义为在比根据Bolton和McCarthy计算法(1962,Proceedings of the National Academy of SciencesUSA 48:1390)得出的T_m低大约5℃至大约10℃，在0.9M NaCl，0.09M Tris-HCl pH 7.6，6mMEDTA，0.5％NP-40，1×Denhardt溶液，1mM焦磷酸钠(sodium pyrophosphate)，1mM磷酸二氢钠(sodium monobasic phosphate)，0.1mM ATP和0.2mg每ml的酵母RNA中，根据标准的Southern印迹步骤进行预杂交、杂交和杂交后洗涤最佳12至24小时。

对于长度大约15个核苷酸至大约70个核苷酸的短探针，将所述载体材料在6×SSC加0.1％SDS中洗涤一次15分钟，并用6×SSC在比计算的T_m低5℃至10℃的温度洗涤两次，每次15分钟。

在第五个方面，所述具有纤维素分解增强活性的多肽是由包含与SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15的成熟多肽编码序列具有优选至少60％，更优选至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，且甚至最优选至少96％，至少97％，至少98％或至少99％同一性程度的核苷酸序列，或由上述核苷酸序列组成的多核苷酸编码的。

在一个优选的方面，所述成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:1的核苷酸388至1332，SEQ ID NO:3的核苷酸98至821，SEQ ID NO:5的核苷酸126至978，SEQ ID NO:7的核苷酸55至678，SEQ ID NO:9的核苷酸58至912，SEQ ID NO:11的核苷酸46至951，SEQ ID NO:13的核苷酸67至796或SEQ ID NO:15的核苷酸77至766。

在第六个方面，所述具有纤维素分解增强活性的多肽是在SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:14或SEQ IDNO:16的成熟多肽或其同源序列中包含一个或多个(几个)氨基酸的取代、缺失和/或插入的人工变体。制备此种人工变体的方法如上文所述。

SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ IDNO:12或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:16成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的总数为10，优选9，更优选8，更优选7，更优选做多6，更优选5，更优选4，甚至更优选3，最优选2，且甚至最优选1。

具有纤维素分解增强活性的多肽可从任何属的微生物获得，在一个优选的方面，从给定来源获得的多肽分泌至胞外。

具有纤维素分解增强活性的多肽可以是细菌多肽。例如，所述多肽可以是革兰氏阳性细菌多肽例如芽孢杆菌属(Bacillus)、链球菌属(Streptococcus)、链霉菌属(Streptomyces)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、梭菌属(Clostridium)、地芽孢杆菌属(Geobacillus)或海洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)多肽，所述多肽具有纤维素分解增强活性；或革兰氏阴性细菌多肽，如大肠杆菌(E.coli)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、螺杆菌属(Helicobacter)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)或脲原体属(Ureaplasma)属多肽，其具有纤维素分解增强活性。

在一个优选方面，所述多肽是具有纤维素分解增强活性的嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillusclausii)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillusfirmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)多肽。

在另一个优选的方面，所述多肽是具有纤维素分解增强活性的似马链球菌(Streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、乳房链球菌(Streptococcus uberis)或马链球菌兽瘟亚种(Streptococcus equisubsp.Zooepidemicus)多肽。

在另一个优选的方面，所述多肽是具有纤维素分解增强活性的不产色链霉菌(Streptomyces achromogenes)、除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)、天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)或浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)多肽。

具有纤维素分解增强活性的多肽也可以是真菌多肽，并且更优选酵母多肽如假丝酵母属(Candida)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)或西洋蓍霉属(Yarrowia)多肽，其具有纤维素分解增强活性；或更优选丝状真菌多肽如枝顶孢霉属(Acremonium)、伞菌属(Agaricus)、链格孢属(Alternaria)、曲霉属(Aspergillus)、短梗霉属(Aureobasidium)、Botryospaeria、拟蜡菌属(Ceriporiopsis)、毛喙壳属(Chaetomidium)、金孢子菌属(Chrysosporium)、Claviceps、Cochliobolus、鬼伞属(Coprinopsis)、Coptotermes、棒囊壳属(Corynascus)、隐丛赤壳菌属(Cryphonectria)、隐球菌属(Cryptococcus)、色二孢属(Diplodia)、黑耳属(Exidia)、Filibasidium、镰孢属(Fusarium)、赤霉属(Gibberella)、全鞭毛虫属(Holomastigotoides)、腐质霉属(Humicola)、耙齿菌属(Irpex)、蘑菇属(Lentinula)、Leptospaeria、梨孢菌属(Magnaporthe)、Melanocarpus、多孔菌属(Meripilus)、毛霉属(Mucor)、毁丝霉属(Myceliophthora)、新考玛脂霉属(Neocallimastix)、脉孢菌属(Neurospora)、拟青霉属(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、平革菌属(Phanerochaete)、瘤胃壶菌属(Piromyces)、Poitrasia、假黑盘菌属(Pseudoplectania)、Pseudotrichonympha、根毛霉属(Rhizomucor)、裂褶菌属(Schizophyllum)、柱顶孢属(Scytalidium)、踝节菌属(Talaromyces)、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、梭孢壳属(Thielavia)、弯颈霉属(Tolypocladium)、木霉属(Trichoderma)、长毛盘菌属(Trichophaea)、轮枝孢属(Verticillium)、包脚菇属(Volvariella)或炭角菌属(Xylaria)多肽，其具有纤维素分解增强活性。

在一个优选的方面，所述多肽是具有纤维素分解增强活性的卡尔酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁弗酵母(Saccharomyces kluyveri)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)或卵形酵母(Saccharomyces oviformis)多肽。

在另一个优选的方面，所述多肽是具有纤维素分解增强活性的解纤维枝顶孢霉(Acremonium cellulolyticus)、棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、臭曲霉(Aspergillusfoetidus)、日本曲霉(Aspergillus japonicus)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、嗜角质金孢子菌(Chrysosporiumkeratinophilum)、Chrysosporium lucknowense、热带金孢子菌(Chrysosporiumtropicum)、Chrysosporium merdarium、Chrysosporium inops、毡金孢子菌(Chrysosporium pannicola)、Chrysosporium queenslandicum、Chrysosporium zonatum、杆孢状镰孢(Fusarium bactridioides)、禾谷镰孢(Fusarium cerealis)、库威镰孢(Fusarium crookwellense)、大刀镰孢(Fusarium culmorum)、禾本科镰孢(Fusariumgraminearum)、禾赤镰孢(Fusarium graminum)、异孢镰孢(Fusarium heterosporum)、合欢木镰孢(Fusarium negundi)、尖镰孢(Fusarium oxysporum)、多枝镰孢(Fusariumreticulatum)、粉红镰孢(Fusarium roseum)、接骨木镰孢(Fusarium sambucinum)、肤色镰孢(Fusarium sarcochroum)、拟分枝孢镰孢(Fusarium sporotrichioides)、硫色镰孢(Fusarium sulphureum)、圆镰孢(Fusarium torulosum)、拟丝孢镰孢(Fusariumtrichothecioides)、镶片镰孢(Fusarium venenatum)、灰腐质霉(Humicola grisea)、特异腐质霉(Humicola insolens)、疏棉状腐质霉(Humicola lanuginosa)、白耙齿菌(Irpexlacteus)、米黑毛霉(Mucor miehei)、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)、绳状青霉(Penicillium funiculosum)、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、Thielaviaachromatica、Thielavia albomyces、Thielavia albopilosa、澳洲梭孢壳(Thielaviaaustraleinsis)、Thielavia fimeti、小孢梭孢壳(Thielavia microspora)、卵孢梭孢壳(Thielavia ovispora)、Thielavia peruviana、Thielavia spededonium、毛梭孢壳(Thielavia setosa)、Thielavia subthermophila、土生梭孢霉(Thielavia terrestris)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、绿色木霉(Trichoderma viride)或Trichophaea saccata多肽。

可理解的是对于前述的种，本发明包含完全和不完全阶段(perfect andimperfect states)，和其它分类学的等同物，例如无性型(anamorph)，而无论它们已知的种名。本领域熟练技术人员将容易地识别适合的等同物的身份。

这些种的菌株在许多培养物保藏中心对于公众能够容易地取得，所述保藏中心诸如美国典型培养物保藏中心(the American Type Culture Collection)(ATCC)、德意志微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH)(DSM)、真菌菌种保藏中心(Centraalbureau VoorSchimmelcultures)(CBS)和农业研究机构专利培养物保藏中心北区研究中心(Agricultural Research Service Patent Culture Collection,Northern RegionalResearch Center)(NRRL)。

此外，可以使用上述的探针从其它来源，包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物鉴定和获得具有纤维素分解增强活性的多肽。用于从天然生境(habitat)分离微生物的技术是本领域内公知的。随后可通过相似地筛选这种微生物的基因组或cDNA文库来获得所述多核苷酸。一旦用所述探针检测到编码多肽的多核苷酸，就能够使用本领域普通技术人员熟知的技术将所述多核苷酸分离或克隆(参见，例如，Sambrook等,1989,见上文)。

可分离包含编码具有纤维素分解增强活性的多肽的核苷酸序列的多核苷酸并将其用于表达具有纤维素分解增强活性的多肽以供如本文中所述在本发明的方法中进行评价。

所述多核苷酸包含编码具有纤维素分解增强活性的多肽，与SEQ ID NO:1，SEQ IDNO:3，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:13或SEQ IDNO:15的成熟多肽编码序列具有优选至少60％，更优选至少65％，更优选至少70％，更优选至少75％，更优选至少80％，更优选至少85％，甚至更优选至少90％，最优选至少95％，且甚至最优选至少96％，至少97％，至少98％或至少99％的同一性程度的核苷酸序列。

所述多核苷酸亦可为编码具有纤维素分解增强活性的多肽的多核苷酸，其在至少非常低严格条件，优选至少低严格条件，更优选至少中严格条件，更优选至少中-高严格条件，甚至更优选至少高严格条件，且最优选至少非常高严格条件下与下述杂交：(i)SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15的成熟多肽编码序列，(ii)包含于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:5或SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列中的cDNA序列，或包含SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:15的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；或如本文中定义的其等位变体和亚序列(J.Sambrook,E.F.Fritsch和T.Maniatus,1989,见上)。在一个优选的方面，所述成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:1的核苷酸388至1332，SEQ ID NO:3的核苷酸98至821，SEQ ID NO:5的核苷酸126至978，SEQ IDNO:7的核苷酸55至678，SEQ ID NO:9的核苷酸58至912，SEQ ID NO:11的核苷酸46至951，SEQ ID NO:13的核苷酸67至796或SEQ ID NO:15的核苷酸77至766。

如前所述，用于分离或克隆编码多肽的多核苷酸的技术在本领域是已知的，并包括从基因组DNA分离，从cDNA制备，或其组合。

纤维二糖脱氢酶及其多核苷酸

在本发明的方法中，所述纤维二糖脱氢酶可为任何纤维二糖脱氢酶。所述纤维二糖脱氢酶可作为酶活性存在于酶组合物和/或作为添加至组合物的一种或多种(几种)蛋白质组分的组分存在。

所述纤维二糖脱氢酶可以获得自任何属的微生物。就本发明而言，用于本文与给定的来源有关的术语“获得自”，意思是核苷酸序列编码的多肽由所述来源产生，或由其中插入了来自所述来源的核苷酸序列的菌株产生。在一个方面，获得自给定来源的多肽分泌至胞外。

所述纤维二糖脱氢酶可以是细菌多肽。例如，所述多肽可以是革兰氏阳性细菌多肽例如芽孢杆菌属(Bacillus)、链球菌属(Streptococcus)、链霉菌属(Streptomyces)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、梭菌属(Clostridium)、地芽孢杆菌属(Geobacillus)或海洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)纤维二糖脱氢酶；或革兰氏阴性细菌多肽，如大肠杆菌(E.coli)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、螺杆菌属(Helicobacter)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)或脲原体属(Ureaplasma)属纤维二糖脱氢酶。

在一个方面，所述多肽是嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)纤维二糖脱氢酶。

在另一个方面，所述多肽是似马链球菌(Streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、乳房链球菌(Streptococcus uberis)或马链球菌兽瘟亚种(Streptococcus equi subsp.Zooepidemicus)纤维二糖脱氢酶。

在另一个方面，所述多肽是不产色链霉菌(Streptomyces achromogenes)、除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)、天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)或浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)纤维二糖脱氢酶。

所述纤维二糖脱氢酶也可以是真菌多肽，并且更优选酵母多肽如假丝酵母属(Candida)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)或西洋蓍霉属(Yarrowia)纤维二糖脱氢酶；或更优选丝状真菌多肽如枝顶孢霉属(Acremonium)、伞菌属(Agaricus)、链格孢属(Alternaria)、曲霉属(Aspergillus)、短梗霉属(Aureobasidium)、Botryospaeria、拟蜡菌属(Ceriporiopsis)、毛喙壳属(Chaetomidium)、金孢子菌属(Chrysosporium)、Claviceps、Cochliobolus、鬼伞属(Coprinopsis)、Coptotermes、棒囊壳属(Corynascus)、隐丛赤壳菌属(Cryphonectria)、隐球菌属(Cryptococcus)、色二孢属(Diplodia)、黑耳属(Exidia)、Filibasidium、镰孢属(Fusarium)、赤霉属(Gibberella)、全鞭毛虫属(Holomastigotoides)、腐质霉属(Humicola)、耙齿菌属(Irpex)、蘑菇属(Lentinula)、Leptospaeria、梨孢菌属(Magnaporthe)、Melanocarpus、多孔菌属(Meripilus)、毛霉属(Mucor)、毁丝霉属(Myceliophthora)、新考玛脂霉属(Neocallimastix)、脉孢菌属(Neurospora)、拟青霉属(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、平革菌属(Phanerochaete)、瘤胃壶菌属(Piromyces)、Poitrasia、假黑盘菌属(Pseudoplectania)、Pseudotrichonympha、根毛霉属(Rhizomucor)、裂褶菌属(Schizophyllum)、柱顶孢属(Scytalidium)、踝节菌属(Talaromyces)、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、梭孢壳属(Thielavia)、弯颈霉属(Tolypocladium)、木霉属(Trichoderma)、长毛盘菌属(Trichophaea)、轮枝孢属(Verticillium)、包脚菇属(Volvariella)或炭角菌属(Xylaria)纤维二糖脱氢酶。

在另一个方面，所述多肽是卡尔酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁弗酵母(Saccharomyces kluyveri)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)或卵形酵母(Saccharomyces oviformis)纤维二糖脱氢酶。

在另一个方面，所述多肽是解纤维枝顶孢霉(Acremonium cellulolyticus)、棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、烟曲霉(Aspergillusfumigatus)、臭曲霉(Aspergillus foetidus)、日本曲霉(Aspergillus japonicus)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillusoryzae)、嗜角质金孢子菌(Chrysosporium keratinophilum)、Chrysosporiumlucknowense、热带金孢子菌(Chrysosporium tropicum)、Chrysosporium merdarium、Chrysosporium inops、毡金孢子菌(Chrysosporium pannicola)、Chrysosporiumqueenslandicum、Chrysosporium zonatum、杆孢状镰孢(Fusarium bactridioides)、禾谷镰孢(Fusarium cerealis)、库威镰孢(Fusarium crookwellense)、大刀镰孢(Fusariumculmorum)、禾本科镰孢(Fusarium graminearum)、禾赤镰孢(Fusarium graminum)、异孢镰孢(Fusarium heterosporum)、合欢木镰孢(Fusarium negundi)、尖镰孢(Fusariumoxysporum)、多枝镰孢(Fusarium reticulatum)、粉红镰孢(Fusarium roseum)、接骨木镰孢(Fusarium sambucinum)、肤色镰孢(Fusarium sarcochroum)、拟分枝孢镰孢(Fusariumsporotrichioides)、硫色镰孢(Fusarium sulphureum)、圆镰孢(Fusarium torulosum)、拟丝孢镰孢(Fusarium trichothecioides)、镶片镰孢(Fusarium venenatum)、灰腐质霉(Humicola grisea)、特异腐质霉(Humicola insolens)、疏棉状腐质霉(Humicolalanuginosa)、白耙齿菌(Irpex lacteus)、米黑毛霉(Mucor miehei)、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)、绳状青霉(Penicillium funiculosum)、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、Thielavia achromatica、Thielavia albomyces、Thielavia albopilosa、澳洲梭孢壳(Thielavia australeinsis)、Thielavia fimeti、小孢梭孢壳(Thielavia microspora)、卵孢梭孢壳(Thielavia ovispora)、Thielaviaperuviana、Thielavia spededonium、毛梭孢壳(Thielavia setosa)、Thielaviasubthermophila、土生梭孢霉、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉(Trichoderma reesei)或绿色木霉(Trichoderma viride)纤维二糖脱氢酶。

其他纤维二糖脱氢酶及其来源的实例列于表1.

表1公开的微生物纤维二糖脱氢酶序列

在另一个方面，所述纤维二糖脱氢酶是特异腐质霉纤维二糖脱氢酶。在另一个方面，所述纤维二糖脱氢酶是特异腐质霉DSM 1800纤维二糖脱氢酶，例如包含由SEQ ID NO:17编码的SEQ ID NO:18的多肽，或其具有纤维二糖脱氢酶活性的片段(参见美国专利6,280,976号)。

在另一个方面，所述纤维二糖脱氢酶是嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶。在另一个方面，所述纤维二糖脱氢酶是嗜热毁丝霉CBS 117.65纤维二糖脱氢酶。

可理解的是对于前述的种，本发明包含完全和不完全阶段，和其它分类学的等同物(equivalent)，例如无性型(anamorph)，而无论它们已知的种名。本领域熟练技术人员将容易地识别适合的等同物的身份。

这些种的菌株在许多培养物保藏中心对于公众能够容易地取得，所述保藏中心诸如美国典型培养物保藏中心(the American Type Culture Collection)(ATCC)、德意志微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH)(DSM)、真菌菌种保藏中心(Centraalbureau VoorSchimmelcultures)(CBS)和农业研究机构专利培养物保藏中心北区研究中心(Agricultural Research Service Patent Culture Collection,Northern RegionalResearch Center)(NRRL)。

如前所述，用于分离或克隆编码多肽的多核苷酸的技术在本领域是已知的，并包括从基因组DNA分离，从cDNA制备，或其组合。

酶组合物

在本发明的方法中，所述酶组合物可包含任何涉及含纤维素材料至葡萄糖和/或纤维二糖，或者半纤维素至木糖、甘露糖、半乳糖和/或阿拉伯糖的加工的蛋白质。

所述酶组合物优选包含一种或多种(几种)纤维素分解酶。所述一种或多种(几种)纤维素分解酶优选选自下组：内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。

在另一个方面，所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)木聚糖降解酶。所述一种或多种(几种)木聚糖降解酶优选选自下组：木聚糖酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、木糖苷酶和葡糖醛酸糖苷酶。

在另一个方面，所述酶组合物可进一步或甚至进一步包含一种或多种(几种)其他酶活性以改善含纤维素材料的降解。其他优选的酶为半纤维素酶(例如α-D-葡糖醛酸糖苷酶、α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶、内切甘露聚糖酶、β-甘露糖苷酶、α-半乳糖苷酶、内切-α-L-阿拉伯聚糖酶、β-半乳糖苷酶)，糖酯酶(例如乙酰木聚糖酯酶、乙酰甘露聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、香豆酸酯酶、葡糖醛酸酯酶(glucuronoyl esterases))，果胶酶，蛋白酶，木质素水解酶(ligninolytic enzyme)(例如漆酶、锰过氧化物酶、木质素过氧化物酶、H₂O₂产生酶、氧化还原酶)，棒曲霉素(expansin)、膨胀素(swollenin)或其组合。在本发明的方法中，其他酶可在发酵之前或之中添加，例如在糖化过程中添加，例如在糖化过程中或在发酵微生物繁殖过程中或之后添加。具有纤维素分解酶活性的多肽可以是细菌多肽。例如，所述多肽可以是革兰氏阳性细菌多肽例如芽孢杆菌属(Bacillus)、链球菌属(Streptococcus)、链霉菌属(Streptomyces)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、梭菌属(Clostridium)、地芽孢杆菌属(Geobacillus)或海洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)多肽，所述多肽具有纤维素分解酶活性；或革兰氏阴性细菌多肽，如大肠杆菌(E.coli)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、螺杆菌属(Helicobacter)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)或脲原体属(Ureaplasma)属多肽，其具有纤维素分解酶活性。

所述酶组合物的一种或多种(几种)组分可为野生型蛋白、重组蛋白或野生型蛋白和重组蛋白的组合。举例而言，一种或多种(几种)组分可为细胞的天然蛋白，其用作宿主细胞以重组表达一种或多种(几种)酶组合物的其他组分。酶组合物的一种或多种(几种)组分可作为单组分产生，然后将其组合以形成酶组合物。所述酶组合物可为多组分和单组分蛋白制备物的组合。

用于本发明方法中的酶可为任何适用于本文中所述工艺的形式，如例如去除或未去除细胞的粗发酵液，具有或不具有细胞碎片的细胞裂解液，半纯化或纯化的酶制备物，或宿主细胞，作为酶的来源。所述酶组合物可为干粉或颗粒，无粉尘的颗粒，液体，稳定化液体或稳定化受保护的酶。液体酶制备物可根据确立的工艺，例如通过添加稳定剂如糖、糖醇或其他多元醇，和/或乳酸或其他有机酸来稳定化。

具有纤维素分解酶活性或木聚糖降解活性的多肽可以是细菌多肽。例如，所述多肽可以是革兰氏阳性细菌多肽如芽孢杆菌属(Bacillus)、链球菌属(Streptococcus)、链霉菌属(Streptomyces)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、梭菌属(Clostridium)、地芽孢杆菌属(Geobacillus)或海洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)多肽，所述多肽具有纤维素分解酶活性或木聚糖降解活性；或革兰氏阴性细菌多肽，如大肠杆菌、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、螺杆菌属(Helicobacter)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)或脲原体属(Ureaplasma)多肽，所述多肽具有纤维素分解酶活性或木聚糖降解活性。

在一个优选的方面，所述多肽是具有纤维素分解活性或木聚糖降解活性的嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或苏云金芽孢杆菌多肽。

在另一个优选的方面，所述多肽是具有纤维素分解活性或木聚糖降解活性的似马链球菌、酿脓链球菌、乳房链球菌或马链球菌兽瘟亚种多肽。

在另一个优选的方面，所述多肽是具有纤维素分解活性或木聚糖降解活性的不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌或浅青紫链霉菌多肽。

具有纤维素分解活性或木聚糖降解活性的多肽也可以是真菌多肽，并且更优选酵母多肽如假丝酵母属、克鲁维酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属或西洋蓍霉属多肽，其具有纤维素分解活性或木聚糖降解活性；或更优选丝状真菌多肽如枝顶孢霉属、伞菌属、链格孢属、曲霉属、短梗霉属、Botryospaeria、拟蜡菌属、毛喙壳属、金孢子菌属、Claviceps、Cochliobolus、Coprinopsis、Coptotermes、棒囊壳属、隐丛赤壳菌属、隐球菌属、色二孢属、黑耳属、Filibasidium、镰孢属、赤霉属、全鞭毛虫属、腐质霉属、耙齿菌属、蘑菇属、Leptospaeria、梨孢菌属、Melanocarpus、多孔菌属、毛霉属、毁丝霉属、新考玛脂霉属、脉孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、瘤胃壶菌属、Poitrasia、假黑盘菌属、Pseudotrichonympha、根毛霉属、裂褶菌属、柱顶孢属、踝节菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、木霉属、长毛盘菌属、轮枝孢属、包脚菇属或炭角菌属多肽，其具有纤维素分解活性或木聚糖降解活性。

在一个优选的方面，所述多肽是具有纤维素分解活性或木聚糖降解活性的卡尔酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母或卵形酵母多肽。

在另一个优选的方面，所述多肽是具有纤维素分解活性或木聚糖降解活性的解纤维枝顶孢霉、棘孢曲霉、泡盛曲霉、烟曲霉、臭曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、嗜角质金孢子菌、Chrysosporium lucknowense、热带金孢子菌、Chrysosporium merdarium、Chrysosporium inops、毡金孢子菌、Chrysosporium queenslandicum、Chrysosporiumzonatum、杆孢状镰孢、禾谷镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾本科镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、灰腐质霉、特异腐质霉、疏棉状腐质霉、白耙齿菌、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、绳状青霉、产紫青霉、黄孢平革菌、Thielavia achromatica、Thielavia albomyces、Thielavia albopilosa、Thielavia australeinsis、Thielaviafimeti、Thielavia microspora、Thielavia ovispora、Thielavia peruviana、瘤孢梭孢壳、毛梭孢壳、Thielavia subthermophila、土生梭孢霉、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、绿色木霉或Trichophaea saccata多肽。

还可以使用具有纤维素分解酶活性或木聚糖降解活性的多肽经化学修饰或蛋白质工程改造的突变体。

所述纤维素分解酶组合物的一种或多种(几种)组分可以是重组组分，亦即，通过克隆编码所述单独组分的DNA序列并随即用该DNA序列转化细胞并在宿主中表达(参见，例如，WO91/17243和WO91/17244)产生。所述宿主优选是异源宿主(酶对宿主是异源的)，但该宿主在一定条件下也可以是同源宿主(酶对宿主是同源的)。单组分纤维素分解蛋白还可以通过从发酵液中纯化这样的蛋白质来制备。

所述一种或多种(几种)纤维素分解酶可为商业性制备物。适用于本发明的商业性的纤维素分解蛋白制备物的实例包括，举例而言，CELLIC^TMCtec(Novozymes A/S)、CELLUCLAST^TM(Novozymes A/S)、NOVOZYM^TM188(Novozymes A/S)、CELLUZYME^TM(NovozymesA/S)、CEREFLO^TM(Novozymes A/S)和ULTRAFLO^TM(Novozymes A/S)，ACCELERASE^TM(GenencorInt.)、LAMINEX^TM(Genencor Int.)、SPEZYME^TMCP(Genencor Int.)，ROHAMENT^TM7069W(GmbH)，LDI(Dyadic International,Inc.)、LBR(Dyadic International,Inc.)或150L(Dyadic International,Inc.)。所述纤维素酶以固体的约0.001到约5.0wt.％，更优选固体的0.025到约4.0wt.％，且最优选固体的约0.005到约2.0wt.％的有效量添加。所述纤维素酶以固体的约0.001到约5.0wt.％，更优选固体的0.025到约4.0wt.％，且最优选固体的约0.005到约2.0wt.％的有效量添加。

可以用于本发明的方法的细菌内切葡聚糖酶的实例包括但不仅限于，解纤维热酸菌(Acidothermus cellulolyticus)内切葡聚糖酶(WO 91/05039；WO 93/15186；美国专利5,275,944；WO 96/02551；美国专利5,536,655，WO 00/70031，WO 05/093050)；Thermobifida fusca内切葡聚糖酶III(WO 05/093050)；和Thermobifida fusca内切葡聚糖酶V(WO 05/093050)。

可以用于本发明的方法的真菌内切葡聚糖酶的实例包括但不仅限于，里氏木霉内切葡聚糖酶I(Penttila等,1986,Gene 45:253-263；GENBANK^TM登录号M15665)；里氏木霉内切葡聚糖酶II(Saloheimo等,1988,Gene 63:11-22；GENBANK^TM登录号M19373)；里氏木霉内切葡聚糖酶III(Okada等,1988,Appl.Environ.Microbiol.64:555-563；GENBANK^TM登录号AB003694)；棘孢曲霉内切葡聚糖酶(Ooi等,1990,Nucleic Acids Research 18:5884)；川地曲霉(Aspergillus kawachii)内切葡聚糖酶(Sakamoto等,1995,Current Genetics 27:435-439)；胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovara)内切葡聚糖酶(Saarilahti等,1990,Gene 90:9-14)；尖镰孢内切葡聚糖酶(GENBANK^TM登录号L29381)；灰腐质霉thermoidea变种内切葡聚糖酶(GENBANK^TM登录号AB003107)；Melanocarpus albomyces内切葡聚糖酶(GENBANK^TM登录号MAL515703)；粗糙脉孢菌内切葡聚糖酶(GENBANK^TM登录号XM_324477)；特异腐质霉内切葡聚糖酶V(SEQ ID NO:20)；嗜热毁丝霉CBS 117.65内切葡聚糖酶(SEQ IDNO:22)；担子菌纲(basidiomycete)CBS 495.95内切葡聚糖酶(SEQ ID NO:24)；担子菌纲CBS 494.95内切葡聚糖酶(SEQ ID NO:26)；土生梭孢霉NRRL 8126CEL6B内切葡聚糖酶(SEQID NO:28)；土生梭孢霉NRRL 8126 CEL6C内切葡聚糖酶(SEQ ID NO:30)；土生梭孢霉NRRL8126 CEL7C内切葡聚糖酶(SEQ ID NO:32)；土生梭孢霉NRRL 8126 CEL7E内切葡聚糖酶(SEQ ID NO:34)；土生梭孢霉NRRL 8126 CEL7F内切葡聚糖酶(SEQ ID NO:36)；Cladorrhinum foecundissimum ATCC 62373 CEL7A内切葡聚糖酶(SEQ ID NO:38)；以及里氏木霉菌株VTT-D-80133内切葡聚糖酶(SEQ ID NO:40；GENBANK^TM登录号M15665)。上述SEQID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQID NO:32、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:40的内切葡聚糖酶分别由SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:39的成熟多肽编码序列编码。

可用于本发明的方法的纤维二糖水解酶的示例包括但不仅限于，里氏木霉纤维二糖水解酶I(SEQ ID NO:42)；里氏木霉纤维二糖水解酶II(SEQ ID NO:44)；特异腐质霉纤维二糖水解酶I(SEQ ID NO:46)、嗜热毁丝霉纤维二糖水解酶II(SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:50)、土生梭孢霉纤维二糖水解酶II(CEL6A)(SEQ ID NO:52)、嗜热毛壳菌(Chaetomiumthermophilum)纤维二糖水解酶I(SEQ ID NO:54)以及嗜热毛壳菌纤维二糖水解酶II(SEQID NO:56)。上述SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:54的纤维二糖水解酶分别由SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列编码。

可用于本发明的方法的β-葡糖苷酶的实例包括但不仅限于米曲霉β-葡糖苷酶(SEQ ID NO:58)；烟曲霉β-葡糖苷酶(SEQ ID NO:60)；巴西青霉(Penicilliumbrasilianum)IBT 20888β-葡糖苷酶(SEQ ID NO:62)；黑曲霉β-葡糖苷酶(SEQ ID NO:64)；以及棘孢曲霉β-葡糖苷酶(SEQ ID NO:66)。上述SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:66的β-葡糖苷酶分别由SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:59、SEQID NO:61、SEQ ID NO:63和SEQ ID NO:65的成熟多肽编码序列编码。

具有β-葡糖苷酶活性的米曲霉多肽可根据WO 2002/095014获取。具有β-葡糖苷酶活性的烟曲霉多肽可根据WO 2005/047499获取。具有β-葡糖苷酶活性的巴西青霉多肽可根据WO 2007/019442获取。具有β-葡糖苷酶活性的黑曲霉多肽可根据Dan等,2000,J.Biol.Chem.275:4973-4980获取。具有β-葡糖苷酶活性的棘孢曲霉多肽可根据Kawaguchi等,1996,Gene 173:287-288获取。

所述β-葡糖苷酶可以是融合蛋白。在一个方面，所述β-葡糖苷酶是SEQ ID NO:68的米曲霉β-葡糖苷酶变体BG融合蛋白或SEQ ID NO:70的米曲霉β-葡糖苷酶融合蛋白。在另一个方面，所述米曲霉β-葡糖苷酶变体BG融合蛋白由SEQ ID NO:67的多核苷酸编码，或所述米曲霉β-葡糖苷酶融合蛋白由SEQ ID NO:69的多核苷酸编码。

其它内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶使用根据Henrissat B.,1991,A classification of glycosyl hydrolases based on amino-acid sequencesimilarities,Biochem.J.280:309-316和Henrissat B.和Bairoch A.,1996,Updatingthe sequence-based classification of glycosyl hydrolases,Biochem.J.316:695-696的分类公开于许多糖基水解酶家族中。

其它可用于本发明的纤维素分解酶描述于EP 495,257、EP 531,315、EP 531,372、WO 89/09259、WO 94/07998、WO 95/24471、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 96/034108、WO97/14804、WO 98/08940、WO 98/012307、WO 98/13465、WO 98/015619、WO 98/015633、WO98/028411、WO 99/06574、WO 99/10481、WO 99/025846、WO 99/025847、WO 99/031255、WO2000/009707、WO 2002/050245、WO 2002/0076792、WO 2002/101078、WO 2003/027306、WO2003/052054、WO 2003/052055、WO 2003/052056、WO 2003/052057、WO 2003/052118、WO2004/016760、WO 2004/043980、WO 2004/048592、WO 2005/001065、WO 2005/028636、WO2005/093050、WO 2005/093073、WO 2006/074005、WO 2006/117432、WO 2007/071818、WO2007/071820、WO 2008/008070、WO 2008/008793、美国专利No.4,435,307、美国专利No.5,457,046、美国专利No.5,648,263、美国专利No.5,686,593、美国专利No.5,691,178、美国专利No.5,763,254以及美国专利No.5,776,757。

所述一种或多种(几种)木聚糖降解酶可为商业性制备物。适用于本发明的商业性木聚糖降解酶制备物的实例包括，例如SHEARZYME^TM(Novozymes A/S)、CELLIC^TMHtec(Novozymes A/S)、(Novozymes A/S)、(Novozymes A/S)、HC(Novozymes A/S)、Xylanase(Genencor)、TX-200A(AB Enzymes)、HSP 6000Xylanase(DSM)、DEPOL^TM333P(Biocatalysts Limit,Wales,UK)、DEPOL^TM740L.(Biocatalysts Limit,Wales,UK)和DEPOL^TM762P(Biocatalysts Limit,Wales,UK)。

可用于本发明方法的木聚糖酶的实例包括但不限于棘孢曲霉(Aspergillusaculeatus)木聚糖酶(GeneSeqP:AAR63790；WO 94/21785)、烟曲霉(Aspergillusfumigatus)木聚糖酶(WO 2006/078256)和土生梭孢霉(Thielavia terrestris)NRRL 8126木聚糖酶(WO 2009/079210)。

可用于本发明方法的β-木糖苷酶的实例包括但不限于里氏木霉(Trichodermareesei)β-木糖苷酶(UniProtKB/TrEMBL登录号Q92458),埃默森踝节菌(Talaromycesemersonii)(SwissProt登录号Q8X212)和粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)(SwissProt登录号Q7SOW4)。

可用于本发明方法的乙酰木聚糖酯酶的实例包括但不限于红褐肉座菌(Hypocreajecorina)乙酰木聚糖酯酶(WO 2005/001036)、粗糙脉孢菌乙酰木聚糖酯酶(UniProt登录号q7s259)、土生梭孢霉NRRL 8126乙酰木聚糖酯酶(WO 2009/042846)、球毛壳菌(Chaetomium globosum)乙酰木聚糖酯酶(Uniprot登录号Q2GWX4)、细丽毛壳菌(Chaetomium gracile)乙酰木聚糖酯酶(GeneSeqP登录号AAB82124)、颖枯壳针孢(Phaeosphaeria nodorum)乙酰木聚糖酯酶(Uniprot登录号Q0UHJ1)和特异腐质霉(Humicola insolens)DSM 1800乙酰木聚糖酯酶(WO 2009/073709)。

可用于本发明方法的阿魏酸酯酶的实例包括但不限于特异腐质霉DSM 1800阿魏酸酯酶(WO 2009/076122)、粗糙脉孢菌阿魏酸酯酶(UniProt登录号Q9HGR3)和费希新萨托菌(Neosartorya fischer)阿魏酸酯酶(UniProt登录号A1D9T4)。

