CN107014994A - 一种丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，包括步骤为：通过点膜喷金设备用HCV标记单抗和HCV标记抗原标记的混合液对玻璃纤维素膜喷金得到金垫，用HCV包被抗原检测线包被液和对照线包被液分别在硝酸纤维素膜上划线，并经过处理后粘贴于聚氯乙烯底板，得到点膜的聚氯乙烯底板；将样品垫、金垫、点膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装在一起，切割成检测试纸。通过上述方式，本发明得到的检测试纸基于免疫侧向流层析技术，能够通过手工操作、肉眼读取判断血液样本中是否含有丙型肝炎病毒抗体，诊断快速且结果准确，不会对受检者身体造成伤害。

Description

一种丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法
技术领域
本发明属于生物应用技术领域，特别是涉及一种丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法。
背景技术
丙型病毒性肝炎，即HCV，简称为丙型肝炎、丙肝，是一种由丙型肝炎病毒感染引起的病毒性肝炎。丙型肝炎是一种全球性流行的传染病，全球丙型肝炎流行率平均为3.0%，每年新发HCV感染300万~400万例，估计已有1.7亿慢性HCV感染者。HCV最主要的传播方式包括经输血和血制品传播、经破损的皮肤和黏膜暴露、与感染者性交及高危性行为等。过去献血员中HCV感染率较高，是造成HCV流行的主要原因。随着全球多数国家积极开展对献血员的筛查，目前该人群中 HCV感染率迅速下降，与一般人群HCV感染率相近，而吸毒和高危性行为人群中HCV感染率显著高于一般人群，是目前 HCV流行的重要传染源。
HCV感染自然转阴率低，慢性化发生率明显高于乙肝，治疗效果差，且与肝硬化肝癌的发生及发展密切相关。目前国内尚无HCV抗病毒特效药物和相关疫苗。因此，控制HCV感染的形势十分严峻。目前主要靠早发现、早诊断和早治疗来防控HCV传染源、阻断传播途径。HCV抗体检查、乙肝表面抗原、人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体及梅毒（TP）抗体检查是我国法定的四个血源性筛查项目。
临床上有较多的丙型肝炎病毒抗体检测方法，主要包括酶联免疫法、化学发光免疫分析法。酶联免疫法的试剂盒灵敏度和特异性达不到理想要求，化学发光法的检测成本较高，这两种方法存在的缺点使其难以进行推广应用，无法作为筛查丙型肝炎病毒抗体的重要手段。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，该制备方法得到的检测试纸以双抗原夹心法为原理，诊断快速且结果准确，相比间接法能够提高产品的特异性和灵敏度，具有快捷、观察直观、省时等特点，能作为筛查丙型肝炎病毒抗体的重要手段。
为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，包括步骤为：
（1）制备重悬液：所述重悬液中包括三羟甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白，将三羟甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白溶于水并定容，调节pH值至8-9，得到重悬液；制备包被基液：用海藻糖溶于pH值为7-8的磷酸盐缓冲溶液并定容，得到包被基液；
（2）将胶体金和碳酸钾混合后调节pH值，再加入丙型肝炎病毒标记单抗和牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，所述沉淀用步骤（1）制备的重悬液重悬，再加入丙型肝炎病毒标记抗原，得到丙型肝炎病毒抗体检测免疫金；
（3）用所述包被基液、无水乙醇稀释丙型肝炎病毒包被抗原得到检测线包被液，用所述包被基液、无水乙醇稀释羊抗鼠IgG多抗得到对照线包被液；
（4）用所述丙型肝炎病毒抗体检测免疫金对金垫喷金得到免疫金垫，用所述检测线包被液、所述对照线包被液分别在硝酸纤维素膜上划线，得到反应膜。
（5）将所述反应膜在膜封闭液中浸泡后取出贴于聚氯乙烯底板上干燥，得到贴膜的聚氯乙烯底板；
