CN107158181A

CN107158181A - 一种天南星炮制方法及其制品

Info

Publication number: CN107158181A
Application number: CN201710516850.0A
Authority: CN
Inventors: 杨书彬; 南洋; 陶荟竹; 杨绍杰; 卢春雪
Original assignee: Heilongjiang University of Chinese Medicine
Current assignee: Heilongjiang University of Chinese Medicine
Priority date: 2017-06-29
Filing date: 2017-06-29
Publication date: 2017-09-15

Abstract

本发明公开了一种天南星炮制方法，包括如下步骤：(1)取天南星干燥块茎，置于压力为0.15±0.02Mpa的蒸制容器内蒸至内无干心；(2)将经蒸制后的天南星切成薄片，干燥；(3)将酸性乙醇水溶液均匀喷洒至干燥后的天南星薄片上，拌匀，立即放置在50±5℃的密闭环境中，闷润48±4h，取出干燥即得制南星。本发明提供的天南星炮制方法缩短了生产时间，提高了生产效率，减少了环境污染，充分保留了天南星的有效成分，临床使用更加安全，避免了炎热天气情况下长时间水浸泡引起的天南星发霉变质问题，同时，采用酸性乙醇水溶液作为辅料，可以杀死药材表面霉菌，使药材易于保存，也有利于药材中有效成分溶出，调高临床疗效。

Description

一种天南星炮制方法及其制品

技术领域

本发明涉及一种中药炮制方法，具体涉及一种天南星的炮制方法及其制品。

背景技术

天南星为临床常用中药，来源于天南星科植物天南星Arisaemaerubescens(Wall.)Schott、异叶天南星A.heterophyllumBlume、东北天南星A.amurenseMaxim.干燥块茎，其性温，味苦、辛，具有燥湿化痰，祛风解痉之功能，主治风疾眩晕、顽痰咳嗽及由于风邪夹痰、寒痰所引起众多疾病。然而，文献记载天南星有毒，毒性特征主要表现为对皮肤黏膜强烈刺激性，可致口唇肿痛、失音、流涎、痉挛、呼吸困难，甚至窒息死亡，国家卫生部早已把天南星列入28种毒性中药之一，因此必须经过炮制减毒后方能内服。天南星毒性问题早已被历代医药学家所认识，但对于引起毒性作用的物质却一直没有被确定下来，尤其是国内对天南星科常用药用植物半夏、天南星等药材的刺激性或毒性物质一直存在较大争议，早期有学者推测认为天南星药材中含有的生物碱或苷类成分为其麻辣刺激性的主要成分。国内对天南星科植物毒性物质研究开始较晚，起步于上世纪80年代，真正对毒性物质深入研究开始于2000年以后，目前取得显著的研究成果。钟凌云等查阅了国内外对于天南星科植物的刺激性成分研究的相关文献，均认为刺激性成分是天南星科植物中所含有的特殊生物代谢产物草酸钙针晶，刺激性被认为是草酸钙针晶单独起作用、草酸钙针晶与酶类物质的共同作用以及草酸钙针晶通过特殊的黏液细胞起作用。为了深入探讨研究天南星科植物中刺激性物质，吴皓等对天南星科几种常用药材中草酸钙针晶进行提取分离，并采用药理学实验方法进一步证明了产生刺激性作用的主要成分为草酸钙针晶，被称为“毒针晶”。其组成成分分析表明，毒针晶是由草酸钙和蛋白质组成，并含有微量多糖。毒性的产生是由于针晶的物理刺激与蛋白的化学刺激共同作用结果。其中，针晶是产生刺激性毒性的主要物质基础，刺激毒性与其结构形态有关，传统炮制过程中使用明矾减毒机制可能是其Al³⁺加速破坏了草酸钙针晶的形态结构。为了进一步研究其毒性特点，探讨针晶中所含凝集素蛋白与毒性的相关性，研究结果表明，天南星科四种有毒中药毒针晶中均带有共性的凝集素蛋白成分，且是毒针晶蛋白中的主要毒蛋白，80℃以下具有凝集活性，50℃以下凝集活性最强，85℃以上凝集活性全部丧失，而且毒针晶的毒性与毒针晶中带有的凝集素蛋白含量呈正相关。毒针晶产生刺激性毒性的机制在于毒针晶刺入组织后，产生机械刺激性，同时毒针晶上的凝集素蛋白随毒针晶进入组织，诱导中性粒细胞向刺入部位迁移，促使巨噬细胞活化，并刺激巨噬细胞释放炎症介质及导致严重的组织水肿和炎症反应。

