CN106995809B - 一种低温木聚糖酶Xyn27及其基因和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种低温木聚糖酶Xyn27及其基因和应用，提供了一种来源于枝顶孢属菌(Acremonium sp.)13‑4的木聚糖酶Xyn27，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，且本发明提供了编码上述酶的编码基因Xyn27。本发明的Xyn27具有以下性质：最适pH7.0，在pH 4.0‑8.0范围内都具有30％以上的相对酶活性；最适温度35℃，在10℃和0℃还有38.7和10.8％的相对酶活性。本发明的木聚糖酶是一种新的低温木聚糖酶，可以应用于饲料和食品等工业，减少能源消耗。

Description

一种低温木聚糖酶Xyn27及其基因和应用

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种低温木聚糖酶Xyn27及其基因和应用。

背景技术

自然界中，半纤维素是植物细胞壁骨架木质纤维素的组成部分，是仅次于纤维素的第二大可再生资源；大量存在于废弃农作物中，如秸秆、玉米、稻草等。因此，半纤维素的降解是废弃农作物再利用的首要前提。由于半纤维素的组成较为复杂，是由戊糖、己糖和糖醛酸连接而成的异质多糖；因此半纤维素的降解需要多种酶的参与，例如水解β-1,4-木糖苷键的外切木聚糖酶、甘露聚糖酶、作用于阿拉伯木聚糖非还原性末端的α-L-阿拉伯呋喃糖酶、水解葡萄糖醛酸木聚糖的α-葡萄糖醛酸酶、甘露聚糖酶、木葡聚糖酶等。

木聚糖是组成半纤维素的多种杂多糖中的最主要成分，因此，木聚糖的完全降解对于半纤维素的降解来说也是至关重要的因素。木聚糖的结构亦为复杂，除了D-吡喃木糖以β-1,4-糖苷键连接而成的主链骨架外，其主链吡喃环的2，3号位往往会被不同的侧链基团如阿拉伯糖、4-O-甲基-D-葡萄糖醛酸、阿魏酸等取代，不同来源的木聚糖其侧链组成不同。

与中、高温木聚糖酶相比，低温木聚糖酶具有更松散、柔顺的分子结构，使其在自然条件下具有更低的活化能、Km值及催化反应温度。这些特点可以加强其对底物的亲和力，提高底物利用率，从而降低能耗，缩短处理过程的时间；另外，利用低温木聚糖酶在高温条件下对热敏感的特点，可以通过温和的热处理使其变性失活，从而控制酶水解程度，使产品品质不受影响。例如，在食品行业中，由于低温酶在中温下容易失活，在应用低温酶达到最佳反应效果后,只需在中等温度保持较短时间就可使酶失活,这样不会因温度高而破坏食品的风味。目前发现的多数木聚糖酶都是中温木聚糖酶，其最适作用温度在70-90℃；对低温木聚糖酶的研究在理论和实际应用中都具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种能高效应用的低温木聚糖酶，其最适温度35℃，在10℃和0℃还有38.7％和10.8％的相对酶活性，在35℃处理1h可以保持70％以上的相对活性，具有良好的热稳定性，是一种具有应用潜力的新的低温木聚糖酶。

本发明还提供编码上述低温木聚糖酶基因，包含上述基因的重组载体，以及包含上述基因的重组菌株。

本发明从枝顶孢属菌中分离得到一种新的低温木聚糖酶Xyn27。

本发明实现目的的技术方案如下：

一种低温木聚糖酶Xyn27，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

而且，低温木聚糖酶Xyn27以1％榉木木聚糖为底物，在离子浓度为5mmol时，Mn²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺酶活力提高至123.33％，129.13％和106.45％；在Ni²⁺,Fe²⁺,Cu²⁺,Fe³⁺存在的条件下，Xyn27酶活力保持94.28％，89.98％，85.50％和70.93％的相对活力；在EDTA和SDS中，Xyn27仍可以保持93.23％和83.07％的相对活性。

