JP6934235B2 - 遺伝子発現制御のための発現制御核酸分子およびその用途 - Google Patents
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(a)配列番号1〜6のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチド
(b)前記(a)のいずれかの塩基配列において、1もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および/または付加された塩基配列からなり、前記癌関連遺伝子の発現を制御するポリヌクレオチド
(c)前記(a)のいずれかの塩基配列に対して、80%以上の同一性を有する塩基配列からなり、前記癌関連遺伝子の発現を制御するポリヌクレオチド
本発明の発現制御核酸分子は、前述のように、癌関連遺伝子の発現を制御する発現制御核酸分子であり、下記(a)〜(c)からなる群から選択された少なくとも一つのポリヌクレオチドからなることを特徴とする。
(a)配列番号1〜6のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチド
(b)前記(a)のいずれかの塩基配列において、1もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および/または付加された塩基配列からなり、前記癌関連遺伝子の発現を制御するポリヌクレオチド
(c)前記(a)のいずれかの塩基配列に対して、80%以上の同一性を有する塩基配列からなり、前記癌関連遺伝子の発現を制御するポリヌクレオチド
本発明の発現制御用組成物は、前述のように、癌関連遺伝子の発現を制御するための組成物であって、前記本発明の発現制御核酸分子を含むことを特徴とする。本発明の組成物は、前記本発明の発現制御核酸分子を含むことが特徴であり、その他の構成は、何ら制限されない。本発明の発現制御用組成物は、例えば、発現制御用試薬ということもできる。
本発明の発現制御方法は、前述のように、癌関連遺伝子の発現を制御する方法であって、前記本発明の発現制御核酸分子を使用することを特徴とする。本発明の発現制御方法は、前記本発明の発現制御核酸分子を使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。
本発明の治療方法は、前述のように、前記本発明の発現制御核酸分子を、患者に投与する工程を含むことを特徴とする。本発明の治療方法は、前記本発明の発現制御核酸分子を使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。
本発明の使用は、前記癌関連遺伝子の発現制御のための、前記本発明の発現制御核酸分子の使用である。
ghRNA−2(配列番号1)を合成し、MET遺伝子、CDK2AP1遺伝子およびSUV39H1遺伝子のmRNA発現の抑制を確認した。
ghRNA−2は、細胞内にも存在する核酸分子であることから、RNAスポンジにより内在ghRNA−2の機能をブロックした上で、外来ghRNA−2を細胞に導入し、内在ghRNA−2および外来ghRNA−2による発現への影響を確認した。なお、特に示さない限り、前記実施例1の方法を援用した。
図3に、RNAスポンジの概略を示す。図3に示すように、ghRNA−2のシード領域のみが結合するghRNA−2スポンジmiRNA型、ghRNA−2の全体が結合するghRNA−2スポンジsiRNA型、ghRNA−2の逆向き配列が結合するghRNA−2スポンジコントロール、ghRNA−2の結合領域を持たないNon−スポンジコントロールを作成した。
前記(1)で作成した、内在ghRNA−2の機能をブロックした細胞について、MET遺伝子の発現相対値を確認した。これらの結果を、図5に示す。図2は、MET遺伝子の発現の相対値を示すグラフである。図5に示すように、内在性ghRNA−2の機能をブロックした細胞は、MET遺伝子の発現量が有意に増加した。この結果から、ghRNA−2は、MET遺伝子の発現抑制に関与していることが確認できた。
ghRNA−2による発現抑制活性と、AGOとの関係とを確認した。なお、特に示さない限り、前記実施例1の方法を援用した。
図6に、H1299細胞におけるAGO1〜AGO4のmRNAコピー数を示す。このH1299細胞のAGO1ノックアウト株、AGO2ノックアウト株、AGO3ノックアウト株、AGO4ノックアウト株について、前記実施例1と同様にして、ghRNA−2を導入し、各遺伝子(MET遺伝子、CDK2AP1遺伝子、SUV39H1遺伝子)のノックダウン効果を確認した。
H1299細胞と、そのAGO1、2および3ノックアウト株2種類(#1、#2)について、前記実施例1と同様にして、ghRNA−2を導入し、各遺伝子(MET遺伝子、CDK2AP1遺伝子、SUV39H1遺伝子)のノックダウン効果を確認した。
Claims (6)
- 下記(a)のポリヌクレオチドを含み、標的遺伝子が、MET遺伝子、CDK2AP1遺伝子、およびSUV39H1遺伝子からなる群から選択された少なくとも一つの癌関連遺伝子であることを特徴とする癌関連遺伝子発現制御用組成物。
(a)配列番号1または2の塩基配列からなるポリヌクレオチド - 前記ポリヌクレオチドが、分子内でステムループ構造を形成する、請求項1記載の癌関連遺伝子発現制御用組成物。
- 前記癌関連遺伝子の発現を抑制する、請求項1または2記載の癌関連遺伝子発現制御用組成物。
- 標的遺伝子が、MET遺伝子、CDK2AP1遺伝子、およびSUV39H1遺伝子からなる群から選択された少なくとも一つの癌関連遺伝子であり、in vitroにおいて、または非ヒト動物に対して、請求項1から3のいずれか一項に記載の癌関連遺伝子発現制御用組成物を使用することを特徴とする標的遺伝子の発現を制御する発現制御方法。
- 前記癌関連遺伝子発現制御用組成物を、細胞、組織または器官に投与する工程を含む、請求項4記載の発現制御方法。
- 前記標的遺伝子の発現を抑制する、請求項4または5記載の発現制御方法。
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