可用于本发明方法的阿拉伯呋喃糖苷酶的实例包括但不限于特异腐质霉(Humicola insolens)DSM 1800阿拉伯呋喃糖苷酶(WO 2009/073383)和黑曲霉(Aspergillus niger)阿拉伯呋喃糖苷酶(GeneSeqP登录号AAR94170)。

可用于本发明方法的α-葡糖醛酸糖苷酶的实例包括但不限于棒曲霉(Aspergillus clavatus)α-葡糖醛酸糖苷酶(UniProt登录号alcc12)、里氏木霉(Trichoderma reesei)α-葡糖醛酸糖苷酶(Uniprot登录号Q99024)、埃默森踝节菌(Talaromyces emersonii)α-葡糖醛酸糖苷酶(UniProt登录号Q8X211)、黑曲霉(Aspergillus niger)α-葡糖醛酸糖苷酶(Uniprot登录号Q96WX9)、土曲霉(Aspergillusterreus)α-葡糖醛酸糖苷酶(SwissProt登录号Q0CJP9)和烟曲霉(Aspergillusfumigatus)α-葡糖醛酸糖苷酶(SwissProt登录号Q4WW45)。

用于本发明方法的酶和蛋白可通过在含有合适碳源和氮源和无机盐，使用本领域已知方法(参见，例如Bennett,J.W.和LaSure,L.(编),More Gene Manipulations inFungi,Academic Press,CA,1991)的营养培养基上发酵上述指出的微生物菌株来产生。合适的培养基可从供应商获得，或可根据已公开组合物制备(例如美国典型培养物保藏中心的目录)。适于生长和酶产生的温度范围和其他条件在本领域是已知的(参见，例如Bailey,J.E.和Ollis,D.F.,Biochemical Engineering Fundamentals,McGraw-Hill BookCompany,NY,1986)。

所述发酵可以是任何导致酶表达或分离的培养细胞的方法。因此，发酵可以理解为包括在合适的培养基中并在允许所述酶得以表达或分离的条件下进行的摇瓶培养，或在实验室或工业发酵罐中的小-或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)。通过上述方法产生的所得的酶可从发酵培养基回收并通过常规方法纯化。

核酸构建体

可构建包含与一个或多个(几个)调控序列可操作地连接的编码感兴趣的多肽的分离的多核苷酸的核酸构建体，使其在合适的宿主细胞中在与该调控序列相容的条件下指导编码序列的表达。

可以用许多方式操作所述分离的多核苷酸以提供多肽的表达。取决于表达载体，在将多核苷酸的序列插入载体之前对其进行操作可能是理想的或必需的。使用重组DNA方法修饰多核苷酸序列的技术是本领域熟知的。

调控序列可以是适当的启动子序列，其是由用于表达编码本发明多肽的多核苷酸的宿主细胞识别的核苷酸序列。启动子序列含有介导多肽的表达的转录调控序列。启动子可以是在所选的宿主细胞中显示转录活性的任何核苷酸序列，包括突变的、截短的和杂合的启动子，并且可以从编码与宿主细胞同源或异源的胞外或胞内多肽的基因获得。

用于指导核酸构建体转录，特别是在细菌宿主细胞中转录的合适启动子的实例是从下述获得的启动子：大肠杆菌lac操纵子、天蓝链霉菌琼脂糖酶基因(dagA)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽淀粉酶基因(amyM)、解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等,1978,Proceedings of the National Academy of Sciences USA 75:3727-3731)，以及tac启动子(DeBoer等,1983,Proceedings of the National Academy of Sciences USA 80:21-25)。另外的启动子在"Useful proteins from recombinant bacteria"于ScientificAmerican,1980,242:74-94中；和在Sambrook等,1989,见上文中描述。

用于指导本发明的核酸构建体在丝状真菌宿主细胞中转录的合适启动子的实例是从下列酶的基因获得的启动子：米曲霉TAKA淀粉酶、曼赫根毛霉(Rhizomucor miehei)天冬氨酸蛋白酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡糖淀粉酶(glaA)、曼赫根毛霉脂肪酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、构巢曲霉乙酰胺酶、镶片镰孢淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(WO 00/56900)、尖镰孢胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶IV、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉β-木糖苷酶，以及NA2-tpi启动子(一种修饰的启动子，其包含在曲霉属中编码中性α-淀粉酶的基因，其中未翻译的前导序列由在曲霉属中编码丙糖磷酸异构酶的基因的未翻译的前导序列所替代；非限制性实例包括修饰的启动子，其包含在黑曲霉中编码中性α-淀粉酶的基因，其中未翻译的前导序列由在构巢曲霉和米曲霉中编码丙糖磷酸异构酶的基因的未翻译的前导序列所替代)；和它们的突变的、截短的和杂合的启动子。

在酵母宿主中，有用的启动子从如下酶的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1,ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)和酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。对于酵母宿主细胞其它有用的启动子由Romanos等,1992,Yeast 8:423-488描述。

调控序列也可以是合适的转录终止子序列，是由宿主细胞识别以终止转录的序列。所述终止子序列与编码所述多肽的核苷酸序列的3’末端可操作地连接。可以将在所选宿主细胞中有功能的任何终止子用在本发明中。

对于丝状真菌宿主细胞优选的终止子从如下酶的基因获得：米曲霉TAKA淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉α-葡糖苷酶和尖镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。

对于酵母宿主细胞优选的终止子从如下酶的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)和酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。对于酵母宿主细胞其它有用的终止子由Romanos等,1992,见上文描述。

调控序列还可以是合适的前导序列，其是对于宿主细胞的翻译重要的mRNA非翻译区。前导序列可操作地连接于编码多肽的核苷酸序列的5’-末端。可以将在所选宿主细胞中有功能的任何前导序列用在本发明中。

对于丝状真菌宿主细胞优选的前导序列从如下酶的基因获得：米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶。

对于酵母宿主细胞合适的前导序列从如下酶的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α因子和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。

调控序列也可以是聚腺苷酸化序列，其是与核苷酸序列的3’末端可操作地连接的序列，并且在转录时，宿主细胞将其识别为将聚腺苷残基添加至转录的mRNA的信号。可以将在所选宿主细胞中有功能的任何聚腺苷酸化序列在本发明中使用。

对于丝状真菌宿主细胞优选的聚腺苷酸化序列从如下酶的基因获得：米曲霉TAKA淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、尖镰孢胰蛋白酶样蛋白酶和黑曲霉α-葡糖苷酶。

对于酵母宿主细胞有用的聚腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,MolecularCellular Biology 15:5983-5990描述。

调控序列还可以是信号肽编码区，其编码与多肽的氨基末端相连的信号肽，并且指导编码的多肽进入细胞分泌途径。核苷酸序列的编码序列5’端可固有地包含信号肽编码区，其与编码分泌多肽的编码区片段一起天然地连接在翻译阅读框中。可供选择的是，编码序列5’端可含有对于所述编码序列异源的信号肽编码区。异源信号肽编码区在编码序列不天然地含有信号肽编码区时可为必需的。或者，外源信号肽编码区可以简单地取代天然信号肽编码区以增强多肽的分泌。然而，指导表达的多肽进入所选宿主细胞的分泌途径(即，分泌至培养基中)的任何信号肽编码区可在本发明中使用。

对于细菌宿主细胞有效的信号肽编码区是从如下酶的基因获得的信号肽编码区：芽孢杆菌属NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT,nprS,nprM)和枯草芽孢杆菌prsA。另外的信号肽由Simonen和Palva,1993,Microbiological Reviews 57:109-137描述。

对于丝状真菌宿主细胞有效的信号肽编码区是从如下酶的基因获得的信号肽编码区：米曲霉TAKA淀粉酶、黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、曼赫根毛霉天冬氨酸蛋白酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V和疏棉状腐质霉脂肪酶。

对于酵母宿主细胞有用的信号肽从酿酒酵母α因子和酿酒酵母转化酶的基因获得。其它有用的信号肽编码区由Romanos等,1992,见上文描述。

调控序列还可以是前肽编码序列，其编码位于多肽氨基末端的前肽。所得多肽称为酶原(proenzyme)或前多肽(propolypeptide)(或在某些情况下称为酶原(zymogen))。前多肽通常是无活性的并且能够通过前肽的催化或自催化切割从前多肽转化为成熟活性多肽。可以从枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、酿酒酵母α因子、曼赫根毛霉天冬氨酸蛋白酶和嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)的基因获得前肽编码序列。

当信号肽和前肽序列二者均出现在多肽的氨基末端时，将前肽序列置于紧接着(next to)多肽氨基末端，并且将信号肽序列置于紧接着前肽序列的氨基末端。

同样理想的是添加调节序列，其允许相对于宿主细胞的生长来调节多肽的表达。调节系统的实例是引起基因表达响应化学或物理刺激物，包括调节化合物的存在而开启或关闭的那些系统。原核系统中的调节系统包括lac、tac和trp操纵基因系统。在酵母中，可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用TAKA α-淀粉酶启动子、黑曲霉葡糖淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子作为调节序列。调节序列的其它实例是那些允许基因扩增的序列。在真核系统中，这些序列包括在氨甲蝶呤(methotrexate)存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因，和以重金属(with heavy metal)扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况下，编码多肽的核苷酸序列将与调节序列可操作地连接。

表达载体

可构建包含编码感兴趣的多肽的多核苷酸、启动子和转录和翻译终止信号的重组表达载体以供在合适的宿主细胞中表达所述多肽。本文所述的多种核酸和调控序列可以结合在一起以产生重组表达载体，所述表达载体可以包括一个或多个(几个)方便的限制位点以允许在这些位点插入或取代编码多肽的核苷酸序列。可供选择的是，可以通过在适当的用于表达的载体中插入包含所述序列的核苷酸序列或核酸构建体来表达多核苷酸序列。在制备表达载体的过程中，将编码序列置于载体中，从而将该编码序列与适当的表达调控序列可操作地连接。

重组表达载体可以是任何载体(例如，质粒或病毒)，其能够方便地进行重组DNA步骤，并且能够产生核苷酸序列的表达。载体的选择将通常依赖于载体与将引入该载体的宿主细胞的相容性。载体可以是线状或闭合环状质粒。

载体可以是自主复制载体，即，作为染色体外实体(entity)存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如，质粒、染色体外元件、微型染色体(minichromosome)或人工染色体。载体可以含有任何用于确保自复制的手段(means)。或者，载体可以是一种当被引入宿主细胞中时，整合到基因组中并且与整合了该载体的染色体一起复制的载体。此外，可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同含有待引入宿主细胞基因组的完整DNA(total DNA)，或可以使用转座子(transposon)。

所述载体优选地含有一个或多个(几个)选择性标记，其允许简单选择经转化、转染、转导等的细胞。选择性标记是基因，其产物提供杀生物剂或病毒抗性、对重金属的抗性、对营养缺陷型的原养性(prototrophy to auxotrophs)等。

细菌选择性标记的实例是来自枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的dal基因，或赋予抗生素抗性的标记，所述抗生素抗性例如氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素或四环素抗性。对于酵母宿主细胞合适的标记是ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于丝状真菌宿主细胞的选择性标记包括但不限于amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草铵膦(phosphinothricin)乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)(nitrate reductase)、pyrG(乳清酸核苷-5’-磷酸脱羧酶)(orotidine-5’-phosphatedecarboxylase)、sC(硫酸腺苷酰转移酶)和trpC(邻氨基苯甲酸合酶(anthranilatesynthase))以及它们的等同物。优选用在曲霉属细胞中的是构巢曲霉或米曲霉的amdS和pyrG基因和吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的bar基因。

所述载体优选含有元件，其允许载体整合入宿主细胞基因组或载体在细胞中独立于基因组的自主复制。

为了整合入宿主细胞基因组，载体可依赖编码多肽的多核苷酸的序列或用于通过同源或非同源重组整合入基因组的任何其它载体元件。或者，载体可以含有额外的核苷酸序列，用于指导通过同源重组整合入宿主细胞基因组染色体中的精确位置。为了增加在精确位置整合的可能性，整合元件应优选含有足够数量的核酸，如100至10,000碱基对，优选400至10,000碱基对，并且最优选800至10,000碱基对，其与相应的目标序列具有高度同一性以增强同源重组的概率。整合元件可以是任何序列，其与宿主细胞基因组中的目标序列同源。此外，整合元件可以是非编码或编码的核苷酸序列。另一方面，可以将载体通过非同源重组整合到宿主细胞的基因组中。

为了自主复制，载体可以进一步包含复制起点，其使载体能够在所述的宿主细胞中自主地复制。复制起点可以是介导自主复制的任何质粒复制子(replicator)，其在细胞中发挥功能。术语“复制起点”或“质粒复制子”在本文定义为能够使质粒或载体体内复制的核苷酸序列。

细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177和pACYC184的复制起点，和允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060和pAMβ1的复制起点。

用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点，ARS1,ARS4,ARS1和CEN3的组合，和ARS4和CEN6的组合。

在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等,1991,Gene 98:61-67；Cullen等,1987,Nucleic Acids Research 15:9163-9175；WO 00/24883)。分离AMA1基因和构建包含该基因的质粒或载体能够根据公开于WO 00/24883中的方法完成。

可以将多于一个拷贝的本发明的多核苷酸插入宿主细胞以增加基因产物的产生。多核苷酸拷贝数的增加可通过如下方法获得：将至少一个额外拷贝的序列整合入宿主细胞基因组，或将可扩增的选择性标记基因包括于多核苷酸，其中可通过在合适的选择剂(selectable agent)存在下培养细胞来选择含有选择性标记基因的扩增拷贝，且由此含有多核苷酸的额外拷贝的细胞。

用于连接上述元件以构建重组表达载体的方法是本领域技术人员熟知的(参见，例如，Sambrook等,1989,见上文)。

宿主细胞

可将包含编码感兴趣的多肽的分离的多核苷酸的核酸构建体或表达载体导入重组宿主细胞以供所述多肽的重组产生。将包含多核苷酸的载体导入宿主细胞，使载体如前所述作为染色体整体或者作为自复制的染色体外载体维持。术语“宿主细胞”包括亲本细胞的任何后代，其由于复制过程中发生的突变而不同于亲本细胞。宿主细胞的选择将在很大程度上依赖于编码多肽的基因及其来源。

宿主细胞可以是在多肽的重组产生中有用的任何细胞，例如，原核或真核细胞。

原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于，芽孢杆菌属、链球菌属、链霉菌属、葡萄球菌属、肠球菌属、乳杆菌属、乳球菌属、梭菌属、地芽孢杆菌属和海洋芽孢杆菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于，大肠杆菌、假单胞菌属、沙门氏菌属、弯曲杆菌属、螺杆菌属、黄杆菌属、梭杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属和脲原体属。

细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞。芽孢杆菌属细胞包括但不限于，嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌细胞。

在一个优选的方面，细菌宿主细胞是解淀粉芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌。在一个更优选的方面，细菌宿主细胞是解淀粉芽孢杆菌细胞。在另一个更优选的方面，细菌宿主细胞是克劳氏芽孢杆菌细胞。在另一个更优选的方面，细菌宿主细胞是地衣芽孢杆菌细胞。在另一个更优选的方面，细菌宿主细胞是枯草芽孢杆菌细胞。

细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞。链球菌属细胞包括但不限于，似马链球菌、酿脓链球菌、乳房链球菌和马链球菌兽瘟亚种细胞。

在一个优选的方面，细菌宿主细胞是似马链球菌细胞。在另一个优选的方面，细菌宿主细胞是酿脓链球菌细胞。在另一个优选的方面，细菌宿主细胞是乳房链球菌细胞。在另一个优选的方面，细菌宿主细胞是马链球菌兽瘟亚种细胞。

细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞。链霉菌属细胞包括但不限于，不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌和浅青紫链霉菌细胞。

在一个优选的方面，细菌宿主细胞是不产色链霉菌细胞。在另一个优选的方面，细菌宿主细胞是除虫链霉菌细胞。在另一个优选的方面，细菌宿主细胞是天蓝链霉菌细胞。在另一个优选的方面，细菌宿主细胞是灰色链霉菌细胞。在另一个优选的方面，细菌宿主细胞是浅青紫链霉菌细胞。

可通过如下方法实现将DNA引入到芽孢杆菌属细胞：例如原生质体转化(参见，例如，Chang和Cohen,1979,Molecular General Genetics 168:111-115)，使用感受态细胞(参见，例如，Young和Spizizen,1961,Journal of Bacteriology 81:823-829或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,Journal of Molecular Biology 56:209-221)，电穿孔(参见，例如，Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques 6:742-751)或接合(参见，例如，Koehler和Thorne,1987,Journal of Bacteriology 169:5771-5278)。可通过如下方法实现将DNA引入到大肠杆菌细胞：例如原生质体转化(参见，例如，Hanahan,1983,J.Mol.Biol.166:557-580)或电穿孔(参见，例如，Dower等,1988,Nucleic Acids Res.16:6127-6145)。可通过如下方法实现将DNA引入到链霉菌属细胞：例如原生质体转化和电穿孔(参见，例如，Gong等,2004,Folia Microbiol.(Praha)49:399-405)，接合(参见，例如，Mazodier等,1989,J.Bacteriol.171:3583-3585)，或转导(参见，例如，Burke等,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98:6289-6294)。可通过如下方法实现将DNA引入到假单胞菌属细胞：例如电穿孔(参见，例如，Choi等,2006,J.Microbiol.Methods 64:391-397)或接合(参见，例如，Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.71:51-57)。可通过如下方法实现将DNA引入到链球菌属细胞：例如天然感受态(natural competence)(参见，例如，Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.32:1295-1297)，原生质体转化(参见，例如，Catt和Jollick,1991,Microbios.68:189-207)，电穿孔(参见，例如，Buckley等,1999,Appl.Environ.Microbiol.65:3800-3804)或接合(参见，例如，Clewell,1981,Microbiol.Rev.45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞的任何方法。

宿主细胞还可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。

在一个优选的方面，宿主细胞是真菌细胞。“真菌”用在本文包括以下门：子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)(如由Hawksworth等,于Ainsworth and Bisby’s Dictionary of TheFungi,第8版,1995,CAB International,University Press,Cambridge,UK中所定义)以及卵菌门(Oomycota)(如Hawksworth等,1995,见上,171页中所引用)，和所有有丝分裂孢子真菌(mitosporic fungi)(Hawksworth等,1995,见上文)。

在一个更优选的方面，真菌宿主细胞是酵母细胞。“酵母”用在本文包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类在未来可能改变，就本发明而言，将酵母定义为如Biology and Activities of Yeast(Skinner,F.A.,Passmore,S.M.,和Davenport,R.R.编,Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9,1980)中所述。

在一个甚至更加优选的方面，酵母宿主细胞是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁维酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属或西洋蓍霉属细胞。

在最优选的方面，酵母宿主细胞是卡尔酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母或卵形酵母细胞。在另一个最优选的方面，酵母宿主细胞是乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)细胞。在另一个最优选的方面，酵母宿主细胞是解脂西洋蓍霉(Yarrowia lipolytica)细胞。

在另一个更优选的方面，真菌宿主细胞是丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门的亚门(如由Hawksworth等,1995,见上文，所定义)的所有丝状形式。丝状真菌通常的特征在于由壳多糖(chitin)、纤维素、葡聚糖、壳聚糖(chitosan)、甘露聚糖和其它复杂多糖组成的菌丝体壁。通过菌丝延伸进行营养生长，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母例如酿酒酵母的营养生长通过单细胞菌体的出芽生殖(budding)进行，而碳分解代谢可以是发酵的。

在一个甚至更优选的方面，丝状真菌宿主细胞是枝顶孢霉属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属(Bjerkandera)、拟蜡菌属、金孢子菌属、鬼伞属(Coprinus)、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属、Filibasidium、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新考玛脂霉属、脉孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属、踝节菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属(Trametes)或木霉属细胞。

在最优选的方面，丝状真菌宿主细胞是泡盛曲霉、烟曲霉、臭曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉或米曲霉细胞。在另一个最优选方面，丝状真菌宿主细胞是杆孢状镰孢、禾谷镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾本科镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢或镶片镰孢细胞。在另一个最优选的方面，丝状真菌宿主细胞是黑刺烟管菌(Bjerkanderaadusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsis aneirina)、干拟蜡菌、Ceriporiopsis caregiea、Ceriporiopsis gilvescens、Ceriporiopsis pannocinta、Ceriporiopsis rivulosa、Ceriporiopsis subrufa、虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora)、嗜角质金孢子菌、Chrysosporium lucknowense、热带金孢子菌、Chrysosporium merdarium、Chrysosporiuminops、毡金孢子菌、Chrysosporium queenslandicum、Chrysosporium zonatum、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolus hirsutus)、特异腐质霉、疏棉状腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、产紫青霉、黄孢平革菌、辐射射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、土生梭孢霉、长绒毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉或绿色木霉细胞。

可以将真菌细胞通过涉及原生质体形成、原生质体转化和细胞壁重建的方法以本身公知的方式转化。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的合适方法在EP 238 023和Yelton等,1984,Proceedings of the National Academy of Sciences USA 81:1470-1474中描述。用于转化镰孢属菌种的合适方法由Malardier等,1989,Gene 78:147-156和WO 96/00787描述。可以使用由如下文献描述的方法转化酵母：Becker和Guarente,于Abelson,J.N.和Simon,M.I.编,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology,Methods inEnzymology,Volume 194,pp 182-187,Academic Press,Inc.,New York；Ito等,1983,Journal of Bacteriology 153:163；和Hinnen等,1978,Proceedings of the NationalAcademy of Sciences USA 75:1920。

产生方法

感兴趣的多肽可通过下述方法来产生：(a)在有助于产生多肽的条件下培养细胞，所述细胞以其野生型形式产生所述多肽；和(b)回收所述多肽。

感兴趣的多肽还可通过下述方法来产生：(a)如本文所述，在有助于产生多肽的条件下培养重组宿主细胞；和(b)回收所述多肽。

在所述产生方法中，使用本领域熟知的方法在适合于产生所述多肽的营养培养基中培养细胞。例如，可以通过在合适培养基中和允许表达和/或分离所述多肽的条件下进行的摇瓶培养，和实验室或工业发酵罐中的小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)来培养细胞。使用本领域已知的方法在合适的营养培养基中进行培养，所述营养培养基包含碳源和氮源和无机盐。合适的培养基能够从商业供应商获得或可以根据公开的组成制备(例如，在美国典型培养物保藏中心的目录中)。如果多肽分泌到营养培养基中，该多肽能够从所述培养基中直接回收。如果多肽不分泌到培养基中，其能够从细胞裂解物(lysate)回收。

可以使用本领域已知的对于所述多肽是特异性的方法来检测多肽。这些检测方法可包括特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，酶试验(enzyme assay)可用于测定如本文所述的多肽的活性。

所得多肽可以使用本领域已知的方法回收。例如，多肽可以通过常规方法从营养培养基中回收，所述常规方法包括但不限于离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀。

所述多肽可以通过多种本领域已知的方法纯化以获得基本上纯的多肽，所述方法包括但不限于层析、电泳方法、差示溶解度、SDS-PAGE或提取(参见，例如，ProteinPurification,J.-C.Janson和Lars Ryden编,VCH Publishers,New York,1989)。

本发明进一步通过下述实施例进行描述，其不应视为对本发明范围的限制。

实施例

培养基

2X YT平板由10g的胰蛋白胨，5g的酵母提取物，5g的氯化钠，15g的细菌琼脂，和加至1升的去离子水组成。

PDA平板由39g的马铃薯右旋糖琼脂和加至1升的去离子水组成。

MDU2BP培养基由45g的麦芽糖，1g的MgSO₄·7H₂O，1g的NaCl，2g的K₂HSO₄，12g的KH₂PO₄，2g的尿素，500μl的AMG微量金属溶液，和加至1升的去离子水组成；其pH调整至5.0，然后用0.22μm过滤单元进行过滤灭菌。

AMG微量金属溶液由14.3g的ZnSO₄·7H₂O，2.5g的CuSO₄·5H₂O，0.5g的NiCl₂·6H₂O，13.8g的FeSO₄·H₂O，8.5g的MnSO₄·7H₂O，3g的柠檬酸和加至1升的去离子水组成。

YEG培养基由5g的酵母提取物，20g的D-葡萄糖，和加至1升的去离子水组成。

实施例1：嗜热毁丝霉CBS 117.65的生长

将来自嗜热毁丝霉CBS 117.65的PDA平板的两个栓(plug)接种入含有100ml摇瓶培养基的500ml摇瓶以获得用于纯化纤维二糖脱氢酶的培养液。PDA平板由39g马铃薯右旋糖琼脂和加至1升的去离子水组成。摇瓶培养基由15g的葡萄糖，4g的K₂HPO₄，1g的NaCl，0.2g的MgSO₄·7H₂O，2g的不含MES的酸(MES free acid)，1g的细菌蛋白胨，5g的酵母提取物，2.5g的柠檬酸，0.2g的CaCl₂·2H₂O，5g的NH₄NO₃，1ml的微量元素溶液，和加至1升的去离子水组成。所述微量元素溶液由1.2g的FeSO₄·7H₂O，10g的ZnSO₄·7H₂O，0.7g的MnSO₄·H₂O，0.4g的CuSO₄·5H₂O，0.4g的Na₂B₄O₇·10H₂O，0.8g的Na₂MoO₂·2H₂O，和加至1升的去离子水组成。将烧瓶在45℃在定轨振荡器上以200rpm温育48小时。

将五十ml的烧瓶培养液用于接种含有总共1.8升的发酵分批培养基的2升玻璃夹套发酵罐(glass jacketed fermentor)(Applikon Biotechnology,Schiedam,Netherlands)。将发酵给料培养基以4g/l/小时的速率在72小时的时间进行补料。发酵分批培养基由5g的酵母提取物，176g的粉末状纤维素，2g的葡萄糖，1g的NaCl，1g的细菌蛋白胨，4g的K₂HPO₄，0.2g的CaCl₂·2H₂O，0.2g的MgSO₄.7H₂O，2.5g的柠檬酸，5g的NH₄NO₃，1.8ml的消泡剂，1ml的微量元素溶液，和加至1升的去离子水组成。将发酵容器维持在45℃的温度，并使用Applikon 1030控制系统(Applikon Biotechnology,Schiedam,Netherlands)将pH控制在5.6+/-0.1的设定点。将空气以1vvm的速率添加至容器，并通过以1100至1300rpm旋转的Rushton叶轮搅拌培养液。在发酵结束时，从容器收获全部培养液，并以3000x g离心以去除生物质。

实施例2：嗜热毁丝霉CBS 117.65纤维二糖脱氢酶的纯化

将实施例1中所述收获的嗜热毁丝霉CBS 117.65培养液在500ml瓶中以13000x g在4℃离心20分钟，然后使用0.22μm聚醚砜膜(Millipore,Bedford,MA,USA)过滤灭菌。浓缩经过滤的培养液，并用20mM Tris-HCl pH 8.5使用配置10kDa聚醚砜膜(Pall Filtron,Northborough,MA,USA)的切线流浓缩器(tangential flow concentrator)(PallFiltron,Northborough,MA,USA)进行缓冲液交换。为了减少色素的量，将浓缩物施加于用20mM Tris-HCl pH 8.5平衡的60ml Q-SEPHAROSE BIG BEAD^TM柱(GE Healthcare,Piscataway,NJ,USA)，并用含有600mM NaCl的平衡缓冲液逐步洗脱。通过使用8-16％CRITERION^TMSDS-PAGE凝胶(Bio-Rad Laboratories,Inc.,Hercules,CA,USA)和以GELCODE^TMBlue蛋白质染料(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA,USA)染色的SDS-PAGE分析流过物和洗脱物级分。根据通过SDS-PAGE对应于表观分子量大约100kDa的条带的存在判断洗脱物级分含有纤维二糖脱氢酶(CBDH)(Schou等,1998,Biochem.J.330:565–571)。

洗脱物级分使用配置10kDa聚醚砜膜的AMICON^TM超滤装置(Millipore,Bedford,MA,USA)浓缩，并使用26/10脱盐柱(GE Heathcare,Piscataway,NJ,USA)缓冲液交换至20mM Tris-HCl pH 8.5中。将经脱盐的材料加载于用20mM Tris-HCl pH 8.5平衡的MONO柱(HR 16/10,GE Healthcare,Piscataway,NJ,USA)上。将结合的蛋白质用20mMTris-HCl pH 8.5中从0至500mM(18个柱体积)的线性NaCl梯度进行洗脱。如上所述通过SDS-PAGE分析级分，且纤维二糖脱氢酶在大约350-400mM NaCl洗脱。

汇集含有纤维二糖脱氢酶的级分(60ml)并将其与等体积的含有3.4M硫酸铵的20mM Tris-HCl pH 7.5混合以产生终浓度1.7M的硫酸铵。在加载于用20mM Tris-HCl pH7.5中的1.7M硫酸铵平衡的Phenyl Superose柱(HR 16/10,GE Healthcare,Piscataway,NJ,USA)上之前过滤样品(0.2μM注射器过滤器，聚醚砜膜,Whatman,Maidstone,UnitedKingdom)以去除颗粒状物质。结合的蛋白质用20mM Tris-HCl pH 7.5中的1.7→0M递减的硫酸铵梯度(12个柱体积)洗脱。如上所述通过SDS-PAGE分析级分，且纤维二糖脱氢酶在大约800mM硫酸铵洗脱。如通过SDS-PAGE判断，纤维二糖脱氢酶级分>90％纯。如Schou等,1998,见上所述，在纤维二糖存在下通过2,6-二氯靛酚(DCIP)还原测定法确证CBDH活性。

汇集了含有纤维二糖脱氢酶的级分，将其浓缩，并通过以1877x g使用VIVASPIN^TM20离心浓缩器(10kDa聚醚砜膜；Sartorius,Germany)在RT7离心机(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA,USA)中的离心浓缩而缓冲液交换至20mM Tris-HCl pH 7.5中。蛋白质浓度使用Microplate BCA^TMProtein AssayKit(Thermo Fischer Scientific,Waltham,MA,USA)确定，其中牛血清白蛋白用作蛋白质标样。

实施例3：特异腐质霉DSM 1800纤维二糖脱氢酶的纯化

如Xu等,2001,Enzyme and Microbial Technology 28:744-653所述重组制备和纯化特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(CBDH)。使用Microplate BCA^TMProtein Assay Kit确定蛋白质浓度。

实施例4：米曲霉CEL3A β-葡糖苷酶的制备

如WO 2004/099228中所述重组制备米曲霉CEL3A β-葡糖苷酶，并如Langston等,2006,Biochim.Biophys.Acta Proteins Proteomics 1764:972-978所述对其进行纯化。使用Microplate BCA^TMProtein Assay Kit确定蛋白质浓度。

实施例5：具有纤维素分解增强活性的多肽的桔橙热子囊菌GH61A多肽的制备

在米曲霉JaL250中根据WO 2005/074656重组产生具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A多肽。将重组产生的桔橙热子囊菌GH61A多肽首先通过超滤使用10kDa膜进行浓缩，缓冲液交换至20mM Tris-HCl pH 8.0，然后使用100mlBigBeads柱(GE Healthcare,Piscataway,NJ,USA)用相同缓冲液中的600ml 0-600mM NaCl线性梯度进行纯化。收集10ml级分，并基于SDS-PAGE进行汇集。

然后使用20ml MONO柱(GE Healthcare,Piscataway,NJ,USA)用相同缓冲液中的500ml 0-500mM NaCl线性梯度进一步纯化汇集的级分(90ml)。收集6ml的级分，并基于SDS-PAGE进行汇集。将汇集的级分(24ml)通过超滤使用10kDa膜进行浓缩，并使用320ml200SEC柱(GE Healthcare,Piscataway,NJ,USA)进行层析及大约1.3升的150mM NaCl-20mM Tris-HCl pH 8.0的等度洗脱。收集20ml的级分，并基于SDS-PAGE进行汇集。使用Microplate BCA^TMProtein Assay Kit确定蛋白质浓度。

实施例6：经磷酸溶胀的纤维素的制备

从PH101(FMC,Philadelphia,PA,USA)使用Zhang等,2006,Biomacromolecules 7:644–648所述的实验方案制备经磷酸溶胀的纤维素。

实施例7：细菌纤维素的制备

从NATA DE COCO(Huerto International Trading,Lucena City,Philippines)通过用水大量漂洗一个500ml罐的立方体(can of cubes)，然后在0.25M氢氧化钠中使用WARING(Waring Products,Torrington,CT,USA)匀浆15分钟来制备细菌纤维素。将所得的浆料以40000x g在RT7离心机中沉淀。弃去上清。然后将沉淀重悬于0.25M氢氧化物并在4℃搅拌过夜。所述洗涤、沉淀、倾析、重悬和温育过夜重复四次。在这些第一洗涤步骤之后，在类似条件下将纤维素洗涤六次，其中用水替代0.25M氢氧化钠。在水洗之后，再次将纤维素在WARING中匀浆15分钟，并调整至250ml的终体积。

实施例8：经预处理的玉米秸秆测定法

玉米秸秆是在U.S.Department of Energy National Renewable EnergyLaboratory(NREL)使用稀硫酸进行预处理的。使用下述条件用于预处理：在165℃和107psi用1.4wt％硫酸进行8分钟。经预处理的玉米秸秆(PCS)中的水不溶性固体含有56.5％纤维素、4.6％半纤维素和28.4％木质素。纤维素和半纤维素通过使用NREL StandardAnalytical Procedure#002进行两阶段硫酸水解随后通过高效液相色谱进行糖分析来确定。木质素是使用NREL Standard Analytical Procedure#003通过重量分析在用硫酸水解纤维素和半纤维素级分之后确定的。在酶法水解之前，在玻璃过滤器中用大体积的双蒸水洗涤PCS；发现经水洗的PCS的干重为24.54％。经磨制的PCS(干重32.35％)是从经水洗的PCS通过在咖啡磨(coffee-grinder)中磨制并随后用去离子水在22μm Millipore Filter(6P Express Membrane,Stericup,Millipore,Bedford,MA,USA)上洗涤来制备的。

PCS的水解是使用2.2ml深孔平板(Axygen,Union City,CA,USA)以1.0ml的总反应体积进行的。水解是用每ml含有1mM硫酸锰的50mM乙酸钠pH 5.0缓冲液50mg的PCS和多种蛋白质加载的多种纤维素分解酶组合物(表示为每克纤维素的mg蛋白质)进行的。制备酶组合物，然后将其以100μl的体积同时添加至所有的孔中，使每个反应中终体积为1ml。然后使用ALPS-300^TM平板热密封器(plate heat sealer)(Abgene,Epsom,United Kingdom)密封，充分混合，并在50℃温育72小时。所有报道的实验均重复三次进行。

在水解之后，用0.45μm96-孔过滤器平板(Millipore,Bedford,MA,USA)过滤样品，并如下所述就糖含量分析滤过物。当不立即使用时，将经过滤的糖等分试样冻结于-20℃。稀释于0.005M H₂SO₄的样品的糖浓度是使用4.6x 250mmHPX-87H柱(Bio-Rad Laboratories,Inc.,Hercules,CA,USA)通过用0.05％w/w苯甲酸-0.005M H₂SO₄以每分钟0.6ml的流速在65℃洗脱，并通过用纯糖样品校准的积分来自折射率检测(1100HPLC,Agilent Technologies,Santa Clara,CA,USA)的葡萄糖和纤维二糖信号的定量而进行测量的。所得的当量用于计算对于每个反应纤维素转化率的百分比。

所有的HPLC数据处理是使用MICROSOFT EXCEL^TM软件(Microsoft,Richland,WA,USA)进行的。就适当的稀释因子调整测得的糖浓度。分别测量葡萄糖和纤维二糖。然而，为了计算总转化率，合并葡萄糖和纤维二糖的值。将纤维二糖浓度乘以1.053以转化为葡萄糖当量，并将其加至葡萄糖浓度。使用下式计算纤维素转化的程度：％转化＝[葡萄糖浓度+1.053x(纤维二糖浓度)]/[(葡萄糖浓度+1.053x限制消化中的(纤维二糖浓度))。纤维二糖的1.053因子考虑了纤维二糖转化为葡萄糖时质量的增加。为了计算％转化率，基于纤维素酶对照(每克纤维素50-100mg的里氏木霉纤维素酶组合物)设定了100％转化点，并将所有值除以该数值然后乘以100。对三次重复数据点取平均值，并计算标准偏差。