（6）将样品垫、免疫金垫、贴膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装得到丙型肝炎病毒抗体检测试纸。
在本发明一个较佳实施例中，步骤（1）中所述三羟甲基氨基甲烷、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白和定容后总体积的比例为0.24g：10g：5g：1g：100mL。
在本发明一个较佳实施例中，步骤（1）中所述重悬液的pH值用1M盐酸调节至8.4；所述磷酸盐缓冲溶液为0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液。
在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）的具体过程为：将胶体金置于磁力搅拌器上搅拌，往搅拌的胶体金中加入碳酸钾，调节pH并搅拌10min，加入丙型肝炎病毒标记单抗并搅拌15min，再加入牛血清白蛋白溶液，搅拌15min，在4℃、转速为10000r/min的条件下离心20 min得到沉淀，所述沉淀用所述重悬液重悬至离心前体积的1/10，再加入丙型肝炎病毒标记抗原，得到丙型肝炎病毒抗体检测免疫金。
在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）中所述碳酸钾为0.2M碳酸钾；所述0.2M碳酸钾、所述丙型肝炎病毒标记单抗和所述丙型肝炎病毒标记抗原的比例为6uL/mL:5µg/mL:0.5µg/mL；所述牛血清白蛋白溶液为质量分数为10%的牛血清白蛋白溶液，所述牛血清白蛋白溶液的加入体积为所述胶体金体积的1/10。
在本发明一个较佳实施例中，步骤（3）中所述检测线包被液中所述丙型肝炎病毒包被抗原的浓度为1.2mg/mL，所述对照线包被液中所述羊抗鼠IgG多抗的浓度为1.0mg/mL，所述无水乙醇的加入量为所述检测线包被液或所述对照线包被液总体积的2.5%。
在本发明一个较佳实施例中，步骤（4）中采用点膜喷金设备对于所述金垫进行喷金；所述金垫采用玻璃纤维膜。
在本发明一个较佳实施例中，步骤（5）中得到所述贴膜的聚氯乙烯底板的具体步骤为：将所述反应膜在2-8℃下存放4h后，再取出放入10倍稀释后的膜封闭液中浸泡30min，取出贴于聚氯乙烯底板上干燥。
在本发明一个较佳实施例中，步骤（5）中所述膜封闭液是将比例为2g：1.21g：0.1mL的聚乙二醇20000、三羟甲基氨基甲烷、曲拉通100溶于水中定容至100 mL得到；所述膜封闭液的pH值为8.0。
在本发明一个较佳实施例中，步骤（6）中所述样品垫采用玻璃纤维膜；所述样品垫的处理过程为：在使用前所述样品垫用样品垫处理液浸泡10min后干燥，其中所述样品垫处理液是将比例为1.21g：25mg的三羟甲基氨基甲烷和鼠抗人红细胞抗体溶于水中定容至100mL，pH值调节至8.0得到的；所述丙型肝炎病毒抗体检测试纸是组装后切割得到的。
本发明的有益效果是：本发明的丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，得到的检测试纸为快速诊断试纸，是采用双抗原夹心法原理制备的，基于免疫侧向流层析技术进行检测，不需任何仪器设备，操作简便、经济实用，诊断快速且适合现场检测，不会对受检者身体造成伤害，并且所述试纸由HCV标记单抗及标记抗原分两步加入反应体系得到，在不影响抗原活性的同时能提高其活性，抗原包含NS3+NS4+NS5+CORE，可以较大提高试纸的灵敏度和特异性。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
（一）容器及材料
容器设备：烧杯、量筒、容量瓶、玻璃棒、磁力搅拌机、电子天平、移液枪、点膜喷金设备、裁切机、切条机、封口机、压壳机、pH计、鼓风干燥箱。
试剂辅料：氯金酸、柠檬酸三钠、K2CO3、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、无水乙醇、Tris（三羟甲基氨基甲烷）、HCl、BSA（牛血清白蛋白）、PEG20000（聚乙二醇20000）、TritonX-100（曲拉通）、蔗糖、海藻糖、鼠抗人红细胞抗体。
