CN106994136A - 肠内细菌数量抑制剂、食品、及药品 - Google Patents
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Abstract
本发明提供可以抑制与疾病相关的特定的肠内细菌的数量的肠内细菌数量抑制剂、以及含有上述肠内细菌数量抑制剂的食品及药品。一种肠内细菌数量抑制剂,其含有五层龙属植物的提取物和/或粉碎物,上述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上。
Description
技术领域
本发明涉及一种肠内细菌数量抑制剂,其可以抑制与疾病相关的特定的肠内细菌的数量。本发明进一步涉及含有上述肠内细菌数量抑制剂的食品及药品。
背景技术
五层龙属植物的根及树干在印度及斯里兰卡的传统医学阿育吠陀(ayurveda)中一直被作为天然药物使用。在斯里兰卡流传着网状五层龙(Salacia reticulata)的根皮对风湿病、淋病及皮肤病的治疗有效、以及在初期糖尿病的治疗中使用上述根皮的说法。
关于五层龙属植物的提取物或粉碎物对肠道的效果,已知的是可改变肠内菌群。例如,专利文献1中记载了一种体重增加抑制剂,其特征在于,含有五层龙属植物的提取物,通过五层龙属植物的提取物使肠内菌群中的拟杆菌门的比率增加、使硬壁菌门的比率降低,调整肠内菌群构成比率。专利文献2中记载了一种减少肠杆菌属菌或梭状芽胞杆菌属菌的方法,其使用五层龙属植物的粉碎物或提取物、及类黄酮。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开2015-127340号公报
专利文献2:日本特开2014-240431号公报
发明内容
发明要解决的问题
专利文献1及2中,没有记载对与特定的疾病相关的菌(毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌)的作用。已知的是,特定的肠内细菌与疾病有关,但尚未建立通过控制特定的肠内细菌来治疗疾病的方法。本发明要解决的问题是,提供一种可以控制与疾病相关的特定的肠内细菌的数量的肠内细菌数量抑制剂。本发明要解决的另一问题是,提供一种含有上述肠内细菌数量抑制剂的食品及药品。
用于解决问题的方案
本发明人们为了解决上述问题进行了深入研究,结果确认:五层龙属植物的提取物可以抑制与炎症性肠疾病等疾病相关的特定的肠内细菌的数量、及五层龙属植物的提取物可以减轻疾病模型动物的症状,直至完成了本发明。
根据本发明,可提供以下的发明。
[1]一种肠内细菌数量抑制剂,其含有五层龙属植物的提取物和/或粉碎物,上述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上。
[2]根据[1]所述的肠内细菌数量抑制剂,其中,上述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科梭杆菌(Fusobacterium)属、及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科脱硫弧菌(Desulfovibrio)属的菌中的1种以上。
[3]根据[1]或[2]所述的肠内细菌数量抑制剂,其中,五层龙属植物的提取物和/或粉碎物的摄取量或施予量为0.5mg/kg/天以上。
[4]根据[1]~[3]中任一项所述的肠内细菌数量抑制剂,其用于预防或治疗消化道症状。
[5]根据[4]所述的肠内细菌数量抑制剂,其中,上述消化道症状为选自功能性消化不良、过敏性肠综合症、炎症性肠疾病、克罗恩病(Crohn's disease)、及溃疡性大肠炎中的一种以上疾病的症状。
[6]一种食品,其含有[1]~[5]中任一项所述的肠内细菌数量抑制剂,用于抑制选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的肠内细菌的数量。
[7]一种药品,其含有[1]~[5]中任一项所述的肠内细菌数量抑制剂,用于抑制选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的肠内细菌的数量。
进一步,根据本发明,提供一种肠内细菌数量的抑制方法,含有将五层龙属植物的提取物和/或粉碎物施予需要抑制肠内细菌数量的对象的步骤,上述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上。
