CN107137750B - 一种生物活性敷贴的制作方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生物活性敷贴的制作方法，包括除脂、碎末化、取胶、离心、盐析、离心、溶解、调PH、离心、水洗、离心、水洗、离心、溶解、调PH、超滤、折膜、配液、灌装、灭菌；本发明利用化学方法和物理方法相结合，取长补短，大大提高了胶原蛋白的纯度，也解决了单一化学法残留的问题，提高了产品的安全性和有效性，且可以进行大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药及材料科学技术领域，尤其涉及一种生物活性敷贴的制作方法。
背景技术
目前行业内胶原蛋白的提纯大部分以物理的方法为主，其缺点是胶原蛋白的纯度不高，且不利于大规模进行生产；单一化学方法则又产生杂质残留的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生物活性敷贴的制作方法，利用化学方法和物理方法相结合，取长补短，大大提高了胶原蛋白的纯度，也解决了单一化学法残留的问题，提高了产品的安全性和有效性，且可以进行大规模生产。
为了达到上述目的，本发明的技术方案是：
一种生物活性敷贴的制作方法，包括如下步骤：除脂：用生物酶脱脂,酶量与肌腱比为1:5-20，调PH为5-8之间，温度为25-39℃，放置10-16小时，取出后用纯化水洗净；
碎末化：沿着肌腱纤维方向切成5 mm以下的薄片；
取胶：将已切片的肌腱放入容器中，加入相应量的注射用水，加胃蛋白酶，胃蛋白酶：肌腱=1：5-20，再加入冰乙酸使溶液中冰乙酸的浓度为0.2-1mol/L，进行水解，控制温度0-10oC，搅拌20-50小时；离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心15 min，取上清液，即可提得胶原蛋白原液；
盐析：加入氯化钠晶体，使氯化钠浓度达到0.5-2mol/L,静置10-16小时；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心15min，取沉淀；
溶解：用0.1-1mol/L冰醋酸溶解；
调PH：用4mol/L氢氧化钠调PH至6-10，分别加入丙酮和丁二酸酐，比例为20:1，再用5mol/L盐酸调PH至产生沉淀；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
溶解：用注射用水溶解；
调PH：用1mol/L氢氧化钠调PH至4-8；
超滤：用超滤设备进行超滤浓缩提纯；
折膜：将非织造布和铝箔袋放于折棉机上，进行折膜；
配液：取浓缩液，用注射用水稀释，按比例加入保湿剂和防腐剂；
灌装：将配好的溶液和折膜后的铝箔袋放置灌装机上，进行灌装封口；灭菌：辐照灭菌，剂量15-25KGy。
所述配液包括胶原蛋白浓缩液1%-10%，保湿剂1%-10%，防腐剂0.01%-0.1%，余量为注射用水。
所述超滤：用超滤设备进行超滤浓缩提纯，膜的材质为纤维膜、陶瓷膜或聚醚砜膜中的一种，膜的孔径为10-200KDa,取浓缩液。
所述保湿剂为丙三醇或丁二醇中的一种。
所述防腐剂为羟苯甲酯、山梨酸钾、甘草酸二钾中的一种。
所述配液包括胶原蛋白浓缩液5%，保湿剂6%，防腐剂0.08%，余量为注射用水。
本发明的有益效果是：利用化学方法和物理方法相结合，取长补短，大大提高了胶原蛋白的纯度，也解决了单一化学法残留的问题，提高了产品的安全性和有效性，且可以进行大规模生产。
具体实施方式
实施例1
一种生物活性敷贴的制作方法，包括如下步骤：除脂：用生物酶如脂肪酶（3000-10000U/g脱脂,酶量与肌腱比为1:5-20，调PH为5-8之间，温度为25-39℃，放置10-16小时，取出后用纯化水洗净；
碎末化：沿着肌腱纤维方向切成5 mm以下的薄片，，肌腱颗粒越小越有利于提取胶原蛋白；
取胶：将已切片的肌腱放入容器中，加入相应量的注射用水，加胃蛋白酶，胃蛋白酶：肌腱=1：5-20，再加入冰乙酸使溶液中冰乙酸的浓度为0.2-1mol/L，进行水解，控制温度0-10oC，搅拌20-50小时；离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心15 min，取上清液，即可提得胶原蛋白原液；
盐析：加入氯化钠晶体，使氯化钠浓度达到0.5-2mol/L,静置10-16小时；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心15min，取沉淀；
