CN106929449A - 一种高效降解油脂的枯草芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种高效降解油脂的枯草芽孢杆菌，其中该枯草芽孢杆菌6‑1oil于2016年12月22日在广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号为GDMCC No.60134。本发明的枯草芽孢杆菌6‑1oil可以利用油脂为生长碳源，能在油脂含量较高的环境下正常生长，并具有高效降解油脂的能力；采用本发明的枯草芽孢杆菌6‑1oil与凝结芽孢杆菌、酿酒酵母和载体辅料复配可以制备餐厨垃圾处理菌剂。制备的餐厨垃圾处理菌剂能适应国内餐厨垃圾油脂含量高的情况，从而有效避免了在好氧堆肥中出现油脂包裹微生物导致微生物活性下降而好氧堆肥失败的情况，可满足国内餐厨垃圾好氧堆肥的需求。该枯草芽孢杆菌6‑1oil还可以应用于治理土壤油污、生产生物表面活性剂、制备生物清洁剂等领域。

Description

一种高效降解油脂的枯草芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物发酵领域，具体地，涉及一种高效降解油脂的枯草芽孢杆菌及其在餐厨垃圾好氧堆肥中的应用。
背景技术
餐厨垃圾是指日常生活中所产生的食品垃圾，是城镇生活垃圾重要组成部分之一。根据清华大学环境科学与工程系固体废物污染控制及资源化研究所的统计数据表明，我国大中城市餐厨垃圾的年产生量不低于6000万吨。餐厨垃圾以淀粉、食物纤维类、蛋白质和油脂等为主要成分，这些物质极易腐败、霉变，而且成分复杂，其中含有如聚氯、聚苯等不易分解和吸收的化学物质、如亚硝酸盐等毒素、如细菌等有毒有害成分和大量的病毒，不但容易传染沙门氏菌、大肠杆菌等10余种疾病，还会传染疯牛病、口蹄疫、肺结核、肝炎等恶性传染病。
餐厨垃圾中的高油脂含量给其处理带来很多麻烦，如果不经处置而直接排入市政管网，由于油脂在常温下不易降解，因此其会粘附器壁，从而容易造成管路堵塞。而进入下水道的油脂也会带来一定的安全隐患，例如，进入下水道的油脂经非法采集后经简单的加热、分层、脱水、去渣和沉淀等提炼工艺提取油脂，即形成“地沟油”。由于餐厨垃圾中的大量易腐有机物属于资源型废弃物，极易被微生物降解，因此生物好氧堆肥法是实现餐厨垃圾资源化处理的有效途径之一。利用生物技术对餐厨垃圾进行处理，不仅对环境影响小，而且可以产生对环境有益的二次产物。
我国餐厨垃圾中干基粗脂肪含量在20～30％之间，根据各地饮食结构和生活水平的不同而有所差异，例如重庆大量火锅店使用较多食用油，部分火锅店餐厨垃圾中的干基粗脂肪含量高达60％，平均湿基粗脂肪含量为17.2％。
含油量对餐厨垃圾的好氧堆肥具有重要影响。对于堆肥，微生物最佳的pH范围为5.5～8.5。油脂会在堆料表面形成一层膜，阻碍了堆料与氧气的接触，导致堆料出现厌氧现象。如果餐厨垃圾含油量过高，堆料由好氧环境转为厌氧环境，进入水解酸化阶段，当pH<6.0时，主要是嗜酸性微生物(真菌、酵母菌等)，其胞外水解酶促进了油脂的水解和脂肪酸的形成，而油脂的水解和脂肪酸的形成使得系统进一步酸化，其pH值无法升高，始终在4.5～5.0左右波动，不利于堆肥微生物的生长；含油量高使堆料内部出现的厌氧环境会抑制好氧微生物的生长，不利于有机质降解，堆料含水率和水溶性碳氮比均随着时间延长而逐渐下降；温度是好氧堆肥的一个重要条件，温度的作用主要影响微生物的生长，餐厨垃圾中含油量越高，好氧堆肥反应越慢，体系能达到的最高温度越低，当含油量大于8％时，堆料最高温度始终没有达到堆肥最适宜的温度55℃，堆肥效果受到显著影响；油脂包裹支撑介质，干扰微生物生命活动，高浓度长链脂肪酸吸附在细胞膜表面阻止了物质的传递，未降解的油脂凝聚包裹着微生物，从而抑制餐厨垃圾好氧堆肥中微生物的活性。
国内餐厨垃圾的主要特点为含盐高、含油脂高。在好氧堆肥中，高盐高油脂会抑制微生物生长，导致堆肥失败，或者堆肥出来的肥料会对植物造成伤害。在餐厨垃圾处理中，通常需要针对油脂进行预处理再进行好氧堆肥。油脂的预处理会提高餐厨垃圾的处理复杂度并增加处理成本。
