CN106999525A - 用于治疗间皮瘤的菜蓟滴定提取物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及菜蓟的滴定提取物，涉及菜蓟提取物的滴定馏分或所述提取物与一种以上的所述滴定馏分的滴定混合物或所述馏分的混合物，还涉及包含它们的组合物和试剂盒，用于预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤。

Description

用于治疗间皮瘤的菜蓟滴定提取物
技术领域
本发明涉及菜蓟滴定提取物，涉及菜蓟提取物的滴定馏分或所述提取物与一种以上的所述滴定馏分的滴定混合物或所述馏分的混合物，并且涉及包含它们的组合物和试剂盒，用于预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤(MPM)。
背景技术
恶性胸膜间皮瘤(MPM)是一种源自胸腔间皮细胞的侵袭性肿瘤。尽管化疗(通常如果采用了培美曲塞后)改善了患有不能手术的MPM的患者的生存时间，但全球生存时间平均值非常短。最近报道了MPM的潜在分子治疗靶标是由MPM患者的胸膜液中存在的高水平IL-6激活的白细胞介素-6信号通路(IL-6)/JAK/STAT3。IL-6与其受体的结合导致引发JAK活化的受体中的构象变化，该构象变化反过来又引发STAT3转录因子的二聚化，并且STAT3二聚体在细胞核中易位，从而确定引发各种靶基因的转录激活。
这种通路是造血作用、免疫应答和肿瘤形成发生的关键。此外，还已经证明JAK/STAT3系统的功能障碍参与癌症的发展。
据文献报道，接触石棉是间皮瘤的原因之一。
还预测了发达国家的间皮瘤的发病率在未来15年将会上升，并且有些预测已经预计自1998年至2018年间，每年hMPM病例将持续翻番。还预测了第三世界，特别是在印度的间皮瘤急剧上升，因为在印度石棉的使用继续呈指数级上升，而没有采取必要的预防措施。目前，间皮瘤病例在美国每年造成约3000人死亡，在欧洲约5000人死亡。尽管有消除石棉的方案，但是近二十年来间皮瘤的频率没有明显变化，估计欧洲国家在未来25年将每年上升5％-10％。
世界卫生组织(WHO)估计约1.25亿人在工作场所接触石棉。
在美国，估计五十岁以上的男性群体中间皮瘤病例的预计总数为71,000例。
在多年来已经禁止商业使用石棉的欧洲，首次分析预测，男性群体中由间皮瘤引起的死亡人数将继续上升，将在2020年左右达到最大峰值，或者根据最近的预测，在2015年左右达到最大峰值(考虑到平均潜伏期为44.6岁)。
这种疾病的年发病率根据国家的不同而有所不同，但是怀疑在新兴市场中，由于缺乏对石棉矿的监管并且石棉在工业和国内水平广泛普及，病例数量将急剧上升。
人类MPM(hMPM)通常分为4个亚组，其中已经鉴定出各种预后因素。目前的疗法包括手术、放疗、化疗和多模式治疗，但到目前为止，却没有带来令人满意的结果。间皮瘤很少适用于根治性手术消融，常见在文献中报道其对化疗和放疗的抵抗。从诊断时起的平均生存期为8-18个月。
仍然没有有效的药物用于间皮瘤治疗。
发明内容
如将在本申请的实验部分中在大量实验和恶性胸膜间皮瘤的多种细胞系中看到的，本发明的作者已经证，本文所述的提取物对恶性胸膜间皮瘤细胞(通过多种机制抑制其生长)和未转化的间皮细胞以差异方式起作用。
本发明的作者还描述了该提取物的特征，滴定其的一些组分，并且分离出了菜蓟提取物的不同馏分且以相同组分对它们进行滴定；以便一方面能够鉴定出具有与在已报道的实验中使用的菜蓟提取物的滴定值相似的滴定值的各个馏分，还能够将其中的不同馏分混合或者将其与所述提取物混合从而获得最终化合物，其具有与在实施例和附图中报道的提取物的滴定值相似的滴定值，以便能够提供适应于临床用途的标准制剂。
本公开的发明人已经证明，如本专利申请中所述的滴定的菜蓟提取物能够抑制STAT3组成性或异常活化，并诱导MPM肿瘤细胞培养物中细胞凋亡的再活化。此外，本发明的作者还证明，在MPM肿瘤细胞培养物的实验中菜蓟提取物抑制伤口愈合，实际上是防止肿瘤细胞的侵袭。此外，本发明的作者还通过小鼠肿瘤细胞的植入实验证明了本发明的提取物针对于MPM细胞在体内发挥抗肿瘤作用。
因此，本发明的第一主题是以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，其用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤中使用，其中
总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％。
本发明的第二主题是菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，其用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤中使用，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％。
本公开的第三主题是一种组合物，该组合物包含作为唯一活性药物成分的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物和载体和/或稀释剂和/或辅料(excipient)，其用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤中使用，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％。
本发明的第四主题是一种组合物，该组合物包含与一种以上的具有抗肿瘤活性的药剂以及载体和/或稀释剂和/或辅料联合的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物或由其组成，其用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤中使用，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％。
本发明的第五主题是一种试剂盒，该试剂盒将菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物与一种以上的具有抗炎和/或抗肿瘤活性的化合物联合用于合并或序贯给药，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％，该试剂盒包含如以上定义的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物的一个以上的等分试样，或者包含作为活性药物成分的如以上定义的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物的组合物的一个以上的等分试样，和化疗剂或化疗剂与合适的药学上可接受的载体的混合物的一个以上的单独等分试样，该试剂盒用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤中使用。
本发明的第六主题是用于预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤的治疗方法，包括将治疗活性量的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，或者以上定义的药物组合物，可选地与一种以上的具有抗肿瘤和/或抗炎活性的药剂联合给药至需要其的个体的步骤，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％。
描述的所有受试者都涉及恶性胸膜间皮瘤。
为了本说明的目的，术语菜蓟(Cynara scolymus)对应于刺菜蓟亚种朝鲜蓟(Cynara cardunculus subsp.scolymus)，并且可以在说明书和权利要求书的任何一点上相互替代。
为了本说明的目的，术语“包括(comprising)”可以在说明书和权利要求书的任何一点上用术语“组成(consisting of)”替代。
附图说明