物料：玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、聚氯乙烯底板、吸水纸、塑料卡、干燥剂、一次性滴管、铝箔袋。
环境：洁净、室温、干区相对湿度≤30%，湿区相对湿度45-65%，水质：高纯水。
（二）制备过程
1、胶体金的制备：采用柠檬酸三钠还原法
50 mL 质量分数为2%的氯金酸溶液配制：取1g/瓶的氯金酸溶于高纯水中，容量瓶定容至50 mL，2-8℃保存备用。
100 mL质量分数为5%的柠檬酸三钠溶液配制：称取5.00g柠檬酸三钠溶于高纯水中，容量瓶定容至100 mL，用0.22 µm滤头过滤，现配现用。
胶体金制备方法：取两只洁净烧杯，分别加入400mL和200mL高纯水，前者加入质量分数为2%的氯金酸溶液，后者加入质量分数为5%的柠檬酸三钠溶液，于磁力搅拌机上加热至煮沸，待两种溶液都沸腾时，将柠檬酸三钠溶液，快速倒入沸腾的氯金酸溶液中，继续煮沸30min，冷却后加高纯水稀释，2-8℃保存备用。
各组份加入体积：
2、样品垫的处理：
1L样品垫处理液配制：称取12.1g Tris和0.25g鼠抗人红细胞抗体溶于高纯水中，容量瓶定容至1L，用1M盐酸调pH为8.0，2-8℃密闭保存备用。
将型号为RB45的玻璃纤维膜在样品垫处理液中浸润，浸泡10min，取出，相对湿度≤30%，风干4h，裁去边缘，防止边缘效应，装入铝箔袋中室温保存备用。
3、重悬液、包被基液、膜封闭液溶液配制
100mL 1M盐酸配制：量取8.59 mL浓盐酸溶于高纯水中，容量瓶定容至100 mL，室温保存备用。
100mL重悬液配制：称取0.24g Tris、10g蔗糖、5g海藻糖和1g BSA溶于高纯水，在100mL容量瓶中定容，用1M盐酸调pH为8.4，用0.22µm滤头过滤，2-8℃密闭保存备用。
磷酸盐缓冲液（PBS）配制：称取2.84g磷酸氢二钠溶于高纯水，容量瓶定容至100mL，即为0.2M磷酸氢二钠溶液；称取2.40g磷酸二氢钠溶于高纯水，容量瓶定容至100 mL，即为0.2M磷酸二氢钠溶液；用0.22 µm滤头过滤，2-8℃保存备用。量取19 mL0.2M磷酸二氢钠溶液，81 mL0.2M磷酸氢二钠溶液，称取17.00g氯化钠，加入1900 mL高纯水，混匀，即为0.01M，pH=7.4的磷酸盐缓冲液（PBS），2-8℃密闭保存备用。
包被基液配制：称取1.00g海藻糖溶于磷酸盐缓冲液（PBS），容量瓶定容至100 mL，2-8℃密闭保存备用。
膜封闭液配制：称取2.00g PEG20000和1.21g Tris，量取0.1 mL TritonX-100溶于高纯水，在100mL容量瓶中定容，用1M盐酸调pH为8.0，2-8℃密闭保存备用。
4、免疫金制备
100mL 0.2 M碳酸钾溶液配制：称取2.76 g碳酸钾溶于高纯水，容量瓶定容至100mL，用0.22 µm滤头过滤，2-8℃密闭保存备用。
100mL 质量分数为10％的BSA溶液配制：称取10 g BSA溶于高纯水中，容量瓶定容至100mL，0.22 µm滤头过滤，2-8℃密闭保存备用。
标记：取烧杯，加入胶体金，置磁力搅拌机上搅拌，加入6uL/mL的0.2M碳酸钾，调节pH并搅拌10min，缓慢加入5µg/mL的HCV标记单抗，搅拌15min，缓慢加入10% BSA保护剂，至终浓度1%，搅拌15min，在4℃下转速为10000r/min的条件下离心20min，弃去上清液，沉淀用重悬液重悬至原体积的1/10，按每1mL胶体金加入HCV标记抗原0.5μg，混匀，得到HCV免疫金，2-8℃保存备用。
5、点膜喷金操作
喷金：打开点膜喷金设备，将喷金模块压下去，划线模块抬上来，防止划线头碰触到板面，打开真空泵至0.5个大气压。
按[运行]进入运行画面，选择[程序]转换到喷金工作模式。进入程序数据画面后选择好程序号，编辑好“长度”、“浓度”、“速度”、“原点X、Y、Z”等参数，修改好参数后，按[保存]保存数据，按[永久保存]将永久保存数据。
按[手动]进入手动画面，将2号泵（喷金模式）样品管道插入高纯水试管中，管道末端准备接水的器皿。选择[清洗]使用高纯水清洗5遍。待拿走高纯水试管后，选择[排液]直至管道内无水分。此时将2号泵样品管道插入试管中，按[加液]直至管道内充满丙型肝炎抗体检测免疫金。将金垫放在板面上的合适位置，按[运行]进入运行画面，按[开始]进行喷金。