专利申请号为CN201310403853.5的专利《高效油脂降解菌及其应用》提供了一种高效降解油脂的不动杆菌，并介绍了将其用于清除餐厨垃圾油脂。这种菌的应用需要先从发酵液中提取出生物表面活性剂，然后再将生物表面活性剂用于去除油脂。这项技术用于餐厨垃圾好氧堆肥领域不够方便，效益并不比直接使用化学表面活性剂更有优势。
因此，我们需要一种既能够高效乳化和降解油脂，又能适应餐厨垃圾好氧堆肥环境，而且不会产生恶臭和毒素，对环境友好的菌种。这种高效除油菌种的应用还可以推广到治理土壤油污、生产生物表面活性剂、制备生物清洁剂等领域。
发明内容
本发明的目的在于提供一株枯草芽孢杆菌6-1oil，该枯草芽孢杆菌6-1oil可以利用油脂为生长碳源，能在油脂含量较高的环境下正常生长，并能高效乳化快速降解油脂，满足国内餐厨垃圾好氧堆肥的需求。
本发明所采取的技术方案为：一种高效降解油脂的枯草芽孢杆菌，所述高效降解油脂的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌6-1oil，于2016年12月22日在广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号为GDMCC No.60134，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；分类学命名为：Bacillus subtilis，其从餐厨垃圾好氧堆肥料中分离而得。
本发明的枯草芽孢杆菌6-1oil的特征如下：菌体长2～3μm、宽0.7μm；芽孢短杆状，中生，具体为长1.5μm、宽0.7μm，其光学显微镜照片如图1所示；营养琼脂上菌落为纯白色，有环形褶起，边缘裂叶状，菌株6-1oil在营养琼脂培养基上的菌落形态如图2所示。
菌株6-1oil的16S rDNA序列与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)具有最高同源性，高达99.92％，其16S rDNA序列如序列表SEQ ID No.1所示；构建的系统发育树如图3所示，菌株6-1oil与芽孢杆菌属聚合到一起，说明6-1oil属于芽孢杆菌属(Bacillus)，因此初步判断为菌株6-1oil为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。根据枯草芽孢杆菌基因组中β-甘露聚糖酶基因上下游序列设计特异引物，菌株6-1oil的枯草芽孢杆菌特异引物扩增结果为阳性，说明其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。其中，特异引物序列为：Bsu-man-1F：5’-CAGGCTCACACTTTGTCTTG-3’(SEQ ID No.2)；Bsu-man-1R：5’-TGAACACAGTCCTGGGTTAG-3’(SEQ ID No.3)。
本发明还提供了包含枯草芽孢杆菌6-1oil的餐厨垃圾处理菌剂。
本发明还提供了一种餐厨垃圾处理菌剂，所述餐厨垃圾处理菌剂包含枯草芽孢杆菌6-1oil。
优选地，所述餐厨垃圾处理菌剂还包含凝结芽孢杆菌、酿酒酵母和载体辅料。
其中，凝结芽孢杆菌和酿酒酵母均可以从广东省微生物中心获得，凝结芽孢杆菌编号GIM1.421，酿酒酵母编号GIM 2.135；枯草芽孢杆菌6-1oil、凝结芽孢杆菌和酿酒酵母经液态发酵扩大培养后离心而得。
进一步优选地，枯草芽孢杆菌6-1oil、凝结芽孢杆菌和酿酒酵母的活菌含量分别为(2～9)×108CFU/g、(1～8)×108CFU/g和(3～9)×107CFU/g。
优选地，所述载体辅料包括以下重量百分比的物料：玉米糠15％～30％、米糠15％～30％、椰糠5％～10％、花生麸30％～50％、红糖8％～15％。
本发明还提供了上述餐厨垃圾处理菌剂的制备方法，包括以下步骤：
1)分别对枯草芽孢杆菌6-1oil、凝结芽孢杆菌和酿酒酵母进行斜面菌种活化，活化后再分别经液体发酵扩大培养、高速离心收集菌体，将收集得到的枯草芽孢杆菌体6-1oil、凝结芽孢杆菌体和酿酒酵母体混合，得到复合菌体；
2)将载体辅料中的各物料按重量百分比混合，得到载体辅料；
3)将步骤1)得到的复合菌体和步骤2)得到的载体辅料按0.8-1.2:0.5-1.5质量比混合，在40-60℃烘干至水分含量为10％～15％，得到餐厨垃圾处理菌剂。