溶解：用0.1-1mol/L冰醋酸溶解；
调PH：用4mol/L氢氧化钠调PH至6-10，分别加入丙酮和丁二酸酐，比例为20:1，再用5mol/L盐酸调PH至产生沉淀；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
溶解：用注射用水溶解；
调PH：用1mol/L氢氧化钠调PH至4-8；
超滤：用超滤设备进行超滤浓缩提纯，去除小分子盐、杂蛋白、有机物等，膜的材质为纤维膜、陶瓷膜或聚醚砜膜，膜的孔径为10-200KDa,取浓缩液，流量为250L/H；
折膜：将非织造布和铝箔袋放于折棉机上，进行折膜；
配液：取浓缩液，用注射用水稀释，按比例加入保湿剂和防腐剂；
灌装：将配好的溶液和折膜后的铝箔袋放置灌装机上，进行灌装封口；
灭菌：辐照灭菌，剂量15-25KGy。
所述配液包括胶原蛋白浓缩液10%，保湿剂10%，防腐剂0.1%，余量为注射用水。
所述超滤：用超滤设备进行超滤浓缩提纯，膜的材质为纤维膜、陶瓷膜或聚醚砜膜中的一种，膜的孔径为10-200KDa,取浓缩液。
所述保湿剂为丙三醇或丁二醇中的一种。
所述防腐剂为羟苯甲酯、山梨酸钾、甘草酸二钾中的一种。
本实施例的一种生物活性敷贴的制作方法，利用化学方法和物理方法相结合，取长补短，大大提高了胶原蛋白的纯度，也解决了单一化学法残留的问题，提高了产品的安全性和有效性，且可以进行大规模生产。
实施例2
一种生物活性敷贴的制作方法，包括如下步骤：除脂：用生物酶如脂肪酶（3000-10000U/g脱脂,酶量与肌腱比为1:5-20，调PH为5-8之间，温度为25-39℃，放置10-16小时，取出后用纯化水洗净；
碎末化：沿着肌腱纤维方向切成5 mm以下的薄片，，肌腱颗粒越小越有利于提取胶原蛋白；
取胶：将已切片的肌腱放入容器中，加入相应量的注射用水，加胃蛋白酶，胃蛋白酶：肌腱=1：5-20，再加入冰乙酸使溶液中冰乙酸的浓度为0.2-1mol/L，进行水解，控制温度0-10oC，搅拌20-50小时；离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心15 min，取上清液，即可提得胶原蛋白原液；
盐析：加入氯化钠晶体，使氯化钠浓度达到0.5-2mol/L,静置10-16小时；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心15min，取沉淀；
溶解：用0.1-1mol/L冰醋酸溶解；
调PH：用4mol/L氢氧化钠调PH至6-10，分别加入丙酮和丁二酸酐，比例为20:1，再用5mol/L盐酸调PH至产生沉淀；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
溶解：用注射用水溶解；
调PH：用1mol/L氢氧化钠调PH至4-8；
超滤：用超滤设备进行超滤浓缩提纯，去除小分子盐、杂蛋白、有机物等，膜的材质为纤维膜、陶瓷膜或聚醚砜膜，膜的孔径为10-200KDa,取浓缩液，流量为250L/H；
折膜：将非织造布和铝箔袋放于折棉机上，进行折膜；
配液：取浓缩液，用注射用水稀释，按比例加入保湿剂和防腐剂；
灌装：将配好的溶液和折膜后的铝箔袋放置灌装机上，进行灌装封口；
灭菌：辐照灭菌，剂量15-25KGy。
所述配液包括胶原蛋白浓缩液1%，保湿剂1%，防腐剂0.01%，余量为注射用水。
所述超滤：用超滤设备进行超滤浓缩提纯，膜的材质为纤维膜、陶瓷膜或聚醚砜膜中的一种，膜的孔径为10-200KDa,取浓缩液。
所述保湿剂为丙三醇或丁二醇中的一种。
所述防腐剂为羟苯甲酯、山梨酸钾、甘草酸二钾中的一种。
本实施例的一种生物活性敷贴的制作方法，利用化学方法和物理方法相结合，取长补短，大大提高了胶原蛋白的纯度，也解决了单一化学法残留的问题，提高了产品的安全性和有效性，且可以进行大规模生产。
实施例3
一种生物活性敷贴的制作方法，包括如下步骤：除脂：用生物酶如脂肪酶（3000-10000U/g脱脂,酶量与肌腱比为1:5-20，调PH为5-8之间，温度为25-39℃，放置10-16小时，取出后用纯化水洗净；
碎末化：沿着肌腱纤维方向切成5 mm以下的薄片，，肌腱颗粒越小越有利于提取胶原蛋白；
取胶：将已切片的肌腱放入容器中，加入相应量的注射用水，加胃蛋白酶，胃蛋白酶：肌腱=1：5-20，再加入冰乙酸使溶液中冰乙酸的浓度为0.2-1mol/L，进行水解，控制温度0-10oC，搅拌20-50小时；离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心15 min，取上清液，即可提得胶原蛋白原液；