一种低温木聚糖酶Xyn27编码基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

包含低温木聚糖酶Xyn27编码基因的重组载体。所述载体为pPIC9-Xyn27。

包含低温木聚糖酶Xyn27编码基因的重组菌株。

一种制备低温木聚糖酶Xyn27的方法，所述方法包括以下步骤：

⑴用权利要求4的重组载体转化宿主细胞，得重组菌株；

⑵培养重组菌株，诱导重组低温木聚糖酶Xyn27编码基因表达；

⑶回收并纯化所表达的低温木聚糖酶Xyn27。

低温木聚糖酶Xyn27在食品发酵中的应用。

本发明的优点和积极效果如下：

本发明的Xyn27是一个低温木聚糖酶，最适温度35℃，最适pH值均为7.0，常温下，在弱酸性和中性的范围内均具有活性；同时具有良好的热稳定性，以1％榉木木聚糖为底物，测得其木聚糖酶活性在pH＝4.0-8.0的范围内维持30％以上的酶活性；在35℃处理1h后活性具有70％以上的酶活力。

附图说明

图1重组木聚糖酶的蛋白纯化图，Xyn27蛋白纯化，M：蛋白marker；1：发酵液；2：镍柱纯化后的蛋白。

图2重组木聚糖酶的最适pH。

图3重组木聚糖酶的pH稳定性。

图4重组木聚糖酶的最适温度。

图5重组木聚糖酶的热稳定性。

图6重组木聚糖酶的金属离子稳定性。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。

本发明从枝顶孢属菌中分离得到一种新的低温木聚糖酶Xyn27基因，同时提供该基因编译的低温木聚糖酶。

本发明提供了一种低温木聚糖酶Xyn27，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，如下。

MRSHLTTALPLLAATPLASAQINKWAQAAGLMYFGSATDTPGQRERAGLETTYPQYDAILADNDMFGSTTPTNGQKWLFTEPEQGVFNFTEGDITADLAAEQGKSLRCHALVWHSQLAPWVETTEWTPETLTEAITLHVNTIAEHYKGRCYAWDVVNEALNEDGTWRESVFYEVLGEDYIKLAFRLAAEADPEAKLYYNDYNIERPGGKVNGTLRIVEMLQADGIRIDGVGMQAHFVAGDSPTLDEQIEVIESYAALGVEVALTELDVRLSTLPPTEETLALQKEDYKNAVGACTQVDACIGITMWDFYDPFSWVPYTFEGEGAALLWFEDFTVHPAYYGVLAALKNATGLCASKAKRGTAQLFNA

其中，该酶基因编码366个氨基酸和一个终止密码子，其中前20个氨基酸为信号肽，成熟的木聚糖酶Xyn27的理论分子量为40.41kDa。

本发明提供了编码上述低温木聚糖酶Xyn27，具体地，该基因的基因组序列如SEQID NO.2所示。

本发明通过PCR的方法分离克隆了木聚糖酶Xyn27，DNA全序列分析结果表明，木聚糖酶Xyn27全长1101bp。SEQ ID NO.2：

ATGCGAAGCCATCTCACCACCGCCCTGCCCCTGCTGGCCGCCACGCCGCTGGCCTCGGCCCAGATCAACAAGTGGGCCCAGGCTGCTGGCCTCATGTACTTTGGCTCGGCCACGGACACACCCGGCCAGCGTGAGCGCGCCGGTCTGGAGACGACCTACCCCCAGTACGACGCCATCCTCGCCGACAATGACATGTTCGGCTCCACGACGCCCACCAACGGGCAAAAGTGGCTCTTTACCGAGCCGGAGCAGGGCGTCTTCAACTTCACCGAGGGCGACATCACCGCCGACCTCGCCGCCGAGCAGGGCAAGAGCCTCCGCTGCCACGCCCTCGTCTGGCACTCGCAGCTCGCCCCCTGGGTCGAGACCACCGAGTGGACGCCTGAGACGCTCACCGAGGCCATCACGCTGCACGTCAACACCATTGCCGAGCACTACAAGGGCCGGTGCTACGCCTGGGACGTGGTCAACGAGGCGCTCAACGAGGACGGCACCTGGCGCGAGAGCGTCTTCTACGAGGTTCTCGGCGAGGACTACATCAAGCTCGCCTTCCGCCTCGCCGCCGAGGCGGATCCCGAGGCCAAGCTGTACTACAACGACTACAACATCGAGCGCCCCGGTGGCAAGGTCAACGGCACGCTGCGTATTGTGGAGATGCTCCAGGCGGACGGCATCCGCATCGACGGTGTCGGTATGCAGGCACACTTTGTCGCCGGCGACTCCCCTACCCTCGACGAGCAGATTGAGGTCATTGAATCGTACGCCGCGCTCGGCGTCGAGGTCGCCCTCACGGAGCTGGACGTGAGACTGTCCACCCTCCCCCCCACCGAGGAGACCCTCGCACTCCAGAAGGAGGACTATAAGAACGCCGTCGGCGCCTGTACCCAGGTCGATGCCTGCATCGGCATCACCATGTGGGACTTTTACGACCCCTTCAGCTGGGTTCCCTACACCTTTGAGGGTGAGGGCGCCGCGCTGCTTTGGTTCGAGGACTTTACCGTGCACCCGGCGTACTATGGTGTCCTTGCCGCGCTCAAGAACGCCACGGGCCTGTGCGCGAGCAAGGCCAAGCGCGGCACGGCGCAGCTGTTCAACGCATAG