国内餐厨垃圾普遍状况为油脂含量高，干基含油量能达到20％～30％，将本发明制备的复合菌剂用于处理餐厨垃圾，能有效降解餐厨垃圾中的油脂，降低油脂含量。
本发明还提供了高效降解油脂的枯草芽孢杆菌的应用，所述高效降解油脂的枯草芽孢杆菌可以应用于生物降解餐厨垃圾、治理土壤油污、生产生物表面活性剂和制备生物清洁剂等领域中。
其中，在降解餐厨垃圾时，餐厨垃圾处理菌剂中的枯草芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌6-1oil)的含量为(2～9)×108cfu/mL；在治理土壤油污时，采用的高效降解油脂的枯草芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌6-1oil)的含量不低于108cfu/mL；在生产生物表面活性剂、制备生物清洁剂时，采用的高效降解油脂的枯草芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌6-1oil)的含量不低于109cfu/mL。
本发明的有益效果是：
本发明的枯草芽孢杆菌6-1oil可以利用油脂为生长碳源，能在油脂含量较高的环境下正常生长，并具有高效降解油脂的能力，可满足国内餐厨垃圾好氧堆肥的需求；枯草芽孢杆菌6-1oil可以与其他菌种进行复配而制备餐厨垃圾好氧堆肥菌剂，不影响其它菌种的活性和有效性能，在餐厨垃圾处理中有效降解油脂，降低油脂含量。
采用枯草芽孢杆菌6-1oil、凝结芽孢杆菌、酿酒酵母和载体辅料复配制备的餐厨垃圾好氧堆肥复合菌剂能适应国内餐厨垃圾油脂含量高的情况，从而有效避免了在好氧堆肥中出现油脂包裹微生物导致微生物活性下降而好氧堆肥失败的情况。
枯草芽孢杆菌6-1oil油脂降解效果主要以餐厨垃圾好氧堆肥中的干基含油量来体现；干基含油量为18.7％的餐厨垃圾在加入由枯草芽孢杆菌6-1oil制备的高效除油复合菌剂，在好氧堆肥厨余机内运作120h后，餐厨垃圾干基含油量下降至4.2％。
枯草芽孢杆菌6-1oil的应用还可以推广到治理土壤油污、生产生物表面活性剂、制备生物清洁剂等领域。
附图说明
图1是枯草芽孢杆菌6-1oil光学显微镜照片；
图2是枯草芽孢杆菌6-1oil在营养琼脂培养基上的菌落形态；
图3是基于16S rDNA序列构建的系统发育树；
图4是枯草芽孢杆菌6-1oil在含油脂的培养基上的生长情况；
图5A是含油液体培养基接种枯草芽孢杆菌6-1oil培养前的图片；
图5B是含油液体培养基接种枯草芽孢杆菌6-1oil培养后的图片；
图6是采用枯草芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌6-1oil处理餐厨垃圾好氧堆肥的效果对比图。
具体实施方式
实施例1
本例为枯草芽孢杆菌菌株6-1oil的分离、驯化和鉴定。
(1)取好氧发酵的餐厨垃圾堆肥料1g溶解于20mL无菌水中，充分震荡溶解后，按5％接种量将上清液接种到营养肉汤培养基中，置于摇床上，于37℃、180rpm下培养48h，得到培养液；
(2)取步骤(1)中的培养液稀释至菌液浓度为500～1500cfu/mL涂布于含有1％食用油的培养基中(配方：蛋白胨10g、牛肉膏5g、NaCl 5g、食用油10mL、吐温80 1.5～3mL、琼脂15～20g，补水至1L，pH 7.0～7.4)，在温度为37℃下，培养筛选出生长的单菌落；
(3)取步骤(2)中的单菌落接种于含有5％食用油的液体培养基中，在37℃培养，5日为一个驯化周期；驯化25个周期，每个驯化周期的培养基中食用油含量依次按5-10％逐渐增加；
(4)将步骤(3)中驯化后的培养液稀释至菌液浓度为500～1500cfu/mL，涂布于中性红油脂培养基中(配方：蛋白胨10g、牛肉膏5g、NaCl 5g、食用油10mL、1.6％中性红水溶液1mL、琼脂15～20g，补水至1L，pH7.0～7.4)，选取菌落周围变红明显且范围大的单菌落，获得菌株6-1oil。
对获得的菌株6-1oil进行观察和鉴定，结果如下：
菌体特征：菌株6-1oil菌体长2～3μm、宽0.7μm；芽孢短杆状，中生，长1.5μm、宽0.7μm；具体如图1所示。
菌落特征：菌株6-1oil在营养琼脂平板上划线分离，观察菌落特征营养琼脂上菌落纯白色，单菌落直径6mm，有环形褶起，边缘裂叶状，如图2所示。