实施例9：微晶纤维素测定法

通过将2.5g的PH101添加至带刻度的50ml螺旋帽锥形管然后加入大约40ml的双蒸水来制备5％微晶纤维素浆料。然后将每个锥形管通过振荡/涡旋充分混合，并用双蒸水调整至总共50ml，并再次混合。然后将试管内含物迅速转移至100ml的烧瓶，并用磁性搅拌棒迅速搅拌。将五百μl等分试样的5％浆料使用配宽口端(wideaperture tip)(吸管端从基部切去约2mm)的1000μl微量移液器移液至2.2ml深孔平板的每个孔。然后将三百μl双蒸水和100μl的500mM乙酸钠-10mM MnSO₄pH 5添加至每个孔。制备了酶混合物，然后将其以100μl的体积同时添加至每个孔，使得每个反应中总共为1ml。然后使用ALPS-300^TM平板热密封器密封，充分混合，并在50℃温育大约3日。所有报道的实验进行三次重复。

转化反应的主要分析是使用配置了AMINEX^TMHPX-87H柱的1100HPLC进行的。在大约3日之后，从温育箱移出所述深孔板，并冷却过夜至4℃。然后通过倒置并在RT7中以52x g迅速离心10秒将平板混合良好。然后通过移液混合样品，并将来自每个孔的200μl转移至HV(Millipore,Bedford,MA,USA)离心过滤平板组件(centrifuge filter plate assembly)。将该离心过滤平板组件以2000rpm在RT7离心机中离心20分钟。将滤过物转移至96孔自动采样器平板(AgilentTechnologies,Inc.,Santa Clara,CA,USA)，并用5mM H₂SO₄进行1:1稀释，用硅密封垫(Agilent Technologies,Inc.,Santa Clara,CA,USA)密封，并将其插入HPLC注入器模块(设为4℃)以供将20μl注射至连接于AMINEX^TMHPX-87H柱的CATION H^TM保护柱(Bio-RadLaboratories,Inc.,Hercules,CA,USA)之上，并用5mM H₂SO₄洗脱。通过折射率检测(Agilent Technologies,Inc.,Santa Clara,CA,USA)及相对于纯化的糖标样通过积分的定量来检测糖。

所有的HPLC数据处理是根据实施例8使用MICROSOFT EXCEL^TM软件进行的。

实施例10：经磷酸溶胀的纤维素测定法

如实施例6中所述制备1.6％经磷酸溶胀的纤维素浆料。将该1.6％浆料通过振荡充分重悬，并迅速转移至100ml烧杯，并用磁性搅拌棒迅速搅拌。将五百μl等分试样的1.6％磷酸溶胀的纤维素浆料使用配宽口端(wide aperture tip)(吸管端从基部切去约2mm)的1000μl微量移液器移液至2.2ml深孔平板的每个孔。然后将三百μl双蒸水和100μl的500mM乙酸钠-10mM MnSO₄pH 5添加至每个孔。制备了酶混合物，然后将其以100μl的体积同时添加至每个孔，使得每个反应中总共为1ml。然后使用ALPS-300^TM平板热密封器密封，充分混合，并在50℃温育大约3日。所有报道的实验进行三次重复。

转化反应的主要分析是使用配置了AMINEX^TMHPX-87H柱的1100HPLC进行的。在大约3日之后，从温育箱移出所述深孔板，并冷却过夜至4℃。然后通过倒置并在RT7中以52x g迅速离心10秒将平板混合良好。然后通过移液混合样品，并将来自每个孔的200μl转移至HV离心过滤平板组件。将该离心过滤平板组件以2000rpm在RT7离心机中离心20分钟。将滤过物转移至96孔自动采样器平板，并用5mM H₂SO₄进行1:1稀释，用硅密封垫密封，并将其置入HPLC注入器模块(设为4℃)以供将20μl注射至连接于AMINEX^TMHPX-87H柱的CATION H^TM保护柱之上，并用5mM H₂SO₄洗脱。通过折射率检测(及相对于纯化的糖标样通过积分的定量来检测糖。

所有的HPLC数据处理是根据实施例8使用MICROSOFT EXCEL^TM软件进行的。

实施例11：细菌纤维素测定法

如实施例7中所述制备了0.46％的细菌纤维素浆料。将该0.46％浆料通过振荡充分重悬，并迅速转移至100ml烧杯，并用磁性搅拌棒迅速搅拌。将五百μl等分试样的0.46％细菌纤维素浆料使用配宽口端(wide aperture tip)(吸管端从基部切去约2mm)的1000μl微量移液器移液至2.2ml深孔平板的每个孔。然后将三百μl双蒸水和100μl的500mM乙酸钠-10mM MnSO₄pH 5添加至每个孔。制备了酶混合物，然后将其以100μl的体积同时添加至每个孔，使得每个反应中总共为1ml。然后使用ALPS-300^TM平板热密封器密封，充分混合，并在50℃温育大约3日。所有报道的实验进行三次重复。

转化反应的主要分析是使用配置了AMINEX^TMHPX-87H柱的1100HPLC进行的。在大约3日之后，从温育箱移出所述深孔板，并冷却过夜至4℃。然后通过倒置并在RT7中以52x g迅速离心10秒将平板混合良好。然后通过移液混合样品，并将来自每个孔的200μl转移至HV离心过滤平板组件。将该离心过滤平板组件以2000rpm在RT7离心机中离心20分钟。将滤过物转移至96孔自动采样器平板，并用5mM H₂SO₄进行1:1稀释，用硅密封垫密封，并将其置入HPLC注入器模块(设为4℃)以供将20μl注射至连接于AMINEX^TMHPX-87H柱的CATION H^TM保护柱之上，并用5mM H₂SO₄洗脱。通过折射率检测及相对于纯化的糖标样通过积分的定量来检测糖。

所有的HPLC数据处理是根据实施例8使用MICROSOFT EXCEL^TM软件进行的。

实施例12：嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶对纤维素酶组合物在具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A多肽存在或不存在时水解微晶纤维素的作用

对具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A多肽和嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶测试其增强里氏木霉纤维素酶组合物(补充了可从Novozymes A/S,Bagsvaerd,Denmark获得的米曲霉β-葡糖苷酶的)水解微晶纤维素的能力。所述纤维素酶组合物在本文中在实施例中命名为“里氏木霉纤维素酶组合物”。该微晶纤维素测定法如实施例9中所述进行。

如实施例9中所述测定了所述里氏木霉纤维素酶组合物(每g纤维素12.5mg蛋白)，个别组分桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素12.5mg蛋白)或嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素5mg蛋白)，里氏木霉纤维素酶组合物(每g纤维素12.5mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素12.5mg蛋白)的组合，里氏木霉纤维素酶组合物(每g纤维素12.5mg蛋白)与嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素5mg蛋白)的组合，桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素12.5mg蛋白)与嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素5mg蛋白)的组合，和里氏木霉纤维素酶组合物(每g纤维素12.5mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素12.5mg蛋白)和嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素5mg蛋白)二者的组合的微晶纤维素纤维素分解能力。如实施例9中所述，在50℃温育88小时之后收集并分析数据。

结果示于图1。嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素5mg蛋白)的添加导致对里氏木霉纤维素酶组合物的微晶纤维素转化的温和(19％)抑制。桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素12.5mg蛋白)的添加导致对里氏木霉纤维素酶组合物的微晶纤维素转化的温和(7.6％)抑制。桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素12.5mg蛋白)和嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素5mg蛋白)二者的组合的添加导致与仅里氏木霉纤维素酶组合物(每g纤维素12.5mg蛋白)无法分辨的总转化率。无论桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素12.5mg蛋白)还是嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素5mg蛋白)单独均未导致显著的纤维素转化。然而桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素12.5mg蛋白)和嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素5mg蛋白)二者的组合导致可检测水平的纤维素转化。

实施例13：特异腐质霉纤维二糖脱氢酶对纤维素酶组合物在具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A多肽存在或不存在时水解微晶纤维素的作用

对具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A多肽和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶测试其增强里氏木霉纤维素酶组合物(实施例12)水解微晶纤维素的能力。该微晶纤维素测定法如实施例9中所述进行。

如实施例9中所述测定了所述里氏木霉纤维素酶组合物(每g纤维素10mg蛋白)，单独组分桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)或特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素4mg蛋白)，里氏木霉纤维素酶组合物(每g纤维素10mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)的组合，里氏木霉纤维素酶组合物(每g纤维素10mg蛋白)与特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素4mg蛋白)的组合，桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)与特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素4mg蛋白)的组合，和里氏木霉纤维素酶组合物(每g纤维素10mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素4mg蛋白)二者的组合的微晶纤维素纤维素分解能力。如实施例9中所述，在50℃温育72小时之后收集并分析数据。

结果示于图2。特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素4mg蛋白)的添加导致对里氏木霉纤维素酶组合物的微晶纤维素转化的温和(12.7％)抑制。桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)的添加导致对里氏木霉纤维素酶组合物的微晶纤维素转化的温和(2.8％)抑制。桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素4mg蛋白)二者的组合的添加导致与仅里氏木霉纤维素酶组合物(每g纤维素10mg蛋白)相比增加的总转化率(12.6％)。无论桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)还是特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素4mg蛋白)单独均未导致显著的纤维素转化。

实施例14：嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶对纤维素酶组合物在具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A多肽存在或不存在时水解经预处理的玉米秸秆的作用

对具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A多肽和嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶测试其增强里氏木霉纤维素酶组合物(实施例12)水解PCS的能力。所有测定作为附加实验进行，其中将嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶和桔橙热子囊菌GH61A多肽添加至里氏木霉纤维素酶组合物的基础加载量(每克纤维素4mg蛋白)。进行了滴定实验，其中将桔橙热子囊菌GH61A多肽以相对所述蛋白5％、10％、20％和50％的添加量(每克纤维素0.2mg、0.4mg、0.8mg和2mg桔橙热子囊菌GH61A多肽的蛋白)添加至里氏木霉纤维素酶组合物(每克纤维素4mg蛋白)。还用以蛋白的1％、2％、5％和10％的添加量(每克纤维素0.04mg、0.08mg、0.2mg和0.4mg嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶蛋白)添加至里氏木霉纤维素酶组合物(每克纤维素4mg蛋白)的嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶进行滴定。为了测试嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶和桔橙热子囊菌GH61A多肽对里氏木霉纤维素组合物的PCS水解活性的作用，用向里氏木霉纤维素酶组合物(以每克纤维素4mg蛋白加载)递增添加的嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(以蛋白的1％、2％、5％和10％的添加量，分别为每克纤维素0.04mg、0.08mg、0.2mg和0.4mg蛋白)加上固定量(10％添加量，每克纤维素0.4mg蛋白)的桔橙热子囊菌GH61A多肽进行了滴定。此外，用向里氏木霉纤维素酶组合物(以每克纤维素4mg蛋白加载)递增添加的嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(以蛋白的5％、10％、20％和50％的添加量，分别为每克纤维素0.2mg、0.4mg、0.8mg和2mg蛋白)加上固定量(5％添加量，每克纤维素0.2mg蛋白)的嗜热毁丝霉GH61A多肽的进行了滴定。

PCS的水解是使用2.2ml深孔平板(Axygen,Union City,CA,USA)以1.0ml的总反应体积进行的。在该实验方案中，PCS(含有1mM硫酸锰的50mM乙酸钠pH 5.0缓冲液中50mg/ml)的水解在50℃以三次重复进行72小时。在水解之后，用96-孔过滤器平板(0.45μm)过滤样品，并如下所述就糖含量分析滤过物。

当不立即使用时，将经过滤的糖等分试样冻结于-20℃。稀释于0.005M H₂SO₄的样品的糖浓度是使用4.6x 250mmHPX-87H柱通过含0.05％w/w苯甲酸的0.005MH₂SO₄以每分钟0.6ml的流速在65℃洗脱后，并通过用纯糖样品校准的积分来自折射率检测( 1100HPLC,Agilent Technologies,Santa Clara,CA,USA)的葡萄糖和纤维二糖信号的定量而进行测量的。所得的当量用于计算对于每个反应纤维素转化率的百分比。使用下式计算纤维素转化的程度：％转化＝[葡萄糖浓度+1.053x(纤维二糖浓度)]/[(葡萄糖浓度+1.053x限制消化中的(纤维二糖浓度))。纤维二糖的1.053因子考虑了纤维二糖转化为葡萄糖时质量的增加。将每克纤维素六十mg的里氏木霉纤维素酶组合物用于限制消化。

结果示于图3。将5％、10％、20％和50％的桔橙热子囊菌GH61A多肽(每克纤维素0.2mg、0.4mg、0.8mg和2mg蛋白)添加至里氏木霉纤维素酶组合物的基础加载(每克纤维素4mg蛋白)导致PCS转化分别增加25％、29.5％、31％和30.3％。将1％、2％、5％和10％的嗜热毁丝霉GH61A多肽(每克纤维素0.04mg、0.08mg、0.2mg和0.4mg蛋白)添加至里氏木霉纤维素酶组合物的基础加载(每克纤维素4mg蛋白)导致PCS转化分别减少4％、6.3％、10.7％和14.3％。将1％、2％和5％的嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(每克纤维素0.04mg、0.08mg和0.2mg)添加至里氏木霉纤维素酶组合物(每克纤维素4mg蛋白)和10％添加量的桔橙热子囊菌GH61A多肽(每克纤维素0.4mg蛋白)的混合物导致PCS转化相对于仅含有里氏木霉纤维素酶组合物的基础加载(每克纤维素4mg蛋白)和10％添加量的桔橙热子囊菌GH61A多肽(每克纤维素0.4mg蛋白)的混合物分别增加1.7％、5.1％和1.7％。当将更高(10％添加量)量的嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶(每克纤维素0.4mg蛋白)添加至里氏木霉纤维素酶组合物的基础加载(每克纤维素4mg蛋白)和10％添加量的桔橙热子囊菌GH61A多肽(每克纤维素0.4mg蛋白)的混合物时，导致PCS转化相对于仅含有里氏木霉纤维素酶组合物的基础加载(每克纤维素4mg蛋白)和10％添加量的桔橙热子囊菌GH61A多肽(每克纤维素0.4mg蛋白)的混合物略微减少(减少2.3％)。当将桔橙热子囊菌GH61A多肽(每克纤维素0.2mg蛋白)添加至含有5％添加量(每克纤维素0.2mg蛋白)嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶的里氏木霉纤维素酶组合物(每克纤维素4mg蛋白)时，获得了PCS转化的6.9％减少。当将桔橙热子囊菌GH61A多肽以更高量(每克纤维素0.4mg、0.8mg和2.0mg蛋白)添加至含有5％添加量(每克纤维素0.2mg蛋白)嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶的里氏木霉纤维素酶组合物(每克纤维素4mg蛋白)时，相对于仅含有10％、20％和50％蛋白添加量的桔橙热子囊菌GH61A多肽(每克纤维素0.4mg、0.8mg和2mg蛋白)的里氏木霉纤维素酶组合物(每克纤维素4mg蛋白)基础加载，获得了PCS转化的同时增加(分别为0.3％，10.1％和14.3％)。

由于嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶单独的添加对里氏木霉纤维素酶组合物的PCS水解活性具有抑制性，而将桔橙热子囊菌GH61A多肽添加至含有嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶的里氏木霉纤维素酶组合物相对于仅添加嗜热毁丝霉GH61A多肽增加了PCS水解活性，这些结果表明当将嗜热毁丝霉纤维二糖脱氢酶和桔橙热子囊菌GH61A多肽二者添加至所述里氏木霉纤维素酶组合物时，可获得改善的PCS水解活性。

实施例15：特异腐质霉纤维二糖脱氢酶、具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A多肽和米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶的组合对微晶纤维素转化的作用

对桔橙热子囊菌GH61A多肽和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶测试其增强米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶转化微晶纤维素的能力。该微晶纤维素测定法如实施例9中所述进行。

如实施例9中所述测定了米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素10mg蛋白)，单独组分桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)或特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)，米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素10mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)的组合，米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素10mg蛋白)与特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)的组合，和米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素10mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)二者的组合的微晶纤维素纤维素分解能力。如实施例9中所述，在50℃温育72小时之后收集并分析数据。

结果示于图4。米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素10mg蛋白)导致微晶纤维素少于1％的转化。特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)或桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)的添加未导致对米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素10mg蛋白)的微晶纤维素转化的显著变化。桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)、特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)或桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)的混合物导致微晶纤维素0.5％或更少的转化。米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素10mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)二者的组合导致与仅CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素10mg蛋白)相比微晶纤维素转化增加至4倍。

实施例16：特异腐质霉纤维二糖脱氢酶、具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A多肽和米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶的组合对经磷酸溶胀的纤维素的转化的作用

对桔橙热子囊菌GH61A多肽和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶测试其增强米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶转化经磷酸溶胀的纤维素的能力。该微晶纤维素测定法如实施例10中所述进行。

如实施例10中所述测定了米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素5mg蛋白)，单独组分桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)或特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)，米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素10mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)的组合，米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素5mg蛋白)与特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)的组合，和米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素5mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)二者的组合的经磷酸溶胀的纤维素纤维素分解能力。如实施例10中所述，在50℃温育72小时之后收集并分析数据。

结果示于图5。米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素5mg蛋白)导致经磷酸溶胀的纤维素1.5％的转化。特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)或桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)的添加未导致对米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素5mg蛋白)转化经磷酸溶胀的纤维素的显著变化。桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)或特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)单独不导致经磷酸溶胀的纤维素的转化。桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)的混合物导致经磷酸溶胀的纤维素2.4％的转化。米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素5mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素10mg蛋白)和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素1mg蛋白)二者的组合导致与仅CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素5mg蛋白)相比经磷酸溶胀的纤维素的转化增加至23倍。

实施例17：特异腐质霉纤维二糖脱氢酶、具有纤维素分解增强活性的桔橙热子囊菌GH61A多肽和米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶的组合对细菌纤维素的转化的作用

对桔橙热子囊菌GH61A多肽和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶测试其增强米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶转化细菌纤维素的能力。该微晶纤维素测定法如实施例11中所述进行。

如实施例11中所述测定了米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素50mg蛋白)，单独组分桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素50mg蛋白)或特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素10mg蛋白)，米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素50mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素50mg蛋白)的组合，米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素50mg蛋白)与特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素10mg蛋白)的组合，和米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素50mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素50mg蛋白)和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素10mg蛋白)二者的组合的细菌纤维素纤维素分解能力。如实施例11中所述，在50℃温育72小时之后收集并分析数据。

结果示于图6。米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素50mg蛋白)导致细菌纤维素1.4％的转化。特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素10mg蛋白)或桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素50mg蛋白)的添加未导致对米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素50mg蛋白)转化细菌纤维素的显著变化。桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素50mg蛋白)单独未导致与米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素50mg蛋白)单独相比细菌纤维素的转化。特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素10mg蛋白)单独未导致细菌纤维素的转化。桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素50mg蛋白)和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素10mg蛋白)的混合物未导致细菌纤维素的显著转化。米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素50mg蛋白)与桔橙热子囊菌GH61A多肽(每g纤维素50mg蛋白)和特异腐质霉纤维二糖脱氢酶(每g纤维素10mg蛋白)二者的组合导致与仅米曲霉CEL3Aβ-葡糖苷酶(每g纤维素50mg蛋白)相比细菌纤维素的转化增加至7倍。

本发明进一步通过下述段落描述：

[1]用于降解或转化纤维素材料的方法，包括：用包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的酶组合物处理所述纤维素材料。

[2]段落1的方法，其中所述一种或多种(几种)纤维素分解酶选自下组：内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。

[3]段落1或2的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：半纤维素酶、酯酶、蛋白酶、漆酶和过氧化物酶。

[4]段落1-3任一项的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：木聚糖酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、木糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶，及其组合。

[5]段落1-4任一项的方法，其中所述纤维素材料是玉米秸秆。

[6]段落1-5任一项的方法，其中所述纤维素材料经预处理。

[7]段落1-6任一项的方法，进一步包括回收经降解的纤维素材料。

[8]段落7的方法，其中所述经降解的纤维素材料是糖。

[9]段落8的方法，其中所述糖选自下组：葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖和阿拉伯糖。

[10]段落9的方法，其中纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的存在与纤维二糖脱氢酶存在而具有纤维素分解增强活性的多肽不存在相比增加了纤维素材料的降解或转化。

[11]用于产生发酵产物的方法，包括：(a)用包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的酶组合物糖化纤维素材料；(b)用一种或多种(几种)发酵微生物发酵所述经糖化的纤维素材料以产生所述发酵产物；和(c)从发酵回收所述发酵产物。

[12]段落11的方法，其中所述一种或多种(几种)纤维素分解酶选自下组：内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。

[13]段落11或12的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：半纤维素酶、酯酶、蛋白酶、漆酶和过氧化物酶。

[14]段落11-13任一项的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：木聚糖酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、木糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶，及其组合。

[15]段落11-14任一项的方法，其中所述纤维素材料是玉米秸秆。

[16]段落11-15任一项的方法，其中所述纤维素材料经预处理。

[17]段落11-16任一项的方法，其中所述发酵产物是醇、有机酸、酮、氨基酸或气体。

[18]段落11-17的任一项方法，其中纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的存在与纤维二糖脱氢酶存在而具有纤维素分解增强活性的多肽不存在相比增加了纤维素材料的糖化。

[19]用于发酵纤维素材料的方法，包括：用一种或多种(几种)发酵微生物发酵所述纤维素材料，其中用包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的酶组合物水解所述纤维素材料。

[20]段落19的方法，其中所述纤维素材料的发酵产生发酵产物。

[21]段落20的方法，进一步包括从发酵回收所述发酵产物。

[22]段落19-21任一项的方法，其中所述纤维素材料是玉米秸秆。

[23]段落19-22任一项的方法，其中所述纤维素材料在糖化之前或在发酵过程中经预处理。

[24]段落19-23任一项的方法，其中所述一种或多种(几种)纤维素分解酶选自下组：内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。

[25]段落19-24任一项的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：半纤维素酶、酯酶、蛋白酶、漆酶和过氧化物酶。

[26]段落19-25任一项的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：木聚糖酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、木糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶，及其组合。

[27]段落19-26任一项的方法，其中所述发酵产物是醇、有机酸、酮、氨基酸或气体。

[28]段落19-27的任一项方法，其中纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的存在与纤维二糖脱氢酶存在而具有纤维素分解增强活性的多肽不存在相比增加了纤维素材料的水解。

本文描述和要求保护的本发明并不局限于本文公开的具体方面的范围内，因为这些方面旨在作为本发明几个方面的说明。旨在将任何等同的方面包含于本发明的范围内。实际上，从前面的说明中，除本文所显示和描述的之外，本发明的多种修改对于本领域的技术人员来说是显而易见的。这些修改也旨在落入所附的权利要求的范围内。在冲突的情况下，将以包括定义部分的本公开为准。

序列表

<110> 诺维信股份有限公司(Novozymes, Inc.)

<120> 在纤维二糖脱氢酶存在下增加纤维素材料水解的方法

<130> 11474-CN-PCD

<150> US 61/139,431

<151> 2008-12-19

<160> 70

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1846

<212> DNA

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 1

aattgaagga gggagtggcg gagtggccac caagtcaggc ggctgtcaac taaccaagga 60

tgggaacagt tcggctcgcc ttgcccgagg gcagcgttcc ctgatgggga cgaaccatgg 120

gactggggtc agctgctgta taaaagttca aatcgatgat ctctcagatg gcgctgctgg 180

ggtgttctgc gcttttccat cctcgcaacc tggtatccca ctagtccagc gttcggcacc 240

atgaagtcgt tcaccattgc cgccttggca gccctatggg cccaggaggc cgccgcccac 300

gcgaccttcc aggacctctg gattgatgga gtcgactacg gctcgcaatg tgtccgcctc 360

ccggcgtcca actcccccgt caccaatgtt gcgtccgacg atatccgatg caatgtcggc 420

acctcgaggc ccaccgtcaa gtgcccggtc aaggccggct ccacggtcac gatcgagatg 480

caccaggttc gcacgcctct ctgcgtaggc cccccagcta ctatatggca ctaacacgac 540

ctccagcaac ctggcgaccg gtcttgcgcc aacgaggcta tcggcggcga ccactacggc 600

cccgtaatgg tgtacatgtc caaggtcgat gacgcggtga cagccgacgg ttcatcgggc 660

tggttcaagg tgttccagga cagctgggcc aagaacccgt cgggttcgac gggcgacgac 720

gactactggg gcaccaagga cctcaactcg tgctgcggca agatgaacgt caagatcccc 780

gaagacatcg agccgggcga ctacctgctc cgcgccgagg ttatcgcgct gcacgtggcc 840

gccagctcgg gcggcgcgca gttctacatg tcctgctacc agctgaccgt gacgggctcc 900

ggcagcgcca ccccctcgac cgtgaatttc ccgggcgcct actcggccag cgacccgggc 960

atcctgatca acatccacgc gcccatgtcg acctacgtcg tcccgggccc gaccgtgtac 1020

gcgggcggct cgaccaagtc ggctggcagc tcctgctccg gctgcgaggc gacctgcacg 1080

gttggttccg gccccagcgc gacactgacg cagcccacct ccaccgcgac cgcgacctcc 1140

gcccctggcg gcggcggctc cggctgcacg gcggccaagt accagcagtg cggcggcacc 1200

ggctacactg ggtgcaccac ctgcgctgta agttccctcg tgatatgcag cggaacaccg 1260

tctggactgt tttgctaact cgcgtcgtag tccgggtcta cctgcagcgc cgtctcgcct 1320

ccgtactact cgcagtgcct ctaagccggg agcgcttgct cagcgggctg ctgtgaagga 1380

gctccatgtc cccatgccgc catggccgga gtaccgggct gagcgcccaa ttcttgtata 1440

tagttgagtt ttcccaatca tgaatacata tgcatctgca tggactgttg cgtcgtcagt 1500

ctacatcctt tgctccactg aactgtgaga ccccatgtca tccggaccat tcgatcggtg 1560

ctcgctctac catctcggtt gatgggtctg ggcttgagag tcactggcac gtcctcggcg 1620

gtaatgaaat gtggaggaaa gtgtgagctg tctgacgcac tcggcgctga tgagacgttg 1680

agcgcggccc acactggtgt tctgtaagcc agcacacaaa agaatactcc aggatggccc 1740

atagcggcaa atatacagta tcagggatgc aaaaagtgca aaagtaaggg gctcaatcgg 1800

ggatcgaacc cgagacctcg cacatgactt atttcaagtc aggggt 1846

<210> 2

<211> 326

<212> PRT

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 2

Met Lys Ser Phe Thr Ile Ala Ala Leu Ala Ala Leu Trp Ala Gln Glu

1 5 10 15

Ala Ala Ala His Ala Thr Phe Gln Asp Leu Trp Ile Asp Gly Val Asp

20 25 30

Tyr Gly Ser Gln Cys Val Arg Leu Pro Ala Ser Asn Ser Pro Val Thr

35 40 45

Asn Val Ala Ser Asp Asp Ile Arg Cys Asn Val Gly Thr Ser Arg Pro

50 55 60

Thr Val Lys Cys Pro Val Lys Ala Gly Ser Thr Val Thr Ile Glu Met

65 70 75 80

His Gln Gln Pro Gly Asp Arg Ser Cys Ala Asn Glu Ala Ile Gly Gly

85 90 95

Asp His Tyr Gly Pro Val Met Val Tyr Met Ser Lys Val Asp Asp Ala

100 105 110

Val Thr Ala Asp Gly Ser Ser Gly Trp Phe Lys Val Phe Gln Asp Ser

115 120 125

Trp Ala Lys Asn Pro Ser Gly Ser Thr Gly Asp Asp Asp Tyr Trp Gly

130 135 140

Thr Lys Asp Leu Asn Ser Cys Cys Gly Lys Met Asn Val Lys Ile Pro

145 150 155 160

Glu Asp Ile Glu Pro Gly Asp Tyr Leu Leu Arg Ala Glu Val Ile Ala

165 170 175

Leu His Val Ala Ala Ser Ser Gly Gly Ala Gln Phe Tyr Met Ser Cys

180 185 190

Tyr Gln Leu Thr Val Thr Gly Ser Gly Ser Ala Thr Pro Ser Thr Val

195 200 205

Asn Phe Pro Gly Ala Tyr Ser Ala Ser Asp Pro Gly Ile Leu Ile Asn

210 215 220

Ile His Ala Pro Met Ser Thr Tyr Val Val Pro Gly Pro Thr Val Tyr

225 230 235 240

Ala Gly Gly Ser Thr Lys Ser Ala Gly Ser Ser Cys Ser Gly Cys Glu

245 250 255

Ala Thr Cys Thr Val Gly Ser Gly Pro Ser Ala Thr Leu Thr Gln Pro

260 265 270

Thr Ser Thr Ala Thr Ala Thr Ser Ala Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly

275 280 285

Cys Thr Ala Ala Lys Tyr Gln Gln Cys Gly Gly Thr Gly Tyr Thr Gly

290 295 300

Cys Thr Thr Cys Ala Ser Gly Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Pro Pro

305 310 315 320

Tyr Tyr Ser Gln Cys Leu

325

<210> 3

<211> 880

<212> DNA

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 3

accccgggat cactgcccct aggaaccagc acacctcggt ccaatcatgc ggttcgacgc 60

cctctccgcc ctcgctcttg cgccgcttgt ggctggccac ggcgccgtga ccagctacat 120

catcggcggc aaaacctatc ccggctacga gggcttctcg cctgcctcga gcccgccgac 180

gatccagtac cagtggcccg actacaaccc gaccctgagc gtgaccgacc cgaagatgcg 240

ctgcaacggc ggcacctcgg cagagctcag cgcgcccgtc caggccggcg agaacgtgac 300

ggccgtctgg aagcagtgga cccaccagca aggccccgtc atggtctgga tgttcaagtg 360

ccccggcgac ttctcgtcgt gccacggcga cggcaagggc tggttcaaga tcgaccagct 420

gggcctgtgg ggcaacaacc tcaactcgaa caactggggc accgcgatcg tctacaagac 480

cctccagtgg agcaacccga tccccaagaa cctcgcgccg ggcaactacc tcatccgcca 540

cgagctgctc gccctgcacc aggccaacac gccgcagttc tacgccgagt gcgcccagct 600

ggtcgtctcc ggcagcggct ccgccctgcc cccgtccgac tacctctaca gcatccccgt 660

ctacgcgccc cagaacgacc ccggcatcac cgtgagtggg cttccgttcc gcggcgagct 720

ctgtggaaat cttgctgacg atgggctagg ttgacatcta caacggcggg cttacctcct 780

acaccccgcc cggcggcccc gtctggtctg gcttcgagtt ttaggcgcat tgagtcgggg 840

gctacgaggg gaaggcatct gttcgcatga gcgtgggtac 880

<210> 4

<211> 239

<212> PRT

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 4

Met Arg Phe Asp Ala Leu Ser Ala Leu Ala Leu Ala Pro Leu Val Ala

1 5 10 15

Gly His Gly Ala Val Thr Ser Tyr Ile Ile Gly Gly Lys Thr Tyr Pro

20 25 30

Gly Tyr Glu Gly Phe Ser Pro Ala Ser Ser Pro Pro Thr Ile Gln Tyr

35 40 45

Gln Trp Pro Asp Tyr Asn Pro Thr Leu Ser Val Thr Asp Pro Lys Met

50 55 60

Arg Cys Asn Gly Gly Thr Ser Ala Glu Leu Ser Ala Pro Val Gln Ala

65 70 75 80

Gly Glu Asn Val Thr Ala Val Trp Lys Gln Trp Thr His Gln Gln Gly

85 90 95

Pro Val Met Val Trp Met Phe Lys Cys Pro Gly Asp Phe Ser Ser Ser

100 105 110

His Gly Asp Gly Lys Gly Trp Phe Lys Ile Asp Gln Leu Gly Leu Trp

115 120 125

Gly Asn Asn Leu Asn Ser Asn Asn Trp Gly Thr Ala Ile Val Tyr Lys

130 135 140

Thr Leu Gln Trp Ser Asn Pro Ile Pro Lys Asn Leu Ala Pro Gly Asn

145 150 155 160

Tyr Leu Ile Arg His Glu Leu Leu Ala Leu His Gln Ala Asn Thr Pro

165 170 175

Gln Phe Tyr Ala Glu Cys Ala Gln Leu Val Val Ser Gly Ser Gly Ser

180 185 190

Ala Leu Pro Pro Ser Asp Tyr Leu Tyr Ser Ile Pro Val Tyr Ala Pro

195 200 205

Gln Asn Asp Pro Gly Ile Thr Val Asp Ile Tyr Asn Gly Gly Leu Thr

210 215 220

Ser Tyr Thr Pro Pro Gly Gly Pro Val Trp Ser Gly Phe Glu Phe

225 230 235

<210> 5

<211> 1000

<212> DNA

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 5

ctcctgttcc tgggccaccg cttgttgcct gcactattgg tagagttggt ctattgctag 60

agttggccat gcttctcaca tcagtcctcg gctcggctgc cctgcttgct agcggcgctg 120

cggcacacgg cgccgtgacc agctacatca tcgccggcaa gaattacccg gggtgggtag 180

ctgattattg agggcgcatt caaggttcat accggtgtgc atggctgaca accggctggc 240

agataccaag gcttttctcc tgcgaactcg ccgaacgtca tccaatggca atggcatgac 300

tacaaccccg tcttgtcgtg cagcgactcg aagcttcgct gcaacggcgg cacgtcggcc 360

accctgaacg ccacggccgc accgggcgac accatcaccg ccatctgggc gcagtggacg 420

cacagccagg gccccatcct ggtgtggatg tacaagtgcc cgggctcctt cagctcctgt 480

gacggctccg gcgctggctg gttcaagatc gacgaggccg gcttccacgg cgacggcgtc 540

aaggtcttcc tcgacaccga gaacccgtcc ggctgggaca tcgccaagct cgtcggcggc 600

aacaagcagt ggagcagcaa ggtccccgag ggcctcgccc ccggcaacta cctcgtccgc 660

cacgagttga tcgccctgca ccaggccaac aacccgcagt tctacccgga gtgcgcccag 720

gtcgtcatca ccggctccgg caccgcgcag ccggatgcct catacaaggc ggctatcccc 780

ggctactgca accagaatga cccgaacatc aaggtgagat ccaggcgtaa tgcagtctac 840

tgctggaaag aaagtggtcc aagctaaacc gcgctccagg tgcccatcaa cgaccactcc 900

atccctcaga cctacaagat tcccggccct cccgtcttca agggcaccgc cagcaagaag 960

gcccgggact tcaccgcctg aagttgttga atcgatggag 1000

<210> 6

<211> 258

<212> PRT

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 6

Met Leu Leu Thr Ser Val Leu Gly Ser Ala Ala Leu Leu Ala Ser Gly

1 5 10 15

Ala Ala Ala His Gly Ala Val Thr Ser Tyr Ile Ile Ala Gly Lys Asn

20 25 30

Tyr Pro Gly Tyr Gln Gly Phe Ser Pro Ala Asn Ser Pro Asn Val Ile

35 40 45

Gln Trp Gln Trp His Asp Tyr Asn Pro Val Leu Ser Cys Ser Asp Ser

50 55 60

Lys Leu Arg Cys Asn Gly Gly Thr Ser Ala Thr Leu Asn Ala Thr Ala

65 70 75 80

Ala Pro Gly Asp Thr Ile Thr Ala Ile Trp Ala Gln Trp Thr His Ser

85 90 95

Gln Gly Pro Ile Leu Val Trp Met Tyr Lys Cys Pro Gly Ser Phe Ser

100 105 110

Ser Cys Asp Gly Ser Gly Ala Gly Trp Phe Lys Ile Asp Glu Ala Gly

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Phe His Gly Asp Gly Val Lys Val Phe Leu Asp Thr Glu Asn Pro Ser