现行版药典中，收载天南星的炮制品有制南星和胆南星两种，其中制南星是天南星药材主流炮制品，多采用药典法进行炮制，广泛应用于临床。目前除药典炮制法外，制南星还存在其它几种炮制方法，现将制南星炮制方法归纳总结如下：

(1)药典炮制法：采用中药炮制复制法，即取净选天南星，大小分档后，用清水浸泡，每日换水2～3次，如水面起白沫，换水后加白矾(每100kg天南星，加白矾2kg)，泡1d后，再换水漂至切开口尝微有麻舌感时取出。另取生姜片、白矾置锅内加适量水煮沸后，倒入天南星共煮至内无干心时取出，除去姜片，晒至四至六成干，切薄片，干燥即得。该方法在整个炮制过程中，存在诸多弊端。首先，药材在水中经过长时间浸泡，会导致药材中水溶性成分流失，夏季还会发霉变质；其次，药材在姜矾水溶液中经过长时间加热共煮，会导致药材中对热不稳定成分的破坏；再次，在炮制过程中，使用白矾作为辅料，会使炮制品中A1³⁺含量增加，A1³⁺的摄入量过多，会引起大脑思维、意识及记忆等神经功能的损伤，甚至会引起老年痴呆；最后，整个炮制过程所需时间较长，炮制各环节控制多依靠经验进行判断，炮制品质量控制缺乏科学性。

(2)制南星的炮制方法：取生天南星过筛，按大小分开；将净选过的天南星放入洗药机，用流动水快速清洗干净；将清洗过的天南星置于润药机内进行热润，加压0.4MPa，温度50℃，加水量为天南星的4倍，大者浸润时间2小时，小者浸润1小时，浸泡至透心为度；将浸润过的天南星取出滤干，转入至用水煮沸的生姜片和白矾的水液中，每100kg生品用生姜12.5kg，白矾6kg，煮沸2小时，水液面要高于药物；煮制后，取出洗净，干燥至四至六成干，切成薄片，于60℃真空度为0.04MPa下烘干。该炮制方法虽然能够通过加压、真空一定程度缩短润药和干燥药材时间，调高炮制效率，但存在与药典炮制方法同样的缺点，达不到科学炮制的目的。

(3)天南星的中药炮制方法：取天南星生品置于密闭容器中，加体积比浓度为65％～80％的乙醇溶液闷润36～96小时；将闷润后的天南星取出置煮制容器中，加生姜汁，混匀，煮至姜汁被吸干，晾至四至六成干，干燥得天南星炮制品。该炮制方法虽然采用乙醇溶液闷润药材，减少了传统炮制方法中长时间水浸泡过程中而致的有效成分损失，但药材组织细胞中草酸钙毒针晶的结构没有得到破坏，达不到最佳减毒效果，存在一定弊端。

(4)一种天南星的炮制方法：取重量份数为80～120份天南星，加清水至浸没天南星，浸泡一天至透捞出；取重量份数为5～15份生石灰块，加水至浸没生石灰块，调成混悬液，过筛得石灰液；将石灰液加到已浸透的天南星中，至浸没天南星，搅匀浸制，干燥即得成品。采用本法炮制天南星，虽然未使用白矾作为辅料，会消除A1³⁺带来的毒副作用，但同样也存在诸多弊端。首先，药材在水中经过长时间浸泡，夏季不但会发霉变质，还会导致药材中水溶性成分流失；其次，炮制过程中，使用强碱性石灰液浸泡药材，会导致药材中黄酮类成分结构破坏或流失，影响药效；最后，药材在强碱溶液中浸泡，虽然能使毒针晶中凝集素蛋白变性，但草酸钙针晶的结构没有破坏，达不到彻底减毒的目的。

根据目前对天南星药材的毒性作用及毒性物质的认识，本发明在现有制南星炮制方法的基础上，通过科学实验研究，对原有的炮制方法进行改进并优化，使制南星炮制方法更为科学合理，以期更好地实现减毒增效目的，进而保证制南星炮制品质量，提高其临床疗效。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种天南星炮制方法及其制品。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种天南星炮制方法，包括如下步骤：

