CN106928252A - 一种抑制rock的化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种抑制rock的化合物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了式Ⅰ所示的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其晶型、或其溶剂合物、或其同位素体。本发明还提供了所述化合物的制备方法及其在制备抑制ROCK的药物中的应用。

Description

一种抑制ROCK的化合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种抑制ROCK的化合物及其制备方法与应用。
背景技术
Rho属于小分子单聚体GTPase超家族，是Ras超家族的哺乳动物基因同系物，通过其下游最主要的效应分子Rho激酶(Rho-associated coiled-coil containing proteinkinase，ROCK)，来调节细胞肌动蛋白骨架的重组，从而广泛参与细胞有丝分裂、细胞骨架调整、平滑肌细胞收缩、神经再生、肿瘤细胞浸润、细胞凋亡的调节等一系列生物学过程。Rho/ROCK激活后可以作用于多种底物，从而产生生物学过程。最主要的两种底物是肌球蛋白轻链(MLC)和肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)，MLC的磷酸化水平是决定平滑肌收缩程度的一个重要因素。肌球蛋白轻链激酶(MLCK)磷酸化MLC的Ser-19位点，导致平滑肌收缩；MLCP的抑制可以使MLC的磷酸化和平滑肌的收缩进一步增强。ROCK被激活以后，本身可以将MLC磷酸化而发生肌丝收缩作用；同时也能将MLCP磷酸化，使MLCP失活，导致细胞胞浆内MLC磷酸化程度增高，间接促进肌丝收缩。
青光眼及眼部高压在我国是第二大眼科疾病，我国40岁以上人口中青光眼患者高达520万，双眼盲的患者已近100万。青光眼是指眼内压间断或持续升高的一种眼病，持续的高眼压可以给眼球各部分组织和视功能带来损害，如不及时治疗，视野可以全部丧失而至失明。Rho/ROCK信号通路通过抑制MLC、MLCP的磷酸化水平，进而舒张眼部的小梁组织，减小房水流出通道的阻力，促进房水的流出，从而达到降低眼压的疗效；同时对ROCK2的抑制可以促进神经节细胞轴突的再生，增加视网膜神经节细胞的存活，显示出对视网膜神经保护的作用。而青光眼患者致盲最主要的原因就是由于长期眼部房水流出受阻，眼压过高导致视网膜受损。ROCK2的抑制剂在这两个方面都能起到很好疗效，为抗青光眼的研究开辟了新的机制。
在作为抗青光眼及眼部高压的新靶点的同时，ROCK抑制剂在抗肿瘤，心血管疾病以及炎症等疾病领域也有重要进展，多个化合物处于药物发现或者已进入临床阶段。对ROCK靶点特异性抑制剂的相关研究将具有很好的药物应用前景和社会价值。
目前已经研究开发的ROCK抑制剂可分为五大类：(1)异喹啉类：此类化合物结构特点是具有一个异喹啉结构和哌嗪环，两者通过磺酰基相连。代表物有法苏地尔(Uehata M,Ishizaki T,Satoh H,et al.Calcium sensitization of smooth muscle mediated by aRho-associated protein kinase in hypertension[J].Nature,1997,389:990-994)、H-1152P(Tamura M,Nakao H,Yoshizaki H,et al.Development of specific Rho-kinaseinhibitors and their clinical application[J].Biochim Biophys Acta,2005,1754:245-252)；(2)4-氨基吡啶类：此类化合物结构除4-氨基吡啶母核外，在分子的中心位置还含有一个环己烷或苯环结构，在环己烷的4位具有侧链结构。代表物有Y-30141(Takami A,Iwakubo M,Okada Y,et al.Design and synthesis of Rho kinase inhibitors[J].Bioorg Med Chem,2004,12:2115-2137)；(3)吲唑类：此类化合物将5-氨基或5-烷氧基-1H吲唑作为骨架；(4)酰胺和脲类：此类化合物具有一个邻苯二甲酰亚胺和一个脲基构成的绞和结构。(5)其它类：其它不包含上述结构的ROCK抑制剂，代表物有Rockout(Yarrow JC,Totsukawa G,Charras GT,et al.Screening for cell migration inhibitors viaautomated microscopy reveals a Rho-kinase inhibitor[J].Chem Biol,2005,12:385-395)。
目前已上市的ROCK抑制剂药物有Asahi Kasei公司的Eril(适用于脑血管痉挛的治疗)和Kowa公司的Glanatec(适用于高眼压症和青光眼的治疗)。其中Glanatec仅在日本上市销售。因此进行开发作用于ROCK的靶向小分子药物研究，得到活性更好、选择性更高、更低毒性和副作用、更经济的抗青光眼药物，具有十分重要的社会和经济意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新结构的具有药用价值的式Ⅰ所示的化合物及其制备方法与应用，以及包含该化合物的药物组合物，以便制备预防和/或治疗与ROCK活性异常相关的疾病的药物，为患者提供更多、更好的药物选择。
本发明提供了式Ⅰ所示的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其晶型、或其溶剂合物、或其同位素体：
其中，
Y为S、O或NR12；
X1、X2、X3分别或同时为CR1或N；
每个R1独立选自H、卤素、C1～C6烷基或C1～C6烷氧基；
R4、R5、R6、R7、R12分别或同时为H、卤素、C1～C6烷基或C1～C6烷氧基；
R8、R9分别或同时为H、C1～C6烷基、取代的C1～C6烷基、C3～C6环烷基、取代的C3～C6环烷基、3元～6元杂环基、取代的3元～6元杂环基、C5～C10芳基、取代的C5～C10芳基、5元～10元杂芳基或取代的5元～10元杂芳基；或者，R8与R9相连构成C3～C6环烷基、取代的C3～C6环烷基、3元～6元杂环基或取代的3元～6元杂环基；
R10、R11分别或同时为H、C1～C6烷基、取代的C1～C6烷基、C3～C6环烷基、取代的C3～C6环烷基、3元～6元杂环基、取代的C3～C6杂环基、C5～C10芳基、取代的C5～C10芳基、5元～10元杂芳基或取代的5元～10元杂芳基；或者，R10与R11相连构成3元～6元杂环基或取代的3元～6元杂环基。
进一步地，所述化合物结构如式Ⅰa所示：
其中，
Y为S或O；
X1、X2中至少有1个为N。
进一步地，R8与R9相连构成C3～C6环烷基、卤素取代或C1～C6烷基取代的C3～C6环烷基；或者，R8、R9独立选自H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基取代或芳基取代或杂芳基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、卤素取代或C1～C6烷基取代的C3～C6环烷基、4元杂环基、苯基、取代苯基、6元杂芳基或取代的6元杂芳基，其中，R8、R9至少1个为H。
进一步地，所述取代的C3～C6环烷基中取代基为氟或甲基；所述取代的C1～C4烷基中取代基为甲氧基、苯基、取代苯基、吡啶基或取代吡啶基；所述的4元杂环基为氧杂环丁基；所述的6元杂芳基为吡啶基。
进一步地，所述取代苯基、取代的6元杂芳基、取代吡啶基中，取代基独立选自卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基；优选为氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
进一步地，所述化合物结构如式Ⅱ所示：
进一步地，R10、R11分别或同时为H或C1～C4烷基。
进一步地，所述的化合物为：
进一步地，所述化合物如式Ⅱa所示：
a为0～6的整数；
R1a、R2a、R3a、R4a、R5a分别或同时为H、羟基、卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基。
进一步地，a为0、1或2；R1a、R2a、R3a、R4a、R5a分别或同时为H、羟基、氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
进一步地，式Ⅱa所示的化合物为：
进一步地，所述的化合物如式Ⅱb所示：
b为0～6的整数；
R1b、R2b、R3b、R4b、R5b、R6b、R7b分别或同时为H、羟基、卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基。
进一步地，b为0、1或2；R1b、R2b、R3b、R4b、R5b、R6b、R7b分别或同时为H、氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
进一步地，式Ⅱb所示的化合物为：
进一步地，所述的化合物如式Ⅱc所示：
c为0～6的整数；
Xc、Yc、Zc独立选自CR3c或N，其中至少1个为N；
R1c、R2c、每个R3c独立选自H、羟基、卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基。
进一步地，c为0、1或2；Xc、Yc中仅1个为N，Zc为CR3c；R1c、R2c、每个R3c分
别或同时为H、氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
进一步地，式Ⅱc所示的化合物为：
进一步地，所述的化合物如式Ⅱd所示：
d为1～6的整数；
R1d、R2d分别或同时为H、羟基、卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基。
进一步地，d为1或2；R1d、R2d分别或同时为H或C1～C4烷基。
进一步地，式Ⅱd所示的化合物为：
进一步地，R10为H，R11为C3～C6环烷基或取代的C3～C6环烷基。
进一步地，R11为C4～C6环烷基或取代的C4～C6环烷基；其中，所述的取代基为氟、甲基或乙基。
进一步地，所述的化合物为：
进一步地，R10为H，R11为3元～6元杂环基或取代的3元～6元杂环基。
进一步地，R11为4元～6元杂环基或取代的4元～6元杂环基；其中，所述的杂环基中仅有1个杂原子，所述杂原子为N或O；所述的取代基为甲基或乙基。
进一步地，所述的化合物为：
进一步地，所述的化合物如式Ⅱg所示：
Xg、Yg独立选自CR3g或N，其中至少1个为N；
R1g、R2g、R3g独立选自H、羟基、卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基。
进一步地，Xg为N，Yg为CR3g或N；R1g、R2g、R3g分别或同时为H、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
进一步地，式Ⅱg所示的化合物为：
进一步地，所述的化合物如式Ⅱh所示：
R1h、R2h、R3h、R4h、R5h、R6h分别或同时为H、羟基、卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基；优选为H、氟、氯、甲基或三氟甲基。
进一步地，式Ⅱh所示的化合物为：
进一步地，R10与R11相连构成6元杂环基或C1～C6烷基取代的6元杂环基。
进一步地，所述的杂环基中至多有2个杂原子，所述杂原子为N或O；所述取代的6元杂环基中取代基为甲基或三氟甲基。
进一步地，所述的化合物为：
本发明提供了一种所述化合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤a：
化合物SM-1a与化合物SM-2a，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在卤烃类溶剂中反应，得化合物IM-1a；其中，T1a为叔丁氧羰基、苄氧羰基或芴甲氧羰基；
步骤b：
化合物IM-1a与路易斯酸或路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-2a；
步骤c：
化合物IM-2a与化合物SM-3a，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-3a；其中，T2a为叔丁氧羰基、苄氧羰基或芴甲氧羰基；
步骤d：
化合物IM-3a与路易斯酸或路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-4a；
步骤e：
化合物IM-4a与化合物SM-4a，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，即得。
其中，步骤a于10℃～40℃反应1h～12h；
所述化合物SM-1a与化合物SM-2a的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物SM-1a与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物SM-1a与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物SM-1a与卤烃类溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上；
步骤b于10℃～40℃反应0.5h～12h；
所述化合物IM-1a与路易斯酸的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-1a与路易斯碱的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-1a与有机溶剂的重量体积比为1：20～100g/ml；
所述所述路易斯酸选自三氟乙酸、盐酸或氢溴酸；所述路易斯碱选自哌啶、吗啉或哌嗪；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂、酸类溶剂或两者的混合溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，酸类溶剂选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸中的任意一种或两种以上；
步骤c于10℃～40℃反应1h～12h；
所述化合物IM-2a与化合物SM-3a的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物IM-2a与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物IM-2a与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物IM-2a与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上；
步骤d于10℃～40℃反应0.5h～12h；
所述化合物IM-3a与路易斯酸的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-3a与路易斯碱的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-3a与有机溶剂的重量体积比为1：20～100g/ml；
所述所述路易斯酸选自三氟乙酸、盐酸或氢溴酸；所述路易斯碱选自哌啶、吗啉或哌嗪；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂、酸类溶剂或两者的混合溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，酸类溶剂选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸中的任意一种或两种以上；
步骤e于10℃～40℃反应1h～12h；
所述化合物IM-4a与化合物SM-4a的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物IM-4a与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物IM-4a与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物IM-4a与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上。
进一步地，步骤a所述化合物SM-1a是由下述方法制备得到：
步骤a1：
将三氯氧磷与N,N-二甲基甲酰胺混合，加入二氯甲烷，再加入化合物A反应，得到化合物B；其中，T1a为叔丁氧羰基、苄氧羰基或芴甲氧羰基；
步骤a2：
化合物B、化合物C和路易斯碱，在卤烃类溶剂中反应，得到化合物D；其中，T11a为C1～C6烷基；
步骤a3：
化合物D与路易斯碱在醇类溶剂和/或水中反应，即得化合物SM-1a。
其中，步骤a1于0℃～5℃将三氯氧磷与N,N-二甲基甲酰胺混合，加入二氯甲烷，室温下搅拌2小时～5小时，再加入化合物A的二氯甲烷溶液，室温下反应2小时～5小时，得到化合物B；
所述三氯氧磷与N,N-二甲基甲酰胺的摩尔比为1：0.5～2；所述三氯氧磷与二氯甲烷A的重量体积比为1：1～10g/ml；所述三氯氧磷与化合物A的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物A与二氯甲烷B的重量体积比为1：1～10g/ml；
步骤a2于50℃～90℃反应2小时～24小时，得到化合物D；
所述化合物B与化合物C的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物B与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物B与卤烃类溶剂的重量体积比为1：1～10g/ml；
所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上；
步骤a3于10℃～40℃反应1h～12h，即得化合物SM-1a；
所述化合物D与路易斯碱的摩尔比为1：5～15；所述化合物D与混合溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；所述的混合溶剂中，醇类溶剂与水的体积比为1：0.5～2；
所述路易斯碱选自氢氧化钾、氢氧化钠中的任意一种或两种；所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇中的任意一种或两种以上。
本发明提供了一种所述化合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤①：
化合物SM-1b与化合物SM-2b，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-1b；其中，T1b为叔丁氧羰基、苄氧羰基或芴甲氧羰基；T11b为C1～C6烷基；
步骤②：
化合物IM-1b和路易斯碱在醇类溶剂和/或水中反应，得化合物IM-2b；
步骤③：
化合物IM-2b与化合物SM-3b，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-3b；
步骤④：
化合物IM-3b与路易斯酸或路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-4b；
步骤⑤：
化合物SM-4b与化合物IM-4b，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，即得。
其中，步骤①于10℃～40℃反应1h～12h，得化合物IM-1b；
所述化合物化合物SM-1b与化合物SM-2b的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物SM-1b与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物SM-1b与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物SM-1b与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上；
步骤②于10℃～40℃反应1h～12h，得化合物IM-2b；