注意：在本附图中，常用缩写ABO-1表示所使用的菜蓟种提取物。
图1：用不同剂量的菜蓟提取物对人类恶性胸膜间皮瘤细胞系的克隆形成试验(条件参见实验部分)
图表1a.对人类间皮瘤细胞系MSTO211H进行的测定
图表1b.对人类间皮瘤细胞系NCI-H28进行的测定
图表1c.对人类间皮瘤细胞系MPP-89进行的测定
图表1d.对人类间皮瘤细胞系NCI-H2052进行的测定
图2：使用ATPlite试验(条件参见实验部分)对恶性胸膜间皮瘤细胞系(MSTO211H，MPP-89，NCI-H28)测定细胞活力。该测定表明，在多种间皮瘤细胞系中，本发明的菜蓟提取物以剂量依赖的方式抑制细胞活力。
图3：图2的三种活力曲线与用菜蓟提取物处理正常间皮细胞(HMC)获得的增殖曲线的比较(图3a MSTO211H，图3b MMP-89，图3c NCI-H28)。与HMC相比，恶性间皮瘤细胞系(MPM)清楚地显示了菜蓟提取物的抗增殖作用。
图4：用朝鲜蓟提取物与培美曲塞(PMTX)对间皮瘤细胞系MPM(图4a MSTO211H和图4b NCI-H2052)和转化的间皮细胞(图4c HMC)联合处理后测定的细胞活性(ATPlite试验)。PMTX的处理对MPM细胞具有细胞毒性，并且对非肿瘤细胞具有高毒性。用本发明提取物+PMTX对细胞共同处理对于MPM细胞系的细胞活力具有显著作用，同时降低未转化细胞(HCM)中由培美曲塞引起的死亡率。因此，很明显，本发明的朝鲜蓟提取物仅使得肿瘤细胞对培美曲塞敏感。
图5：人类间皮瘤细胞系MSTO221H的伤口愈合测定(条件参见实验部分)。
图表5a示出了仅具有载体(溶剂(vehicle))和浓度为6μg/ml的产物的对照板中的伤口愈合，而图5b示出了在所示时间用本发明的提取物和载体处理而与闭合伤口的功效有关的条形图(细胞数量的定量％)。
图6：菜蓟提取物对细胞周期影响的评价(FACS法)。在处理48小时(图6a)和处理72小时(图6b)后，提取物通过增加亚G1期细胞百分比诱导了MPM细胞(MSTO211H)死亡。
图7：评价细胞凋亡诱导的测定(Western法)。如通过细胞系MSTO211H中的PARP和caspases 3和7的裂解形式的一些凋亡标记物水平升高所证实的，本发明的提取物以100μg/ml的剂量诱导凋亡。
图8：通过测量annexin V的水平来评价细胞凋亡诱导的测定。如通过annexin V的着色确定的，本发明的提取物以时间依赖性和剂量依赖性的方式诱导细胞系MSTO211H中的凋亡。
图9和10涉及在6-7周龄的雌性CD1裸鼠(MPM肿瘤植入)中进行的朝鲜蓟提取物对细胞系MSTO211H抗肿瘤活性的评价。
图9：朝鲜蓟对MPM细胞系植入的影响
用朝鲜蓟对MSTO211H预处理24小时。然后，将它们接种在CD1裸鼠中。用朝鲜蓟提取物进行的预处理影响了肿瘤的植入，并且对肿瘤体积诱导了显著的统计学差异(p＝0.01)。
图10：朝鲜蓟提取物对MPM细胞移植的作用。用日益增长量的朝鲜蓟提取物对具有MSTO异种移植物的CD1小鼠处理3周。观察到朝鲜蓟提取物的治疗剂量依赖性作用。培美曲塞(PMTX)以已知的治疗浓度用作为阳性对照。该图示出了与已知治疗浓度的培美曲塞相比本发明提取物的功效*p<0.01。
图11：在恶性胸膜间皮瘤细胞系上利用ATPlite测定的三种活力曲线的比较(图11a和11b MSTO211H，图11c和11d MMP-89)。
在图表a和c中，用多种菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分混合物进行测定，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的提取物或馏分混合物(混合物(mix))的9重量％至15重量％，绿原酸占以干燥形式的提取物或馏分混合物的3.5重量％至5.5重量％，并且菜蓟苦素占以干燥形式的提取物或馏分混合物的0.2重量％至3重量％。
在图表b和d中，用也报道在图a和c中的滴定提取物进行测定，馏分3、4和5如下所述。
显然，馏分3和4至少与如上所述滴定的整个提取物或混合物一样有效，而单独馏分5没有任何效果。
具体实施方式
因此，本申请涉及以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，其用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤(MPM)中使用，其中
总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物(混合物(mix))的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占0.2％至4％
或者其中
总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至48重量％，绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至21重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至10重量％。
在其它实施方式中，本申请还涉及以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，其用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤(MPM)中使用，其中
总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物(混合物(mix))的9重量％至15重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至5.5重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2％至3％
或者其中
总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至35重量％，绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至15重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至8重量％。
用于本发明的目的的朝鲜蓟或菜蓟是指属于菜蓟属(菜蓟种(Cynara spp.))，特别是刺菜蓟亚种朝鲜蓟的植物。
为了实施本发明的目的，提取物或其馏分可以是干燥的或新鲜的叶和/或花头或其混合物。
术语“花头”表示由植物产生的花的花头，例如朝鲜蓟本身(通常用作食物的部分)。提取物可以是流体提取物，或者通过已知的干燥技术冻干或干燥的提取物。
提取物可以通过用以下溶剂提取得到：水、乙醇、甲醇、丙酮或异丙醇，在每种情况下都是以纯的形式或以彼此的混合物。醇可以是甲醇、乙醇、异丙醇、优选为乙醇。可以采用纯形式的乙醇或按以下百分比使用：96％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、5％、1％采用乙醇与水的混合物。在本发明的非限制性实施方式中，用于提取的溶剂可以是由乙醇和水以50:50的比例形成的混合物。可以通过水醇提取来制备流体提取物，其相对于1:2至1:100的药物/溶剂，优选以1:10的比例将朝鲜蓟叶渗透/消解。提取的持续时间是本领域技术人员通常使用的持续时间，并且可以是例如至少1小时至约8小时。提取温度通常受到控制，并且可以优选为例如约50℃的温度。可以通过冻干或干燥进行从水醇提取物蒸发醇以及随后干燥含水浓缩物，以提供冻干的提取物或干提取物。
这种提取物的制备是本领域技术人员通常已知的，并且不需要在本公开中进行特别详细的描述。为了实现本发明的目的，可以使用根据常规技术制备的以上指出的任何提取物。
特别地，为了本发明的目的，提取物也可以被以上所述的菜蓟提取物的馏分或馏分混合物或者菜蓟提取物和一种以上的提取物馏分的混合物代替，只要满足上述公开的滴定标准即可。