喷金完毕，将2号泵样品管道插入高纯水试管中，管道末端准备接水的器皿。选择[清洗]使用高纯水清洗5遍。按[主菜单]的[气操作]开气至气压为零。
喷金处理后的金垫于相对湿度≤30%风干1h。干燥处理后的免疫金垫置于铝箔袋中，加干燥剂室温密封保存备用。
配制检测线包被液：用包被基液、无水乙醇稀释HCV包被抗原至终浓度为1.2mg/mL，得到检测线包被液C线工作液中，2-8℃保存备用。
配制对照线包被液：用包被基液、无水乙醇将羊抗鼠IgG多抗稀释至终浓度为1.0mg/mL，得到对照线包被液即T线工作液，2-8℃保存备用。
点膜：将划线模块压下去，将喷金模块抬上来，形成一定的落差，防止喷金头触碰板面。
按[运行]进入运行画面，选择[程序]转换到划线工作模式。进入程序数据画面后选择好程序号，编辑好“长度”、“浓度”、“速度”、“原点X、Y、Z”等参数，其中“速度”不可太快，为80mm/s，修改好参数后，按[保存]保存数据，按[永久保存]将永久保存数据。
按[手动]进入手动画面，将1、3号泵（划线模式）样品管道插入高纯水试管中，管道末端准备接水的器皿。选择[清洗]使用高纯水清洗5遍。待拿走高纯水试管后，选择[排液]直至管道内无水分。此时将1号泵（划线模式）样品管道插入C线工作液中，将3号泵（划线模式）样品管道插入T线工作液中，按[加液]直至管道内充满工作液。将准备好的硝酸纤维素膜放在板面上的合适位置，按[运行]进入运行画面，按[开始]进行划线。
划线操作完毕，将1、3号泵样品管道插入高纯水试管中，管道末端准备接水的器皿。选择[清洗]使用高纯水清洗5遍。关闭点膜喷金仪。划线完成后的硝酸纤维素膜即反应膜于2-8℃保存，4h后备用。
将反应膜放入10倍稀释后的膜封闭液中浸泡30min，取出贴于聚氯乙烯底板的相应位置，将粘有反应膜的聚氯乙烯底板置于干燥箱中，60℃±3℃，相对湿度≤30%，烘干2h。干燥完成后将所述聚氯乙烯底板置于铝箔袋中，加干燥剂室温密封保存备用。
6、组装切割、装配、包装
将样品垫、免疫金垫、粘有反应膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装在一起，使用自动斩切机切割成3.0/4.0mm试纸条。每张试纸条装配至塑料卡中，使用压壳机压紧。加入一个干燥剂、一个一次性滴管后装入铝箔袋中保存，即为成品。
所述丙型肝炎病毒抗体检测试纸在硝酸纤维素膜的检测区固定了HCV包被抗原，在对照区固定了羊抗鼠IgG多抗，在玻璃纤维素膜上预包被HCV标记单抗和标记抗原-胶体金。测试时，滴加50uL血清、血浆即可，如检测全血，还需再滴加一滴（约35µL）全血缓冲液（生理盐水），水平放置。免疫金垫上的HCV标记单抗和标记抗原-胶体金会溶解，如样本中含有HCV抗体，HCV标记抗原-HCV标记单抗-胶体金与样本中的HCV抗体结合在一起，形成“抗体-抗原-抗体-金”复合物，复合物沿着试纸条向后方移动，首先到达包被了HCV包被抗原的检测区，“抗体-抗原-抗体-金”复合物将同HCV包被抗原结合，并在检测线上滞留下来，形成一条红色的线，这表示阳性结果。线条颜色的深浅同样本中的抗体数量没有比例关系。该区里如果没有带颜色的线条表示样本中不含HCV抗体或HCV抗体低于本试纸最低检出限。复合物继续移动，到达包被了羊抗鼠IgG多抗的对照区，游离的“抗原-抗体-金”复合物将同羊抗鼠IgG多抗结合在一起而富集在对照区，形成一条红色的线。对照线的出现证明试纸条检测功能正常。无论样本中是否含有HCV抗体，在有效试验中，试纸条的对照区都应当出现淡红至紫红色的对照线。样本继续移动，通过对照区进入吸收区。吸收区的作用是吸附剩余的复合物，使其在试纸条内移动，并消除本底的颜色。自试纸条加入稀释后的样本混合液起计时，15~20分钟内方可读取结果。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，包括步骤为：
（1）制备重悬液：所述重悬液中包括三羟甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白，将三羟甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白溶于水并定容，调节pH值至8-9，得到重悬液；制备包被基液：用海藻糖溶于pH值为7-8的磷酸盐缓冲溶液并定容，得到包被基液；
