CN106978415B - 转运rna片段及其应用 - Google Patents

转运rna片段及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106978415B
CN106978415B CN201610031270.8A CN201610031270A CN106978415B CN 106978415 B CN106978415 B CN 106978415B CN 201610031270 A CN201610031270 A CN 201610031270A CN 106978415 B CN106978415 B CN 106978415B
Authority
CN
China
Prior art keywords
trna
seq
fragment
gly
rna
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610031270.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106978415A (zh
Inventor
邓志锋
李青
汪泱
胡斌
牛鑫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
East Hospital Of Shanghai Sixth Peoples Hospital
Original Assignee
East Hospital Of Shanghai Sixth Peoples Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by East Hospital Of Shanghai Sixth Peoples Hospital filed Critical East Hospital Of Shanghai Sixth Peoples Hospital
Priority to CN201610031270.8A priority Critical patent/CN106978415B/zh
Publication of CN106978415A publication Critical patent/CN106978415A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106978415B publication Critical patent/CN106978415B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明公开了多种转运RNA片段，它是来源于以下全长序列的包含20‑55核苷酸的片段：tRNA‑val、tRNA‑gly、tRNA‑glu或tRNA‑his；其中，tRNA‑val的全长序列如SEQ ID NO1所示；tRNA‑gly的全长序列如SEQ ID NO2所示；tRNA‑glu的全长序列如SEQ ID NO3所示；tRNA‑his的全长序列如SEQ ID NO4所示。本发明的转运RNA片段可用于治疗肿瘤，调控血管新生。

