CN106963975B - 白芨胶自组装纳米微粒及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开白芨胶纳米微粒及其制备方法和应用。本发明将从白芨块茎中提取分离的分子量分布20～150kDa白芨胶干粉经若干步骤获得白芨胶纳米微粒。本发明所制备的白芨胶纳米微粒，保持并增强其聚多糖的多孔性、成胶性及稳定性，无毒副作用、具有良好生物相容性，有止血、促进创面愈合、阻止渗液溢出的综合止血效果。本发明可广泛应用于外科领域如普外科、骨科、心胸外科、神经外科、妇产科等的组织止血、组织封口和组织粘合。

Description

白芨胶自组装纳米微粒及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体地，涉及能快速使用，具有迅速止血、粘合和封闭创面作用的白芨胶自组装纳米微粒及其制备方法和应用。

背景技术

过度失血是事故和战伤致死的主要原因，也是外科手术治疗过程中致死的主要原因之一，控制失血是手术、急救和野外创伤护理的关键环节。不幸的是，来自各种原因的出血(流血)是非常见的，日常生活和工作中的意外受伤出血(流血)、外科手术中的创伤出血(流血)、来自战争的受伤出血(流血)等，如不能控制及时控制，则将有可能造成巨大损失甚至死亡。因此，止血日益成为医学界研究热点。常规的止血方法有人工挤压、烧灼术和伤口缝合但这些方法有时并不能有效止血，而延长了止血时间。目前临床上，在皮肤创伤和脾、肾等软组织器官损伤及手术的出血治疗中，大都采用天然衍生可降解止血材料，主要有明胶海绵、氧化纤维素、微纤维胶原粉末、纤维蛋白胶，胶原海绵等。而这些止血产品，在止血效果、止血时间、创面愈合、生物相容性等方面都存在一定的不足。如明胶和胶原的组织黏附力较差，两者的止血功能均依赖于足量的血小板和凝血因子，故应用受到限制。血纤蛋白原和凝血酶产品不仅来源少，而且可能会传播肝炎。动物纤维蛋白胶产品虽然具有来源广泛、价格低廉、避免人类传染病等优点，但亦存在以下问题：①环境稳定性差，需要低温贮存；②使用不便，需要一定的准备时间；③功能单一，不能用作药物载体，如在肿瘤切除术中不能用作局部化疗的载体等；④来自动物的血纤维蛋白胶其生物相容性差；⑤而且血纤维蛋白胶源自血液，不能排除导致病毒感染的可能。因此，如何使用新技术、新材料，优化制备工艺，研制一种具有生物安全性、生物相容性，且有较强的止血功能的新型止血材料，实现止血材料的多功能性，便成为当前亟待研究和探索的重要课题。

白芨为兰科植物白芨 Bletila striata(Thunb.)Reichb.f. 的干燥块茎，具有收敛止血，清热利湿，消肿生肌等功效。临床上常用于咳血吐血、外伤疮疡、宫颈糜烂及消化道溃疡等症。白芨中含有大量的白芨胶，白芨胶又称白芨多糖、白芨甘露聚糖(Bletillaglucomannan)，为白芨块茎经水提所得的一种杂多糖。现代研究表明，白芨胶是白芨止血的活性成分。白芨胶是由4分子甘露糖和1分子葡萄糖组成的葡萄糖配甘露聚糖，是一种理想的天然止血材料。白芨在我国作为收敛、止血药已有几千年的历史；在止血领域，白芨胶因为其优良的止血、组织黏附、抗感染、促进伤口愈合等功能和良好的生物相容性和生物降解性，将成为止血材料中的佼佼者。天然多糖白芨胶本身具有无毒、安全、收敛、止血、延缓皮肤衰老、增稠、悬浮、保湿和助乳化等功能；可促进血液循环、改善皮肤营养状况、治疗和防止皮肤冻疮、皲裂、防止皱纹等，且无副反应和毒性。

然而白芨胶的分子量跨度很大，在分布在20~2500kDa之间都有，虽然都有止血的作用，但大分子量的白芨多糖相对活性低，稳定性也低，并且难以被人体吸收，通常用于体外止血。如何提高白芨胶的止血效果，发挥白芨胶的止血能力，值得研究。