考虑到可以由气候条件、环境条件产生的，由栽培场地和/或栽培技术的差异产生的，或者甚至由栽培植物的不同品种产生的植物提取物的变异性，因此对于临床使用，重要的是标准化产品以及确定标准化参数，使得能够提供具有定义特征的产品。
因此，本发明的作者描述了在实验中使用的提取物，例如，如附图和实验方案中所报道的提取物的特征，以便确定能够将在临床实践中使用的最终产物标准化的参数。
然后针对一些活性组分对所使用的提取物进行滴定，并且还用各种技术进行分馏，以便能够获得滴定为相同组分或可滴定为相同组分的提取物馏分，因此可以使用各个馏分或将两种以上的所述馏分混合以便获得落入以上指示的参数内的最终产物。
对干燥样品，例如经过干燥、脱水或冻干(冷冻干燥)的样品进行参数的滴定。
根据本发明，总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％或9至15重量％，例如约8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％。在此指示“约”还表示从8到16的非整数，例如，如8.1；8.2；8.3；等等，多达16，均包括在本发明中。
在优选的实施方式中，总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的11重量％至13重量％，例如，如约11％、12％、13％以及包括在11至13之间的非整数。
根据本发明，总绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，或3.5重量％至5.5重量％或4.5重量％至5.5重量％，例如，如约4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％。
根据本发明，总菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％或0.2重量％至3重量％。由于菜蓟苦素倾向于降解，因此初始菜蓟苦素含量(即，刚刚发生提取或分馏时)优选为2至3％的范围。在任何情况下，当从提取或从分馏起将提取物、馏分或馏分的混合物存储在+4℃至+40℃的温度范围，优选在25℃时，提取物、馏分或馏分混合物在从提取起的+36个月时达到等于至少0.2％的菜蓟苦素含量是可接受的。
本发明还涉及菜蓟提取物的馏分，其中该馏分的每一种组分的重量百分(百分数)约是以上报道的两倍，从而以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的馏分中，总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至48重量％或25重量％至35重量％，绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至21重量％或11重量％至15重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至10重量％或1重量％至8重量％。
该馏分适用于组合物和试剂盒的所有用途和实施方式，以及针对以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的该提取物、该馏分和馏分混合物的描述中所指出的治疗方法，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％或9重量％至15重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％或3.5重量％至5.5重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％或0.2至3重量％。
根据本发明，可以通过以下所示的多种方法获得菜蓟提取物的多种馏分。一旦获得馏分，则以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定，然后可以由本说明书中公开的最佳滴度进行选择，可以单独地使用馏分，或者使用具有如上所定义的三种滴定组分中的每一种的浓度(按重量计)的馏分混合物。
作为示例，可以通过按照以下列出的多种方法和步骤获得多种馏分：
1.将菜蓟的干燥叶和/或花头分馏，在35至45℃的温度下与96°的乙醇接触4至10小时。从叶和/或花头中分离醇部分，并使其进行过滤从而消除植物残留物。收集澄清的醇溶液。
2.用水，优选软化水进一步地提取植物残留物，收集水性组分，也将该水性组分过滤从而除去残留的植物部分。收集澄清的水性溶液。
3.将收集的澄清(醇和水)溶液混合，得到40°至60°范围内的醇溶液(在本发明中，相对于醇，符号°表示醇等级)，并进行沉淀和离心，回收上清液进行过滤。
4.收集移除上清液后得到的沉淀，其对应于提取物的第一馏分，该第一馏分可以通过例如冷冻干燥进行干燥，并且滴定。平均来说，在所获得的第一馏分中，总咖啡酰奎宁酸占干提取物馏分的总重量的约2-3％，绿原酸占干提取物馏分的总重量的约0.2-0.6％，以及菜蓟苦素占干提取物馏分的总重量的约0.1-0.3％。
5.将在以上第3点中所述的经受沉淀和离心的40°-50°水醇馏分的上清液在真空下浓缩，除去醇，从而使馏分成为醇0°。将得到的浓缩水溶液进行沉淀和离心，并将浓缩水溶液的上清液过滤以澄清。
6.收集移除上清液后得到的沉淀，其对应于提取物的第二馏分，该第二馏分可以通过例如冷冻干燥进行干燥，并且滴定。平均来说，在所获得的第二馏分中，总咖啡酰奎宁酸占干提取物馏分的总重量的约1-2.5％，绿原酸占干提取物馏分的总重量的约0.05-0.1％，以及菜蓟苦素占干提取物馏分的总重量的约0.3-0.5％。
7.从在第5点中离心和进行过滤后的上清液获得的滤液是浓缩后(例如，在真空下)的水溶液，然后进行干燥，例如通过冷冻干燥，其对应于第三馏分。平均来说，在所获得的第三馏分中，总咖啡酰奎宁酸占干提取物馏分的总重量的约12-14％，绿原酸占干提取物馏分的总重量的约5-7％，以及菜蓟苦素占干提取物馏分的总重量的约2.5-3.5％。
8.可替换地，从在第5点中离心和进行过滤后的上清液获得的滤液是在高孔隙率吸附树脂上经过吸附的水溶液。
9.然后回收树脂吸附的馏分，浓缩并干燥，例如通过冷冻干燥，并且对应于第四馏分。平均来说，在所获得的第四馏分中，总咖啡酰奎宁酸占干提取物馏分的总重量的约29-32％，绿原酸占干提取物馏分的总重量的约13-15％，以及菜蓟苦素占干提取物馏分的总重量的约3-4.5％。
10.对未吸附在树脂上的馏分进行干燥，例如通过冷冻干燥，并对应于第五馏分。平均来说，在所获得的第四馏分中，总咖啡酰奎宁酸占干提取物馏分的总重量的约0.5-0.7％，绿原酸占干提取物馏分的总重量的约0.1-0.2％，以及菜蓟苦素占干提取物馏分的总重量的约0.04-0.06％。
根据本发明，步骤8可以在树脂柱或树脂床上进行，该树脂柱或树脂床能够吸附芳族物质或富含高度不饱和部分或富含烷基或环烷基基团的物质，并能够洗脱不相关物质，如许多极性非芳族物质。用合适的溶剂(如，例如乙醇或水醇溶剂)解吸吸附的树脂，用于其它用途。
合适的层析树脂可以是例如苯乙烯-二乙烯基苯共聚物的高孔隙率吸附树脂，如例如amberlite XAD-2、serdolit PAD-II、ADS TQ 318。
特别地，树脂将是能够吸附芳族和/或非极性物质的树脂，如，例如疏水性吸附树脂，该树脂由直径为0.2mm-0.8mm的微球组成，其均匀系数为≤1.5，由不含活性基团的苯乙烯和DVB的聚合而获得，将其表征为具有相对于孔体积的等于约1.3ml/g的参数的高度多孔的物理结构，使得能够吸附和选择性洗脱有机物质，优选芳族性质。
下表列出了在所报道的实验中使用的菜蓟提取物(ABO-1)以及根据以上报道的方法获得的其馏分(因此，第一、第二、第三、第四和第五馏分)中获得的精准滴定值数据。
因此，作为实例，馏分混合物可以是由约12％的馏分1、约6％的馏分2、约82％的馏分3组成的混合物，或是由约12％的馏分1、约6％的馏分2、约55％的馏分4和约27％的馏分5组成的混合物。
通过滴定得到的馏分，本领域技术人员将确定地知晓如何重新组成馏分混合物或者补充特别缺乏药物活性成分的提取物，以获得具有以上所示的最佳滴定值的化合物。