Description

转运RNA片段及其应用
技术领域
本发明涉及生物工程技术，特别涉及转运RNA片段及其应用。
背景技术
血管新生(angiogenesis)是指在原有血管的基础上内皮细胞增殖、迁移和重塑形成新血管的生物学过程，其在生物体发育、生长过程中十分普遍，并广泛参与创伤修复、各种缺血性疾病和肿瘤生长侵袭等病理生理过程。深入研究血管新生的调控机制对促进组织修复、抑制肿瘤生长和迁移都具有重要的指导意义。已有研究表明多种非编码RNA，包括miRNA、piRNA、lncRNA等都参与血管新生的调控。
转运RNA(tRNA)是一类长73-94核苷酸的小分子RNA，是细胞活动不可或缺的组成部分，他们主要负责将信使RNA(mRNA)序列翻译成氨基酸序列合成蛋白。除此之外，tRNA还参与细胞交流、反转录和蛋白降解等过程。随着测序技术的进步，在最近几年中，研究人员在多种细胞系及组织中发现了一批来源于tRNA序列的更短的片段，主要包括以下几类：剪切于成熟tRNA反义密码子前，产生5′tRNAhalves和3′tRNAhalves，每段有30-35个核苷酸的长度；剪切于D环或T环分别产生5’-tRFs和3’-tRFs，长约20个核苷酸。此外，tRNA前体剪切也可产生多种小片段RNA。研究表明，多种生理病理刺激包括缺氧、高渗、射线照射、病毒感染等均可导致tRNA剪切片段的产生，并且这些片段参与如翻译起始调控、细胞增殖、凋亡、迁移等多种生物学过程，说明tRNA片段并非随机剪切产生的垃圾RNA，而是经过精密调控剪切产生的具有特定生物活性的非编码小RNA。这类小RNA是否参与血管新生尚未见报道。我们的研究发现在缺氧条件下多种组织都会发生tRNA的剪切，产生tRNA片段(参见图1，图2)，在内皮细胞中过表达这些片段可通过抑制内皮细胞的增殖、迁移、成管等功能，从而抑制血管新生(参见图3)。在种植肿瘤细胞的老鼠中注射本发明的转运RNA片段，可抑制肿瘤的生长(参见图4)。
发明内容
本发明的目的，就是为了提供一种转运RNA片段及其应用。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：转运RNA片段，是来源于以下全长序列的包含20-55核苷酸的片段：tRNA-val、tRNA-gly、tRNA-glu或tRNA-his；其中，tRNA-val的全长序列如SEQ ID NO.1所示；tRNA-gly的全长序列如SEQ ID NO.2所示；tRNA-glu的全长序列如SEQ ID NO.3所示；tRNA-his的全长序列如SEQ ID NO.4所示。
来源于tRNA-val的转运RNA片段包括SEQ ID NO.5-SEQ ID NO.7所示的tRNA-val片段序列，以及SEQ ID NO.8-SEQ ID NO.10所示的tRNA-val片段反义序列。
来源于tRNA-gly的转运RNA片段包括SEQ ID NO.11-SEQ ID NO.13所示的tRNA-gly片段序列，以及SEQ ID NO.14-SEQ ID NO.16所示的tRNA-gly片段反义序列。
来源于tRNA-glu的转运RNA片段包括SEQ ID NO.17-SEQ ID NO.19所示的tRNA-glu片段序列，以及SEQ ID NO.20-SEQ ID NO.22所示的tRNA-glu片段反义序列。
来源于tRNA-His的转运RNA片段包括SEQ ID NO.23-SEQ ID NO.25所示的tRNA-His片段序列，以及SEQ ID NO.26-SEQ ID NO.28所示的tRNA-His片段反义序列。
上述转运RNA片段在治疗肿瘤中的应用；所述肿瘤包括肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、脑瘤、黑色素瘤或骨肉瘤。
上述转运RNA片段反义序列或其组合在治疗缺血性疾病中的应用；所述缺血性疾病包括脑缺血、心肌缺血、下肢缺血或肾缺血。
包含上述转运RNA片段的药物组合物，包括由所述转运RNA片段合成的核酸片段及碱基修饰，激活或抑制转运RNA片段表达的试剂，以及药学试剂能接受的载体。
可用于局部注射或静脉注射的权利要求1所述转运RNA片段的悬液。
包含上述转运RNA片段的复合物，通过将所述转运RNA片段锚定、注入载体表面或内部，形成形状固定、可供植入的复合物，该复合物植入后，所述转运RNA片段缓释或可控释放。
在内皮细胞中过表达本发明的转运RNA片段，可通过抑制内皮细胞的增殖、迁移、成管等功能，从而抑制血管新生。在肿瘤细胞中过表达本发明的转运RNA片段，可抑制肿瘤细胞的增殖迁移。
附图说明：
图1显示NO.rthern blot(A)和定量PCR(B)分析验证tRNAVal-和tRNAGly来源的小RNA在缺血脑组织中水平升高；
图2显示tRNA来源小片段在下肢缺血组织及缺氧内皮细胞中水平升高。其中：(A)定量PCR检测tRNAVal和tRNAGly来源的小RNA在下肢缺血组织中的水平。(B)NO.rthernblot验证tRNAVal和tRNAGly来源的小RNA在下肢缺血3天后的组织中水平升高。(C)定量PCR检测tRNAVal和tRNAGly来源的小RNA在缺氧内皮细胞中的水平。(D)NO.rthern blot验证内皮细胞缺氧48小时后小RNA水平升高。
图3显示tRNA来源的小RNA抑制血管新生。合成tRNAVal和tRNAGly来源的小RNA模拟序列，转染血管内皮细胞24小时后检测下列指标：(A)转染Oligo-Val和Oligo-Gly后抑制内皮细胞增殖；(B-C)tRNAVal和tRNAGly来源的小RNA抑制内皮细胞迁移；(D-H)tRNAVal和tRNAGly来源的小RNA抑制内皮细胞成管。
图4显示tRNA-Gly片段模拟物抑制胰腺癌生长。
图5、图6显示tRNA-Gly片段反义序列促进缺血下肢血管新生。
具体实施方式
实施例1
tRNA-Gly片段模拟物抑制胰腺癌生长
将胰腺癌细胞悬液经皮下注射入裸鼠腹股沟，随机分为2组，每组5只老鼠，同时经尾静脉注射tRNA-Gly片段模拟物序列，隔天注射至第30天，处死所有裸鼠，取出瘤体，检查并测量。结果显示注射tRNA-Gly片段类似物明显抑制胰腺癌瘤体大小，参见图4，图4中上部三个瘤体是对照注射组的情况，下部三个瘤体是tRNA-Gly片段模拟物注射组的情况。tRNA-Gly片段模拟物序列为GCATTGGTGGTTCAGTGGTAGAATTCTCGCCT(SEQ ID NO.12)。
实施例2
定点注射tRNA-Gly片段反义序列促进缺血下肢血管新生
构建10只小鼠下肢缺血模型，并随机分为A、B两组，A组注射对照无义序列RNA，B组注射tRNA-Gly片段反义序列，分别于第7天和第14天通过多普勒观察血流恢复情况。结果显示与对照组相比，注射tRNA-Gly片段反义序列组血供明显恢复，参见图5、图6，图5是对照注射组的情况，图6是tRNA-Gly片段反义序列注射组的情况。说明注射tRNA-Gly片段反义序列可促进缺血下肢血管新生。tRNA-Gly片段反义序列为AGGCGAGAATTCTACCACTGAACCACCAATGC(SEQ ID NO.15)。
Figure GDA0002229407230000051
Figure GDA0002229407230000061
Figure GDA0002229407230000071
Figure GDA0002229407230000081
Figure GDA0002229407230000091
Figure GDA0002229407230000101
Figure GDA0002229407230000111