（2）将胶体金和碳酸钾混合后调节pH值，再加入丙型肝炎病毒标记单抗和牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，所述沉淀用步骤（1）制备的重悬液重悬，再加入丙型肝炎病毒标记抗原，得到丙型肝炎病毒抗体检测免疫金；
（3）用所述包被基液、无水乙醇稀释丙型肝炎病毒包被抗原得到检测线包被液，用所述包被基液、无水乙醇稀释羊抗鼠IgG多抗得到对照线包被液；
（4）用所述丙型肝炎病毒抗体检测免疫金对金垫喷金得到免疫金垫，用所述检测线包被液、所述对照线包被液分别在硝酸纤维素膜上划线，得到反应膜；
（5）将所述反应膜在膜封闭液中浸泡后取出贴于聚氯乙烯底板上干燥，得到贴膜的聚氯乙烯底板；
（6）将样品垫、免疫金垫、贴膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装得到丙型肝炎病毒抗体检测试纸。
2.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述三羟甲基氨基甲烷、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白和定容后总体积的比例为0.24g：10g：5g：1g：100mL。
3.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述重悬液的pH值用1M盐酸调节至8.4；所述磷酸盐缓冲溶液为0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液。
4.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤（2）的具体过程为：将胶体金置于磁力搅拌器上搅拌，往搅拌的胶体金中加入碳酸钾，调节pH并搅拌10min，加入丙型肝炎病毒标记单抗并搅拌15min，再加入牛血清白蛋白溶液，搅拌15min，在4℃、转速为10000r/min的条件下离心20 min得到沉淀，所述沉淀用所述重悬液重悬至离心前体积的1/10，再加入丙型肝炎病毒标记抗原，得到丙型肝炎病毒抗体检测免疫金。
5.根据权利要求1或4所述的丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述碳酸钾为0.2M碳酸钾；所述0.2M碳酸钾、所述丙型肝炎病毒标记单抗和所述丙型肝炎病毒标记抗原的比例为6uL/mL:5µg/mL:0.5µg/mL；所述牛血清白蛋白溶液为质量分数为10%的牛血清白蛋白溶液，所述牛血清白蛋白溶液的加入体积为所述胶体金体积的1/10。
6.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述检测线包被液中所述丙型肝炎病毒包被抗原的浓度为1.2mg/mL，所述对照线包被液中所述羊抗鼠IgG多抗的浓度为1.0mg/mL，所述无水乙醇的加入量为所述检测线包被液或所述对照线包被液总体积的2.5%。
7.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤（4）中采用点膜喷金设备对于所述金垫进行喷金；所述金垫采用玻璃纤维膜。
8.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤（5）中得到所述贴膜的聚氯乙烯底板的具体步骤为：将所述反应膜在2-8℃下存放4h后，再取出放入10倍稀释后的膜封闭液中浸泡30min，取出贴于聚氯乙烯底板上干燥。
9.根据权利要求1或8所述的丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤（5）中所述膜封闭液是将比例为2g：1.21g：0.1mL的聚乙二醇20000、三羟甲基氨基甲烷、曲拉通100溶于水中定容至100 mL得到；所述膜封闭液的pH值为8.0。