如从图11中报道的数据明显看出的，馏分3和4本身都是有用的。
在本发明中，[意大利语]术语“活性药物成分(active pharmaceuticalingredient)”等同于英文术语“活性药物成分(Active pharmaceutical ingredient)”(API)。
术语“活性药物成分”也可以用术语“活性成分”(或“活性成分(activeprinciple)”)代替，这是指具有药理学活性的一组分子。
a.菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素进行滴定，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％和16重量％或9重量％至15重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％或3.5重量％至5.5重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％或0.2至3重量％(包括上述详细的实施方式)。
b.以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物的馏分，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至48重量％或25重量％至35重量％，绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至21重量％或11重量％至15重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至10重量％或重量％至8重量％。
根据本发明，如以上详情和权利要求书中描述的，以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物或其馏分或其馏分混合物可以作为活性药物成分使用用于预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤MPM。
这些疾病可以是例如并如文献中记载的炎性和/或肿瘤前和/或肿瘤类型的疾病。
特别地，本发明可适用于治疗暴露于石棉并因而处于恶性胸膜间皮瘤风险中的群体，并且用于减少这些患者群体的间皮素产生。
在间皮瘤肿瘤细胞系中获得的以下和附图中所显示的实验数据还表明，如本说明书中所公开的滴定的菜蓟提取物或其馏分或其馏分混合物可以有利地与一种以上的抗肿瘤药物联合，因此也以协同作用的方式增加了药物本身的抗肿瘤功效。
因此，根据本发明的实施方式，本文所描述和要求保护的菜蓟提取物、其馏分或其馏分混合物与一种以上的具有抗肿瘤活性的化合物(抗肿瘤化合物)联合可用于预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤(MPM)。
根据一个实施方式，具有抗肿瘤活性的化合物可以是化疗剂，并且可以选自包括顺铂、多柔比星、培美曲塞、甲氨蝶呤、长春瑞滨、吉西他滨和紫杉醇的组。
本发明还包括使用根据本说明书所公开滴定的菜蓟提取物的提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物与一种以上的化疗剂联合，用于预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤。
特别地，将以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定根据本发明的提取物、馏分或混合物，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物(混合物(mix))的8重量％至16重量％或9重量％至15重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％或3.5重量％至5.5重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％或0.2重量％至3重量％，或者该馏分将是一种其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至48重量％或25重量％至35重量％、绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至21重量％或11重量％至15重量％以及所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至10重量％或1重量％至8重量％的馏分。
上面提供的总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素的滴定值范围的详细描述也适用于这种具体实施方式。
与一种以上的化疗剂的联合可以是合并或序贯的联合，或者可以同时(单次给予或分开给予)或在几分钟的时间内给予本发明的活性药物成分和化疗剂，或者可以在一天以内或治疗处理期内以彼此分开超过几分钟的方式序贯地或在不同的时间给予本发明的活性药物成分和化疗剂。
由治疗医生根据患者的性别、年龄、疾病状态、体重和病史来确定给药方案。
如上所述，单独地和以联合的方式两者，该治疗可以是预防性的，例如在如上述那些的已知具有可能的肿瘤发生作用的感染的情况下，或者在肿瘤消融的情况下，从而防止所述肿瘤重新形成。
可以将本发明的活性药物成分配制成可用于与上述相同目的的组合物。
因此，本发明还涉及一种组合物，其包含作为活性药物成分的如以上所述和要求保护的以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物、其馏分或其馏分的混合物或其所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物，和载体和/或稀释剂和/或辅料，该组合物用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤(MPM)中使用。
组合物可包含以冻干、干燥或流体形式的如本文所定义的本发明的活性药物成分。
如已经指出的，根据上述方法，可以通过提取无论是新鲜还是干燥的朝鲜蓟的叶或朝鲜蓟的花头或上述部分的混合物获得提取物及其馏分。
根据本发明，以上定义的组合物可用于预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤。
该组合物可以例如含有作为唯一活性成分的以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟、菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％或9重量％至15重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％或3.5重量％至5.5重量％，所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％或0.2重量％至3重量％。
可替换地，组合物可以包含作为唯一活性成分的菜蓟提取物的馏分，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至48重量％或25重量％至35重量％，绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至21重量％或11重量％至25重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至10重量％或1重量％至8重量％。
此外，组合物可以包含适合用于所选制剂类型的辅料。
本领域技术人员将能够容易地确定最佳制剂。
仅作为示例，可以将组合物制成硬明胶胶囊的形式，并含有以冻干形式的如上定义的30％至60％的活性成分以及70％至40％的合适的药理学惰性辅料(例如，微晶纤维素)。
胶囊可以是例如最终重量为300-500mg的胶囊。
