CN106954640A - 一种利用微生物防治树木病的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种利用微生物防治树木病的方法，该方法针对树木的患病进行预防和治疗，对于患病的树木采用微生物菌液喷洒于树木的患病处，对枝叶喷洒及灌根来达到预防的目的。微生物菌液的制备过程是将沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、酿酒酵母菌采用不同的培养基分别活化，然后进行液体试管培养以及一级、二级、三级种子液分别培养，培养完成后按1∶1∶1的比例提取并接入发酵罐中混合培养，混合培养产生稳定状态的菌液与无菌水稀释，最后得到复合微生物菌液。通过该方法制备的复合微生物菌液可以快速到达病原菌侵染位置，对其抑制杀灭迅速且没有任何副作用，同时可有效刺激病变处愈合，促进林木生长。

Description

一种利用微生物防治树木病的方法
技术领域
本发明涉及一种利用微生物防治树木病的方法，具体应用于果树的真菌性及细菌性病害防治。
背景技术
目前，绿化树木、果树及核果类树木的轮纹病、炭疽、黑星病、流胶病等真菌性病害较为普遍，核果类树木的细菌性根癌症也会危害树木的健康，影响水果的产量，对于这些情况，果农一般会使用碱式硫酸铜或氯溴异氰脲酸等进行预防，上述物质的使用会使有害重金属以及氯离子在果树上产生积累后进入果实中，人们食用后必然会对人体产生危害；而病虫害发生后，则使用波尔多液进行喷洒，这些残留物很难彻底的去除，同样对人体造成极大危害。
此外，人们在对果树及绿化树木修剪，环剥后会留下伤口，病源菌同样容易通过伤口侵入树木的内部，阻碍伤口的愈合，甚至会造成林木的死亡。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种利用微生物防治树木病方法，该方法采用的复合微生物菌液可以快速到达病原菌侵染位置，对其抑制杀灭迅速且没有任何副作用，同时可有效刺激病变处愈合，促进林木生长。
一种利用微生物防治树木病的方法，该方法针对树木的患病进行预防和治疗，对于患病的树木采用微生物菌液喷洒于树木的患病处，对枝叶喷洒及灌根来达到预防的目的。
微生物菌液的制备方法，其制备步骤如下：
第一步：休眠菌种活化
将休眠状态的沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、酿酒酵母菌分别接入试管斜面活化；其中沼泽红假单胞菌采用光合培养基培养，置于恒温培养箱厌氧培养3-5天，温度控制在28-30度；植物乳杆菌采用MRS培养基培养，培养温度30度，连续培养48-72小时；酿酒酵母采用麦芽汁琼脂I培养基培养，培养温度30度，连续培养48-72小时；
第二步：液体试管培养；
将第一步活化后的沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、酿酒酵母菌分别接入装有培养液的试管，混合摇匀后置培养箱培养3-5小时，待菌液状态均一培养成熟后，再接入三角摇瓶培养8-12小时；培养液的组份为3％食盐水、10％胃液素、0.5％的甘油和86.5％纯净水；
第三步：一级种子液分别培养
将第二步三角摇瓶中的菌液分别接入体积1立方米的种子罐中，30度条件下经培养后称为一级种子；
第四步：二级、三级种子液分别培养
将一级种子接入体积2立方米的种子罐内，30度条件下经培养后称为二级种子；将二级种子转入发酵罐内发酵，30度条件下经培养后称为三级种子；其中每级种子液培养时间均为48-72小时；
第四步：种子液混合培养
三级种子液培养完毕后，按1∶1∶1的比例提取并接入发酵罐中混合培养，培养温度为30度，培养时间为48-72小时；
第五步：菌液达到稳定的状态
发酵罐中的菌液混合培养48-72小时后，菌液达到稳定状态，气味酸香，颜色为红褐色且均一，细致不粘稠；
第六步：菌液稀释
向第五步中得到的稳定状态的菌液中通入无菌水，其中菌液与无菌水比例为2∶8，稀释后的菌液即为复合微生物菌液。