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Gly Trp Asp Ile Ala Lys Leu Val Gly Gly Asn Lys Gln Trp Ser Ser

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Lys Val Pro Glu Gly Leu Ala Pro Gly Asn Tyr Leu Val Arg His Glu

165 170 175

Leu Ile Ala Leu His Gln Ala Asn Asn Pro Gln Phe Tyr Pro Glu Cys

180 185 190

Ala Gln Val Val Ile Thr Gly Ser Gly Thr Ala Gln Pro Asp Ala Ser

195 200 205

Tyr Lys Ala Ala Ile Pro Gly Tyr Cys Asn Gln Asn Asp Pro Asn Ile

210 215 220

Lys Val Pro Ile Asn Asp His Ser Ile Pro Gln Thr Tyr Lys Ile Pro

225 230 235 240

Gly Pro Pro Val Phe Lys Gly Thr Ala Ser Lys Lys Ala Arg Asp Phe

245 250 255

Thr Ala

<210> 7

<211> 681

<212> DNA

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 7

atgctcgcaa acggtgccat cgtcttcctg gccgccgccc tcggcgtcag tggccactac 60

acctggccac gggttaacga cggcgccgac tggcaacagg tccgtaaggc ggacaactgg 120

caggacaacg gctacgtcgg ggatgtcacg tcgccacaga tccgctgttt ccaggcgacc 180

ccgtccccgg ccccatccgt cctcaacacc acggccggct cgaccgtgac ctactgggcc 240

aaccccgacg tctaccaccc cgggcctgtg cagttttaca tggcccgcgt gcccgatggc 300

gaggacatca actcgtggaa cggcgacggc gccgtgtggt tcaaggtgta cgaggaccat 360

cctacctttg gcgctcagct cacatggccc agcacgggca agagctcgtt cgcggttccc 420

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ccggccgtct tcagctgctg a 681

<210> 8

<211> 226

<212> PRT

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 8

Met Leu Ala Asn Gly Ala Ile Val Phe Leu Ala Ala Ala Leu Gly Val

1 5 10 15

Ser Gly His Tyr Thr Trp Pro Arg Val Asn Asp Gly Ala Asp Trp Gln

20 25 30

Gln Val Arg Lys Ala Asp Asn Trp Gln Asp Asn Gly Tyr Val Gly Asp

35 40 45

Val Thr Ser Pro Gln Ile Arg Cys Phe Gln Ala Thr Pro Ser Pro Ala

50 55 60

Pro Ser Val Leu Asn Thr Thr Ala Gly Ser Thr Val Thr Tyr Trp Ala

65 70 75 80

Asn Pro Asp Val Tyr His Pro Gly Pro Val Gln Phe Tyr Met Ala Arg

85 90 95

Val Pro Asp Gly Glu Asp Ile Asn Ser Trp Asn Gly Asp Gly Ala Val

100 105 110

Trp Phe Lys Val Tyr Glu Asp His Pro Thr Phe Gly Ala Gln Leu Thr

115 120 125

Trp Pro Ser Thr Gly Lys Ser Ser Phe Ala Val Pro Ile Pro Pro Cys

130 135 140

Ile Lys Ser Gly Tyr Tyr Leu Leu Arg Ala Glu Gln Ile Gly Leu His

145 150 155 160

Val Ala Gln Ser Val Gly Gly Ala Gln Phe Tyr Ile Ser Cys Ala Gln

165 170 175

Leu Ser Val Thr Gly Gly Gly Ser Thr Glu Pro Pro Asn Lys Val Ala

180 185 190

Phe Pro Gly Ala Tyr Ser Ala Thr Asp Pro Gly Ile Leu Ile Asn Ile

195 200 205

Tyr Tyr Pro Val Pro Thr Ser Tyr Gln Asn Pro Gly Pro Ala Val Phe

210 215 220

Ser Cys

225

<210> 9

<211> 960

<212> DNA

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 9

atgaagggac ttttcagtgc cgccgccctc tccctggccg tcggccaggc ttcggcccat 60

tacatcttcc agcaactctc catcaacggg aaccagtttc cggtgtacca atatattcgc 120

aagaacacca attataacag tcccgttacc gatctcacgt ccgacgatct tcggtgcaat 180

gtcggcgccc agggtgctgg gacagacacc gtcacggtga aggccggcga ccagttcacc 240

ttcacccttg acacccctgt ttaccaccag gggcccatct ccatctacat gtccaaggcc 300

ccgggcgcgg cgtcagacta cgatggcagc ggcggctggt tcaagatcaa ggactggggc 360

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ggcggcggca acggcaaccc tggcccgacg gccctcatcc ccggcgcctt caaggacacc 600

gacccgggct acacggtgaa catctacacg aacttccaca actacacggt tcccggcccg 660

gaggtcttca gctgcaacgg cggcggctcg aacccgcccc cgccggtgag tagcagcacg 720

cccgcgacca cgacgctggt cacgtcgacg cgcaccacgt cctccacgtc ctccgcctcg 780

acgccggcct cgaccggcgg ctgcaccgtc gccaagtggg gccagtgcgg cggcaacggg 840

tacaccggct gcacgacctg cgcggccggg tccacctgca gcaagcagaa cgactactac 900

tcgcagtgct tgtaagggag gccgcaaagc atgaggtgtt tgaagaggag gagaggggtc 960

<210> 10

<211> 304

<212> PRT

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 10

Met Lys Gly Leu Phe Ser Ala Ala Ala Leu Ser Leu Ala Val Gly Gln

1 5 10 15

Ala Ser Ala His Tyr Ile Phe Gln Gln Leu Ser Ile Asn Gly Asn Gln

20 25 30

Phe Pro Val Tyr Gln Tyr Ile Arg Lys Asn Thr Asn Tyr Asn Ser Pro

35 40 45

Val Thr Asp Leu Thr Ser Asp Asp Leu Arg Cys Asn Val Gly Ala Gln

50 55 60

Gly Ala Gly Thr Asp Thr Val Thr Val Lys Ala Gly Asp Gln Phe Thr

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Phe Thr Leu Asp Thr Pro Val Tyr His Gln Gly Pro Ile Ser Ile Tyr

85 90 95

Met Ser Lys Ala Pro Gly Ala Ala Ser Asp Tyr Asp Gly Ser Gly Gly

100 105 110

Trp Phe Lys Ile Lys Asp Trp Gly Pro Thr Phe Asn Ala Asp Gly Thr

115 120 125

Ala Thr Trp Asp Met Ala Gly Ser Tyr Thr Tyr Asn Ile Pro Thr Cys

130 135 140

Ile Pro Asp Gly Asp Tyr Leu Leu Arg Ile Gln Ser Leu Ala Ile His

145 150 155 160

Asn Pro Trp Pro Ala Gly Ile Pro Gln Phe Tyr Ile Ser Cys Ala Gln

165 170 175

Ile Thr Val Thr Gly Gly Gly Asn Gly Asn Pro Gly Pro Thr Ala Leu

180 185 190

Ile Pro Gly Ala Phe Lys Asp Thr Asp Pro Gly Tyr Thr Val Asn Ile

195 200 205

Tyr Thr Asn Phe His Asn Tyr Thr Val Pro Gly Pro Glu Val Phe Ser

210 215 220

Cys Asn Gly Gly Gly Ser Asn Pro Pro Pro Pro Val Ser Ser Ser Thr

225 230 235 240

Pro Ala Thr Thr Thr Leu Val Thr Ser Thr Arg Thr Thr Ser Ser Thr

245 250 255

Ser Ser Ala Ser Thr Pro Ala Ser Thr Gly Gly Cys Thr Val Ala Lys

260 265 270

Trp Gly Gln Cys Gly Gly Asn Gly Tyr Thr Gly Cys Thr Thr Cys Ala

275 280 285

Ala Gly Ser Thr Cys Ser Lys Gln Asn Asp Tyr Tyr Ser Gln Cys Leu

290 295 300

<210> 11

<211> 954

<212> DNA

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 11

atgaagggcc tcagcctcct cgccgctgcg tcggcagcga ctgctcatac catcttcgtg 60

cagctcgagt cagggggaac gacctatccg gtatcctacg gcatccggga ccctagctac 120

gacggtccca tcaccgacgt cacctccgac tcactggctt gcaatggtcc cccgaacccc 180

acgacgccgt ccccgtacat catcaacgtc accgccggca ccacggtcgc ggcgatctgg 240

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ttcaagatcc aggaggccgg ttacgacaat ggcaattggg ctaccagcac ggtgatcacc 420

aacggtggct tccaatatat tgacatcccc gcctgcattc ccaacggcca gtatctgctc 480

cgcgccgaga tgatcgcgct ccacgccgcc agcacgcagg gtggtgccca gctctacatg 540

gagtgcgcgc agatcaacgt ggtgggcggc tccggcagcg ccagcccgca gacgtacagc 600

atcccgggca tctaccaggc aaccgacccg ggcctgctga tcaacatcta ctccatgacg 660

ccgtccagcc agtacaccat tccgggtccg cccctgttca cctgcagcgg cagcggcaac 720

aacggcggcg gcagcaaccc gtcgggcggg cagaccacga cggcgaagcc cacgacgacg 780

acggcggcga cgaccacctc ctccgccgct cctaccagca gccagggggg cagcagcggt 840

tgcaccgttc cccagtggca gcagtgcggt ggcatctcgt tcaccggctg caccacctgc 900

gcggcgggct acacctgcaa gtatctgaac gactattact cgcaatgcca gtaa 954

<210> 12

<211> 317

<212> PRT

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 12

Met Lys Gly Leu Ser Leu Leu Ala Ala Ala Ser Ala Ala Thr Ala His

1 5 10 15

Thr Ile Phe Val Gln Leu Glu Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Pro Val Ser

20 25 30

Tyr Gly Ile Arg Asp Pro Ser Tyr Asp Gly Pro Ile Thr Asp Val Thr

35 40 45

Ser Asp Ser Leu Ala Cys Asn Gly Pro Pro Asn Pro Thr Thr Pro Ser

50 55 60

Pro Tyr Ile Ile Asn Val Thr Ala Gly Thr Thr Val Ala Ala Ile Trp

65 70 75 80

Arg His Thr Leu Thr Ser Gly Pro Asp Asp Val Met Asp Ala Ser His

85 90 95

Lys Gly Pro Thr Leu Ala Tyr Leu Lys Lys Val Asp Asp Ala Leu Thr

100 105 110

Asp Thr Gly Ile Gly Gly Gly Trp Phe Lys Ile Gln Glu Ala Gly Tyr

115 120 125

Asp Asn Gly Asn Trp Ala Thr Ser Thr Val Ile Thr Asn Gly Gly Phe

130 135 140

Gln Tyr Ile Asp Ile Pro Ala Cys Ile Pro Asn Gly Gln Tyr Leu Leu

145 150 155 160

Arg Ala Glu Met Ile Ala Leu His Ala Ala Ser Thr Gln Gly Gly Ala

165 170 175

Gln Leu Tyr Met Glu Cys Ala Gln Ile Asn Val Val Gly Gly Ser Gly

180 185 190

Ser Ala Ser Pro Gln Thr Tyr Ser Ile Pro Gly Ile Tyr Gln Ala Thr

195 200 205

Asp Pro Gly Leu Leu Ile Asn Ile Tyr Ser Met Thr Pro Ser Ser Gln

210 215 220

Tyr Thr Ile Pro Gly Pro Pro Leu Phe Thr Cys Ser Gly Ser Gly Asn

225 230 235 240

Asn Gly Gly Gly Ser Asn Pro Ser Gly Gly Gln Thr Thr Thr Ala Lys

245 250 255

Pro Thr Thr Thr Thr Ala Ala Thr Thr Thr Ser Ser Ala Ala Pro Thr

260 265 270

Ser Ser Gln Gly Gly Ser Ser Gly Cys Thr Val Pro Gln Trp Gln Gln

275 280 285

Cys Gly Gly Ile Ser Phe Thr Gly Cys Thr Thr Cys Ala Ala Gly Tyr

290 295 300

Thr Cys Lys Tyr Leu Asn Asp Tyr Tyr Ser Gln Cys Gln

305 310 315

<210> 13

<211> 799

<212> DNA

<213> 桔橙嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)

<400> 13

atgtcctttt ccaagataat tgctactgcc ggcgttcttg cctctgcttc tctagtggct 60

ggccatggct tcgttcagaa catcgtgatt gatggtaaaa agtatgtcat tgcaagacgc 120

acataagcgg caacagctga caatcgacag ttatggcggg tatctagtga accagtatcc 180

atacatgtcc aatcctccag aggtcatcgc ctggtctact acggcaactg atcttggatt 240

tgtggacggt actggatacc aaaccccaga tatcatctgc cataggggcg ccaagcctgg 300

agccctgact gctccagtct ctccaggagg aactgttgag cttcaatgga ctccatggcc 360

tgattctcac catggcccag ttatcaacta ccttgctccg tgcaatggtg attgttccac 420

tgtggataag acccaattag aattcttcaa aattgccgag agcggtctca tcaatgatga 480

caatcctcct gggatctggg cttcagacaa tctgatagca gccaacaaca gctggactgt 540

caccattcca accacaattg cacctggaaa ctatgttctg aggcatgaga ttattgctct 600

tcactcagct cagaaccagg atggtgccca gaactatccc cagtgcatca atctgcaggt 660

cactggaggt ggttctgata accctgctgg aactcttgga acggcactct accacgatac 720

cgatcctgga attctgatca acatctatca gaaactttcc agctatatca tccctggtcc 780

tcctctgtat actggttaa 799

<210> 14

<211> 250

<212> PRT

<213> 桔橙嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)

<400> 14

Met Ser Phe Ser Lys Ile Ile Ala Thr Ala Gly Val Leu Ala Ser Ala

1 5 10 15

Ser Leu Val Ala Gly His Gly Phe Val Gln Asn Ile Val Ile Asp Gly

20 25 30

Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Tyr Leu Val Asn Gln Tyr Pro Tyr Met Ser

35 40 45

Asn Pro Pro Glu Val Ile Ala Trp Ser Thr Thr Ala Thr Asp Leu Gly

50 55 60

Phe Val Asp Gly Thr Gly Tyr Gln Thr Pro Asp Ile Ile Cys His Arg

65 70 75 80

Gly Ala Lys Pro Gly Ala Leu Thr Ala Pro Val Ser Pro Gly Gly Thr

85 90 95

Val Glu Leu Gln Trp Thr Pro Trp Pro Asp Ser His His Gly Pro Val

100 105 110

Ile Asn Tyr Leu Ala Pro Cys Asn Gly Asp Cys Ser Thr Val Asp Lys

115 120 125

Thr Gln Leu Glu Phe Phe Lys Ile Ala Glu Ser Gly Leu Ile Asn Asp

130 135 140

Asp Asn Pro Pro Gly Ile Trp Ala Ser Asp Asn Leu Ile Ala Ala Asn

145 150 155 160

Asn Ser Trp Thr Val Thr Ile Pro Thr Thr Ile Ala Pro Gly Asn Tyr

165 170 175

Val Leu Arg His Glu Ile Ile Ala Leu His Ser Ala Gln Asn Gln Asp

180 185 190

Gly Ala Gln Asn Tyr Pro Gln Cys Ile Asn Leu Gln Val Thr Gly Gly

195 200 205

Gly Ser Asp Asn Pro Ala Gly Thr Leu Gly Thr Ala Leu Tyr His Asp

210 215 220

Thr Asp Pro Gly Ile Leu Ile Asn Ile Tyr Gln Lys Leu Ser Ser Tyr

225 230 235 240

Ile Ile Pro Gly Pro Pro Leu Tyr Thr Gly

245 250

<210> 15

<211> 1172

<212> DNA

<213> 里氏木霉(Trichoderma reesei)

<400> 15

ggatctaagc cccatcgata tgaagtcctg cgccattctt gcagcccttg gctgtcttgc 60

cgggagcgtt ctcggccatg gacaagtcca aaacttcacg atcaatggac aatacaatca 120

gggtttcatt ctcgattact actatcagaa gcagaatact ggtcacttcc ccaacgttgc 180

tggctggtac gccgaggacc tagacctggg cttcatctcc cctgaccaat acaccacgcc 240

cgacattgtc tgtcacaaga acgcggcccc aggtgccatt tctgccactg cagcggccgg 300

cagcaacatc gtcttccaat ggggccctgg cgtctggcct cacccctacg gtcccatcgt 360

tacctacgtg gctgagtgca gcggatcgtg cacgaccgtg aacaagaaca acctgcgctg 420

ggtcaagatt caggaggccg gcatcaacta taacacccaa gtctgggcgc agcaggatct 480

gatcaaccag ggcaacaagt ggactgtgaa gatcccgtcg agcctcaggc ccggaaacta 540

tgtcttccgc catgaacttc ttgctgccca tggtgcctct agtgcgaacg gcatgcagaa 600

ctatcctcag tgcgtgaaca tcgccgtcac aggctcgggc acgaaagcgc tccctgccgg 660

aactcctgca actcagctct acaagcccac tgaccctggc atcttgttca acccttacac 720

aacaatcacg agctacacca tccctggccc agccctgtgg caaggctaga tccaggggta 780

cggtgttggc gttcgtgaag tcggagctgt tgacaaggat atctgatgat gaacggagag 840

gactgatggg cgtgactgag tgtatatatt tttgatgacc aaattgtata cgaaatccga 900

acgcatggtg atcattgttt atccctgtag tatattgtct ccaggctgct aagagcccac 960

cgggtgtatt acggcaacaa agtcaggaat ttgggtggca atgaacgcag gtctccatga 1020

atgtatatgt gaagaggcat cggctggcat gggcattacc agatataggc cctgtgaaac 1080

atatagtact tgaacgtgct actggaacgg atcataagca agtcatcaac atgtgaaaaa 1140

acactacatg taaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 1172

<210> 16

<211> 249

<212> PRT

<213> 里氏木霉(Trichoderma reesei)

<400> 16

Met Lys Ser Cys Ala Ile Leu Ala Ala Leu Gly Cys Leu Ala Gly Ser

1 5 10 15

Val Leu Gly His Gly Gln Val Gln Asn Phe Thr Ile Asn Gly Gln Tyr

20 25 30

Asn Gln Gly Phe Ile Leu Asp Tyr Tyr Tyr Gln Lys Gln Asn Thr Gly

35 40 45

His Phe Pro Asn Val Ala Gly Trp Tyr Ala Glu Asp Leu Asp Leu Gly

50 55 60

Phe Ile Ser Pro Asp Gln Tyr Thr Thr Pro Asp Ile Val Cys His Lys

65 70 75 80

Asn Ala Ala Pro Gly Ala Ile Ser Ala Thr Ala Ala Ala Gly Ser Asn

85 90 95

Ile Val Phe Gln Trp Gly Pro Gly Val Trp Pro His Pro Tyr Gly Pro

100 105 110

Ile Val Thr Tyr Val Val Glu Cys Ser Gly Ser Cys Thr Thr Val Asn

115 120 125

Lys Asn Asn Leu Arg Trp Val Lys Ile Gln Glu Ala Gly Ile Asn Tyr

130 135 140

Asn Thr Gln Val Trp Ala Gln Gln Asp Leu Ile Asn Gln Gly Asn Lys

145 150 155 160

Trp Thr Val Lys Ile Pro Ser Ser Leu Arg Pro Gly Asn Tyr Val Phe

165 170 175

Arg His Glu Leu Leu Ala Ala His Gly Ala Ser Ser Ala Asn Gly Met

180 185 190

Gln Asn Tyr Pro Gln Cys Val Asn Ile Ala Val Thr Gly Ser Gly Thr

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Gly Thr Pro Ala Thr Gln Leu Tyr Lys Pro Thr

210 215 220

Asp Pro Gly Ile Leu Phe Asn Pro Tyr Thr Thr Ile Thr Ser Tyr Thr

225 230 235 240

Ile Pro Gly Pro Ala Leu Trp Gln Gly

245

<210> 17

<211> 2576

<212> DNA

<213> 特异腐质霉(Humicola insolens)

<400> 17

agctacagct tccttgggcc cgtctgaacc aaccttctgg gaccaagtgg tgagatctgg 60

cggcacaacc atgaagttcc tcggccgtat tggggcgacc gcccttgcgg cgtcgctgta 120

tctcacatca ggcgccgcgc aagccactgg tgatgcgtac accgactcgg aaacaggcat 180

taagttccag acctggtccc cggatccgca gttcactttt ggccttgccc tgccgccgga 240

tgccctggag aaggatgcca ctgagtacat tggtcttctc cgctgcacca gggccgaccc 300

atccgaccct ggctactgcg gtctctctca tggccaggtc ggccagatga cgcagtcgct 360

gcttctcgtg gcctgggcct acgagaacca ggtctacacg tcgttccgct acgccaccgg 420

ctacaccctc ccgggtctgt acaccggcaa cgctaagctg acccagctct ccgtcaacat 480

caccgacacc agcttcgagc tcatctaccg ctgcgagaac tgcttctcgt gggagcacga 540

aggcagcacc ggatctagct cgacctccca gggctatctc gtcctcggtc gtgcttccgc 600

ccgccgcggc gtcgtcggcc cgacttgccc ggacacggcc acctttggtt tccacgacaa 660

tggcttcggt cagtggggtg ttggtctcga gaatgccgtt tcggagcagt attctgagtg 720

ggcttcgctg ccgggtctga ctgttgagac cacctgcgaa ggatccggcc ctggtgaggc 780

gcagtgcgtg cctgcccctg aggagactta tgactatatt gttgttggtg ctggcgccgg 840

cggtattcct gtcgccgaca agctgagcga ggccggccac aaggttctgc tcatcgagaa 900

gggtcccccg tcgacgggcc gctggcaggg taccatgaag cccgagtggc ttgaaggcac 960

tgacctcact cggttcgatg tgcccggcct ttgcaaccag atctgggttg actcggctgg 1020

cattgcctgc actgatactg atcagatggc tggctgcgtc ttgggcggtg gcacggccgt 1080

taatgctggc ctgtggtgga agcccattga cctcgactgg gatgagaact tccctgaggg 1140

ctggcactcg caggatctcg ccgcggcgac cgagcgcgtc tttgagcgca tccccggcac 1200

ctggcacccg tccatggatg gcaagctgta ccgtgacgaa ggctacaagg ttctctccag 1260

cggtctggct gagtctggct ggaaggaggt tgtggccaac gaggttccca acgagaagaa 1320

ccgcactttc gcccacaccc acttcatgtt cgctggcgga gagcgtaacg ggcctcttgc 1380

cacttacctg gtctctgccg atgcccgcga gaacttctcg ctctggacca acactgctgt 1440

tcgccgcgct gtccgcactg gtggcaaggt cacaggtgtc gagctcgagt gcttgactga 1500

tggcggctac agcggcattg ttaagctcaa tgagggcggt ggcgtcatct tctcggccgg 1560

tgcctttggt tcggccaagc tgctcttccg cagcggtatc ggccctgagg atcagctccg 1620

cgttgttgcc tcctctaagg acggagagga cttcatcgac gagaaggact ggattaagct 1680

ccccgtcggc tacaacctga ttgaccacct taacactgac ctcatcctca ctcaccccga 1740

tgtcgtcttc tacgacttct atgaggcctg gaccaccccg atcgaggccg acaagcagct 1800

gtaccttgag cagcgctctg gcatccttgc ccaggctgct cctaacattg gccccatgat 1860

gtgggagcag gtcaccccct cggacggcat tacccgccaa ttccagtgga cggctcgcgt 1920

cgagggcgac agccgcttca ccaactcttc tcatgccatg actctcagcc agtacctcgg 1980

ccgtggtgtc gtgtcgcgcg gtcgcgccac catcacccag ggtctcgtca ccaccgtggc 2040

tgagcacccg tacctccaca acgccggcga caaggaggcc gtcattcagg gcatcaagaa 2100

cctcattgag tctcttaacg tgattcccaa catcacttgg gtcctgccgc ctcctggtag 2160

cactgtcgag gaatacgtcg attcgctcct cgtctccgcc tcggctcgtc gctcgaacca 2220

ctggatgggc acggccaagc tgggtactga tgatggccgc tacggcggta cttcggtcgt 2280

cgacctcgac accaaggtct acggcaccga taacctgttc gtggtggatg cttccatctt 2340

ccctggcatg tcgaccggca acccgtccgc tatgatcgtg attgccgctg agcaggctgc 2400

ggagcgcatt cttaagctga ggaagtaaga aggggagaga ggatggaggg atgacattga 2460

ggaaaatagg gttatgagtt gatgagttat gggcgaatgt gtcagccagt gtacttgact 2520

tattacctga gttaaacaac acgacgtgct tgatgtgtta aaaaaaaaaa aacttt 2576

<210> 18

<211> 785

<212> PRT

<213> 特异腐质霉(Humicola insolens)

<400> 18

Met Lys Phe Leu Gly Arg Ile Gly Ala Thr Ala Leu Ala Ala Ser Leu

1 5 10 15

Tyr Leu Thr Ser Gly Ala Ala Gln Ala Thr Gly Asp Ala Tyr Thr Asp

20 25 30

Ser Glu Thr Gly Ile Lys Phe Gln Thr Trp Ser Pro Asp Pro Gln Phe

35 40 45

Thr Phe Gly Leu Ala Leu Pro Pro Asp Ala Leu Glu Lys Asp Ala Thr

50 55 60

Glu Tyr Ile Gly Leu Leu Arg Cys Thr Arg Ala Asp Pro Ser Asp Pro

65 70 75 80

Gly Tyr Cys Gly Leu Ser His Gly Gln Val Gly Gln Met Thr Gln Ser

85 90 95

Leu Leu Leu Val Ala Trp Ala Tyr Glu Asn Gln Val Tyr Thr Ser Phe

100 105 110

Arg Tyr Ala Thr Gly Tyr Thr Leu Pro Gly Leu Tyr Thr Gly Asn Ala

115 120 125

Lys Leu Thr Gln Leu Ser Val Asn Ile Thr Asp Thr Ser Phe Glu Leu

130 135 140

Ile Tyr Arg Cys Glu Asn Cys Phe Ser Trp Glu His Glu Gly Ser Thr

145 150 155 160

Gly Ser Ser Ser Thr Ser Gln Gly Tyr Leu Val Leu Gly Arg Ala Ser

165 170 175

Ala Arg Arg Gly Val Val Gly Pro Thr Cys Pro Asp Thr Ala Thr Phe

180 185 190

Gly Phe His Asp Asn Gly Phe Gly Gln Trp Gly Val Gly Leu Glu Asn

195 200 205

Ala Val Ser Glu Gln Tyr Ser Glu Trp Ala Ser Leu Pro Gly Leu Thr

210 215 220

Val Glu Thr Thr Cys Glu Gly Ser Gly Pro Gly Glu Ala Gln Cys Val

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Glu Thr Tyr Asp Tyr Ile Val Val Gly Ala Gly Ala

245 250 255

Gly Gly Ile Pro Val Ala Asp Lys Leu Ser Glu Ala Gly His Lys Val

260 265 270

Leu Leu Ile Glu Lys Gly Pro Pro Ser Thr Gly Arg Trp Gln Gly Thr

275 280 285

Met Lys Pro Glu Trp Leu Glu Gly Thr Asp Leu Thr Arg Phe Asp Val

290 295 300

Pro Gly Leu Cys Asn Gln Ile Trp Val Asp Ser Ala Gly Ile Ala Cys

305 310 315 320

Thr Asp Thr Asp Gln Met Ala Gly Cys Val Leu Gly Gly Gly Thr Ala

325 330 335

Val Asn Ala Gly Leu Trp Trp Lys Pro Ile Asp Leu Asp Trp Asp Glu

340 345 350

Asn Phe Pro Glu Gly Trp His Ser Gln Asp Leu Ala Ala Ala Thr Glu

355 360 365

Arg Val Phe Glu Arg Ile Pro Gly Thr Trp His Pro Ser Met Asp Gly

370 375 380

Lys Leu Tyr Arg Asp Glu Gly Tyr Lys Val Leu Ser Ser Gly Leu Ala

385 390 395 400

Glu Ser Gly Trp Lys Glu Val Val Ala Asn Glu Val Pro Asn Glu Lys

405 410 415

Asn Arg Thr Phe Ala His Thr His Phe Met Phe Ala Gly Gly Glu Arg

420 425 430

Asn Gly Pro Leu Ala Thr Tyr Leu Val Ser Ala Asp Ala Arg Glu Asn

435 440 445

Phe Ser Leu Trp Thr Asn Thr Ala Val Arg Arg Ala Val Arg Thr Gly

450 455 460

Gly Lys Val Thr Gly Val Glu Leu Glu Cys Leu Thr Asp Gly Gly Tyr

465 470 475 480

Ser Gly Ile Val Lys Leu Asn Glu Gly Gly Gly Val Ile Phe Ser Ala

485 490 495

Gly Ala Phe Gly Ser Ala Lys Leu Leu Phe Arg Ser Gly Ile Gly Pro

500 505 510

Glu Asp Gln Leu Arg Val Val Ala Ser Ser Lys Asp Gly Glu Asp Phe

515 520 525

Ile Asp Glu Lys Asp Trp Ile Lys Leu Pro Val Gly Tyr Asn Leu Ile

530 535 540

Asp His Leu Asn Thr Asp Leu Ile Leu Thr His Pro Asp Val Val Phe

545 550 555 560

Tyr Asp Phe Tyr Glu Ala Trp Thr Thr Pro Ile Glu Ala Asp Lys Gln

565 570 575

Leu Tyr Leu Glu Gln Arg Ser Gly Ile Leu Ala Gln Ala Ala Pro Asn

580 585 590

Ile Gly Pro Met Met Trp Glu Gln Val Thr Pro Ser Asp Gly Ile Thr

595 600 605

Arg Gln Phe Gln Trp Thr Ala Arg Val Glu Gly Asp Ser Arg Phe Thr

610 615 620

Asn Ser Ser His Ala Met Thr Leu Ser Gln Tyr Leu Gly Arg Gly Val

625 630 635 640

Val Ser Arg Gly Arg Ala Thr Ile Thr Gln Gly Leu Val Thr Thr Val

645 650 655

Ala Glu His Pro Tyr Leu His Asn Ala Gly Asp Lys Glu Ala Val Ile

660 665 670

Gln Gly Ile Lys Asn Leu Ile Glu Ser Leu Asn Val Ile Pro Asn Ile

675 680 685

Thr Trp Val Leu Pro Pro Pro Gly Ser Thr Val Glu Glu Tyr Val Asp

690 695 700

Ser Leu Leu Val Ser Ala Ser Ala Arg Arg Ser Asn His Trp Met Gly

705 710 715 720

Thr Ala Lys Leu Gly Thr Asp Asp Gly Arg Tyr Gly Gly Thr Ser Val

725 730 735

Val Asp Leu Asp Thr Lys Val Tyr Gly Thr Asp Asn Leu Phe Val Val

740 745 750

Asp Ala Ser Ile Phe Pro Gly Met Ser Thr Gly Asn Pro Ser Ala Met

755 760 765

Ile Val Ile Ala Ala Glu Gln Ala Ala Glu Arg Ile Leu Lys Leu Arg

770 775 780

Lys

785

<210> 19

<211> 923

<212> DNA

<213> 特异腐质霉(Humicola insolens)

<400> 19

atgcgttcct cccccctcct ccgctccgcc gttgtggccg ccctgccggt gttggccctt 60

gccgctgatg gcaggtccac ccgctactgg gactgctgca agccttcgtg cggctgggcc 120

aagaaggctc ccgtgaacca gcctgtcttt tcctgcaacg ccaacttcca gcgtatcacg 180

gacttcgacg ccaagtccgg ctgcgagccg ggcggtgtcg cctactcgtg cgccgaccag 240

accccatggg ctgtgaacga cgacttcgcg ctcggttttg ctgccacctc tattgccggc 300

agcaatgagg cgggctggtg ctgcgcctgc tacgagctca ccttcacatc cggtcctgtt 360

gctggcaaga agatggtcgt ccagtccacc agcactggcg gtgatcttgg cagcaaccac 420

ttcgatctca acatccccgg cggcggcgtc ggcatcttcg acggatgcac tccccagttc 480

ggcggtctgc ccggccagcg ctacggcggc atctcgtccc gcaacgagtg cgatcggttc 540

cccgacgccc tcaagcccgg ctgctactgg cgcttcgact ggttcaagaa cgccgacaat 600

ccgagcttca gcttccgtca ggtccagtgc ccagccgagc tcgtcgctcg caccggatgc 660

cgccgcaacg acgacggcaa cttccctgcc gtccagatcc cctccagcag caccagctct 720

ccggtcaacc agcctaccag caccagcacc acgtccacct ccaccacctc gagcccgcca 780

gtccagccta cgactcccag cggctgcact gctgagaggt gggctcagtg cggcggcaat 840

ggctggagcg gctgcaccac ctgcgtcgct ggcagcactt gcacgaagat taatgactgg 900

taccatcagt gcctgtagaa ttc 923

<210> 20

<211> 305

<212> PRT

<213> 特异腐质霉(Humicola insolens)

<400> 20

Met Arg Ser Ser Pro Leu Leu Arg Ser Ala Val Val Ala Ala Leu Pro

1 5 10 15

Val Leu Ala Leu Ala Ala Asp Gly Arg Ser Thr Arg Tyr Trp Asp Cys

20 25 30

Cys Lys Pro Ser Cys Gly Trp Ala Lys Lys Ala Pro Val Asn Gln Pro

35 40 45

Val Phe Ser Cys Asn Ala Asn Phe Gln Arg Ile Thr Asp Phe Asp Ala

50 55 60

Lys Ser Gly Cys Glu Pro Gly Gly Val Ala Tyr Ser Cys Ala Asp Gln

65 70 75 80

Thr Pro Trp Ala Val Asn Asp Asp Phe Ala Leu Gly Phe Ala Ala Thr

85 90 95

Ser Ile Ala Gly Ser Asn Glu Ala Gly Trp Cys Cys Ala Cys Tyr Glu

100 105 110

Leu Thr Phe Thr Ser Gly Pro Val Ala Gly Lys Lys Met Val Val Gln

115 120 125

Ser Thr Ser Thr Gly Gly Asp Leu Gly Ser Asn His Phe Asp Leu Asn

130 135 140

Ile Pro Gly Gly Gly Val Gly Ile Phe Asp Gly Cys Thr Pro Gln Phe

145 150 155 160

Gly Gly Leu Pro Gly Gln Arg Tyr Gly Gly Ile Ser Ser Arg Asn Glu

165 170 175

Cys Asp Arg Phe Pro Asp Ala Leu Lys Pro Gly Cys Tyr Trp Arg Phe

180 185 190

Asp Trp Phe Lys Asn Ala Asp Asn Pro Ser Phe Ser Phe Arg Gln Val

195 200 205

Gln Cys Pro Ala Glu Leu Val Ala Arg Thr Gly Cys Arg Arg Asn Asp

210 215 220

Asp Gly Asn Phe Pro Ala Val Gln Ile Pro Ser Ser Ser Thr Ser Ser

225 230 235 240

Pro Val Asn Gln Pro Thr Ser Thr Ser Thr Thr Ser Thr Ser Thr Thr

245 250 255

Ser Ser Pro Pro Val Gln Pro Thr Thr Pro Ser Gly Cys Thr Ala Glu

260 265 270

Arg Trp Ala Gln Cys Gly Gly Asn Gly Trp Ser Gly Cys Thr Thr Cys

275 280 285

Val Ala Gly Ser Thr Cys Thr Lys Ile Asn Asp Trp Tyr His Gln Cys

290 295 300

Leu

305

<210> 21

<211> 1188

<212> DNA

<213> 嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)

