CN107164418A - 一种透性化细胞制备茶氨酸的方法 - Google Patents
一种透性化细胞制备茶氨酸的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107164418A CN107164418A CN201710445408.3A CN201710445408A CN107164418A CN 107164418 A CN107164418 A CN 107164418A CN 201710445408 A CN201710445408 A CN 201710445408A CN 107164418 A CN107164418 A CN 107164418A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- permeabilized cells
- thalline
- theanine
- borate buffer
- prepare
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- DATAGRPVKZEWHA-YFKPBYRVSA-N N(5)-ethyl-L-glutamine Chemical compound CCNC(=O)CC[C@H]([NH3+])C([O-])=O DATAGRPVKZEWHA-YFKPBYRVSA-N 0.000 title claims abstract description 50
- 229940026510 theanine Drugs 0.000 title claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 31
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 102000009127 Glutaminase Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010073324 Glutaminase Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 38
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000035699 permeability Effects 0.000 claims description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 4
- 241000204735 Pseudomonas nitroreducens Species 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 4
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 claims description 4
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 4
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 claims description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 230000009514 concussion Effects 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 229910052564 epsomite Inorganic materials 0.000 claims description 3
- XWBDWHCCBGMXKG-UHFFFAOYSA-N ethanamine;hydron;chloride Chemical class Cl.CCN XWBDWHCCBGMXKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 6
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 abstract description 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- QMVPMAAFGQKVCJ-UHFFFAOYSA-N citronellol Chemical compound OCCC(C)CCC=C(C)C QMVPMAAFGQKVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 2