进一步地，所述第一步中沼泽红假单胞菌采用光合培养基为：KH2PO41.0g、CaCl 0.1g、NaHCO33.0g、乙酸钠1.0g、MgCl20.5g、NH4Cl 1.0g、NaCl 1.0g、微量元素溶液1.0ml、维生素溶液1.0ml、琥珀酸钠1.0g、酵母提取物0.5g、蛋白胨0.5g、蒸馏水1.0L，接种量为1.5-5％，培养PH值为6.8，培养温度为30℃，光照强度为3500-4500勒克斯，培养时间为5-8天；
植物乳杆菌采用的MRS培养基为：葡萄糖10.0g、蛋白胨10.0g、酵母提取物5g、琼脂20g、蒸馏水1.0L，接种量为1.5-5％，培养PH值为5-7，培养温度为25-28℃，培养时间为1-2天。
麦芽汁琼脂I培养基为：12Brix麦芽汁1.0L、琼脂15.0g、ph值为6-7，培养温度为25-28℃，培养时间为1-2天。
有益效果：
本发明通过纯生物手段制备出微生物菌液，通过微生物菌液来对树木中存在的病原菌进行防治，能够有效的避免化学农药对树木产生的副作用以及对环境造成的危害，同时也杜绝了果树上的果实的农药残留对人们身体健康带来的危害。
附图说明
图1为本发明的制备工艺流程图。
具体实施方式
下面结合附图并举实施例，对本发明进行详细描述。
本发明提供了一种利用微生物防治树木病的方法，该方法针对树木的患病进行预防和治疗，对于患病的树木采用微生物菌液喷洒于树木的患病处，对枝叶喷洒及灌根来达到预防的目的。
如附图1所示，该复合微生物菌液的制备步骤如下：
第一步：休眠菌种活化
将休眠状态的沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、酿酒酵母菌分别接入试管斜面活化；其中沼泽红假单胞菌采用光合培养基培养，置于恒温培养箱厌氧培养4天，温度控制在29度；植物乳杆菌采用MRS培养基培养，培养温度30度，连续培养48小时；酿酒酵母采用麦芽汁琼脂I培养基培养，培养温度30度，连续培养50小时；
第二步：液体试管培养；
将第一步活化后的沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、酿酒酵母菌分别接入装有培养液的试管，混合摇匀后置培养箱培养3小时，待菌液状态均一培养成熟后，再接入三角摇瓶培养8小时；培养液的组份为3％食盐水、10％胃液素、0.5％的甘油和86.5％纯净水；
第三步：一级种子液分别培养
将第二步三角摇瓶中的菌液分别接入体积1立方米的种子罐中，30度条件下经培养后称为一级种子；
第四步：二级、三级种子液分别培养
将一级种子接入体积2立方米的种子罐内，30度条件下经培养后称为二级种子；将二级种子转入发酵罐内发酵，30度条件下经培养后称为三级种子；其中每级种子液培养时间均为48-72小时；
第四步：种子液混合培养
三级种子液培养完毕后，按1∶1∶1的比例提取并接入发酵罐中混合培养，培养温度为30度，培养时间为50小时；
第五步：菌液达到稳定的状态
发酵罐中的菌液混合培养60小时后，菌液达到稳定状态，气味酸香，颜色为红褐色且均一，细致不粘稠；
第六步：菌液稀释
向第五步中得到的稳定状态的菌液中通入无菌水，其中菌液与无菌水比例为2∶8，稀释后的菌液即为复合微生物菌液。
所述第一步中沼泽红假单胞菌采用光合培养基为：KH2PO41.0g、CaCl 0.1g、NaHCO33.0g、乙酸钠1.0g、MgCl20.5g、NH4Cl 1.0g、NaCl 1.0g、微量元素溶液1.0ml、维生素溶液1.0ml、琥珀酸钠1.0g、酵母提取物0.5g、蛋白胨0.5g、蒸馏水1.0L，接种量为1.5％，培养PH值为6.8，培养温度为30℃，光照强度为3500勒克斯，培养时间为5天；
植物乳杆菌采用的MRS培养基为：葡萄糖10.0g、蛋白胨10.0g、酵母提取物5g、琼脂20g、蒸馏水1.0L，接种量为1.5％，培养PH值为6，培养温度为25℃，培养时间为1天。
麦芽汁琼脂I培养基为：12Brix麦芽汁1.0L、琼脂15.0g、ph值为6，培养温度为25℃，培养时间为2天。
实施例1：桃树炭疽病的预防与治疗
山西运城刘先生经营一个桃树园区，每年桃树都会受到炭疽病不同程度的侵袭，使用我公司菌液进行对照处理，即20棵不使用菌液处理其他预防措施正常使用，另20棵使用菌液预防处理同时其他预防措施正常使用(如其他预防措施使用农药或杀虫剂类，应等到其失去药效再使用菌液)。2个月后，未使用菌液处理的20棵桃树有2棵患病，提取患处成分化验分析为植物性真菌炭疽病，另20棵使用菌液预防处理没有患此病现象。对于两棵患病树木的患病处喷施50-100倍菌液，间隔7天喷施一次，喷施3次后提取患处成分分析，炭疽真菌数量减少，5次后恢复正常。