所述化合物IM-1b与路易斯碱的摩尔比为1：5～15；所述化合物IM-1b与混合溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；所述的混合溶剂中，醇类溶剂与水的体积比为1：0.5～2；
所述路易斯碱选自氢氧化钾、氢氧化钠中的任意一种或两种；所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇中的任意一种或两种以上。
步骤③于10℃～40℃反应1h～12h，得化合物IM-3b；
所述化合物化合物IM-2b与化合物SM-3b的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物IM-2b与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物IM-2b与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物IM-2b与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上；
步骤④于10℃～40℃反应0.5h～12h，得化合物IM-4b；
所述化合物IM-3b与路易斯酸的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-3b与路易斯碱的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-3b与有机溶剂的重量体积比为1：20～100g/ml；
所述所述路易斯酸选自三氟乙酸、盐酸或氢溴酸；所述路易斯碱选自哌啶、吗啉或哌嗪；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂、酸类溶剂或两者的混合溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，酸类溶剂选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸中的任意一种或两种以上；
步骤⑤于10℃～40℃反应1h～12h，即得；
所述化合物SM-4b与化合物IM-4b的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物SM-4b与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物SM-4b与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物SM-4b与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上。
本发明提供了一种所述化合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤i：
化合物SM-1c与化合物SM-2c，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-1c；其中，T11c为C1～C6烷基；
步骤ii：
化合物IM-1c与路易斯碱在醇类溶剂和/或水中反应，得化合物IM-2c；
步骤iii：
化合物SM-3c与化合物SM-4c，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，，得化合物IM-3c；其中，T1c为叔丁氧羰基、苄氧羰基或芴甲氧羰基；
步骤iv：
化合物IM-3c与路易斯酸或路易斯碱在有机溶剂中反应，得化合物IM-4c；
步骤v：
化合物IM-2c与化合物IM-4c，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，即得。
其中，步骤i于10℃～40℃反应1h～12h，得化合物IM-1c；
所述化合物化合物SM-1c与化合物SM-2c的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物SM-1c与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物SM-1c与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物SM-1c与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上；
步骤ii于10℃～40℃反应1h～12h，得化合物IM-2c；
所述化合物IM-1c与路易斯碱的摩尔比为1：1～10；所述化合物IM-1c与混合溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；所述的混合溶剂中，醇类溶剂与水的体积比为1：0.5～2；
所述路易斯碱选自氢氧化钾、氢氧化钠中的任意一种或两种；所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇中的任意一种或两种以上；
步骤iii于10℃～40℃反应1h～12h，得化合物IM-3c；
所述化合物化合物SM-3c与化合物SM-4c的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物SM-3c与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物SM-3c与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物SM-3c与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上；
步骤iv于10℃～40℃反应0.5h～12h，得化合物IM-4c；
所述化合物IM-3c与路易斯酸的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-3c与路易斯碱的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-3c与有机溶剂的重量体积比为1：20～100g/ml；
所述所述路易斯酸选自三氟乙酸、盐酸或氢溴酸；所述路易斯碱选自哌啶、吗啉或哌嗪；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂、酸类溶剂或两者的混合溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，酸类溶剂选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸中的任意一种或两种以上；
步骤v于10℃～40℃反应1h～12h，即得；
所述化合物IM-2c与化合物IM-4c的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物IM-2c与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物IM-2c与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物IM-2c与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上。
本发明提供了所述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其晶型、或其溶剂合物、或其同位素体在制备ROCK抑制剂类药物中的应用。
进一步地，所述的药物为ROCK1和/或ROCK2抑制剂。
进一步地，所述的药物为治疗和/或预防心血管疾病、高眼压症、青光眼或者癌症的药物。
本发明提供了一种药物组合物，它是以所述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其晶型、或其溶剂合物、或其同位素体为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备得到的制剂。
进一步地，所述的制剂为滴眼剂、口服给药制剂、舌下给药制剂、颊给药制剂、透皮吸收制剂或注射制剂。
本发明中提供的化合物和衍生物可以根据IUPAC(国际纯粹与应用化学联合会)或CAS(化学文摘服务社，Columbus，OH)命名系统命名。
关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。
“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。
碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示，例如，前缀Ca～Cb烷基表明任何含“a”至“b”个碳原子的烷基。因此，例如，C1～C4烷基是指包含1～4个碳原子的烷基；取代的C1～C6烷基是指烷基中包含1～6个碳原子，不将取代基的碳原子数计算在内。
术语“杂环基”是指具有环杂原子的非芳香族环系的基团，可以是饱和的也可以是部分不饱和的。
术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。
术语“盐”和“可药用的盐”是指上述化合物或其立体异构体，与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物，或其立体异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。
术语“立体异构体”包括立体中心(例如带有4个不同取代基的碳)、轴不对称例如有关键、平面不对称及其混合物的存在。
本发明的某些实施方式中，本发明包括了同位素标记的化合物，所述同位素标记化合物是指与本文中所列化合物相同，但是其中的一个或多个原子被另一个原子取代，该原子的原子质量或质量数不同于自然界中常见的原子质量或质量数。可以引入式(I)化合物中的同位素包括氢、碳、氮、氧、硫，即2H,3H、13C、14C、15N、17O、18O、35S。含有上述同位素和/或其它原子同位素的式(I)的化合物及其立体异构体，以及该化合物、立体异构体的可药用的盐均应包含在本发明范围之内。
术语“同位素体”是指其中天然同位素丰度的至少一个原子被不同于天然丰度的同位素富集形式置换的化合物的任何形式。同位素体可以氢置换为氘和/或氚为基础。同样地，天然丰度的12C可被13C或14C置换、天然丰度的14N可被15N置换，天然丰度的16O被17O或18O置换等或任何组合。同位素体可包括化合物内的任何数目的原子被同位素富集形式置换。可实现同位素富集到任何程度。
本发明中的关键中间体和化合物进行分离和纯化，所使用的方式是有机化学中常用的分离和纯化方法且所述方法的实例包括过滤、萃取、干燥、旋干和各种类型的色谱。可选择地，可以使中间体不经纯化即进行下一步反应。
在某些实施方式中，本发明的一种或多种化合物可以彼此联合使用。也可选择将本发明的化合物与任何其它的活性试剂结合使用，用于制备调控细胞功能或治疗疾病的药物或药物组合物。如果使用的是一组化合物，则可将这些化合物同时、分别或有序地对受试对象进行给药。
本发明提供了一类结构新颖的化合物。活性检测结果表明，本发明化合物可显著抑制ROCK的活性，为临床治疗和/或预防心血管疾病、高眼压症、青光眼或者癌症提供了一种新的用药选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
实施例1、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
1、1-苄氧羰基-4-氯-5-甲酰-3,6-二氢-2H-哌啶的制备
在0℃下，将三氯氧磷(52.6g 343mmol)缓慢滴加入搅拌的干燥N N-二甲基甲酰胺(31.3g,429mmol,33.3mL)中,滴加完待混合液完全固化，加入二氯甲烷(100ml)，升至室温，继续搅拌两个小时,然后将温度降至0℃。将N-苄氧羰基-4-哌啶酮(50.0g,214mmol，德默试剂)溶于二氯甲烷(100ml)后缓慢滴入反应液中，升至室温继续搅拌反应2小时后，搅拌下将反应混合液倒入加冰的醋酸钠水溶液中，搅拌半个小时，用二氯甲烷(100ml×3)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得粗品1-苄氧羰基-4-氯-5-甲酰-3,6-二氢-2H-哌啶(60.0g，产率100％)。
MS(ESI)m/z 280(M+1)+。
2、5-苄基2-乙基6,7-二氢噻吩[3,2-c]并吡啶-2,5(4H)-二羧酸的制备
在室温下,将1-苄氧羰基-4-氯-5-甲酰-3,6-二氢-2H-哌啶(60.0g,214mmol)和巯基乙酸乙酯(41.2g,343mmol，德默试剂),溶入二氯甲烷(200mL)中，搅拌下，缓慢滴加三乙胺(43.3g,429mmol,59.3mL)，滴加后温度升至60℃回流过夜后，加入水，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得粗品，层析柱纯化得5-苄基2-乙基6,7-二氢噻吩[3,2-c]并吡啶-2,5(4H)-二羧酸(18.0g,44.3mmol,产率21％)。
MS(ESI)m/z 346(M+1)+。
3、5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸
在室温下,将5-苄基2-乙基6,7-二氢噻吩[3,2-c]并吡啶-2,5(4H)-二羧酸(2.00g,5.79mmol)溶解在甲醇(30.0mL)和氢氧化钾水溶液(30.0mL,2M)中，然后搅拌2小时后，减压蒸除甲醇，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取出杂质，调节pH至5～6，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，萃取液用饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，滤出萃取液，减压蒸除溶剂得5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸(1.30g,4.10mmol,产率71％)。
MS(ESI)m/z 318(M+1)+。
4、2-(苯基氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-羧酸苄酯的制备
将5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸(500mg,1.58mmol)和N,N-二异丙基乙胺(814mg,6.31mmol,1.14mL)溶于二氯甲烷(10.0mL)中，然后加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(822mg,1.58mmol)，室温下搅拌15分钟，加入苯胺(147mg,1.58mmol)继续搅拌反应1～2小时后直接旋干得粗品，柱层析纯化得2-(苯基氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5-(4H)-羧酸苄酯(460mg,1.17mmol,产率74％)。
MS(ESI)m/z 393(M+1)+。
5、N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
将2-(苯基氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5-(4H)-羧酸苄酯(460mg,1.17mmol,)溶于含30％溴化氢的乙酸溶液(10.0mL)中，室温搅拌1小时后直接旋干并用乙酸乙酯洗涤得白色固体N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(302mg,1.17mmol,产率100％)。
MS(ESI)m/z 259(M+1)+。
6、(R)-(1-氧代-1-(2-(苯基氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基]丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(267mg,1.32mmol，江苏鳄鱼试剂化工有限公司)和N,N-二异丙基乙胺(680mg,5.27mmol,919μL)溶于二氯甲烷(10.0mL)中，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(502mg,1.32mmol)，室温下搅拌15分钟，加入N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(302mg,1.17mmol)继续搅拌反应1～2小时后直接旋干得粗品，柱层析纯化得(R)-(1-氧代-1-(2-(苯基氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基]丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg,677μmol，产率58％)。
MS(ESI)m/z 444(M+1)+。
7、(R)-5-(2-氨基丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
将(R)-(1-氧代-1-(2-(苯基氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基]丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg,677μmol)溶于三氟乙酸(2.00mL)和二氯甲烷(10.0mL)中，室温搅拌1小时后直接旋干得(R)-5-(2-氨基丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(209mg,609μmol,产率90％)。
MS(ESI)m/z 344(M+1)+。
8、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
将(R)-5-(2-氨基丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(209mg,609μmol),1H-吲唑-5-羧酸(142mg,874μmol)和N,N-二异丙基乙胺(452mg,3.50mmol,610μL)溶于DMF(10.0mL)中,然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(332mg,874μmol)，室温下搅拌反应1～2小时后直接旋干得粗品,柱层析及制备高效液相纯化得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(76.5mg,157μmol,产率26％)。
MS(ESI)m/z 488(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.28(m,1H),10.15(s,1H),8.65-8.63(m,1H),,8.42-8.37(d,1H),8.21-8.18(m,1H),7.91-7.89(m,1H),7.80(s,1H),7.72-7.70(m,2H),7.58-7.55(m,1H),7.36-7.11(m,2H),7.11-7.07(m,1H)4.97-4.95(m,1H),4.80-4.76(m,1.4H),4.49-4.45(m,0.6H),3.85-3.84(m,2H),2.90-2.85(m,2H),1.80-1.76(m,2H),0.99-0.92(m,3H)。
实施例2、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-氟吡啶-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2-氟吡啶-4-胺(江苏鳄鱼试剂化工有限公司)、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸(上海德默医药有限公司)为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-氟吡啶-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率1.7％)。
MS(ESI)m/z＝507(M+1)+。
1HNMR(400MHz):δ＝13.00(1H,s),10.83(1H,s),8.60-8.62(1H,m),8.42-8.34(1.3H,m),8.21-8.13(1.9H,m),7.90-7.83(2H,m),7.60-7.51(3H,m),4.96-4.95(1H,m),4.82-4.74(1.4H,m),4.50-4.45(0.6H,m),4.00-3.86(0.7H,m),3.85-3.82(1.3H,m),2.98-2.87(2H,m),1.82-1.74(2H,m),0.98-0.90(3H,m)。