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- QMVPMAAFGQKVCJ-SNVBAGLBSA-N (R)-(+)-citronellol Natural products OCC[C@H](C)CCC=C(C)C QMVPMAAFGQKVCJ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- DATAGRPVKZEWHA-UHFFFAOYSA-N L-gamma-glutamyl-n-ethylamine Natural products CCNC(=O)CCC(N)C(O)=O DATAGRPVKZEWHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235342 Saccharomycetes Species 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002929 anti-fatigue Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- JGQFVRIQXUFPAH-UHFFFAOYSA-N beta-citronellol Natural products OCCC(C)CCCC(C)=C JGQFVRIQXUFPAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000000484 citronellol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种透性化细胞制备茶氨酸的方法，包括（1）制备透性化细胞：首先将含胞内谷氨酰胺酶的菌株进行培养，培养好后离心，收集菌体；用pH9.0‑10.0的0.1 M硼砂缓冲液清洗菌体后，将菌体加入到处理试剂中进行处理，然后离心收集菌体；再用pH9.0‑10.0的0.1 M硼砂缓冲液清洗菌体，收集菌体，即得到透性化细胞；（2）透性化细胞转化法制备天然茶氨酸。本发明的有益效果：方法简便，透性化细胞表观酶活力提高，表现出比游离酶更高的催化合成茶氨酸的活性。所得透性化细胞的酶活达可达到未渗透细胞的5‑10倍。透性化细胞可以重复使用，可显著降低生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用产胞内谷氨酰胺酶的菌体透性化细胞制备茶氨酸的方法。
背景技术
茶氨酸(L-theanine)天然存在，是茶叶特有的一种氨基酸。由于其具有降血压、抗肿瘤、保护神经、放松、抗抑郁、抗疲劳、提高免疫力、减轻体脂等多种生理功能，在食品、保健品方面有着广泛的需求和应用，因此研究者们致力于研究一种可大规模生产，不受资源限制的生产方法。
微生物酶法具有环境污染小、生产周期短、不受资源限制、可大规模生产等优点。目前报道了微生物来源的谷氨酰胺酶酶法生产茶氨酸的方法，如来自硝基还原假单胞菌、假单孢菌属、以及2005年公开的来自香茅醇假单孢菌GEA和2007年公开的来自芽孢杆菌属、霉菌或酵母菌中的1种或2种以上的谷氨酰胺酶， 还有2008年公开了一种利用来自枯草芽孢杆菌的谷氨酰转肽酶生产茶氨酸的方法，在实际生产过程中，发现利用产胞内酶的菌体细胞进行细胞转化来制备茶氨酸
不需要对酶液进行提纯与浓缩处理、不存在发酵液成分带入导致后处理工艺复杂的问题，但是仍旧存在成本高的问题，致使产品价格居高不下，限制了产品的应用。
细胞透性化技术可以不造成细胞裂解以及不破坏细胞内部结构的情况下改善细胞的通透性，使得小分子物质和一些较大分子物质能够自由地进出细胞，从而提高菌体的表观催化活力。采用有机溶剂或者表面活性剂等透性化试剂或加热等物理方法来制备透性化细胞。透性化细胞可以提高表观酶活，并且可以反复使用，可以显著降低成本。
发明内容
本发明的目的在于提供一种方法简便，透性化细胞可重复使用的透性化细胞制备茶氨酸的方法。
本发明的技术解决方案是：
一种透性化细胞制备茶氨酸的方法，其特征是：
（1）制备透性化细胞：
首先将含胞内谷氨酰胺酶的菌株进行培养，培养好后离心，收集菌体；
用pH9.0-10.0的0.1 M硼砂缓冲液清洗菌体后，将菌体加入到处理试剂中进行处理，然后离心收集菌体；再用pH9.0-10.0的0.1 M硼砂缓冲液清洗菌体，收集菌体，即得到透性化细胞；
（2）透性化细胞转化法制备天然茶氨酸：
将步骤（1）得到的透性化细胞置于含0. 2～0. 4M谷氨酰胺和1.5～ 2.5M乙胺盐酸盐的pH 为9～10的50～100mM硼酸缓冲液中，在35～40℃下进行2～8小时的酶反应，制备得到茶氨酸。
将菌体加入到处理试剂中进行处理，是将菌体加入50%的乙醇中，25℃下震荡处理1min；或是将菌体重新置于pH9.0-10.0的0.1 M硼砂缓冲液中，50℃加热10min，冷却。
步骤（1）中将含胞内谷氨酰胺酶的菌株进行培养的具体方法是：在发酵培养基中，以g/L计：葡萄糖12、酵母抽提物0.9、谷氨酸钠12、MgSO4·7H2O 0.5、K2HPO40.6、KH2PO40.6、EDTA-Fe 0.1，pH 6.8-7.0，35-37℃，200 rpm的条件下培养可产谷氨酰胺酶的硝基还原假单胞菌16 h。
步骤（1）中的处理试剂还可以使用：丙酮、土温80等有机溶剂或表面活性剂等。
一种透性化细胞在制备固定化细胞中的应用，其特征是：将透性化细胞加入到海藻酸钠溶液中，再逐滴滴入到氯化钙溶液中，制备得到固定化细胞。
本发明的有益效果：方法简便，透性化细胞表观酶活力提高，表现出比游离酶更高的催化合成茶氨酸的活性。所得透性化细胞的酶活达可达到未渗透细胞的5-10倍。透性化细胞可以重复使用，可显著降低生产成本。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
实施例1：
获得菌体：在发酵培养基中（以g/L计）：葡萄糖12、酵母抽提物0.9、谷氨酸钠12、MgSO4·7H2O 0.5、K2HPO40.6、KH2PO40.6、EDTA-Fe 0.1，pH 6.8-7.0，35-37℃，200 rpm的条件下培养可产谷氨酰胺酶的硝基还原假单胞菌16 h，离心，收集菌体。