(1)取天南星干燥块茎，置于压力为0.15±0.02Mpa的蒸制容器内蒸至内无干心；

(2)将经蒸制后的天南星切成薄片，干燥；

(3)将酸性乙醇水溶液均匀喷洒至干燥后的天南星薄片上，拌匀，立即放置在50±5℃的密闭环境中，闷润，取出干燥即得制南星。

优选的，步骤(1)中蒸制温度为121±10℃。

优选的，步骤(1)中蒸制时间为10～15min。

优选的，步骤(2)中天南星薄片的厚度为1-2mm。

优选的，步骤(3)中酸性乙醇水溶液的pH为4±0.5，该溶液由乙醇及盐酸混合而成。

优选的，步骤(3)中焖润时间为48±4h。

优选的，步骤(3)中酸性乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为50％。

优选的，步骤(3)中酸性乙醇水溶液的质量为干燥后的天南星薄片质量的0.5～0.6倍。

本发明还提供了一种天南星制品，按照如上所述的任一种方法制备得到。

本发明基于药材组织中草酸钙晶体在酸性条件下易于溶解，凝集素蛋白在加热和酸性乙醇溶液中变性失去活性的性质，采用酸性乙醇水溶液作为炮制辅料，以炮制品中Ca²⁺含量变化为评价指标，通过对炮制过程中乙醇溶液的浓度、乙醇溶液的pH、密闭闷润温度及闷润时间四个主要影响因素进行考察，优选得到制南星的一种最佳炮制方法。

本发明在现有天南星炮制方法的基础上，打破了传统观念的束缚，针对目前天南星几种炮制方法的优点和不足，及目前对天南星药材的毒性作用及毒性物质的认识，通过科学实验研究，对原有的炮制方法进行改进并优化，使天南星炮制方法更为科学合理，以期更好地实现减毒增效目的，进而保证天南星炮制品的质量，提高其临床疗效，使其更好的服务于人类健康。

本发明的炮制方法与以往炮制方法比较，存在以下优点：

1、缩短了生产时间，提高了生产效率，减少了环境污染；

2、减少了辅料用量，节约了生产成本，简化了生产流程，充分保留了天南星的有效成分；

3、炮制过程中未使用白矾，可避免白矾残留过量摄入A1³⁺对神经系统等的毒害，保证临床使用安全；

4、解决了长时间水浸泡或煮沸造成的有效成分损失问题，以及炎热天气情况下长时间水浸泡引起的天南星发霉变质问题；

5、酸性乙醇作为辅料，既可以杀死药材表面霉菌，使药材易于保存，也有利于药材中有效成分溶出，调高临床疗效。

具体实施方式

现结合实施例对本发明进一步详细的说明。应当理解，本实施例仅用于说明本发明，而不用于限定本发明的保护范围。

实施例1一种天南星的炮制方法

(1)取天南星干燥块茎，经净选分档后，置于压力为0.15Mpa的蒸制容器内于121℃蒸至内无干心(约10-15min)；

(2)将经蒸制后的天南星切成1-2mm的薄片，干燥；

(3)将质量为干燥后的天南星薄片质量的0.5-0.6倍的pH为4的酸性乙醇水溶液(乙醇体积百分比为50％，其余为盐酸)均匀喷洒至干燥后的天南星上，拌匀，立即放置在50±5℃的密闭环境中，闷润48h，取出干燥即得制南星。

实施例2一种天南星的炮制方法

(1)取天南星干燥块茎，经净选分档后，置于压力为0.13Mpa的蒸制容器内于123℃蒸至内无干心(约10-15min)；

(2)将经蒸制后的天南星切成1-2mm的薄片，干燥；

(3)将质量为干燥后的天南星薄片质量的0.5-0.6倍的pH为4.5的酸性乙醇水溶液(乙醇体积百分比为50％，其余为盐酸)均匀喷洒至干燥后的天南星上，拌匀，立即放置在50±5℃的密闭环境中，闷润50h，取出干燥即得制南星。

实施例3效果实验

为了评本发明炮制方法的合理性，本实验以A1³⁺含量差异、眼结膜刺激性、急性毒性及亚急性毒性为评价方法，对按照本发明方法炮制品安全性进行评价，并与天南星生品、药典法炮制品进行比较，进而阐明天南星新炮制方法的科学性。

一、铝离子含量测定

由于药典法炮制天南星时，采用白矾作为炮制辅料，白矾水溶液中含有大量的A1³ ⁺，人体摄入A1³⁺量过多，会引起大脑思维、意识及记忆等神经功能损伤，甚至会引起老年痴呆。本实验对天南星生品、药典法炮制品和本发明的新法炮制品进行了A1³⁺含量分析和比较，证实论本发明方法的安全性及炮制方法的可行性。

1、实验材料

1.1实验试剂

乙二胺四醋酸二钠(天津市瑞金特化学有限公司，批号：20130620，分析纯)；氧化锌(天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20131108，分析纯)；硫酸锌(天津市密欧化学试剂有限公司，批号：20080716，分析纯)；十二水合硫酸铝钾(广东光华化学厂有限公司，批号：20070830，分析纯)；铬黑T指示剂(天津市光复精细化工研究所，批号：20120307)；盐酸、冰乙酸、氨水、乙酸铵、甲基红、二甲酚橙均为分析纯。