由于本文所述的活性化合物可以是以冻干、干燥或流体的形式，所以本领域技术人员可以容易地制备适于用于所选用途的药物组合物。
根据本发明的非限制性实例，本发明，本文定义的组合物可用于预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤。
因此，本发明还涉及一种组合物，其包含除了本发明的活性药物成分之外的一种以上的具有抗肿瘤活性的化合物(抗肿瘤化合物)，该组合物用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤中使用。
根据一个实施方式，这类具有抗肿瘤活性的化合物(抗肿瘤化合物)可以是选自例如包括顺铂、多柔比星、培美曲塞、甲氨蝶呤、长春瑞滨、吉西他滨和紫杉醇的组的化疗剂。
为了还能够使治疗适应每名患者的个体需要的目的，可以由治疗医生以单位剂量或以可剂量的方式配制本发明的组合物。
因此，本发明设想使用包含作为唯一活性药物成分的本发明的活性药物成分的组合物，可选地与一种以上的具有抗肿瘤活性的另外的活性药物成分联合，用于预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤。
这类另外的活性药物成分可以是例如化疗化合物。
与一种以上的化疗剂的联合可以是合并或序贯的联合，或者可以同时(单次给予或分开给予)或在几分钟的时间内给予活性药物成分和化疗剂，或者可以在一天以内或治疗处理期内以彼此分开几分钟的方式序贯地或在不同的时间给予活性药物成分和化疗剂。
由治疗医生根据患者的性别、年龄、疾病状态、体重和病史来确定给药方案。
所描述的治疗可以是预防性的，在肿瘤消融的情况下，从而防止所述肿瘤重新形成。
在如上所述的组合物(由本发明的活性药物成分和至少一种药学上可接受的辅料或佐剂组成，可选地与一种以上的抗肿瘤剂组合)中，至少一种药学上可接受的辅料或佐剂可以选自技术性用于普通药物或化妆品实践或食品工业中的辅料或佐剂。使用的辅料可以属于稀释剂、增溶剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、表面活性剂、滑爽剂和抗粘附剂的类别。
如果需要，组合物还可以含有通常用于药学、化妆品和食品工业中的调味剂、着色剂和防腐剂。
组合物可以是由本领域技术人员所认为适合于制备旨在用于口服给药(例如粉末、颗粒、硬或软明胶的胶囊、片剂、糖浆、滴剂、溶液和口服乳剂)，吸入(例如气溶胶、液体和粉末喷雾剂)，局部给药(凝胶、软膏、乳剂、糊剂、泡沫、用于局部应用的无水固体形式和贴剂)以及根据目前使用的和本领域技术人员已知的技术以肠胃外方式(例如皮下使用、肌内使用、静脉内使用或皮内使用)的制剂的任何制剂。在所有制剂中，通过基于药物实践中通常使用的物质以选择待使用的物质来确定技术性辅料或佐剂的使用。
在基于与或不与具有抗肿瘤活性的药剂联合的本发明的活性药物成分而制备制剂中，本领域技术人员可以使用根据现有技术认为有用的任何辅料以获得适合用于在治疗使用的稳定制剂。作为示例，在稀释剂类别中，可以使用固体制剂形式的稀释剂，如糖、多元醇(例如乳糖、甘露糖醇、山梨糖醇)，纤维素，无机酸的盐(例如磷酸氢钙)，有机酸的盐(如以钠盐、钾盐和钙盐形式的柠檬酸盐、碳酸盐和碳酸氢盐滴定剂)，或者以液体形式的稀释剂，如水，用于口服的食用油(向日葵油、橄榄油、玉米油、甜杏仁油、坚果油)或用于局部制剂的食用油(荷荷芭油，短链、中链或长链的甘油三酸酯)，多元醇(甘油、丙二醇、己二醇)。
在崩解剂的类别中，可以使用例如天然或改性淀粉(玉米淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉)，交联羧甲基纤维素钠、乙醇酸钠淀粉，交联聚维酮；可以使用的可能的粘合剂包括橡胶类型的天然产物(瓜尔胶、黄原胶、阿拉伯树胶)，蔗糖和合成产物(包括聚乙烯吡咯烷酮和纤维素的半合成衍生物)。
使用硬脂酸及其盐，包括镁盐、乙二醇的聚合物、甘油三酯和天然或合成蜡作为润滑剂已被证明是有效的。
表面活性剂用于使形成本发明基础的包含在制剂中的一种以上的活性成分更加与水可溶或用水更易洗涤，这些活性成分单独地起作用或由一种以上的稀释剂携带。例如，可以举出脱水山梨糖醇酯、脱水山梨糖醇聚氧乙烯酯、蔗糖酯和月桂基硫酸钠。
滑爽剂可以选自例如胶体二氧化硅、沉淀二氧化硅，而可使用的抗粘附剂包括例如滑石或淀粉。
在可注射制剂的制备中，可以选择允许活性物质有效溶解或分散的那些辅料。举例来说，出于获得适合于通过注射给药的pH和渗透压的目的，可以与水一起采用其它水溶性载体如多元醇和有机或无机酸的盐。
在特定情况下，可以使用非水溶性载体，如油或通常被批准用于注射用途的合成物质。
本领域技术人员可以使用他/她已知的普通制备方案来制备所有制剂。
仅通过举例的方式，胶囊中的制剂可以方便地通过预先研磨本发明的活性药物成分，在普通混合器中将所获得的粉末与一种以上的所选择的其它抗肿瘤剂和辅料一起混合以制备该制剂，该辅料例如选自以上提及的或在市场上可获得的且批准用于口服使用的那些中的稀释剂、崩解剂、润滑剂和滑爽剂。
在片剂的情况下，可能需要利用预先溶解在水中的或引入至混合物中的粘合剂对部分或全部混合物造粒，并使用水作为根据现有技术的造粒方法的佐剂。
可以对颗粒干燥、筛分并与其它粉末进一步混合，以获得适合于获得根据本领域技术人员已知的片剂的混合物。
在肠胃外使用的情况下，组合物还可以被提供为在分开容器中的本发明的活性药物成分和一种以上的抗肿瘤剂，其可以根据具体操作要求方便地进行混溶。
为了促进本文所述的组合物的使用，这些可以以含有本发明的活性药物成分以及可选的一种以上的抗肿瘤剂的单位剂量的形式存在，该单位剂量有效用于恶性胸膜间皮瘤的预防和/或治疗用途。
本发明还涉及用于将本发明的活性药物成分和一种以上的具有抗肿瘤活性的化合物合并给药或序贯给药的试剂盒，该试剂盒用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤中使用，所述试剂盒包含如本说明书中定义的本发明的活性药物成分的一个以上的等分试样，以及一种以上的具有抗肿瘤活性的化合物的一个以上的等分试样。
可替换地，试剂盒可以包含含有作为唯一活性药物成分的如本说明书中定义的本发明的活性药物成分的组合物的一个以上的等分试样和一种以上的具有抗肿瘤活性的化合物的一个以上的等分试样。
如上所述，这些化合物可以是选自例如包括顺铂、多柔比星、培美曲塞、甲氨蝶呤、长春瑞滨、吉西他滨和紫杉醇的组的化疗剂。
根据本发明，本文所述的组合物发挥其治疗活性的病理学由恶性胸膜间皮瘤代表。
最后，本说明书还涉及用于预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤的治疗方法，包括将治疗活性量的活性药物成分或包含作为唯一活性药物成分的本发明的活性药物成分，可选地与一种以上的抗肿瘤化合物联合的药物组合物给予至需要其的个体的步骤。
形成本发明基础的方法可以通过以下实施：向表现出恶性胸膜间皮瘤的肿瘤前和/或肿瘤病理病症的受试者给予治疗有效剂量的本文所定义的活性药物成分，可选地与一种以上的抗肿瘤药物联合；或通过给予治疗有效剂量的本文定义的组合物，可选地还包含一种以上的抗肿瘤药物，或通过利用本文定义的试剂盒给予提取物和一种以上的抗肿瘤药物。
可以根据医生选择的给药方案合并或序贯地进行如上所述的给药。
在本发明的优选实施方式中，病理学由恶性胸膜间皮瘤代表。
已经报道了许多证实根据本发明提取物的功效的实验数据。
使用的细胞系
-MSTO211H人肺二相间皮瘤细胞系，具有组成型激活的STAT3。可获得自ATCC#CLR-2081
由62岁的未曾进行过任何治疗的患有间皮瘤(二相恶性肿瘤)的人的胸膜溢出建立的人类间皮瘤细胞系。细胞系MSTO211H表达高水平的pStat3)(Tsao等人.Inhibition ofc-Src expression and activation in malignant pleural mesothelioma tissuesleads to apoptosis,cell cycle arrest,and decreased migration andinvasion.MolCancerTher 2007；6:1962-1972.)