菌株6-1oil构建的系统发育树如图3所示。
1％葡萄糖琼脂穿刺接种试验：深部生长但不扩散，不产气。
O-F试验：有氧时下面产酸(弱+)，油封不产酸，不产气，表面菌苔白色、起皱，沿穿刺向深生长(+)，有氧时扩散(+)，油封时不扩散；因此，该菌株是氧化型产酸，兼性好氧菌；
遗传学特征：菌株6-1oil的16S rDNA分析序列与枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)具有最高同源性，高达99.92％，其枯草芽孢杆菌特异引物扩增结果为阳性，因此鉴定菌株6-1oil为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 6-1oil)，并将其保存。
实施例2
本例为高油脂琼脂平板分别培养未驯化枯草芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌6-1oil的实验。
配置含有食用油的固体培养基(配方：蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、琼脂粉15g、食用油50mL、吐温-80 2mL，补水至1L，pH7.0～7.4)，平板上打孔，分别接种未驯化枯草芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌6-1oil，在37℃下培养，观察其生长情况。
两种菌株的生长情况见图4，其中图4中的上下孔接种未驯化枯草芽孢杆菌，左右孔接种枯草芽孢杆菌6-1oil。由图4可知，枯草芽孢杆菌6-1oil在含有食用油的平板上生长迅速，菌落面积大，并将未驯化枯草芽孢杆菌的菌落包围，说明6-1oil能在含油情况下生长良好。
实施例3
本例为高油脂营养液发酵实验
将菌株枯草芽孢杆菌6-1oil接种于已灭菌的含油液体培养基(配方：蛋白胨10g、牛肉膏5g、氯化钠5g、食用油10mL、吐温-80 1.5mL，补水至1L，pH 7.0～7.4)中，在37℃下摇床培养，培养3日后，观察结果。
图5A为含油液体培养基接种枯草芽孢杆菌6-1oil培养前的图片，由图5A可知，接种菌株枯草芽孢杆菌6-1oil前，含油液体培养基呈黄色，上面浮有一层油，有较明显的分层现象，瓶壁上具有油脂附着。
培养3日后，采用枯草芽孢杆菌6-1oil接种的含油液体培养基的乳化降解情况如图5B所示。由图5B可知，经过枯草芽孢杆菌6-1oil降解后，含油液体培养基油水混合均匀，由黄色变成乳白色，瓶壁干净，没油脂附着，说明食用油被乳化降解。
实施例4
本例为餐厨垃圾处理菌剂的制备。
制备餐厨垃圾处理菌剂的方法，包括以下步骤：
1)将枯草芽孢杆菌6-1oil接种在营养琼脂斜面培养基，凝结芽孢杆菌接种在MRS斜面
培养基，酿酒酵母接种在PDA斜面培养基，进行菌种活化；
2)将活化后的枯草芽孢杆菌6-1oil、凝结芽孢杆菌、酿酒酵母分别接种于250mL液体培养基，摇床培养，其中，枯草芽孢杆菌6-1oil和凝结芽孢杆菌在37℃温度下培养48h，酿酒酵母在28℃温度下培养48h，得种子液；
其中，枯草芽孢杆菌6-1oil液体培养基配方：蛋白胨10g、牛肉膏5g、氯化钠10g、食用油10mL、吐温-80 2mL，补水至1L，pH7.0～7.4；
凝结芽孢杆菌液体培养基配方：乳化胨15g、酵母提取物5g、磷酸二氢钾2g、葡萄糖10g、番茄汁100mL、吐温-80 10g，补水至1L，pH6.6～7；
酿酒酵母液体培养基配方：麦汁80mL、红糖20g，补水至1L；
3)将所得的种子液分别接种到10L发酵罐液体培养基中培养。枯草芽孢杆菌6-1oil、凝结芽孢杆菌在37℃温度下培养48h，酿酒酵母在28℃温度下培养48h；其中各发酵液体培养基配方与步骤2)中的液体培养基配方一致；
4)将上述所得发酵液分别离心得到枯草芽孢杆菌6-1oil菌体、凝结芽孢杆菌菌体和酿酒酵母菌体，分别将这三种菌体按1:1:1质量比混合，得混合菌体；
5)将载体辅料按以下重量比混合，玉米糠20％、米糠20％、椰糠8％、花生麸40％、红糖12％，得到载体辅料；
6)将步骤4)得到的混合菌体和步骤5)得到的载体辅料按1:1质量比混合，50℃烘干至水分含量为15％，即得到餐厨垃圾处理菌剂。