1.2实验仪器

常规实验器材，AB204-N型电子分析天平(梅特勒-托利多有限公司，中国上海)。

1.3实验药材

天南星采于佳木斯市桦川县松木河林场，为天南星科植物东北天南星ArisaemaamurenseMaxim.的干燥块茎。

天南星药典法炮制品的制备：取净选天南星，大小分档后，用清水浸泡，每日换水2～3次，如水面起白沫，换水后加白矾(每100kg天南星，加白矾2kg)，泡1d后，再换水漂至切开口尝微有麻舌感时取出。另取生姜片、白矾置锅内加适量水煮沸后，倒入天南星共煮至内无干心时取出，除去姜片，晒至四至六成干，切薄片，干燥即得。

天南星新法炮制品的制备：按照实施例1所述的方法制备得到。

2、实验方法

2.1标准液的配制

乙二胺四醋酸二钠(0.05mol/L)：准确称取19g乙二胺四醋酸二钠，加蒸馏水溶解后，定容至1000ml，摇匀即得。

锌滴定液(0.05mol/L)：取硫酸锌15g，加稀盐酸10ml与水适量，加水定容至1000ml，摇匀即得。

乙二胺四醋酸二钠的标定：按《药典》附录XV F下乙二胺四醋酸二钠滴定液进行标定。标定后得出，乙二胺四醋酸二钠溶液浓度为0.04998mol/L。

锌滴定液的标定：按《药典》附录XV F下锌滴定液进行标定。标定后得出，锌滴定液浓度为0.04993mol/L。

2.2测定方法

采用《中国药典》(2015版)中白矾含量测定方法，制天南星供试品溶液的制备方法：精密称取制南星细粉(过65目筛)约2g，置于坩埚中，将坩埚在电炉上低温炭化后，升温至灰化4h后，放置冷却。向坩埚中加入10ml稀盐酸，盖上盖，并置于水浴上加热20分钟后，用5ml热蒸馏水分次冲洗表面皿，并将清洗液放入坩埚中，用25ml水分次洗涤适用于滤过、滤渣等容器后，合并滤液与洗液。滴1滴加甲基红，摇匀，再滴加氨试液至溶液由红色转为黄色，加25ml的pH6.0的醋酸-醋酸铵缓冲液，加25ml乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)，煮5分钟左右，置冷，加入1ml二甲酚橙指示剂，用0.05mol/L锌滴定液，滴定至溶液由黄色转变为橘红色,并用空白试验校正滴定的结果。

2.3方法学考察

2.3.1精密度试验

精密称量0.2g十二水合硫酸铝钾，平行精密称定三份，按照2.2项下测定方法测定，RSD＝0.73％，滴定方法良好。

2.3.2重复性试验

精密称定10份样品，按2.2项下的方法测定白矾含量，同时进行空白试验校正。结果显示，RSD＝0.14％，方法重现性好。

2.3.3稳定性试验

精密称定样品5份，制备供试品溶液，分别放置0、2、4、6、8h后进行滴定，滴定方法同2.2，测得RSD为0.46％，符合含量测定要求。

2.3.4回收率试验

取天南星药典法炮制品2g，平行操作6份，精密称定，置坩埚中，分别精密加入十二水合硫酸铝钾0.1g，按2.2项下自“将坩埚在电炉上低温炭化”起操作，测定白矾中A1³⁺含量，结果见表1。

表1天南星药典法炮制品A1³⁺含量测定

回收率实验结果显示，十二水合硫酸铝钾回收率为98.38％，RSD＝1.75％(n＝6)，表明测定方法具有一定的准确性。

3、实验结果

按2.2项下的方法，对天南星新法炮制品中A1³⁺进行含量测定，并与生南星及药典法炮制品中A1³⁺测定含量进行比较，结果见表2。

表2天南星新法炮制品A1³⁺含量测定

4、小结与讨论

对实验样品进行灼烧灰化处理，使A1³⁺充分游离，再用EDTA滴定。由于A1³⁺在水中容易水解并形成络合物，且A1³⁺与EDTA反应慢，络合物不稳定，所以用反滴定法来测定铝的含量。结果显示，天南星药典法炮制品中A1³⁺含量明显高于生品组及新法炮制组，天南星新法炮制品未经白矾处理，A1³⁺含量比生品组还低，可见经过本发明的方法炮制后，天南星的毒性有所降低。