-NCl-H2052人类间皮瘤细胞系。该细胞系表达pSTAT3(Tsao等人.Inhibition ofc-Src expression and activation in malignant pleural mesothelioma tissuesleads to apoptosis,cell cycle arrest,and decreased migration andinvasion.MolCancerTher 2007；6:1962-1972.)可获得自ATCC#CLR-5915
-NCI-h28：人类第4期间皮瘤细胞系。可获得自ATCC#CRL-5820
-MPP-89人类间皮瘤细胞系。可获得自CABRI，接入号ICLC HTL00012
以下实施例示出了本发明的菜蓟提取物如何能够：
以剂量依赖的方式降低间皮瘤细胞(MSTO211H，MPP-89，NCI-H2052，NCI-H28)的活力，而对未转化的间皮细胞(HMC)作用不强烈；
降低在相同细胞系的克隆生存测定中形成集落的能力，
诱导在细胞凋亡测定中的恶性间皮瘤细胞MM的细胞死亡；
抑制在伤口愈合测定中的MM细胞的迁移和增殖；
用化疗剂如培美曲塞连续处理使MM细胞敏化；
诱导MM细胞中的DNA损伤，而不诱导HMC细胞中的DNA损伤；
降低MSTO细胞对用提取物预处理的细胞肿瘤移植的能力；
对MSTO异种移植的治疗具有剂量依赖性作用。
实施例
1.方法
1.1.细胞裂解和蛋白质印迹。
在用蛋白酶和磷酸酶的抑制剂(5mM PMSF，3mM NaF，1mM DTT，1mM NaVO4)补充的裂解缓冲液NP40(50mM Tris-HCl pH 7.4，150mM NaCl，1％NP-40，1mM EGTA，1mM EDTA)中将细胞在冰上裂解30分钟。通过在8％聚丙烯酰胺凝胶上的变性电泳(SDS-PAGE)将等量的蛋白质总提取物(30μg)分解，并用2小时转移至硝酸纤维素膜上。用溶解在TBS-吐温_200.05％中的5％奶汁溶液对膜封闭1小时，并与特异性一抗孵育。使用以下一抗：抗β肌动蛋白(A-2228，SIGMA)、抗-pSTAT3(Tyr-705)(sc8059，Santa Cruz)和抗-STAT3(sc7179，SantaCruz)。二抗被过氧化物酶缀合(Santa Cruz)并且使用ECL试剂(Amersham，GE Healthcare，Piscataway，NJ，USA)用于化学发光。
1.2.用菜蓟提取物处理MPM和正常商业性间皮细胞(HMC)的细胞系。
从ATCC(Rockville，MD)获得MPM(MSTO-211H，NCI-H28，NCI-H2052，MPP89)的细胞系，而从Tebu-Bio(法国)获得HMC(人间皮细胞)的细胞系。所有细胞系在37℃和5％CO2下在特定培养基中单层生长。将朝鲜蓟提取物方便地溶解在水溶液中，可注射溶液和乙醇的比例为1:1，初始浓度为30mg/ml。为了测试抗肿瘤性质，如图所示，然后使用多种浓度和多个时间，将产物直接加入多种细胞系的培养基中。
2.测定恶性胸膜间皮瘤(MPM)细胞的克隆形成
将MPM细胞(MSTO211H，NCI-H28；MPP-89；NCI-H2052)以每孔200个细胞接种，并以多种生长浓度的根据本说明书的菜蓟提取物(对照仅含有载体；12.5μg/ml；25μg/ml；50μg/ml；100μg/ml，200μg/ml)进行处理。每个点在6孔多孔中一式两份。15-21天后用结晶紫对形成的集落染色。克隆形成实验(colony formation assay)，也称为克隆生成试验(clonogenic assay)是用于评价抗肿瘤化合物对肿瘤细胞从单细胞形成集落的能力的功效的技术。认为一个集落是一组起源自单个细胞的50个以上的细胞(克隆)。
图1a-1d中所示的实验结果示出了本发明提取物以剂量依赖的方式抑制所测定的所有MPM细胞系中的集落形成的剂量依赖性能力。
3.ATPliteTM细胞活力测定
根据生产商的说明书，利用ATPliteTM测定(Perkin Elmer)评价暴露于多种浓度的本发明提取物之后的各种细胞系的活力。在指出的情况下，术语“载体”是指以与用于处理的相同体积使用的浓度为1:1的可注射溶液和乙醇的水溶液。
ATPLiteTM是基于萤火虫(Photinus pyralis)萤光素酶的活性监测三磷酸腺苷(ATP)水平的系统。该发光测定是对用包含在培养基中的可能物质进行处理的培养的哺乳动物细胞的增殖进行定量评价的比色、荧光和放射性同位素测试的替代。事实上，ATP的监测是用于评价广泛范围的药物、生物反应的调节剂和生物化合物的细胞生长抑制和抗增殖作用。ATPLiteTM测试系统基于加入ATP荧光素酶和D-荧光素的反应产生的光。发射的光在一定限度内与ATP浓度成比例。细胞中ATP的量与细胞活力相关。
在用各种浓度的根据本发明的提取物(对照仅具有载体；12.5μg/ml；25μg/ml；50μg/ml；100μg/ml，200μg/ml)处理后，测定各种类型的MPM细胞系(MSTO211H，MPP89，NCI-H28)和HMC细胞(由有意愿的捐献者提供的未转化的间皮细胞)的细胞活力。
图2中的示出了测定结果的图表明，提取物能够以剂量依赖的方式显著降低细胞活力。
还对未转化的间皮细胞(HMC)测试了细胞活力的影响，通过该测试证实了与肿瘤细胞系相比，形成本发明基础的提取物具有更低的细胞毒性(图6A-6C)(图6A-6C)。
4.测定用化疗剂共同处理的细胞活力
采用细胞系MSTO211H和NCI-H2052以评价菜蓟提取物+抗肿瘤药物联合的作用。
根据制造商的说明书，使用ATPliteTM测定(Perkin Elmer)进行图4(a-c)所示的测定。
以用于处理的相同体积使用浓度为1:1的可注射溶液和乙醇的水溶液。
药剂：
根据生产商的说明书进行稀释的培美曲塞(Alimta，Lilly)。
4.1利用ATPliteTM测定菜蓟种提取物和培美曲塞的联合
图4示出了用培美曲塞、培美曲塞与菜蓟种提取物联合处理72小时后的MSTO211H的活力曲线。图A示出了用非细胞毒性剂量(6μg/ml)的提取物和培美曲塞对MSTO211H细胞的处理，图B示出了用非细胞毒性剂量(6μg/ml)的提取物和培美曲塞(多种浓度)对NCI-H2052细胞的处理，以及图C示出了用非细胞毒性剂量(6μg/ml)的提取物和培美曲塞(多种浓度)对未转化的HMC细胞的处理。测定化合物的浓度绘制在横坐标上，而以百分比表示的细胞活力绘制在纵坐标上。
图4a和b示出了用提取物处理如何使肿瘤细胞系敏感于培美曲塞的处理。在双重处理的曲线中，很明显的是，仅10μM培美曲塞的浓度足以降低测试细胞系的细胞活力。令人有趣发现的是，在非肿瘤细胞系中，针对于培美曲塞，提取物具有保护作用。
5.伤口愈合测定
伤口愈合测定(图16)是简单、便宜的且是用于研究体外定向细胞迁移而开发的最初方法之一。该方法模拟体内伤口愈合过程中的细胞迁移。基本步骤包括在细胞单层中产生“伤口”，然后通过在封闭“伤口”所需的细胞迁移期间的开始和以规则的间隔时捕获图像来监测“伤口”的特定区域。将经过培养具有95％融合度的MSTO211H细胞接种在6孔板中，用10微升无菌移液管穿刺来制成“伤口”(或切口)，以除去细胞。在受伤后在指定时间产生数字显微照片。最后的条形图示出了在指定时间用载体或ABO 1处理的切口(细胞的定量数％)的封闭效果。
6.评价诱导细胞凋亡的测定
参见图(6-8)
6.1蛋白质印迹
使用与第1.1点中所述的相同技术，使用以下一抗：抗β肌动蛋白(A-2228，SIGMA)、抗-caspase-3(31A1067，Alexis)、抗-caspase-7(#9492，Cell Signaling)和抗-PARP(#9542S，Cell Signaling)。
6.2FACS分析和PI染色以及PI/膜联蛋白V染色分析
为了确定本发明提取物对细胞周期的影响，进行了FACS分析。
为了用碘化丙啶(PI)染色，将细胞以104个细胞/ml的密度接种在6孔板中。24小时后，用指定浓度的本发明提取物以不同的时间间隔处理肿瘤细胞。将细胞收集在悬浮液中，在PBS中洗涤附着的细胞，用冷冻乙醇(70％v/v)固定并储存在-20℃。为了分析，将细胞在PBS 1×中洗涤并悬浮于PBS 1Z，PI(25mg/ml)和Rnase A(200mg/ml)的溶液中。
对于PI/膜联蛋白V双重染色，收集经过处理的细胞并重悬于结合缓冲液(HEPESpH7.4，CaCl2 2.5mM，NaCl 140mM)中。用膜联蛋白V FITC和PI(5mg/mL)(Invitrogen)将等分试样的细胞孵育15分钟。
在所有的FACS分析中，对每个样品分析了105个事件。在GuavaEasyCyte 8HT(Millipore)流式细胞仪上进行流式细胞术分析。
从图8可以看出，如通过膜联蛋白V染色确定的，本发明的提取物以时间依赖性和剂量依赖性方式诱导MSTO211H细胞的细胞凋亡。
7.移植用本发明的提取物处理或未处理的肿瘤细胞
第一次植入实验的描述。
用50μg/ml浓度的朝鲜蓟将MSTO211H细胞处理24小时。收集PBS/Matrigel(BDBiosciences)中的2×106个细胞的悬浮液并接种在4周龄的雌性裸鼠的右髋。每周监测肿瘤体积两次，一直到第21天。处死小鼠并且移除肿块。