实施例3、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-苯乙基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、苯乙胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-苯乙基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率1.6％)。
MS(ESI)m/z＝516(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.30(s,1H),8.64-8.62(m,1H),8.50-8.47(m,1H),8.42-8.8.35(m,1H),8.21-8.19(d,1H),7.91-7.89(m,1H),7.57-7.56(m,1H),7.47-7.46(d,1H),7.31-7.27(m,3H),7.23-7.20(m,3H),4.94(m,1H),4.73-4.69(m,1.4H),4.43(m,0.6H),3.83.-3.81(m,2H),3.45-3.40(m,2H),2.91-2.77(m,4H),1.79-1.35(m,2H),0.98-0.90(m,3H)。
实施例4、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(四氢呋喃-3-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基))-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、四氢呋喃-3-胺(上海韶远化学科技有限公司)、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(四氢呋喃-3-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率5.2％)。
MS(ESI)m/z＝482(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.28(m,1H),8.7-8.30(m,3H),,8.45(m,1H),7.54-7.75(m,1H),7.50-7.52(m,2H)5.6-4.25(m,4H),4.0-3.8(m,5H),3.75(m,2H),3.0-2.75(m,2H),2.3-2.1(m,1H),1.75-1.65(m,3H),0.98-0.90(m,3H)。
实施例5、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、1-甲基-1H-吡唑-3-胺(上海德默医药有限公司)、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率2.7％)。
MS(ESI)m/z＝492(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.28(m,1H),10.85-10.83(m,1H),8.65-8.56(m,1H),8.41-8.36(m,1H),8.20-8.18(m,1H),7.90-7.84(m,2H),7.59-7.53(m,2H),6.50-6.49(m,1H),4.95-4.92(m,1H),4.75-4.69(m,1H),4.44-4.40(m,1H),4.00-3.97(m,1H),3.82-3.80(m,1H),3.76(s,3H),2.92-2.82(m,2H),1.84-1.70(m,2H),0.98-0.91(m,3H)。
实施例6、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(1-甲基哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、1-甲基哌啶-4-胺(上海韶远化学科技有限公司)、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(1-甲基哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率12％)。
MS(ESI)m/z＝509(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.30(s,1H),8.63-8.57(m,2H),8.41-8.33(m,1H),8.29(s,1H),8.20-8.18(m,2H),7.89-7.81(m,1H),7.57-7.53(m,2H),4.96-4.87(m,1H),4.72-4.63(m,1H),4.42-4.38(m,1H),3.99-3.95(m,1H),3.81-3.78(m,2H),2.89-2.79(m,4H),2.20(s,3H),2.08-1.98(m,2H),1.81-1.73(m,2H),1.57-1.55(d,j＝8Hz,2H),0.97-0.89(m,3H)。
实施例7、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-氟苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2-氟苯胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-氟苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率4.2％)。
MS(ESI)m/z＝506(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO)δ＝13.30(s,1H),10.06(s,1H),8.66(d,J＝0.8Hz,0.6H),8.59(d,J＝0.8Hz,0.4H),8.43(s,0.6H),8.37(s,0.4H),8.22(s,0.6H),8.20(s,0.4H),7.86–7.92(m,1H),7.79(s,1H),7.53-7.59(m,2H),7.19–7.32(m,3H),4.92–5.00(m,1H),4.72–4.84(m,1.32H),4.47(d,J＝1.6Hz,0.66H),3.98–4.04(m,0.65H),3.81–3.86(m,1.39H),2.86-3.02(m,2H),1.69–1.89(m,2H),0.93–1.00(m,3H)。
实施例8、5-(1-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)-环丙烷)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、1-((叔丁氧基羰基)氨基)环丙甲酸(江苏鳄鱼试剂化工有限公司)和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得5-(1-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)-环丙烷)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率5.8％)。
MS(ESI)m/z＝424(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.35-13.33(t,j＝3.8Hz,1H),9.09(s,,1H),8.33-8.31(t,j＝4.8Hz,2H),8.21(s,1H),7.81-7.78(d,j＝8.8Hz,1H),7.58-7.55(dj＝8.4Hz,1H),7.41(s,1H),4.48-4.46(t,j＝4.4Hz,2H),3.92-3.88(m,2H),2.71-2.70(d,j＝4.4Hz,5H),1.29(S,2H),1.06-1.03(m,2H)。
实施例9、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-苄基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、苄胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-苄基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率5.1％)。
MS(ESI)m/z＝502(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.34(S,1H),9.09(s,1H),8.98-8.95(t,j＝6Hz,2H),8.64-8.62(m,1H),8.41-8.34(d,1H),8.20-8.18(d,j＝8.8Hz,1H),7.90-7.87(m,1H),7.57-7.55(m,2H),7.34-7.23(m,5H),4.95-4.93(m,1H),4.73-4.69(m,1H),4.42-4.39(m,3H),3.82-3.79(m,2H),2.92-2.80(m,2H),1.78-1.74(m,2H),0.97-0.89(m,3H)。
实施例10、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N，N-二甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、二甲胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N，N-二甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率7.6％)。
MS(ESI)m/z＝440(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.34(S,1H),8.64-8.52(m,1H),8.41-8.34(m,1H),8.20-8.19(m,1H),7.90-7.82(m,1H),7.57-7.53(t,j＝8.4Hz,1H),7.31-7.25(d,j＝20.8Hz,1H),,4.95-4.93(m,1H),4.74-4.68(m,1H),4.44-4.39(d,1H),3.99-3.81(m,2H),3.06-2.80(m,8H),1.81-1.72(m,2H),0.97-0.89(m,3H)。
实施例11、(R)-5-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率16％)。
MS(ESI)m/z＝426(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝11.98(S,1H),8.75-8.60(m,2H),.8.50-8.35(m,2H),7.56-7.44(m,2H),6.56-6.53(m,1H),4.95-4.93(m,1H),4.74-4.68(m,1H),4.44-4.39(d,1H),3.99-3.82(m,2H),2.90-2.79(m,2H),1.81-2.72(m,2H),0.97-0.90(m,3H)。
实施例12、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(3-氟苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、3-氟苄胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(3-氟苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率17％)。
MS(ESI)m/z＝520(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.34(S,1H),9.01-8.99(t,j＝6Hz,1H),8.64-8.62(m,1H),8.41-8.35(d,1H),8.20-8.18(m,1H),7.90-7.87(m,1H),7.57-7.55(m,1H),7.39-7.33(m,1H),7.13-7.07(m,3H),4.95-4.93(m,1H),4.74-4.68(m,1H),4.44-4.39(m,3H),3.82-3.81(m,2H)2.91-2.79(m,2H),1.76-1.74(m,2H),0.97-0.90(m,3H)。
实施例13、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(3-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、3-甲基苄胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(3-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率6.0％)。
MS(ESI)m/z＝516(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.30(s,1H),8.93(s,1H),8.64-8.62(m,1H),,8.44-8.41(m,2H),8.21-8.18(d,1H),7.91-7.89(m,1H),7.57-7.56(m,2H),7.20-7.18(m,1H),7.09-7.05(m,3H),4.90(m,1H),4.75-4.38(m,4H),3.83-3.81(m,2H),2.91-2.81(m,2H),2.28(s,3H),1.77-1.75(m,2H),0.99-0.92(m,3H)。
实施例14、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2,3-二氢-1H-茚-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2,3-二氢-1H-茚-4-胺(江苏鳄鱼试剂化工有限公司)、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(3-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率5.8％)。
MS(ESI)m/z＝528(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.28(s,1H),9.82(s,1H),8.42(m,1H),8.35(m,1H),8.21(m,1H),7.74-7.73(d,1H),7.58-7.56(m,2H),7.15-7.08(m,3H),5.00-4.50(m,3H),4.00-3.75(m,2H),2.92-2.77(m,6H),2.0-1.97(m,2H),1.75(m,2H),0.99-0.94(m,3H)。
实施例15、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2,3-二甲基苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2,3-二甲基苯胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2,3-二甲基苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率5.1％)。
MS(ESI)m/z＝516(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.30(m,1H),9.86(s,1H),8.65-8.63(m,1H),,8.45-8.35(m,1H),8.21-8.18(d,1H),7.91-7.89(m,1H),7.57-7.56(m,1H),7.09-7.06(m,3H),4.99-4.49(m,4H),3.86-3.34(m,2H),2.95-2.84(m,2H),2.27(s,3H),2.08-2.04(d,3H),1.8-1.79(m,2H),0.99-0.92(m,3H)。
实施例16、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-氟苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2-氟苄胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-氟苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率9.3％)。
MS(ESI)m/z＝520(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.34(S,1H),8.95-8.92(t,j＝6Hz,1H),8.64-8.62(m,1H),8.41-8.35(d,1H),8.20-8.18(m,1H),7.90-7.87(m,1H),7.57-7.55(m,1H),7.39-7.33(m,1H),7.13-7.07(m,3H),4.95-4.93(m,1H),4.74-4.68(m,1H),4.44-4.39(m,3H),3.82-3.81(m,2H)2.91-2.79(m,2H),1.76-1.74(m,2H),0.97-0.90(m,3H)。
实施例17、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-氟-3-(三氟甲基)苄基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2-氟-3-三氟甲基苄胺(上海德默医药有限公司)、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-氟-3-(三氟甲基)苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率5.0％)。
MS(ESI)m/z＝588(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.26(m,1H),9.05-9.02(t,j＝5.6Hz,1H),8.65-8.63(m,1H),,8.42-8.35(d,1H),8.21-8.18(m,1H),7.91-7.89(m,1H),7.69-7.67(m,2H),759-7.67(m,2H),7.59-7.56(m,2H),7.41-7.37(m,1H),4.75-4.44(m,4H),3.83-3.30(m,2H),2.81-2.50(m,2H),1.77-1.75(m,2H),0.98-0.90(m,3H)。
实施例18、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(3-甲氧基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、3-甲氧基苄胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(3-甲氧基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.8％)。
MS(ESI)m/z＝532(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.30(s,1H),8.93(s,1H),8.64-8.62(m,1H),,8.44-8.41(m,2H),8.21-8.18(d,1H),7.91-7.89(m,1H),7.57-7.56(m,2H),7.20-7.18(m,1H),7.09-7.05(m,3H),4.90(m,1H),4.75-4.38(m,4H),3.83-3.81(m,2H),2.91-2.81(m,2H),2.28(s,3H),1.77-1.75(m,2H),0.99-0.92(m,3H)。
实施例19、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(仲丁基)-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、仲丁胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(仲丁基)-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率14％)。