发明内容

本发明旨在克服现有止血产品的不足，发挥白芨胶的止血、成膜、生物相容性、生物可降解性及药物载体的多重功能，提供一种白芨胶自组装纳米微粒。

本发明同时提供所述白芨胶自组装纳米微粒的制备方法。

本发明还提供所述白芨胶自组装纳米微粒的应用。

本发明的上述目的通过如下技术方案予以实现：

一种白芨胶纳米微粒的制备方法，包括如下步骤：

S1.将分子量分布在20~150KDa的白芨胶干粉溶于水中，制成水溶液，加入0.01~0.10%第一交联剂，控制溶液至30~50℃，在300～800转/分钟的速度搅拌20~60分钟后将其倾倒入至液体石蜡中，搅拌，再加入1～10％的分散剂，在1000～3000转/分钟的速度搅拌2~8小时进行乳化，得到乳化液；

S2.往S1.所得乳化液中加入0.5~5.0%的第二交联剂，混匀后置于30~50℃水浴中进行交联8~12小时，交联完成后冷却至室温，于0℃冷凝，进行过滤，得到交联产物；

S3.交联产物用丙酮洗涤至丙酮表面无漂浮油斑，即得凝胶状半透明纳米微粒；依次以70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、无水乙醇对凝胶状半透明纳米微粒进行脱水，即得固态纳米微球；

S4.将固态纳米微球在10~40℃下真空干燥，得到所述白芨胶纳米微粒；

S1.中，溶液与液体石蜡的体积比为1:10~20。

通过上述方法制备得到的白芨胶纳米微粒呈球形或类球形，且具有比较光洁的表面以及很好的规整度，大多形态比较均匀完整，粒径分布为50~300nm。该纳米微粒具有良好的稳定性，并具有高的止血活性，而且能够被人体吸收，可作为外科手术的止血药物。

优选地，S1.中，所述水溶液中白芨胶的浓度为5~20质量%。

优选地，S1.中，所述分散剂选自司盘80、吐温80或泊洛沙姆。

优选地，所述第一交联剂及第二交联剂独立选自戊二醛、甲醛、乙醛、N, N-亚甲基-双丙烯酰胺、乙二胺、己二胺、二(甲基)丙烯酸己二醇酯、乙二醇双缩水甘油醚、丙二醇双缩水甘油醚、丁二醇双缩水甘油醚、表氯醇、聚乙二醇、海藻酸钠中的一种或几种。

优选地，S1.中，所述白芨胶干粉通过如下方法制备得到：

S5.将干燥的白芨块茎粉碎成5~10目的块料，加纯化水浸泡，块料与纯化水的质量比为 1:15～30，浸泡时间为0.5h~2h，浸泡温度为室温，然后加热回流提取1~3h，40目滤网过滤，收集滤液；滤渣重复上述浸泡、提取和过滤1~3次，分次收集并合并滤液，得到第一滤液；

S6.将S5.的第一滤液，在50~100℃减压浓缩，浓缩成有效成分葡配甘露聚糖的含量为15～95％的浓缩液；

S7.向S6.的浓缩液中加入乙醇浓度为70~95%的乙醇溶液，搅拌，使乙醇浓度达到20~30%，醇沉，过滤，弃去沉淀，得到第二滤液；

S8.向第二滤液中，加入乙醇浓度为95%的乙醇溶液或无水乙醇，搅拌，使乙醇浓度达到75~80%，醇沉，过滤，收集沉淀，并用乙醇浓度为95%的乙醇溶液或无水乙醇洗涤沉淀，洗涤后沉淀冷冻干燥或减压真空干燥，干燥温度为 40~60℃；制得所述白芨胶干粉。