二、刺激性作用研究

为了进一步证实天南星新法炮制品的刺激性是否降低，本实验采用刺激性试验研究方法，通过观察天南星新法炮制品混悬液对兔眼结膜的刺激性，并与天南星生品及药典法炮制品刺激性强度差异进行比较，用以评价天南星新法炮制品的安全性。

1、实验材料

1.1实验动物

大耳白兔，雌雄不限，体重1.5～2.5kg，健康，双眼无红肿，由黑龙江中医药大学GLP中心提供，动物生产许可证号：SCXK(黑)2013—004。

1.2实验药材

取适量天南星生品、药典法炮制品、新法炮制品适量(按照实施例1所述的方法制备得到)，粉碎后过200目筛。准确称取三种样品粉末适量，加入生理盐水，配置成0.1g/ml混悬液，空白组以生理盐水作为对照，其它各组分别调试成不同的渗透压和pH值混悬液备用。

1.3实验试剂

氯化钠注射液(哈尔滨三联药业有限公司，规格：500ml，批号：140505D6)；75％医用酒精(山东利尔康消毒科技股份有限公司，规格:500ml，批号：1403101A)；其他试剂均为分析纯。

2、实验方法

取健康家兔，于实验前24h检查两眼(包括使用荧光素钠检查)。剔除眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物。将家兔随机分为4组，分别作为天南星生品组、药典法组、新法炮制组和空白组。轻轻拉开兔的下眼睑，使其离开眼球,将各混悬液滴入眼睑内，每只兔眼滴入50μl各混悬液。给药后，轻轻合眼上下眼睑10s左右，以防供试液流出，使样品混悬液和眼充分接触，2min后用30ml左右生理盐水冲洗至家兔肉眼观察兔眼中无任何异物。1h后观察兔眼情况，并通过拍照等记录家兔的刺激性反应情况。

3、评分方法

表中评价的标准为：根据每隔一段时间记载的，观察家兔的眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应情况，并将其转换成分值，相加得总积分，再除以动物数，得到的最后分值，作为判断其刺激程度的依据，见表3和表4。

表3眼刺激性评价标准

表4眼刺激性评分

4、统计分析

实验数据以均数±标准误表示，用SPSS17.0进行数据统计分析。组间比较釆用单因素方差分析，两组间比较采用q检验，以p＜0.01和p＜0.05分别代表极显著性差异和显著性差异。

5、实验结果

药典法组与新法组对兔眼的刺激性作用不明显，与空白组比较，存在极显著性和显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)，尤其生品组对兔眼的刺激性明显，与空白组比较，存在极显著性(P＜0.01)；药典法组和新法组对兔眼结膜的刺激性作用均得到降低，与生品组比较，存在显著性和极显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)；新法组刺激性明显，与药典法组比较，存在极显著性差异(P＜0.01)。结果表明，天南星经药典法和新法炮制后，刺激性作用都得到明显降低，尤其新法炮制品刺激性作用降低更为明显。结果见表5。

表5天南星新法炮制品对家兔眼结膜刺激性影响(n＝6)

注：*P＜0.05**P＜0.01与空白对照组比较；△P＜0.05，△△P＜0.051与生品组比较；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01与药典法组比较。

6、小结与讨论

天南星生品刺激性作用强烈，药典法炮制品对兔眼的刺激性相对减弱，新法炮制品几乎对兔眼没有刺激性，只是对虹膜造成轻度的充血，症状很快便可消失。表明天南星新法炮制品对皮肤黏膜的刺激性得到明显降低，结果证明该炮制方法合理，能够达到降低刺激性作用的目的。

天南星生品对人体的毒副作用主要表现为对皮肤、黏膜的强烈刺激作用，人口嚼生天南星，可使舌、咽、口腔麻木和肿痛，出现黏膜糜烂，音哑、张口困难，甚至呼吸缓慢、窒息等。皮肤接触可致过敏瘙痒，尚有报道称长期使用天南星可引起智力发育障碍。误服本品中毒者，可服稀醋、鞣酸或浓茶、蛋清等洗胃，或服鲜姜汁或鲜姜汤内服解毒。口腔糜烂者，可用双氧水和复方硼酸溶液漱口，并用龙胆紫涂口腔，必要时给以吸氧，或气管切开。如果皮肤接触时产生红肿胀痛等毒性反应时，可以用水或者稀醋酸清洗。

三、急性毒性研究

急性毒性试验是指以观察动物接受单次或24h内多次给药后，动物表现出的毒性反应情况，其目的是尽可能多了解受试药物的毒理学特点，为早期判断该药是否具有研究开发价值提供其毒性强度的信息，也为设计进一步的毒性试验提供参考。为了探讨天南星新法炮制品是否具有毒性及其毒性特点，本试验采用急性毒性实验方法对天南星新法炮制品的毒性进行了研究，以期揭示新法炮制品是否具有毒性及其毒性特点。