MS(ESI)m/z＝468(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.30(S,1H),8.41(m,1H),.8.21(m,1H),8.08-8.06(d,1H),7.80(m,1H),7.55(m,2H),3.82-3.81(m,3H),2.51-2.49(m,2H),1.75(m,2H),1.48-1.47(m,2H),1.11-1.08(m,3H),0.98-0.92(m,3H),0.86-0.81(m,3H)。
实施例20、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-氯-5-氟苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、2-氯-5-氟苄胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-氯-5-氟苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率2.9％)。
MS(ESI)m/z＝554(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.31(s,1H),9.01-8.99(m,1H),8.65-8.63(m,1H),8.8.42-8.36(m,1H),8.21-8.19(m,1H),7.91-7.89(m,1H),7.63(s,1H),7.57-7.50(m,2H),7.19-7.11(m,2H),4.76-4.47(m,5H),3.83(m,2H),2.93-2.92(m,2H),1.77-1.76(m,2H),0.98-0.91(m,3H)。
实施例21、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-C]吡啶-2-甲酰胺的制备
1、(R)-5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯的制备
将(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(1.73g,8.50mmol)和N,N-二异丙基乙胺(4.39g,34.0mmol,6.00mL)溶于二氯甲烷(10.0mL)中,然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(3.22g,8.50mmol)),室温下搅拌15分钟,加入4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯(1.79g,8.50mmol)继续搅拌反应1～2小时后直接旋干得粗品,柱层析纯化得(R)-5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯(2.46g,6.21mmol,产率73％)。
MS(ESI)m/z 397(M+1)+。
2、(R)-5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸的制备
将(R)-5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯(2.46g,6.21mmol)溶解在甲醇(30.0mL)和氢氧化钾水溶液(30.0mL,2.0M)中，室温搅拌2小时后，减压蒸除甲醇，用乙酸乙酯(50mLx3)萃取出杂质，调节PH至5～6，用乙酸乙酯(50mLx3)萃取，萃取液用饱和食盐水(50mLx2)洗涤，无水硫酸钠干燥，滤出萃取液，减压蒸馏得(R)-5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸(2.28g,6.20mmol,产率99％)。
MS(ESI)m/z 369(M+1)+。
3、(R)-(1-氧-1-(2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)基)丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将(R)-5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸(600mg,1.63mmol)和N,N-二异丙基乙胺(421mg,3.26mmol,569μL)溶于二氯甲烷(20.0mL)中，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(619mg,1.63mmol)，室温下搅拌15分钟，加入四氢-2H-吡喃-4-胺(165mg,1.63mmol)继续搅拌反应1～2小时后直接旋干得粗品，柱层析纯化得(R)-(1-氧-1-(2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)基)丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(723mg,1.60mmol,产率98％)。
MS(ESI)m/z 452(M+1)+。
4、(R)-5-(2-氨基丁酰基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
将(R)-(1-氧-1-(2-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)基)丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(723mg,1.60mmol)溶于三氟乙酸(2.00mL)和二氯甲烷(10.0mL)中，室温搅拌1小时后直接旋干得(R)-5-(2-氨基丁酰基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(498mg,1.42mmol，产率88％)。
MS(ESI)m/z 352(M+1)+。
5、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-C]吡啶-2-甲酰胺的制备
将(R)-5-(2-氨基丁酰基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(498mg,1.42mmol),1H-吲唑-5-羧酸(230mg,1.42mmol)和N,N-二异丙基乙胺(368mg,2.84mmol,497μL)溶于DMF(10.0mL)中,然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(343mg,1.42mmol)，室温下搅拌反应1～2小时后直接旋干得粗品,柱层析和制备高效液相纯化得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-C]吡啶-2-甲酰胺(119mg,241μmol,产率17％)。
MS(ESI)m/z 496(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.30(s,1H),8.52-8.55(m,1H),,8.34(m,1H),8.50-8.45(m,2H),7.9-7.88(m,1H),7.91-7.89(m,1H),7.57-7.56(m,2H),4.74-4.43(m,3H),3.88-3.80(m,5H),3.38-3.34(m,2H),2.91-2.90(m,2H),1.76-1.51(m,6H),0.92(m,3H)。
实施例22、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-((2-氟吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、(2-氟吡啶-4-基)甲胺(上海泰坦科技股份有限公司)和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-((2-氟吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.5％)。
MS(ESI)m/z＝521(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.28(d,1H),9.11-9.08(m,1H),8.66–8.58(m,1H),8.42-8.34(m,3H),8.21-8.19(m,2H),7.91-7.83(m,1H),7.60-7.53(m,2H),7.26-7.22(m,1H)，7.03(s,1H),4.96-4.91(m,1H),4.76-4.72(m,1.4H),4.50-4.41(m,2.6H),4.01-3.81(m,2H),2.96-2.82(m,2H),1.82-2.72(m,2H),0.98-0.91(m,3H)。
实施例23、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-环己基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、环己胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-环己基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率13％)。
MS(ESI)m/z＝494(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.29(s,1H),8.64-8.66(m,1H),8.59-8.61(d,J＝14.2,1H),8.21-8.24(m,2H),7.83-7.90(m,1H),7.53-7.58(m,2H),4.73-4.95(m,1H),4.42-4.71(m,1.41H),3.83-4.38(m,0.63H),3.66-3.68(m,0.63H),3.66-3.67(m,1.39),3.64-3.66(s,1H),2.89-2.90(d,J＝15.1,2H),1.77-1.81(m,6H),1.73-1.75(s,1H),1.57-1.72(m,4H),1.27-1.29(m,1H),1.22-1.29(m,1H)。
[α]D＝-58°(c＝0.4g/100mL,DMF)
实施例24、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-环丁基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、环丁胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-环丁基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率15％)。
MS(ESI)m/z＝466(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.32(s,1H),8.64-8.35(m,3H),,8.21-8.18(m,1H),7.88(m,1H),7.58-7.54(m,2H),5.0-4.3(m,4H),4.0-3.75(m,2H),2.85-2.75(m,2H),2.05-2.0(m,4H),1.80-1.64(m,4H),0.98-0.90(m,3H)。
实施例25、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、氧杂环丁烷-3-胺(江苏鳄鱼试剂化工有限公司)和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(氧杂环丁烷-3-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率2.2％)。
MS(ESI)m/z＝468(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.27(m,1H),9.04-9.03(m,1H),8.64-8.62(m,1H),8.41-8.33(m,1H),8.21-7.18(m,1H),7.90-7.88(m,1H),7.60-7.56(m,2H)4.95-4.92(m,2H),4.76-4.45(m,6H),3.82-3.81(m,2H),2.82-2.89(m,2H),1.77(m,2H),0.98-0.90(m,3H)。
实施例26、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-环戊基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、环戊胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-环戊基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率14％)。
MS(ESI)m/z＝480(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.29(s,1H),8.64-8.66(m,1H),8.35-8.42(d,J＝7.9,2H),8.19-8.20(m,2H),7.83-7.91(m,1H),7.53-7.58(m,2H),4.68-4.73(s,1H),4.38-4.42(m,1.42H),4.11-4.13(m,0.62H),3.82-4.11(m,1H),3.81-3.82(m,0.65H),3.80-3.81(m,1.4H),2.79-2.90(md,J＝9.8,2H),1.77-1.86(m,6H),1.68-1.77(m,4H),1.50-1.67(m,3H)。
实施例27、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、4-氟苯胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率2.0％)。
MS(ESI)m/z＝506(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.28(s,1H),10.21(s,1H),8.64-8.66(m,1H),8.36-8.42(m,1H),8.21-8.36(m,1H),8.18-8.21(m,1H),7.91-8.18(m,1H),7.89-7.91(m,2H),7.78-7.89(m,1H),7.17-7.56(m,2H),4.76(s,1H),4.49-4.76(m,2H),3.83-3.85(m,2H),1.55-1.67(m,2H),0.91-0.99(m,3H)。
实施例28、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(3-氟苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、3-氟苯胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(3-氟苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.2％)。
MS(ESI)m/z＝506(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.29(s,1H),10.32(s,1H),8.65-8.66(m,1H),8.37-8.42(m,1H),8.29-8.36(m,1H),8.18-8.21(m,1H),7.85-8.08(m,1H),7.91-7.91(m,2H),7.71-7.89(m,1H),7.12-7.56(m,2H),4.76(s,1H),4.49-4.76(m,2H),3.80-3.85(m,2H),1.55-1.67(m,2H),0.93-0.98(m,3H)。
实施例29、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-((5-氟吡啶-3-基)甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、(5-氟吡啶-3-基)甲胺(江苏鳄鱼试剂化工有限公司)和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-((5-氟吡啶-3-基)甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率13％)。
MS(ESI)m/z＝521(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.27(m,1H),9.060-9.03(m,1H),8.64-8.36(m,3H),,8.21-8.19(m,1H),7.9-7.84(m,1H),7.61-7.53(m,3H),4.96-4.95(m,1H),4.94-4.92(m,1.4H)4.49-4.40(m,2.6H),3.97-3.80(m,2H),2.92-2.81(m,2H),1.80-1.73(m,2H),0.99-0.92(m,3H)。
实施例30、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(1-甲基吡咯烷-3-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、1-甲基吡咯烷-3-胺(江苏鳄鱼试剂化工有限公司)和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(1-甲基吡咯烷-3-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率7.3％)。
MS(ESI)m/z＝495(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.27(m,1H),8.65-8.18(m,5H),7.90-7.88(m,1H),,7.6-7.55(m,2H),5.0(m,1H),4.71-4.69(m,1H),4.34-4.33(m,2H),3.96-3.78(m,2H),2.91-2.69(m,1H),2.48(m,2H),2.31(s,3H),2.2(m,1H)1.78-1.72(m,2H),0.99-0.92(m,3H)。
实施例31、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-((2-甲氧基吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-C]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、(2-甲氧基吡啶-4-基)甲胺(江苏鳄鱼试剂化工有限公司)和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-((2-甲氧基吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-C]吡啶-2-甲酰胺(总产率5.9％)。
MS(ESI)m/z＝533(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.30(s,1H),9.03-9.05(m,1H),8.66-9.02(m,1H),8.36-8.42(m,1H),8.19-8.21(m,1H),8.08-8.09(m,1H),7.89-7.91(m,1H),7.54-7.59(m,2H),6.86-6.89(m,1H),6.67(s,1H),4.94-4.96(m,1H),4.38-4.75(m,4H),3.81-3.83(m,5H),2.82-2.93(m,2H),1.74-1.80(m,2H),0.93-0.98(m,3H)。
实施例32、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-二甲胺基乙基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、2-二甲胺乙胺(江苏鳄鱼试剂化工有限公司)和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-二甲胺基乙基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率1.5％)。