在GenBank中进行BLAST比对，该基因与来源于Myceliophthora thermophilaATCC 42464.(XM_003662144)氨基酸序列一致性为83％。说明Xyn27是一种新的木聚糖酶。

本发明还提供了包含上述木聚糖酶Xyn27的重组载体，命名为pPIC9-Xyn27。将本发明的木聚糖酶基因插入到表达载体合适的限制性酶切位点之间，使其核苷酸序列可操作的与表达调控序列相连接。作为本发明的一个最优选的实施方案，优选为将本发明的木聚糖酶基因插入到质粒pPIC9上的EcoR I和Not I限制性酶切位点之间，使该核苷酸序列位于AOX1启动子的下游并受其调控，得到重组酵母表达质粒pPIC9-Xyn27。

本发明还提供了包含上述低温木聚糖酶Xyn27的重组菌株，优选所述菌株为大肠杆菌、酵母菌，优选为重组菌株GS115/Xyn27。

本发明还提供了一种制备低温木聚糖酶Xyn27的方法，包括以下步骤：

⑴用上述的重组载体转化宿主细胞，得重组菌株；

⑵培养重组菌株，诱导重组木聚糖酶表达；

⑶回收并纯化所表达的木聚糖酶Xyn27。

其中，优选所述宿主细胞为毕赤酵母细胞、啤酒酵母细胞或多型逊酵母细胞，优选将重组酵母表达质粒转化毕赤酵母细胞(Pichia pastoris)GS115，得到重组菌株GS115/Xyn27。

本发明涉及的具体步骤如下：

试验材料和试剂

1、菌株及载体：本发明从枝顶孢属菌13-4中分离得到一种新的低温木聚糖酶Xyn27。毕赤酵母表达载体pPIC9及菌株GS115购自于Invitrogen公司。

2、酶类及其它生化试剂：内切酶购自TaKaRa公司，连接酶购自Invitrogen公司。购自Sigma公司，其它都为国产试剂(均可从普通生化试剂公司购买得到)。

3、培养基：

⑴大肠杆菌培养基LB(1％蛋白胨、0.5％酵母提取物、1％NaCl,pH7.0)。

⑵BMGY培养基：1％酵母提取物，2％蛋白胨，1.34％YNB，0.00004％Biotin，1％甘油(V/V)。

⑶BMMY培养基：除以0.5％甲醇代替甘油,其余成份均与BMGY相同。

⑷NB培养基：0.3％酵母粉，0.5％蛋白胨，0.6葡萄糖，1％NaCl。

说明：以下实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法，均参照《分子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行。

本发明的Xyn27是一个低温木聚糖酶，最适温度35℃，最适pH值均为7.0，常温下，在弱酸性和中性的范围内均具有活性；同时具有良好的热稳定性，以1％榉木木聚糖为底物，测得其木聚糖酶活性在PH4.0-8.0的范围内维持30％以上的酶活性；在35℃处理1h后活性具有70％以上的酶活力。

实施例1

枝顶孢属菌木聚糖酶编码基因Xyn27的克隆

提取来源于土壤样品的枝顶孢属菌13-4基因组DNA：

根据第10家木聚糖酶基因的保守区序列设计合成了简并引物XynF，XynR。

以枝顶孢属菌13-4总DNA为模板进行Touch-down PCR扩增。PCR反应参数为：94℃变性5min；然后94℃变性30sec，65-55℃退火45sec(每个循环降0.5度)，72℃延伸40sec 10个循环，94℃变性30s，60℃退火45sec，72℃延伸1min，30个循环后72℃保温10min。得到一约1101bp片段，将该片段回收后与PMD-19T载体相连并测序。