1、实验材料

1.1实验动物

ICR种系小鼠(SPF)，体重20±2g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，动物生产许可证号：SCXK(黑)2013—004。

1.2实验仪器

同铝离子含量测定部分。

1.3实验药材

同铝离子含量测定部分。

天南星新法炮制品混悬液的制备：取天南星新法炮制品(按照实施例1所述的方法制备得到)，用粉碎机粉碎成粗粉后，过100目药典筛，得到样品细粉,临用前用蒸馏水混悬，配制成含生药量0.5g/ml的混悬剂，供动物灌胃给药使用。

天南星新法炮制品水煎剂的制备：取天南星新法炮制品(按照实施例1所述的方法制备得到)，用粉碎机粉碎成粗粉后，过24目药典筛，得到样品粗粉。取粗粉适量，加入8倍量蒸馏水浸泡20min后，煎煮30min，提取液离心(3000r/m，10min)，残渣再加入8倍量蒸馏水，再煎煮30min，提取液离心，合并两次提取液，减压回收至含生药量3.0g/ml的浓缩液，置于4℃冰箱内保存备用。

1.4实验试剂

同刺激性作用研究部分。

2、实验环境

实验动物饲养于通风、避光环境中，温度(24±2)℃，相对湿度55％～70％，明暗交替(12h:12h)，动物自由获取食物和水。实验前动物在实验室饲养一周，使之适应环境，并于每日上午8点进行实验。

3、实验方法

3.1天南星新法炮制品给药剂量预实验

3.1.1天南星新法炮制品混悬剂对小鼠死亡率的影响

取小鼠40只，禁食16h后(不禁水)，按体重随机分为空白组、生品组、药典法组和新法组，每组10只，雌雄各半。各组分别以最高浓度(0.5g/ml)、最大给药体积(0.4ml/10g)一次灌胃各样品混悬剂(相当于人用量的156倍)，空白组灌胃给予同体积的蒸馏水。连续观察7天，详细记录各组小鼠毒性反应情况。

3.1.2天南星新法炮制品水煎剂对小鼠死亡率的影响

取小鼠40只，禁食16h后(不禁水)，按体重随机分为空白组、生品组、药典法组和新法组，每组10只，雌雄各半。分别以最高浓度(3.0g/ml)、最大给药体积(0.4ml/10g)一次灌胃各样品水煎剂(相当于人用量的933倍)，空白组灌胃给予同体积的蒸馏水。连续观察7天，详细记录各组小鼠毒性反应情况。

3.2天南星新法炮制品水煎剂最大给药量试验

取小鼠40只，禁食16h后(不禁水)，按体重随机分为空白组和新法组，每组20只，雌雄各半。新法组以最高浓度(3.0g/ml)、最大给药体积(0.4ml/10g)一日3次灌胃给予水煎剂，每次给药间隔时间4h，空白组平行灌胃给予同体积蒸馏水。连续观察14天，详细记录各组小鼠毒性反应表现和特点，毒性反应出现和消失的时间，观察小鼠的活动和行为表现，并计算各组小鼠体重变化率。通过总给药量可推算出相当于临床用药量及其倍数。

4、统计分析

实验数据以均数±标准误表示，用SPSS17.0进行数据统计分析。组间比较釆用单因素方差分析，两组间比较采用q检验，以p<0.05，p<0.01分别代表显著性差异和极显著性差异。

体重变化率＝(当时体重-原始体重)/原始体重×100％

5、实验结果

5.1天南星新法炮制品混悬剂对小鼠行为体征及死亡率的影响

生品组小鼠在给药期间个别小鼠表现食少，大便溏稀现象，个别小鼠出现死亡的情况。新法组和药典法组小鼠给药后，均未出现食少，精神状态萎靡、少动、流涎、竖毛、大便湿软等情况，活动行为正常，未见有小鼠死亡和明显毒性反应。生品组、药典法组及新法组小鼠给药后，体重增长均受到影响，与空白组比较，存在极显著性差异和显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)；药典法组和新法组小鼠给药后，体重增长明显，与空白组比较，均存在显著性差异(P＜0.05)；药典法组和新法组小鼠给药后，体重增长无明显差异。结果表明，一次给药无法测出新法炮制品混悬剂的LD₅₀剂量，故采用多次给药测定最大给药量。结果见表6。

表6天南星各样品混悬剂对小鼠行为体征及死亡率的影响(n＝10)