MS(ESI)m/z＝483(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.29(s,1H),8.63-8.65(m,1H),8.35-8.41(m,2H),8.19-8.21(m,2H),7.88-7.90(m,1H),7.50-7.58(m,2H),4.69-4.73(m,1H),4.45-4.69(m,2H),3.61-3.90(m,2H),3.40-3.51(m,2H),2.75-2.90(m,2H),2.31-2.41(m,6H),2.21-2.31(m,2H),1.65-1.82(m,2H),0.85-0.95(m,3H)。
实施例33、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(4-羟基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、4-羟基苄胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(4-羟基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率7.7％)。
MS(ESI)m/z＝518(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.28(m,1H),9.27(s,1H),8.65-8.63(m,1H),,8.42-8.37(d,1H),8.21-8.18(m,1H),7.91-7.89(m,1H),7.80(s,1H),7.72-7.70(m,2H),7.58-7.55(m,1H),7.36-7.11(m,2H),7.11-7.07(m,1H)4.97-4.95(m,1H),4.80-4.76(m,1.4H),4.49-4.45(m,0.6H),3.85-3.84(m,2H),2.90-2.85(m,2H),1.80-1.76(m,2H),0.98-0.90(m,3H)。
实施例34、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(5-氟2-甲苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、5-氟2-甲苯胺(北京百灵威化学技术有限公司)和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(5-氟2-甲苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率4.6％)。
MS(ESI)m/z＝520(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.27(m,1H),9.80(m,1H),8.64-8.62(m,1H),,8.42-8.37(m,1H),8.21-8.18(d,1H),7.91-7.89(m,1H),7.61-7.56(m,2H),7.20-7.18(m,1H),7.0-6.97(m,2H),4.75-4.71(m,1H),4.45-4.36(m,3H),3.62.3.33(m,2H),2.92(m,2H),2.20-2.08(s,2H),1.77(m,2H),0.99-0.92(m,3H)。
实施例35、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-甲胺基乙基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、2-甲胺基乙胺(北京伊诺凯科技有限公司)和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-甲胺基乙基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率20％)。
MS(ESI)m/z＝469(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.27(m,1H),8.65-8.60(m,2H),8.41-8.36(m,1H),,8.21-8.20(m,2H),7.90-7.84(m,1H),7.58-7.50(m,2H),4.95-4.92(m,1H),4.75-4.71(m,1.4H),4.43-4.39(m,0.6H),4.1-3.80(m,2H),3.49-3.46(m,2H),3.06-3.01(m,2H),2.94-2.82(M,2H),2.58(S,3H)1.82-1.72(m,2H),0.99-0.90(m,3H)。
实施例36、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)-3-甲基丁酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、甲胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)-3-甲基丁酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率13％)。
MS(ESI)m/z＝440(M+1)+。
1HNMR(400MHz,MeOD):δ＝8.41(s,1H),8.21-8.19(m,1H),7.92-7.89(m,1H),7.81-7.78(m,1H),7.63-7.60(d,J＝9.2Hz,1H),5.03-4.99(m,1H),4.84-4.76(t,J＝16.8Hz,1H),4.61-4.57(d,J＝16.4Hz,1H),4.16-4.07(m,2H),3.08-2.88(m,2H),2.82(s,2H),2.32-2.26(m,1H),1.18-0.98(m,4H)。
实施例37、(R)-5-(2-环丙基-2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)乙酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-环丙乙酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、甲胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-环丙基-2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)乙酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率27％)。
MS(ESI)m/z＝438(M+1)+。
1HNMR(400MHz,MeOD):δ＝8.40(s,1H),8.27(s,1H),8.19-8.16(d,J＝11.2Hz,1H),7.93-7.80(m,1H),7.62-7.56(m,1H),7.38(s,1H),7.30(s,1H),4.83-4.58(m,3H),4.12-3.82(m,2H),3.21-2.77(m,2H),2.82(s,3H),1.42-1.41(m,1H),0.70-0.48(m,4H)。
实施例38、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、5-氟2-甲基苄胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.6％)。
MS(ESI)m/z＝562(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.29(s,1H),8.88-8.91(m,1H),8.35-8.40(d,J＝13.5,1H),7.85-8.19(m,2H),7.81-7.83(m,1H),7.79-7.91(m,1H),7.61-7.79(m,1H),7.51-7.56(m,1H),6.95-7.00(m,2H),5.05-5.12(m,1H),4.80-4.85(d,J＝9.8,1.36H),4.34-4.38(m,3H),3.82-4.34(m,1.45H),2.80-2.93(d,J＝14.2,2H),2.49(s,1H),1.02-1.07(m,9H)。
实施例39、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-(5-氟-2-甲氧基苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、5-氟2-甲氧基苯胺(江苏鳄鱼试剂化工有限公司)和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-(5-氟-2-甲氧基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率22％)。
MS(ESI)m/z＝564(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.28(s,1H),9.36-9.36(d,J＝14.6,1H),8.64-8.66(m,1H),8.42-8.64(m,1H),8.21-8.36(m,1H),8.18-8.21(m,1H),7.91-8.18(m,1H),7.89-7.91(m,1H),7.56-7.58(m,1H),7.10-7.11(m,1H),6.99-7.07(m,1H),4.94-4.97(s,1H),4.74-4.78(m,1.42H),4.45-4.49(m,0.65H),3.85-3.88(m,5H),2.95-2.96(d,J＝13.1,2H)1.76-1.80(m,2H),0.92-0.99(m,3H)。
实施例40、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)-3-甲氧基丙酰基)-N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、5-氟2-甲基苄胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)-3-甲氧基丙酰基)-N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率20％)。
MS(ESI)m/z＝550(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.29(s,1H),8.86-8.88(m,1H),8.75-8.85(m,1H),8.21-8.41(d,J＝8.8,1H),8.19-8.21(m,1H),7.87-8.08(m,1H),7.56-7.61(m,2H),7.18-7.22(m,1H),6.96-7.00(m,2H),4.66-4.70(m,1H),4.35-4.39(m,2H),4.34-4.35(m,2H),3.64-3.82(m,2H),3.26-3.29(m,2H),3.25-3.26(m,3H),2.89-2.90(d,J＝13.1,2H),2.08(s,3H)。
实施例41、(R)-5-(2-(6-甲氧基-1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、5-氟2-甲基苄胺和6-甲氧基-1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(6-甲氧基-1H-吲唑-5-甲酰氨基)-3-甲氧基丙酰基)-N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率20％)。
MS(ESI)m/z＝564(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.06(s,1H),8.93-8.95(m,1H),8.67-8.92(m,1H),8.63-8.68(m,1H),7.63-8.07(m,1H),7.22-7.63(s,1H),7.18-7.22(m,2H,6.96-7.00(m,2H),5.08-5.10(m,1H),4.51-4.76(m,2H),4.38-4.51(m,2H),3.82-3.94(m,5H),2.93-2.97(d,J＝11.3,2H),2.27(s,3H),1.61-1.72(m,2H),0.85-0.93(m,3H)。
实施例42、(R)-5-(2-(6-甲氧基-1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、苯胺和6-甲氧基-1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(6-甲氧基-1H-吲唑-5-甲酰氨基)-3-甲氧基丙酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率22％)。
MS(ESI)m/z＝518(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.03(s,1H),10.16-10.22(m,1H),8.65-8.67(m,1H),8.22-8.28(d,J＝13.6,1H),8.15-8.20(m,2H),7.81-7.83(m,2H),7.71-7.73(m,2H),7.06-7.11(m,2H),5.09-5.11(m,1H),4.50-4.80(m,2H),3.84-3.97(m,5H),2.98-3.00(d,J＝11.2,2H),1.65-1.81(m,2H),0.87-0.92(m,3H)。
实施例43、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(3-氯苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、3-氯苯胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(3-氯苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率19％)。
MS(ESI)m/z＝522(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.29(s,1H),10.31(s,1H),8.65-8.67(m,1H),8.43-8.65(m,1H),8.37-8.43(m,1H),8.18-8.22(m,1H),7.91-8.18(m,1H),7.89-7.90(m,1H),7.40-7.66(m,2H),7.36-7.40(m,1H),7.14-7.16(m,1H),4.95-4.97(m,1H),4.45-4.81(m,2H),3.34-3.87(m,2H),1.76-1.81(m,2H),0.92-0.99(m,3H)。
实施例44、(R)-5-(2-(3-氟-1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、苯胺和3-氟-1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(3-氟-1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率10％)。
MS(ESI)m/z＝506(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝12.79(1H,s),10.16-10.14(1H,m),8.76-8.70(1H,m),8.40-8.32(1H,m),7.98-7.92(1H,m),7.80-7.79(1H,m),7.72-7.68(2H,m),7.55-7.48(1H,m),7.36-7.32(2H,m),7.10-7.07(1H,m),4.98-4.92(1H,m),4.81-4.73(1.3H,m),4.49-4.45(0.7H,m),4.02-3.97(0.6H,m),3.87-3.80(1.4H,m),2.96-2.94(1H,m),2.85-2.83(1H,m),1.82-1.73(2H,m),0.99-0.91(3H,m)。
实施例45、(R)-5-(2-(6-氟-1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、苯胺和6-氟-1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(6-氟-1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率5.1％)。
MS(ESI)m/z＝506(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO)：δ＝13.90(1H,s),10.18-10.16(1H,m),8.75-8.69(1H,m),8.42(1H,s),8.38-8.23(2H,m),7.81(0.7H,s),7.73-7.66(2.3H,m),7.36-7.32(2H,m),7.10-7.07(1H,m),4.98-4.90(1H,m),4.81-4.69(1.3H,m),4.49-4.45(0.7H,m),4.10-3.98(0.7H,m),3.88-3.80(1.3H,m),3.00-2.90(1H,m),2.84(1H,s),1.82-1.76(2H,m),0.99-0.91(3H,m)。
实施例46、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2,4,5-三氟苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、2,4,5-三氟苄胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2,4,5-三氟苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率6.2％)。
MS(ESI)m/z＝574(M+1)+。
1HNMR(400MHz,MeOD):δ＝8.38-8.39(s,1H),8.15-8.25(m,1H),7.81-7.93(d,1H),7.56-7.63(m,1H),7.42-7.48(d,1H),7.19-7.23(m,1H),7.16-7.17(m,1H),5.12-5.14(m,1H),4.74-4.82(t,1H),4.57-4.61(d,1H),4.52-4.54(d,2H),4.46-4.48(d,1H),4.08-4.12(m,1H),3.71-3.99(d,1H)，3.04-3.51(m,1H),2.95-3.03(m,1H),1.90-1.96(m,1H).1.86-1.89(s,1H),1.02-1.11(m,3H)。
实施例47、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-三氟甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、2-三氟甲基苄胺(江苏鳄鱼试剂化工有限公司)和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(2-三氟甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率4.7％)。
MS(ESI)m/z＝570(M+1)+。
1HNMR(400MHz,MeOD):δ＝8.25-8.40(d,1H),8.16-8.19(d,1H),7.79-7.93(dd,1H),7.52-7.66(m,5H),7.43-7.48(d,1H),5.07-5.05(m,1H),4.60-4.82(t,1H),4.58-4.61(d,2H),4.07-4.11(m,1H),3.69-3.99(m,1H),3.02-3.03(m,1H),2.97-2.98(m,1H),1.88-1.99(m,2H),1.02-1.11(m,3H)。
实施例48、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-((2-甲基吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、(2-甲基吡啶-4-基)甲胺和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-((2-甲基吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率11％)。
MS(ESI)m/z＝517(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.28(s,1H),9.04-9.01(m,1H),8.66–8.58(m,1H),8.41-8.34(m,1H),8.20-8.17(m,1.5H),7.90-7.83(m,1H),7.58-7.53(m,2H),7.11-7.03(m,2H),4.97-4.90(m,1H),4.79-4.67(m,1H),4.44-4.38(m,3H),4.00-3.97(m,1H),3.83-3.78(m,1H),2.92-2.81(m,2H),2.43(s,3H),1.83-1.73(m,1H),0.98-0.91(m,3H)。
实施例49、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-((3-甲基吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸、4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯、(3-甲基吡啶-4-基)甲胺(江苏鳄鱼试剂化工有限公司)和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例21中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-((2-甲基吡啶-4-基)甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.6％)。
MS(ESI)m/z＝517(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.29(s,1H),8.99-8.97(m,1H),8.66–8.58(m,1H),8.42-8.34(m,3H),8.21-8.19(m,1.5H),7.91-7.83(m,1H),7.62-7.53(m,2H),7.15-7.10(m,1H),4.96-4.93(m,1H),4.76-4.72(m,1H),4.42-4.40(m,3H),4.01-3.97(m,1H),3.84-3.80(m,1H),2.94-2.82(m,2H),2.29(s,3H),1.84-1.72(m,1H),0.98-0.91(m,3H)。
实施例50、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
1、(R)-甲基2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酯的制备
将(R)-2-氨基丁酸甲酯(2.00g,12.3mmol)和5-甲酸-1H-吲唑(1.44g,12.3mmol)、二异丙基乙胺(4.78g,37.0mmol,6.46mL)溶于DMF(25.0mL)中，向反应液中加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(4.69g,12.3mmol)。反应液室温搅拌1小时后，浓缩除去溶剂，粗产品经过制备液相纯化得到(R)-2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酸甲酯(2.80g,10.7mmol,产率87％)。
MS(ESI)m/z 262(M+1)+。
2、(R)-2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酸的制备
将(R)-2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酸甲酯(2.80g,10.7mmol)和氢氧化钾(1.20g,21.4mmol)溶于甲醇(10.0mL)和水(10.0mL)中。反应液室温搅拌2小时后，浓缩除去溶剂，正丁醇萃取(50mL×3)。合并有机相，浓缩除去溶剂得到(R)-2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酸(2.50g,10.1mmol,产率94％)。
MS(ESI)m/z 248(M+1)+。
3、叔丁基2-((5-氟-2-甲基苄基)氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-羧酸酯的制备
将5-(叔丁氧基羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸(800mg,2.82mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(1.13g,2.96mmol)、二异丙基乙胺(729mg,5.64mmol,206μL)溶于二氯甲烷(10.0mL)中，向反应液中加入(5-氟-2-甲基苯基)甲胺(392mg,2.82mmol)。反应液室温搅拌1小时后，浓缩除去溶剂，粗产品经过中压制备液相纯化得到叔丁基2-((5-氟-2-甲基苄基)氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-羧酸酯(1.00g,1.98mmol,产率70％)。
MS(ESI)m/z 405(M+1)+。
4、N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
将叔丁基2-((5-氟-2-甲基苄基)氨基甲酰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-羧酸酯(1.00g,2.47mmol)和三氟乙酸(2mL)溶于二氯甲烷(10mL)中，反应液室温搅拌0.5小时后，浓缩除去溶剂，粗产品经过中压制备液相纯化得到N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(560mg,1.75mmol,产率71％,)。
MS(ESI)m/z 305(M+1)+。
5、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
将(R)-2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酸(244mg,986μmol)和N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(300mg,986μmol)、二异丙基乙胺(382mg,2.96mmol,516μL)溶于DMF(10.0mL)中，向反应液中加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(393mg,1.03mmol)。反应液室温搅拌1小时后，浓缩除去溶剂，粗产品经过柱层析和制备高效液相纯化得到(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(30.0mg,55.1μmol,产率5.6％)。
MS(ESI)m/z 534(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.27(m,1H),8.8(m,1H),8.64-8.62(m,1H),,8.42-8.37(m,1H),8.21-8.18(d,1H),7.91-7.89(m,1H),7.61-7.56(m,2H),7.20-7.18(m,1H),7.0-6.97(m,2H),4.75-4.71(m,1H),4.45-4.36(m,4H),3.62.3.33(m,2H),2.92(m,2H),2.27(s,3H),1.77(m,2H),0.99-0.92(m,3H)。
实施例51、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(萘-1-基甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以(R)-2-氨基丁酸甲酯、5-甲酸-1H-吲唑、5-(叔丁氧基羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸和萘-1-基甲胺(上海德默医药有限公司)为原料，按照实施例50中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(萘-1-基甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率6.3％)。
MS(ESI)m/z＝552(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.34(S,1H),8.99-8.98(d,j＝6Hz,1H),8.64-8.62(m,1H),8.41-8.35(d,1H),8.21-8.13(m,2H),7.97-7.85(m,2H),7.60-7.47(m,6H),4.90-4.89(m,3H),4.72-4.44(m,2H),3.82-3.81(m,2H)2.91-2.79(m,2H),1.76-1.74(m,2H),0.97-0.90(m,3H)。
实施例52、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丙酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丙酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.8％)。
MS(ESI)m/z＝412(M+1)+。
1HNMR(400MHz,MeOD):δ＝8.40(s,0.6H),8.26(s,1.4H),7.93(d,J＝8.8Hz,0.7H),7.83(d,J＝8.8Hz,0.5H),7.59(dd,J＝15.0,8.8Hz,1H),7.39(s,0.6H),7.31(s,0.5H),5.20(dq,J＝17.7,6.9Hz,1H),4.84(d,J＝16.4Hz,1H),4.70(d,J＝16.0Hz,1H),4.54(d,J＝16.6Hz,1H),4.13–4.04(m,1H),3.96–3.84(m,1H),3.17–3.07(m,1H),3.04–2.81(m,5H),1.52(d,J＝7.0Hz,2H),1.45(d,J＝6.9Hz,1H)。
实施例53、5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)乙酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)乙酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.2％)。
MS(ESI)m/z＝398(M+1)+。
1HNMR(400MHz,MeOD):δ＝8.40(d,J＝10.9Hz,1H),8.20(s,1H),7.93(t,J＝7.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,1H),7.40(d,J＝6.8Hz,1H),4.70(d,J＝9.7Hz,2H),4.44(s,1H),4.39(s,1H),3.97(t,J＝5.7Hz,1H),3.92(q,J＝5.7Hz,1H),3.05(t,J＝5.3Hz,1H),2.93(t,J＝5.5Hz,1H),2.89(s,3H)。
实施例54、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)-3-苯基丙酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-苯基丙酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)-3-苯基丙酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率2.1％)。
MS(ESI)m/z＝488(M+1)+。
1HNMR(400MHz,MeOD):δ＝8.31(d,J＝28Hz,1H),8.18(d,J＝5.2Hz,1H),7.79-7.87(m,1H),7.58(t,J＝8.4Hz,1H),7.03-7.33(m,6H),5.33-5.38(m,1H),4.28-4.63(m,2H),3.63-4.04(m,2H),3.14-3.28(m,2H),2.69-2.88(m,5H)。
实施例55、5-(1-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)环丁酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、1-((叔丁氧羰基)氨基)环丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得5-(1-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)环丁酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率2.0％)。
MS(ESI)m/z＝438(M+1)+。
1HNMR(400MHz,MeOD):δ＝8.39(s,1H),8.22(s,1H),8.10(d,J＝23.3Hz,1H),7.88(d,J＝8.2Hz,0H),7.62(d,J＝8.2Hz,1H),7.48(d,J＝8.6Hz,0H),7.36(s,0H),7.09(s,0H),4.60(d,J＝29.6Hz,2H),3.94(s,1H),3.81(s,1H),2.87(s,4H),2.72(s,2H),2.47(s,2H),2.07(s,1H),1.95(d,J＝8.6Hz,1H)。
实施例56、5-(1-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)环戊酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、甲胺、1-((叔丁氧羰基)氨基)环戊酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得5-(1-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)环戊酰基)-N-甲基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率1.7％)。
MS(ESI)m/z＝452(M+1)+。
1HNMR(400MHz,MeOD):δ＝8.35(s,0.5H),8.17(d,J＝32.9Hz,1.0H),7.91(d,J＝55.2Hz,1H),7.48(dd,J＝59.5,43.3Hz,2H),6.92(s,0.5H),4.68(d,J＝33.5Hz,2H),3.96(s,2H),2.97–2.61(m,5H),2.49(s,2H),2.16(s,2H),1.94–1.74(m,4H)。
实施例57、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(5-氟-2-甲氧基苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、5-氟-2-甲氧基苯胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(5-氟-2-甲氧基苯基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.3％)。
MS(ESI)m/z＝536(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.28(d,1H),9.36-9.38(d,1H),8.64-8.66(m,1H),8.42-8.36(m,1H),8.20-8.18(m,1H),7.91-7.89(m,1H),7.81-7.78(d,1H),7.71-7.69(m,1H),7.58-7.56(t,1H),7.11-7.07(m,1H),7.01-6.98(m,1H),4.97-4.94(m,1H),4.78-4.45(m,2H),4.03-3.97(m,2H),3.85(s,3H)2.85-2.96(m,2H),1.80-1.74(m,2H),0.99-0.92(m,3H)。
实施例58、(R)-N-(1-(2-(吗啉-4-羰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基)-1-氧代丁-2-基)-1H-吲唑-5-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、吗啉、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-N-(1-(2-(吗啉-4-羰基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基)-1-氧代丁-2-基)-1H-吲唑-5-甲酰胺(总产率2.7％)。
MS(ESI)m/z＝482(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.3(s,1H),8.54-8.66(dd,J＝8Hz,J＝39.2Hz,1H),8.44(d,15.6Hz,1H),8.26(d,56Hz,1H),8.21(s,1H),δ＝7.82-7.91(dd,J＝8.8Hz,J＝27.2Hz,1H),7.56(t,J＝8.0Hz,1H),7.23(d,22.4Hz,1H),4.88-4.98(m,1H),4.64-4.80(m,1H),4.42(d,J＝16Hz,1H),3.89-4.00(m,1H),3.78-3.85(m,1H),3.70-3.76(m,1H),3.61-3.63(m,7H),2.89-2.93(m,1H),2.80-2.83(m,1H),1.71-1.83(m,2H),0.91-0.98(m,3H)。
实施例59、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(吡咯烷-3-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、吡咯-3-胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(吡咯烷-3-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率2.9％)。
MS(ESI)m/z＝481(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.31(s,1H),8.91(s,2H),8.41-8.67(m,2H),8.33-8.41(m,1H),8.19-8.21(m,1H),7.84-7.90(m,1H),7.53-7.58(m,1H),4.91-4.95(m,1H),4.39-4.76(m,2H),3.82-4.02(m,2H),3.32-3.45(m,2H),3.24-3.28(m,2H),3.10-3.13(m,2H),2.81-2.93(m,2H),2.15-2.19(m,1H),1.94-1.97(m,3H),0.90-1.05(m,3H)。
实施例60、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、哌啶4-胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.9％)。
MS(ESI)m/z＝495(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.32(s,1H),8.61-8.77(m,2H),8.21-8.34(m,2H),8.19-8.21(d,1H),7.83-7.90(m,1H),7.53-7.60(m,2H),4.91-4.95(m,1H),4.38-4.75(m,2H),3.80-4.00(m,3H),3.30-3.33(d,2H),2.80-3.02(m,4H),1.92-1.95(d,2H),1.67-1.81(m,4H),0.98-0.90(m,3H)。
实施例61、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(1-甲基哌啶-3-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、1-甲基哌啶-3-胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(1-甲基哌啶-3-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.6％)。
MS(ESI)m/z＝509(M+1)+。