进一步,根据本发明,提供一种在抑制肠内细菌数量的处置中使用的五层龙属植物的提取物和/或粉碎物,上述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上。
进一步,根据本发明,提供一种五层龙属植物的提取物和/或粉碎物在制造肠内细菌数量抑制剂中的用途,上述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上。
进一步,根据本发明,提供一种五层龙属植物的提取物和/或粉碎物在制造用于抑制肠内细菌的数量的食品中的用途,所述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌。
进一步,根据本发明,提供一种五层龙属植物的提取物和/或粉碎物在制造用于抑制肠内细菌的数量的药品中的用途,所述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌。
发明效果
根据本发明,通过服用本发明的肠内细菌数量抑制剂、食品或药品,可以抑制选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上的肠内细菌的数量。
此外,根据本发明,可以抑制上述特定的肠内细菌的数量,优选可以减少上述特定的肠内细菌的数量。
进一步,根据本发明,含有五层龙属植物的提取物和/或粉碎物的肠内细菌数量抑制剂可以在(例如包括人在内的哺乳动物、模型动物等)中减轻肠疾病和/或其症状。
具体实施方式
以下,对本发明的实施方式进行说明。
[肠内细菌数量抑制剂]
本发明的肠内细菌数量抑制剂含有五层龙属植物的提取物和/或粉碎物,肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上。
毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌分别为与特定的疾病相关的菌,迄今为止,关于五层龙属植物的提取物和/或粉碎物可以抑制上述肠内细菌的数量尚无报道,这是本发明人此次首次发现的认知。本发明中,基于上述认知而公开了五层龙属植物的提取物和/或粉碎物对与上述细菌相关的疾病的预防或治疗有效。本发明提供五层龙属植物的提取物和/或粉碎物的新用途。
<五层龙属植物的提取物和/或粉碎物>
五层龙属植物是主要生长在斯里兰卡、印度及东南亚地区的翅子藤科的植物,更具体而言,可以列举选自网状五层龙(Salacia reticulata)、长圆果五层龙(Salaciaoblonga)、五层龙(Salacia prinoides)、中国五层龙(Salacia chinensis)、阔叶五层龙(Salacia latifolia)、河口五层龙(Salacia burunoniana)、粉叶五层龙(Salaciagrandiflora)、及多籽五层龙(Salacia macrosperma)中的1种以上植物。作为五层龙属植物,优选网状五层龙(Salacia reticulata)、长圆果五层龙(Salacia oblonga)、及中国五层龙(Salacia chinensis)中的至少1种植物。
本说明书中,五层龙属植物的提取物和/或粉碎物以包含五层龙属植物的根、树干、叶、花、果实等可食用部分的粉碎物和/或提取物、上述粉碎物和/或提取物的干燥物的意思来使用。本说明书中,干燥物可以是干燥粉末(提取物粉末)。在制备上述将五层龙属植物的提取物和/或粉碎物时,可以将五层龙属植物的1种以上的部位混合使用。作为五层龙属植物的提取物,更优选使用将从选自根及树干的部位提取的提取物干燥而得的提取物粉末。
关于干燥粉末(提取物粉末),优选用溶剂对五层龙属植物的可食用部分等进行提取、使通过上述而得的提取物干燥而得到。
作为提取中使用的溶剂,可以列举水、醇、或酮等,可以使用将这些中的2种以上混合而得的混合溶剂。
作为醇,可以列举甲醇、或乙醇等,优选乙醇。
作为酮,优选丙酮、甲乙酮、或环己烷等。
上述中,优选水、醇、水与醇的混合溶剂、或水与酮的混合溶剂等,更优选水、醇、或水与醇的混合溶剂,进一步优选50℃~98℃的热水、乙醇、或水与乙醇的混合溶剂。
水与醇的混合溶剂中的醇含量优选为30质量%~90质量%,更优选40质量%~70质量%。
对将提取物干燥而得到干燥粉末(提取物粉末)时的干燥方法没有特别限制,可以列举公知的干燥方法,例如,喷雾干燥、冷冻干燥等方法。此外,还可以使用公知的赋形剂、例如糊精等糖类来制作干燥粉末。从得到活性更高的干燥粉末的观点出发,优选将提取物直接进行喷雾法干燥(スプレードライ)等喷雾干燥(噴霧乾燥)来制备。