根据测序得到的核苷酸序列，设计上游和下游各三条TAIL-PCR特异性引物：设计方向为需要扩增的未知区域方向，sp2的位置设计在sp1的内侧，sp3位于sp2的内侧。每两个引物之间的距离没有严格规定，引物长度一般22-30nt，退火温度在60-65℃。并将它们分别命名为usp1、usp2、usp3(上游特异性引物)，dsp1、dsp2、dsp3(下游特异性引物)见表1。

表1.木聚糖酶Xyn27TAIL-PCR特异性引物

通过TAIL-PCR得到已知基因序列的侧翼序列，扩增得到产物回收后送金唯智公司测序。拼接后木聚糖酶Xyn27基因全长1101bp，编码366个氨基酸和一个终止密码子。该基因所编码的成熟蛋白的理论分子量为40.41kDa。

实施例2

重组木聚糖酶Xyn27的制备

将表达载体pPIC9进行双酶切(EcoR I+Not I)，同时将编码木聚糖酶的基因Xyn27双酶切(EcoR I+Not I)，切出编码成熟木聚糖酶的基因片段与表达载体pPIC9连接，获得含有木聚糖酶基因Xyn27的重组质粒pPIC-Xyn27转化毕赤酵母GS115，获得重组毕赤酵母菌株GS115/Xyn27。

取含有重组质粒的GS115菌株，接种于100mL BMGY培养液中，30℃250rpm振荡培养48h后，离心收集菌体。然后于50mL BMMY培养基重悬，30℃250rpm振荡培养。诱导48h后，离心收集上清。测定木聚糖酶的活力。通过镍柱纯化后，SDS-PAGE结果表明(图1)，重组酶在毕赤酵母中得到了表达。测得其木聚糖酶比活为10.41U/mg。

实施例3

木聚糖酶的活性分析

具体方法如下：在0.9mL的pH 6.0的1％(w/v)榉木木聚糖底物中加入100μL酶液，在37℃反应10min后加入1.5mL DNS，煮5min终止反应，冰上放置10min后，室温下测定OD₅₄₀的吸光值。1U定义为在最适条件下每分钟释放1μmol还原糖所需要的酶量，单位是U/mL。

实施例4

木聚糖酶Xyn27的性质测定

1、木聚糖酶Xyn27的最适pH和pH稳定性的测定方法如下：

将实施例2纯化的重组木聚糖酶在不同的pH下进行酶促反应以测定其最适pH。以1％榉木木聚糖为底物。缓冲溶液的缓冲梯度不同：0.2M甘氨酸-盐酸pH 1.0-3.0；0.2M磷酸氢二钠-柠檬酸pH 2.5-8.0；0.2M Tris-盐酸缓冲液，pH 7.0-9.0；0.2M甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，pH 9.0-12.0。900μL底物与缓冲液的混合溶液在35℃的反应条件下先预冷5min，加入100μL适当稀释的酶液，混匀并准确反应10min，加入1.5ml DNS终止反应，冷却至室温后测定OD₅₄₀值。结果(图2)表明，重组酶在以1％榉木木聚糖为底物时的最适PH为7.0，在pH4.0-8.0之间有30％以上的相对酶活性。在重组酶于各种不同PH值的缓冲液中35℃，处理1h，再于pH 7.0的缓冲液，35℃的条件下测定相对剩余酶活，以研究酶的PH稳定性。结果(图3)表明，测得其木聚糖酶活性在pH3.0-9.0之间都很稳定，相对剩余酶活均在30％以上。

2、木聚糖酶的最适温度及热稳定性测定方法如下：

木聚糖酶的最适温度的测定为在柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH7.0)缓冲液体系及不同温度下进行酶促反应。热稳定性测定为木聚糖酶在不同温度下处理不同时间，再在35℃下进行酶活性测定。酶反应最适温度测定结果(图4)表明酶活性最适温度为35℃。酶的热稳定性性试验表明(图5)，Xyn27有良好的热稳定性，在35℃下温育60min，能保持70％以上的酶活