<400> 21

cgacttgaaa cgccccaaat gaagtcctcc atcctcgcca gcgtcttcgc cacgggcgcc 60

gtggctcaaa gtggtccgtg gcagcaatgt ggtggcatcg gatggcaagg atcgaccgac 120

tgtgtgtcgg gctaccactg cgtctaccag aacgattggt acagccagtg cgtgcctggc 180

gcggcgtcga caacgctgca gacatcgacc acgtccaggc ccaccgccac cagcaccgcc 240

cctccgtcgt ccaccacctc gcctagcaag ggcaagctga agtggctcgg cagcaacgag 300

tcgggcgccg agttcgggga gggcaattac cccggcctct ggggcaagca cttcatcttc 360

ccgtcgactt cggcgattca gacgctcatc aatgatggat acaacatctt ccggatcgac 420

ttctcgatgg agcgtctggt gcccaaccag ttgacgtcgt ccttcgacca gggttacctc 480

cgcaacctga ccgaggtggt caacttcgtg acgaacgcgg gcaagtacgc cgtcctggac 540

ccgcacaact acggccggta ctacggcaac atcatcacgg acacgaacgc gttccggacc 600

ttctggacca acctggccaa gcagttcgcc tccaactcgc tcgtcatctt cgacaccaac 660

aacgagtaca acacgatgga ccagaccctg gtgctcaacc tcaaccaggc cgccatcgac 720

ggcatccggg ccgccggcgc gacctcgcag tacatcttcg tcgagggcaa cgcgtggagc 780

ggggcctgga gctggaacac gaccaacacc aacatggccg ccctgacgga cccgcagaac 840

aagatcgtgt acgagatgca ccagtacctc gactcggaca gctcgggcac ccacgccgag 900

tgcgtcagca gcaccatcgg cgcccagcgc gtcgtcggag ccacccagtg gctccgcgcc 960

aacggcaagc tcggcgtcct cggcgagttc gccggcggcg ccaacgccgt ctgccagcag 1020

gccgtcaccg gcctcctcga ccacctccag gacaacagcg acgtctggct gggtgccctc 1080

tggtgggccg ccggtccctg gtggggcgac tacatgtact cgttcgagcc tccttcgggc 1140

accggctatg tcaactacaa ctcgatcttg aagaagtact tgccgtaa 1188

<210> 22

<211> 389

<212> PRT

<213> 嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)

<400> 22

Met Lys Ser Ser Ile Leu Ala Ser Val Phe Ala Thr Gly Ala Val Ala

1 5 10 15

Gln Ser Gly Pro Trp Gln Gln Cys Gly Gly Ile Gly Trp Gln Gly Ser

20 25 30

Thr Asp Cys Val Ser Gly Tyr His Cys Val Tyr Gln Asn Asp Trp Tyr

35 40 45

Ser Gln Cys Val Pro Gly Ala Ala Ser Thr Thr Leu Gln Thr Ser Thr

50 55 60

Thr Ser Arg Pro Thr Ala Thr Ser Thr Ala Pro Pro Ser Ser Thr Thr

65 70 75 80

Ser Pro Ser Lys Gly Lys Leu Lys Trp Leu Gly Ser Asn Glu Ser Gly

85 90 95

Ala Glu Phe Gly Glu Gly Asn Tyr Pro Gly Leu Trp Gly Lys His Phe

100 105 110

Ile Phe Pro Ser Thr Ser Ala Ile Gln Thr Leu Ile Asn Asp Gly Tyr

115 120 125

Asn Ile Phe Arg Ile Asp Phe Ser Met Glu Arg Leu Val Pro Asn Gln

130 135 140

Leu Thr Ser Ser Phe Asp Gln Gly Tyr Leu Arg Asn Leu Thr Glu Val

145 150 155 160

Val Asn Phe Val Thr Asn Ala Gly Lys Tyr Ala Val Leu Asp Pro His

165 170 175

Asn Tyr Gly Arg Tyr Tyr Gly Asn Ile Ile Thr Asp Thr Asn Ala Phe

180 185 190

Arg Thr Phe Trp Thr Asn Leu Ala Lys Gln Phe Ala Ser Asn Ser Leu

195 200 205

Val Ile Phe Asp Thr Asn Asn Glu Tyr Asn Thr Met Asp Gln Thr Leu

210 215 220

Val Leu Asn Leu Asn Gln Ala Ala Ile Asp Gly Ile Arg Ala Ala Gly

225 230 235 240

Ala Thr Ser Gln Tyr Ile Phe Val Glu Gly Asn Ala Trp Ser Gly Ala

245 250 255

Trp Ser Trp Asn Thr Thr Asn Thr Asn Met Ala Ala Leu Thr Asp Pro

260 265 270

Gln Asn Lys Ile Val Tyr Glu Met His Gln Tyr Leu Asp Ser Asp Ser

275 280 285

Ser Gly Thr His Ala Glu Cys Val Ser Ser Thr Ile Gly Ala Gln Arg

290 295 300

Val Val Gly Ala Thr Gln Trp Leu Arg Ala Asn Gly Lys Leu Gly Val

305 310 315 320

Leu Gly Glu Phe Ala Gly Gly Ala Asn Ala Val Cys Gln Gln Ala Val

325 330 335

Thr Gly Leu Leu Asp His Leu Gln Asp Asn Ser Asp Val Trp Leu Gly

340 345 350

Ala Leu Trp Trp Ala Ala Gly Pro Trp Trp Gly Asp Tyr Met Tyr Ser

355 360 365

Phe Glu Pro Pro Ser Gly Thr Gly Tyr Val Asn Tyr Asn Ser Ile Leu

370 375 380

Lys Lys Tyr Leu Pro

385

<210> 23

<211> 1232

<212> DNA

<213> 担子菌纲(Basidiomycete) CBS 495.95

<400> 23

ggatccactt agtaacggcc gccagtgtgc tggaaagcat gaagtctctc ttcctgtcac 60

ttgtagcgac cgtcgcgctc agctcgccag tattctctgt cgcagtctgg gggcaatgcg 120

gcggcattgg cttcagcgga agcaccgtct gtgatgcagg cgccggctgt gtgaagctca 180

acgactatta ctctcaatgc caacccggcg ctcccactgc tacatccgcg gcgccaagta 240

gcaacgcacc gtccggcact tcgacggcct cggccccctc ctccagcctt tgctctggca 300

gccgcacgcc gttccagttc ttcggtgtca acgaatccgg cgcggagttc ggcaacctga 360

acatccccgg tgttctgggc accgactaca cctggccgtc gccatccagc attgacttct 420

tcatgggcaa gggaatgaat accttccgta ttccgttcct catggagcgt cttgtccccc 480

ctgccactgg catcacagga cctctcgacc agacgtactt gggcggcctg cagacgattg 540

tcaactacat caccggcaaa ggcggctttg ctctcattga cccgcacaac tttatgatct 600

acaatggcca gacgatctcc agtaccagcg acttccagaa gttctggcag aacctcgcag 660

gagtgtttaa atcgaacagt cacgtcatct tcgatgttat gaacgagcct cacgatattc 720

ccgcccagac cgtgttccaa ctgaaccaag ccgctgtcaa tggcatccgt gcgagcggtg 780

cgacgtcgca gctcattctg gtcgagggca caagctggac tggagcctgg acctggacga 840

cctctggcaa cagcgatgca ttcggtgcca ttaaggatcc caacaacaac gtcgcgatcc 900

agatgcatca gtacctggat agcgatggct ctggcacttc gcagacctgc gtgtctccca 960

ccatcggtgc cgagcggttg caggctgcga ctcaatggtt gaagcagaac aacctcaagg 1020

gcttcctggg cgagatcggc gccggctcta actccgcttg catcagcgct gtgcagggtg 1080

cgttgtgttc gatgcagcaa tctggtgtgt ggctcggcgc tctctggtgg gctgcgggcc 1140

cgtggtgggg cgactactac cagtccatcg agccgccctc tggcccggcg gtgtccgcga 1200

tcctcccgca ggccctgctg ccgttcgcgt aa 1232

<210> 24

<211> 397

<212> PRT

<213> 担子菌纲(Basidiomycete) CBS 495.95

<400> 24

Met Lys Ser Leu Phe Leu Ser Leu Val Ala Thr Val Ala Leu Ser Ser

1 5 10 15

Pro Val Phe Ser Val Ala Val Trp Gly Gln Cys Gly Gly Ile Gly Phe

20 25 30

Ser Gly Ser Thr Val Cys Asp Ala Gly Ala Gly Cys Val Lys Leu Asn

35 40 45

Asp Tyr Tyr Ser Gln Cys Gln Pro Gly Ala Pro Thr Ala Thr Ser Ala

50 55 60

Ala Pro Ser Ser Asn Ala Pro Ser Gly Thr Ser Thr Ala Ser Ala Pro

65 70 75 80

Ser Ser Ser Leu Cys Ser Gly Ser Arg Thr Pro Phe Gln Phe Phe Gly

85 90 95

Val Asn Glu Ser Gly Ala Glu Phe Gly Asn Leu Asn Ile Pro Gly Val

100 105 110

Leu Gly Thr Asp Tyr Thr Trp Pro Ser Pro Ser Ser Ile Asp Phe Phe

115 120 125

Met Gly Lys Gly Met Asn Thr Phe Arg Ile Pro Phe Leu Met Glu Arg

130 135 140

Leu Val Pro Pro Ala Thr Gly Ile Thr Gly Pro Leu Asp Gln Thr Tyr

145 150 155 160

Leu Gly Gly Leu Gln Thr Ile Val Asn Tyr Ile Thr Gly Lys Gly Gly

165 170 175

Phe Ala Leu Ile Asp Pro His Asn Phe Met Ile Tyr Asn Gly Gln Thr

180 185 190

Ile Ser Ser Thr Ser Asp Phe Gln Lys Phe Trp Gln Asn Leu Ala Gly

195 200 205

Val Phe Lys Ser Asn Ser His Val Ile Phe Asp Val Met Asn Glu Pro

210 215 220

His Asp Ile Pro Ala Gln Thr Val Phe Gln Leu Asn Gln Ala Ala Val

225 230 235 240

Asn Gly Ile Arg Ala Ser Gly Ala Thr Ser Gln Leu Ile Leu Val Glu

245 250 255

Gly Thr Ser Trp Thr Gly Ala Trp Thr Trp Thr Thr Ser Gly Asn Ser

260 265 270

Asp Ala Phe Gly Ala Ile Lys Asp Pro Asn Asn Asn Val Ala Ile Gln

275 280 285

Met His Gln Tyr Leu Asp Ser Asp Gly Ser Gly Thr Ser Gln Thr Cys

290 295 300

Val Ser Pro Thr Ile Gly Ala Glu Arg Leu Gln Ala Ala Thr Gln Trp

305 310 315 320

Leu Lys Gln Asn Asn Leu Lys Gly Phe Leu Gly Glu Ile Gly Ala Gly

325 330 335

Ser Asn Ser Ala Cys Ile Ser Ala Val Gln Gly Ala Leu Cys Ser Met

340 345 350

Gln Gln Ser Gly Val Trp Leu Gly Ala Leu Trp Trp Ala Ala Gly Pro

355 360 365

Trp Trp Gly Asp Tyr Tyr Gln Ser Ile Glu Pro Pro Ser Gly Pro Ala

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Val Ser Ala Ile Leu Pro Gln Ala Leu Leu Pro Phe Ala

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<210> 25

<211> 1303

<212> DNA

<213> 担子菌纲(Basidiomycete) CBS 495.95

<400> 25

ggaaagcgtc agtatggtga aatttgcgct tgtggcaact gtcggcgcaa tcttgagcgc 60

ttctgcggcc aatgcggctt ctatctacca gcaatgtgga ggcattggat ggtctgggtc 120

cactgtttgc gacgccggtc tcgcttgcgt tatcctcaat gcgtactact ttcagtgctt 180

gacgcccgcc gcgggccaga caacgacggg ctcgggcgca ccggcgtcaa catcaacctc 240

tcactcaacg gtcactacgg ggagctcaca ctcaacaacc gggacgacgg cgacgaaaac 300

aactaccact ccgtcgacca ccacgaccct acccgccatc tctgtgtctg gtcgcgtctg 360

ctctggctcc aggacgaagt tcaagttctt cggtgtgaat gaaagcggcg ccgaattcgg 420

gaacactgct tggccagggc agctcgggaa agactataca tggccttcgc ctagcagcgt 480

ggactacttc atgggggctg gattcaatac attccgtatc accttcttga tggagcgtat 540

gagccctccg gctaccggac tcactggccc attcaaccag acgtacctgt cgggcctcac 600

caccattgtc gactacatca cgaacaaagg aggatacgct cttattgacc cccacaactt 660

catgcgttac aacaacggca taatcagcag cacatctgac ttcgcgactt ggtggagcaa 720

tttggccact gtattcaaat ccacgaagaa cgccatcttc gacatccaga acgagccgta 780

cggaatcgat gcgcagaccg tatacgaact gaatcaagct gccatcaatt cgatccgcgc 840

cgctggcgct acgtcacagt tgattctggt tgaaggaacg tcatacactg gagcttggac 900

gtgggtctcg tccggaaacg gagctgcttt cgcggccgtt acggatcctt acaacaacac 960

ggcaattgaa atgcaccaat acctcgacag cgacggttct gggacaaacg aagactgtgt 1020

ctcctccacc attgggtcgc aacgtctcca agctgccact gcgtggctgc aacaaacagg 1080

actcaaggga ttcctcggag agacgggtgc tgggtcgaat tcccagtgca tcgacgccgt 1140

gttcgatgaa ctttgctata tgcaacagca aggcggctcc tggatcggtg cactctggtg 1200

ggctgcgggt ccctggtggg gcacgtacat ttactcgatt gaacctccga gcggtgccgc 1260

tatcccagaa gtccttcctc agggtctcgc tccattcctc tag 1303

<210> 26

<211> 429

<212> PRT

<213> 担子菌纲(Basidiomycete) CBS 495.95

<400> 26

Met Val Lys Phe Ala Leu Val Ala Thr Val Gly Ala Ile Leu Ser Ala

1 5 10 15

Ser Ala Ala Asn Ala Ala Ser Ile Tyr Gln Gln Cys Gly Gly Ile Gly

20 25 30

Trp Ser Gly Ser Thr Val Cys Asp Ala Gly Leu Ala Cys Val Ile Leu

35 40 45

Asn Ala Tyr Tyr Phe Gln Cys Leu Thr Pro Ala Ala Gly Gln Thr Thr

50 55 60

Thr Gly Ser Gly Ala Pro Ala Ser Thr Ser Thr Ser His Ser Thr Val

65 70 75 80

Thr Thr Gly Ser Ser His Ser Thr Thr Gly Thr Thr Ala Thr Lys Thr

85 90 95

Thr Thr Thr Pro Ser Thr Thr Thr Thr Leu Pro Ala Ile Ser Val Ser

100 105 110

Gly Arg Val Cys Ser Gly Ser Arg Thr Lys Phe Lys Phe Phe Gly Val

115 120 125

Asn Glu Ser Gly Ala Glu Phe Gly Asn Thr Ala Trp Pro Gly Gln Leu

130 135 140

Gly Lys Asp Tyr Thr Trp Pro Ser Pro Ser Ser Val Asp Tyr Phe Met

145 150 155 160

Gly Ala Gly Phe Asn Thr Phe Arg Ile Thr Phe Leu Met Glu Arg Met

165 170 175

Ser Pro Pro Ala Thr Gly Leu Thr Gly Pro Phe Asn Gln Thr Tyr Leu

180 185 190

Ser Gly Leu Thr Thr Ile Val Asp Tyr Ile Thr Asn Lys Gly Gly Tyr

195 200 205

Ala Leu Ile Asp Pro His Asn Phe Met Arg Tyr Asn Asn Gly Ile Ile

210 215 220

Ser Ser Thr Ser Asp Phe Ala Thr Trp Trp Ser Asn Leu Ala Thr Val

225 230 235 240

Phe Lys Ser Thr Lys Asn Ala Ile Phe Asp Ile Gln Asn Glu Pro Tyr

245 250 255

Gly Ile Asp Ala Gln Thr Val Tyr Glu Leu Asn Gln Ala Ala Ile Asn

260 265 270

Ser Ile Arg Ala Ala Gly Ala Thr Ser Gln Leu Ile Leu Val Glu Gly

275 280 285

Thr Ser Tyr Thr Gly Ala Trp Thr Trp Val Ser Ser Gly Asn Gly Ala

290 295 300

Ala Phe Ala Ala Val Thr Asp Pro Tyr Asn Asn Thr Ala Ile Glu Met

305 310 315 320

His Gln Tyr Leu Asp Ser Asp Gly Ser Gly Thr Asn Glu Asp Cys Val

325 330 335

Ser Ser Thr Ile Gly Ser Gln Arg Leu Gln Ala Ala Thr Ala Trp Leu

340 345 350

Gln Gln Thr Gly Leu Lys Gly Phe Leu Gly Glu Thr Gly Ala Gly Ser

355 360 365

Asn Ser Gln Cys Ile Asp Ala Val Phe Asp Glu Leu Cys Tyr Met Gln

370 375 380

Gln Gln Gly Gly Ser Trp Ile Gly Ala Leu Trp Trp Ala Ala Gly Pro

385 390 395 400

Trp Trp Gly Thr Tyr Ile Tyr Ser Ile Glu Pro Pro Ser Gly Ala Ala

405 410 415

Ile Pro Glu Val Leu Pro Gln Gly Leu Ala Pro Phe Leu

420 425

<210> 27

<211> 1580

<212> DNA

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 27

agccccccgt tcaggcacac ttggcatcag atcagcttag cagcgcctgc acagcatgaa 60

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cgccagcacc aacgtttgga agaagtacac gctgcacccc aacagctact accgcaagga 240

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ggcgatccag gacgtgccct gcgagaacat cctgggcctg gtcatctacg acctgccggg 420

ccgcgactgc gcggccaagg cgtccaacgg cgagctcaag gtcggcgaga tcgaccgcta 480

caagaccgag tacatcgaca gtgagtgctg ccccccgggt tcgagaagag cgtgggggaa 540

agggaaaggg ttgactgact gacacggcgc actgcagaga tcgtgtcgat cctcaaggca 600

caccccaaca cggcgttcgc gctggtcatc gagccggact cgctgcccaa cctggtgacc 660

aacagcaact tggacacgtg ctcgagcagc gcgtcgggct accgcgaagg cgtggcttac 720

gccctcaaga acctcaacct gcccaacgtg atcatgtacc tcgacgccgg ccacggcggc 780

tggctcggct gggacgccaa cctgcagccc ggcgcgcagg agctagccaa ggcgtacaag 840

aacgccggct cgcccaagca gctccgcggc ttctcgacca acgtggccgg ctggaactcc 900

tggtgagctt ttttccattc catttcttct tcctcttctc tcttcgctcc cactctgcag 960

ccccccctcc cccaagcacc cactggcgtt ccggcttgct gactcggcct ccctttcccc 1020

gggcaccagg gatcaatcgc ccggcgaatt ctcccaggcg tccgacgcca agtacaacaa 1080

gtgccagaac gagaagatct acgtcagcac cttcggctcc gcgctccagt cggccggcat 1140

gcccaaccac gccatcgtcg acacgggccg caacggcgtc accggcctgc gcaaggagtg 1200

gggtgactgg tgcaacgtca acggtgcagg ttcgttgtct tctttttctc ctcttttgtt 1260

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tgttctgctt cctctctagg cttcggcgtg cgcccgacga gcaacacggg cctcgagctg 1380

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gacggtccag catcatccgg 1580

<210> 28

<211> 396

<212> PRT

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 28

Met Lys Leu Ser Gln Ser Ala Ala Leu Ala Ala Leu Thr Ala Thr Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Pro Ser Pro Thr Thr Pro Gln Ala Pro Arg Gln Ala Ser

20 25 30

Ala Gly Cys Ser Ser Ala Val Thr Leu Asp Ala Ser Thr Asn Val Trp

35 40 45

Lys Lys Tyr Thr Leu His Pro Asn Ser Tyr Tyr Arg Lys Glu Val Glu

50 55 60

Ala Ala Val Ala Gln Ile Ser Asp Pro Asp Leu Ala Ala Lys Ala Lys

65 70 75 80

Lys Val Ala Asp Val Gly Thr Phe Leu Trp Leu Asp Ser Ile Glu Asn

85 90 95

Ile Gly Lys Leu Glu Pro Ala Ile Gln Asp Val Pro Cys Glu Asn Ile

100 105 110

Leu Gly Leu Val Ile Tyr Asp Leu Pro Gly Arg Asp Cys Ala Ala Lys

115 120 125

Ala Ser Asn Gly Glu Leu Lys Val Gly Glu Ile Asp Arg Tyr Lys Thr

130 135 140

Glu Tyr Ile Asp Lys Ile Val Ser Ile Leu Lys Ala His Pro Asn Thr

145 150 155 160

Ala Phe Ala Leu Val Ile Glu Pro Asp Ser Leu Pro Asn Leu Val Thr

165 170 175

Asn Ser Asn Leu Asp Thr Cys Ser Ser Ser Ala Ser Gly Tyr Arg Glu

180 185 190

Gly Val Ala Tyr Ala Leu Lys Asn Leu Asn Leu Pro Asn Val Ile Met

195 200 205

Tyr Leu Asp Ala Gly His Gly Gly Trp Leu Gly Trp Asp Ala Asn Leu

210 215 220

Gln Pro Gly Ala Gln Glu Leu Ala Lys Ala Tyr Lys Asn Ala Gly Ser

225 230 235 240

Pro Lys Gln Leu Arg Gly Phe Ser Thr Asn Val Ala Gly Trp Asn Ser

245 250 255

Trp Asp Gln Ser Pro Gly Glu Phe Ser Gln Ala Ser Asp Ala Lys Tyr

260 265 270

Asn Lys Cys Gln Asn Glu Lys Ile Tyr Val Ser Thr Phe Gly Ser Ala

275 280 285

Leu Gln Ser Ala Gly Met Pro Asn His Ala Ile Val Asp Thr Gly Arg

290 295 300

Asn Gly Val Thr Gly Leu Arg Lys Glu Trp Gly Asp Trp Cys Asn Val

305 310 315 320

Asn Gly Ala Gly Phe Gly Val Arg Pro Thr Ser Asn Thr Gly Leu Glu

325 330 335

Leu Ala Asp Ala Phe Val Trp Val Lys Pro Gly Gly Glu Ser Asp Gly

340 345 350

Thr Ser Asp Ser Ser Ser Pro Arg Tyr Asp Ser Phe Cys Gly Lys Asp

355 360 365

Asp Ala Phe Lys Pro Ser Pro Glu Ala Gly Thr Trp Asn Glu Ala Tyr

370 375 380

Phe Glu Met Leu Leu Lys Asn Ala Val Pro Ser Phe

385 390 395

<210> 29

<211> 1203

<212> DNA

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 29

atgaagtacc tcaacctcct cgcagctctc ctcgccgtcg ctcctctctc cctcgctgca 60

cccagcatcg aggccagaca gtcgaacgtc aacccataca tcggcaagag cccgctcgtt 120

attaggtcgt acgcccaaaa gcttgaggag accgtcagga ccttccagca acgtggcgac 180

cagctcaacg ctgcgaggac acggacggtg cagaacgttg cgactttcgc ctggatctcg 240

gataccaatg gtattggagc cattcgacct ctcatccaag atgctctcgc ccagcaggct 300

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tctgccaacg cctcgactgg agagttcacc gtaggaaacg acggtctcaa ccgatacaag 420

aactttgtca acaccatcgc ccgcgagctc tcgactgctg acgctgacaa gctccacttt 480

gccctcctcc tcgaacccga cgcacttgcc aacctcgtca ccaacgcgaa tgcccccagg 540

tgccgaatcg ccgctcccgc ttacaaggag ggtatcgcct acaccctcgc caccttgtcc 600

aagcccaacg tcgacgtcta catcgacgcc gccaacggtg gctggctcgg ctggaacgac 660

aacctccgcc ccttcgccga actcttcaag gaagtctacg acctcgcccg ccgcatcaac 720

cccaacgcca aggtccgcgg cgtccccgtc aacgtctcca actacaacca gtaccgcgct 780

gaagtccgcg agcccttcac cgagtggaag gacgcctggg acgagagccg ctacgtcaac 840

gtcctcaccc cgcacctcaa cgccgtcggc ttctccgcgc acttcatcgt tgaccaggga 900

cgcggtggca agggcggtat caggacggag tggggccagt ggtgcaacgt taggaacgct 960

gggttcggta tcaggcctac tgcggatcag ggcgtgctcc agaacccgaa tgtggatgcg 1020

attgtgtggg ttaagccggg tggagagtcg gatggcacga gtgatttgaa ctcgaacagg 1080

tatgatccta cgtgcaggag tccggtggcg catgttcccg ctcctgaggc tggccagtgg 1140

ttcaacgagt atgttgttaa cctcgttttg aacgctaacc cccctcttga gcctacctgg 1200

taa 1203

<210> 30

<211> 400

<212> PRT

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 30

Met Lys Tyr Leu Asn Leu Leu Ala Ala Leu Leu Ala Val Ala Pro Leu

1 5 10 15

Ser Leu Ala Ala Pro Ser Ile Glu Ala Arg Gln Ser Asn Val Asn Pro

20 25 30

Tyr Ile Gly Lys Ser Pro Leu Val Ile Arg Ser Tyr Ala Gln Lys Leu

35 40 45

Glu Glu Thr Val Arg Thr Phe Gln Gln Arg Gly Asp Gln Leu Asn Ala

50 55 60

Ala Arg Thr Arg Thr Val Gln Asn Val Ala Thr Phe Ala Trp Ile Ser

65 70 75 80

Asp Thr Asn Gly Ile Gly Ala Ile Arg Pro Leu Ile Gln Asp Ala Leu

85 90 95

Ala Gln Gln Ala Arg Thr Gly Gln Lys Val Ile Val Gln Ile Val Val

100 105 110

Tyr Asn Leu Pro Asp Arg Asp Cys Ser Ala Asn Ala Ser Thr Gly Glu

115 120 125

Phe Thr Val Gly Asn Asp Gly Leu Asn Arg Tyr Lys Asn Phe Val Asn

130 135 140

Thr Ile Ala Arg Glu Leu Ser Thr Ala Asp Ala Asp Lys Leu His Phe

145 150 155 160

Ala Leu Leu Leu Glu Pro Asp Ala Leu Ala Asn Leu Val Thr Asn Ala

165 170 175

Asn Ala Pro Arg Cys Arg Ile Ala Ala Pro Ala Tyr Lys Glu Gly Ile

180 185 190

Ala Tyr Thr Leu Ala Thr Leu Ser Lys Pro Asn Val Asp Val Tyr Ile

195 200 205

Asp Ala Ala Asn Gly Gly Trp Leu Gly Trp Asn Asp Asn Leu Arg Pro

210 215 220

Phe Ala Glu Leu Phe Lys Glu Val Tyr Asp Leu Ala Arg Arg Ile Asn

225 230 235 240

Pro Asn Ala Lys Val Arg Gly Val Pro Val Asn Val Ser Asn Tyr Asn

245 250 255

Gln Tyr Arg Ala Glu Val Arg Glu Pro Phe Thr Glu Trp Lys Asp Ala

260 265 270

Trp Asp Glu Ser Arg Tyr Val Asn Val Leu Thr Pro His Leu Asn Ala

275 280 285

Val Gly Phe Ser Ala His Phe Ile Val Asp Gln Gly Arg Gly Gly Lys

290 295 300

Gly Gly Ile Arg Thr Glu Trp Gly Gln Trp Cys Asn Val Arg Asn Ala

305 310 315 320

Gly Phe Gly Ile Arg Pro Thr Ala Asp Gln Gly Val Leu Gln Asn Pro

325 330 335

Asn Val Asp Ala Ile Val Trp Val Lys Pro Gly Gly Glu Ser Asp Gly

340 345 350

Thr Ser Asp Leu Asn Ser Asn Arg Tyr Asp Pro Thr Cys Arg Ser Pro

355 360 365

Val Ala His Val Pro Ala Pro Glu Ala Gly Gln Trp Phe Asn Glu Tyr

370 375 380

Val Val Asn Leu Val Leu Asn Ala Asn Pro Pro Leu Glu Pro Thr Trp

385 390 395 400

<210> 31

<211> 1501

<212> DNA

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 31

gccgttgtca agatgggcca gaagacgctg cacggattcg ccgccacggc tttggccgtt 60

ctcccctttg tgaaggctca gcagcccggc aacttcacgc cggaggtgca cccgcaactg 120

ccaacgtgga agtgcacgac cgccggcggc tgcgttcagc aggacacttc ggtggtgctc 180

gactggaact accgttggat ccacaatgcc gacggcaccg cctcgtgcac gacgtccagc 240

ggggtcgacc acacgctgtg tccagatgag gcgacctgcg cgaagaactg cttcgtggaa 300

ggcgtcaact acacgagcag cggtgtcacc acatccggca gttcgctgac gatgaggcag 360

tatttcaagg ggagcaacgg gcagaccaac agcgtttcgc ctcgtctcta cctgctcggc 420

tcggatggaa actacgtaat gctcaagctg ctcggccagg agctgagctt cgatgtcgat 480

ctctccacgc tcccctgcgg cgagaacggc gcgctgtacc tgtccgagat ggacgcgacc 540

ggtggcagga accagtacaa caccggcggt gccaactacg gctcgggcta ctgtgacgcc 600

cagtgtcccg tgcagacgtg gatgaacggc acgctgaaca ccaacgggca gggctactgc 660

tgcaacgaga tggacatcct cgaggccaac tcccgcgcca acgcgatgac acctcacccc 720

tgcgccaacg gcagctgcga caagagcggg tgcggactca acccctacgc cgagggctac 780

aagagctact acggaccggg cctcacggtt gacacgtcga agcccttcac catcattacc 840

cgcttcatca ccgacgacgg cacgaccagc ggcaccctca accagatcca gcggatctat 900

gtgcagaatg gcaagacggt cgcgtcggct gcgtccggag gcgacatcat cacggcatcc 960

ggctgcacct cggcccaggc gttcggcggg ctggccaaca tgggcgcggc gcttggacgg 1020

ggcatggtgc tgaccttcag catctggaac gacgctgggg gctacatgaa ctggctcgac 1080

agcggcaaca acggcccgtg cagcagcacc gagggcaacc cgtccaacat cctggccaac 1140

tacccggaca cccacgtggt cttctccaac atccgctggg gagacatcgg ctcgacggtc 1200

caggtctcgg gaggcggcaa cggcggctcg accaccacca cgtcgaccac cacgctgagg 1260

acctcgacca cgaccaccac caccgccccg acggccactg ccacgcactg gggacaatgc 1320

ggcggaatcg gggtacgtca accgcctcct gcattctgtt gaggaagtta actaacgtgg 1380

cctacgcagt ggactggacc gaccgtctgc gaatcgccgt acgcatgcaa ggagctgaac 1440

ccctggtact accagtgcct ctaaagtatt gcagtgaagc catactccgt gctcggcatg 1500

g 1501

<210> 32

<211> 464

<212> PRT

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 32

Met Gly Gln Lys Thr Leu His Gly Phe Ala Ala Thr Ala Leu Ala Val

1 5 10 15

Leu Pro Phe Val Lys Ala Gln Gln Pro Gly Asn Phe Thr Pro Glu Val

20 25 30

His Pro Gln Leu Pro Thr Trp Lys Cys Thr Thr Ala Gly Gly Cys Val

35 40 45

Gln Gln Asp Thr Ser Val Val Leu Asp Trp Asn Tyr Arg Trp Ile His

50 55 60

Asn Ala Asp Gly Thr Ala Ser Cys Thr Thr Ser Ser Gly Val Asp His

65 70 75 80

Thr Leu Cys Pro Asp Glu Ala Thr Cys Ala Lys Asn Cys Phe Val Glu

85 90 95

Gly Val Asn Tyr Thr Ser Ser Gly Val Thr Thr Ser Gly Ser Ser Leu

100 105 110

Thr Met Arg Gln Tyr Phe Lys Gly Ser Asn Gly Gln Thr Asn Ser Val

115 120 125

Ser Pro Arg Leu Tyr Leu Leu Gly Ser Asp Gly Asn Tyr Val Met Leu

130 135 140

Lys Leu Leu Gly Gln Glu Leu Ser Phe Asp Val Asp Leu Ser Thr Leu

145 150 155 160

Pro Cys Gly Glu Asn Gly Ala Leu Tyr Leu Ser Glu Met Asp Ala Thr

165 170 175

Gly Gly Arg Asn Gln Tyr Asn Thr Gly Gly Ala Asn Tyr Gly Ser Gly

180 185 190

Tyr Cys Asp Ala Gln Cys Pro Val Gln Thr Trp Met Asn Gly Thr Leu

195 200 205

Asn Thr Asn Gly Gln Gly Tyr Cys Cys Asn Glu Met Asp Ile Leu Glu

210 215 220

Ala Asn Ser Arg Ala Asn Ala Met Thr Pro His Pro Cys Ala Asn Gly

225 230 235 240

Ser Cys Asp Lys Ser Gly Cys Gly Leu Asn Pro Tyr Ala Glu Gly Tyr

245 250 255

Lys Ser Tyr Tyr Gly Pro Gly Leu Thr Val Asp Thr Ser Lys Pro Phe

260 265 270

Thr Ile Ile Thr Arg Phe Ile Thr Asp Asp Gly Thr Thr Ser Gly Thr

275 280 285

Leu Asn Gln Ile Gln Arg Ile Tyr Val Gln Asn Gly Lys Thr Val Ala

290 295 300

Ser Ala Ala Ser Gly Gly Asp Ile Ile Thr Ala Ser Gly Cys Thr Ser

305 310 315 320

Ala Gln Ala Phe Gly Gly Leu Ala Asn Met Gly Ala Ala Leu Gly Arg

325 330 335

Gly Met Val Leu Thr Phe Ser Ile Trp Asn Asp Ala Gly Gly Tyr Met

340 345 350

Asn Trp Leu Asp Ser Gly Asn Asn Gly Pro Cys Ser Ser Thr Glu Gly

355 360 365

Asn Pro Ser Asn Ile Leu Ala Asn Tyr Pro Asp Thr His Val Val Phe

370 375 380

Ser Asn Ile Arg Trp Gly Asp Ile Gly Ser Thr Val Gln Val Ser Gly

385 390 395 400

Gly Gly Asn Gly Gly Ser Thr Thr Thr Thr Ser Thr Thr Thr Leu Arg

405 410 415

Thr Ser Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ala Pro Thr Ala Thr Ala Thr His

