CN107174663B - 疫苗冻干保护剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种疫苗冻干保护剂,按重量份数计,包括填充剂40‑60份;防冻剂10‑15份;酸碱调节剂3‑10份;抗氧化剂2‑15份;透明质酸20‑30份;聚天冬氨酸10‑25份。本发明具有以下优点和效果:采用在疫苗冻干保护剂内加入填充剂,冻干过程中起到保护活疫苗的作用。防冻剂能够防止和减少冷冻过程中结晶水的形成,提高活疫苗冻干过程中的存活率。加入抗氧化剂,延长冻干活疫苗的保存时间。疫苗冻干保护剂内加入透明质酸和聚天冬氨酸后混合,包裹活疫苗形成一层保护层,提高冻干活疫苗的耐热性和延长保存时间,达到了提高活疫苗冻干过程中的存活率、提高冻干活疫苗的耐热性、延长冻干活疫苗的保存时间的效果。
Description
技术领域
本发明涉及动物疫苗制品,特别涉及一种疫苗冻干保护剂。
背景技术
疫苗是将病原微生物如细菌、立克次氏体、病毒等及其代谢产物通过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。按照生产工艺的不同可分为冻干疫苗、液体疫苗及各种佐剂疫苗,其中冻干活疫苗中保护剂的添加和冷冻干燥技术是保证活疫苗质量的关键环节。
活疫苗的运输、储存大多需要在低温下保存、运输,目前兽用疫苗中,冻干活疫苗常用的保护剂主要为牛奶、蔗糖、明胶等,组方简单,保护功能差,导致冻干活疫苗耐热性差,冻干活疫苗的保存和运输受限。
发明内容
本发明的目的是提供一种疫苗冻干保护剂,具有耐热的效果。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的:一种疫苗冻干保护剂,按重量份数计,包括填充剂40-60份;防冻剂10-15份;酸碱调节剂3-10份;抗氧化剂2-15份;透明质酸20-30份;聚天冬氨酸10-25份。
通过采用上述技术方案,冷冻干燥技术是保持微生物、动物组织、细胞及蛋白质等活性物质活性的一个有效、普遍的方法,在一定的真空条件下,制品溶液预先冻结成固体,然后在低温低压条件下,从冻结状态不经液态而直接升华去除水分的一种冻干方法,此过程即称冷冻干燥,简称冻干。
活疫苗在冷冻干燥过程中,冷冻和干燥不可避免会造成部分微生物的损伤及死亡,蛋白质变性。为提高冻干活疫苗的存活率和生物活性,在活疫苗冻干前加入疫苗冻干保护剂,包含有填充剂和防冻剂,填充剂能防止有效物质随水蒸气一起升华飞散。在疫苗冻干保护剂内加入防冻剂,防冻剂能够防止和减少冷冻过程中结晶水的形成,保护活疫苗的结构。抗氧化剂能够防止保存过程中的氧化反应。
在疫苗冻干保护剂中加入透明质酸,透明质酸加入到活疫苗溶液内后,透明质酸能够形成含水量高的溶胶,聚天冬氨酸分散在透明质酸形成的溶胶内,透明质酸形成的溶胶包裹和保护活疫苗,能够在疫苗冻干过程中保护活疫苗,提高活疫苗的存活率和生物活性。
活疫苗通过冷冻干燥处理后形成冻干活疫苗,聚天冬氨酸分布在透明氨酸内后形成溶胶状的保护层,保护层包裹在活疫苗外,能在较高温度和较长时间下对冻干活疫苗进行保护,提高冻干活疫苗的耐热性,延长冻干活疫苗的保存时间。
本发明的进一步设置为:按重量份数计,还包括聚山梨醇酯15-20份。
通过采用上述技术方案,聚山梨醇酯加入到疫苗冻干保护剂内,疫苗冻干保护剂加入到活疫苗溶液内时,聚山梨醇酯能够起到分散作用,促进聚天冬氨酸均匀分散在透明质酸形成的溶胶内,当活疫苗冷冻干燥后形成冻干活疫苗后,能进一步提高冻干活疫苗的耐热性能。
本发明的进一步设置为:按重量份数计,还包括硫脲2-5份。
通过采用上述技术方案,硫脲能够抑制活疫苗内酶的活性,促进冻干活疫苗的稳定剂,延长冻干活疫苗的保存时间。
本发明的进一步设置为:所述填充剂为蔗糖、明胶、甘露醇中的一种。
通过采用上述技术方案,蔗糖、明胶、甘露醇作为填充剂加入到疫苗冻干保护剂中,明胶、蔗糖在能够起到骨架作用,保护活疫苗。
本发明的进一步设置为:所述防冻剂为甘油、二甲亚砜中的一种。
通过采用上述技术方案,甘油和二甲亚砜起到防冻作用,减少活疫苗冷冻干燥过程中受到的损伤,提高冷冻干燥时活疫苗的存活率。
本发明的进一步设置为:所述酸碱调节剂为磷酸缓冲液。
通过采用上述技术方案,磷酸缓冲液也称磷酸盐缓冲液,是生物化学研究中广泛使用的一种缓冲液,通常使用的有磷酸钠缓冲液和磷酸钾缓冲液,由于它们有二级解离,缓冲的pH值范围很广。
本发明的进一步设置为:所述抗氧化剂为维生素D、维生素E、硫代硫酸钠中的一种。
通过采用上述技术方案,维生素D、维生素E、硫代硫酸钠加入到疫苗冻干保护剂内,起到抗氧化作用。
本发明的进一步设置为:按重量份数计,还包括谷氨酸钠10-20份。
通过采用上述技术方案,谷氨酸钠加入到疫苗冻干保护剂内,能够在活疫苗冻干过程中与聚天冬氨酸联合作用,提高活疫苗冷冻干燥过程中存活率。
本发明的进一步设置为:按重量份数计,还包括葡聚糖5-15份。
