CN107164340A - 一种鲜猪血中超氧化物歧化酶的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种鲜猪血中超氧化物歧化酶的提取方法，包括以下步骤：鲜猪血离心分离，收集猪血球，加入1‑3倍饱和NaCl溶液，高速搅拌30min，然后浸泡10‑16h，离心分离，弃沉淀，取上清液；加入一定体积比的2％鞣酸，在50‑60rpm絮凝沉淀1‑2h，离心分离，去沉淀，取上清液；然后加入一定量醋酸钠，用醋酸调节pH至3.0‑6.0，在2℃下静置30min，5000rpm离心10min，去除沉淀，取上清液，然后超滤浓缩，冷冻干燥即得SOD成品。

Description

一种鲜猪血中超氧化物歧化酶的提取方法
技术领域
本发明涉及酶制品技术领域，具体涉及一种鲜猪血中超氧化物歧化酶的提取方法。
背景技术
超氧化物歧化酶(SOD)是一种在体内以超氧化阴离子自由基为底物的金属酶，能清除超氧阴离子自由基等中间物的毒性，有效地预防活性氧对生物体的毒害作用，SOD应用于临床治疗，具有抗老化，抗辐射，抗炎症等效果，甚至对自身免疫病都有一定的疗效，也被用于高级化妆品、食品、饮料等领域。
超氧化物歧化酶广泛存在于自然界各种生物体内，而且目前动物血液是生产超氧化物歧化酶的主要原料，而猪血来源丰富且价格低廉，用于提取超氧化物歧化酶具有很好的市场前景。目前，从猪血中提取氧化物歧化酶大多用传统工艺：乙醇氯仿提取，热变性、硫酸铵盐析和丙酮沉淀等方法获得SOD，工艺流程复杂，生产成本高，酶活性损失大，并且使用了大量有毒有机溶剂，对环境有一定的影响。因此有必要对鲜猪血中超氧化物歧化酶提取工艺进行改造，为企业规模化生产降低成本，提高市场竞争力。
发明内容
本发明提供一种种鲜猪血中超氧化物歧化酶的提取方法，采用先进分离纯化技术，达到工艺简单，提取效率高，酶活损失小，对环境无污染的目的。
为解决上述问题，本发明采用的技术方案如下：以鲜猪血为材料，经离心分离，收集猪血球，加入2-3倍饱和NaCl溶液，高速搅拌30min，然后浸泡10-16h，离心分离，弃沉淀，取上清液，加入上清液体积比0.3％的2％鞣酸，用HCl溶液调剂pH6-7，在50-60rpm下，絮凝沉淀1-2h，离心分离，去沉淀，取上清液；在清液中加入一定量醋酸钠，用醋酸调节pH至3.0-6.0，在2℃下静置30min，5000rpm离心10min，去除沉淀，取上清液，然后超滤浓缩，冷冻干燥，即得SOD成品。
具体步骤：
步骤一：鲜猪血中加入一定抗凝血剂，充分搅拌后以3000rpm离心20-30min，收集血球；
步骤二：将猪血球与饱和NaCl溶液按体积比1：1～3比例混合，高速搅拌30min，室温静置10-16h，然后5000rpm离心分离，收集上清液；
步骤三：将上述上清液与2％鞣酸按1000：3比例混合，在50-60rpm下，絮凝沉淀1-2h，离心分离，去沉淀，收集上清液；
步骤四：上述上清液中加入饱和醋酸钠溶液至终浓度为30％，用醋酸调节pH至3.0-6.0，在2℃下静置30min，8000rpm离心10min，去除沉淀，取上清液；
步骤五：超滤器将上述上清液浓缩，然后冷冻干燥，即得SOD产品。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
本发明采用饱和NaCl溶液提取，鞣酸絮凝沉淀与醋酸钠沉淀结合，再结合超滤浓缩纯化，不需要任何有机溶剂，安全环保，并且工艺路线简单，成本低，所得SOD产品提取率高，酶活性损失小。可用于企业大规模化生产，提高市场竞争力。
本发明采用饱和NaCl溶液提取，并且采用高速搅拌，使得猪血球破膜，释放出血红蛋白，经离心分离除去血红蛋白，此技术避免了使用有机溶剂，并且除去了血红蛋白，且酶活性不损失；采用鞣酸絮凝沉淀与醋酸钠沉淀相结合的方法，使得SOD酶活性损失小，且方法简单操作；最后在结合超滤浓缩，保证了产品的高纯度，使得纯度能达到96％。
具体实施方式
为了更好的对本发明的技术方案进行理解，下面通过具体的实施例进行阐述和说明。
实施例1
步骤一：鲜猪血中加入一定抗凝血剂，充分搅拌后以3000rpm离心20-30min，收集血球；
步骤二：将猪血球与饱和NaCl溶液按体积比1：1比例混合，高速搅拌30min，室温静置10-16h，然后5000rpm离心分离，收集上清液；
步骤三：将上述上清液与2％鞣酸按1000：3比例混合，在50-60rpm下絮凝沉淀1-2h，离心分离，去沉淀，收集上清液；
步骤四：上述上清液中加入饱和醋酸钠溶液至终浓度为30％，用醋酸调节pH至3.0，在2℃下静置30min，8000rpm离心10min，去除沉淀，取上清液；
步骤五：用超滤器将上述上清液浓缩至原来的1/3，然后冷冻干燥，即得SOD产品。
实施例2
步骤一：鲜猪血中加入一定抗凝血剂，充分搅拌后以3000rpm离心20-30min，收集血球；
步骤二：将猪血球与饱和NaCl溶液按体积比1：3比例混合，高速搅拌30min，室温静置10-16h，然后5000rpm离心分离，收集上清液；
步骤三：将上述上清液与2％鞣酸按1000：3比例混合，在50-60rpm下絮凝沉淀1-2h，离心分离，去沉淀，收集上清液；
步骤四：上述上清液中加入饱和醋酸钠溶液至终浓度为30％，用醋酸调节pH至6.0，在2℃下静置30min，8000rpm离心10min，去除沉淀，取上清液；
步骤五：用超滤器将上述上清液浓缩至原来的1/3，然后冷冻干燥，即得SOD产品。
实施例3
步骤一：鲜猪血中加入一定抗凝血剂，充分搅拌后以3000rpm离心20-30min，收集血球；
步骤二：将猪血球与饱和NaCl溶液按体积比1：2比例混合，高速搅拌30min，室温静置10-16h，然后5000rpm离心分离，收集上清液；
步骤三：将上述上清液与2％鞣酸按1000：3比例混合，在50-60rpm下絮凝沉淀1-2h，离心分离，去沉淀，收集上清液；
步骤四：上述上清液中加入饱和醋酸钠溶液至终浓度为30％，用醋酸调节pH至4.5，在2℃下静置30min，8000rpm离心10min，去除沉淀，取上清液；
步骤五：用超滤器将上述上清液浓缩至原来的1/3，然后冷冻干燥，即得SOD产品。
尽管这里参照本发明的解释性实施例对本发明进行了描述，上述实施例仅为本发明较佳的实施方式，本发明的实施并不受上述实施例的限制，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种鲜猪血中超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：鲜猪血预处理：鲜猪血经连续离心机离心分离，收集猪血球；
步骤二：往猪血球中加入1-3倍体积的饱和NaCl溶液，高速搅拌30min，室温静置10-16h，然后离心分离，收集上清液；
步骤三：将上述上清液与2％鞣酸按一定比例混合，用HCl调节pH6-7，在50-60rpm絮凝沉淀1-2h，离心分离，去沉淀，收集上清液；
步骤三：上述上清液中加入饱和醋酸钠溶液至终浓度为30％，用醋酸调节pH至3.0-6.0，在2℃下静置30min，5000rpm离心10min，去除沉淀，取上清液；
步骤四：将上述上清液进行超滤浓缩，然后冷冻干燥，即得SOD产品。
2.如权利要求1所述的一种鲜猪血中超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，步骤三中所述上清液与鞣酸体积比为1000：3。
3.如权利要求1所述的一种鲜猪血中超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，所用超滤采用截留分子量为60000的毛细管式超滤膜。
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