420 425 430

Trp Gly Gln Cys Gly Gly Ile Gly Trp Thr Gly Pro Thr Val Cys Glu

435 440 445

Ser Pro Tyr Ala Cys Lys Glu Leu Asn Pro Trp Tyr Tyr Gln Cys Leu

450 455 460

<210> 33

<211> 1368

<212> DNA

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 33

accgatccgc tcgaagatgg cgcccaagtc tacagttctg gccgcctggc tgctctcctc 60

gctggccgcg gcccagcaga tcggcaaagc cgtgcccgag gtccacccca aactgacaac 120

gcagaagtgc actctccgcg gcgggtgcaa gcctgtccgc acctcggtcg tgctcgactc 180

gtccgcgcgc tcgctgcaca aggtcgggga ccccaacacc agctgcagcg tcggcggcga 240

cctgtgctcg gacgcgaagt cgtgcggcaa gaactgcgcg ctcgagggcg tcgactacgc 300

ggcccacggc gtggcgacca agggcgacgc cctcacgctg caccagtggc tcaagggggc 360

cgacggcacc tacaggaccg tctcgccgcg cgtatacctc ctgggcgagg acgggaagaa 420

ctacgaggac ttcaagctgc tcaacgccga gctcagcttc gacgtcgacg tgtcccagct 480

cgtctgcggc atgaacggcg ccctgtactt ctccgagatg gagatggacg gcggccgcag 540

cccgctgaac ccggcgggcg ccacgtacgg cacgggctac tgcgacgcgc agtgccccaa 600

gttggacttt atcaacggcg aggtatttct tctctcttct gtttttcttt tccatcgctt 660

tttctgaccg gaatccgccc tcttagctca acaccaacca cacgtacggg gcgtgctgca 720

acgagatgga catctgggag gccaacgcgc tggcgcaggc gctcacgccg cacccgtgca 780

acgcgacgcg ggtgtacaag tgcgacacgg cggacgagtg cgggcagccg gtgggcgtgt 840

gcgacgaatg ggggtgctcg tacaacccgt ccaacttcgg ggtcaaggac tactacgggc 900

gcaacctgac ggtggacacg aaccgcaagt tcacggtgac gacgcagttc gtgacgtcca 960

acgggcgggc ggacggcgag ctgaccgaga tccggcggct gtacgtgcag gacggcgtgg 1020

tgatccagaa ccacgcggtc acggcgggcg gggcgacgta cgacagcatc acggacggct 1080

tctgcaacgc gacggccacc tggacgcagc agcggggcgg gctcgcgcgc atgggcgagg 1140

ccatcggccg cggcatggtg ctcatcttca gcctgtgggt tgacaacggc ggcttcatga 1200

actggctcga cagcggcaac gccgggccct gcaacgccac cgagggcgac ccggccctga 1260

tcctgcagca gcacccggac gccagcgtca ccttctccaa catccgatgg ggcgagatcg 1320

gcagcacgta caagagcgag tgcagccact agagtagagc ttgtaatt 1368

<210> 34

<211> 423

<212> PRT

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 34

Met Ala Pro Lys Ser Thr Val Leu Ala Ala Trp Leu Leu Ser Ser Leu

1 5 10 15

Ala Ala Ala Gln Gln Ile Gly Lys Ala Val Pro Glu Val His Pro Lys

20 25 30

Leu Thr Thr Gln Lys Cys Thr Leu Arg Gly Gly Cys Lys Pro Val Arg

35 40 45

Thr Ser Val Val Leu Asp Ser Ser Ala Arg Ser Leu His Lys Val Gly

50 55 60

Asp Pro Asn Thr Ser Cys Ser Val Gly Gly Asp Leu Cys Ser Asp Ala

65 70 75 80

Lys Ser Cys Gly Lys Asn Cys Ala Leu Glu Gly Val Asp Tyr Ala Ala

85 90 95

His Gly Val Ala Thr Lys Gly Asp Ala Leu Thr Leu His Gln Trp Leu

100 105 110

Lys Gly Ala Asp Gly Thr Tyr Arg Thr Val Ser Pro Arg Val Tyr Leu

115 120 125

Leu Gly Glu Asp Gly Lys Asn Tyr Glu Asp Phe Lys Leu Leu Asn Ala

130 135 140

Glu Leu Ser Phe Asp Val Asp Val Ser Gln Leu Val Cys Gly Met Asn

145 150 155 160

Gly Ala Leu Tyr Phe Ser Glu Met Glu Met Asp Gly Gly Arg Ser Pro

165 170 175

Leu Asn Pro Ala Gly Ala Thr Tyr Gly Thr Gly Tyr Cys Asp Ala Gln

180 185 190

Cys Pro Lys Leu Asp Phe Ile Asn Gly Glu Leu Asn Thr Asn His Thr

195 200 205

Tyr Gly Ala Cys Cys Asn Glu Met Asp Ile Trp Glu Ala Asn Ala Leu

210 215 220

Ala Gln Ala Leu Thr Pro His Pro Cys Asn Ala Thr Arg Val Tyr Lys

225 230 235 240

Cys Asp Thr Ala Asp Glu Cys Gly Gln Pro Val Gly Val Cys Asp Glu

245 250 255

Trp Gly Cys Ser Tyr Asn Pro Ser Asn Phe Gly Val Lys Asp Tyr Tyr

260 265 270

Gly Arg Asn Leu Thr Val Asp Thr Asn Arg Lys Phe Thr Val Thr Thr

275 280 285

Gln Phe Val Thr Ser Asn Gly Arg Ala Asp Gly Glu Leu Thr Glu Ile

290 295 300

Arg Arg Leu Tyr Val Gln Asp Gly Val Val Ile Gln Asn His Ala Val

305 310 315 320

Thr Ala Gly Gly Ala Thr Tyr Asp Ser Ile Thr Asp Gly Phe Cys Asn

325 330 335

Ala Thr Ala Thr Trp Thr Gln Gln Arg Gly Gly Leu Ala Arg Met Gly

340 345 350

Glu Ala Ile Gly Arg Gly Met Val Leu Ile Phe Ser Leu Trp Val Asp

355 360 365

Asn Gly Gly Phe Met Asn Trp Leu Asp Ser Gly Asn Ala Gly Pro Cys

370 375 380

Asn Ala Thr Glu Gly Asp Pro Ala Leu Ile Leu Gln Gln His Pro Asp

385 390 395 400

Ala Ser Val Thr Phe Ser Asn Ile Arg Trp Gly Glu Ile Gly Ser Thr

405 410 415

Tyr Lys Ser Glu Cys Ser His

420

<210> 35

<211> 1000

<212> DNA

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 35

atgaccctac ggctccctgt catcagcctg ctggcctcgc tggcagcagg cgccgtcgtc 60

gtcccacggg cggagtttca cccccctctc ccgacttgga aatgcacgac ctccgggggc 120

tgcgtgcagc agaacaccag cgtcgtcctg gaccgtgact cgaagtacgc cgcacacagc 180

gccggctcgc ggacggaatc ggattacgcg gcaatgggag tgtccacttc gggcaatgcc 240

gtgacgctgt accactacgt caagaccaac ggcaccctcg tccccgcttc gccgcgcatc 300

tacctcctgg gcgcggacgg caagtacgtg cttatggacc tcctcaacca ggagctgtcg 360

gtggacgtcg acttctcggc gctgccgtgc ggcgagaacg gggccttcta cctgtccgag 420

atggcggcgg acgggcgggg cgacgcgggg gcgggcgacg ggtactgcga cgcgcagtgc 480

cagggctact gctgcaacga gatggacatc ctcgaggcca actcgatggc gacggccatg 540

acgccgcacc cgtgcaaggg caacaactgc gaccgcagcg gctgcggcta caacccgtac 600

gccagcggcc agcgcggctt ctacgggccc ggcaagacgg tcgacacgag caagcccttc 660

accgtcgtca cgcagttcgc cgccagcggc ggcaagctga cccagatcac ccgcaagtac 720

atccagaacg gccgggagat cggcggcggc ggcaccatct ccagctgcgg ctccgagtct 780

tcgacgggcg gcctgaccgg catgggcgag gcgctggggc gcggaatggt gctggccatg 840

agcatctgga acgacgcggc ccaggagatg gcatggctcg atgccggcaa caacggccct 900

tgcgccagtg gccagggcag cccgtccgtc attcagtcgc agcatcccga cacccacgtc 960

gtcttctcca acatcaggtg gggcgacatc gggtctacca 1000

<210> 36

<211> 336

<212> PRT

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 36

Met Thr Leu Arg Leu Pro Val Ile Ser Leu Leu Ala Ser Leu Ala Ala

1 5 10 15

Gly Ala Val Val Val Pro Arg Ala Glu Phe His Pro Pro Leu Pro Thr

20 25 30

Trp Lys Cys Thr Thr Ser Gly Gly Cys Val Gln Gln Asn Thr Ser Val

35 40 45

Val Leu Asp Arg Asp Ser Lys Tyr Ala Ala His Ser Ala Gly Ser Arg

50 55 60

Thr Glu Ser Asp Tyr Ala Ala Met Gly Val Ser Thr Ser Gly Asn Ala

65 70 75 80

Val Thr Leu Tyr His Tyr Val Lys Thr Asn Gly Thr Leu Val Pro Ala

85 90 95

Ser Pro Arg Ile Tyr Leu Leu Gly Ala Asp Gly Lys Tyr Val Leu Met

100 105 110

Asp Leu Leu Asn Gln Glu Leu Ser Val Asp Val Asp Phe Ser Ala Leu

115 120 125

Pro Cys Gly Glu Asn Gly Ala Phe Tyr Leu Ser Glu Met Ala Ala Asp

130 135 140

Gly Arg Gly Asp Ala Gly Ala Gly Asp Gly Tyr Cys Asp Ala Gln Cys

145 150 155 160

Gln Gly Tyr Cys Cys Asn Glu Met Asp Ile Leu Glu Ala Asn Ser Met

165 170 175

Ala Thr Ala Met Thr Pro His Pro Cys Lys Gly Asn Asn Cys Asp Arg

180 185 190

Ser Gly Cys Gly Tyr Asn Pro Tyr Ala Ser Gly Gln Arg Gly Phe Tyr

195 200 205

Gly Pro Gly Lys Thr Val Asp Thr Ser Lys Pro Phe Thr Val Val Thr

210 215 220

Gln Phe Ala Ala Ser Gly Gly Lys Leu Thr Gln Ile Thr Arg Lys Tyr

225 230 235 240

Ile Gln Asn Gly Arg Glu Ile Gly Gly Gly Gly Thr Ile Ser Ser Cys

245 250 255

Gly Ser Glu Ser Ser Thr Gly Gly Leu Thr Gly Met Gly Glu Ala Leu

260 265 270

Gly Arg Gly Met Val Leu Ala Met Ser Ile Trp Asn Asp Ala Ala Gln

275 280 285

Glu Met Ala Trp Leu Asp Ala Gly Asn Asn Gly Pro Cys Ala Ser Gly

290 295 300

Gln Gly Ser Pro Ser Val Ile Gln Ser Gln His Pro Asp Thr His Val

305 310 315 320

Val Phe Ser Asn Ile Arg Trp Gly Asp Ile Gly Ser Thr Thr Lys Asn

325 330 335

<210> 37

<211> 1480

<212> DNA

<213> Cladorrhinum foecundissimum

<400> 37

gatccgaatt cctcctctcg ttctttagtc acagaccaga catctgccca cgatggttca 60

caagttcgcc ctcctcaccg gcctcgccgc ctccctcgca tctgcccagc agatcggcac 120

cgtcgtcccc gagtctcacc ccaagcttcc caccaagcgc tgcactctcg ccggtggctg 180

ccagaccgtc gacacctcca tcgtcatcga cgccttccag cgtcccctcc acaagatcgg 240

cgacccttcc actccttgcg tcgtcggcgg ccctctctgc cccgacgcca agtcctgcgc 300

tgagaactgc gcgctcgagg gtgtcgacta tgcctcctgg ggcatcaaga ccgagggcga 360

cgccctaact ctcaaccagt ggatgcccga cccggcgaac cctggccagt acaagacgac 420

tactccccgt acttaccttg ttgctgagga cggcaagaac tacgaggatg tgaagctcct 480

ggctaaggag atctcgtttg atgccgatgt cagcaacctt ccctgcggca tgaacggtgc 540

tttctacttg tctgagatgt tgatggatgg tggacgtggc gacctcaacc ctgctggtgc 600

cgagtatggt accggttact gtgatgcgca gtgcttcaag ttggatttca tcaacggcga 660

ggccaacatc gaccaaaagc acggcgcctg ctgcaacgaa atggacattt tcgaatccaa 720

ctcgcgcgcc aagaccttcg tcccccaccc ctgcaacatc acgcaggtct acaagtgcga 780

aggcgaagac gagtgcggcc agcccgtcgg cgtgtgcgac aagtgggggt gcggcttcaa 840

cgagtacaaa tggggcgtcg agtccttcta cggccggggc tcgcagttcg ccatcgactc 900

ctccaagaag ttcaccgtca ccacgcagtt cctgaccgac aacggcaagg aggacggcgt 960

cctcgtcgag atccgccgct tgtggcacca ggatggcaag ctgatcaaga acaccgctat 1020

ccaggttgag gagaactaca gcacggactc ggtgagcacc gagttctgcg agaagactgc 1080

ttctttcacc atgcagcgcg gtggtctcaa ggcgatgggc gaggctatcg gtcgtggtat 1140

ggtgctggtt ttcagcatct gggcggatga ttcgggtttt atgaactggt tggatgcgga 1200

gggtaatggc ccttgcagcg cgactgaggg cgatccgaag gagattgtca agaataagcc 1260

ggatgctagg gttacgttct caaacattag gattggtgag gttggtagca cgtatgctcc 1320

gggtgggaag tgcggtgtta agagcagggt tgctaggggg cttactgctt cttaaggggg 1380

gtgtgaagag aggaggaggt gttgttgggg gttggagatg ataattgggc gagatggtgt 1440

agagcgggtt ggttggatat gaatacgttg aattggatgt 1480

<210> 38

<211> 440

<212> PRT

<213> Cladorrhinum foecundissimum

<400> 38

Met Val His Lys Phe Ala Leu Leu Thr Gly Leu Ala Ala Ser Leu Ala

1 5 10 15

Ser Ala Gln Gln Ile Gly Thr Val Val Pro Glu Ser His Pro Lys Leu

20 25 30

Pro Thr Lys Arg Cys Thr Leu Ala Gly Gly Cys Gln Thr Val Asp Thr

35 40 45

Ser Ile Val Ile Asp Ala Phe Gln Arg Pro Leu His Lys Ile Gly Asp

50 55 60

Pro Ser Thr Pro Cys Val Val Gly Gly Pro Leu Cys Pro Asp Ala Lys

65 70 75 80

Ser Cys Ala Glu Asn Cys Ala Leu Glu Gly Val Asp Tyr Ala Ser Trp

85 90 95

Gly Ile Lys Thr Glu Gly Asp Ala Leu Thr Leu Asn Gln Trp Met Pro

100 105 110

Asp Pro Ala Asn Pro Gly Gln Tyr Lys Thr Thr Thr Pro Arg Thr Tyr

115 120 125

Leu Val Ala Glu Asp Gly Lys Asn Tyr Glu Asp Val Lys Leu Leu Ala

130 135 140

Lys Glu Ile Ser Phe Asp Ala Asp Val Ser Asn Leu Pro Cys Gly Met

145 150 155 160

Asn Gly Ala Phe Tyr Leu Ser Glu Met Leu Met Asp Gly Gly Arg Gly

165 170 175

Asp Leu Asn Pro Ala Gly Ala Glu Tyr Gly Thr Gly Tyr Cys Asp Ala

180 185 190

Gln Cys Phe Lys Leu Asp Phe Ile Asn Gly Glu Ala Asn Ile Asp Gln

195 200 205

Lys His Gly Ala Cys Cys Asn Glu Met Asp Ile Phe Glu Ser Asn Ser

210 215 220

Arg Ala Lys Thr Phe Val Pro His Pro Cys Asn Ile Thr Gln Val Tyr

225 230 235 240

Lys Cys Glu Gly Glu Asp Glu Cys Gly Gln Pro Val Gly Val Cys Asp

245 250 255

Lys Trp Gly Cys Gly Phe Asn Glu Tyr Lys Trp Gly Val Glu Ser Phe

260 265 270

Tyr Gly Arg Gly Ser Gln Phe Ala Ile Asp Ser Ser Lys Lys Phe Thr

275 280 285

Val Thr Thr Gln Phe Leu Thr Asp Asn Gly Lys Glu Asp Gly Val Leu

290 295 300

Val Glu Ile Arg Arg Leu Trp His Gln Asp Gly Lys Leu Ile Lys Asn

305 310 315 320

Thr Ala Ile Gln Val Glu Glu Asn Tyr Ser Thr Asp Ser Val Ser Thr

325 330 335

Glu Phe Cys Glu Lys Thr Ala Ser Phe Thr Met Gln Arg Gly Gly Leu

340 345 350

Lys Ala Met Gly Glu Ala Ile Gly Arg Gly Met Val Leu Val Phe Ser

355 360 365

Ile Trp Ala Asp Asp Ser Gly Phe Met Asn Trp Leu Asp Ala Glu Gly

370 375 380

Asn Gly Pro Cys Ser Ala Thr Glu Gly Asp Pro Lys Glu Ile Val Lys

385 390 395 400

Asn Lys Pro Asp Ala Arg Val Thr Phe Ser Asn Ile Arg Ile Gly Glu

405 410 415

Val Gly Ser Thr Tyr Ala Pro Gly Gly Lys Cys Gly Val Lys Ser Arg

420 425 430

Val Ala Arg Gly Leu Thr Ala Ser

435 440

<210> 39

<211> 1380

<212> DNA

<213> 里氏木霉(Trichoderma reesei)

<400> 39

atggcgccct cagttacact gccgttgacc acggccatcc tggccattgc ccggctcgtc 60

gccgcccagc aaccgggtac cagcaccccc gaggtccatc ccaagttgac aacctacaag 120

tgtacaaagt ccggggggtg cgtggcccag gacacctcgg tggtccttga ctggaactac 180

cgctggatgc acgacgcaaa ctacaactcg tgcaccgtca acggcggcgt caacaccacg 240

ctctgccctg acgaggcgac ctgtggcaag aactgcttca tcgagggcgt cgactacgcc 300

gcctcgggcg tcacgacctc gggcagcagc ctcaccatga accagtacat gcccagcagc 360

tctggcggct acagcagcgt ctctcctcgg ctgtatctcc tggactctga cggtgagtac 420

gtgatgctga agctcaacgg ccaggagctg agcttcgacg tcgacctctc tgctctgccg 480

tgtggagaga acggctcgct ctacctgtct cagatggacg agaacggggg cgccaaccag 540

tataacacgg ccggtgccaa ctacgggagc ggctactgcg atgctcagtg ccccgtccag 600

acatggagga acggcaccct caacactagc caccagggct tctgctgcaa cgagatggat 660

atcctggagg gcaactcgag ggcgaatgcc ttgacccctc actcttgcac ggccacggcc 720

tgcgactctg ccggttgcgg cttcaacccc tatggcagcg gctacaaaag ctactacggc 780

cccggagata ccgttgacac ctccaagacc ttcaccatca tcacccagtt caacacggac 840

aacggctcgc cctcgggcaa ccttgtgagc atcacccgca agtaccagca aaacggcgtc 900

gacatcccca gcgcccagcc cggcggcgac accatctcgt cctgcccgtc cgcctcagcc 960

tacggcggcc tcgccaccat gggcaaggcc ctgagcagcg gcatggtgct cgtgttcagc 1020

atttggaacg acaacagcca gtacatgaac tggctcgaca gcggcaacgc cggcccctgc 1080

agcagcaccg agggcaaccc atccaacatc ctggccaaca accccaacac gcacgtcgtc 1140

ttctccaaca tccgctgggg agacattggg tctactacga actcgactgc gcccccgccc 1200

ccgcctgcgt ccagcacgac gttttcgact acacggagga gctcgacgac ttcgagcagc 1260

ccgagctgca cgcagactca ctgggggcag tgcggtggca ttgggtacag cgggtgcaag 1320

acgtgcacgt cgggcactac gtgccagtat agcaacgact actactcgca atgcctttag 1380

<210> 40

<211> 459

<212> PRT

<213> 里氏木霉(Trichoderma reesei)

<400> 40

Met Ala Pro Ser Val Thr Leu Pro Leu Thr Thr Ala Ile Leu Ala Ile

1 5 10 15

Ala Arg Leu Val Ala Ala Gln Gln Pro Gly Thr Ser Thr Pro Glu Val

20 25 30

His Pro Lys Leu Thr Thr Tyr Lys Cys Thr Lys Ser Gly Gly Cys Val

35 40 45

Ala Gln Asp Thr Ser Val Val Leu Asp Trp Asn Tyr Arg Trp Met His

50 55 60

Asp Ala Asn Tyr Asn Ser Cys Thr Val Asn Gly Gly Val Asn Thr Thr

65 70 75 80

Leu Cys Pro Asp Glu Ala Thr Cys Gly Lys Asn Cys Phe Ile Glu Gly

85 90 95

Val Asp Tyr Ala Ala Ser Gly Val Thr Thr Ser Gly Ser Ser Leu Thr

100 105 110

Met Asn Gln Tyr Met Pro Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Ser Ser Val Ser

115 120 125

Pro Arg Leu Tyr Leu Leu Asp Ser Asp Gly Glu Tyr Val Met Leu Lys

130 135 140

Leu Asn Gly Gln Glu Leu Ser Phe Asp Val Asp Leu Ser Ala Leu Pro

145 150 155 160

Cys Gly Glu Asn Gly Ser Leu Tyr Leu Ser Gln Met Asp Glu Asn Gly

165 170 175

Gly Ala Asn Gln Tyr Asn Thr Ala Gly Ala Asn Tyr Gly Ser Gly Tyr

180 185 190

Cys Asp Ala Gln Cys Pro Val Gln Thr Trp Arg Asn Gly Thr Leu Asn

195 200 205

Thr Ser His Gln Gly Phe Cys Cys Asn Glu Met Asp Ile Leu Glu Gly

210 215 220

Asn Ser Arg Ala Asn Ala Leu Thr Pro His Ser Cys Thr Ala Thr Ala

225 230 235 240

Cys Asp Ser Ala Gly Cys Gly Phe Asn Pro Tyr Gly Ser Gly Tyr Lys

245 250 255

Ser Tyr Tyr Gly Pro Gly Asp Thr Val Asp Thr Ser Lys Thr Phe Thr

260 265 270

Ile Ile Thr Gln Phe Asn Thr Asp Asn Gly Ser Pro Ser Gly Asn Leu

275 280 285

Val Ser Ile Thr Arg Lys Tyr Gln Gln Asn Gly Val Asp Ile Pro Ser

290 295 300

Ala Gln Pro Gly Gly Asp Thr Ile Ser Ser Cys Pro Ser Ala Ser Ala

305 310 315 320

Tyr Gly Gly Leu Ala Thr Met Gly Lys Ala Leu Ser Ser Gly Met Val

325 330 335

Leu Val Phe Ser Ile Trp Asn Asp Asn Ser Gln Tyr Met Asn Trp Leu

340 345 350

Asp Ser Gly Asn Ala Gly Pro Cys Ser Ser Thr Glu Gly Asn Pro Ser

355 360 365

Asn Ile Leu Ala Asn Asn Pro Asn Thr His Val Val Phe Ser Asn Ile

370 375 380

Arg Trp Gly Asp Ile Gly Ser Thr Thr Asn Ser Thr Ala Pro Pro Pro

385 390 395 400

Pro Pro Ala Ser Ser Thr Thr Phe Ser Thr Thr Arg Arg Ser Ser Thr

405 410 415

Thr Ser Ser Ser Pro Ser Cys Thr Gln Thr His Trp Gly Gln Cys Gly

420 425 430

Gly Ile Gly Tyr Ser Gly Cys Lys Thr Cys Thr Ser Gly Thr Thr Cys

435 440 445

Gln Tyr Ser Asn Asp Tyr Tyr Ser Gln Cys Leu

450 455

<210> 41

<211> 1545

<212> DNA

<213> 里氏木霉(Trichoderma reesei)

<400> 41

atgtatcgga agttggccgt catctcggcc ttcttggcca cagctcgtgc tcagtcggcc 60

tgcactctcc aatcggagac tcacccgcct ctgacatggc agaaatgctc gtctggtggc 120

acgtgcactc aacagacagg ctccgtggtc atcgacgcca actggcgctg gactcacgct 180

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ggcgccaagt acggcacggg gtactgtgac agccagtgtc cccgcgatct gaagttcatc 600

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accaccaaga aattgaccgt tgtcacccag ttcgagacgt cgggtgccat caaccgatac 960

tatgtccaga atggcgtcac tttccagcag cccaacgccg agcttggtag ttactctggc 1020

aacgagctca acgatgatta ctgcacagct gaggaggcag aattcggcgg atcctctttc 1080

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<210> 42

<211> 514

<212> PRT

<213> 里氏木霉(Trichoderma reesei)

<400> 42

Met Tyr Arg Lys Leu Ala Val Ile Ser Ala Phe Leu Ala Thr Ala Arg

1 5 10 15

Ala Gln Ser Ala Cys Thr Leu Gln Ser Glu Thr His Pro Pro Leu Thr

20 25 30

Trp Gln Lys Cys Ser Ser Gly Gly Thr Cys Thr Gln Gln Thr Gly Ser

35 40 45

Val Val Ile Asp Ala Asn Trp Arg Trp Thr His Ala Thr Asn Ser Ser

50 55 60

Thr Asn Cys Tyr Asp Gly Asn Thr Trp Ser Ser Thr Leu Cys Pro Asp

65 70 75 80

Asn Glu Thr Cys Ala Lys Asn Cys Cys Leu Asp Gly Ala Ala Tyr Ala

85 90 95

Ser Thr Tyr Gly Val Thr Thr Ser Gly Asn Ser Leu Ser Ile Gly Phe

100 105 110

Val Thr Gln Ser Ala Gln Lys Asn Val Gly Ala Arg Leu Tyr Leu Met

115 120 125

Ala Ser Asp Thr Thr Tyr Gln Glu Phe Thr Leu Leu Gly Asn Glu Phe

130 135 140

Ser Phe Asp Val Asp Val Ser Gln Leu Pro Cys Gly Leu Asn Gly Ala

145 150 155 160

Leu Tyr Phe Val Ser Met Asp Ala Asp Gly Gly Val Ser Lys Tyr Pro

165 170 175

Thr Asn Thr Ala Gly Ala Lys Tyr Gly Thr Gly Tyr Cys Asp Ser Gln

180 185 190

Cys Pro Arg Asp Leu Lys Phe Ile Asn Gly Gln Ala Asn Val Glu Gly

195 200 205

Trp Glu Pro Ser Ser Asn Asn Ala Asn Thr Gly Ile Gly Gly His Gly

210 215 220

Ser Cys Cys Ser Glu Met Asp Ile Trp Glu Ala Asn Ser Ile Ser Glu

225 230 235 240

Ala Leu Thr Pro His Pro Cys Thr Thr Val Gly Gln Glu Ile Cys Glu

245 250 255

Gly Asp Gly Cys Gly Gly Thr Tyr Ser Asp Asn Arg Tyr Gly Gly Thr

260 265 270

Cys Asp Pro Asp Gly Cys Asp Trp Asn Pro Tyr Arg Leu Gly Asn Thr

275 280 285

Ser Phe Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Phe Thr Leu Asp Thr Thr Lys Lys

290 295 300

Leu Thr Val Val Thr Gln Phe Glu Thr Ser Gly Ala Ile Asn Arg Tyr

305 310 315 320

Tyr Val Gln Asn Gly Val Thr Phe Gln Gln Pro Asn Ala Glu Leu Gly

325 330 335

Ser Tyr Ser Gly Asn Glu Leu Asn Asp Asp Tyr Cys Thr Ala Glu Glu

340 345 350

Ala Glu Phe Gly Gly Ser Ser Phe Ser Asp Lys Gly Gly Leu Thr Gln

355 360 365

Phe Lys Lys Ala Thr Ser Gly Gly Met Val Leu Val Met Ser Leu Trp

370 375 380

Asp Asp Tyr Tyr Ala Asn Met Leu Trp Leu Asp Ser Thr Tyr Pro Thr

385 390 395 400

Asn Glu Thr Ser Ser Thr Pro Gly Ala Val Arg Gly Ser Cys Ser Thr

405 410 415

Ser Ser Gly Val Pro Ala Gln Val Glu Ser Gln Ser Pro Asn Ala Lys

420 425 430

Val Thr Phe Ser Asn Ile Lys Phe Gly Pro Ile Gly Ser Thr Gly Asn

435 440 445

Pro Ser Gly Gly Asn Pro Pro Gly Gly Asn Pro Pro Gly Thr Thr Thr

450 455 460

Thr Arg Arg Pro Ala Thr Thr Thr Gly Ser Ser Pro Gly Pro Thr Gln

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Ser His Tyr Gly Gln Cys Gly Gly Ile Gly Tyr Ser Gly Pro Thr Val

485 490 495

Cys Ala Ser Gly Thr Thr Cys Gln Val Leu Asn Pro Tyr Tyr Ser Gln

500 505 510

Cys Leu

<210> 43

<211> 1611

<212> DNA

<213> 里氏木霉(Trichoderma reesei)

<400> 43

atgattgtcg gcattctcac cacgctggct acgctggcca cactcgcagc tagtgtgcct 60

ctagaggagc ggcaagcttg ctcaagcgtc tggtaattat gtgaaccctc tcaagagacc 120

caaatactga gatatgtcaa ggggccaatg tggtggccag aattggtcgg gtccgacttg 180

ctgtgcttcc ggaagcacat gcgtctactc caacgactat tactcccagt gtcttcccgg 240

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caatgcatat tacgcctctg aagttagcag cctcgctatt cctagcttga ctggagccat 480

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tatgccggac agtttgtggt gtatgacttg ccggatcgcg attgcgctgc ccttgcctcg 720

aatggcgaat actctattgc cgatggtggc gtcgccaaat ataagaacta tatcgacacc 780

attcgtcaaa ttgtcgtgga atattccgat atccggaccc tcctggttat tggtatgagt 840

ttaaacacct gcctcccccc ccccttccct tcctttcccg ccggcatctt gtcgttgtgc 900

taactattgt tccctcttcc agagcctgac tctcttgcca acctggtgac caacctcggt 960

actccaaagt gtgccaatgc tcagtcagcc taccttgagt gcatcaacta cgccgtcaca 1020

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<210> 44

<211> 471

<212> PRT

<213> 里氏木霉(Trichoderma reesei)

<400> 44

Met Ile Val Gly Ile Leu Thr Thr Leu Ala Thr Leu Ala Thr Leu Ala

1 5 10 15

Ala Ser Val Pro Leu Glu Glu Arg Gln Ala Cys Ser Ser Val Trp Gly

20 25 30

Gln Cys Gly Gly Gln Asn Trp Ser Gly Pro Thr Cys Cys Ala Ser Gly

35 40 45

Ser Thr Cys Val Tyr Ser Asn Asp Tyr Tyr Ser Gln Cys Leu Pro Gly

50 55 60

Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Thr Arg Ala Ala Ser Thr Thr Ser Arg

65 70 75 80

Val Ser Pro Thr Thr Ser Arg Ser Ser Ser Ala Thr Pro Pro Pro Gly

85 90 95

Ser Thr Thr Thr Arg Val Pro Pro Val Gly Ser Gly Thr Ala Thr Tyr

100 105 110

Ser Gly Asn Pro Phe Val Gly Val Thr Pro Trp Ala Asn Ala Tyr Tyr

115 120 125

Ala Ser Glu Val Ser Ser Leu Ala Ile Pro Ser Leu Thr Gly Ala Met

130 135 140

Ala Thr Ala Ala Ala Ala Val Ala Lys Val Pro Ser Phe Met Trp Leu

145 150 155 160

Asp Thr Leu Asp Lys Thr Pro Leu Met Glu Gln Thr Leu Ala Asp Ile

165 170 175

Arg Thr Ala Asn Lys Asn Gly Gly Asn Tyr Ala Gly Gln Phe Val Val

180 185 190

Tyr Asp Leu Pro Asp Arg Asp Cys Ala Ala Leu Ala Ser Asn Gly Glu

195 200 205

Tyr Ser Ile Ala Asp Gly Gly Val Ala Lys Tyr Lys Asn Tyr Ile Asp

210 215 220

Thr Ile Arg Gln Ile Val Val Glu Tyr Ser Asp Ile Arg Thr Leu Leu

225 230 235 240

Val Ile Glu Pro Asp Ser Leu Ala Asn Leu Val Thr Asn Leu Gly Thr

245 250 255

Pro Lys Cys Ala Asn Ala Gln Ser Ala Tyr Leu Glu Cys Ile Asn Tyr

260 265 270

Ala Val Thr Gln Leu Asn Leu Pro Asn Val Ala Met Tyr Leu Asp Ala

275 280 285

Gly His Ala Gly Trp Leu Gly Trp Pro Ala Asn Gln Asp Pro Ala Ala

290 295 300

Gln Leu Phe Ala Asn Val Tyr Lys Asn Ala Ser Ser Pro Arg Ala Leu

305 310 315 320

Arg Gly Leu Ala Thr Asn Val Ala Asn Tyr Asn Gly Trp Asn Ile Thr

325 330 335

Ser Pro Pro Ser Tyr Thr Gln Gly Asn Ala Val Tyr Asn Glu Lys Leu

340 345 350

Tyr Ile His Ala Ile Gly Arg Leu Leu Ala Asn His Gly Trp Ser Asn

355 360 365

Ala Phe Phe Ile Thr Asp Gln Gly Arg Ser Gly Lys Gln Pro Thr Gly

370 375 380

Gln Gln Gln Trp Gly Asp Trp Cys Asn Val Ile Gly Thr Gly Phe Gly

385 390 395 400

Ile Arg Pro Ser Ala Asn Thr Gly Asp Ser Leu Leu Asp Ser Phe Val

405 410 415

Trp Val Lys Pro Gly Gly Glu Cys Asp Gly Thr Ser Asp Ser Ser Ala

420 425 430

Pro Arg Phe Asp Ser His Cys Ala Leu Pro Asp Ala Leu Gln Pro Ala

435 440 445

Pro Gln Ala Gly Ala Trp Phe Gln Ala Tyr Phe Val Gln Leu Leu Thr

450 455 460

Asn Ala Asn Pro Ser Phe Leu

465 470

<210> 45

<211> 2046

<212> DNA

<213> 特异腐质霉(Humicola insolens)

<400> 45

gccgtgacct tgcgcgcttt gggtggcggt ggcgagtcgt ggacggtgct tgctggtcgc 60

cggccttccc ggcgatccgc gtgatgagag ggccaccaac ggcgggatga tgctccatgg 120

ggaacttccc catggagaag agagagaaac ttgcggagcc gtgatctggg gaaagatgct 180

ccgtgtctcg tctatataac tcgagtctcc ccgagccctc aacaccacca gctctgatct 240

caccatcccc atcgacaatc acgcaaacac agcagttgtc gggccattcc ttcagacaca 300

tcagtcaccc tccttcaaaa tgcgtaccgc caagttcgcc accctcgccg cccttgtggc 360

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gaacaagtgc accgccggcg gccagtgcca gaccgtccag gcttccatca ctctcgactc 480

caactggcgc tggactcacc aggtgtctgg ctccaccaac tgctacacgg gcaacaagtg 540

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cgactacacc agcacctatg gcatcaccac caacggtgat tccctgagcc tcaagttcgt 660

caccaagggc cagcactcga ccaacgtcgg ctcgcgtacc tacctgatgg acggcgagga 720

caagtatcag agtacgttct atcttcagcc ttctcgcgcc ttgaatcctg gctaacgttt 780

acacttcaca gccttcgagc tcctcggcaa cgagttcacc ttcgatgtcg atgtctccaa 840

catcggctgc ggtctcaacg gcgccctgta cttcgtctcc atggacgccg atggtggtct 900

cagccgctat cctggcaaca aggctggtgc caagtacggt accggctact gcgatgctca 960

gtgcccccgt gacatcaagt tcatcaacgg cgaggccaac attgagggct ggaccggctc 1020

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caactccgag tccaccatcc ccggcgtcga gggcaattcc atcacccagg actggtgcga 1440

ccgccagaag gttgcctttg gcgacattga cgacttcaac cgcaagggcg gcatgaagca 1500

gatgggcaag gccctcgccg gccccatggt cctggtcatg tccatctggg atgaccacgc 1560

ctccaacatg ctctggctcg actcgacctt ccctgtcgat gccgctggca agcccggcgc 1620

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gatgtc 2046

<210> 46

<211> 525

<212> PRT

<213> 特异腐质霉(Humicola insolens)

<400> 46

Met Arg Thr Ala Lys Phe Ala Thr Leu Ala Ala Leu Val Ala Ser Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gln Gln Ala Cys Ser Leu Thr Thr Glu Arg His Pro Ser Leu