<肠内细菌>
本发明的肠内细菌数量抑制剂中的肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上。
本说明书中,肠内是指常驻有毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌的进行消化·吸收的动物(优选包括人在内的哺乳动物)的消化器官内,优选列举人小肠及人大肠等。但是,此时的肠内并非限定于人的肠内,也可以是人以外的动物(狗、马、牛、猪、小鼠、大鼠、猴等)的肠内。
作为毛螺菌(Lachnospiraceae)科的菌,可以列举布劳特氏菌(Blautia)属、Anaerostipes属、粪球菌(Coprococcus)属、Dorea属、罗斯氏(Roseburia)属、毛螺菌(Lachnospira)属等的菌。
作为瘤胃菌(Ruminococcaceae)科的菌,可以列举瘤胃菌(Ruminococcus)属、栖粪杆菌(Faecalibacterium)属、颤螺菌(Oscillospira)属、Anaerotruncus属等的菌。
作为梭杆菌(Fusobacteriaceae)科的菌,可以列举梭杆菌(Fusobacterium)属等的菌。
作为脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌,可以列举脱硫弧菌(Desulfovibrio)属、嗜胆菌(Bilophila)属等的菌。
例如,可以通过以下的方法,来确认本发明的肠内细菌数量抑制剂是否能够抑制选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上的菌的数量。
使受试者在一定期间内摄取规定量的本发明的肠内细菌数量抑制剂,回收摄取期间前后的粪便。从所回收的便中提取DNA,用所得到的DNA制备测序文库。通过新一代测序仪(MiSeq;Illumina,Inc.)进行测序,将类似性高的数据分组(OTU;Operation TaxonomicUnit;操作的分类单位),对系统分类进行推定。对属于各分类组的序列数据数进行统计,并进行前后的数据比较,由于各种菌的存在比率差异较大,将初始值设为100,实施摄取前后的菌数的比较,可以通过摄取后变为小于100来确认是否能够抑制上述规定的菌的数量。
<α-糖苷酶抑制活性>
本发明的肠内细菌数量抑制剂含有五层龙属植物的提取物和/或粉碎物,可以具有α-糖苷酶抑制活性也可以不具有α-糖苷酶抑制活性。
可以用以下方法来测定作为α-糖苷酶抑制活性的指标的蔗糖酶50%抑制浓度(IC50值)。
[实验法1]蔗糖酶IC50值的测定
样品溶液的准备:量取2mg的样品至管中,加入水2mL充分悬浮,制作1mg/mL浓度的样品溶液。将其用水分别稀释为0、50、100、250、500μg/mL。
底物液的准备:在0.2mol/L马来酸缓冲液(pH6.0)中溶解蔗糖并使蔗糖浓度达到100mmol/L,将其作为底物液。
粗酶液的准备:将1g的intestinal acetone powder rat(SIGMA公司制)悬浮在10mL的生理盐水中后,离心分离(3000rpm,4℃,5分钟)。将所得到的上清分离,作为粗酶液。
对上述各浓度的样品溶液500μL,添加底物液400μL,在水浴中在37℃下预加热5分钟。分别在其中添加粗酶液100μL,在37℃反应60分钟。反应结束后,在95℃加热2分钟而使酶失活,使反应停止。使用市售的试剂盒-变旋酶-葡糖氧化酶法(Glucose CII-test Wako、和光纯药工业(株))对生成的葡萄糖浓度进行定量。
空白的准备:对上述各浓度的样品溶液250μL添加底物液200μL、粗酶液50μL,立即以95℃加热2分钟,从而使酶热失活,将其作为空白数据。
由所得到的值制作标准曲线,求出抑制50%酶活性的浓度(IC50值)。
<其他成分>
本发明的肠内细菌数量抑制剂除了五层龙属植物的提取物和/或粉碎物以外还可以含有其它成分。作为其它成分,可以列举例如:乳酸菌、无芽孢酵母、类黄酮、多酚、及具有免疫活性作用的口服物质等,没有特别限定。作为上述其它成分,具体可以列举日本特开2015-127340号公报的段落号0023~0038中记载的成分。
本发明的肠内细菌数量抑制剂可以进一步适量含有选自维生素、维生素样物质、蛋白质、氨基酸、油脂、有机酸、碳水化合物、植物源原料、动物源原料、微生物、食品用添加剂、及药品用添加剂中的1种以上等可经口摄取的成分。
<制剂>
本发明的肠内细菌数量抑制剂可以使用选自药学上或食品卫生上可接受的各种载体,例如赋形剂、润滑剂、稳定剂、分散剂、结合剂、稀释剂、香味料、甜味料、风味剂、及着色剂中的1种以上添加剂而制备,优选以经口施予剂形式来制备。
本发明的肠内细菌数量抑制剂的形态只要发挥本发明的效果则没有特别限制,可以是例如片剂、丸剂、颗粒剂、细粒剂、咀嚼剂、胶囊剂(填充于硬胶囊、软胶囊中的剂型)、液剂、可咀嚼剂或后述的食品(包括饮料)的形态。
上述施予形态可以使用本领域技术人员知晓的惯用方法来制备。
在为片剂、丸剂及颗粒剂时,可以根据需要制成惯用的实施包衣的剂形,例如糖衣片,明胶包覆剂、肠溶包覆剂、薄膜包衣剂等,此外片剂还可以是双层片剂等多层片剂。
本发明中,为了改善五层龙属植物的提取物和/或粉碎物的经时变色,优选配合作为干燥剂的碳酸钙和/或二氧化硅(优选微粒二氧化硅))。本发明的肠内细菌数量抑制剂为片剂或胶囊剂时,本发明的肠内细菌数量抑制剂优选含有片剂或胶囊剂的质量的1%以上的量的碳酸钙和/或二氧化硅。关于碳酸钙或二氧化硅的添加,可以分别单独含有1质量%以上,也可以含有合计1质量%以上的碳酸钙和二氧化硅。需要说明的是,在食品用途的情况下,由于食品卫生法规定碳酸钙的添加量的上限为2.5质量%,二氧化硅的添加量的上限为2.0质量%,因此在以食品形式提供本发明的肠内细菌数量抑制剂时,优选碳酸钙的添加量为2.5质量%以下,二氧化硅的添加量为2.0质量%以下。
本发明的肠内细菌数量抑制剂可以配合可作为食品或食品添加剂使用的低吸湿原料、吸湿剂、抗氧化剂等。作为优选的低吸湿性原料,可以使用纤维素、结晶纤维素、粉末纤维素、微晶纤维素、乳糖、寡糖、糖醇、海藻糖、硬脂酸镁、硬脂酸钙、蔗糖脂肪酸酯等。作为吸湿剂,可使用硅酸盐类、碳酸镁、亚铁氰化物、多糖类等。作为更优选的低吸湿性原料,可使用结晶纤维素、微结纤维素、乳糖、蔗糖脂肪酸酯。作为抗氧化剂,可以列举抗坏血酸或抗坏血酸钠等。
本发明的肠内细菌数量抑制剂进一步还可以适量含有成型为粉末、固形剂或液剂所需要的化合物。作为上述化合物的例子,可以列举赤藓醇、麦芽糖醇、羟丙基纤维素、高岭土、滑石等。
<使用方法>
本发明的肠内细菌数量抑制剂以包括人在内的哺乳动物为施予对象,可以经口施予至哺乳动物。
根据本发明的另一观点,提供一种肠内细菌数量的抑制方法,含有将五层龙属植物的提取物和/或粉碎物施予需要抑制肠内细菌数量的对象的步骤,上述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上。
在将本发明的肠内细菌数量抑制剂施与例如人时,五层龙属植物的提取物和/或粉碎物的一天摄取量或施予量优选为0.1mg/kg/天以上,更优选为0.5mg/kg/天以上,进一步优选为1.0mg/kg/天以上,进一步优选为2.0mg/kg/天以上,进一步优选为4.0mg/kg/天以上。对五层龙属植物的提取物和/或粉碎物的一天摄取量或施予量的上限没有特别限定,通常为100mg/kg/天以下,优选为50mg/kg/天以下。
本发明的肠内细菌数量抑制剂中所含的五层龙属植物的提取物和/或粉碎物的量可以适当进行设定。例如,在制作1天摄取量为3片的片剂时,优选每1片中含有1天摄取量的1/3。
本发明的肠内细菌数量抑制剂可以用于预防或治疗消化道症状。
已知毛螺菌(Lachnospiraceae)科的菌与糖尿病相关(例如,国际公开WO2013/146319号公报)。已知瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌与消化道疾病及癌症(大肠癌等)有关(例如,OhkusaT.Fusobacterium,Ulcerative Colitis and Colorectal Cancer.肠内细菌学杂志.2013;27:169-79.、Fox J,Dewhirst F,Fraser G,Paster B,Shames B,Murphy J.IntracellularCampylobacter-like organism from ferrets and hamsters with proliferativebowel disease is a Desulfovibrio sp.Journal of clinical microbiology.1994;32(5):1229-37.)。
通过摄取本发明的肠内细菌数量抑制剂,可以抑制作为伴随有消化道症状的疾病的原因菌的毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌的数量。因而,可以预防或治疗消化道症状。
作为伴随有消化道症状的疾病,可以列举:糖尿病、消化道疾病、癌症(大肠癌等)等。作为消化道症状,可以列举选自功能性消化不良(FD)、过敏性肠综合症(IBS)、炎症性肠疾病(IBD)、克罗恩病(CD)、及溃疡性大肠炎(UC)中的一种以上疾病的症状,但并不受这些的特别限定。
本发明的肠内细菌数量抑制剂可以期待预防或治疗上述疾病的效果。消化道为排出异物的部位,因此,肠内菌群恶化所引起的消化道功能低下会引起腐败产物等对身体带来有害影响的物质的滞留,可能诱发腹部胀满感、腹部不舒服感、腹部倦怠感等。此外,滞留的对身体带来有害影响的物质通过被再吸收到体内而对肝脏、肾脏、胰脏等各种脏器产生影响,有引起肝脏损害和癌变、引发动脉硬化等疾病等之虞。进而,日常生活中引起肌肉状态恶化、疲劳感累积、身体状态不良、睡眠状态恶化等。通过摄取本发明的肠内细菌数量抑制剂,可以期待体重减轻、体脂肪减少、便秘及腹泻等腹部症状的改善等。进而,出乎意料的是,通过摄取本发明的肠内细菌数量抑制剂可以期待日常生活中情绪的改善(気分の向上)(生活质量(QOL)的改善)。本发明的肠内细菌数量抑制剂即使长期服用也是安全的,副作用少。
<食品及药品>
对本发明的肠内细菌数量抑制剂的形态没有特别限定,可以是例如食品(包括饮料及补充剂)、食品材料、医药外用品、药品、药品材料、及医药外用品材料中的任意种。
根据本发明,可提供含有本发明的肠内细菌数量抑制剂的、用于抑制选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的肠内细菌的数量的食品;以及含有本发明的肠内细菌数量抑制剂的、用于抑制选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的肠内细菌的数量的药品。
作为本发明的药品,将上述各种形态的本发明的肠内细菌数量抑制剂以药品形式来提供即可。
作为本发明的药品的另一方式,优选为还含有以下所示的结构式1的化合物(以下称为结构式1的化合物)的药品。
〔结构式1〕
结构式1中,n为0~4的整数,
R1为氢原子、-OH、-(CH(OH))m-CH2OH(m为0~2的整数)、C1~C16烷基、或C3-C6环烷基。
R2为氢原子、-SO3 -、C1~C16烷基、或C3-C6环烷基。
此外,上述C1~C16烷基、或C3-C6环烷基还包括被卤素原子(氟原子、氯原子等)、羟基、氨基、或硝基等取代基取代后的化合物。
结构式1中,作为锍离子的抗衡离子的阴离子是布朗斯台德酸的共轭碱离子。
作为布朗斯台德酸的共轭碱离子的具体例子,可以列举:卤素离子(例如,F-、Cl-、Br-等);磺酸离子(例如,CH3SO3 -、C2H5SO3 -、CF3SO3 -、p-CH3C6H4SO3 -等);烷基硫酸离子(例如,CH3OSO3 -、C2H5OSO3 -、CF3OSO3 -、p-CH3C6H5OSO3 -等);羧酸离子(例如,HCOO-、CH3COO-、CF3COO-、C6H5COO-等);磷酸离子、磷酸一氢根离子、磷酸二氢根离子;ClO4 -离子;由路易斯酸和卤化氢形成的化合物的共轭碱(例如,BF4 -、PF6 -等)等。但不限于这些具体例子。布朗斯台德酸的共轭碱离子优选Cl-或BF4 -。
结构式1的化合物的摄取量或施予量根据施予对象、疾病、症状、剂形、施予途径等而不同,例如,经口施予人(体重:约60kg)时,结构式1的化合物的摄取量或施予量在每天1mg以上、1g以下的范围。此外,可以将该摄取量或施予量分成1次或数次摄取或施予。
作为本发明的食品,可以列举健康食品(片剂、颗粒、胶囊、粉体等)、饮用剂、饮料等。
对本发明的食品的形态没有特别限定,可以制成能够主要通过经口途径向体内供给的各种形态。本发明的食品可以以例如粉末食品、颗粒状食品、片状食品、瓶装食品、罐装食品、蒸煮灭菌食品、胶囊食品、块状食品、流动食品、或饮用剂等形态来提供。本发明的食品可以作为健康食品、功能性食品、营养辅助食品、特定保健用食品等食品来使用。
本发明的食品为功能性食品的形态时,优选不仅以营养饮用品、滋养强壮剂、嗜好性饮料、冷饮等一般食品类形式提供,还以片剂状、颗粒状、胶囊状的营养辅助食品形式提供。
本发明的食品除了本发明的肠内细菌数量抑制剂以外,还可以根据期望含有通常用于食品的成分。
作为本发明的食品中可以使用的成分,可以列举例如:着色料、保存料、增稠稳定剂、抗氧化剂、显色剂、漂白剂、防霉剂、胶基、苦味料、酶、光泽剂、酸味料、调味料、乳化剂、强化剂、制造用剂(赋形剂)、香料、香辛料提取物、pH调节剂等。
从提高五层龙醇(salacinol)的稳定性的观点出发,所发明的食品的pH与前述的组合物同样地优选为8.0以下,更优选为7.0以下,进一步优选为3.0~6.0。
就食品的pH的调节中可以使用的pH调节剂,只要是食品领域中通常使用的pH调节剂则均可使用。
作为食品中可以使用的pH调节剂,可以列举例如:选自葡糖酸、L-酒石酸、苹果酸、乳酸、己二酸、琥珀酸、乙酸、富马酸、植酸及这些的衍生物中的有机酸,小苏打(碳酸氢钠)、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、碳酸钾等无机酸。
有机酸可以是形成钠盐、钾盐、镁盐等盐形态的有机酸。
pH调节剂可以单独使用或将2种以上组合使用。
作为食品用途中可以使用的其它成分,可以列举:乳蛋白、大豆蛋白、鸡蛋清蛋白等或作为这些的分解物的蛋清多肽、大豆水解物、氨基酸单质的混合物等。
此外,本发明的食品可以为配合有糖类、脂肪、微量元素、维生素、乳化剂、香料等的自然流动食品、半消化态营养食品及营养食品、饮用剂、胶囊剂、经肠营养剂等加工物形态。
在将本发明的食品制成饮用剂的形态时,为了改善营养平衡、及摄取时的风味,还可以配合氨基酸、维生素、矿物质等营养添加剂,甜味料,香辛料,香料及色素等。
本发明的肠内细菌数量抑制剂在作为食品使用时,其含量可以根据目的适当选择。从充分表现五层龙属植物的提取物和/或粉碎物的有效性的观点出发,本发明的食品中的五层龙属植物的提取物和/或粉碎物的含量相对于食品的总量优选在1质量%~60质量%的范围,更优选在1质量%~40质量%的范围。
<五层龙属植物的提取物和/或粉碎物的用途>
根据本发明的另一观点,提供一种在肠内细菌数量的抑制处置中使用的五层龙属植物的提取物和/或粉碎物,上述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上。根据本发明的又一观点,提供五层龙属植物的提取物和/或粉碎物在制造肠内细菌数量抑制剂中的用途,上述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上。根据本发明的又一观点,提供一种五层龙属植物的提取物和/或粉碎物在制造用于抑制肠内细菌的数量的食品或药品中的用途,所述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌。
上述发明的优选方式如本说明书中此前所述。
<试剂盒>
本发明的肠内细菌数量抑制剂进而还可以以与用于检查肠内细菌的组件和/或试剂一起组合而成的试剂盒形态来提供。
作为用于检查肠内细菌的组件,可以列举:用于采集粪便的容器(容器中可以含有用于肠内细菌检查的样品保存液)、片、采集器具等。
作为用于肠内细菌检查的试剂,可以列举:含有各细菌的特异序列的合成DNA片段或引物的试样、用于通过PCR(聚合酶链反应)进行DNA扩增反应的试剂等。
可以使使用上述组件和/或试剂进行肠内细菌的检查并判断为需要抑制选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的肠内细菌的数量的对象者摄取本发明的肠内细菌数量抑制剂。
实施例
通过以下实施例对本发明进行进一步说明,但本发明不受以下实施例限定。本说明书中,Tris为三羟甲基氨基甲烷的简称,EDTA为乙二胺四乙酸的简称。
实施例1:
将网状五层龙(Salacia reticulata)和长圆果五层龙(Salacia oblonga)的根及树干部分粉碎后,按照相等重量进行混合,将经过98℃热水提取工序而得的液体喷雾干燥,得到五层龙属植物提取物粉末。使用所得到的提取物粉末按照表1记载的配方制作片剂(250mg/片)。
【表1】
原材料名 | 配合量(质量%) |
五层龙属植物提取物粉末 | 24.0 |
结晶纤维素 | 69.1 |
蔗糖脂肪酸酯 | 3.0 |
碳酸钙 | 2.4 |
微粒二氧化硅 | 1.5 |
实施例2(人肠内细菌)
以成年男性25名为对象,使其每天摄取1g作为试验食品的实施例1中记载的含有五层龙属植物提取物粉末的片剂,摄取4周,用粪便采集试剂盒(TechnoSuruga LaboratoryCo.,Ltd.,Shizuoka,Japan)回收摄取期间前后的粪便。将回收的粪便悬浮于GTC(硫氰酸胍)缓冲液(100mM Tris-HCl[pH 9.0],40mM Tris-EDTA[pH8.0],4M硫氰酸胍)。通过氧化锆珠将添加于液体中的粪便破碎,使用自动核酸提取装置(Precision System Science,Chiba,Japan)从100μl的悬浊液中提取DNA。使用所得到的DNA,通过NexteraTM DNA样品制备试剂盒(Illumina,Inc.)制备测序用文库的样品。此外,通过在各样品中添加索引序列(按照试剂盒的说明书),从而能够进行样品的判别。使用所制备的测序文库,通过新一代测序仪(MiSeq;Illumina,Inc.)进行测序。对于所得的数据,进行碱基序列的质量确认,并实施低质量数据的过滤。对于通过了质量确认的数据,将类似性高的数据分组(OTU;OperationTaxonomic Unit;操作的分类单位)。对于各OUT,进行相对于16S rRNA基因数据库的同源性检索,对系统分类进行推定。对属于各分类组的序列数据数进行统计,并进行前后的数据比较,由于各菌的存在比率差异较大,因此将初始值设为100,实施摄取前后的菌数的比较,通过摄取后变为小于100来确认是否能够抑制上述规定的菌的数量。将测定结果示于表2。
【表2】
如表2所示,可观察到:通过摄取五层龙属植物提取物粉末,上述菌的DNA量(菌数)减少。上述菌是显示与糖尿病、肠疾病的引发或加重相关的菌。通过减少这些菌,可以期待预防疾病的引发、可以减轻症状的效果。
实施例2中,作为毛螺菌(Lachnospiraceae)科的菌,含有布劳特氏菌(Blautia)属、Anaerostipes属、粪球菌(Coprococcus)属、Dorea属、罗斯氏(Roseburia)属、及毛螺菌(Lachnospira)属等。作为瘤胃菌(Ruminococcaceae)科的菌,含有瘤胃菌(Ruminococcus)属、栖粪杆菌(Faecalibacterium)属、及颤螺菌(Oscillospira)属等。
实施例3(溃疡性大肠炎模型)
使用8周龄的C57BL/6(C57black 6)小鼠(雌性),分成5组,每组5只。将各组的五层龙属植物提取物粉末的施予量设为(1)施予0.0mg/kg/天(day)、(2)施予0.5mg/kg/天、(3)施予5.0mg/kg/天、(4)施予50.0mg/kg/天、或(5)施予0.0mg/kg/天,将悬浮于生理盐水的五层龙属植物提取物粉末强制经口施予1周。1周后,使(1)~(4)组自由饮用3质量%葡聚糖硫酸钠(DSS)而诱发肠炎(溃疡性大肠炎模型)。此外,在DSS施予期间也继续施予五层龙属植物提取物粉末。在DSS施予开始后第6天,用疾病活动指数(DAI,disease activity index)评价炎症的程度。疾病活动指数(DAI,disease activity index)通过对体重减轻及腹泻进行评分来评价炎症的程度。
按照以下的基准进行评分(参考文献:Yoshihara K,Yajima T,Kubo C,YoshikaiY.Role of interleukin 15in colitis induced by dextran sulphate sodium inmice.Gut.2006;55(3):334-41)。
在无体重减少时:0;体重减少1~5%时:1;体重减少5~10%时:2;体重减少10~15%时:3;体重减少15%以上时:4
粪便性质正常时:0;粪便软时:1~3;腹泻时:4
我们认为,五层龙属植物提取物粉末通过减少血中的炎症性细胞因子量而抑制生物体的炎症,减轻这些症状。
【表3】
施予组 | DAI |
(1)0.0mg/kg | 7.5 |
(2)0.5mg/kg | 5.2 |
(3)5.0mg/kg | 4.0 |
(4)50.0mg/kg | 3.3 |
(5)对照 | 0.3 |
如表3所示,可确认:通过施予五层龙属植物提取物粉末,炎症减轻、得到抑制。
实施例4(人类中的问卷调查)
以成年男性10名为对象,使其每天摄取1g(4粒)作为试验食品的实施例1中记载的含有五层龙属植物提取物粉末的片剂,对于自觉症状实施问卷调查。关于各项目,将1设为“完全不符合”、将2设为“基本不符合”、将3设为“不怎么符合”、将4设为“稍微符合”、将5设为“很符合”、将6设为“非常符合”,要求选择最接近自身状态的编号。将摄取前设为100%,示出摄取后的变化率。数值越大表示症状越符合,若改善则越小。示出p<0.05的项目。p表示p值(probability)。