采用上述方法，能获得得到分子量在20~150kDa的白芨胶。

一种上述方法制得的白芨胶纳米微粒。

所述白芨胶纳米微粒在制备组织止血、组织封口和/或组织粘合的产品中的应用。

优选地，所述组织为体内组织。

优选地，所述白芨胶纳米微粒在制备外科手术过程中止血材料的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明制备的白芨胶纳米微粒，比普通的白芨胶对组织黏附性更好、成胶性更强、止血性能更好，既具有高分子微球类止血材料的特点（分子筛及提供凝血表面），又充分融合了白芨多糖材料本身的优势（收敛、止血），从而显著提高止血效果，易在创面形成薄层，发挥白芨胶的成膜功能，对术后组织创面起粘合和封闭作用。

附图说明

图1为本发明制备的白芨胶纳米微粒的形貌图。

图2为本发明制备的白芨胶纳米微粒的粒径分布图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明进行阐述，然而本发明的保护范围并非仅仅局限于以下实施例，实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。凡在本专利的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明要求的保护范围之内。

实施例1

白芨胶的提取与分离：

（1）取干燥的白芨块茎300g,粉碎成约8目的小块，加纯化水9000ml室温浸泡2h，加热回流提取2h，40目滤网过滤，收集滤液；滤渣继续加纯化水9000ml室温浸泡1h，加热回流提取2h，40目滤网过滤，收集滤液,合并2次提取滤液，得第一滤液约17200ml。

（2）将上述第一滤液，置于减压真空浓缩装置中，70℃减压浓缩至稠状，使其有效成分葡配甘露聚糖的含量约为30%，得浓缩液约400ml。

（3）向上述浓缩液中缓缓加入95%的乙醇溶液143ml，搅拌，使乙醇浓度达到约25%，醇沉，过滤，弃去沉淀，得到第二滤液约530 ml。

（4）向上述第二滤液中，缓缓加入95%的乙醇溶液1760ml，搅拌，使乙醇浓度达到约80%，醇沉过夜，过滤，收集沉淀；并用95%的乙醇洗涤沉淀，洗涤沉淀次数为3次，每次250ml。将洗涤后的白芨胶沉淀置于真空干燥箱中减压真空干燥，干燥温度为 50℃；制得白芨胶A80.2g。该白芨胶A的分子量分布在20~150KDa。

白芨胶纳米微粒的制备：

S1.将上述白芨胶A 80.2g加入到800ml水溶液中，搅拌至完全溶解，形成白芨胶水溶液；升温至40℃，滴加0.5%戊二醛溶液120ml,以600转/分钟的速度搅拌30分钟,将其倾倒入至9200ml液体石蜡中，搅拌，再加入184ml的司盘80，以1500转/分钟的速度高速搅拌4小时进行乳化，得到乳化液；

S2.取上述乳化液再加入30%戊二醛溶液276ml，搅拌30分钟,使其分散均匀，置于40℃水浴中进行交联自组装8h,将产物冷却至室温，于0℃冷凝，取出，进行过滤, 得到交联产物；

S3.取交联产物，用丙酮洗涤3次，每次900ml,至丙酮表面无漂浮油斑，即得凝胶状半透明纳米微粒；依次以900ml的70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、无水乙醇对凝胶状半透明纳米微粒进行脱水，即得固态纳米微球；

S4.将固态纳米微球置于真空干燥器中40℃温度下真空干燥，得白色的所述白芨胶纳米微粒A 78.6g。

实施例2

白芨胶的提取与分离：

（1）取干燥的白芨块茎600g,粉碎成约6目的小块，加纯化水12000ml室温浸泡2h，加热回流提取2h，40目滤网过滤，收集滤液；滤渣继续加纯化水10000ml室温浸泡1h，加热回流提取1.5h，40目滤网过滤，收集滤液, 滤渣继续加纯化水10000ml室温浸泡1h，加热回流提取1h，40目滤网过滤，收集滤液,合并3次提取滤液，得第一滤液约31200ml。

（2）将上述第一滤液，置于减压真空浓缩装置中，65℃减压浓缩至稠状，使其有效成分葡配甘露聚糖的含量约为25%，得浓缩液约950ml。

（3）向上述浓缩液中缓缓加入95%的乙醇溶液438ml，搅拌，使乙醇浓度达到约30%，醇沉，过滤，弃去沉淀，得到第二滤液约1290ml。

（4）向上述第二滤液中，缓缓加入95%的乙醇溶液2900ml，搅拌，使乙醇浓度达到约75%，醇沉过夜，过滤，收集沉淀；并用95%的乙醇洗涤沉淀，洗涤沉淀次数为3次，每次400ml。将洗涤后的白芨胶沉淀置于真空干燥箱中减压真空干燥，干燥温度为40℃；制得白芨胶B147.1g。该白芨胶B的分子量分布在20~150KDa。

白芨胶纳米微粒的制备：

S1.将上述白芨胶B 147.1g加入到1500ml水溶液中，搅拌至完全溶解，形成白芨胶水溶液；升温至50℃，滴加1.0%戊二醛溶液100ml,以500转/分钟的速度搅拌40分钟,将其倾倒入至16000ml液体石蜡中，搅拌，再加入184ml的吐温80，以2000转/分钟的速度高速搅拌5小时进行乳化，得到乳化液；

S2.取上述乳化液再加入30%戊二醛溶液550ml，搅拌30分钟,使其分散均匀，置于40℃水浴中进行交联自组装10h,将产物冷却至室温，于0℃冷凝，取出，进行过滤, 得到交联产物；

S3.取交联产物，用丙酮洗涤3次，每次1000ml,至丙酮表面无漂浮油斑，即得凝胶状半透明纳米微粒；依次以1000ml的70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、无水乙醇对凝胶状半透明纳米微粒进行脱水，即得固态纳米微球；

S4.将固态纳米微球置于真空干燥器中40℃温度下真空干燥，得白色的所述白芨胶纳米微粒B 142.3g。

实施例3

白芨胶的提取与分离：

（1）取干燥的白芨块茎300g,粉碎成约5目的小块，加纯化水6000ml室温浸泡2h，加热回流提取2h，40目滤网过滤，收集滤液；滤渣继续加纯化水4500ml室温浸泡1h，加热回流提取1.5h，40目滤网过滤，收集滤液, 滤渣继续加纯化水4500ml室温浸泡0.5h，加热回流提取1.0h，40目滤网过滤，收集滤液,合并2次提取滤液，得第一滤液约14100ml。

（2）将上述第一滤液，置于减压真空浓缩装置中，75℃减压浓缩至稠状，使其有效成分葡配甘露聚糖的含量约为28%，得浓缩液约430ml。

（3）向上述浓缩液中缓缓加入95%的乙醇溶液162ml，搅拌，使乙醇浓度达到约26%，醇沉，过滤，弃去沉淀，得到第二滤液约560ml。

（4）向上述第二滤液中，缓缓加入95%的乙醇溶液1420ml，搅拌，使乙醇浓度达到约76%，醇沉过夜，过滤，收集沉淀；并用95%的乙醇洗涤沉淀，洗涤沉淀次数为3次，每次250ml。将洗涤后的白芨胶沉淀置于真空干燥箱中减压真空干燥，干燥温度为 50℃；制得白芨胶C79.5g。该白芨胶C的分子量分布在20~150KDa。

白芨胶纳米微粒的制备：

S1.将上述白芨胶C 79.5g加入到750ml水溶液中，搅拌至完全溶解，形成白芨胶水溶液；升温至45℃，滴加1.0%戊二醛溶液80ml,以800转/分钟的速度搅拌30分钟,将其倾倒入至8300ml液体石蜡中，搅拌，再加入170ml的司盘80，以1800转/分钟的速度高速搅拌5小时进行乳化，得到乳化液；

S2.取上述乳化液再加入30%戊二醛溶液250ml，搅拌40分钟,使其分散均匀，置于45℃水浴中进行交联自组装10h,将产物冷却至室温，于0℃冷凝，取出，进行过滤, 得到交联产物；

S3.取交联产物，用丙酮洗涤3次，每次800ml,至丙酮表面无漂浮油斑，即得凝胶状半透明纳米微粒；依次以800ml的70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、无水乙醇对凝胶状半透明纳米微粒进行脱水，即得固态纳米微球；

S4.将固态纳米微球置于真空干燥器中40℃温度下真空干燥，得白色的所述白芨胶纳米微粒C 77.4g。

白芨胶纳米微粒理化性能分析

白芨胶具有良好的生物相容性和生物可降解性,近年来，在创面修复材料的研制和开发中显示了其广阔的应用前景。本发明制备的白芨胶纳米微粒在伤口愈合的作用中具有独特的优势。本实验以白芨胶（葡配甘露聚糖）为原料制备的白芨胶自组装纳米微粒,对该白芨胶纳米微粒敷料的外观、表面结构、微球的粒径、含水率、溶胀率、固密度、pH值、炽灼残渣等理化性能进行了检测和分析。

1材料与方法

1.1实验仪器和材料

扫描电子显微镜 (日立X-650型)；PHS-204数字式精密酸度计(武汉仪器仪表研究所 )。EL204 型电子天平( 梅特勒-托利多仪器有限公司)；UV-8000双光束紫外分光光度计( Ultraviolet Spectrophotometric，上海元析仪器有限公司)；GWJ-4 型智能粒径检测仪(天津天大天发科技有限公司)。

1.2白芨胶纳米微粒

上述实施例1～3制备的白芨胶纳米微粒A、B、C。

1.3白芨胶纳米微粒的理化性能检测方法

1.3.1材料的外观:在自然光下肉眼观察白芨胶纳米微粒敷料外观。

1.3.2 微球粒径: 取适量白芨胶纳米微粒加至超纯水中，磁力搅拌器使其分散均匀后，放入激光粒度分析仪中测定微球的直径及粒径分布。

1.3.3 微球形态: 取少许粉末样品撒于样品盖上，喷金，然后在高压条件下成像，用扫描电镜观察。

1.3.4 含水率：取数个规格相同且干燥恒重的称量瓶，分别称其重量记为 Wn，分别加入适量的微球后称其重量，记为 W(其中微球重为 W-Wn)，移至 105℃烘箱中干燥 4h，取出，置干燥器中冷却 30 min，迅速称定重量(W')，再置 105 ℃烘箱中干燥 0.5h，取出，置干燥器中冷却 30 min，迅速称定重量( W')，2 次恒重之差不超过0.3mg，按下式计算微球的含水率。则含水率的计算公式为(1)：

含水率(%)= [(W- W')/(W-Wn)]×100% ………………………………(1)

1.3.5 溶胀率：精密称取干燥的白芨胶纳米微粒适量(Wd)分散于5mL试管中，加入4mL磷酸盐缓冲溶液( 0.2 M，pH6.8)溶解，漩涡振荡5 min，置于室温 12h以上直至达到溶胀平衡，离心，弃去上清液，用滤纸将微球表面的水分吸干，精密称重溶胀后的微球 (Wn)，按下式计算溶胀率(SR%),则溶胀率的计算公式为(2)：

SR(%)= [(Wn-Wd)/Wd]×100%………………………………………(2)

1.3.6 固密度：测定白芨胶纳米微粒粉末固密度方法，将白芨胶纳米微粒的粉末填充于小塑料瓶( 5 mL)中，从一定高度( 约14 mm) 按规定次数( 20 次) 落下，利用落下的撞击力使粉末装紧，并不断加入白芨胶纳米微粒粉末，直至填满且溢出瓶口，刮去多余粉末，准确测定粉末重量及塑料瓶内容积，将粉重和容积相比即得粉末的固密度。

1.3.7 pH值测定：取白芨胶纳米微粒粉末0.5g置入10ml蒸馏水中, 37℃下浸提24 h,制备白芨胶纳米微粒粉末浸提液。测定其浸提液的 pH值,作为白芨胶纳米微粒粉末的 pH值。

1.3.8炽灼残渣：取白芨胶纳米微粒粉末2g,按照《中华人民共和国药典》的方法测定。

2结果

2.1白芨胶纳米微粒粉的外观及微观形貌表征：经上述实施例制备工艺制备的白芨胶纳米微粒粉外观为类白色或淡黄色的微球粉末, 电镜扫描，微球表面呈光滑球形，大部分表面光滑，分布均匀，无明显粘连。实施例1制备的白芨胶纳米微粒的形貌如图1所示。实施例2、实施例3制备的白芨胶纳米微粒形貌与实施例1一致。

2.2白芨胶纳米微粒粉的粒径：用粒度分析仪测得所制备的微球粒径的分布范围是50～250nm。实施例1制备的白芨胶纳米微粒，粒径分布在100～200nm 范围内的微球占总数的86.9%，微球粒径分布较均匀。具体如图2所示。

2.3白芨胶纳米微粒粉的含水率：在相同的相对湿度和时间条件下，白芨胶纳米微粒A、B、C的含水率分别为 13.20%、13.51%、13.35%。

2.4白芨胶纳米微粒粉的溶胀率：在pH 6.8 的溶液中微球 12h 以上直至达到溶胀平衡，白芨胶纳米微粒A、B、C的溶胀率分别为 305.89%、306.50%、304.62%。

2.5白芨胶纳米微粒粉的固密度：白芨胶纳米微粒A、B、C的固密度值分别是 0.36/cm³、0.37/cm³、0.35g/cm³。

2.6白芨胶纳米微粒粉的pH值：白芨胶纳米微粒A、B、C的pH值分别为 5.98、6.05、6.03。

2.7白芨胶纳米微粒粉的炽灼残渣：白芨胶纳米微粒A、B、C的炽灼残渣分别为0.32%、0.29%、0.33%。

白芨胶纳米微粒粉止血效果试验

本实验考察了白芨胶纳米微粒粉对家兔体内出血模型的止血时间，以验证白芨胶纳米微粒粉的止血作用。

1材料和方法

1.1材料

白芨胶纳米微粒粉：白芨胶纳米微粒A、B、C；样品分别用具有细小喷孔的软塑料瓶分装。健康家兔，雌雄均用，体重2.5～3.Okg，(由南方医科大学实验动物中心提供)；戊巴比妥钠(南方医科大学动物实验中心)；云南白药(云南白药集团股份有限公司)；普通纱布、可溶性止血纱布和胶原蛋白海绵，均由市场购得；白芨粉末：白芨块茎粉碎研磨得到。

1.2试验方法

1.2.1止血实验

戊巴比妥钠按30mg/kg体重于兔耳静脉缓慢注入，麻醉动物。腹部剪毛，消毒铺巾后，沿右侧肋缘下6cm切口，深度先至皮肤全层，再切开腹肌至腹膜层，提起腹膜，剪开进入腹腔。从肋缘下找到肝脏，并暴露肝脏。在其平坦面，用15号手术刀片沿肝脏长轴先后划出长1cm，深1mm的两条对称性伤口，创面出血活跃。10S后两侧伤口按随机化原则分别敷云南白药或白芨粉末或白芨胶纳米微粒粉100mg，观察创面出血情况，每隔3~5s观察一次，伤口停止出血的时间为止血时间；若2min内未再出血，即认为止血成功，记录止血时间，并观察止血制剂与创面的粘合情况。

1.2.2统计学方法

采用SPSS10.0统计软件包进行统计学分析。数据以均数±标准差表示，组间比较行配对t检验P值<0.05为有统计学意义。

1.3出血时间(bleeding time，BT)

白芨胶纳米微粒A粉组BT为0.75±0.13min，白芨胶纳米微粒B粉组BT为0.94±0.12min，白芨胶纳米微粒C粉组BT为0.83±0.11min，云南白药对照组BT为3.33±0.37min。白芨粉末对照组BT为4.12±0.39min。经统计学分析，白芨胶纳米微粒粉组与两个对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时，白芨胶纳米微粒粉与创面黏附良好，能有效地密封出血创面在止血操作中，先用纱布吸干出血后，再用白芨胶纳米微粒覆盖渗血创面可以起到良好的止血作用。

2 结果和讨论

白芨胶纳米微粒粉具有明显的止血作用，主要作用表现在以下几个方面：首先白芨胶纳米微粒粉对组织表面有较强的粘附性，特别是粘附在出血周围的组织，吸收血液后体积缩小，对创面形成压迫作用，阻止进一步出血；吸收血液中的水分后使血液粘稠，减少血液的流动性促进止血；白芨胶纳米微粒粉吸水后形成水凝胶，水凝胶分子中的羟基能和纤维蛋白原分子形成氢键，促进纤维蛋白的交链，加速止血，这也是白芨胶纳米微粒加速血液凝固减少出血量和缩短出血时间的主要作用机制。云南白药吸收血液后使血液变粘稠，但对创面的粘合性不强。云南白药、白芨粉的止血作用不如白芨胶纳米微粒粉理想。结论：白芨胶纳米微粒粉是一种新型的可降解生物材料，具有肯定的止血作用。在分子水平上白芨胶纳米微粒粉能增强纤维蛋白原的凝固性，缩短凝血酶时间；在大体水平上白芨胶纳米微粒粉对组织表面具有较强的粘附性，压迫创面止血，吸收血液中的水分使血液粘稠，促进凝血，达到缩短止血时间和减少出血量的作用。

Claims (9)

1.一种白芨胶纳米微粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.将分子量分布在20～150KDa的白芨胶干粉溶于水中，制成水溶液，加入0.01～0.10％第一交联剂，控制溶液至30～50℃，在300～800转/分钟的速度搅拌20～60分钟后将其倾倒入至液体石蜡中，搅拌，再加入1～10％的分散剂，在1000～3000转/分钟的速度搅拌2～8小时进行乳化，得到乳化液；

S2.往S1.所得乳化液中加入0.5～5.0％的第二交联剂，混匀后置于30～50℃水浴中进行交联8～12小时，交联完成后冷却至室温，于0℃冷凝，进行过滤，得到交联产物；

S3.交联产物用丙酮洗涤至丙酮表面无漂浮油斑，即得凝胶状半透明纳米微粒；依次以70％乙醇、80％乙醇、90％乙醇、无水乙醇对凝胶状半透明纳米微粒进行脱水，即得固态纳米微球；

S4.将固态纳米微球在10～40℃下真空干燥，得到所述白芨胶纳米微粒；

S1.中，溶液与液体石蜡的体积比为1:10～20；

所述白芨胶纳米微粒呈球形或类球形，粒径分布为50～300nm。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S1.中，所述水溶液中白芨胶的浓度为5～20质量％。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S1.中，所述分散剂选自司盘80、吐温80或泊洛沙姆。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一交联剂及第二交联剂独立选自戊二醛、甲醛、乙醛、N,N-亚甲基-双丙烯酰胺、乙二胺、己二胺、二(甲基)丙烯酸己二醇酯、乙二醇双缩水甘油醚、丙二醇双缩水甘油醚、丁二醇双缩水甘油醚、表氯醇、聚乙二醇、海藻酸钠中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S1.中，所述白芨胶干粉通过如下方法制备得到：

S5.将干燥的白芨块茎粉碎成5～10目的块料，加纯化水浸泡，块料与纯化水的质量比为1:15～30，浸泡时间为0.5h～2h，浸泡温度为室温，然后加热回流提取1～3h，40目滤网过滤，收集滤液；滤渣重复上述浸泡、提取和过滤1～3次，分次收集并合并滤液，得到第一滤液；

S6.将S5.的第一滤液，在50～100℃减压浓缩，浓缩成有效成分葡配甘露聚糖的含量为15～95％的浓缩液；

S7.向S6.的浓缩液中加入乙醇浓度为70～95％的乙醇溶液，搅拌，使乙醇浓度达到20～30％，醇沉，过滤，弃去沉淀，得到第二滤液；

S8.向第二滤液中，加入乙醇浓度为95％的乙醇溶液或无水乙醇，搅拌，使乙醇浓度达到75～80％，醇沉，过滤，收集沉淀，并用乙醇浓度为95％的乙醇溶液或无水乙醇洗涤沉淀，洗涤后沉淀冷冻干燥或减压真空干燥，干燥温度为40～60℃；制得所述白芨胶干粉。

6.一种权利要求1至5任一项所述制备方法制得的白芨胶纳米微粒。

7.权利要求6所述白芨胶纳米微粒在制备组织止血、组织封口和/或组织粘合的产品中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述组织为体内组织。

9.权利要求6所述白芨胶纳米微粒在制备外科手术过程中止血材料的应用。