注：*P<0.05**P<0.01与空白组比较；ΔP<0.05与生品组比较。

5.2天南星新法炮制品水煎剂对小鼠行为体征及死亡率的影响

生品组小鼠在给药期间个别小鼠表现大便溏稀现象，未出现小鼠死亡的情况。新法组和药典法组小鼠在给药后，均未出现食少，精神状态萎靡、少动、流涎、竖毛、大便湿软等情况，活动行为正常，未见小鼠死亡和明显毒性反应。生品组小鼠给药后，体重增长缓慢，与空白组比较，存在极显著性差异(P＜0.01)；药典法组和新法组小鼠给药后，体重增长明显，与空白组比较，均无显著性差异；药典法组和新法组小鼠给药后，体重增长无明显差异。表明一次给药无法测出新法炮制品水煎剂的LD50剂量，故采用多次给药测定最大给药量试验。结果见表7。

表7天南星各样品水煎剂对小鼠行为体征及死亡率的影响(n＝10)

注：*P<0.05**P<0.01与空白组比较；ΔP<0.05与生品组比较。

5.3天南星新法炮制品水煎剂最大给药量试验结果

结果表明，小鼠一日灌胃给予天南星新法炮制品水煎剂360g/kg，未见小鼠死亡和异常表现，说明天南星新法炮制品水煎剂毒性很低或无毒性。

6、小结与讨论

急性毒性结果表明，天南星生品混悬剂具有一定毒性，毒性大于生品水煎剂。经过炮制后，其混悬剂和水煎剂毒性都得到明显降低；通过灌胃给药无法测出天南星新法炮制品水煎剂LD50剂量，且最大给药量实验中小鼠每日给药剂量360g/kg，相当于成人临床用量的2800倍。说明天南星新法炮制品毒性不明显，较为安全，达到炮制降低毒性的目的。

四、亚急性毒性研究

亚急性毒性实验，是通过对动物重复给药的试验，表征受试物的毒性作用，并且预测其可能对人体产生的不良反应，降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险。为了进一步评价天南星新法炮制品长期给药对机体毒性作用特点，本研究在急性毒性实验基础上，对天南星新法炮制品水煎剂多次给药毒性特征进行了评价研究。

1、实验材料

1.1实验动物

SD大鼠(SPF级)，体重180±20g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，动物生产许可证号：SCXK(黑)2013—004。

1.2实验仪器

同铝离子含量测定部分。

1.3实验药材

同铝离子含量测定部分。

1.4实验试剂

同刺激性作用研究部分。

2、实验环境

同急性毒性研究部分。

3、实验方法

取大鼠40只，雌雄各半，随机分为四组，即空白对照组、生品组、药典法组及新法组，每组10只。适应环境一周后，每日上午8:00开始灌胃给药，每日一次，给药剂量50g/kg(相当于成人用量的60倍)，空白组给予同体积的生理盐水。同时，每周精确称量大鼠体重，并按体重变化调整动物给药剂量。给药期间，每天观察各组大鼠行为学变化。连续给药30天后，采血和取主要脏器进行生化及病理学分析。

4、统计分析

实验数据以均数±标准误表示，用SPSS17.0进行数据统计分析。组间比较釆用单因素方差分析，两组间比较采用q检验，以p＜0.01,p＜0.05分别代表极显著性差异和显著性差异。

5、实验结果

5.1天南星新法炮制品水煎剂对大鼠行为体征的影响

药典法组及新法组大鼠在给药期间，均未出现食少，精神状态萎靡、少动、流涎、竖毛、大便湿软等情况，活动行为正常。生品组大鼠在给药期间个别大鼠表现食少，大便溏稀等现象。各组大鼠在给药期间均未出现死亡情况。

5.2天南星新法炮制品对大鼠体重变化率的影响

给药第一周，生品组大鼠体重增长相对缓慢，与空白组比较，存在显著性差异(P＜0.05)；药典法组与新法组体重变化率，与生品组比较，无明显差异；给药第二周以后，各给药组大鼠体重变化率，与空白组比较，差异均无显著性意义。各组大鼠的体重变化率见表8所示。

体重变化率：变化率＝(当时体重-原始体重)/原始体重。

表8天南星各炮制品水煎剂对大鼠体重变化率的影响(n＝10)

