CN107184985A - 鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂 - Google Patents

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Abstract

本发明属于疫苗的技术领域，特别涉及一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂；它是由下述重量份数的原料配制而成：2%～6%棉籽糖、1%～2%肌醇、1%～3%麦芽糊精、0.5%～2%脯氨酸、0.5～1.5%吐温80，余量为蒸馏水；用本发明制备鸡新城疫活疫苗(Lasota株)外观合格，效价稳定，符合国家兽药典相关规定，价格低廉，可在2‑8℃保存24个月，且在37℃可至少保存1周，可有效减少运输、使用过程中的损失。

Description

鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂
技术领域
本发明属于疫苗的技术领域，特别涉及一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂。
背景技术
新城疫（newcastle disease,ND）是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病，具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的一种主要传染病。OIE将其列为A类疫病。新城疫无特效的治疗手段，主要依赖疫苗免疫预防，鸡新城疫活疫苗(Lasota株)是最常用的疫苗之一，具有良好的安全性和防治效果。该疫苗的制备通常是把疫苗用毒株接种于9-11日龄SPF鸡胚，37摄氏度孵化3-5天，收获尿囊液，与一定比例的冻干保护剂混合，分装冻干制成。
冻干保护剂对新城疫活疫苗(Lasota株)的效价、储存、运输和使用过程均有至关重要的影响，目前国内使用的冻干保护剂主要是蔗糖、脱脂奶粉、明胶、白蛋白等不同组合，保护效果一般，且一般要求保存条件为-15℃冷冻保存，而在实际的临床使用中，运输和正规供应站可较好执行保存条件，养殖户或养殖企业多存在室温操作，饮水用苗时间过长等问题，在此过程易造成少部分失效，同时为降低生产和使用成本，耐热保护剂应考虑低成本组合，对此，有必要筛选开发一种耐热冻干保护剂，能够适当提高疫苗保存温度，减少使用过程的损失，且成本低廉，降低养殖成本。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足而提供的一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂。
本发明的目的是这样实现的：一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：2%～6%棉籽糖、1%～2%肌醇、1%～3%麦芽糊精、0.5%～2%脯氨酸、0.5～1.5%吐温80，余量为蒸馏水。
一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：3%～5%棉籽糖、1.2%～1.8%肌醇、1.6%～2.5%麦芽糊精、1%～1.7%脯氨酸、0.8～1.2%吐温80，余量为蒸馏水。
一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：4%棉籽糖、1.5%肌醇、2%麦芽糊精、1.4%脯氨酸、1%吐温80，余量为蒸馏水。
本发明中棉籽糖是低分子量糖类，由半乳糖、葡萄糖及果糖3个单糖缩合而成的非还原糖，易溶于水，在热、酸环境中都很稳定，无吸湿性。其可以通过水合作用使溶液粘性增大，弱化水的结晶过程，起到保护作用。此外还具有整肠及提高机体免疫力等多种功能，非常适合应用于新城疫等肠道疫病的防治。
肌醇为多羟基化合物，当冻干过程中脱水后，多羟基化合物的羟基能替代蛋白质表面的水分子的轻基，与蛋白质表面形成一层假定的水化膜，从而保护氢键的连接位点不直接暴露在周围环境中，稳定蛋白质的高级结构，防止蛋白质因冻干而变性，从而起到保护作用。
麦芽糊精属糖类，糖是最常见、使用最广的一类冻干保护剂，为蛋白质的非特异性稳定剂，在冻干及保存各阶段均能对生物制品起到一定的保护作用。糖对阻止蛋白质二级结构的改变有显著作用。麦芽糊精属低聚糖类，不能透过细胞壁和细胞膜，可是溶液呈过冷状态，即可在特定温度下降低溶质浓度，从而起到保护作用。
脯氨酸是氨基酸类保护剂中的常用品种，在冷冻过程中的主要作用是能升高成品的塌陷温度，阻止因塌陷而引起蛋白质结构的破坏。
吐温80为表面活性剂，在冷冻干燥过程中辅助保护蛋白质结构免受破坏。
微生物活疫苗的最佳冻干保护剂不同，可采用不同浓度的几种冻干保护剂协同保护，以获得个体化的最佳组合。经验证，用本发明制备鸡新城疫活疫苗(Lasota株)外观合格，效价稳定，符合国家兽药典相关规定，价格低廉，可在2-8℃保存24个月，且在37℃可至少保存1周，可有效减少运输、使用过程中的损失。
具体实施方式
实施例1、
筛选试验
查阅相关文献，选择多种预选冻干保护剂，分别为蔗糖、棉籽糖、聚乙二醇、脱脂奶粉、麦芽糊精、明胶、吐温80、谷氨酸钠、甘油、葡聚糖、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮、海藻糖、脯氨酸、肌醇，按尿囊液∶保护剂=1∶1体积比添加冻干保护剂，以外观、及冻干后病毒的鸡胚半数感染量（EID50/0.1ml）为评价指标，同时考虑成本和类别因素，预选出肌醇、麦芽糊精、脯氨酸、吐温80为组合物，进一步组合筛选，筛选出2-6%棉籽糖、1-2%肌醇、1-3%麦芽糊精、0.5-2%脯氨酸、0.5-1.5%吐温80作为冻干保护剂组合。
优选组合
根据单因素预选出棉籽糖、肌醇、麦芽糊精、脯氨酸、吐温80为试验因素，以外观、及其对应的半成品的鸡胚半数感染量（EID50/0.1ml）为评价指标，每个因素取3个浓度水平，进行正交试验设计L18（35），正交试验因素与水平见表1。
表1 正交试验的因素与水平
根据正交试验实验结果，优选出冻干保护剂组合：4%棉籽糖、1%肌醇、3%麦芽糊精、1%脯氨酸、0.5%吐温80，其余成分为蒸馏水。
实施例2、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，它是由下述重量份数的原料配制而成：将40g棉籽糖、10g肌醇、30g麦芽糊精、10g脯氨酸、5ml吐温80，溶于蒸馏水1000ml中，然后100℃高压灭菌30分钟，冷却即为所述的鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂。
将尿囊液与鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂按1:1进行配置，分装，冻干，获得冻干疫苗。
疫苗检验：按照中国兽药典2015版第三部相关项目检验，对上述冻干疫苗进行检验，经检验，本发明制备的新城疫活疫苗(Lasota株)符合规定，见表2。
表2 ：疫苗检验结果
项目 物理性状 无菌检验 支原体检验 外源病毒检验 特异性检验 安全性检验 剩余水分 病毒含量（EID50/0.1ml）
