CN107037164A - 一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法，涉及搁架技术领域，设有一对固定件，固定件上沿竖直方向均布设各卡槽，各搁架前后侧分别通过托卡配合卡接于两个固定件相对应的一组卡槽中，各搁架的左右两侧由EPE材料整体包裹，形成EPE层；两个固定件与各搁架及EPE层构成搁架组合结构；本发明通过筋条与EPE层和搁架两侧配合，限制搁架的上下位移，通过与门体及箱体配合的固定件，限制搁架的前后位移，利用门体关闭后形成的密封空间，将搁架固定，固定结构牢固可靠，无损伤内衬的风险；搁架两侧包裹EPE材料形成EPE层，并通过胶带固定，具有较好的缓冲作用，减少装卸、搬运中搁架及内衬受到的震动和冲击，装配简单，提高了搁架组装的在线操作效率。

Description

一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法

技术领域

本发明涉及氨基甲酸乙酯检测领域，具体涉及一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法。

背景技术

白酒作为中国传统的饮料酒，有着几千年的历史，并得到广泛传承。白酒在发酵过程中，会产生一种氨基甲酸乙酯，但是这种环境下产生的氨基甲酸乙酯一旦被人体直接吸收饮用，就会严重导致的身体致癌。

氨基甲酸乙酯可由自然反应及添加前驱物质两种方式形成，其致癌机理是通过两种不同途径破坏DNA结构。通常情况，主要通过减少前体物质的添加和形成抑制氨基甲酸乙酯的生成。氨基甲酸乙酯的通用检测方法为色谱与不同检测器结合使用或色谱与质谱联用，其中，检测前的样品前处理有液液萃取，固相萃取等不同形式。目前，我国检测控制工作虽然已经取得一定进展，但是检测方法不够经济有效，控制方法不能够普遍应用。关于控制方法的最新研究中，基因工程技术与系统生物技术的相关应用纳入进程，后基因组研究和蛋白质学等对基因的应用改造处于探索阶段。随着关于氨基甲酸乙酯的危害、形成机理等方面的研究不断深入，不同机制的控制方法不断出现。EC的处理逐步进入更加完善的状态。

鉴于氨基甲酸乙酯的上述危害之大，研究一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的检测方法迫在眉睫。目前氨基甲酸乙酯的检测多采用比色法或者气相色谱质谱法。其中，比色法只能半定量，不稳定，气相色谱质谱法操作费时、麻烦，且使用的试剂有毒，不利于人体健康。

发明内容

本发明正是为了避免上述现有技术所存在的不足之处，提供了一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法，实现快速检测氨基甲酸乙酯。

本发明为解决技术问题采用如下技术方案：一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法，操作步骤如下所示：

1)前处理：

取样至蒸发瓶中，在20-50℃，20-100MPa下旋转蒸发，用超纯水定容后再经过过滤，获得待测样品；

2)设定超高效液相色谱仪的条件为：

色谱柱为ACQUITYUPLC BEH C181.7μm 2.1×50mm Column液相色谱柱；

柱温为30～45℃；

样品室温度为10～20℃；

流动相：A相为乙腈，B相为体积浓度为(0.1％—0.5％的乙酸水溶液)；

流速为0.2～0.5mL/min；

洗脱方式为等度洗脱；

进样量为1～5μL；

检测所用时间为2min；

3)三重四级杆质谱检测器的条件设定为：

离子化方式：ESI+；

监测方式：多反应监测模式MRM；

锥孔电压：30～50V；

毛细管电压：3.00～5.00kV；

脱溶剂气温度：400～600℃；

脱溶剂气流量：500～1000L/h；

锥空气流量：50～100L/h；

离子源温度：150～500℃；

4)母离子以及碎片离子的扫描：

使用快速直接注入质谱的模式(Infusion模式)进入质谱，不需要加入流动相，标准样品的浓度保持配制的浓度，不会得到稀释，同种浓度的样品使用注入的进样模式在质谱中的相应要比普通模式进样的响应高3-5倍。