8.将肿瘤细胞移植至小鼠中并用菜蓟和培美曲塞处理
第二次植入实验的描述。
在细胞植入前，将其扩增，并根据其活力和污染进行评价，即将其计数并以20×106/ml的浓度重新悬浮于PBS中。将基质胶(Matrigel)加入到悬浮液中以获得终浓度为10×106细胞/ml的PBS Matrigel 1/1。将MSTO细胞接种在48只小鼠的皮下。
当肿瘤达到60mm3的平均体积时，将小鼠分成8组，每组6只动物接受不同的处理。
两组在三周的时间内以饮用水一周7天地接受朝鲜蓟；其它组在3周的时间内一周5天地腹膜内接受培美曲塞。
以下表5的方式列出了这些组：
SC＝皮下
治疗(treatm.)＝治疗(treatment)
给药(administrat.)＝给药(administration)
IP＝腹膜内
OS＝口服
随着肿瘤发展的出现(即肿瘤达到60mm3时)，用Abo1和培美曲塞开始处理，如下给药：腹膜内连续5天剂量为100mg/Kg，88ml/小鼠的培美曲塞，浓度为25、50和75微克/ml的朝鲜蓟提取物饮用水，并在3周时间内隔天进行测量。
每天监测小鼠以评价任何病症；每周监测体重两次。
实验结束时(接种后42天)，收集肿瘤块并固定在10％福尔马林中(24小时后转移至70％乙醇)。
使用三丰卡尺(Mitutoyo caliper)每周测量肿瘤直径两次。
9.测定菜蓟中的绿原酸和菜蓟苦素
样品制备：称重0.25g的冻干提取物(0.5g的被研磨的叶子)，并用50ml的75％MeOH/0.1％HCOOH在超声下提取15分钟，防止光照。离心并倾析于100ml容量瓶中。在相同的条件下对残留物重复进行第二次提取。离心并倾析于同一100ml容量瓶中。在20℃下用相同的提取溶剂使重新结合的有机提取液至一体积。用0.45μm的醋酸纤维素过滤器进行过滤，并将滤液注入UHPLC或HPLC系统。
色谱条件(UHPLC)：
柱：Poroshell 120EC-C18,3×100mm 2.7μm+在线过滤器4.6mm，0.2μm过滤器；柱温：30℃±0.8℃
检测器：二极管阵列检测器
绿原酸：波长＝325nm—带宽4。
菜蓟苦素：波长＝212nm—带宽4。
流速：0.43ml/min。
注射量：5μl
流动相：A＝H2O/0.1％HCOOH，B＝CH3CN/0.1％HCOOH。
洗脱条件：
标准品制备：
标准品：菜蓟苦素—溶解溶剂：用于HPLC的MeOH。工作浓度：0.00404至0.064624mg/ml。储存条件：工作溶液储存于-20℃，避光保存。
标准品：绿原酸—溶解溶剂：用于HPLC的50％MeOH。工作浓度：0.02548至0.10192mg/ml。储存条件：工作溶液储存在+4℃，避光保存。
色谱条件(HPLC法)：
色谱柱：Luna C18 150×4.6mm 5μm
柱温：30℃±0.8℃
检测器：二极管阵列检测器
绿原酸：波长＝325nm—带宽4。参考(Ref.off)
波长：波长＝212nm—带宽4。参考
流速：0.5ml/min。
注射体积：10μl
流动相：A＝H2O/0.1％HCOOH，B＝CH3CN/0.1％HCOOH
洗脱条件：
计算：
用下式计算固体产物中绿原酸含量的百分含量：
其中：
AC＝样品中与绿原酸相关的峰面积；
Ast＝标准品中与绿原酸相关的峰面积；
conc.st＝标准品中绿原酸以mg/ml计的浓度；
V＝以ml计的提取物的总体积；
p＝以克计的样品重量
F＝稀释因子。
用相同的公式15计算固体产物中菜蓟苦素的含量百分比。测定菜蓟中表示为绿原酸的总咖啡酰奎宁酸。
10.测定在菜蓟中以绿原酸表示的总咖啡酰奎宁酸。
样品制备：精确称重0.30g±0.015g冻干的提取物样品(如果是研磨的叶子，则为0.50g)。加入40ml超纯H2O，置于95℃±2℃的温度下进行磁力搅拌。一旦达到沸腾温度后，通过棉花过滤于50ml离心管中。加入2ml的饱和醋酸铅溶液至(仍然温热的)溶液中。
冷却，离心并弃去上清液。向残留物中加入5ml超纯H2O，并搅拌离心管。再次离心并弃去上清液。用70ml稀释的乙酸(用超纯H2O使11.4ml成为100ml)提取残余物，并在缓慢搅拌下加热至沸腾。通过棉花过滤仍然温热的溶液，加入2ml(200ml/l)硫酸溶液。离心并将澄清溶液倾析至100ml容量瓶中。向残留物中加入5ml稀释的乙酸。离心并将澄清溶液倾析于同一100ml的烧瓶中。在室温下，用稀释的乙酸使其体积为100ml。
测试溶液：取1ml溶液。利用容量瓶，用甲醇定容至25ml，搅拌。
参考溶液：取1ml乙酸。利用容量瓶，用甲醇定容至25ml，搅拌。
分光光度计读数：
使用参考溶液作为空白，测量325nm处的测试溶液吸光度。
A1％,1cm的定义(如欧洲药典Ed 8.0,2.2.25中所定义)＝置于1cm长小室中的以浓度为10g/升溶解的参考物在特定波长下的吸光系数。
假设值在325nm处的绿原酸的A1％,1cm为485，那么用下式计算以绿原酸表示的咖啡酰奎宁酸的百分比：
计算：
其中：
A＝样品在325nm处的吸光度。
Ve＝提取物的终体积。
Vf＝稀释的终体积。
p＝以克计的样品重量。
Vp＝用于最终稀释的样品体积。
A1％,1cm＝485(在325nm波长处的绿原酸的A1％,1cm)。
参考文献
-Aggarwal B.B.等人.Ann.N.Y.Acad.Sci.1091；151-69:2006
-Johnston PA e Grandis RG,MolInterv；11(1)；18-26:2011
-Niu G.等人.Mol Cancer Res,6(7)；1099-105:2008
-Turkson J.Jove R.“STAT proteins:novel molecular targets for cancerdrug discovery”Oncogene.2000Dec 27；19(56):6613-26
-Yu.H.等人“STATs in cancer inflammation and immunity:a leading rolefor STAT3”Nature Reviews Cancer 9,798-809(November 2009)

Claims (13)

1.一种以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，其用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤中使用，其中
总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％
或者其中
总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至48重量％，绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至21重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至10重量％。
2.根据权利要求1使用的所述菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，其中
所述总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的9重量％至15重量％，所述绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至5.5重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至3重量％
或者其中
所述总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至35重量％，所述绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至15重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至8重量％。
3.根据权利要求1或2中任一项所述的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，其中所述提取物、所述馏分或所述混合物是以干燥、冻干或流体形式并且从菜蓟叶、花头或其混合物获得。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，与一种以上的抗肿瘤化合物联合在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤中使用。
5.根据权利要求4所述的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，其中通过将所述提取物或所述馏分或所述混合物与所述一种以上的抗肿瘤化合物合并给药或序贯给药来进行所述联合。
6.根据权利要求4或5中任一项所述的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物，其中所述一种以上的抗肿瘤化合物选自包括顺铂、多柔比星、培美曲塞、甲氨蝶呤、长春瑞滨、吉西他滨和紫杉醇的组。