将本例制备的餐厨垃圾处理菌剂用于处理餐厨垃圾：餐厨垃圾为食堂泔水桶内的饭菜，初始含油量测得为20％～28％；将制得的菌剂按与餐厨垃圾重量比为1:6的量投入到餐厨垃圾中，在40℃保温通风条件下不断搅拌；72h后垃圾减重率65％～75％，降解残余物的含油量降至10％以下。或将2.5kg菌剂投入到40℃保温通风条件下不断搅拌的餐厨垃圾处理机中，每日可投入并降解1.5kg餐厨垃圾，降解24h后垃圾减重率80％～90％，降解残余物含油量在8％以下。
实施例5
本例为枯草芽孢杆菌6-1oil和枯草芽孢杆菌GIM 1.222用于厨余机餐厨垃圾除油效果测试对比
实验用的厨余机具有搅拌功能、37～45℃保温功能和抽风换气功能，提供了一个微生物好氧堆肥的环境条件。
(1)试验组：
菌株：枯草芽孢杆菌6-1oil、凝结芽孢杆菌、酿酒酵母；
辅料：20％玉米糠、20％米糠、8％椰糠、40％花生麸、12％红糖；
枯草芽孢杆菌6-1oil接入LB液体培养基中，37℃摇床培养至活菌浓度为(5～9)×108cfu/mL；凝结芽孢杆菌接入液体乳酸菌培养基中，37℃摇床培养至活菌浓度为(3～7)×108cfu/mL；酿酒酵母接入麦汁红糖培养液(8％麦汁+2％红糖)中，28℃摇床培养至活菌浓度为(3～9)×107cfu/mL；
将上述各菌株发酵液150mL接入到2.5kg辅料中，然后投入到含15kg高油脂食物的好氧堆肥餐厨垃圾处理机中，开始运作，24小时后开始记录堆肥料中的干基含油量；
(2)对照组：
菌株：枯草芽孢杆菌GIM 1.222、凝结芽孢杆菌、酿酒酵母
辅料：20％玉米糠、20％米糠、8％椰糠、40％花生麸、12％红糖
枯草芽孢杆菌接入LB液体培养基中，37℃摇床培养至活菌浓度为(5～9)×108cfu/mL；凝结芽孢杆菌接入液体乳酸菌培养基中，37℃摇床培养至活菌浓度为(3～7)×108cfu/mL；酿酒酵母接入麦汁红糖培养液(8％麦汁+2％红糖)中，28℃摇床培养至活菌浓度为(3～9)×107cfu/mL；
将上述各菌株发酵液150mL接入到2.5kg辅料中，然后投入到含15kg高油脂食物的好氧堆肥餐厨垃圾处理机中，开始运作，24小时后开始记录堆肥料中的干基含油量。
采用枯草芽孢杆菌GIM 1.222和枯草芽孢杆菌6-1oil处理餐厨垃圾好氧堆肥的对比结果如表1所示。处理的对比效果图如图6所示。其中，左边的柱状图为含有除油菌6-1oil(实验组)的处理结果；右边的柱状图为对照组的处理结果。
表1 枯草芽孢杆菌GIM 1.222和枯草芽孢杆菌6-1oil处理餐厨垃圾好氧堆肥的对比结果
时间 第1天(初始) 第3天 第6天
试验组干基含油量(％) 18.7 9.9 4.2
对照组干基含油量(％) 16.6 16.1 14.5
分析表1和图6可知，本发明的枯草芽孢杆菌6-1oil能很好地处理餐厨垃圾的油脂成分，降解5天后(即第6天)，对照组的干基含油量为14.5％，油脂降解率为12.6％，试验组干基含油量降低到了4.2％，油脂降解率高达77.5％；与含有普通枯草芽孢杆菌的对照组相比，从油脂降解率得知，枯草芽孢杆菌6-1oil在餐厨垃圾处理中能高效地降低油脂含量。
实施例6
本例为枯草芽孢杆菌6-1oil在治理土壤油污中的应用，包括以下步骤：
1)枯草芽孢杆菌6-1oil接种于油脂固体培养基中活化，37℃培养1日，所述油脂固体培养基配方为：蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、琼脂粉15g、食用油10mL、吐温-802mL，补水至1L，pH7.0～7.4；
2)挑取步骤1)活化后的枯草芽孢杆菌6-1oil接种于LB液体培养基中，37℃摇床培养得种子液，所述LB液体培养基配方为：蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g，补水至1L，pH7.0～7.4；
3)将种子液按5％接种于发酵培养液中，37℃，震荡频率为120rpm～150rpm，培养2日，有效活菌数≥108cfu/mL，离心干燥，得菌体，发酵培养液配方为：蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，磷酸二氢钠2g，补水至1L；；