(4)质谱方法参数表如表1：

表1：质谱方法参数表

5)氨基甲酸乙酯的标准曲线的绘制：

取氨基甲酸乙酯标准品配制质量浓度范围在50～500ng/mL的一系列标准工作溶液，至少配标准样品5个，然后按照步骤2)所设定的条件用超高效液相色谱分离、质谱检测，以待测物的峰面积或者待测物在质谱中的响应值对其所相应的质量浓度进行线性回归，获得氨基甲酸乙酯的线性回归方程，线性回归方程所对应的曲线，即为氨基甲酸乙酯的标准曲线；以待测物在质谱中的响应值为例，氨基甲酸乙酯对应的线性回归方程及相关系数r²见表2，方程中X为氨基甲酸乙酯的浓度，Y为对应的待测物在质谱中的响应值。

表2：氨基甲酸乙酯的线性回归方程、相关系数、检出限、定量限

6)待测白酒酒样的检测：

将待测白酒酒样按步骤1)的方式进行前处理获得待测样品后，按步骤2)所设定的条件进行检测，获得待测样品的色谱图，根据母离子对待测样品进行定性，然后根据氨基甲酸乙酯的标准曲线对待测样品进行定量。

进一步地，步骤1)中采用的过滤方式为：经0.22μm滤膜针头过滤器过滤。

进一步地，步骤2)中所述的等度洗脱中流动相A相与B相的体积比为20％：80％。

本发明提供了一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法，具有以下有益效果：

1、本发明建立了一种利用超高效液相色谱串接三重四级杆质谱快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法，能够准确地对白酒中的氨基甲酸乙酯进行定性、定量，为白酒中氨基甲酸乙酯的准确判定、快速检测提供科学依据。

2、本发明的检测方法操作简单快捷、准确可靠、重复性好，降低检测时间可以节约人力、物力以及财力。

3、本发明ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm 2.1×50mm Column液相色谱柱与0.1％的乙酸水溶液和乙腈流动相的选择对白酒中氨基甲酸乙酯达到了优异的分离效果。

4、本发明的前处理操作步骤少，从而降低了实验误差并提高了数据的准确性。

5、本发明在找母离子以及碎片时使用了一种直接注入的模式，能够使相同浓度的物质响应增大3-5倍，提高了数据的准确性。

6、本发明测试了加标样品回收率以及实际样品中氨基甲酸乙酯的含量。结果表明，氨基甲酸乙酯的检出限与定量限完全能够满足酒类样品的测定要求，化合物回收率、重现性均满足定量测试要求。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

为验证本发明方法的准确性，取已知氨基甲酸乙酯含量的几个白酒样品按本发明的方法进行测定，具体步骤如下：

(1)对待测白酒酒样进行前处理：

准确量取50mL待测白酒酒样于100mL旋转蒸发瓶中，旋转蒸发至3-5mL，去除待测白酒中的醇类物质，然后用超纯水定容至10mL，最后经0.22μm滤膜针头过滤器过滤，获得待测样品；

(2)设定超高效液相色谱仪的条件为：

色谱柱为ACQUITYUPLC BEH C181.7μm 2.1×50mm Column液相色谱柱；

柱温为40℃；

样品室温度为20℃

流动相：A相为乙腈，B相为体积浓度为0.1％的乙酸水溶液；

流速为0.2mL/min；

洗脱方式为梯度洗脱(流动相A相与B相的体积比为20％：80％)；

进样量为2μL；

检测所用时间为2min；

三重四级杆质谱检测器的条件设定为：

离子化方式：ESI+；

监测方式：多反应监测模式MRM；

锥孔电压：30V；

毛细管电压：3.00kV；

脱溶剂气温度：400℃；

脱溶剂气流量：1000L/h；

锥空气流量：50L/h；

离子源温度：150℃；

质谱方法参数表如表1：

表1：质谱方法参数表

3)待测白酒酒样的检测

将待测白酒酒样按步骤1)的方式进行前处理获得待测样品后，按步骤(2)所设定的条件取1.5mL进样检测，获得待测样品的色谱图，根据母离子对待测样品进行定性分析，然后根据氨基甲酸乙酯的标准曲线对待测样品进行定量分析，即获得待测白酒中所含有的氨基甲酸乙酯及相应含量。