3、不同金属离子化学试剂对Xyn27酶活的影响测定如下：

在酶促反应体系中加入不同的金属离子及化学试剂(图6)，研究其对酶活性的影响，各种物质终浓度为5mmol/L。在35℃、pH7.0条件下测定酶活性。结果表明，以1％榉木木聚糖为底物，大多数离子在浓度为5mmol时，对其酶活力都有一定程度的抑制作用。其中Fe^{3 +}，Fe²⁺,Cu²⁺，K⁺能强烈抑制其活力，而Mn²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺明显增强酶活力。

结果表明，以1％榉木木聚糖为底物，在离子浓度为5mmol时，Mn²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺可以显著提高酶活力，分别提升至123.33％，129.13％和106.45％；Mg²⁺基本不影响酶活力；在Ni^{2 +},Fe²⁺,Cu²⁺,Fe³⁺存在的条件下，Xyn27仍可以保持94.28％，89.98％，85.50％和70.93％的相对活力；在EDTA和SDS中，Xyn27仍可以保持93.23％和83.07％的相对活性。与其他已经报道的低温木聚糖酶相比，Xyn27具有更强的离子耐受能力。

SEQUENCE LISTING

<110> 天津科技大学

<120> 一种低温木聚糖酶Xyn27及其基因和应用

<130> 2016-12-1

<160> 10

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 366

<212> PRT

<213> 低温木聚糖酶Xyn27氨基酸序列

<400> 1

Met Arg Ser His Leu Thr Thr Ala Leu Pro Leu Leu Ala Ala Thr Pro

1 5 10 15

Leu Ala Ser Ala Gln Ile Asn Lys Trp Ala Gln Ala Ala Gly Leu Met

20 25 30

Tyr Phe Gly Ser Ala Thr Asp Thr Pro Gly Gln Arg Glu Arg Ala Gly

35 40 45

Leu Glu Thr Thr Tyr Pro Gln Tyr Asp Ala Ile Leu Ala Asp Asn Asp

50 55 60

Met Phe Gly Ser Thr Thr Pro Thr Asn Gly Gln Lys Trp Leu Phe Thr

65 70 75 80

Glu Pro Glu Gln Gly Val Phe Asn Phe Thr Glu Gly Asp Ile Thr Ala

85 90 95

Asp Leu Ala Ala Glu Gln Gly Lys Ser Leu Arg Cys His Ala Leu Val

100 105 110

Trp His Ser Gln Leu Ala Pro Trp Val Glu Thr Thr Glu Trp Thr Pro

115 120 125

Glu Thr Leu Thr Glu Ala Ile Thr Leu His Val Asn Thr Ile Ala Glu

130 135 140

His Tyr Lys Gly Arg Cys Tyr Ala Trp Asp Val Val Asn Glu Ala Leu

145 150 155 160

Asn Glu Asp Gly Thr Trp Arg Glu Ser Val Phe Tyr Glu Val Leu Gly

165 170 175

Glu Asp Tyr Ile Lys Leu Ala Phe Arg Leu Ala Ala Glu Ala Asp Pro

180 185 190

Glu Ala Lys Leu Tyr Tyr Asn Asp Tyr Asn Ile Glu Arg Pro Gly Gly

195 200 205

Lys Val Asn Gly Thr Leu Arg Ile Val Glu Met Leu Gln Ala Asp Gly

210 215 220

Ile Arg Ile Asp Gly Val Gly Met Gln Ala His Phe Val Ala Gly Asp

225 230 235 240

Ser Pro Thr Leu Asp Glu Gln Ile Glu Val Ile Glu Ser Tyr Ala Ala

245 250 255

Leu Gly Val Glu Val Ala Leu Thr Glu Leu Asp Val Arg Leu Ser Thr

260 265 270

Leu Pro Pro Thr Glu Glu Thr Leu Ala Leu Gln Lys Glu Asp Tyr Lys

275 280 285

Asn Ala Val Gly Ala Cys Thr Gln Val Asp Ala Cys Ile Gly Ile Thr

290 295 300

Met Trp Asp Phe Tyr Asp Pro Phe Ser Trp Val Pro Tyr Thr Phe Glu

305 310 315 320

Gly Glu Gly Ala Ala Leu Leu Trp Phe Glu Asp Phe Thr Val His Pro

325 330 335

Ala Tyr Tyr Gly Val Leu Ala Ala Leu Lys Asn Ala Thr Gly Leu Cys

340 345 350

Ala Ser Lys Ala Lys Arg Gly Thr Ala Gln Leu Phe Asn Ala

355 360 365

<210> 2

<211> 1101

<212> DNA

