CN107058456A - 一种循环肿瘤细胞3d药敏试验方法 - Google Patents

一种循环肿瘤细胞3d药敏试验方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107058456A
CN107058456A CN201710409124.9A CN201710409124A CN107058456A CN 107058456 A CN107058456 A CN 107058456A CN 201710409124 A CN201710409124 A CN 201710409124A CN 107058456 A CN107058456 A CN 107058456A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tissue block
circulating tumor
cell
tumor cell
chemotherapeutics
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710409124.9A
Other languages
English (en)
Inventor
吴英
王毅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan Puri precision medical technology Co.,Ltd.
Original Assignee
Sichuan Precision Medical Inspection Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan Precision Medical Inspection Co Ltd filed Critical Sichuan Precision Medical Inspection Co Ltd
Priority to CN201710409124.9A priority Critical patent/CN107058456A/zh
Publication of CN107058456A publication Critical patent/CN107058456A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Materials By The Use Of Electric Means (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

本发明公开了一种循环肿瘤细胞3D药敏试验方法，是将循环肿瘤以组织块的形式进行三维立体培养，组织块与胶原蛋白一起培养，胶原蛋白凝胶形成支架，使组织块在37度，5％CO2环境下模拟自然环境生长；最后加入化疗药物，计算组织块对化疗药物的敏感性；其中，组织块进行三维立体培养时的条件如下：O2含量在1～18％，CO2含量在1％～10％，压力在1～4psi，温度在25～40℃，湿度在30～70％。本发明可以使检测方法标准化、商品化、极大地简化操作程序，提高了检测的准确性和稳定性，减少临床化疗医生治疗的盲目性，指导临床科学合理地用药，提高化疗的有效率。

Description

一种循环肿瘤细胞3D药敏试验方法
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种循环肿瘤细胞3D药敏试验方法。
背景技术
肿瘤精准治疗的目的之一是为肿瘤病人提供抗肿瘤药物的用药指导。而药敏试验是医生用药的重要技术支持。目前，医生通过手术或穿刺针取出肿瘤样本，然后在显微镜下检查并进行遗传学分析，从而做出诊断指导治疗。这种方法是昂贵的，侵入性的，通常只适用于肿瘤足够大或已威胁到生命的情况。更糟的是，癌症扩散时常常发生突变，意味着原位肿瘤组织活检可能无法帮助治疗侵入性转移的瘤体。目前有多种肿瘤的体内和体外药敏试验方法。然而，由于这些方法与体内药效差异巨大，不易进入广泛的临床应用。
发明内容
为了改善上述问题，本发明的目的主要是提供一种循环肿瘤细胞3D药敏试验方法。
本发明通过下述技术方案实现：
一种循环肿瘤细胞3D药敏试验方法，是将循环肿瘤细胞以组织块的形式进行三维立体培养，将瘤组织块与胶原蛋白培养，胶原蛋白凝胶形成支架，使组织块在37度，5％CO2环境下模拟自然环境生长；最后加入化疗药物，计算组织块对化疗药物的敏感性；其中，组织块进行三维立体培养时的条件如下：O2含量在1～18％，CO2含量在1％～10％，压力在1～4psi，温度在25～40℃，湿度在30～70％。
进一步地，在加入化疗药物之前和加入化疗药物之后，分别采用无标记成像分析系统测定组织块电阻抗值，来判断细胞数目和细胞的形态。
再进一步地，采用ECM培养液对组织块进行三维立体培养。
本发明具有以下优点及有益效果：
本发明可以使检测方法标准化、商品化、极大地简化操作程序，提高了检测的准确性和稳定性，减少化疗中的盲目性。能够有效指导临床化疗用药，提高多种肿瘤的临床疗效。
三维培养比其它体外药敏试验的优点:1.细胞用量少(仅需要3X103个细胞/孔)。由于所需标本细胞数量少，不仅可对小量的组织样本进行药物敏感性测定，而且可对胸腹水等液体标本进行检测。使用乳腺针吸活检标本，胸水标本，组织活检标本均可以进行体外药敏检测，扩大了肿瘤药敏技术的检测范围。2.标本培养成功率高。肿瘤细胞在胶原凝胶所形成的三维立体培养环境中，细胞具有与体内细胞相似的生长环境，培养细胞成功率高。3。采用无标记成像软件系统分析结果，无需标记,对细胞无损伤,结果准确度高。通过图像软件系统进行分析，并排除成纤维细胞对实验的干扰，可对抗癌药物对肿瘤细胞的特异性杀伤作用在体外做出客观评价。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但本发明的实施方式并不限于此。
实施例
一种循环肿瘤细胞3D药敏试验方法，通过微流控芯片对血样进行CTC分离，获得循环肿瘤细胞；或将循环肿瘤细胞切割成组织块，组织酶消化，在胶原包裹中37度，5％CO2孵育12～48小时，收集活体细胞，然后通过微型泵将组织块和ECM培养液加入到微孔板的板孔中，并将微孔板置于低氧生理环境模拟培养系统中培养72小时；然后采用无标记成像分析系统测定瘤组织块电阻抗值；接着向微孔板的板孔中加入化疗药物(对照孔除外)，每例标本均选择多种单药及组合用药，化疗药物与培养液充分混匀后，放入生理环境模拟培养系统培养箱中孵育72小时；最后取出微孔板，通过无标记成像分析仪器测定细胞指数来表示细胞生理功能相关变化。
细胞指数(CI)是由无标记细胞功能检测系统测得的通过公式推算获得。每个时间点的CI＝(Rn-Rb)/15,其中Rn为孔内接种有细胞时的电阻抗值，Rb为孔内只有培养基时的背景阻抗值。细胞指数表示检测孔中的细胞活性，为细胞表型的综合检测指标，CI反映了细胞数目和细胞大小，细胞贴壁状态等方面的特性。当检测板细胞孔内没有细胞或细胞没有很好的粘附在电极上时，细部指数CI为0；当细胞接种入孔内，随着细胞贴壁，伸展，细胞数目的增多，黏附在电极的数目越多，电阻抗值越大，细胞指数CI越大。
值得说明的是，本发明的方法是保持了细胞间接触，维持了瘤细胞立体形态和功能，更加接近机体实体瘤内环境，临床效果相关性好，所需临床样本量少，非常适用于临床应用。同时本发明减少了操作步骤、提高了实验的准确性，降低了实验成本并节约了试验时间。
按照上述实施例，便可很好地实现本发明。值得说明的是，基于上述设计的前提下，为解决同样的技术问题，即使在本发明上做出的一些无实质性的改动或润色，所采用的技术方案的实质仍然与本发明一样，故其也应当在本发明的保护范围内。