20 25 30

Ser Trp Asn Lys Cys Thr Ala Gly Gly Gln Cys Gln Thr Val Gln Ala

35 40 45

Ser Ile Thr Leu Asp Ser Asn Trp Arg Trp Thr His Gln Val Ser Gly

50 55 60

Ser Thr Asn Cys Tyr Thr Gly Asn Lys Trp Asp Thr Ser Ile Cys Thr

65 70 75 80

Asp Ala Lys Ser Cys Ala Gln Asn Cys Cys Val Asp Gly Ala Asp Tyr

85 90 95

Thr Ser Thr Tyr Gly Ile Thr Thr Asn Gly Asp Ser Leu Ser Leu Lys

100 105 110

Phe Val Thr Lys Gly Gln His Ser Thr Asn Val Gly Ser Arg Thr Tyr

115 120 125

Leu Met Asp Gly Glu Asp Lys Tyr Gln Thr Phe Glu Leu Leu Gly Asn

130 135 140

Glu Phe Thr Phe Asp Val Asp Val Ser Asn Ile Gly Cys Gly Leu Asn

145 150 155 160

Gly Ala Leu Tyr Phe Val Ser Met Asp Ala Asp Gly Gly Leu Ser Arg

165 170 175

Tyr Pro Gly Asn Lys Ala Gly Ala Lys Tyr Gly Thr Gly Tyr Cys Asp

180 185 190

Ala Gln Cys Pro Arg Asp Ile Lys Phe Ile Asn Gly Glu Ala Asn Ile

195 200 205

Glu Gly Trp Thr Gly Ser Thr Asn Asp Pro Asn Ala Gly Ala Gly Arg

210 215 220

Tyr Gly Thr Cys Cys Ser Glu Met Asp Ile Trp Glu Ala Asn Asn Met

225 230 235 240

Ala Thr Ala Phe Thr Pro His Pro Cys Thr Ile Ile Gly Gln Ser Arg

245 250 255

Cys Glu Gly Asp Ser Cys Gly Gly Thr Tyr Ser Asn Glu Arg Tyr Ala

260 265 270

Gly Val Cys Asp Pro Asp Gly Cys Asp Phe Asn Ser Tyr Arg Gln Gly

275 280 285

Asn Lys Thr Phe Tyr Gly Lys Gly Met Thr Val Asp Thr Thr Lys Lys

290 295 300

Ile Thr Val Val Thr Gln Phe Leu Lys Asp Ala Asn Gly Asp Leu Gly

305 310 315 320

Glu Ile Lys Arg Phe Tyr Val Gln Asp Gly Lys Ile Ile Pro Asn Ser

325 330 335

Glu Ser Thr Ile Pro Gly Val Glu Gly Asn Ser Ile Thr Gln Asp Trp

340 345 350

Cys Asp Arg Gln Lys Val Ala Phe Gly Asp Ile Asp Asp Phe Asn Arg

355 360 365

Lys Gly Gly Met Lys Gln Met Gly Lys Ala Leu Ala Gly Pro Met Val

370 375 380

Leu Val Met Ser Ile Trp Asp Asp His Ala Ser Asn Met Leu Trp Leu

385 390 395 400

Asp Ser Thr Phe Pro Val Asp Ala Ala Gly Lys Pro Gly Ala Glu Arg

405 410 415

Gly Ala Cys Pro Thr Thr Ser Gly Val Pro Ala Glu Val Glu Ala Glu

420 425 430

Ala Pro Asn Ser Asn Val Val Phe Ser Asn Ile Arg Phe Gly Pro Ile

435 440 445

Gly Ser Thr Val Ala Gly Leu Pro Gly Ala Gly Asn Gly Gly Asn Asn

450 455 460

Gly Gly Asn Pro Pro Pro Pro Thr Thr Thr Thr Ser Ser Ala Pro Ala

465 470 475 480

Thr Thr Thr Thr Ala Ser Ala Gly Pro Lys Ala Gly Arg Trp Gln Gln

485 490 495

Cys Gly Gly Ile Gly Phe Thr Gly Pro Thr Gln Cys Glu Glu Pro Tyr

500 505 510

Ile Cys Thr Lys Leu Asn Asp Trp Tyr Ser Gln Cys Leu

515 520 525

<210> 47

<211> 1812

<212> DNA

<213> 嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)

<400> 47

atggccaaga agcttttcat caccgccgcc cttgcggctg ccgtgttggc ggcccccgtc 60

attgaggagc gccagaactg cggcgctgtg tggtaagaaa gcccggtctg agtttcccat 120

gactttctca tcgagtaatg gcataaggcc caccccttcg actgactgtg agaatcgatc 180

aaatccagga ctcaatgcgg cggcaacggg tggcagggtc ccacatgctg cgcctcgggc 240

tcgacctgcg ttgcgcagaa cgagtggtac tctcagtgcc tgcccaacaa tcaggtgacg 300

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gtgactagca ttcccggcgg tgcgaccacc acggcgagct actctggcaa ccccttctcg 480

ggcgtccggc tcttcgccaa cgactactac aggtccgagg tccacaatct cgccattcct 540

agcatgaccg gtactctggc ggccaaggct tccgccgtcg ccgaagtccc tagcttccag 600

tggctcgacc ggaacgtcac catcgacacc ctgatggtcc agactctgtc ccagatccgg 660

gctgccaata atgccggtgc caatcctccc tatgctggtg agttacatgg cggcgacttg 720

ccttctcgtc ccccaccttt cttgacggga tcggttacct gacctggagg caaaacaaaa 780

ccagcccaac ttgtcgtcta cgacctcccc gaccgtgact gcgccgccgc tgcgtccaac 840

ggcgagtttt cgattgcaaa cggcggcgcc gccaactaca ggagctacat cgacgctatc 900

cgcaagcaca tcattgagta ctcggacatc cggatcatcc tggttatcga gcccgactcg 960

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cacgagttga ccgtgtacgc gctcaagcag ctgaacctgc ccaacgtcgc catgtatctc 1080

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tttgccggca tctacaatga cgccggcaag ccggctgccg tccgcggcct ggccactaac 1200

gtcgccaact acaacgcctg gagtatcgct tcggccccgt cgtacacgtc ccctaaccct 1260

aactacgacg agaagcacta catcgaggcc ttcagcccgc tcctgaacgc ggccggcttc 1320

cccgcacgct tcattgtcga cactggccgc aacggcaaac aacctaccgg tatggttttt 1380

ttcttttttt ttctctgttc ccctccccct tccccttcag ttggcgtcca caaggtctct 1440

tagtcttgct tcttctcgga ccaaccttcc cccaccccca aaacgcaccg cccacaaccg 1500

ttcgactcta tactcttggg aatgggcgcc gaaactgacc gttcgacagg ccaacaacag 1560

tggggtgact ggtgcaatgt caagggcact ggctttggcg tgcgcccgac ggccaacacg 1620

ggccacgacc tggtcgatgc ctttgtctgg gtcaagcccg gcggcgagtc cgacggcaca 1680

agcgacacca gcgccgcccg ctacgactac cactgcggcc tgtccgatgc cctgcagcct 1740

gctccggagg ctggacagtg gttccaggcc tacttcgagc agctgctcac caacgccaac 1800

ccgcccttct aa 1812

<210> 48

<211> 482

<212> PRT

<213> 嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)

<400> 48

Met Ala Lys Lys Leu Phe Ile Thr Ala Ala Leu Ala Ala Ala Val Leu

1 5 10 15

Ala Ala Pro Val Ile Glu Glu Arg Gln Asn Cys Gly Ala Val Trp Thr

20 25 30

Gln Cys Gly Gly Asn Gly Trp Gln Gly Pro Thr Cys Cys Ala Ser Gly

35 40 45

Ser Thr Cys Val Ala Gln Asn Glu Trp Tyr Ser Gln Cys Leu Pro Asn

50 55 60

Asn Gln Val Thr Ser Ser Asn Thr Pro Ser Ser Thr Ser Thr Ser Gln

65 70 75 80

Arg Ser Ser Ser Thr Ser Ser Ser Ser Thr Arg Ser Gly Ser Ser Ser

85 90 95

Ser Ser Thr Thr Thr Pro Pro Pro Val Ser Ser Pro Val Thr Ser Ile

100 105 110

Pro Gly Gly Ala Thr Thr Thr Ala Ser Tyr Ser Gly Asn Pro Phe Ser

115 120 125

Gly Val Arg Leu Phe Ala Asn Asp Tyr Tyr Arg Ser Glu Val His Asn

130 135 140

Leu Ala Ile Pro Ser Met Thr Gly Thr Leu Ala Ala Lys Ala Ser Ala

145 150 155 160

Val Ala Glu Val Pro Ser Phe Gln Trp Leu Asp Arg Asn Val Thr Ile

165 170 175

Asp Thr Leu Met Val Gln Thr Leu Ser Gln Ile Arg Ala Ala Asn Asn

180 185 190

Ala Gly Ala Asn Pro Pro Tyr Ala Ala Gln Leu Val Val Tyr Asp Leu

195 200 205

Pro Asp Arg Asp Cys Ala Ala Ala Ala Ser Asn Gly Glu Phe Ser Ile

210 215 220

Ala Asn Gly Gly Ala Ala Asn Tyr Arg Ser Tyr Ile Asp Ala Ile Arg

225 230 235 240

Lys His Ile Ile Glu Tyr Ser Asp Ile Arg Ile Ile Leu Val Ile Glu

245 250 255

Pro Asp Ser Met Ala Asn Met Val Thr Asn Met Asn Val Ala Lys Cys

260 265 270

Ser Asn Ala Ala Ser Thr Tyr His Glu Leu Thr Val Tyr Ala Leu Lys

275 280 285

Gln Leu Asn Leu Pro Asn Val Ala Met Tyr Leu Asp Ala Gly His Ala

290 295 300

Gly Trp Leu Gly Trp Pro Ala Asn Ile Gln Pro Ala Ala Asp Leu Phe

305 310 315 320

Ala Gly Ile Tyr Asn Asp Ala Gly Lys Pro Ala Ala Val Arg Gly Leu

325 330 335

Ala Thr Asn Val Ala Asn Tyr Asn Ala Trp Ser Ile Ala Ser Ala Pro

340 345 350

Ser Tyr Thr Ser Pro Asn Pro Asn Tyr Asp Glu Lys His Tyr Ile Glu

355 360 365

Ala Phe Ser Pro Leu Leu Asn Ala Ala Gly Phe Pro Ala Arg Phe Ile

370 375 380

Val Asp Thr Gly Arg Asn Gly Lys Gln Pro Thr Gly Gln Gln Gln Trp

385 390 395 400

Gly Asp Trp Cys Asn Val Lys Gly Thr Gly Phe Gly Val Arg Pro Thr

405 410 415

Ala Asn Thr Gly His Asp Leu Val Asp Ala Phe Val Trp Val Lys Pro

420 425 430

Gly Gly Glu Ser Asp Gly Thr Ser Asp Thr Ser Ala Ala Arg Tyr Asp

435 440 445

Tyr His Cys Gly Leu Ser Asp Ala Leu Gln Pro Ala Pro Glu Ala Gly

450 455 460

Gln Trp Phe Gln Ala Tyr Phe Glu Gln Leu Leu Thr Asn Ala Asn Pro

465 470 475 480

Pro Phe

<210> 49

<211> 1725

<212> DNA

<213> 里氏木霉(Trichoderma reesei)

<400> 49

gagggcagct cacctgaaga ggcttgtaag atcaccctct gtgtattgca ccatgattgt 60

cggcattctc accacgctgg ctacgctggc cacactcgca gctagtgtgc ctctagagga 120

gcggcaagct tgctcaagcg tctggggcca atgtggtggc cagaattggt cgggtccgac 180

ttgctgtgct tccggaagca catgcgtcta ctccaacgac tattactccc agtgtcttcc 240

cggcgctgca agctcaagct cgtccacgcg cgccgcgtcg acgacttctc gagtatcccc 300

cacaacatcc cggtcgagct ccgcgacgcc tccacctggt tctactacta ccagagtacc 360

tccagtcgga tcgggaaccg ctacgtattc aggcaaccct tttgttgggg tcactccttg 420

ggccaatgca tattacgcct ctgaagttag cagcctcgct attcctagct tgactggagc 480

catggccact gctgcagcag ctgtcgcaaa ggttccctct tttatgtggc tagatactct 540

tgacaagacc cctctcatgg agcaaacctt ggccgacatc cgcaccgcca acaagaatgg 600

cggtaactat gccggacagt ttgtggtgta tgacttgccg gatcgcgatt gcgctgccct 660

tgcctcgaat ggcgaatact ctattgccga tggtggcgtc gccaaatata agaactatat 720

cgacaccatt cgtcaaattg tcgtggaata ttccgatatc cggaccctcc tggttattga 780

gcctgactct cttgccaacc tggtgaccaa cctcggtact ccaaagtgtg ccaatgctca 840

gtcagcctac cttgagtgca tcaactacgc cgtcacacag ctgaaccttc caaatgttgc 900

gatgtatttg gacgctggcc atgcaggatg gcttggctgg ccggcaaacc aagacccggc 960

cgctcagcta tttgcaaatg tttacaagaa tgcatcgtct ccgagagctc ttcgcggatt 1020

ggcaaccaat gtcgccaact acaacgggtg gaacattacc agccccccat cgtacacgca 1080

aggcaacgct gtctacaacg agaagctgta catccacgct attggacctc ttcttgccaa 1140

tcacggctgg tccaacgcct tcttcatcac tgatcaaggt cgatcgggaa agcagcctac 1200

cggacagcaa cagtggggag actggtgcaa tgtgatcggc accggatttg gtattcgccc 1260

atccgcaaac actggggact cgttgctgga ttcgtttgtc tgggtcaagc caggcggcga 1320

gtgtgacggc accagcgaca gcagtgcgcc acgatttgac tcccactgtg cgctcccaga 1380

tgccttgcaa ccggcgcctc aagctggtgc ttggttccaa gcctactttg tgcagcttct 1440

cacaaacgca aacccatcgt tcctgtaagg ctttcgtgac cgggcttcaa acaatgatgt 1500

gcgatggtgt ggttcccggt tggcggagtc tttgtctact ttggttgtct gtcgcaggtc 1560

ggtagaccgc aaatgagcaa ctgatggatt gttgccagcg atactataat tcacatggat 1620

ggtctttgtc gatcagtagc tagtgagaga gagagaacat ctatccacaa tgtcgagtgt 1680

ctattagaca tactccgaga aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 1725

<210> 50

<211> 471

<212> PRT

<213> 里氏木霉(Trichoderma reesei)

<400> 50

Met Ile Val Gly Ile Leu Thr Thr Leu Ala Thr Leu Ala Thr Leu Ala

1 5 10 15

Ala Ser Val Pro Leu Glu Glu Arg Gln Ala Cys Ser Ser Val Trp Gly

20 25 30

Gln Cys Gly Gly Gln Asn Trp Ser Gly Pro Thr Cys Cys Ala Ser Gly

35 40 45

Ser Thr Cys Val Tyr Ser Asn Asp Tyr Tyr Ser Gln Cys Leu Pro Gly

50 55 60

Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Thr Arg Ala Ala Ser Thr Thr Ser Arg

65 70 75 80

Val Ser Pro Thr Thr Ser Arg Ser Ser Ser Ala Thr Pro Pro Pro Gly

85 90 95

Ser Thr Thr Thr Arg Val Pro Pro Val Gly Ser Gly Thr Ala Thr Tyr

100 105 110

Ser Gly Asn Pro Phe Val Gly Val Thr Pro Trp Ala Asn Ala Tyr Tyr

115 120 125

Ala Ser Glu Val Ser Ser Leu Ala Ile Pro Ser Leu Thr Gly Ala Met

130 135 140

Ala Thr Ala Ala Ala Ala Val Ala Lys Val Pro Ser Phe Met Trp Leu

145 150 155 160

Asp Thr Leu Asp Lys Thr Pro Leu Met Glu Gln Thr Leu Ala Asp Ile

165 170 175

Arg Thr Ala Asn Lys Asn Gly Gly Asn Tyr Ala Gly Gln Phe Val Val

180 185 190

Tyr Asp Leu Pro Asp Arg Asp Cys Ala Ala Leu Ala Ser Asn Gly Glu

195 200 205

Tyr Ser Ile Ala Asp Gly Gly Val Ala Lys Tyr Lys Asn Tyr Ile Asp

210 215 220

Thr Ile Arg Gln Ile Val Val Glu Tyr Ser Asp Ile Arg Thr Leu Leu

225 230 235 240

Val Ile Glu Pro Asp Ser Leu Ala Asn Leu Val Thr Asn Leu Gly Thr

245 250 255

Pro Lys Cys Ala Asn Ala Gln Ser Ala Tyr Leu Glu Cys Ile Asn Tyr

260 265 270

Ala Val Thr Gln Leu Asn Leu Pro Asn Val Ala Met Tyr Leu Asp Ala

275 280 285

Gly His Ala Gly Trp Leu Gly Trp Pro Ala Asn Gln Asp Pro Ala Ala

290 295 300

Gln Leu Phe Ala Asn Val Tyr Lys Asn Ala Ser Ser Pro Arg Ala Leu

305 310 315 320

Arg Gly Leu Ala Thr Asn Val Ala Asn Tyr Asn Gly Trp Asn Ile Thr

325 330 335

Ser Pro Pro Ser Tyr Thr Gln Gly Asn Ala Val Tyr Asn Glu Lys Leu

340 345 350

Tyr Ile His Ala Ile Gly Pro Leu Leu Ala Asn His Gly Trp Ser Asn

355 360 365

Ala Phe Phe Ile Thr Asp Gln Gly Arg Ser Gly Lys Gln Pro Thr Gly

370 375 380

Gln Gln Gln Trp Gly Asp Trp Cys Asn Val Ile Gly Thr Gly Phe Gly

385 390 395 400

Ile Arg Pro Ser Ala Asn Thr Gly Asp Ser Leu Leu Asp Ser Phe Val

405 410 415

Trp Val Lys Pro Gly Gly Glu Cys Asp Gly Thr Ser Asp Ser Ser Ala

420 425 430

Pro Arg Phe Asp Ser His Cys Ala Leu Pro Asp Ala Leu Gln Pro Ala

435 440 445

Pro Gln Ala Gly Ala Trp Phe Gln Ala Tyr Phe Val Gln Leu Leu Thr

450 455 460

Asn Ala Asn Pro Ser Phe Leu

465 470

<210> 51

<211> 1446

<212> DNA

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 51

atggctcaga agctccttct cgccgccgcc cttgcggcca gcgccctcgc tgctcccgtc 60

gtcgaggagc gccagaactg cggttccgtc tggagccaat gcggcggcat tggctggtcc 120

ggcgcgacct gctgcgcttc gggcaatacc tgcgttgagc tgaacccgta ctactcgcag 180

tgcctgccca acagccaggt gactacctcg accagcaaga ccacctccac caccaccagg 240

agcagcacca ccagccacag cagcggtccc accagcacga gcaccaccac caccagcagt 300

cccgtggtca ctaccccgcc gagtacctcc atccccggcg gtgcctcgtc aacggccagc 360

tggtccggca acccgttctc gggcgtgcag atgtgggcca acgactacta cgcctccgag 420

gtctcgtcgc tggccatccc cagcatgacg ggcgccatgg ccaccaaggc ggccgaggtg 480

gccaaggtgc ccagcttcca gtggcttgac cgcaacgtca ccatcgacac gctgttcgcc 540

cacacgctgt cgcagatccg cgcggccaac cagaaaggcg ccaacccgcc ctacgcgggc 600

atcttcgtgg tctacgacct tccggaccgc gactgcgccg ccgccgcgtc caacggcgag 660

ttctccatcg cgaacaacgg ggcggccaac tacaagacgt acatcgacgc gatccggagc 720

ctcgtcatcc agtactcaga catccgcatc atcttcgtca tcgagcccga ctcgctggcc 780

aacatggtga ccaacctgaa cgtggccaag tgcgccaacg ccgagtcgac ctacaaggag 840

ttgaccgtct acgcgctgca gcagctgaac ctgcccaacg tggccatgta cctggacgcc 900

ggccacgccg gctggctcgg ctggcccgcc aacatccagc cggccgccaa cctcttcgcc 960

gagatctaca cgagcgccgg caagccggcc gccgtgcgcg gcctcgccac caacgtggcc 1020

aactacaacg gctggagcct ggccacgccg ccctcgtaca cccagggcga ccccaactac 1080

gacgagagcc actacgtcca ggccctcgcc ccgctgctca ccgccaacgg cttccccgcc 1140

cacttcatca ccgacaccgg ccgcaacggc aagcagccga ccggacaacg gcaatgggga 1200

gactggtgca acgttatcgg aactggcttc ggcgtgcgcc cgacgacaaa caccggcctc 1260

gacatcgagg acgccttcgt ctgggtcaag cccggcggcg agtgcgacgg cacgagcaac 1320

acgacctctc cccgctacga ctaccactgc ggcctgtcgg acgcgctgca gcctgctccg 1380

gaggccggca cttggttcca ggcctacttc gagcagctcc tgaccaacgc caacccgccc 1440

ttttaa 1446

<210> 52

<211> 481

<212> PRT

<213> 土生梭孢霉(Thielavia terrestris)

<400> 52

Met Ala Gln Lys Leu Leu Leu Ala Ala Ala Leu Ala Ala Ser Ala Leu

1 5 10 15

Ala Ala Pro Val Val Glu Glu Arg Gln Asn Cys Gly Ser Val Trp Ser

20 25 30

Gln Cys Gly Gly Ile Gly Trp Ser Gly Ala Thr Cys Cys Ala Ser Gly

35 40 45

Asn Thr Cys Val Glu Leu Asn Pro Tyr Tyr Ser Gln Cys Leu Pro Asn

50 55 60

Ser Gln Val Thr Thr Ser Thr Ser Lys Thr Thr Ser Thr Thr Thr Arg

65 70 75 80

Ser Ser Thr Thr Ser His Ser Ser Gly Pro Thr Ser Thr Ser Thr Thr

85 90 95

Thr Thr Ser Ser Pro Val Val Thr Thr Pro Pro Ser Thr Ser Ile Pro

100 105 110

Gly Gly Ala Ser Ser Thr Ala Ser Trp Ser Gly Asn Pro Phe Ser Gly

115 120 125

Val Gln Met Trp Ala Asn Asp Tyr Tyr Ala Ser Glu Val Ser Ser Leu

130 135 140

Ala Ile Pro Ser Met Thr Gly Ala Met Ala Thr Lys Ala Ala Glu Val

145 150 155 160

Ala Lys Val Pro Ser Phe Gln Trp Leu Asp Arg Asn Val Thr Ile Asp

165 170 175

Thr Leu Phe Ala His Thr Leu Ser Gln Ile Arg Ala Ala Asn Gln Lys

180 185 190

Gly Ala Asn Pro Pro Tyr Ala Gly Ile Phe Val Val Tyr Asp Leu Pro

195 200 205

Asp Arg Asp Cys Ala Ala Ala Ala Ser Asn Gly Glu Phe Ser Ile Ala

210 215 220

Asn Asn Gly Ala Ala Asn Tyr Lys Thr Tyr Ile Asp Ala Ile Arg Ser

225 230 235 240

Leu Val Ile Gln Tyr Ser Asp Ile Arg Ile Ile Phe Val Ile Glu Pro

245 250 255

Asp Ser Leu Ala Asn Met Val Thr Asn Leu Asn Val Ala Lys Cys Ala

260 265 270

Asn Ala Glu Ser Thr Tyr Lys Glu Leu Thr Val Tyr Ala Leu Gln Gln

275 280 285

Leu Asn Leu Pro Asn Val Ala Met Tyr Leu Asp Ala Gly His Ala Gly

290 295 300

Trp Leu Gly Trp Pro Ala Asn Ile Gln Pro Ala Ala Asn Leu Phe Ala

305 310 315 320

Glu Ile Tyr Thr Ser Ala Gly Lys Pro Ala Ala Val Arg Gly Leu Ala

325 330 335

Thr Asn Val Ala Asn Tyr Asn Gly Trp Ser Leu Ala Thr Pro Pro Ser

340 345 350

Tyr Thr Gln Gly Asp Pro Asn Tyr Asp Glu Ser His Tyr Val Gln Ala

355 360 365

Leu Ala Pro Leu Leu Thr Ala Asn Gly Phe Pro Ala His Phe Ile Thr

370 375 380

Asp Thr Gly Arg Asn Gly Lys Gln Pro Thr Gly Gln Arg Gln Trp Gly

385 390 395 400

Asp Trp Cys Asn Val Ile Gly Thr Gly Phe Gly Val Arg Pro Thr Thr

405 410 415

Asn Thr Gly Leu Asp Ile Glu Asp Ala Phe Val Trp Val Lys Pro Gly

420 425 430

Gly Glu Cys Asp Gly Thr Ser Asn Thr Thr Ser Pro Arg Tyr Asp Tyr

435 440 445

His Cys Gly Leu Ser Asp Ala Leu Gln Pro Ala Pro Glu Ala Gly Thr

450 455 460

Trp Phe Gln Ala Tyr Phe Glu Gln Leu Leu Thr Asn Ala Asn Pro Pro

465 470 475 480

Phe

<210> 53

<211> 1593

<212> DNA

<213> 嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)

<400> 53

atgatgtaca agaagttcgc cgctctcgcc gccctcgtgg ctggcgccgc cgcccagcag 60

gcttgctccc tcaccactga gacccacccc agactcactt ggaagcgctg cacctctggc 120

ggcaactgct cgaccgtgaa cggcgccgtc accatcgatg ccaactggcg ctggactcac 180

actgtttccg gctcgaccaa ctgctacacc ggcaacgagt gggatacctc catctgctct 240

gatggcaaga gctgcgccca gacctgctgc gtcgacggcg ctgactactc ttcgacctat 300

ggtatcacca ccagcggtga ctccctgaac ctcaagttcg tcaccaagca ccagcacggc 360

accaatgtcg gctctcgtgt ctacctgatg gagaacgaca ccaagtacca gatgttcgag 420

ctcctcggca acgagttcac cttcgatgtc gatgtctcta acctgggctg cggtctcaac 480

ggcgccctct acttcgtctc catggacgct gatggtggta tgagcaagta ctctggcaac 540

aaggctggcg ccaagtacgg taccggctac tgcgatgctc agtgcccgcg cgaccttaag 600

ttcatcaacg gcgaggccaa cattgagaac tggacccctt cgaccaatga tgccaacgcc 660

ggtttcggcc gctatggcag ctgctgctct gagatggata tctgggatgc caacaacatg 720

gctactgcct tcactcctca cccttgcacc attatcggcc agagccgctg cgagggcaac 780

agctgcggtg gcacctacag ctctgagcgc tatgctggtg tttgcgatcc tgatggctgc 840

gacttcaacg cctaccgcca gggcgacaag accttctacg gcaagggcat gaccgtcgac 900

accaccaaga agatgaccgt cgtcacccag ttccacaaga actcggctgg cgtcctcagc 960

gagatcaagc gcttctacgt tcaggacggc aagatcattg ccaacgccga gtccaagatc 1020

cccggcaacc ccggcaactc catcacccag gagtggtgcg atgcccagaa ggtcgccttc 1080

ggtgacatcg atgacttcaa ccgcaagggc ggtatggctc agatgagcaa ggccctcgag 1140

ggccctatgg tcctggtcat gtccgtctgg gatgaccact acgccaacat gctctggctc 1200

gactcgacct accccattga caaggccggc acccccggcg ccgagcgcgg tgcttgcccg 1260

accacctccg gtgtccctgc cgagattgag gcccaggtcc ccaacagcaa cgttatcttc 1320

tccaacatcc gcttcggccc catcggctcg accgtccctg gcctcgacgg cagcaccccc 1380

agcaacccga ccgccaccgt tgctcctccc acttctacca ccaccagcgt gagaagcagc 1440

actactcaga tttccacccc gactagccag cccggcggct gcaccaccca gaagtggggc 1500

cagtgcggtg gtatcggcta caccggctgc actaactgcg ttgctggcac tacctgcact 1560

gagctcaacc cctggtacag ccagtgcctg taa 1593

<210> 54

<211> 530

<212> PRT

<213> 嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)

<400> 54

Met Met Tyr Lys Lys Phe Ala Ala Leu Ala Ala Leu Val Ala Gly Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gln Gln Ala Cys Ser Leu Thr Thr Glu Thr His Pro Arg Leu

20 25 30

Thr Trp Lys Arg Cys Thr Ser Gly Gly Asn Cys Ser Thr Val Asn Gly

35 40 45

Ala Val Thr Ile Asp Ala Asn Trp Arg Trp Thr His Thr Val Ser Gly

50 55 60

Ser Thr Asn Cys Tyr Thr Gly Asn Glu Trp Asp Thr Ser Ile Cys Ser

65 70 75 80

Asp Gly Lys Ser Cys Ala Gln Thr Cys Cys Val Asp Gly Ala Asp Tyr

85 90 95

Ser Ser Thr Tyr Gly Ile Thr Thr Ser Gly Asp Ser Leu Asn Leu Lys

100 105 110

Phe Val Thr Lys His Gln His Gly Thr Asn Val Gly Ser Arg Val Tyr

115 120 125

Leu Met Glu Asn Asp Thr Lys Tyr Gln Met Phe Glu Leu Leu Gly Asn

130 135 140

Glu Phe Thr Phe Asp Val Asp Val Ser Asn Leu Gly Cys Gly Leu Asn

145 150 155 160

Gly Ala Leu Tyr Phe Val Ser Met Asp Ala Asp Gly Gly Met Ser Lys

165 170 175

Tyr Ser Gly Asn Lys Ala Gly Ala Lys Tyr Gly Thr Gly Tyr Cys Asp

180 185 190

Ala Gln Cys Pro Arg Asp Leu Lys Phe Ile Asn Gly Glu Ala Asn Ile

195 200 205

Glu Asn Trp Thr Pro Ser Thr Asn Asp Ala Asn Ala Gly Phe Gly Arg

210 215 220

Tyr Gly Ser Cys Cys Ser Glu Met Asp Ile Trp Asp Ala Asn Asn Met

225 230 235 240

Ala Thr Ala Phe Thr Pro His Pro Cys Thr Ile Ile Gly Gln Ser Arg

245 250 255

Cys Glu Gly Asn Ser Cys Gly Gly Thr Tyr Ser Ser Glu Arg Tyr Ala

260 265 270

Gly Val Cys Asp Pro Asp Gly Cys Asp Phe Asn Ala Tyr Arg Gln Gly

275 280 285

Asp Lys Thr Phe Tyr Gly Lys Gly Met Thr Val Asp Thr Thr Lys Lys

290 295 300

Met Thr Val Val Thr Gln Phe His Lys Asn Ser Ala Gly Val Leu Ser

305 310 315 320

Glu Ile Lys Arg Phe Tyr Val Gln Asp Gly Lys Ile Ile Ala Asn Ala

325 330 335

Glu Ser Lys Ile Pro Gly Asn Pro Gly Asn Ser Ile Thr Gln Glu Trp

340 345 350

Cys Asp Ala Gln Lys Val Ala Phe Gly Asp Ile Asp Asp Phe Asn Arg

355 360 365

Lys Gly Gly Met Ala Gln Met Ser Lys Ala Leu Glu Gly Pro Met Val

370 375 380

Leu Val Met Ser Val Trp Asp Asp His Tyr Ala Asn Met Leu Trp Leu

385 390 395 400

Asp Ser Thr Tyr Pro Ile Asp Lys Ala Gly Thr Pro Gly Ala Glu Arg

405 410 415

Gly Ala Cys Pro Thr Thr Ser Gly Val Pro Ala Glu Ile Glu Ala Gln

420 425 430

Val Pro Asn Ser Asn Val Ile Phe Ser Asn Ile Arg Phe Gly Pro Ile

435 440 445

Gly Ser Thr Val Pro Gly Leu Asp Gly Ser Thr Pro Ser Asn Pro Thr

450 455 460

Ala Thr Val Ala Pro Pro Thr Ser Thr Thr Thr Ser Val Arg Ser Ser

465 470 475 480

Thr Thr Gln Ile Ser Thr Pro Thr Ser Gln Pro Gly Gly Cys Thr Thr

485 490 495

Gln Lys Trp Gly Gln Cys Gly Gly Ile Gly Tyr Thr Gly Cys Thr Asn

500 505 510

Cys Val Ala Gly Thr Thr Cys Thr Glu Leu Asn Pro Trp Tyr Ser Gln

515 520 525

Cys Leu

530

<210> 55

<211> 1434

<212> DNA

<213> 嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)

<400> 55

atggctaagc agctgctgct cactgccgct cttgcggcca cttcgctggc tgcccctctc 60

cttgaggagc gccagagctg ctcctccgtc tggggtcaat gcggtggcat caattacaac 120

ggcccgacct gctgccagtc cggcagtgtt tgcacttacc tgaatgactg gtacagccag 180

tgcattcccg gtcaggctca gcccggcacg actagcacca cggctcggac caccagcacc 240

agcaccacca gcacttcgtc ggtccgcccg accacctcga atacccctgt gacgactgct 300

cccccgacga ccaccatccc gggcggcgcc tcgagcacgg ccagctacaa cggcaacccg 360

ttttcgggtg ttcaactttg ggccaacacc tactactcgt ccgaggtgca cactttggcc 420

atccccagct tgtctcctga gctggctgcc aaggccgcca aggtcgctga ggttcccagc 480

ttccagtggc tcgaccgcaa tgtgactgtt gacactctct tctccggcac tcttgccgaa 540

atccgcgccg ccaaccagcg cggtgccaac ccgccttatg ccggcatttt cgtggtttat 600

gacttaccag accgtgattg cgcggctgct gcttcgaacg gcgagtggtc tatcgccaac 660

aatggtgcca acaactacaa gcgctacatc gaccggatcc gtgagctcct tatccagtac 720

tccgatatcc gcactattct ggtcattgaa cctgattccc tggccaacat ggtcaccaac 780

atgaacgtcc agaagtgctc gaacgctgcc tccacttaca aggagcttac tgtctatgcc 840

ctcaaacagc tcaatcttcc tcacgttgcc atgtacatgg atgctggcca cgctggctgg 900

cttggctggc ccgccaacat ccagcctgct gctgagctct ttgctcaaat ctaccgcgac 960

gctggcaggc ccgctgctgt ccgcggtctt gcgaccaacg ttgccaacta caatgcttgg 1020

tcgatcgcca gccctccgtc ctacacctct cctaacccga actacgacga gaagcactat 1080

attgaggcct ttgctcctct tctccgcaac cagggcttcg acgcaaagtt catcgtcgac 1140

accggccgta acggcaagca gcccactggc cagcttgaat ggggtcactg gtgcaatgtc 1200

aagggaactg gcttcggtgt gcgccctact gctaacactg ggcatgaact tgttgatgct 1260

ttcgtgtggg tcaagcccgg tggcgagtcc gacggcacca gtgcggacac cagcgctgct 1320

cgttatgact atcactgcgg cctttccgac gcactgactc cggcgcctga ggctggccaa 1380

tggttccagg cttatttcga acagctgctc atcaatgcca accctccgct ctga 1434

<210> 56

<211> 477

<212> PRT

<213> 嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)