<213> 木聚糖酶Xyn27全长基因

<400> 2

atgcgaagcc atctcaccac cgccctgccc ctgctggccg ccacgccgct ggcctcggcc 60

cagatcaaca agtgggccca ggctgctggc ctcatgtact ttggctcggc cacggacaca 120

cccggccagc gtgagcgcgc cggtctggag acgacctacc cccagtacga cgccatcctc 180

gccgacaatg acatgttcgg ctccacgacg cccaccaacg ggcaaaagtg gctctttacc 240

gagccggagc agggcgtctt caacttcacc gagggcgaca tcaccgccga cctcgccgcc 300

gagcagggca agagcctccg ctgccacgcc ctcgtctggc actcgcagct cgccccctgg 360

gtcgagacca ccgagtggac gcctgagacg ctcaccgagg ccatcacgct gcacgtcaac 420

accattgccg agcactacaa gggccggtgc tacgcctggg acgtggtcaa cgaggcgctc 480

aacgaggacg gcacctggcg cgagagcgtc ttctacgagg ttctcggcga ggactacatc 540

aagctcgcct tccgcctcgc cgccgaggcg gatcccgagg ccaagctgta ctacaacgac 600

tacaacatcg agcgccccgg tggcaaggtc aacggcacgc tgcgtattgt ggagatgctc 660

caggcggacg gcatccgcat cgacggtgtc ggtatgcagg cacactttgt cgccggcgac 720

tcccctaccc tcgacgagca gattgaggtc attgaatcgt acgccgcgct cggcgtcgag 780

gtcgccctca cggagctgga cgtgagactg tccaccctcc cccccaccga ggagaccctc 840

gcactccaga aggaggacta taagaacgcc gtcggcgcct gtacccaggt cgatgcctgc 900

atcggcatca ccatgtggga cttttacgac cccttcagct gggttcccta cacctttgag 960

ggtgagggcg ccgcgctgct ttggttcgag gactttaccg tgcacccggc gtactatggt 1020

gtccttgccg cgctcaagaa cgccacgggc ctgtgcgcga gcaaggccaa gcgcggcacg 1080

gcgcagctgt tcaacgcata g 1101

<210> 3

<211> 24

<212> DNA

<213> 引物XynF

<400> 3

ctacgactgg gaggtagaga agga 24

<210> 4

<211> 23

<212> DNA

<213> 引物XynR

<400> 4

gtgactctgg agacctagtc cat 23

<210> 5

<211> 27

<212> DNA

<213> usp1

<400> 5

acaatacgca gcgtgccgtt gaccttg 27

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> usp2

<400> 6

gttgaccttg ccaccggggc g 21

<210> 7

<211> 23

<212> DNA

<213> usp3

<400> 7

gcgcctcatt cccaacgtcc cag 23

<210> 8

<211> 24

<212> DNA

<213> dsp1

<400> 8

gactgggacg ttgggaatga ggcg 24

<210> 9

<211> 26

<212> DNA

<213> dsp2

<400> 9

gcgaggacta catcaagctc gccttc 26

<210> 10

<211> 22

<212> DNA

<213> dsp3

<400> 10

gacggcatcc gcatcgacgg ac 22

Claims (7)

1.一种低温木聚糖酶Xyn27，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种低温木聚糖酶Xyn27编码基因，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.包含权利要求2所述低温木聚糖酶Xyn27编码基因的重组载体。

4.根据权利要求3所述的包含低温木聚糖酶Xyn27编码基因的重组载体，其特征在于：所述载体为pPIC9-Xyn27。

5.包含权利要求2所述低温木聚糖酶Xyn27编码基因的重组菌株。

6.一种制备权利要求1所述低温木聚糖酶Xyn27的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

⑴用权利要求4所述重组载体转化宿主细胞，得重组菌株；

⑵培养重组菌株，诱导重组低温木聚糖酶Xyn27编码基因表达；

⑶回收并纯化所表达的低温木聚糖酶Xyn27。

7.权利要求1所述低温木聚糖酶Xyn27在食品发酵中的应用。

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