通过采用上述技术方案,葡聚糖是以葡萄糖为单糖组成的同型多糖,加入到疫苗冻干保护剂内后,葡聚糖与透明质酸混合后,在冷冻干燥以及运输、保存等各阶段对冻干活疫苗起到保护作用,提高冻干活疫苗的耐热性能和延长保存时间。
本发明的进一步设置为:按重量份数计,包括透明质酸25-30份,聚天冬氨酸20-25份。
通过采用上述技术方案,透明质酸25-30份,聚天冬氨酸20-25份,对冻干疫苗具有优异的保护性能。
综上所述,本发明具有以下有益效果:采用在疫苗冻干保护剂内加入填充剂,冻干过程中起到保护活疫苗的作用。防冻剂能够防止和减少冷冻过程中结晶水的形成,提高活疫苗冻干过程中的存活率。加入抗氧化剂,延长冻干活疫苗的保存时间。疫苗冻干保护剂内加入透明质酸和聚天冬氨酸后混合,包裹活疫苗形成一层保护层,提高冻干活疫苗的耐热性和延长保存时间,达到了提高活疫苗冻干过程中的存活率、提高冻干活疫苗的耐热性、延长冻干活疫苗的保存时间的效果。
具体实施方式
具体实施例仅仅是对本发明的解释,其并不是对本发明的限制,本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改,但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
实施例1:疫苗冻干保护剂,按重量份数计,称取以下表1中的各组分,分别用超纯水配置成溶液后,灭菌处理后混合均匀,得到疫苗冻干保护剂。其中,填充剂选用明胶,防冻剂选用甘油,抗氧化剂选用维生素D,酸碱调节剂选用磷酸缓冲液,磷酸缓冲液配置放入如下:配置0.2mol/L的磷酸二氢钠溶液和0.2mol/L的磷酸氢二钠水溶液,称取36ml的上述磷酸二氢钠和14ml上述的磷酸氢二钠,混合后得到磷酸缓冲液。
冻干活疫苗的制备:商购鸡新城La Sota株和鸡胚。
冻干前病毒含量测定:按《中国药典》三部(2010)要求测定:将含毒细胞液用灭菌生理盐水作10倍系列稀释,取三个稀释度各尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚5个,每胚0.1ml,置36-37℃继续孵育,48小时以前死亡的鸡胚弃去不计,在48-120小时死亡的鸡胚随时取出,收获鸡胚液,同一稀释度的胚液等量混合,按稀释度分别测定红细胞凝集价,至120小时,取出所有活胚,逐个收获尿囊液,分别测定红细胞凝集价,凝集价≥1:160(1:128)者判为感染,计算EID50,在以下表1中列出测定结果。每0.1ml病毒含量应>107EID50,方可用于配置疫苗。
配苗及冻干,将细胞病毒液经无菌筛网过滤后,与疫苗冻干保护剂按1:0.5的比例分别混合,在冻干机中进行冻干,获得冻干活疫苗。
冻干后病毒含量测定,取冻干后冻干活疫苗用灭菌生理盐水溶解后,参照冻干前病毒含量测定的方法,凝集价≥1:160(1:128)者判为感染,计算EID50,在以下表1中列出测定结果。
冻干疫苗热稳定性测定:将冻干后疫苗置于37℃恒温箱中,保存7d后,测定冻干疫苗的病毒含量EID50,在以下表1中列出测定结果。
实施例2:疫苗冻干保护剂,与实施例1的区别在于,填充剂选用蔗糖,防冻剂选用二甲亚砜,抗氧化剂选用维生素E。在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例3:疫苗冻干保护剂,与实施例1的区别在于,填充剂选用甘露醇,抗氧化剂选用硫代硫酸钠。在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例4:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例5:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例6:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例7:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例8:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例9:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例10:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例11:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例12:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例13:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例14:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