Claims (2)

1.转运RNA片段在制备治疗肿瘤药物中的应用；所述肿瘤包括胰腺癌；转运RNA片段是来源于以下全长序列的包含20-55核苷酸的片段：tRNA-gly，tRNA-gly的全长序列如SEQ IDNO.2所示；来源于tRNA-gly的转运RNA片段包括SEQ ID NO.11-SEQ ID NO.13所示的tRNA-gly片段序列，以及SEQ ID NO.14-SEQ ID NO.16所示的tRNA-gly片段反义序列。
2.转运RNA片段反义序列或其组合在制备治疗缺血性疾病药物中的应用；所述缺血性疾病为下肢缺血，转运RNA片段反义序列如SEQ ID NO.14-SEQ ID NO.16所示。
CN201610031270.8A 2016-01-18 2016-01-18 转运rna片段及其应用 Active CN106978415B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610031270.8A CN106978415B (zh) 2016-01-18 2016-01-18 转运rna片段及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610031270.8A CN106978415B (zh) 2016-01-18 2016-01-18 转运rna片段及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106978415A CN106978415A (zh) 2017-07-25
CN106978415B true CN106978415B (zh) 2020-08-14

Family

ID=59340867

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610031270.8A Active CN106978415B (zh) 2016-01-18 2016-01-18 转运rna片段及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106978415B (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107459546B (zh) * 2017-08-11 2018-05-15 广西医科大学第一附属医院 一种tRF-Gly反义链抑制剂及其应用
CN108165634B (zh) * 2018-01-23 2020-06-26 宁波大学 一种胃癌新型分子标记物tRF-5026a的检测及应用
JPWO2022019326A1 (zh) * 2020-07-22 2022-01-27
CN112522262B (zh) * 2020-11-12 2023-06-20 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） 一种与胰腺癌相关的tRF及其应用
CN116515827A (zh) * 2023-03-20 2023-08-01 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 用于治疗年龄相关性黄斑变性的活性成分、药物组合物和应用
CN117771265B (zh) * 2024-02-23 2024-06-11 山东大学 一种用于延缓间充质干细胞衰老的小分子rna及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Endogenous tRNA-derived fragments suppress breast cancer progression via YBX1 displacement;Hani Goodarzi 等;《Cell》;20150507;第161卷(第4期);第790-802页 *
佚名.登录号：HG983811.1.《GenBank》.2015,参见序列部分. *
登录号：HG983811.1;佚名;《GenBank》;20150304;参见序列部分 *
血管生成素与 tRNA 片段化;付汉江 等;《中国生物化学与分子生物学报》;20151231;第31卷(第12期);第1242-1246页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106978415A (zh) 2017-07-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106978415B (zh) 转运rna片段及其应用
ES2666380T3 (es) Vector de transcripción de ARN y sus usos
US8486910B2 (en) SnoRNAi-small nucleolar RNA degradation by RNA interference in trypanosomatids
US20140275221A1 (en) Targeting of mirna precursors
EP2628798A1 (en) Prophylactic or therapeutic agent for fibrosis
US8148514B2 (en) hTERT gene expression regulatory gene
CN111733158B (zh) 一种抑制hsa_circ_0003599表达的siRNA及其应用
CN102643811B (zh) 人miR-1229的反义寡聚核苷酸及其应用
CN107828787B (zh) 抑制人srsf3基因表达的反义寡核苷酸序列及其应用
CN114292847B (zh) 一种长链非编码rna及其在制备治疗骨质疏松药物中的应用
CN102643807B (zh) 人miR-484的反义寡聚核苷酸及其应用
CN102643814B (zh) 人miR-431的反义寡聚核苷酸及其应用
CN102643810B (zh) 人miR-299-5p的反义寡聚核苷酸及其应用
JP5781732B2 (ja) がん抑制ｍｉＲＮＡ
CN102643809B (zh) 人miR-1274b的反义寡聚核苷酸及其应用
CN102643813B (zh) 人miR-504的反义寡聚核苷酸及其应用
JP6934235B2 (ja) 遺伝子発現制御のための発現制御核酸分子およびその用途
CN102643808B (zh) 人miR-1539的反义寡聚核苷酸及其应用
CN102643812B (zh) 人miR-1227的反义寡聚核苷酸及其应用
CN113528520A (zh) 环状RNAhas_circ_0000591及其应用
Han et al. Inhibition of proliferation of human breast cancer MCF-7 cells by small interference RNA against LRP16 gene

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant