CN110201217B - 一种用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球,按照质量百分比由以下原料组成：白及多糖75％～90％，积雪草总苷10％～25％，以上组分质量百分比之和为100％。本发明还公开了上述止血微球的制备方法。本发明止血微球给药后可迅速黏附于创伤表面，并吸水膨胀与创面紧密接触形成机械保护膜，对创面起到保护作用；积雪草总苷自微球骨架结构中缓慢释放，与白及多糖协同起效，药效更加迅速、显著；并且给药方便，无需按压，可避免造成二次伤害，且药物与创面接触面大，在给药部位滞留时间长，药效更持久。

Description

一种用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球，本发明还涉及上述止血微球的制备方法。

背景技术

宫颈糜烂是育龄妇女的常见病、多发病，指宫颈外口处阴道部分表面的鳞状上皮因炎症而丧失，被颈管的柱状上皮所覆盖，使这部分组织呈细颗粒状的红色区。宫颈糜烂是诱发宫颈癌的高危因素，也是导致妇女不孕症的重要因素之一。据统计，宫颈糜烂发病率高达50％～70％，近年来，其发病年龄逐渐趋向于年轻化，患者常伴有接触性阴道出血、白带增多、异臭、腰酸、背痛、下腹坠涨等症状，严重影响女性身心健康，因此有效的治疗宫颈糜烂对于预防宫颈癌的发生及提高女性生活质量具有重要意义。

目前对宫颈糜烂的治疗方法主要有激光、微波、冷冻、LEEP刀等，各种疗法均是通过破坏或除去宫颈糜烂面单层柱状上皮，使其坏死脱落或切除后，由新生的复层鳞状上皮覆盖，从而使糜烂转为光滑。但均存在术后宫颈局部出血的并发症，部分患者出血量甚至不少于月经量，容易造成感染、宫颈狭窄或黏连以及患者心理恐慌等，严重影响治疗效果。

宫颈糜烂术后出血多因宫颈创面脱痂而发生，此时的出血治疗有一定难度，一般口服、肌注或静注止血剂效果均不理想，而且此时创面通常呈水肿充血状，组织极脆弱。目前临床上多以局部给药治疗为主，常用方法有：①无菌碘伏纱布压迫治疗，但效果较差，再次局部出血几率高，尤其对宫颈管壁脱痂出血效果更差，另外纱布压迫一段时间后容易与组织粘连，移除时易造成组织伤害而再次出血，给患者带来痛苦。②止血栓剂，存在与创面接触面较小，效果不理想，且患者在局部塞药时，易因为操作不当而碰触宫颈创面，引起出血量增加而加重术后损伤。③止血软膏剂、凝胶剂，使用不便，易污染衣物，药物难以分布均匀，且用药时也会碰触创面，加重损伤。④止血粉末制剂，存在药粉流动性差给药困难、且由于其生物黏附性差或无而容易脱落，仍需纱布压迫辅助给药的弊端。因此，开发一种使用方便、可避免造成二次伤害、能迅速止血、抗炎、并能有效促进伤口愈合及黏膜修复的治疗药物具有非常重要的意义。

微球是将药物溶解或者分散在高分子材料基质中形成的微小球状实体，一般直径约为1～250μm，由于其比表面积大，吸附性能强，遇水膨胀率较高，对创面具有较强的机械保护作用，近年来，在创伤止血领域逐渐显示出巨大的优势和发展前景。积雪草总苷(Centella asiatica total glucosides,CTG)是伞形科积雪草属植物积雪草(Centallaasiatica(L.)Urban)提取物，现代药理研究表明，CTG不仅能够促进细胞生长，加速伤口、溃疡创面的愈合，修复皮肤损伤，抑制瘢痕增生，而且具有抗氧化、抗溃疡、消炎以及保护神经细胞等作用，临床上常用于手术创伤、烧伤、增生性瘢痕等疾病的治疗。白及多糖(Bletillastriata polysaccharide,BSP)是兰科植物白及[Bletilla striata(Thund.)Reichb.f.]的主要活性成分，具有止血、抗炎、促进伤口愈合、增加免疫因子表达等多重药理作用，主要由β-葡萄糖和α-甘露糖组成，生物相容性好，可降解，溶于热水中可形成稠厚液体，且具有良好的生物黏附性及成球性，研究发现，以白及多糖为骨架所制得的微球内部为三维网状结构，有利于药物缓释，因此白及多糖具有制备用于创伤的止血微球的条件与优势。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球，解决了现有宫颈糜烂术后出血治疗中，易对患者带来二次伤害、药物使用不便的问题。