7.一种组合物，所述组合物包含作为唯一活性药物成分的以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物以及载体和/或稀释剂和/或辅料，所述组合物用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤中使用，其中
总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至7重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％
或者其中
总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至48重量％，绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至21重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至10重量％。
8.根据权利要求7使用的所述组合物，其中
所述总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的9重量％至15重量％，所述绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至5.5重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至3重量％；
或者其中
所述总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述馏分的25重量％至35重量％，所述绿原酸占以干燥形式的所述馏分的11重量％至15重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述馏分的1重量％至8重量％。
9.根据权利要求7或8使用的所述组合物，进一步地包含除所述活性药物成分之外的一种以上的抗肿瘤化合物。
10.根据权利要求7至9中任一项使用的所述组合物，其中所述一种以上的抗肿瘤化合物选自包括顺铂、多柔比星、培美曲塞、甲氨蝶呤、长春瑞滨、吉西他滨和紫杉醇的组。
11.一种试剂盒，所述试剂盒用于将菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物与一种以上的抗肿瘤化合物合并给药或序贯给药，所述试剂盒用于在预防和/或治疗恶性胸膜间皮瘤中使用，包括：
-以总咖啡酰奎宁酸、绿原酸和菜蓟苦素滴定的菜蓟提取物或菜蓟提取物的馏分或所述提取物与一种以上的所述馏分的混合物或所述馏分的混合物的一个以上的等分试样，其中总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的8重量％至16重量％，绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至8重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至4重量％，和
-一种以上的抗肿瘤化合物的一个以上的等分试样。
12.根据权利要求11所述的试剂盒，其中所述总咖啡酰奎宁酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的9重量％至15重量％，所述绿原酸占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的3.5重量％至5.5重量％，并且所述菜蓟苦素占以干燥形式的所述提取物或所述馏分或所述混合物的0.2重量％至3重量％。
13.根据权利要求11或12所述的试剂盒，其中所述一种以上的抗肿瘤化合物选自包括顺铂、多柔比星、培美曲塞、甲氨蝶呤、长春瑞滨、吉西他滨和紫杉醇的组。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107496399B (zh) * 2017-08-21 2020-05-05 四川九章生物科技有限公司 一种具有抗肿瘤药物功效的联合用药物
IT201800005721A1 (it) * 2018-05-25 2019-11-25 Nuove composizioni per il trattamento di leiomiomi uterini
CN112479881B (zh) * 2020-11-18 2022-07-29 湖南朗林生物资源股份有限公司 一种朝鲜蓟提取物的制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014191954A1 (en) * 2013-05-29 2014-12-04 Aboca S.P.A. Societa' Agricola Extract of cynara ssp. and uses thereof

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19627376A1 (de) * 1996-07-06 1998-01-08 Aar Pharma Adler Apotheke Verwendung von Artischocken-(Cynara)-Extrakten
DE10138929A1 (de) * 2001-08-08 2003-02-27 Lichtwer Pharma Ag Artischockenblätterextrakte
ITMI20051347A1 (it) * 2005-07-14 2007-01-15 Indena Spa Estratti di cynara scolimus loro uso e formulazioni che li contengono
PT103839B (pt) * 2007-09-28 2008-10-23 Ecbio Investigacao E Desenvolv Composições farmacêuticas contendo a enzima ciprosina, uma peptidase aspártica de cynara cardunculus, e a sua inclusão em formulações antitumurais

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014191954A1 (en) * 2013-05-29 2014-12-04 Aboca S.P.A. Societa' Agricola Extract of cynara ssp. and uses thereof

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ABDALLA OSAMA等: "Immunomodulatory Effect of Artichoke (Cynara scolymus) on Carbon Tetrachloride Induced Immunosuppression in Rats", 《ANNALS OF VETERINARY AND ANIMAL SCIENCE》 *
CHONGMING WU等: "Chlorogenic Acid Protects against Atherosclerosis in ApoE2/2 Mice and Promotes Cholesterol Efflux from RAW264.7 Macrophages", 《PLOS ONE》 *
CLAUDIO PULITO等: "Cynara scolymus affects malignant pleural mesothelioma by promoting apoptosis and restraining invasion", 《ONCOTARGET》 *
ELENA BUTTURINI等: "Mild oxidative stress induces S-glutathionylation of STAT3 and enhances chemosensitivity of tumoural cells to chemotherapeutic drugs", 《FREE RADICAL BIOLOGY AND MEDICINE》 *
KOTA IWAHORI等: "Overexpression of SOCS3 exhibits preclinical antitumor activity against malignant pleural mesothelioma", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER》 *
赵友谊: "朝鲜蓟的研究进展", 《中国野生植物资源》 *

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