实施例2：山东潍坊杏树根癌症的预防与治疗山东潍坊种植园区，每年杏树都会受到根癌症不同程度的侵袭，园区负责人使用我公司菌液进行预防与治疗对照处理，即20棵不使用菌液处理其他预防措施正常使用，另20棵使用菌液预防处理同时其他预防措施正常使用(如其他预防措施使用农药或杀虫剂类，应等到其失去药效再使用菌液)。2个月后，未使用菌液处理的20棵杏树有2棵患病，提取患处成分化验分析为由致瘤农杆菌引起的细菌性根癌症，另20棵使用菌液预防处理没有患此病现象。对于两棵患病树木的患病处喷施50-100倍菌液，间隔7天喷施一次，喷施3次后提取患处成分分析，致瘤农杆菌数量减少，5次后恢复正常。
综上所述，以上仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种利用微生物防治树木病的方法，该方法针对树木的患病进行预防和治疗，对于患病的树木采用微生物菌液喷洒于树木的患病处，对枝叶喷洒及灌根来达到预防的目的。
2.如权利要求1所述的一种利用微生物防治树木病的方法，其特征在于，微生物菌液的制备步骤如下：
第一步：休眠菌种活化
将休眠状态的沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、酿酒酵母菌分别接入试管斜面活化；其中沼泽红假单胞菌采用光合培养基培养，置于恒温培养箱厌氧培养3-5天，温度控制在28-30度；植物乳杆菌采用MRS培养基培养，培养温度30度，连续培养48-72小时；酿酒酵母采用麦芽汁琼脂I培养基培养，培养温度30度，连续培养48-72小时；
第二步：液体试管培养；
将第一步活化后的沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、酿酒酵母菌分别接入装有培养液的试管，混合摇匀后置培养箱培养3-5小时，待菌液状态均一培养成熟后，再接入三角摇瓶培养8-12小时；培养液的组份为3％食盐水、10％胃液素、0.5％的甘油和86.5％纯净水；
第三步：一级种子液分别培养
将第二步三角摇瓶中的菌液分别接入体积1立方米的种子罐中，30度条件下经培养后称为一级种子；
第四步：二级、三级种子液分别培养
将一级种子接入体积2立方米的种子罐内，30度条件下经培养后称为二级种子；将二级种子转入发酵罐内发酵，30度条件下经培养后称为三级种子；其中每级种子液培养时间均为48-72小时；
第四步：种子液混合培养
三级种子液培养完毕后，按1∶1∶1的比例提取并接入发酵罐中混合培养，培养温度为30度，培养时间为48-72小时；
第五步：菌液达到稳定的状态
发酵罐中的菌液混合培养48-72小时后，菌液达到稳定状态，气味酸香，颜色为红褐色且均一，细致不粘稠；
第六步：菌液稀释
向第五步中得到的稳定状态的菌液中通入无菌水，其中菌液与无菌水比例为2∶8，稀释后的菌液即为复合微生物菌液。
3.如权利要求2所述的一种利用微生物防治树木病的方法，期特征在于，所述第一步中沼泽红假单胞菌采用光合培养基为：KH2PO41.0g、CaCl 0.1g、NaHCO33.0g、乙酸钠1.0g、MgCl20.5g、NH4Cl 1.0g、NaCl 1.0g、微量元素溶液1.0ml、维生素溶液1.0ml、琥珀酸钠1.0g、酵母提取物0.5g、蛋白胨0.5g、蒸馏水1.0L，接种量为1.5-5％，培养PH值为6.8，培养温度为30℃，光照强度为3500-4500勒克斯，培养时间为5-8天；
植物乳杆菌采用的MRS培养基为：葡萄糖10.0g、蛋白胨10.0g、酵母提取物5g、琼脂20g、蒸馏水1.0L，接种量为1.5-5％，培养PH值为5-7，培养温度为25-28℃，培养时间为1-2天。
麦芽汁琼脂I培养基为：12Brix麦芽汁1.0L、琼脂15.0g、ph值为6-7，培养温度为25-28℃，培养时间为1-2天。
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