4)使用前，将步骤3)中的菌体用0.1％红糖水按1:100倍稀释，活化3～8小时后成为菌液，活菌含量不低于108cfu/mL；
5)取洁净土壤加入柴油，使其浓度为2000mg/kg，将步骤4)中的菌液均匀喷洒于土壤上，喷洒后翻耕土壤，每日喷洒一次，每次喷20mL菌液每1kg土壤。5日后，测量土壤中的柴油含量，下降至340mg/kg；枯草芽孢杆菌6-1oil对土壤油污处理有良好效果。
实施例7
生物清洁剂由溶质、溶剂和枯草芽孢杆菌6-1oil的发酵液组成，其中溶质、溶剂和发酵液重量配比为5～10:45～60:30～50。
本例为枯草芽孢杆菌6-1oil在制备生物清洁剂的应用，包括以下步骤：
1)枯草芽孢杆菌6-1oil接种于油脂固体培养基中活化，37℃培养1日，所述油脂固体培养基配方为：蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、琼脂粉15g、食用油10mL、吐温-802mL，补水至1L，pH7.0～7.4；
2)挑取步骤1)活化后的枯草芽孢杆菌6-1oil接种于LB液体培养基中，37℃摇床培养得种子液，所述LB液体培养基配方为：蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g，补水至1L，pH7.0～7.4；
3)将种子液按5％接种于发酵培养液中，37℃，震荡频率为120rpm～150rpm，培养2日，有效活菌数≥109cfu/mL离心，得发酵液，发酵培养液配方为：蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，磷酸二氢钠2g，补水至1L；
4)溶质为表面活性剂，溶质成分为脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠，脂肪醇聚氧乙烯醚和烷醇酰胺，其质量分数比为50～65:20～30:15～30；溶剂为蒸馏水，将溶质、溶剂和枯草芽孢杆菌6-1oil发酵液按重量配比5～10:45～60:30～50混合得生物清洁剂。
5)制得的生物清洁剂可用于餐具清洗、油污清洗等领域，效果明显。
室温下，2L自来水中加入5mL生物清洁剂，拌匀。加入含有大量油污迹的餐具，清洗后，餐具壁上光洁没油污，废水清澈，且没有明显油面，达到清洁目的。
序列表
<110> 江门市地尔汉宇电器股份有限公司
<120> 一种高效降解油脂的枯草芽孢杆菌及其应用
<130> JQ171-6004-D
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1292
<212> DNA
<213> 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）
<400> 1
ggtgtgtaca aggcccggga acgtattcac cgcggcatgc tgatccgcga ttactagcga 60
ttccagcttc acgcagtcga gttgcagact gcgatccgaa ctgagaacag atttgtggga 120
ttggcttaac ctcgcggttt cgctgccctt tgttctgtcc attgtagcac gtgtgtagcc 180
caggtcataa ggggcatgat gatttgacgt catccccacc ttcctccggt ttgtcaccgg 240
cagtcacctt agagtgccca actgaatgct ggcaactaag atcaagggtt gcgctcgttg 300
cgggacttaa cccaacatct cacgacacga gctgacgaca accatgcacc acctgtcact 360
ctgcccccga aggggacgtc ctatctctag gattgtcaga ggatgtcaag acctggtaag 420
gttcttcgcg ttgcttcgaa ttaaaccaca tgctccaccg cttgtgcggg cccccgtcaa 480
ttcctttgag tttcagtctt gcgaccgtac tccccaggcg gagtgcttaa tgcgttagct 540