注：*P<0.05与空白组比较；ΔP<0.05与炮制组比较。

5.3天南星新法炮制品水煎剂对大鼠主要血常规指标的影响

给药30天后，生品组、药典组、新法组白细胞(WBC)值均有升高，尤其生品组升高明显，与空白组比较，存在极显著性差异和显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)；药典法组与新法组(WBC)值虽均有升高，与生品组比较，存在显著性差异(P＜0.05)；药典法组与新法组(WBC)值比较，无显著性差异；生品组、(RBC)值升高明显，与空白组比较，存在显著性差异(P＜0.05)；药典法组与新法组(RBC)值虽有降低，与生品组比较，存在显著性差异(P＜0.05)；药典法组与新法组(RBC)值比较，无显著性差异；生品组、药典法组及新法组血小板数(PLT)值无显著性差异。结果见表9。

表9天南星各炮制品对大鼠主要血常规指标的影响(n＝10)

注：*P<0.05与空白组比较，**P<0.01与空白组比较；ΔP<0.05与生品组比较。

5.4天南星新法炮制品对大鼠主要生化指标的影响

给药30天后，生品组大鼠CK值升高,与空白组比较，存在显著性差异(P<0.05),药典法组与新法组CK值没有明显变化,与空白组比较,无显著性差异；生品组、药典法组及新法组ALT、AST、CREA、UREA值均有升高，与与空白组比较,无显著性差异。结果见表10。

表10天南星给药30天对大鼠生化指标的影响(n＝10)

注：*P<0.05与空白组比较；ΔP<0.05与炮制组比较。

5.4天南星新法炮制品对大鼠脏器指数的影响

给药30天后，生品组大鼠心脏指数偏高，与空白组比较，存在显著性差异(P<0.05)，药典法组和新法炮制组心脏指数正常，与空白组比较，差异不显著；生品组大鼠肺脏指数偏高，与空白组比较，存在显著性差异(P<0.05)，药典法组和新法炮制组肺脏指数正常，与空白组比较，差异不显著性；其它各组的脏器指数未见明显差异，结果见表11。

表11天南星新法炮制品对大鼠脏器指数的影响(n＝10)

注：*P<0.05与空白组比较。

5.5天南星新法炮制品对大鼠病理的影响

大鼠连续30天灌胃给予新法炮制品水煎剂，对大鼠心脏、肝、肺、脾、肾、胃及食管等主要脏器未见影响，表明天南星新法炮制品水煎剂毒性很小或无毒。

6、小结与讨论

亚急性毒性实验目的是通过对动物重复给药，表征受试药物的毒性作用，并且预测其可能对人体产生的不良反应，降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险。机体炎症指标WBC、心肺功能指标RBC、HGB和HCT是血常规中重要指标。CK主要存在于心肌和骨骼肌等肌肉中。UREA是肾脏功能是否改变的一个重要指标。

本研究在急性毒性实验基础上，对天南星新法炮制品水煎剂多次给药毒性特征进行了评价研究，进一步探讨天南星新法炮制品长期给药对机体毒性作用特点。

大鼠连续30天灌胃给予新法炮制品水煎剂，给药期间行为体征正常，体重变化率稳定，血常规指标未见异常。病理切片显示，新法炮制品水煎剂对大鼠心脏、肝、肺、脾、肾、胃及食管脏等主要脏器未见影响，表明天南星新法炮制品水煎剂毒性很小或无毒。

本发明的实施例内容揭露如上，然而本实施例并非用以限定本发明实施的范围，依据本发明的权利要求书及说明内容所作的简单的等效变化与修饰，仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims

1.一种天南星炮制方法，其特征在于，包括如下步骤：

(2)将经蒸制后的天南星切成薄片，干燥；

(3)将酸性乙醇水溶液均匀喷洒至干燥后的天南星薄片上，立即放置在50±5℃的密闭环境中，闷润，取出干燥即得制南星。

2.如权利要求1所述的天南星炮制方法，其特征在于，步骤(1)中蒸制温度为121±10℃。

3.如权利要求1所述的天南星炮制方法，其特征在于，步骤(1)中蒸制时间为10～15min。

4.如权利要求1所述的天南星炮制方法，其特征在于，步骤(2)中天南星薄片的厚度为1-2mm。

5.如权利要求1所述的天南星炮制方法，其特征在于，步骤(3)中酸性乙醇水溶液的pH为4±0.5，该溶液由乙醇及盐酸混合而成。

6.如权利要求1所述的天南星炮制方法，其特征在于，步骤(3)中焖润时间为48±4h。

7.如权利要求1所述的天南星炮制方法，其特征在于，步骤(3)中酸性乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为50％。

8.如权利要求1所述的天南星炮制方法，其特征在于，步骤(3)中酸性乙醇水溶液的质量为干燥后的天南星薄片质量的0.5～0.6倍。

9.一种天南星制品，其特征在于，按照权利要求1-7任一项所述的方法制备得到。