Claims (3)

1.一种循环肿瘤细胞3D药敏试验方法，其特征在于，是将循环肿瘤细胞以组织块的形式进行三维立体培养，也就是将瘤组织块与胶原蛋白培养，胶原蛋白凝胶形成支架，使组织块在37度，5％CO2环境下模拟自然环境生长；然后加入化疗药物，计算组织块对化疗药物的敏感性；其中，组织块进行三维立体培养时的条件如下：O2含量在1～18％，CO2含量在1％～10％，压力在1～4psi，温度在25～40℃，湿度在30～70％。
2.根据权利要求1所述的一种循环肿瘤细胞3D药敏试验方法，其特征在于，在加入化疗药物之前和加入化疗药物之后，分别采用无标记成像分析系统测定组织块电阻抗值，来判断细胞数目和细胞的形态。
3.根据权利要求2所述的一种循环肿瘤细胞3D药敏试验方法，其特征在于，采用ECM培养液对组织块进行三维立体培养。
CN201710409124.9A 2017-06-02 2017-06-02 一种循环肿瘤细胞3d药敏试验方法 Pending CN107058456A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710409124.9A CN107058456A (zh) 2017-06-02 2017-06-02 一种循环肿瘤细胞3d药敏试验方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710409124.9A CN107058456A (zh) 2017-06-02 2017-06-02 一种循环肿瘤细胞3d药敏试验方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107058456A true CN107058456A (zh) 2017-08-18