【表4】
表4:
检查项目 | 摄取前 | 摄取后 |
肉体疲劳 | 4.7±0.7 | 2.8±0.9 |
为失眠而烦恼 | 3.4±1.3 | 2.2±0.8 |
即使休息充分也无法解除疲劳 | 4.6±0.8 | 3.1±0.7 |
笑容逐渐减少 | 3.4±1.4 | 2.5±1.4 |
咽喉肿胀或咽喉经常感觉到不舒服 | 3.3±1.3 | 2.1±0.9 |
粉刺或疹子 | 3.7±0.9 | 2.7±1.5 |
便不出,腹部有残便感 | 2.9±1.4 | 1.9±1.0 |
腹部胀满 | 3.0±0.9 | 1.8±0.8 |
腹部沉重 | 2.8±1.1 | 1.8±0.8 |
如表4所示,可知:通过摄取五层龙属植物提取物粉末,出乎意料的是,情绪低落、腹部症状等得到改善。
Claims (14)
1.一种肠内细菌数量抑制剂,其含有五层龙属植物的提取物和/或粉碎物,所述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上。
2.根据权利要求1所述的肠内细菌数量抑制剂,其中,所述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科梭杆菌(Fusobacterium)属、及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科脱硫弧菌(Desulfovibrio)属的菌中的1种以上。
3.根据权利要求1或2所述的肠内细菌数量抑制剂,其中,五层龙属植物的提取物和/或粉碎物的摄取量或施予量为0.5mg/kg/天以上。
4.根据权利要求1或2所述的肠内细菌数量抑制剂,其用于预防或治疗消化道症状。
5.根据权利要求4所述的肠内细菌数量抑制剂,其中,所述消化道症状为选自功能性消化不良、过敏性肠综合症、炎症性肠疾病、克罗恩病、及溃疡性大肠炎中的一种以上疾病的症状。
6.一种食品,其含有权利要求1~5中任一项所述的肠内细菌数量抑制剂,用于抑制选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的肠内细菌的数量。
7.一种药品,其含有权利要求1~5中任一项所述的肠内细菌数量抑制剂,用于抑制选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的肠内细菌的数量。
8.一种五层龙属植物的提取物和/或粉碎物在制造肠内细菌数量抑制剂中的用途,所述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌中的1种以上。
9.根据权利要求8所述的用途,其中,所述肠内细菌为选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科梭杆菌(Fusobacterium)属、及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科脱硫弧菌(Desulfovibrio)属的菌中的1种以上。
10.根据权利要求8或9所述的用途,其中,五层龙属植物的提取物和/或粉碎物的摄取量或施予量为0.5mg/kg/天以上。
11.根据权利要求8或9所述的用途,其中,将肠内细菌数量抑制剂用于预防或治疗消化道症状。
12.根据权利要求11所述的用途,其中,所述消化道症状为选自功能性消化不良、过敏性肠综合症、炎症性肠疾病、克罗恩病、及溃疡性大肠炎中的一种以上疾病的症状。
13.一种五层龙属植物的提取物和/或粉碎物在制造用于抑制肠内细菌的数量的食品中的用途,所述肠内细菌选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌。
14.一种五层龙属植物的提取物和/或粉碎物在制造用于抑制肠内细菌的数量的药品中的用途,所述肠内细菌选自毛螺菌(Lachnospiraceae)科、瘤胃菌(Ruminococcaceae)科、梭杆菌(Fusobacteriaceae)科及脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的菌。
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