gcagcactaa ggggcggaaa ccccctaaca cttagcactc atcgtttacg gcgtggacta 600
ccagggtatc taatcctgtt cgctccccac gctttcgctc ctcagcgtca gttacagacc 660
agagagtcgc cttcgccact ggtgttcctc cacatctcta cgcatttcac cgctacacgt 720
ggaattccac tctcctcttc tgcactcaag ttccccagtt tccaatgacc ctccccggtt 780
gagccggggg ctttcacatc agacttaaga aaccgcctgc gagcccttta cgcccaataa 840
ttccggacaa cgcttgccac ctacgtatta ccgcggctgc tggcacgtag ttagccgtgg 900
ctttctggtt aggtaccgtc aaggtaccgc cctattcgaa cggtacttgt tcttccctaa 960
caacagagct ttacgatccg aaaaccttca tcactcacgc ggcgttgctc cgtcagactt 1020
tcgtccattg cggaagattc cctactgctg cctcccgtag gagtctgggc cgtgtctcag 1080
tcccagtgtg gccgatcacc ctctcaggtc ggctacgcat cgttgccttg gtgagccgtt 1140
acctcaccaa ctagctaatg cgccgcgggt ccatctgtaa gtggtagccg aagccacctt 1200
ttatgtttga accatgcggt tcaaacaacc atccggtatt agccccggtt tcccggagtt 1260
atcccagtct tacaggcagg ttacccacgt gt 1292
<210>2
<211>20
<212> DNA
<213>人工序列
<400>2
caggctcaca ctttgtcttg 20
<210>3
<211>20
<212> DNA
<213>人工序列
<400>3
tgaacacagt cctgggttag 20

Claims (6)

1.一种高效降解油脂的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述高效降解油脂的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌6-1oil，于2016年12月22日在广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号为GDMCC No.60134。
2.一种餐厨垃圾处理菌剂，其特征在于，所述餐厨垃圾处理菌剂包括权利要求1所述的枯草芽孢杆菌6-1oil。
3.根据权利要求2所述的餐厨垃圾处理菌剂，其特征在于，所述餐厨垃圾处理菌剂还包括凝结芽孢杆菌、酿酒酵母和载体辅料；其中枯草芽孢杆菌6-1oil、凝结芽孢杆菌和酿酒酵母的活菌含量分别为(2～9)×108CFU/g、(1～8)×108CFU/g和(3～9)×107CFU/g。
4.根据权利要求2所述的餐厨垃圾处理菌剂，其特征在于，载体辅料包括以下重量百分比的物料：玉米糠15％～30％、米糠15％～30％、椰糠5％～10％、花生麸30％～50％和红糖8％～15％。
5.权利要求1所述的高效降解油脂的枯草芽孢杆菌的应用，其特征在于，所述高效降解油脂的枯草芽孢杆菌在降解餐厨垃圾、治理土壤油污、生产生物表面活性剂和制备生物清洁剂中的应用。
6.根据权利要求5所述的高效降解油脂的枯草芽孢杆菌的应用，其特征在于，在降解餐厨垃圾时，餐厨垃圾处理菌剂中的高效降解油脂的枯草芽孢杆菌含量为(2～9)×108CFU/g；在治理土壤油污时，采用的高效降解油脂的枯草芽孢杆菌的含量不低于108CFU/mL；在生产生物表面活性剂和制备生物清洁剂时，采用的高效降解油脂的枯草芽孢杆菌的含量不低于109CFU/mL。
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