本发明的另一目的是提供上述止血微球的制备方法。

本发明所采用的技术方案是，一种用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球，按照质量百分比由以下原料组成：白及多糖75％～90％，积雪草总苷10％～25％，以上组分质量百分比之和为100％。

本发明所采用的另一技术方案是，上述止血微球的制备方法，将含有白及多糖、积雪草总苷的水相和油相混合，得到油包水型乳剂；将油包水型乳剂交联固化成球，得到微球混悬液，去除油相、洗涤、干燥、灭菌、分装，即得。

本发明的特点还在于，

具体按照以下步骤实施：

步骤1，制备水相和水相：

将白及多糖、积雪草总苷加入注射用水中，于50～65℃加热溶解，得到水相；

将液体石蜡和乳化剂混合，于50～65℃加热溶解，得到油相；

步骤2，将步骤1得到的水相缓慢加入油相中，于800～1200r/min持续搅拌30～60min，得到油包水型乳剂；

步骤3将交联剂在搅拌条件下缓慢加入步骤2得到的乳剂中，并在50～65℃条件下继续搅拌45～90min使其交联固化成球，然后在维持搅拌的条件下降至室温，得到微球混悬液；

步骤4，去除微球混悬液中油相，洗涤、干燥、灭菌，分装，即得到用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球。

步骤1中白及多糖与注射用水的质量体积比为100～250g/L，积雪草总苷与注射用水的质量体积比为11.1～83.3g/L。

液体石蜡加入量相当于水相体积4.5～6.5倍，乳化剂为制备过程中所有物料总质量的8％～12％。

乳化剂由司盘85：吐温-80按体积比1.5：1～3.5：1混合而成。

步骤2中交联剂用量为制备过程中所有物料总质量的6％～10％。

交联剂由乙二胺-环氧氯丙烷按体积比2：1～4：1混合而成。

步骤4中去除油相具体为：将所得微球混悬液通过270目铜网过滤除掉油相，得到湿微球，再分散于湿微球质量2～4倍的石油醚中，振摇10～20min，静置，弃去石油醚。

洗涤、干燥过程具体为：用异丙醇、丙酮交替洗涤3次后用氮气流吹干，再置于真空减压干燥器中干燥24～48h。

本发明的有益效果是，本发明用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球具有以下优势：①给药后微球可迅速黏附于创伤表面，并吸水膨胀与创面紧密接触形成机械保护膜，对创面起到保护作用；②积雪草总苷自微球骨架结构中缓慢释放，与白及多糖协同起效，以达到止血、抗炎、促进伤口愈合并修复受损黏膜的功效，药效更加迅速、显著；③给药方便，无需按压，可避免造成二次伤害，且药物与创面接触面大，在给药部位滞留时间长，药效更持久。解决了传统无菌碘伏纱布压迫治疗效果较差，移除时易造成组织二次伤害的弊端；也解决了栓剂、软膏剂、凝胶剂等治疗时，存在与创面接触面较小，药物难以分布均匀并到达宫颈管壁，患者用药时因为操作不当而碰触宫颈创面，引起出血量增加而加重术后损伤的弊端；解决了止血粉末制剂，存在药粉流动性差不易给药，生物黏附性差或无而容易脱落，仍需纱布压迫辅助给药的弊端。

附图说明

图1是药效试验中组织切片对比图，其中A为模型组，B为给药组，C正常对照组为正常；

图2是细胞PI荧光染色结果，其中A为止血微球给药组，B为生理盐水对照组。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。

本发明提供了一种用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球，按照质量百分比由以下原料组成：白及多糖75％～90％，积雪草总苷10％～25％，以上组分质量百分比之和为100％。

上述用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球的制备方法，具体按以下步骤实施：

步骤1，称取白及多糖、积雪草总苷溶于注射用水中，于50～65℃加热溶解，得到水相，备用；

其中白及多糖与注射用水的质量体积比为100～250g/L，积雪草总苷与注射用水的质量体积比为11.1～83.3g/L。

步骤2，量取液体石蜡，以司盘85：吐温-80(体积比1.5:1～3.5:1)为乳化剂，于50～65℃加热溶解，得到油相，备用；

其中液体石蜡加入量相当于水相体积4.5～6.5倍，乳化剂用量为制备过程中所有物料总质量的8％～12％。所述所有物料是指白及多糖、积雪草总苷及溶解用注射用水、液体石蜡、乳化剂、交联剂。

步骤3，将步骤1所得水相缓慢加入到步骤2所得油相中，于800～1500r/min持续搅拌30～60min，得油包水型乳剂；

步骤4，量取乙二胺-环氧氯丙烷(体积比2:1～4:1)作为交联剂，于搅拌条件下缓慢加入到步骤3所得乳剂中，并在50～65℃条件下继续搅拌45～90min使其交联固化成球，然后在维持搅拌的条件下降至室温，得到微球混悬液；

交联剂用量为制备过程中所有物料总质量的6％～10％。

步骤5，将步骤4所得微球混悬液通过270目铜滤网过滤除掉油相，得到湿微球，再分散于湿微球质量2～4倍的石油醚中，振摇洗涤10～20min，静置使微球沉降，弃去石油醚层，得到去除油相的湿微球；

步骤6，将步骤5所得去除油相的湿微球，用去除油相的湿微球质量2～4倍的异丙醇、丙酮交替洗涤3次后用氮气流吹干，再置于真空减压干燥器中干燥24～48h后，用环氧乙烷灭菌，分装，即得。

宫颈糜烂在女性中具有较高的发病率，近年来发病率逐年增多，已成为严重困扰女性身心健康的一类疾病。本发明采用天然高分子材料白及多糖为制备微球的骨架材料，白及多糖可降解，生物相容性好，遇水可形成稠厚的凝胶，缓释性能明显，且成球性良好，内部为三维网状结构，载药量大，是一种优良的微球骨架材料。现代药理研究表明白及多糖具有良好的止血、抗炎、促进伤口愈合作用。积雪草总苷能够促进细胞生长，加速伤口、溃疡创面的愈合，修复皮肤损伤，抑制瘢痕增生，而且具有抗氧化、抗溃疡、消炎以及保护神经细胞等作用。因此本发明以BSP为骨架材料，将积雪草总苷包埋于白及多糖微球的三维网状结构中，制备一种用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球，具有以下优势：①给药后微球可迅速黏附于创伤表面，并吸水膨胀与创面紧密接触形成机械保护膜，对创面起到保护作用；②积雪草总苷自微球骨架结构中缓慢释放，与白及多糖协同起效，以达到止血、抗炎、促进伤口愈合并修复受损黏膜的功效，药效更加迅速、显著；③给药方便，无需按压，可避免造成二次伤害，且药物与创面接触面大，在给药部位滞留时间长，药效更持久。解决了传统无菌碘伏纱布压迫治疗效果较差，移除时易造成组织二次伤害的弊端；也解决了栓剂、软膏剂、凝胶剂等治疗时，存在与创面接触面较小，药物难以分布均匀并到达宫颈管壁，患者用药时因为操作不当而碰触宫颈创面，引起出血量增加而加重术后损伤的弊端；解决了止血粉末制剂，存在药粉流动性差不易给药，生物黏附性差或无而容易脱落，仍需纱布压迫辅助给药的弊端。

以下从原理方面说明本发明的关键点所在：

1.本发明采用了天然高分子材料白及多糖(bletillastriatapolysaccharide，BSP)为制备治疗创伤出血微球的骨架材料。白及为兰科多年生草本植物白及[Bletillastriata(Thunb.)Reichb.f.]的干燥块茎，白及又名良姜、紫兰。据《本草纲目》记载：“白及别名连及草，甘根，白给。其根白色，连及而生，故曰白及”，其味苦、甘、涩，性平微寒，归肺、胃、肝经。白及具有补肺，收敛止血，消肿生肌的功效。临床主治肺伤咳血，衄血，金疮出血，痈疽肿毒，溃疡疼痛，皮肤皲裂等症。时珍曰“性涩而收，得金秋之令，故能入肺止血，生肌治疮也。”素有“外科最善”之称，是我国传统止血药。现代药理学研究认为其主要有效物质为所含的多糖类成分，即白及多糖(bletillastriata polysaccharide，BSP)。白及多糖是一种水溶性高分子黏性多糖，又被称为白及葡甘露聚糖，由D-葡萄糖和D-甘露糖按照大约1:4的比例组成，且以β型糖苷键聚合形成空间螺旋结构；其平均分子量为1.35×10⁵Da，溶于水可形成粘稠的凝胶液，从而具有良好的生物黏附性，且对人体极为安全，毒理安全性评价表明白及多糖安全无刺激、无过敏，因而，用途广泛。现代药理研究表明，BSP具有良好的止血、抗炎、增加免疫因子表达、促进伤口、溃疡愈合、抗菌等多重药理作用；同时，可生物降解、生物黏附性好、无抗原性。将其制备成的微球外观良好，内部为三维网状结构，有利于药物缓释。因此，BSP具有成为制备安全高效的止血微球的条件。

2、积雪草(Centalla asiatica(L.)Urban)是伞形科积雪草属植物，又称落得打、半边钱等。积雪草喜热、厌寒，主要产于南北半球的热带和亚热带地区，中国积雪草主要分布在南方地区，如江苏、浙江、湖南、云南等，积雪草多生于海拔2km以下的水边、田间、沟旁等肥沃阴湿处。积雪草味苦、性寒，主要用于解毒消肿、清热利湿。现代研究表明其主要成分为三萜类，其中研究最为广泛的是三萜皂苷类及其衍生物，又称为积雪草总苷(Centellaasiatica total glucosides,CTG)。其中以积雪草苷、羟基积雪草苷的含量最高，活性最强。研究表明，积雪草总苷提取物能够促进胶原蛋白和纤维结合素的合成，并在一定程度上刺激硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素和脯氨酸的合成，能够促进伤口及溃疡面的愈合；羟基积雪草苷可抑制活性氧和活性氮的产生，并加快自身抗氧化剂的生成。促进内皮细胞增生，加速微血管的再生；积雪草苷能够显著抑制瘢痕增形成及增生，其机制可能与调节肌成纤维细胞以及炎症细胞的表达相关；此外积雪草总苷还具有抗氧化、抗溃疡、消炎以及保护神经细胞等作用，在临床上常用于治疗手术创伤、烫伤、烧伤以及增生性瘢痕等的治疗，效果显著。因此本发明以CTG为模型药物，以BSP为骨架材料制备用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球，可使制剂同时具有吸附、机械保护，止血、抗炎、抗菌、促进伤口愈合、以及药物缓释等多重作用，为宫颈糜烂患者提供一种使用方便的新型高效止血制剂。

3、本发明采用乳化交联法制备止血微球，乳化过程是决定微球形态及成型的关键，本发明以司盘-85及吐温-80为混合乳化剂，使白及多糖溶液呈微小液滴分散于油相中形成W/O型乳剂；乳化过程中白及多糖的浓度对微球的形成具有重要影响，白及多糖浓度过低由于骨架材料不足以支撑微球的球体结构，成品易出现皱缩或干瘪塌陷，过高由于体系粘稠度与内聚力的增大使白及多糖不易分散并收缩成球进而影响成品的圆整度及粒径大小；水相油相比不宜过高，以避免内水相乳滴所占比例过高时，由于乳滴间的摩擦、碰撞与聚集几率增高而影响微球的成型与外观。另外，交联过程对于微球的最终成型也具有重要作用，本发明以乙二胺-环氧氯丙烷为交联剂，用量控制在6％～10％范围内，过低将导致交联程度不足，微球强度较低而易发生黏连、变形，而过高会使微球表层局部交联过度而刚性较强易发生皲裂。

实施例1

步骤1，按照质量-体积比，称取10g白及多糖、3.33g积雪草总苷溶于100mL注射用水中，于50℃加热溶解，得到水相，备用；

步骤2，量取液体石蜡450mL，加入吐温-80 18mL、司盘-85 36mL，于50℃加热溶解，得到油相，备用；

步骤3，将步骤1所得水相缓慢加入到步骤2所得油相中，于900r/min持续搅拌45min，得油包水型乳剂；

步骤4，量取乙二胺-环氧氯丙烷(体积比3:1)42mL作为交联剂，于搅拌条件下缓慢加入到步骤3所得乳剂中，并在50℃条件下继续搅拌60min使其交联固化成球，然后在维持搅拌的条件下降至室温，得到微球混悬液；

步骤5，将步骤4所得微球混悬液通过270目铜网过滤除掉油相，得到湿微球，再分散于30mL石油醚中，振摇15min，静置，弃去石油醚，得到去除油相的湿微球；

步骤6，将步骤5所得去除油相的湿微球，用异丙醇、丙酮交替洗涤3次后用氮气流吹干，再置于真空减压干燥器中干燥48h后，用环氧乙烷灭菌，分装，即得。

实施例2

步骤1，按照质量-体积比，称取20g白及多糖、2.22g积雪草总苷溶于100mL注射用水中，于60℃加热溶解，得到水相，备用；

步骤2，量取液体石蜡500mL，加入吐温-80 25mL、司盘-85 50mL，于60℃加热溶解，得到油相，备用；

步骤3，将步骤1所得水相缓慢加入到步骤2所得油相中，于1000r/min持续搅拌40min，得油包水型乳剂；

步骤4，量取乙二胺-环氧氯丙烷(体积比3:1)65mL作为交联剂，于搅拌条件下缓慢加入到步骤3所得乳剂中，并在60℃条件下继续搅拌70min使其交联固化成球，然后在维持搅拌的条件下降至室温，得到微球混悬液；

步骤5，将步骤4所得微球混悬液通过270目铜网过滤除掉油相，得到湿微球，再分散于40mL石油醚中，振摇20min，静置，弃去石油醚，得到去除油相的湿微球；

步骤6，将步骤5所得去除油相的湿微球，用异丙醇、丙酮交替洗涤3次后用氮气流吹干，再置于真空减压干燥器中干燥24h后，用环氧乙烷灭菌，分装，即得。

实施例3

步骤1，按照质量-体积比，称取25g白及多糖、8.33g积雪草总苷溶于100mL注射用水中，于65℃加热溶解，得到水相，备用；

步骤2，量取液体石蜡650mL，加入吐温-80 27mL、司盘-85 54mL，于65℃加热溶解，得到油相，备用；

步骤3，将步骤1所得水相缓慢加入到步骤2所得油相中，于1200r/min持续搅拌45min，得油包水型乳剂；

步骤4，量取乙二胺-环氧氯丙烷(体积比2:1)75mL作为交联剂，于搅拌条件下缓慢加入到步骤3所得乳剂中，并在65℃条件下继续搅拌90min使其交联固化成球，然后在维持搅拌的条件下降至室温，得到微球混悬液；

步骤5，将步骤4所得微球混悬液通过270目铜网过滤除掉油相，得到湿微球，再分散于50mL石油醚中，振摇15min，静置，弃去石油醚，得到去除油相的湿微球；

步骤6，将步骤5所得去除油相的湿微球，用异丙醇、丙酮交替洗涤3次后用氮气流吹干，再置于真空减压干燥器中干燥36h后，用环氧乙烷灭菌，分装，即得。

实施例4

步骤1，按照质量-体积比，称取25g白及多糖、2.77g积雪草总苷溶于100mL注射用水中，于55℃加热溶解，得到水相，备用；

步骤2，量取液体石蜡600mL，加入吐温-80 22mL、司盘-85 44mL，于55℃加热溶解，得到油相，备用；

步骤3，将步骤1所得水相缓慢加入到步骤2所得油相中，于800r/min持续搅拌60min，得油包水型乳剂；

步骤4，量取乙二胺-环氧氯丙烷(体积比4:1)75mL作为交联剂，于搅拌条件下缓慢加入到步骤3所得乳剂中，并在55℃条件下继续搅拌45min使其交联固化成球，然后在维持搅拌的条件下降至室温，得到微球混悬液；

步骤5，将步骤4所得微球混悬液通过270目铜网过滤除掉油相，得到湿微球，再分散于80mL石油醚中，振摇12min，静置，弃去石油醚，得到去除油相的湿微球；

步骤6，将步骤5所得去除油相的湿微球，用异丙醇、丙酮交替洗涤3次后用氮气流吹干，再置于真空减压干燥器中干燥30h后，用环氧乙烷灭菌，分装，即得。

实施例5

步骤1，按照质量-体积比，称取15g白及多糖、5g积雪草总苷溶于100mL注射用水中，于53℃加热溶解，得到水相，备用；

步骤2，量取液体石蜡500mL，加入吐温-80 20mL、司盘-85 60mL，于53℃加热溶解，得到油相，备用；

步骤3，将步骤1所得水相缓慢加入到步骤2所得油相中，于1100r/min持续搅拌55min，得油包水型乳剂；

步骤4，量取乙二胺-环氧氯丙烷(体积比3:1)60mL作为交联剂，于搅拌条件下缓慢加入到步骤3所得乳剂中，并在53℃条件下继续搅拌75min使其交联固化成球，然后在维持搅拌的条件下降至室温，得到微球混悬液；

步骤5，将步骤4所得微球混悬液通过270目铜网过滤除掉油相，得到湿微球，再分散于50mL石油醚中，振摇18min，静置，弃去石油醚，得到去除油相的湿微球；

步骤6，将步骤5所得去除油相的湿微球，用异丙醇、丙酮交替洗涤3次后用氮气流吹干，再置于真空减压干燥器中干燥42h后，用环氧乙烷灭菌，分装，即得。

以下从药效试验结果进一步说明本发明的有益效果：

1、动物实验：选取SD雌性、未孕、健康的大鼠30只，体重200±20g，随机分为正常对照组10只，模型组20只。正常组5只大鼠不作任何处理，模型组每只大鼠经导管注射20％苯酚胶浆1.5mL，隔日给药，共5次。结果显示，模型组动物均可见食欲下降，活动减少，阴道外口红肿，有黄色分泌物。正常对照组动物均干燥、清洁，活动正常。造模结束24h后，在模型组大鼠中随机选出10只，作为阴性对照组，与正常对照组大鼠一并处死，解剖取阴道至子宫角处组织，石蜡包埋，切片，光学显微镜观察。模型组剩余10只动物为给药组，2天后开始阴道深部喷入本发明止血微球制剂0.5g/次，每日1次，共给药7日，末次给药24h后，处死，操作同上。结果显示(见图1)，正常对照组大鼠(图1-C)，组织上皮无增生、萎缩现象，间质无炎症反应，肌层无变形、坏死；阴性对照组(图1-A)大鼠阴道、宫颈组织充血，水肿，个别上皮糜烂，黏膜出血，显微镜下鳞状上皮增厚，黏膜下层毛细血管扩张充血，可见炎性细胞浸润；而给药组(图1-B)在治疗第4天开始阴道分泌物逐渐减少，外阴红肿明显消退，显微镜下显示黏膜下层炎性细胞浸润明显减少，炎症程度减轻，未见出血和坏死。可见，本发明所得止血微球可使实验性大鼠宫颈损伤程度明显减轻。

2、细胞实验：取对数生长期人阴道上皮细胞HVEC，用0.25％的胰酶液消化，离心3min(1000rpm)，调整细胞浓度接种于96孔板，每孔加入100μL。置37℃、5％CO₂培养箱中培养24h后弃去培养液。每孔加入180μL的培养液以及20μL药物，分设阴性对照组及止血微球混悬液(0.5g/mL)组，置于37℃、5％CO₂培养箱中孵育24h后，每孔加入10μL MTT溶液，37℃、5％CO₂培养箱中继续培养4h后弃去培养液。每孔加入150μL二甲基亚砜，轻微振荡5min。经酶标仪检测，在490nm波长处测量各孔的吸光度值。按照细胞抑制率＝(实验组OD值-阴性对照组OD值)/阴性对照组OD值×100％，计算药物对人阴道上皮细胞HVEC的抑制率。结果显示(见图2)，药物组(图2-A)对人阴道上皮细胞HVEC生长无抑制作用，与对照组无显著差异(图2-B)。此结果与白及生肌治疮的药效相一致，可见本发明所得止血微球安全可靠、无细胞毒性，可在一定程度上能够促进细胞增殖。结果见图2

3、SD大鼠断尾止血试验：取健康成年SD大鼠12只，分为两组，每组6只，雌雄各半，其中一组为给药组，另一组为空白对照组。每只大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(30mg/100g)进行麻醉，麻醉成功后，将大鼠平放在实验台上，在大鼠尾部距末端2cm处，用剪刀一次性剪断大鼠尾部，立即在创口洒上本发明白及多糖止血微球，并将创口完全覆盖，给药后，用夹子夹住大鼠尾根部，30s后观察止血效果，如未止血，继续用夹子夹住30s，再进行观察，空白对照组不予给药。结果显示：给药组大鼠平均凝血时间为2.5min，明显优于空白对照组的12min。止血时间：从剪断大鼠尾巴到止血成功所用的时间；止血效果：用滤纸轻轻接触创口，若滤纸上没有留下血迹为止血有效。

Claims (3)

1.一种用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球，其特征在于，按照质量百分比包括以下原料：白及多糖75%～90%，积雪草总苷10%～25%；

所述用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球的制备方法，将含有白及多糖、积雪草总苷的水相和油相混合，得到油包水型乳剂；将油包水型乳剂交联固化成球，得到微球混悬液，去除油相、洗涤、干燥、灭菌、分装，即得；具体按照以下步骤实施：

步骤1，制备水相和油相：

将白及多糖、积雪草总苷加入注射用水中，于50～65℃加热溶解，得到水相；

将液体石蜡和乳化剂混合，于50～65℃加热溶解，得到油相；

所述液体石蜡加入量相当于水相体积4.5～6.5倍，乳化剂为制备过程中所有物料总质量的8%～12%；所述乳化剂由司盘85：吐温-80按体积比1.5：1～3.5：1混合而成；

步骤2，将步骤1得到的水相缓慢加入油相中，于800～1200r/min持续搅拌30～60min，得到油包水型乳剂；

交联剂用量为制备过程中所有物料总质量的6%～10%；交联剂由乙二胺-环氧氯丙烷按体积比2：1～4：1混合而成；

步骤3将交联剂在搅拌条件下缓慢加入步骤2得到的乳剂中，并在50～65℃条件下继续搅拌45～90min使其交联固化成球，然后在维持搅拌的条件下降至室温，得到微球混悬液；

步骤4，去除微球混悬液中油相，洗涤、干燥、灭菌，分装，即得到用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球；

去除油相具体为：将所得微球混悬液通过270目铜网过滤除掉油相，得到湿微球，再分散于湿微球质量2～4倍的石油醚中，振摇10～20min，静置，弃去石油醚。

2.根据权利要求1所述的一种用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球，其特征在于，所述步骤1中白及多糖与注射用水的质量体积比为100～250g/L，积雪草总苷与注射用水的质量体积比为11.1～83.3g/L。

3.根据权利要求1所述的一种用于宫颈糜烂术后创伤出血的止血微球，其特征在于，所述洗涤、干燥过程具体为：用异丙醇、丙酮交替洗涤3次后用氮气流吹干，再置于真空减压干燥器中干燥24～48h。

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