10.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤（6）中所述样品垫采用玻璃纤维膜；所述样品垫的处理过程为：在使用前所述样品垫用样品垫处理液浸泡10min后干燥，其中所述样品垫处理液是将比例为1.21g：25mg的三羟甲基氨基甲烷和鼠抗人红细胞抗体溶于水中定容至100 mL，pH值调节至8.0得到的；所述丙型肝炎病毒抗体检测试纸是组装后切割得到的。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109324184A (zh) * 2018-12-05 2019-02-12 厦门同仁心生物技术有限公司 一种丙型肝炎病毒抗原荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法
CN109917124A (zh) * 2018-10-30 2019-06-21 郑州安图生物工程股份有限公司 一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂盒

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1768267A (zh) * 2003-03-28 2006-05-03 安尼生物科技公司 多通道测试装置、其生产方法及其用途
WO2007034507A2 (en) * 2005-09-20 2007-03-29 International Centre For Genetic Engineering And Biotechnology Tetravalent dengue specific domain iii based chimeric recombinant protein
CN101149385A (zh) * 2007-10-26 2008-03-26 天津中新科炬生物制药有限公司 一种丙型肝炎病毒抗体快速诊断试纸及其制备方法
CN103336113A (zh) * 2013-06-24 2013-10-02 苏州万木春生物技术有限公司 一种人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸的制备方法
CN104678098A (zh) * 2015-03-13 2015-06-03 苏州万木春生物技术有限公司 心肌肌钙蛋白i和心型脂肪酸结合蛋白联检试纸制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1768267A (zh) * 2003-03-28 2006-05-03 安尼生物科技公司 多通道测试装置、其生产方法及其用途
WO2007034507A2 (en) * 2005-09-20 2007-03-29 International Centre For Genetic Engineering And Biotechnology Tetravalent dengue specific domain iii based chimeric recombinant protein
CN101149385A (zh) * 2007-10-26 2008-03-26 天津中新科炬生物制药有限公司 一种丙型肝炎病毒抗体快速诊断试纸及其制备方法
CN103336113A (zh) * 2013-06-24 2013-10-02 苏州万木春生物技术有限公司 一种人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸的制备方法
CN104678098A (zh) * 2015-03-13 2015-06-03 苏州万木春生物技术有限公司 心肌肌钙蛋白i和心型脂肪酸结合蛋白联检试纸制备方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109917124A (zh) * 2018-10-30 2019-06-21 郑州安图生物工程股份有限公司 一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂盒
CN109324184A (zh) * 2018-12-05 2019-02-12 厦门同仁心生物技术有限公司 一种丙型肝炎病毒抗原荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法

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