结果 海绵状疏松团块 合格 合格 合格 合格 合格 1.8 7.5
对比检验：购买市售新城疫活疫苗(Lasota株)，与本发明冻干疫苗分别保存于37℃，于保存后3天，7天,取出检验其病毒含量（EID50/0.1ml）；保存于-15℃，2-8℃，于保存后6个月，12个月，18个月，24个月,取出检验其病毒含量（EID50/0.1ml）。结果见表3，表4。
表3：疫苗在37℃保存对比实验结果
0天 3天 7天
本发明 7.5 7.1 6.8
市售产品 7.6 6.42 5.7
表4 ：疫苗在-15℃，2-8℃保存对比实验结果
从结果可以看出，本发明可在37℃高温至少维持一周，仍可以够达到免疫所需病毒含量，优于市售产品，可以在临床实际使用中满足动物机体免疫需求。在-15℃，2-8℃条件下保存24个月保持较高的病毒含量，尤其在2-8℃条件下，更加符合生产时间对疫苗保存的新要求。本发明可有效减少保存不当，使用时间过长造成的损失。
实施例3、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，它是由下述重量份数的原料配制而成：20g棉籽糖、10g肌醇、10g麦芽糊精、5g脯氨酸、5ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例4、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，它是由下述重量份数的原料配制而成：40g棉籽糖、20g肌醇、10g麦芽糊精、5g脯氨酸、5ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例5、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，它是由下述重量份数的原料配制而成：20g棉籽糖、10g肌醇、30g麦芽糊精、5g脯氨酸、5ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例6、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，它是由下述重量份数的原料配制而成：20g棉籽糖、10g肌醇、10g麦芽糊精、20g脯氨酸、5ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例7、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，它是由下述重量份数的原料配制而成：20g棉籽糖、10g肌醇、10g麦芽糊精、5g脯氨酸、15ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例8、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，它是由下述重量份数的原料配制而成：40g棉籽糖、20g肌醇、30g麦芽糊精、5g脯氨酸、5ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例9、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，它是由下述重量份数的原料配制而成：40g棉籽糖、10g肌醇、30g麦芽糊精、20g脯氨酸、5ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例10、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，它是由下述重量份数的原料配制而成：40g棉籽糖、10g肌醇、10g麦芽糊精、20g脯氨酸、15ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例11、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：40g棉籽糖、20g肌醇、30g麦芽糊精、20g脯氨酸、15ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例12、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：40g棉籽糖、10g肌醇、30g麦芽糊精、20g脯氨酸、15ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例13、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：40g棉籽糖、20g肌醇、10g麦芽糊精、20g脯氨酸、15ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例14、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：20g棉籽糖、20g肌醇、30g麦芽糊精、5g脯氨酸、15ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例15、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：40g棉籽糖、20g肌醇、30g麦芽糊精、20g脯氨酸、5ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例16、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：40g棉籽糖、10g肌醇、10g麦芽糊精、20g脯氨酸、15ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例17、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：40g棉籽糖、20g肌醇、10g麦芽糊精、5g脯氨酸、15ml吐温80，蒸馏水1000ml。
实施例18、一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：40g棉籽糖、15g肌醇、20g麦芽糊精、14g脯氨酸、10ml吐温80，蒸馏水1000ml。

Claims (3)

1.一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：2%～6%棉籽糖、1%～2%肌醇、1%～3%麦芽糊精、0.5%～2%脯氨酸、0.5～1.5%吐温80，余量为蒸馏水。
2.一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：3%～5%棉籽糖、1.2%～1.8%肌醇、1.6%～2.5%麦芽糊精、1%～1.7%脯氨酸、0.8～1.2%吐温80，余量为蒸馏水。
3.一种鸡新城疫活疫苗(Lasota株)的耐热冻干保护剂，其特征在于，它是由下述重量份数的原料配制而成：4%棉籽糖、1.5%肌醇、2%麦芽糊精、1.4%脯氨酸、1%吐温80，余量为蒸馏水。
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