例15:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例16:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例17:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例2的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例18:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例2的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例19:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例2的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例20:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例2的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例21:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例2的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例22:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例2的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例23:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例2的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例24:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例2的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例25:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例2的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
实施例26:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例2的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
对比例1:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
对比例2:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
对比例3:疫苗冻干保护剂,按以下表1中列出的各组分,重复实施例1的方法,在表1中列出冻干前病毒含量、冻干后病毒含量、冻干疫苗热稳定性测试的结果。
表1
Claims (9)
1.一种疫苗冻干保护剂,其特征在于:按重量份数计,包括填充剂40-60份;防冻剂10-15份;酸碱调节剂3-10份;抗氧化剂2-15份;透明质酸20-30份;聚天冬氨酸10-25份;所述填充剂为蔗糖、明胶、甘露醇中的一种。
2.根据权利要求1所述的疫苗冻干保护剂,其特征在于:按重量份数计,还包括聚山梨醇酯15-20份。
3.根据权利要求1或2所述的疫苗冻干保护剂,其特征在于:按重量份数计,还包括硫脲2-5份。
4.根据权利要求1所述的疫苗冻干保护剂,其特征在于:所述防冻剂为甘油、二甲亚砜中的一种。
5.根据权利要求1所述的疫苗冻干保护剂,其特征在于:所述酸碱调节剂为磷酸缓冲液。
6.根据权利要求1所述的疫苗冻干保护剂,其特征在于:所述抗氧化剂为维生素D、维生素E、硫代硫酸钠中的一种。
7.根据权利要求1所述的疫苗冻干保护剂,其特征在于:按重量份数计,还包括谷氨酸钠10-20份。
8.根据权利要求1所述的疫苗冻干保护剂,其特征在于:按重量份数计,还包括葡聚糖5-15份。
9.根据权利要求1所述的疫苗冻干保护剂,其特征在于:按重量份数计,包括透明质酸25-30份,聚天冬氨酸20-25份。
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CN107174663A (zh) | 2017-09-19 |
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