对本发明方法作如下灵敏度测试：灵敏度测试包括仪器的灵敏度与方法的灵敏度，仪器的灵敏度用仪器的检出限表示，取信噪比≥3的氨基甲酸乙酯的一系列标准工作溶液的最小浓度为仪器检出限；方法的灵敏度用方法的定量限表示，取信噪比≥9的氨基甲酸乙酯的一系列标准工作溶液的最小浓度为方法定量限。所得的相关数据见表2。

对本发明方法作如下准确性及重现性实验：选用同一个白酒样品经前处理后作为空白样品，分为3份，分别加入一系列标准工作溶液进行加标回收实验，计算回收率；选取1个白酒样品按照同一前处理方法处理6个，分别进行实验，通过计算其相对标准偏差(RSD)的范围来判断分析方法的重现性。所述的准确性用回收率来表示，见表3，方法的重现性用相对标准偏差(RSD)来表示，见表4。可以看出回收率在80～120％，RSD<10％。

表3：氨基甲酸乙酯的加标回收率实验

表:4：氨基甲酸乙酯的重现性实验

各白酒样品中氨基甲酸乙酯的实际含量与通过本实施例方法测得的含量见表5。

表5 两种方法检测同一种样品的含量比较

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (3)

1.一种快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于，操作步骤如下所示：

1)前处理：

取样至蒸发瓶中，在20-50℃，20-100MPa下旋转蒸发，用超纯水定容后再经过过滤器过滤，获得待测样品；

2)设定超高效液相色谱仪的条件为：

色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm 2.1×50mm Column液相色谱柱；

柱温为30～45℃；

样品室温度为10～20℃；

流动相：A相为乙腈，B相为体积浓度为(0.1％—0.5％的乙酸水溶液)；

流速为0.2～0.5mL/min；

洗脱方式为等度洗脱；

进样量为1～5μL；

检测所用时间为2min；

3)三重四级杆质谱检测器的条件设定为：

离子化方式：ESI+；

监测方式：多反应监测模式MRM；

锥孔电压：30～50V；

毛细管电压：3.00～5.00kV；

脱溶剂气温度：400～600℃；

脱溶剂气流量：500～1000L/h；

锥空气流量：50～100L/h；

离子源温度：150～500℃；

4)母离子以及碎片离子的扫描：

使用快速直接注入质谱的模式进入质谱，标准样品的浓度保持配制的浓度进入质谱。

5)氨基甲酸乙酯的标准曲线的绘制：

取氨基甲酸乙酯标准品配制质量浓度范围在50～500ng/mL的一系列标准工作溶液，然后按照步骤2)所设定的条件用超高效液相色谱分离、质谱检测，以待测物的峰面积或者待测物在质谱中的响应值对其所相应的质量浓度进行线性回归，获得氨基甲酸乙酯的线性回归方程，所述线性回归方程所对应的曲线，即为氨基甲酸乙酯的标准曲线；

6)待测白酒酒样的检测：

将待测白酒酒样按步骤1)的方式进行前处理获得待测样品后，按步骤2)所设定的条件进行检测，获得待测样品的色谱图，根据母离子对待测样品进行定性，然后根据氨基甲酸乙酯的标准曲线对待测样品进行定量。

2.如权利要求1所述的快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于：所述步骤1)中采用的过滤方式为：经0.22μm滤膜针头过滤器过滤。

3.如权利要求1所述的快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于：所述步骤2)中所述的等度洗脱中流动相A相与B相的体积比为20％：80％。