1HNMR(400MHz,MeOH):δ＝8.15-8.46(m,3H),7.73-7.92(m,1H),7.55-7.62(m,1H),7.39-7.49(m,1H),5.06-5.13(m,1H),4.84-4.87(d,1H),4.52-4.71(m,1H),4.08-4.21(m,2H),3.80-3.97(m,1H),3.47-3.50(m,1H),3.11-3.26(m,3H),2.97-3.03(m,1H),2.87-2.92(m,1H),2.80-2.82(d,3H),1.77-2.14(m,6H),1.02-1.11(m,3H)。
实施例62、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(吡啶-4-基甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、4-氨甲基吡啶、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(吡啶-4-基甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.3％)。
MS(ESI)m/z＝503(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.29(s,1H),9.09(d,J＝5.9Hz,1H),8.70–8.46(m,3H),8.38(d,J＝33.0Hz,1H),8.21(d,J＝9.1Hz,1H),8.14(s,0.23H),7.92–7.81(m,1H),7.57(dd,J＝17.5,8.4Hz,2H),7.30(d,J＝9.0Hz,2H),4.99–4.88(m,1H),4.81–4.66(m,1.5H),4.44(dd,J＝14.1,7.1Hz,2.5H),4.04–3.95(m,0.5H),3.89–3.75(m,1.5H),3.03–2.78(m,2H),1.78(ddd,J＝25.6,16.5,9.6Hz,2H),1.02–0.89(m,3H)。
实施例63、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-((6-氟4-甲基吡啶-3-基)甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、6-氟-4-甲基-3-氨甲基吡啶、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-((6-氟4-甲基哌啶-3-基)甲基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.8％)。
MS(ESI)m/z＝535(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.29(b,1H),9.03-9.00(m,1H),8.67-8.59(m,1H),8.41-8.36(m,1H),8.00(s,1H),7.90-7.84(m,1H),7.63-7.53(m,2H),6.86-6.85(m,1H),4.95-4.92(m,1H),4.76-4.72(m,1H),4.45-4.42(m,3H),4.01-3.80(m,2H),2.92-2.81(m,2H),2.26(s,3H),1.83-1.70(m,2H),0.97-0.93(m,2H)。
实施例64、(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(1-乙基哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、4-氨基乙基哌啶、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(1-乙基哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.5％)。
MS(ESI)m/z＝523(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.30(s,1H),8.63(dd,J＝18.1,8.0Hz,1H),8.38(d,J＝29.9Hz,1H),8.30–8.24(m,1H),8.22(s,1H),8.19(s,1H),7.92–7.82(m,1H),7.56(dd,J＝12.0,7.4Hz,2H),4.94(dt,J＝16.6,8.4Hz,1H),4.69(dd,J＝22.4,16.8Hz1.5H),4.41(d,J＝16.7Hz,0.5H),4.03–3.94(m,0.5H),3.87–3.67(m,2.5H),2.94(dd,J＝71.4,24.7Hz,4H),2.53(dd,J＝11.2,3.5Hz,2H),2.23(t,J＝10.9Hz,2H),1.87–1.69(m,4H),1.60(dd,J＝23.2,11.5Hz,2H),1.06(t,J＝7.1Hz,3H),1.00–0.88(m,3H)。
实施例65、5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、5-氟-2-甲基氨甲苯、2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得5-(2-(1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-(5-氟-2-甲基苄基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.3％)。
MS(ESI)m/z＝534(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝13.29(b,1H),8.90-8.87(m,1H),8.64-8.55(m,1H),8.41-8.35(m,1H),8.20-8.18(m,1H),7.90-7.83(m,1H),7.60-7.52(m,2H),7.21-7.17(m,1H),6.99-6.96(m,2H),4.95-4.92(m,1H),4.74-4.70(m,1H),4.44-4.37(m,3H),3.96-3.87(m,2H),2.29-2.80(m,2H),2.26(s,3H),1.84-1.70(m,2H),0.97-0.90(m,2H)。
实施例66、(R)-5-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰胺基)丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、苯胺、2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酰胺基)丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率2.8％)。
MS(ESI)m/z＝488(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝11.91(s,11H),10.15(s,1H),8.80–8.64(m,2H),8.56–8.41(m,1H),7.81(d,J＝3.0Hz,1H),7.72(d,J＝8.3Hz,2H),7.59–7.47(m,1H),7.40–7.29(m,2H),7.09(t,J＝7.4Hz,1H),6.60–6.49(m,1H),5.02–4.89(m,1H),4.87–4.69(m,1.5H),4.48(d,J＝16.4Hz,0.5H),3.94(dd,J＝65.7,9.9Hz,2H),3.01–2.82(m,2H),1.89–1.70(m,2H),0.96(dt,J＝14.7,7.4Hz,3H)。
实施例67、(R)-5-(2-(3-氟-1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-环戊基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、环戊胺、(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吲唑-3-氟-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(3-氟-1H-吲唑-5-甲酰氨基)丁酰基)-N-环戊基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率2.6％)。
MS(ESI)m/z＝498(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO):δ＝12.86(s,1H),8.69-8.75(m,1H),8.30-8.39(d,1H),8.17-8.22(m,1H),7.90-7.98(m,1H),7.49-7.55(m,2H),4.90-4.97(m,1H),4.66-4.73(m,1H),4.39-4.62(m,1H),4.10-4.16(m,1H),3.81-3.99(m,2H),2.79-2.90(m,2H),1.71-1.86(m,6H),1.66-1.67(m,4H),1.42-1.53(m,3H)。
实施例68、(R)-5-(2-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲酰胺基)丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲酰胺的制备
以5-((苄氧基)羰基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸、苯胺、2-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸和1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-羧酸为原料，按照实施例1中的类似步骤制得(R)-5-(2-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-甲酰胺基)丁酰基)-N-苯基-4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺(总产率3.6％)。
MS(ESI)m/z＝499(M+1)+。
1HNMR(400MHz,DMSO)δ13.88(d,J＝14.4Hz,1H),10.14(d,J＝6.2Hz,1H),9.00(dd,J＝19.1,1.9Hz,1H),8.85(dd,J＝16.0,7.9Hz,1H),8.80–8.70(m,1H),8.28(d,J＝19.3Hz,1H),7.81(s,1H),7.71(t,J＝8.7Hz,2H),7.37–7.29(m,2H),7.10(t,J＝7.4Hz,1H),5.03–4.93(m,1H),4.84–4.71(m,1.5H),4.49(d,J＝16.6Hz,0.5H),4.06–3.83(m,2H),2.93(dd,J＝39.0,10.0Hz,2H),1.88–1.71(m,2H),1.05–0.91(m,3H)。
为了说明本发明的有益效果，本发明提供以下试验例：
试验例1、检测化合物酶学活性
1、ROCK2抑制活性的检测
ROCK2能够磷酸化S6K(KRRRLASLR)多肽底物，将ATP转化成ADP。在激酶反应后，加入ADP-GloTM试剂，使激酶反应终止，并消耗完剩余的ATP。加入激酶检测试剂，它在使ADP转化成ATP的同时，ATP再被Ultra-GloTM萤光素酶转化成光发光信号，发光信号与激酶活性正相关。
对于实施例1～实施例68所得的最终化合物，按以下步骤进行ROCK2抑制活性的检测：
1、Assay Buffer:40mM Tris pH 7.5，20mM MgCl2，0.1％BSA(w/v)，50μM DTT；
2、加12μL2.5x0.1μg/ml ROCK2工作液进入96孔PCR板；
3、加6μL6x化合物工作液进入96孔PCR板混匀，25℃预孵育10min；
4、加入12μL 2.5x 37.5μg/ml S6K底物和12.5μM ATP混合工作液，30℃孵育60min；
5、取25μL反应混合物到一个新96孔PCR板，并加入25μL ADP-GloTM试剂混匀，25℃孵育40min终止反应；
6、取40μL终止反应混合物到一个新96孔PCR板，并加入40μL激酶检测试剂混匀，25℃孵育40min；
7、读取luminescence(冷光)信号值，计算抑制率。
2、ROCK1抑制活性的检测
ROCK1能够磷酸化S6K(KRRRLASLR)多肽底物，将ATP转化成ADP。在激酶反应后，加入ADP-GloTM试剂，使激酶反应终止，并消耗完剩余的ATP。加入激酶检测试剂，它在使ADP转化成ATP的同时，ATP再被Ultra-GloTM萤光素酶转化成光发光信号，发光信号与激酶活性正相关。
对于实施例1～实施例68所得的最终化合物，按以下步骤进行ROCK1抑制活性的检测：
1、Assay Buffer:40mMTrispH 7.5，20mM MgCl2，0.1％BSA(w/v)，50μM DTT；
2、加12μL 2.5x 5μg/mlROCK1工作液进入96孔PCR板，
3、加6μL 6x化合物工作液进入96孔PCR板混匀，25℃预孵育10min；
4、加入12μL 2.5x 37.5μg/mlS6K底物和12.5μMATP工作液，30℃孵育60min；
5、取25μL反应混合物到一个新96孔PCR板，并加入25μL ADP-GloTM试剂混匀，25℃孵育90min终止反应；
6、取40μL终止反应混合物到一个新96孔PCR板，并加入40μL激酶检测试剂混匀，25℃孵育40min；
7、读取luminescence(冷光)信号值，计算抑制率。
按照上述方法进行去ROCK1、ROCK2抑制活性检测，试验结果见表1，其中测定各化合物的IC50按照说明分类，表1中：
“+”表示ROCK的IC50测定大于500nM；
“++”表示ROCK的IC50小于500nM大于100nM；
“+++”表示ROCK的IC50小于100nM
表1、化合物对ROCK1和ROCK2的抑制活性
ND：尚未进行检测分析。
试验结果表明，本发明的化合物具有良好的ROCK抑制活性，可以用于预防和/或治疗与ROCK活性异常相关的疾病。
试验例2、检测化合物细胞活性
1、免疫荧光检测微丝和粘着斑的改变
使用原代猪小梁网细胞。ROCK2通过磷酸化肌球蛋白轻链等底物，促进组装微丝和粘着斑，引起细胞形态的改变。将猪小梁网细胞细胞接种入多孔板，培养条件为含10％FBS的DMEM。过夜培养后，将细胞与化合物一起温育1小时。4％多聚甲醛和0.1％Triton X-100固定和通透细胞后，使用vinculin特异性抗体和罗丹明分别标记微丝和粘着斑。分别在488nM和549nM荧光下观察细胞。
实施例化合物1-3、11、23、24、27-28、31、34、63引起细胞微丝和粘着斑解聚的作用均强于或等于对照化合物Ripasudil(Glanatec)。
2、免疫印迹检测肌球蛋白轻链磷酸化
使用大鼠平滑肌细胞系A7r5。ROCK2通过磷酸化肌球蛋白轻链T18/S19两个氨基酸位点导致细胞骨架的改变。将A7r5细胞接种入多孔板，培养条件为含10％FBS的DMEM。过夜培养后，血清饥饿4小时，在无血清培养基中将细胞与化合物一起温育1小时。使用phspho-MLC-T18/S19特异性抗体和第二检测抗体，通过免疫印迹检测肌球蛋白轻链磷酸化水平。DMSO处理的细胞和Ripasudil处理的细胞作为对照。
实施例化合物1-2、23、24、26-28、31、34抑制肌球蛋白轻链磷酸化的作用均强于或等于对照化合物Ripasudil(Glanatec)。
综上所述，本发明提供的式Ⅰ所示的新化合物，表现出了良好的ROCK抑制活性，为临床预防和/或治疗与ROCK活性异常相关的疾病提供了一种新的药用可能。

Claims (47)

1.式Ⅰ所示的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其晶型、或其溶剂合物、或其同位素体：
其中，
Y为S、O或NR12；
X1、X2、X3分别或同时为CR1或N；
每个R1独立选自H、卤素、C1～C6烷基或C1～C6烷氧基；
R4、R5、R6、R7、R12分别或同时为H、卤素、C1～C6烷基或C1～C6烷氧基；
R8、R9分别或同时为H、C1～C6烷基、取代的C1～C6烷基、C3～C6环烷基、取代的C3～C6环烷基、3元～6元杂环基、取代的3元～6元杂环基、C5～C10芳基、取代的C5～C10芳基、5元～10元杂芳基或取代的5元～10元杂芳基；或者，R8与R9相连构成C3～C6环烷基、取代的C3～C6环烷基、3元～6元杂环基或取代的3元～6元杂环基；
R10、R11分别或同时为H、C1～C6烷基、取代的C1～C6烷基、C3～C6环烷基、取代的C3～C6环烷基、3元～6元杂环基、取代的C3～C6杂环基、C5～C10芳基、取代的C5～C10芳基、5元～10元杂芳基或取代的5元～10元杂芳基；或者，R10与R11相连构成3元～6元杂环基或取代的3元～6元杂环基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征是：所述化合物结构如式Ⅰa所示：
其中，
Y为S或O；
X1、X2中至少有1个为N。
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征是：R8与R9相连构成C3～C6环烷基、卤素取代或C1～C6烷基取代的C3～C6环烷基；或者，R8、R9独立选自H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基取代或芳基取代或杂芳基取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、卤素取代或C1～C6烷基取代的C3～C6环烷基、4元杂环基、苯基、取代苯基、6元杂芳基或取代的6元杂芳基，其中，R8、R9至少1个为H。
4.根据权利要求3所述的化合物，其特征是：所述取代的C3～C6环烷基中取代基为氟或甲基；所述取代的C1～C4烷基中取代基为甲氧基、苯基、取代苯基、吡啶基或取代吡啶基；所述的4元杂环基为氧杂环丁基；所述的6元杂芳基为吡啶基。
5.根据权利要求3或4所述的化合物，其特征是：所述取代苯基、取代的6元杂芳基、取代吡啶基中，取代基独立选自卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基；优选为氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
6.根据权利要求1所述的化合物，其特征是：所述化合物结构如式Ⅱ所示：
7.根据权利要求1～6任意一项所述的化合物，其特征是：R10、R11分别或同时为H或C1～C4烷基。
8.根据权利要求7所述的化合物，其特征是：所述的化合物为：
9.根据权利要求1～6任意一项所述的化合物，其特征是：所述化合物如式Ⅱa所示：
a为0～6的整数；
R1a、R2a、R3a、R4a、R5a分别或同时为H、羟基、卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基。
10.根据权利要求9所述的化合物，其特征是：a为0、1或2；R1a、R2a、R3a、R4a、R5a分别或同时为H、羟基、氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
11.根据权利要求10所述的化合物，其特征是：式Ⅱa所示的化合物为：
12.根据权利要求1～6任意一项所述的化合物，其特征是：所述的化合物如式Ⅱb所示：
b为0～6的整数；
R1b、R2b、R3b、R4b、R5b、R6b、R7b分别或同时为H、羟基、卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基。
13.根据权利要求12所述的化合物，其特征是：b为0、1或2；R1b、R2b、R3b、R4b、R5b、R6b、R7b分别或同时为H、氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
14.根据权利要求13所述的化合物，其特征是：式Ⅱb所示的化合物为：
15.根据权利要求1～6任意一项所述的化合物，其特征是：所述的化合物如式Ⅱc所示：
c为0～6的整数；
Xc、Yc、Zc独立选自CR3c或N，其中至少1个为N；
R1c、R2c、每个R3c独立选自H、羟基、卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基。
16.根据权利要求15所述的化合物，其特征是：c为0、1或2；Xc、Yc中仅1个为N，Zc为CR3c；R1c、R2c、每个R3c分别或同时为H、氟、氯、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