盐析：加入氯化钠晶体，使氯化钠浓度达到0.5-2mol/L,静置10-16小时；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心15min，取沉淀；
溶解：用0.1-1mol/L冰醋酸溶解；
调PH：用4mol/L氢氧化钠调PH至6-10，分别加入丙酮和丁二酸酐，比例为20:1，再用5mol/L盐酸调PH至产生沉淀；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
溶解：用注射用水溶解；
调PH：用1mol/L氢氧化钠调PH至4-8；
超滤：用超滤设备进行超滤浓缩提纯，去除小分子盐、杂蛋白、有机物等，膜的材质为纤维膜、陶瓷膜或聚醚砜膜，膜的孔径为10-200KDa,取浓缩液，流量为250L/H；
折膜：将非织造布和铝箔袋放于折棉机上，进行折膜；
配液：取浓缩液，用注射用水稀释，按比例加入保湿剂和防腐剂；
灌装：将配好的溶液和折膜后的铝箔袋放置灌装机上，进行灌装封口；
灭菌：辐照灭菌，剂量15-25KGy。
所述配液包括胶原蛋白浓缩液5%，保湿剂6%，防腐剂0.08%，余量为注射用水。
所述超滤：用超滤设备进行超滤浓缩提纯，膜的材质为纤维膜、陶瓷膜或聚醚砜膜中的一种，膜的孔径为10-200KDa,取浓缩液。
所述保湿剂为丙三醇或丁二醇中的一种。
所述防腐剂为羟苯甲酯、山梨酸钾、甘草酸二钾中的一种。
本实施例的一种生物活性敷贴的制作方法，利用化学方法和物理方法相结合，取长补短，大大提高了胶原蛋白的纯度，也解决了单一化学法残留的问题，提高了产品的安全性和有效性，且可以进行大规模生产。
Claims (6)
1.一种生物活性敷贴的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：除脂：用生物酶脱脂,酶量与肌腱比为1:5-20，调PH为5-8之间，温度为25-39℃，放置10-16小时，取出后用纯化水洗净；
碎末化：沿着肌腱纤维方向切成5 mm以下的薄片；
取胶：将已切片的肌腱放入容器中，加入相应量的注射用水，加胃蛋白酶，胃蛋白酶：肌腱=1：5-20，再加入冰乙酸使溶液中冰乙酸的浓度为0.2-1mol/L，进行水解，控制温度0oC-10oC，搅拌20-50小时；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心15 min，取上清液，即可提得胶原蛋白原液；
盐析：加入氯化钠晶体，使氯化钠浓度达到0.5-2mol/L,静置10-16小时；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心15min，取沉淀；
溶解：用0.1-1mol/L冰醋酸溶解；
调PH：用4mol/L氢氧化钠调PH至6-10，分别加入丙酮和丁二酸酐，比例为20:1，再用5mol/L盐酸调PH至产生沉淀；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
水洗：用注射用水水洗；
离心：用高速冷冻离心机以5000 r/min离心10min，取沉淀；
溶解：用注射用水溶解；
调PH：用1mol/L氢氧化钠调PH至4-8；
超滤：用超滤设备进行超滤浓缩提纯；
折膜：将非织造布和铝箔袋放于折棉机上，进行折膜；
配液：取浓缩液，用注射用水稀释，按比例加入保湿剂和防腐剂；
灌装：将配好的溶液和折膜后的铝箔袋放置灌装机上，进行灌装封口；
灭菌：辐照灭菌，剂量15-25KGy。
2.根据权利要求1所述的一种生物活性敷贴的制作方法，其特征在于：所述配液包括胶原蛋白浓缩液1%-10%，保湿剂1%-10%，防腐剂0.01%-0.1%，余量为注射用水。
3.根据权利要求1所述的一种生物活性敷贴的制作方法，其特征在于：所述超滤：用超滤设备进行超滤浓缩提纯，膜的材质为纤维膜、陶瓷膜或聚醚砜膜中的一种，膜的孔径为10-200KDa,取浓缩液。
4.根据权利要求1所述的一种生物活性敷贴的制作方法，其特征在于：所述保湿剂为丙三醇或丁二醇中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种生物活性敷贴的制作方法，其特征在于：所述防腐剂为羟苯甲酯、山梨酸钾、甘草酸二钾中的一种。
6.根据权利要求2所述的一种生物活性敷贴的制作方法，其特征在于：所述配液包括胶原蛋白浓缩液5%，保湿剂6%，防腐剂0.08%，余量为注射用水。
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