透性化细胞的制备：用0.1 M硼砂缓冲液（pH9.0-10.0）清洗菌体后，将菌体加入50%的乙醇中，25℃下震荡处理1min。在4000rpm、4℃下离心5min后，沉淀用0.1 M硼砂缓冲液（pH10.0）洗涤，弃去上清液，取沉淀即获得透性化细胞。
制备茶氨酸：按照体系1.0 U/mL加酶量添加透性化细胞，在含谷氨酰胺0.3M、乙胺盐酸盐1.5M的50mM硼酸缓冲液（Na2B4O7-NaOH、pH10）中，在37℃下进行6小时的酶反应，合成得到茶氨酸。
实施例2：
获得菌体：在发酵培养基中（以g/L计）：葡萄糖12、酵母抽提物0.9、谷氨酸钠12、MgSO4·7H2O 0.5、K2HPO4 0.6、KH2PO4 0.6、EDTA-Fe 0.1，pH 6.8-7.0，35-37℃，200 rpm的条件下培养可产谷氨酰胺酶的硝基还原假单胞菌16 h，离心，收集菌体。
透性化细胞的制备：用0.1 M硼砂缓冲液（pH9.0-10.0）清洗菌体后，将菌体重新置于0.1 M硼砂缓冲液（pH9.0-10.0）中，50℃加热10min，冷却。在4000rpm、4℃下离心5min后，沉淀用0.1 M硼砂缓冲液（pH10.0）洗涤，弃去上清液，取沉淀即获得透性化细胞。
制备茶氨酸：添加1.5 U/mL透性化细胞，在含谷氨酰胺0.3M、乙胺盐酸盐1.0M的50mM硼酸缓冲液（Na2B4O7-NaOH、pH10）中，在37℃下进行8小时的酶反应，合成了茶氨酸。
实施例3：
一种透性化细胞在制备固定化细胞中的应用，将透性化细胞加入到海藻酸钠溶液中，再逐滴滴入到氯化钙溶液中，制备得到固定化细胞。
Claims (4)
1.一种透性化细胞制备茶氨酸的方法，其特征是：
（1）制备透性化细胞：
首先将含胞内谷氨酰胺酶的菌株进行培养，培养好后离心，收集菌体；
用pH9.0-10.0的0.1 M硼砂缓冲液清洗菌体后，将菌体加入到处理试剂中进行处理，然后离心收集菌体；再用pH9.0-10.0的0.1 M硼砂缓冲液清洗菌体，收集菌体，即得到透性化细胞；
（2）透性化细胞转化法制备天然茶氨酸：
将步骤（1）得到的透性化细胞置于含0. 2～0. 4M谷氨酰胺和1.5～ 2.5M乙胺盐酸盐的pH 为9～10的50～100mM硼酸缓冲液中，在35～40℃下进行2～8小时的酶反应，制备得到茶氨酸。
2. 根据权利要求1所述的一种透性化细胞制备茶氨酸的方法，其特征是：将菌体加入到处理试剂中进行处理，是将菌体加入50%的乙醇中，25℃下震荡处理1min；或是将菌体重新置于pH9.0-10.0的0.1 M硼砂缓冲液中，50℃加热10min，冷却。
3. 根据权利要求1或2所述的一种透性化细胞制备茶氨酸的方法，其特征是：步骤（1）中将含胞内谷氨酰胺酶的菌株进行培养的具体方法是：在发酵培养基中，以g/L计：葡萄糖12、酵母抽提物0.9、谷氨酸钠12、MgSO4·7H2O 0.5、K2HPO40.6、KH2PO40.6、EDTA-Fe 0.1，pH6.8-7.0，35-37℃，200 rpm的条件下培养可产谷氨酰胺酶的硝基还原假单胞菌16 h。
4.一种透性化细胞在制备固定化细胞中的应用，其特征是：将透性化细胞加入到海藻酸钠溶液中，再逐滴滴入到氯化钙溶液中，制备得到固定化细胞。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710445408.3A CN107164418A (zh) | 2017-06-14 | 2017-06-14 | 一种透性化细胞制备茶氨酸的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710445408.3A CN107164418A (zh) | 2017-06-14 | 2017-06-14 | 一种透性化细胞制备茶氨酸的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107164418A true CN107164418A (zh) | 2017-09-15 |
Family
ID=59826103
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710445408.3A Pending CN107164418A (zh) | 2017-06-14 | 2017-06-14 | 一种透性化细胞制备茶氨酸的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107164418A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060105437A1 (en) * | 2002-08-06 | 2006-05-18 | Takashi Tachiki | Process for producing theanine |
| CN101343618A (zh) * | 2008-08-19 | 2009-01-14 | 江南大学 | 天然茶氨酸的制备方法 |
| CN101824407A (zh) * | 2009-03-04 | 2010-09-08 | 重庆医科大学 | 基于组织工程方法构建新型高效生物催化剂 |
| CN104087535A (zh) * | 2014-07-10 | 2014-10-08 | 南通励成生物工程有限公司 | 生物法制备茶氨酸的方法 |
-
2017
- 2017-06-14 CN CN201710445408.3A patent/CN107164418A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060105437A1 (en) * | 2002-08-06 | 2006-05-18 | Takashi Tachiki | Process for producing theanine |