<400> 56

Met Ala Lys Gln Leu Leu Leu Thr Ala Ala Leu Ala Ala Thr Ser Leu

1 5 10 15

Ala Ala Pro Leu Leu Glu Glu Arg Gln Ser Cys Ser Ser Val Trp Gly

20 25 30

Gln Cys Gly Gly Ile Asn Tyr Asn Gly Pro Thr Cys Cys Gln Ser Gly

35 40 45

Ser Val Cys Thr Tyr Leu Asn Asp Trp Tyr Ser Gln Cys Ile Pro Gly

50 55 60

Gln Ala Gln Pro Gly Thr Thr Ser Thr Thr Ala Arg Thr Thr Ser Thr

65 70 75 80

Ser Thr Thr Ser Thr Ser Ser Val Arg Pro Thr Thr Ser Asn Thr Pro

85 90 95

Val Thr Thr Ala Pro Pro Thr Thr Thr Ile Pro Gly Gly Ala Ser Ser

100 105 110

Thr Ala Ser Tyr Asn Gly Asn Pro Phe Ser Gly Val Gln Leu Trp Ala

115 120 125

Asn Thr Tyr Tyr Ser Ser Glu Val His Thr Leu Ala Ile Pro Ser Leu

130 135 140

Ser Pro Glu Leu Ala Ala Lys Ala Ala Lys Val Ala Glu Val Pro Ser

145 150 155 160

Phe Gln Trp Leu Asp Arg Asn Val Thr Val Asp Thr Leu Phe Ser Gly

165 170 175

Thr Leu Ala Glu Ile Arg Ala Ala Asn Gln Arg Gly Ala Asn Pro Pro

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Tyr Ala Gly Ile Phe Val Val Tyr Asp Leu Pro Asp Arg Asp Cys Ala

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Ala Ala Ala Ser Asn Gly Glu Trp Ser Ile Ala Asn Asn Gly Ala Asn

210 215 220

Asn Tyr Lys Arg Tyr Ile Asp Arg Ile Arg Glu Leu Leu Ile Gln Tyr

225 230 235 240

Ser Asp Ile Arg Thr Ile Leu Val Ile Glu Pro Asp Ser Leu Ala Asn

245 250 255

Met Val Thr Asn Met Asn Val Gln Lys Cys Ser Asn Ala Ala Ser Thr

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Tyr Lys Glu Leu Thr Val Tyr Ala Leu Lys Gln Leu Asn Leu Pro His

275 280 285

Val Ala Met Tyr Met Asp Ala Gly His Ala Gly Trp Leu Gly Trp Pro

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Ala Asn Ile Gln Pro Ala Ala Glu Leu Phe Ala Gln Ile Tyr Arg Asp

305 310 315 320

Ala Gly Arg Pro Ala Ala Val Arg Gly Leu Ala Thr Asn Val Ala Asn

325 330 335

Tyr Asn Ala Trp Ser Ile Ala Ser Pro Pro Ser Tyr Thr Ser Pro Asn

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Pro Asn Tyr Asp Glu Lys His Tyr Ile Glu Ala Phe Ala Pro Leu Leu

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Gly Lys Gln Pro Thr Gly Gln Leu Glu Trp Gly His Trp Cys Asn Val

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Leu Val Asp Ala Phe Val Trp Val Lys Pro Gly Gly Glu Ser Asp Gly

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Thr Ser Ala Asp Thr Ser Ala Ala Arg Tyr Asp Tyr His Cys Gly Leu

435 440 445

Ser Asp Ala Leu Thr Pro Ala Pro Glu Ala Gly Gln Trp Phe Gln Ala

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Tyr Phe Glu Gln Leu Leu Ile Asn Ala Asn Pro Pro Leu

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<210> 57

<211> 2586

<212> DNA

<213> 米曲霉(Aspergillus oryzae)

<400> 57

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<212> PRT

<213> 米曲霉(Aspergillus oryzae)

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Gly Ile Arg Phe Ser Asp Tyr Asn Ser Ala Phe Pro Ala Gly Val Asn

100 105 110

Val Ala Ala Thr Trp Asp Lys Thr Leu Ala Tyr Leu Arg Gly Gln Ala

115 120 125

Met Gly Glu Glu Phe Ser Asp Lys Gly Ile Asp Val Gln Leu Gly Pro

130 135 140

Ala Ala Gly Pro Leu Gly Ala His Pro Asp Gly Gly Arg Asn Trp Glu

145 150 155 160

Gly Phe Ser Pro Asp Pro Ala Leu Thr Gly Val Leu Phe Ala Glu Thr

165 170 175

Ile Lys Gly Ile Gln Asp Ala Gly Val Ile Ala Thr Ala Lys His Tyr

180 185 190

Ile Met Asn Glu Gln Glu His Phe Arg Gln Gln Pro Glu Ala Ala Gly

195 200 205

Tyr Gly Phe Asn Val Ser Asp Ser Leu Ser Ser Asn Val Asp Asp Lys

210 215 220

Thr Met His Glu Leu Tyr Leu Trp Pro Phe Ala Asp Ala Val Arg Ala

225 230 235 240

Gly Val Gly Ala Val Met Cys Ser Tyr Asn Gln Ile Asn Asn Ser Tyr

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Pro Pro Asn Phe Ser Ser Trp Thr Arg Asp Glu Tyr Gly Phe Ala His

355 360 365

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Ala Asn Gly Cys Asp Asp Arg Gly Cys Asp Asn Gly Thr Leu Ala Met

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Val Thr Asp Ser Trp Ala Leu Asp Lys Ile Ala Ala Ala Ala Arg Gln

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<210> 59

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<212> DNA

<213> 烟曲霉(Aspergillus fumigatus)

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<210> 60

<211> 863

<212> PRT

<213> 烟曲霉(Aspergillus fumigatus)

<400> 60

Met Arg Phe Gly Trp Leu Glu Val Ala Ala Leu Thr Ala Ala Ser Val

1 5 10 15

Ala Asn Ala Gln Glu Leu Ala Phe Ser Pro Pro Phe Tyr Pro Ser Pro

20 25 30

Trp Ala Asp Gly Gln Gly Glu Trp Ala Asp Ala His Arg Arg Ala Val

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Glu Ile Val Ser Gln Met Thr Leu Ala Glu Lys Val Asn Leu Thr Thr

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Gly Phe Ser Pro Asp Pro Val Leu Thr Gly Val Leu Phe Ala Glu Thr

165 170 175

Ile Lys Gly Ile Gln Asp Ala Gly Val Ile Ala Thr Ala Lys His Tyr

180 185 190

Ile Leu Asn Glu Gln Glu His Phe Arg Gln Val Gly Glu Ala Gln Gly

195 200 205

Tyr Gly Tyr Asn Ile Thr Glu Thr Ile Ser Ser Asn Val Asp Asp Lys

210 215 220

Thr Met His Glu Leu Tyr Leu Trp Pro Phe Ala Asp Ala Val Arg Ala

225 230 235 240

Gly Val Gly Ala Val Met Cys Ser Tyr Asn Gln Ile Asn Asn Ser Tyr

245 250 255

Gly Cys Gln Asn Ser Gln Thr Leu Asn Lys Leu Leu Lys Ala Glu Leu

260 265 270

Gly Phe Gln Gly Phe Val Met Ser Asp Trp Ser Ala His His Ser Gly

275 280 285

Val Gly Ala Ala Leu Ala Gly Leu Asp Met Ser Met Pro Gly Asp Ile

290 295 300

Ser Phe Asp Asp Gly Leu Ser Phe Trp Gly Thr Asn Leu Thr Val Ser

305 310 315 320

Val Leu Asn Gly Thr Val Pro Ala Trp Arg Val Asp Asp Met Ala Val

325 330 335

Arg Ile Met Thr Ala Tyr Tyr Lys Val Gly Arg Asp Arg Leu Arg Ile

340 345 350

Pro Pro Asn Phe Ser Ser Trp Thr Arg Asp Glu Tyr Gly Trp Glu His

355 360 365

Ser Ala Val Ser Glu Gly Ala Trp Thr Lys Val Asn Asp Phe Val Asn

370 375 380

Val Gln Arg Ser His Ser Gln Ile Ile Arg Glu Ile Gly Ala Ala Ser

385 390 395 400

Thr Val Leu Leu Lys Asn Thr Gly Ala Leu Pro Leu Thr Gly Lys Glu

405 410 415

Val Lys Val Gly Val Leu Gly Glu Asp Ala Gly Ser Asn Pro Trp Gly

420 425 430

Ala Asn Gly Cys Pro Asp Arg Gly Cys Asp Asn Gly Thr Leu Ala Met

435 440 445

Ala Trp Gly Ser Gly Thr Ala Asn Phe Pro Tyr Leu Val Thr Pro Glu

450 455 460

Gln Ala Ile Gln Arg Glu Val Ile Ser Asn Gly Gly Asn Val Phe Ala

465 470 475 480

Val Thr Asp Asn Gly Ala Leu Ser Gln Met Ala Asp Val Ala Ser Gln

485 490 495

Ser Ser Val Ser Leu Val Phe Val Asn Ala Asp Ser Gly Glu Gly Phe

500 505 510

Ile Ser Val Asp Gly Asn Glu Gly Asp Arg Lys Asn Leu Thr Leu Trp

515 520 525

Lys Asn Gly Glu Ala Val Ile Asp Thr Val Val Ser His Cys Asn Asn

530 535 540

Thr Ile Val Val Ile His Ser Val Gly Pro Val Leu Ile Asp Arg Trp

545 550 555 560

Tyr Asp Asn Pro Asn Val Thr Ala Ile Ile Trp Ala Gly Leu Pro Gly

565 570 575

Gln Glu Ser Gly Asn Ser Leu Val Asp Val Leu Tyr Gly Arg Val Asn

580 585 590

Pro Ser Ala Lys Thr Pro Phe Thr Trp Gly Lys Thr Arg Glu Ser Tyr

595 600 605

Gly Ala Pro Leu Leu Thr Glu Pro Asn Asn Gly Asn Gly Ala Pro Gln

610 615 620

Asp Asp Phe Asn Glu Gly Val Phe Ile Asp Tyr Arg His Phe Asp Lys

625 630 635 640

Arg Asn Glu Thr Pro Ile Tyr Glu Phe Gly His Gly Leu Ser Tyr Thr

645 650 655

Thr Phe Gly Tyr Ser His Leu Arg Val Gln Ala Leu Asn Ser Ser Ser

660 665 670

Ser Ala Tyr Val Pro Thr Ser Gly Glu Thr Lys Pro Ala Pro Thr Tyr

675 680 685

Gly Glu Ile Gly Ser Ala Ala Asp Tyr Leu Tyr Pro Glu Gly Leu Lys

690 695 700

Arg Ile Thr Lys Phe Ile Tyr Pro Trp Leu Asn Ser Thr Asp Leu Glu

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Asp Ser Ser Asp Asp Pro Asn Tyr Gly Trp Glu Asp Ser Glu Tyr Ile

725 730 735

Pro Glu Gly Ala Arg Asp Gly Ser Pro Gln Pro Leu Leu Lys Ala Gly

740 745 750

Gly Ala Pro Gly Gly Asn Pro Thr Leu Tyr Gln Asp Leu Val Arg Val

755 760 765

Ser Ala Thr Ile Thr Asn Thr Gly Asn Val Ala Gly Tyr Glu Val Pro

770 775 780

Gln Leu Tyr Val Ser Leu Gly Gly Pro Asn Glu Pro Arg Val Val Leu

785 790 795 800

Arg Lys Phe Asp Arg Ile Phe Leu Ala Pro Gly Glu Gln Lys Val Trp

805 810 815

Thr Thr Thr Leu Asn Arg Arg Asp Leu Ala Asn Trp Asp Val Glu Ala

820 825 830

Gln Asp Trp Val Ile Thr Lys Tyr Pro Lys Lys Val His Val Gly Ser

835 840 845

Ser Ser Arg Lys Leu Pro Leu Arg Ala Pro Leu Pro Arg Val Tyr

850 855 860

<210> 61

<211> 2800

<212> DNA

<213> 巴西青霉(Penicillium brasilianum)

<400> 61

tgaaaatgca gggttctaca atctttctgg ctttcgcctc atgggcgagc caggttgctg 60

ccattgcgca gcccatacag aagcacgagg tttgttttat cttgctcatg gacgtgcttt 120

gacttgacta attgttttac atacagcccg gatttctgca cgggccccaa gccatagaat 180

cgttctcaga accgttctac ccgtcgccct ggatgaatcc tcacgccgag ggctgggagg 240

ccgcatatca gaaagctcaa gattttgtct cgcaactcac tatcttggag aaaataaatc 300

tgaccaccgg tgttgggtaa gtctctccga ctgcttctgg gtcacggtgc gacgagccac 360

tgactttttg aagctgggaa aatgggccgt gtgtaggaaa cactggatca attcctcgtc 420

tcggattcaa aggattttgt acccaggatt caccacaggg tgttcggttc gcagattatt 480

cctccgcttt cacatctagc caaatggccg ccgcaacatt tgaccgctca attctttatc 540

aacgaggcca agccatggca caggaacaca aggctaaggg tatcacaatt caattgggcc 600

ctgttgccgg ccctctcggt cgcatccccg agggcggccg caactgggaa ggattctccc 660

ctgatcctgt cttgactggt atagccatgg ctgagacaat taagggcatg caggatactg 720

gagtgattgc ttgcgctaaa cattatattg gaaacgagca ggagcacttc cgtcaagtgg 780

gtgaagctgc gggtcacgga tacactattt ccgatactat ttcatctaat attgacgacc 840

gtgctatgca tgagctatac ttgtggccat ttgctgatgc cgttcgcgct ggtgtgggtt 900

ctttcatgtg ctcatactct cagatcaaca actcctacgg atgccaaaac agtcagaccc 960

tcaacaagct cctcaagagc gaattgggct tccaaggctt tgtcatgagc gattggggtg 1020

cccatcactc tggagtgtca tcggcgctag ctggacttga tatgagcatg ccgggtgata 1080

ccgaatttga ttctggcttg agcttctggg gctctaacct caccattgca attctgaacg 1140

gcacggttcc cgaatggcgc ctggatgaca tggcgatgcg aattatggct gcatacttca 1200

aagttggcct tactattgag gatcaaccag atgtcaactt caatgcctgg acccatgaca 1260

cctacggata taaatacgct tatagcaagg aagattacga gcaggtcaac tggcatgtcg 1320

atgttcgcag cgaccacaat aagctcattc gcgagactgc cgcgaagggt acagttctgc 1380

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acactgctat tcagtcaaag gtcctcgaat acgggggtcg atacgagagt atttttgata 1620

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ttgcaaatgc cgattccggt gaaggctaca tcactgtcga caacaactgg ggtgaccgca 1740

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acccgaacat cacagctatt gtctgggcag ggatgccagg cgaagaatct ggcaatgctc 1920

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aaagtcgaga ggactatggc actgatataa tgtacgagcc caacaacggc cagcgtgcgc 2040

ctcagcagga tttcaccgag agcatctacc tcgactaccg ccatttcgac aaagctggta 2100

tcgagccaat ttacgagttt ggattcggcc tctcctatac caccttcgaa tactctgacc 2160

tccgtgttgt gaagaagtat gttcaaccat acagtcccac gaccggcacc ggtgctcaag 2220

caccttccat cggacagcca cctagccaga acctggatac ctacaagttc cctgctacat 2280

acaagtacat caaaaccttc atttatccct acctgaacag cactgtctcc ctccgcgctg 2340

cttccaagga tcccgaatac ggtcgtacag actttatccc accccacgcg cgtgatggct 2400

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acgacgaact ttacgaggtc actgcacaga tcaaaaacac tggcgacgtg gccggcgacg 2520

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<210> 62

<211> 878

<212> PRT

<213> 巴西青霉(Penicillium brasilianum)

<400> 62

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Val Ala Ala Ile Ala Gln Pro Ile Gln Lys His Glu Pro Gly Phe Leu

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His Gly Pro Gln Ala Ile Glu Ser Phe Ser Glu Pro Phe Tyr Pro Ser

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Pro Trp Met Asn Pro His Ala Glu Gly Trp Glu Ala Ala Tyr Gln Lys

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Thr Thr Gly Val Gly Trp Glu Asn Gly Pro Cys Val Gly Asn Thr Gly

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Gln Gly Val Arg Phe Ala Asp Tyr Ser Ser Ala Phe Thr Ser Ser Gln

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Met Ala Ala Ala Thr Phe Asp Arg Ser Ile Leu Tyr Gln Arg Gly Gln

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Ala Met Ala Gln Glu His Lys Ala Lys Gly Ile Thr Ile Gln Leu Gly

145 150 155 160

Pro Val Ala Gly Pro Leu Gly Arg Ile Pro Glu Gly Gly Arg Asn Trp

165 170 175

Glu Gly Phe Ser Pro Asp Pro Val Leu Thr Gly Ile Ala Met Ala Glu

180 185 190

Thr Ile Lys Gly Met Gln Asp Thr Gly Val Ile Ala Cys Ala Lys His

195 200 205

Tyr Ile Gly Asn Glu Gln Glu His Phe Arg Gln Val Gly Glu Ala Ala

210 215 220

Gly His Gly Tyr Thr Ile Ser Asp Thr Ile Ser Ser Asn Ile Asp Asp

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Arg Ala Met His Glu Leu Tyr Leu Trp Pro Phe Ala Asp Ala Val Arg

245 250 255

Ala Gly Val Gly Ser Phe Met Cys Ser Tyr Ser Gln Ile Asn Asn Ser

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Tyr Gly Cys Gln Asn Ser Gln Thr Leu Asn Lys Leu Leu Lys Ser Glu

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Leu Gly Phe Gln Gly Phe Val Met Ser Asp Trp Gly Ala His His Ser

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Gly Val Ser Ser Ala Leu Ala Gly Leu Asp Met Ser Met Pro Gly Asp

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Thr Glu Phe Asp Ser Gly Leu Ser Phe Trp Gly Ser Asn Leu Thr Ile

325 330 335

Ala Ile Leu Asn Gly Thr Val Pro Glu Trp Arg Leu Asp Asp Met Ala

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Met Arg Ile Met Ala Ala Tyr Phe Lys Val Gly Leu Thr Ile Glu Asp

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Gln Pro Asp Val Asn Phe Asn Ala Trp Thr His Asp Thr Tyr Gly Tyr

370 375 380

Lys Tyr Ala Tyr Ser Lys Glu Asp Tyr Glu Gln Val Asn Trp His Val

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Asp Val Arg Ser Asp His Asn Lys Leu Ile Arg Glu Thr Ala Ala Lys

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Gly Thr Val Leu Leu Lys Asn Asn Phe His Ala Leu Pro Leu Lys Gln

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Gly Pro Asn Gly Cys Ala Asp Arg Gly Cys Asp Gln Gly Thr Leu Ala

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Asp Thr Ala Ile Gln Ser Lys Val Leu Glu Tyr Gly Gly Arg Tyr Glu

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Ser Ile Phe Asp Asn Tyr Asp Asp Asn Ala Ile Leu Ser Leu Val Ser

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Gly Tyr Ile Thr Val Asp Asn Asn Trp Gly Asp Arg Asn Asn Leu Thr

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Asn Asn Thr Ile Val Val Leu His Ser Val Gly Pro Val Leu Leu Asn

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Pro Gly Glu Glu Ser Gly Asn Ala Leu Val Asp Ile Leu Trp Gly Asn

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<210> 63

<211> 2583

<212> DNA

<213> 黑曲霉(Aspergillus niger)

<400> 63

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caggcgcctg aagcccaagg ttttggattt aatatttccg agagtggaag tgcgaacctc 660

gatgataaga ctatgcacga gctgtacctc tggcccttcg cggatgccat ccgtgcaggt 720

gctggcgctg tgatgtgctc ctacaaccag atcaacaaca gttatggctg ccagaacagc 780

tacactctga acaagctgct caaggccgag ctgggcttcc agggctttgt catgagtgat 840

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gtctttgtca acgccgactc tggtgagggt tacatcaatg tggacggaaa cctgggtgac 1560

cgcaggaacc tgaccctgtg gaggaacggc gataatgtga tcaaggctgc tgctagcaac 1620

tgcaacaaca caatcgttgt cattcactct gtcggaccag tcttggttaa cgagtggtac 1680

gacaacccca atgttaccgc tatcctctgg ggtggtttgc ccggtcagga gtctggcaac 1740

tctcttgccg acgtcctcta tggccgtgtc aaccccggtg ccaagtcgcc ctttacctgg 1800

ggcaagactc gtgaggccta ccaagactac ttggtcaccg agcccaacaa cggcaacgga 1860

gcccctcagg aagactttgt cgagggcgtc ttcattgact accgtggatt tgacaagcgc 1920

aacgagaccc cgatctacga gttcggctat ggtctgagct acaccacttt caactactcg 1980

aaccttgagg tgcaggtgct gagcgcccct gcatacgagc ctgcttcggg tgagaccgag 2040

gcagcgccaa ccttcggaga ggttggaaat gcgtcggatt acctctaccc cagcggattg 2100

cagagaatta ccaagttcat ctacccctgg ctcaacggta ccgatctcga ggcatcttcc 2160

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taa 2583

<210> 64

<211> 860

<212> PRT

<213> 黑曲霉(Aspergillus niger)

<400> 64

Met Arg Phe Thr Leu Ile Glu Ala Val Ala Leu Thr Ala Val Ser Leu

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Ala Ala Thr Trp Asp Lys Asn Leu Ala Tyr Leu Arg Gly Lys Ala Met

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Pro Asn Phe Ser Ser Trp Thr Arg Asp Glu Tyr Gly Tyr Lys Tyr Tyr

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450 455 460

Ala Ile Ser Asn Glu Val Leu Lys His Lys Asn Gly Val Phe Thr Ala

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485 490 495

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Asn Gly Asp Asn Val Ile Lys Ala Ala Ala Ser Asn Cys Asn Asn Thr

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Ile Val Val Ile His Ser Val Gly Pro Val Leu Val Asn Glu Trp Tyr

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Asp Asn Pro Asn Val Thr Ala Ile Leu Trp Gly Gly Leu Pro Gly Gln

565 570 575

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580 585 590

Gly Ala Lys Ser Pro Phe Thr Trp Gly Lys Thr Arg Glu Ala Tyr Gln

595 600 605

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Asp Phe Val Glu Gly Val Phe Ile Asp Tyr Arg Gly Phe Asp Lys Arg

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Glu Pro Ala Ser Gly Glu Thr Glu Ala Ala Pro Thr Phe Gly Glu Val

675 680 685

Gly Asn Ala Ser Asp Tyr Leu Tyr Pro Ser Gly Leu Gln Arg Ile Thr

690 695 700

Lys Phe Ile Tyr Pro Trp Leu Asn Gly Thr Asp Leu Glu Ala Ser Ser

705 710 715 720

Gly Asp Ala Ser Tyr Gly Gln Asp Ser Ser Asp Tyr Leu Pro Glu Gly

725 730 735

Ala Thr Asp Gly Ser Ala Gln Pro Ile Leu Pro Ala Gly Gly Gly Pro

740 745 750

Gly Gly Asn Pro Arg Leu Tyr Asp Glu Leu Ile Arg Val Ser Val Thr

755 760 765

Ile Lys Asn Thr Gly Lys Val Ala Gly Asp Glu Val Pro Gln Leu Tyr

770 775 780

Val Ser Leu Gly Gly Pro Asn Glu Pro Lys Ile Val Leu Arg Gln Phe

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<210> 65

<211> 2583

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<213> 棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)

<400> 65

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gactacaatt cggctttccc tgctggtgtc aacgttgctg cgacatggga caagaacctt 360

gcttatctac gtggtcaggc tatgggtcaa gagttcagtg acaaaggaat tgatgttcaa 420

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tacactctga acaagcttct gaaggccgag ctcggcttcc agggctttgt gatgtctgac 840

tggggtgctc accacagtgg tgttggctct gctttggccg gcttggatat gtcaatgcct 900

ggcgatatca ccttcgattc tgccactagt ttctggggta ccaacctgac cattgctgtg 960

ctcaacggta ccgtcccgca gtggcgcgtt gacgacatgg ctgtccgtat catggctgcc 1020

tactacaagg ttggccgcga ccgcctgtac cagccgccta acttcagctc ctggactcgc 1080

gatgaatacg gcttcaagta tttctacccc caggaagggc cctatgagaa ggtcaatcac 1140

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gacaacggta ctcttgctat ggcttggggt agcggcactg ccgaattccc atatctcgtg 1380

acccctgagc aggctattca agccgaggtg ctcaagcata agggcagcgt ctacgccatc 1440

acggacaact gggcgctgag ccaggtggag accctcgcta aacaagccag tgtctctctt 1500

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tgcaacaaca ccatcgttgt catccactcc gttggacctg ttttggttga cgagtggtat 1680

gaccacccca acgttactgc catcctctgg gcgggcttgc ctggccagga gtctggcaac 1740

tccttggctg acgtgctcta cggccgcgtc aacccgggcg ccaaatctcc attcacctgg 1800

ggcaagacga gggaggcgta cggggattac cttgtccgtg agctcaacaa cggcaacgga 1860

gctccccaag atgatttctc ggaaggtgtt ttcattgact accgcggatt cgacaagcgc 1920

aatgagaccc cgatctacga gttcggacat ggtctgagct acaccacttt caactactct 1980

ggccttcaca tccaggttct caacgcttcc tccaacgctc aagtagccac tgagactggc 2040

gccgctccca ccttcggaca agtcggcaat gcctctgact acgtgtaccc tgagggattg 2100

accagaatca gcaagttcat ctatccctgg cttaattcca cagacctgaa ggcctcatct 2160

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tctccgcagc ccgttctgcc tgccggtggt ggctctggtg gtaacccgcg cctctacgat 2280

gagttgatcc gtgtttcggt gacagtcaag aacactggtc gtgttgccgg tgatgctgtg 2340

cctcaattgt atgtttccct tggtggaccc aatgagccca aggttgtgtt gcgcaaattc 2400

gaccgcctca ccctcaagcc ctccgaggag acggtgtgga cgactaccct gacccgccgc 2460

gatctgtcta actgggacgt tgcggctcag gactgggtca tcacttctta cccgaagaag 2520

gtccatgttg gtagctcttc gcgtcagctg ccccttcacg cggcgctccc gaaggtgcaa 2580

tga 2583

<210> 66

<211> 860

<212> PRT

<213> 棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)

<400> 66

Met Lys Leu Ser Trp Leu Glu Ala Ala Ala Leu Thr Ala Ala Ser Val

1 5 10 15

Val Ser Ala Asp Glu Leu Ala Phe Ser Pro Pro Phe Tyr Pro Ser Pro

20 25 30

Trp Ala Asn Gly Gln Gly Glu Trp Ala Glu Ala Tyr Gln Arg Ala Val

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85 90 95

Ser Ile Ala Gly Ser Asn Glu Ala Gly Trp Cys Cys Ala Cys Tyr Glu

100 105 110

Leu Thr Phe Thr Ser Gly Pro Val Ala Gly Lys Lys Met Val Val Gln

115 120 125

Ser Thr Ser Thr Gly Gly Asp Leu Gly Ser Asn His Phe Asp Leu Asn

130 135 140

Ile Pro Gly Gly Gly Val Gly Ile Phe Asp Gly Cys Thr Pro Gln Phe

145 150 155 160

Gly Gly Leu Pro Gly Gln Arg Tyr Gly Gly Ile Ser Ser Arg Asn Glu

165 170 175

Cys Asp Arg Phe Pro Asp Ala Leu Lys Pro Gly Cys Tyr Trp Arg Phe

180 185 190

Asp Trp Phe Lys Asn Ala Asp Asn Pro Ser Phe Ser Phe Arg Gln Val

195 200 205

Gln Cys Pro Ala Glu Leu Val Ala Arg Thr Gly Cys Arg Arg Asn Asp

210 215 220

Asp Gly Asn Phe Pro Ala Val Gln Ile Pro Met Arg Ser Ser Pro Leu

225 230 235 240

Leu Arg Ser Ala Val Val Ala Ala Leu Pro Val Leu Ala Leu Ala Lys

245 250 255

Asp Asp Leu Ala Tyr Ser Pro Pro Phe Tyr Pro Ser Pro Trp Ala Asp

260 265 270

Gly Gln Gly Glu Trp Ala Glu Val Tyr Lys Arg Ala Val Asp Ile Val

275 280 285

Ser Gln Met Thr Leu Thr Glu Lys Val Asn Leu Thr Thr Gly Thr Gly

290 295 300

Trp Gln Leu Glu Arg Cys Val Gly Gln Thr Gly Ser Val Pro Arg Leu

305 310 315 320

Asn Ile Pro Ser Leu Cys Leu Gln Asp Ser Pro Leu Gly Ile Arg Phe

325 330 335

Ser Asp Tyr Asn Ser Ala Phe Pro Ala Gly Val Asn Val Ala Ala Thr

340 345 350

Trp Asp Lys Thr Leu Ala Tyr Leu Arg Gly Gln Ala Met Gly Glu Glu

355 360 365

Phe Ser Asp Lys Gly Ile Asp Val Gln Leu Gly Pro Ala Ala Gly Pro

370 375 380

Leu Gly Ala His Pro Asp Gly Gly Arg Asn Trp Glu Ser Phe Ser Pro

385 390 395 400

Asp Pro Ala Leu Thr Gly Val Leu Phe Ala Glu Thr Ile Lys Gly Ile

405 410 415

Gln Asp Ala Gly Val Ile Ala Thr Ala Lys His Tyr Ile Met Asn Glu

420 425 430

Gln Glu His Phe Arg Gln Gln Pro Glu Ala Ala Gly Tyr Gly Phe Asn

435 440 445

Val Ser Asp Ser Leu Ser Ser Asn Val Asp Asp Lys Thr Met His Glu

450 455 460

Leu Tyr Leu Trp Pro Phe Ala Asp Ala Val Arg Ala Gly Val Gly Ala

465 470 475 480

Val Met Cys Ser Tyr Asn Gln Ile Asn Asn Ser Tyr Gly Cys Glu Asn

485 490 495

Ser Glu Thr Leu Asn Lys Leu Leu Lys Ala Glu Leu Gly Phe Gln Gly

500 505 510

Phe Val Met Ser Asp Trp Thr Ala Gln His Ser Gly Val Gly Ala Ala

515 520 525

Leu Ala Gly Leu Asp Met Ser Met Pro Gly Asp Val Thr Phe Asp Ser

530 535 540

Gly Thr Ser Phe Trp Gly Ala Asn Leu Thr Val Gly Val Leu Asn Gly

545 550 555 560

Thr Ile Pro Gln Trp Arg Val Asp Asp Met Ala Val Arg Ile Met Ala

565 570 575

Ala Tyr Tyr Lys Val Gly Arg Asp Thr Lys Tyr Thr Pro Pro Asn Phe

580 585 590

Ser Ser Trp Thr Arg Asp Glu Tyr Gly Phe Ala His Asn His Val Ser

595 600 605

Glu Gly Ala Tyr Glu Arg Val Asn Glu Phe Val Asp Val Gln Arg Asp

610 615 620

His Ala Asp Leu Ile Arg Arg Ile Gly Ala Gln Ser Thr Val Leu Leu

625 630 635 640

Lys Asn Lys Gly Ala Leu Pro Leu Ser Arg Lys Glu Lys Leu Val Ala

645 650 655

Leu Leu Gly Glu Asp Ala Gly Ser Asn Ser Trp Gly Ala Asn Gly Cys

660 665 670

Asp Asp Arg Gly Cys Asp Asn Gly Thr Leu Ala Met Ala Trp Gly Ser

675 680 685

Gly Thr Ala Asn Phe Pro Tyr Leu Val Thr Pro Glu Gln Ala Ile Gln

690 695 700

Asn Glu Val Leu Gln Gly Arg Gly Asn Val Phe Ala Val Thr Asp Ser

705 710 715 720

Trp Ala Leu Asp Lys Ile Ala Ala Ala Ala Arg Gln Ala Ser Val Ser

725 730 735

Leu Val Phe Val Asn Ser Asp Ser Gly Glu Gly Tyr Leu Ser Val Asp

740 745 750

Gly Asn Glu Gly Asp Arg Asn Asn Ile Thr Leu Trp Lys Asn Gly Asp

755 760 765

Asn Val Val Lys Thr Ala Ala Asn Asn Cys Asn Asn Thr Val Val Ile

770 775 780

Ile His Ser Val Gly Pro Val Leu Ile Asp Glu Trp Tyr Asp His Pro

785 790 795 800

Asn Val Thr Gly Ile Leu Trp Ala Gly Leu Pro Gly Gln Glu Ser Gly

805 810 815

Asn Ser Ile Ala Asp Val Leu Tyr Gly Arg Val Asn Pro Gly Ala Lys

820 825 830

Ser Pro Phe Thr Trp Gly Lys Thr Arg Glu Ser Tyr Gly Ser Pro Leu

835 840 845

Val Lys Asp Ala Asn Asn Gly Asn Gly Ala Pro Gln Ser Asp Phe Thr

850 855 860

Gln Gly Val Phe Ile Asp Tyr Arg His Phe Asp Lys Phe Asn Glu Thr

865 870 875 880

Pro Ile Tyr Glu Phe Gly Tyr Gly Leu Ser Tyr Thr Thr Phe Glu Leu

885 890 895

Ser Asp Leu His Val Gln Pro Leu Asn Ala Ser Arg Tyr Thr Pro Thr

900 905 910

Ser Gly Met Thr Glu Ala Ala Lys Asn Phe Gly Glu Ile Gly Asp Ala

915 920 925

Ser Glu Tyr Val Tyr Pro Glu Gly Leu Glu Arg Ile His Glu Phe Ile

930 935 940

Tyr Pro Trp Ile Asn Ser Thr Asp Leu Lys Ala Ser Ser Asp Asp Ser

945 950 955 960

Asn Tyr Gly Trp Glu Asp Ser Lys Tyr Ile Pro Glu Gly Ala Thr Asp

965 970 975

Gly Ser Ala Gln Pro Arg Leu Pro Ala Ser Gly Gly Ala Gly Gly Asn

980 985 990

Pro Gly Leu Tyr Glu Asp Leu Phe Arg Val Ser Val Lys Val Lys Asn

995 1000 1005

Thr Gly Asn Val Ala Gly Asp Glu Val Pro Gln Leu Tyr Val Ser

1010 1015 1020

Leu Gly Gly Pro Asn Glu Pro Lys Val Val Leu Arg Lys Phe Glu

1025 1030 1035

Arg Ile His Leu Ala Pro Ser Gln Glu Ala Val Trp Thr Thr Thr

1040 1045 1050

Leu Thr Arg Arg Asp Leu Ala Asn Trp Asp Val Ser Ala Gln Asp

1055 1060 1065

Trp Thr Val Thr Pro Tyr Pro Lys Thr Ile Tyr Val Gly Asn Ser

1070 1075 1080

Ser Arg Lys Leu Pro Leu Gln Ala Ser Leu Pro Lys Ala Gln

1085 1090 1095

Claims (10)

1.一种用于降解或转化纤维素材料的方法，包括：用包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的酶组合物处理所述纤维素材料。

2.权利要求1的方法，其中所述一种或多种(几种)纤维素分解酶选自下组：内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。

3.权利要求1或2的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：半纤维素酶、酯酶、蛋白酶、漆酶和过氧化物酶。

4.权利要求1-3任一项的方法，其中所述酶组合物进一步包含一种或多种(几种)选自下组的酶：木聚糖酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、木糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶，及其组合。

5.权利要求1-4任一项的方法，其中所述纤维素材料经预处理。

6.权利要求1-5任一项的方法，进一步包括回收经降解的纤维素材料。

7.权利要求6的方法，其中所述经降解的纤维素材料是糖。

8.一种用于产生发酵产物的方法，包括：

(a)用包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的酶组合物糖化纤维素材料；

(b)用一种或多种(几种)发酵微生物发酵所述经糖化的纤维素材料以产生所述发酵产物；和

(c)从发酵回收所述发酵产物。

9.权利要求8的方法，其中所述一种或多种(几种)纤维素分解酶选自下组：内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。

10.一种发酵纤维素材料的方法，包括：用一种或多种(几种)发酵微生物发酵所述纤维素材料，其中所述纤维素材料经包含一种或多种(几种)纤维素分解酶、纤维二糖脱氢酶和具有纤维素分解增强活性的多肽的酶组合物水解。