17.根据权利要求16所述的化合物，其特征是：式Ⅱc所示的化合物为：
18.根据权利要求1～6任意一项所述的化合物，其特征是：所述的化合物如式Ⅱd所示：
d为1～6的整数；
R1d、R2d分别或同时为H、羟基、卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基。
19.根据权利要求18所述的化合物，其特征是：d为1或2；R1d、R2d分别或同时为H或C1～C4烷基。
20.根据权利要求19所述的化合物，其特征是：式Ⅱd所示的化合物为：
21.根据权利要求1～6任意一项所述的化合物，其特征是：R10为H，R11为C3～C6环烷基或取代的C3～C6环烷基。
22.根据权利要求21所述的化合物，其特征是：R11为C4～C6环烷基或取代的C4～C6环烷基；其中，所述的取代基为氟、甲基或乙基。
23.根据权利要求22所述的化合物，其特征是：所述的化合物为：
24.根据权利要求1～6任意一项所述的化合物，其特征是：R10为H，R11为3元～6元杂环基或取代的3元～6元杂环基。
25.根据权利要求24所述的化合物，其特征是：R11为4元～6元杂环基或取代的4元～6元杂环基；其中，所述的杂环基中仅有1个杂原子，所述杂原子为N或O；所述的取代基为甲基或乙基。
26.根据权利要求25所述的化合物，其特征是：所述的化合物为：
27.根据权利要求1～6任意一项所述的化合物，其特征是：所述的化合物如式Ⅱg所示：
Xg、Yg独立选自CR3g或N，其中至少1个为N；
R1g、R2g、R3g独立选自H、羟基、卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基。
28.根据权利要求27所述的化合物，其特征是：Xg为N，Yg为CR3g或N；R1g、R2g、R3g分别或同时为H、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
29.根据权利要求28所述的化合物，其特征是：式Ⅱg所示的化合物为：
30.根据权利要求1～6任意一项所述的化合物，其特征是：所述的化合物如式Ⅱh所示：
R1h、R2h、R3h、R4h、R5h、R6h分别或同时为H、羟基、卤素、C1～C6烷基、卤素取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基或卤素取代的C1～C6烷氧基；优选为H、氟、氯、甲基或三氟甲基。
31.根据权利要求30所述的化合物，其特征是：式Ⅱh所示的化合物为：
32.根据权利要求1～6任意一项所述的化合物，其特征是：R10与R11相连构成6元杂环基或C1～C6烷基取代的6元杂环基。
33.根据权利要求32所述的化合物，其特征是：所述的杂环基中至多有2个杂原子，所述杂原子为N或O；所述取代的6元杂环基中取代基为甲基或三氟甲基。
34.根据权利要求33所述的化合物，其特征是：所述的化合物为：
35.一种权利要求1～34任意一项所述化合物的制备方法，其特征是：包括如下步骤：
步骤a：
化合物SM-1a与化合物SM-2a，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在卤烃类溶剂中反应，得化合物IM-1a；其中，T1a为叔丁氧羰基、苄氧羰基或芴甲氧羰基；
步骤b：
化合物IM-1a与路易斯酸或路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-2a；
步骤c：
化合物IM-2a与化合物SM-3a，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-3a；其中，T2a为叔丁氧羰基、苄氧羰基或芴甲氧羰基；
步骤d：
化合物IM-3a与路易斯酸或路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-4a；
步骤e：
化合物IM-4a与化合物SM-4a，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，即得。
36.根据权利要求35所述的制备方法，其特征在于：
步骤a于10℃～40℃反应1h～12h；
所述化合物SM-1a与化合物SM-2a的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物SM-1a与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物SM-1a与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物SM-1a与卤烃类溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上；
步骤b于10℃～40℃反应0.5h～12h；
所述化合物IM-1a与路易斯酸的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-1a与路易斯碱的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-1a与有机溶剂的重量体积比为1：20～100g/ml；
所述所述路易斯酸选自三氟乙酸、盐酸或氢溴酸；所述路易斯碱选自哌啶、吗啉或哌嗪；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂、酸类溶剂或两者的混合溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，酸类溶剂选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸中的任意一种或两种以上；
步骤c于10℃～40℃反应1h～12h；
所述化合物IM-2a与化合物SM-3a的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物IM-2a与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物IM-2a与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物IM-2a与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上；
步骤d于10℃～40℃反应0.5h～12h；
所述化合物IM-3a与路易斯酸的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-3a与路易斯碱的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-3a与有机溶剂的重量体积比为1：20～100g/ml；
所述所述路易斯酸选自三氟乙酸、盐酸或氢溴酸；所述路易斯碱选自哌啶、吗啉或哌嗪；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂、酸类溶剂或两者的混合溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，酸类溶剂选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸中的任意一种或两种以上；
步骤e于10℃～40℃反应1h～12h；
所述化合物IM-4a与化合物SM-4a的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物IM-4a与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物IM-4a与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物IM-4a与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上。
37.根据权利要求35所述的制备方法，其特征是：步骤a所述化合物SM-1a是由下述方法制备得到：
步骤a1：
将三氯氧磷与N,N-二甲基甲酰胺混合，加入二氯甲烷，再加入化合物A反应，得到化合物B；其中，T1a为叔丁氧羰基、苄氧羰基或芴甲氧羰基；
步骤a2：
化合物B、化合物C和路易斯碱，在卤烃类溶剂中反应，得到化合物D；其中，T11a为C1～C6烷基；
步骤a3：
化合物D与路易斯碱在醇类溶剂和/或水中反应，即得化合物SM-1a。
38.根据权利要求37所述的制备方法，其特征是：
步骤a1于0℃～5℃将三氯氧磷与N,N-二甲基甲酰胺混合，加入二氯甲烷，室温下搅拌2小时～5小时，再加入化合物A的二氯甲烷溶液，室温下反应2小时～5小时，得到化合物B；
所述三氯氧磷与N,N-二甲基甲酰胺的摩尔比为1：0.5～2；所述三氯氧磷与二氯甲烷A的重量体积比为1：1～10g/ml；所述三氯氧磷与化合物A的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物A与二氯甲烷B的重量体积比为1：1～10g/ml；
步骤a2于50℃～90℃反应2小时～24小时，得到化合物D；
所述化合物B与化合物C的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物B与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物B与卤烃类溶剂的重量体积比为1：1～10g/ml；
所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上；
步骤a3于10℃～40℃反应1h～12h，即得化合物SM-1a；
所述化合物D与路易斯碱的摩尔比为1：5～15；所述化合物D与混合溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；所述的混合溶剂中，醇类溶剂与水的体积比为1：0.5～2；
所述路易斯碱选自氢氧化钾、氢氧化钠中的任意一种或两种；所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇中的任意一种或两种以上。
39.一种权利要求1～34任意一项所述化合物的制备方法，其特征是：包括以下步骤：
步骤①：
化合物SM-1b与化合物SM-2b，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-1b；其中，T1b为叔丁氧羰基、苄氧羰基或芴甲氧羰基；T11b为C1～C6烷基；
步骤②：
化合物IM-1b和路易斯碱在醇类溶剂和/或水中反应，得化合物IM-2b；
步骤③：
化合物IM-2b与化合物SM-3b，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-3b；
步骤④：
化合物IM-3b与路易斯酸或路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-4b；
步骤⑤：
化合物SM-4b与化合物IM-4b，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，即得。
40.根据权利要求39所述的制备方法，其特征是：
步骤①于10℃～40℃反应1h～12h，得化合物IM-1b；
所述化合物化合物SM-1b与化合物SM-2b的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物SM-1b与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物SM-1b与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物SM-1b与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上；
步骤②于10℃～40℃反应1h～12h，得化合物IM-2b；
所述化合物IM-1b与路易斯碱的摩尔比为1：5～15；所述化合物IM-1b与混合溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；所述的混合溶剂中，醇类溶剂与水的体积比为1：0.5～2；
所述路易斯碱选自氢氧化钾、氢氧化钠中的任意一种或两种；所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇中的任意一种或两种以上。
步骤③于10℃～40℃反应1h～12h，得化合物IM-3b；
所述化合物化合物IM-2b与化合物SM-3b的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物IM-2b与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物IM-2b与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物IM-2b与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上；
步骤④于10℃～40℃反应0.5h～12h，得化合物IM-4b；
所述化合物IM-3b与路易斯酸的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-3b与路易斯碱的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-3b与有机溶剂的重量体积比为1：20～100g/ml；
所述所述路易斯酸选自三氟乙酸、盐酸或氢溴酸；所述路易斯碱选自哌啶、吗啉或哌嗪；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂、酸类溶剂或两者的混合溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，酸类溶剂选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸中的任意一种或两种以上；
步骤⑤于10℃～40℃反应1h～12h，即得；
所述化合物SM-4b与化合物IM-4b的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物SM-4b与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物SM-4b与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物SM-4b与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上。
41.一种权利要求1～34任意一项所述化合物的制备方法，其特征是：包括以下步骤：
步骤i：
化合物SM-1c与化合物SM-2c，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，得化合物IM-1c；其中，T11c为C1～C6烷基；
步骤ii：
化合物IM-1c与路易斯碱在醇类溶剂和/或水中反应，得化合物IM-2c；
步骤iii：
化合物SM-3c与化合物SM-4c，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，，得化合物IM-3c；其中，T1c为叔丁氧羰基、苄氧羰基或芴甲氧羰基；
步骤iv：
化合物IM-3c与路易斯酸或路易斯碱在有机溶剂中反应，得化合物IM-4c；
步骤v：
化合物IM-2c与化合物IM-4c，加入酰胺缩合试剂和路易斯碱，在有机溶剂中反应，即得。
42.根据权利要求41所述的制备方法，其特征是：
步骤i于10℃～40℃反应1h～12h，得化合物IM-1c；
所述化合物化合物SM-1c与化合物SM-2c的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物SM-1c与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物SM-1c与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物SM-1c与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上；
步骤ii于10℃～40℃反应1h～12h，得化合物IM-2c；
所述化合物IM-1c与路易斯碱的摩尔比为1：1～10；所述化合物IM-1c与混合溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；所述的混合溶剂中，醇类溶剂与水的体积比为1：0.5～2；
所述路易斯碱选自氢氧化钾、氢氧化钠中的任意一种或两种；所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇中的任意一种或两种以上；
步骤iii于10℃～40℃反应1h～12h，得化合物IM-3c；
所述化合物化合物SM-3c与化合物SM-4c的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物SM-3c与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物SM-3c与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物SM-3c与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上；
步骤iv于10℃～40℃反应0.5h～12h，得化合物IM-4c；
所述化合物IM-3c与路易斯酸的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-3c与路易斯碱的重量体积比为1：2～20g/ml；所述化合物IM-3c与有机溶剂的重量体积比为1：20～100g/ml；
所述所述路易斯酸选自三氟乙酸、盐酸或氢溴酸；所述路易斯碱选自哌啶、吗啉或哌嗪；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂、酸类溶剂或两者的混合溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，酸类溶剂选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸中的任意一种或两种以上；
步骤v于10℃～40℃反应1h～12h，即得；
所述化合物IM-2c与化合物IM-4c的摩尔比为1：0.5～2；所述化合物IM-2c与酰胺缩合试剂的摩尔比为1：1～5；所述化合物IM-2c与路易斯碱的摩尔比为1：2～10；所述化合物IM-2c与有机溶剂的重量体积比为1：5～100g/ml；
所述酰胺缩合试剂选自2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷中的任意一种或两种以上；所述路易斯碱选自二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶中的任意一种或两种以上；所述有机溶剂选自卤烃类溶剂或极性非质子溶剂，卤烃类溶剂选自二氯甲烷、氯乙烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳中的任意一种或两种以上，极性非质子溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、乙腈、吡啶中的任意一种或两种以上。
43.权利要求1～34任意一项所述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其晶型、或其溶剂合物、或其同位素体在制备ROCK抑制剂类药物中的应用。
44.根据权利要求43所述的应用，其特征是：所述的药物为ROCK1和/或ROCK2抑制剂。
45.根据权利要求43或44所述的应用，其特征是：所述的药物为治疗和/或预防心血管疾病、高眼压症、青光眼或者癌症的药物。
46.一种药物组合物，其特征是：它是以权利要求1～34任意一项所述的化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其晶型、或其溶剂合物、或其同位素体为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备得到的制剂。
47.根据权利要求46所述的药物组合物，其特征是：所述的制剂为滴眼剂、口服给药制剂、舌下给药制剂、颊给药制剂、透皮吸收制剂或注射制剂。
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