| CN101343618A (zh) * | 2008-08-19 | 2009-01-14 | 江南大学 | 天然茶氨酸的制备方法 |
| CN101824407A (zh) * | 2009-03-04 | 2010-09-08 | 重庆医科大学 | 基于组织工程方法构建新型高效生物催化剂 |
| CN104087535A (zh) * | 2014-07-10 | 2014-10-08 | 南通励成生物工程有限公司 | 生物法制备茶氨酸的方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| WANMENG MU ET AL: ""An overview of biological production of L-theanine"", 《BIOTECHNOLOGY ADVANCES》 * |
| 帅玉英等: ""茶氨酸的研究进展"", 《食品与发酵工业》 * |
| 朱义松: ""固定化及透性化对瑞士乳杆菌L7生产共轭亚油酸的影响"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 * |
| 李元等: ""酶催化合成L-茶氨酸的研究进展"", 《食品科学》 * |
| 赵伟睿: ""微生物细胞通透性改善方法与策略"", 《中国生物工程杂志》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110016446B (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其生产聚谷氨酸的方法 | |
| CN100500832C (zh) | 枯草芽孢杆菌zjb-063及其应用 | |
| CN103266152B (zh) | 一种利用固定化海藻糖合成酶生产海藻糖的方法 | |
| CN102337233B (zh) | 一株恶臭假单胞菌及其转化生产烟酸或异烟酸方法 | |
| CN111235133B (zh) | 嗜几丁质类芽孢杆菌几丁质酶基因及其克隆表达与应用 | |
| CN105316257A (zh) | 一种解木糖赖氨酸芽孢杆菌及其制备α-酮酸的方法 | |
| CN102994429B (zh) | 微生物催化制备(S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸酯的方法及菌株 | |
| CN104911135B (zh) | 一种海藻糖合酶生产菌株及其应用 | |
| CN105567584B (zh) | 一种能拆分（＋/-）γ-内酰胺得到（+）γ-内酰胺的芽孢杆菌及其筛选和应用 | |
| CN107164418A (zh) | 一种透性化细胞制备茶氨酸的方法 | |
| CN108410749B (zh) | 海洋低温(+)γ-内酰胺酶不对称水解制备(-)γ-内酰胺的方法 | |
| CN102433289B (zh) | 一株产瓜氨酸的菌株及用该菌株生物合成瓜氨酸的方法 | |
| CN105586289B (zh) | 一种能拆分(+/-)γ-内酰胺得到(-)γ-内酰胺的假单胞菌及其筛选和应用 | |
| KR100991907B1 (ko) | 테아닌의 제조법 | |
| CN102433290A (zh) | 一株产瓜氨酸的菌株及用该菌株生物合成瓜氨酸的方法 | |
| CN105483100B (zh) | 一种诱导海洋微生物发酵产κ-卡拉胶酶的组合诱导物 | |
| CN104789489A (zh) | 一株高产精氨酸脱亚胺酶的蜡样芽孢杆菌及其应用 | |
| JP3122990B2 (ja) | Ｏ−メチル−ｌ−チロシン及びｌ−３−（１−ナフチル）アラニンの製造方法 | |
| JPH0761265B2 (ja) | サ−マス属に属する新菌株、新規なβ−ガラクトシダ−ゼ及びその製造法 | |
| JP4139502B2 (ja) | ピロール−２−カルボン酸の製造法 | |
| JP2785323B2 (ja) | β―グルコシダーゼ及びその製造法 | |
| JP3026312B2 (ja) | キチン分解物の製造法 | |
| JPS60241888A (ja) | 新規ヒダントイナ−ゼ | |
| JP4613322B2 (ja) | 好熱性細菌によるキトサンオリゴ糖の製造方法 | |
| CN109706112A (zh) | 一种利用低温淀粉酶促进放线菌生长的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: Hangzhou City, Zhejiang province Binjiang District 310053 shore road 548 Applicant after: ZHEJIANG CHINESE MEDICAL University Address before: Spring Street Long Island Hangzhou city Binjiang District Zhejiang province 310053 Building No. 7 Applicant before: ZHEJIANG CHINESE MEDICAL University |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170915 |