Family

ID=59615691

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710409124.9A Pending CN107058456A (zh) 2017-06-02 2017-06-02 一种循环肿瘤细胞3d药敏试验方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107058456A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107748256A (zh) * 2017-10-11 2018-03-02 上海医盈网络科技有限公司 一种循环肿瘤细胞的液体活检检测方法
CN110628864A (zh) * 2018-06-21 2019-12-31 南昌乐悠生物科技有限公司 一种水凝胶包被的微组织块培养药敏检测方法
WO2023231289A1 (zh) * 2022-05-26 2023-12-07 苏州国科医工科技发展(集团)有限公司 快速药敏检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103756904A (zh) * 2014-01-10 2014-04-30 赵海涛 用于肿瘤细胞培养的三维培养系统
CN103898058A (zh) * 2014-04-02 2014-07-02 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 一种新型胶质瘤干细胞的三维培养方法及其应用
CN106755261A (zh) * 2016-11-11 2017-05-31 四川精准医疗科技有限责任公司 一种肿瘤药敏试验方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103756904A (zh) * 2014-01-10 2014-04-30 赵海涛 用于肿瘤细胞培养的三维培养系统
CN103898058A (zh) * 2014-04-02 2014-07-02 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 一种新型胶质瘤干细胞的三维培养方法及其应用
CN106755261A (zh) * 2016-11-11 2017-05-31 四川精准医疗科技有限责任公司 一种肿瘤药敏试验方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107748256A (zh) * 2017-10-11 2018-03-02 上海医盈网络科技有限公司 一种循环肿瘤细胞的液体活检检测方法
CN110628864A (zh) * 2018-06-21 2019-12-31 南昌乐悠生物科技有限公司 一种水凝胶包被的微组织块培养药敏检测方法
WO2023231289A1 (zh) * 2022-05-26 2023-12-07 苏州国科医工科技发展(集团)有限公司 快速药敏检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4559299A (en) Cytotoxicity assays in cell culturing devices
CN107058456A (zh) 一种循环肿瘤细胞3d药敏试验方法
CN102399693B (zh) 一种仿真三维细胞培养器及培养方法
CN107217039A (zh) 肿瘤组织3d培养方法及培养液
CN105641716A (zh) 一种细粒棘球蚴小动物活体内成像模型及其构建方法
CN101726602A (zh) 一种检测Legumain蛋白判断卵巢癌预后的方法
CN105628910A (zh) 一种针对vegf靶向治疗药物的生物学活性检测方法
CN106367393A (zh) 小鼠前列腺癌循环肿瘤细胞系及前列腺癌循环肿瘤细胞分离和培养方法
CN106566863A (zh) 一种基于微流控芯片的细胞双向侵袭监测方法
CN102183651A (zh) 半胱天冬酶-3酶原蛋白免疫组化诊断试剂盒和应用
CN109385381B (zh) 一种泌尿生殖道支原体双相培养基
CN116590377A (zh) 一种患者来源器官型组织培养药物敏感性检测方法
CN109929797A (zh) 鸡胚移植瘤模型建立方法及其在药物敏感性检测中的应用
Liu et al. Correlations between the expression of C-erB-2, CD34 and ER in breast cancer patients and the signs of conventional ultrasonography and ultrasound elastography.
CN116087522A (zh) 胰腺癌肿瘤分子标志物tnk2及检测试剂盒及其应用
CN101020066A (zh) 一种原位移植构建人类肝癌小鼠模型的方法
CN100487127C (zh) 改良皮肤癣菌试验培养基
CN107144695B (zh) Arl13b蛋白在癌症诊断中的应用
CN115747290A (zh) 一种对肠癌类器官进行药敏测试的新操作方法
CN106755261A (zh) 一种肿瘤药敏试验方法
CN111896725A (zh) 一种肿瘤精准、个性化药物治疗方法及应用
CN113416629B (zh) 一种肿瘤化疗药物敏感性检测试剂盒和检测方法
Rasheeduddin et al. Cutaneous phaeohyphomycosis of foot web by Curvularia lunata
Vorwald Experimental Tuberculous Infection in the Guinea-Pig Foetus Compared with that in the Adult
CN107543926A (zh) 一种新的诊断乳腺浸润性导管癌的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20210811

Address after: 610000 846, southern section of Tianfu Avenue, Huayang street, Tianfu New District, Chengdu, Sichuan

Applicant after: Sichuan Puri precision medical technology Co.,Ltd.

Address before: 610000 No. 302, 4 and 402, 3 / F, building 3, No. 88, Keyuan South Road, high tech Zone, Chengdu, Sichuan

Applicant before: SICHUAN JINGZHUN MEDICAL EXAMINATION Co.,Ltd.

TA01 Transfer of patent application right