CN106928034A - 一种竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物及其制备方法与应用，属于天然药物或天然产物研究领域。该方法包括如下步骤：竹叶兰干燥粉碎，乙醇溶剂浸泡，热回流提取，过滤，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得竹叶兰乙醇提取物浓缩液；将竹叶兰乙醇提取物浓缩液依次用石油醚或氯仿、乙酸乙酯萃取；合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，干燥，即得到竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物。本发明的方法工艺简单，效率高，节约溶剂。乙醇提取和液液萃取相结合，先用石油醚、氯仿等极性小于乙酸乙酯的脂溶性溶剂脱脂除杂，再用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，干燥，得到具有细胞毒活性的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，可用于制备抗肿瘤的产品。

Description

一种竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于天然药物或天然产物研究领域，具体的说，本发明涉及一种竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物及其制备方法与应用。
背景技术
竹叶兰(Arundina graminifolia)为兰科竹叶兰属植物，别名长杆兰，是傣族常用解药，用于治疗疮痈肿毒，黄疸，胃痛，热淋，脚气水肿，疝气腹痛，风湿痹痛，尿路感染，毒蛇咬伤，跌打损伤等。
竹叶兰植株高40～80厘米，地下根状茎常在茎基部呈卵球形膨大，貌似假鳞茎，直径1～2厘米，具较多的纤维根。茎直立，圆柱形，细竹秆状，通常为叶鞘所包，具多枚叶。叶线状披针形，薄革质或坚纸质，常数个丛生或成片生长。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的制备方法。
本发明的另一目的在于提供通过上述制备方法制备得到的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物。该提取物具有细胞毒活性。
本发明的再一目的在于提供上述竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)竹叶兰干燥粉碎，按每克原料药1～100mL的用量加入体积浓度40％～100％乙醇溶剂浸泡0～24h，热回流提取1～4次，每次0.5～5h，过滤，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得竹叶兰乙醇提取物浓缩液；
(2)将步骤(1)得的竹叶兰乙醇提取物浓缩液依次用石油醚或氯仿、乙酸乙酯萃取1～5次；
(3)合并步骤(2)得的乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，干燥，即得到竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物。
优选的，步骤(1)中所述的粉碎为粉碎至2～3cm长度的小段。
优选的，步骤(1)中所述的乙醇溶剂的体积浓度为60～95％。
优选的，步骤(1)中所述的乙醇溶剂的用量为6～12mL/g竹叶兰；优选为8～11mL/g竹叶兰。
优选的，步骤(1)中所述的浸泡的时间为0.5～12h。
优选的，步骤(1)中所述的提取是提取次数1～3次，每次2h；更优选是提取次数3次，每次2h。
优选的，步骤(2)先用石油醚或氯仿等极性小于乙酸乙酯的脂溶性溶剂萃取除杂，石油醚或氯仿等溶剂萃取次数为2～4次，乙酸乙酯萃取次数为2～4次。
一种竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，通过上述制备方法制备得到。
所述的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，该联苄类提取物含有多种活性化合物，包括但不局限于arundinan，arundinaol，orchinol，coelonin，shancidin，batatasinⅢ，其结构式如下：
所述的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物在医药方面的应用。
所述的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物具有细胞毒活性，可用于制备抗肿瘤的产品。
优选的，所述的产品的剂型为片剂、胶囊、滴丸剂等。
本发明相对于现有技术，具有如下的优点及效果：
本发明的制备方法工艺简单，效率高，节约溶剂。采用高浓度的乙醇连续提取，通过液液萃取法，或石油醚、氯仿等极性小于乙酸乙酯的脂溶性溶剂脱脂除杂，再用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，干燥，得到具有细胞毒活性的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，可用于制备抗肿瘤的产品。
附图说明
图1是竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物及对照品的HPLC液相色谱图；其中，a：竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，b：对照品；1、coelonin，2、arundinan，3、shancidin，4、orchinol。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1 竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的制备
取干燥粉碎竹叶兰全草100g，用体积分数95％的乙醇溶剂1100mL浸泡12h，加热回流提取3次，每次2h，合并提取液，减压浓缩至无醇味儿，得到的竹叶兰浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取4次；合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，干燥，即得到竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物。
实施例2 竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的制备
取干燥粉碎竹叶兰全草100g，用体积分数80％的乙醇溶剂1000mL浸泡2h，加热回流提取3次，每次2h，合并提取液，减压浓缩至无醇味儿，得到的竹叶兰浓缩液先用石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯萃取3次；合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，干燥，即得到竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物。
实施例3 竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的制备
取干燥粉碎竹叶兰全草100g，用体积分数70％的乙醇溶剂900mL浸泡1h，加热回流提取3次，每次2h，合并提取液，减压浓缩至无醇味儿，得到的竹叶兰浓缩液先用石油醚萃取4次，再用乙酸乙酯萃取2次；合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，干燥，即得到竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物。
实施例4 竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的制备
取干燥粉碎竹叶兰全草100g，用体积分数60％的乙醇溶剂800mL浸泡0.5h，加热回流提取3次，每次2h，合并提取液，减压浓缩至无醇味儿，得到的竹叶兰浓缩液先用石油醚萃取4次，再用乙酸乙酯萃取3次；合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，干燥，即得到竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物。
实施例5 液相色谱分析
供试品溶液的配制：按实施例1方法制得竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，适量甲醇溶解；
分析方法：
高相液相色谱仪：Agilent
色谱柱：Hypersil ODS(4.6×150mm，5μm)；
流动相：乙腈-水35:65；
检测波长：279nm；
柱温：30℃；
进样量：10μL
对10批不同产地、批次的竹叶兰制备的联苄类提取物进行分析，建立指纹图谱进行匹配，结果coelonin，arundinan，shancidin，orchinol的峰在10批样品色谱图中均出现，因此标定4个峰为共有指纹峰，据此建立该联苄类提取物的HPLC指纹图谱，如图1所示。
实施例6 竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物片剂的制备
按实施例1方法制得竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，加入适量的硬脂酸镁，压片。
实施例7 竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物胶囊的制备
按实施例1方法制得竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，加入适量的二氧化硅，制成胶囊。
实施例8 竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物滴丸剂的制备
按实施例1方法制得竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，加入PEG6000，于水浴上加热至熔化，再加入氯霉素至全部溶解，搅匀，迅速移入80℃保温的滴管中，打开滴管开关，液滴自然滴入用冰冷却的液体石蜡中成丸，滴毕，放置0.5h，滤除冷却剂，将滴丸表面的液体石蜡揩净，自然晾干即得。
药效学实施例1 竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物体外抗肿瘤实验
细胞株来源与主要试剂：人胃癌细胞(BGC-823)、人肝癌细胞(BEL-7402)由中国科学院上海生物研究所提供；RPMI-1460(美国Gibco公司)，胎牛血清(广州蕊特生物科技有限公司)，胰蛋白酶(Sigma)，MTT(华美生物工程公司进口分装)，二氧化碳培养箱(Sanyo Mco-15AC)，酶标仪(广州市深华生物技术有限公司)，DMSO(天津化学试剂有限公司)。
样品处理：按实施例1方法制得竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，DMSO溶解稀释，DMSO的最终浓度不超过0.1％。实验共分为以下几组：高剂量组(生药量200mg/mL)，中剂量组(生药量100mg/mL)，低剂量组(生药量50mg/mL)，空白对照组(溶剂组0.1％DMSO)。
实验方法：取对数生长期的肿瘤细胞，胰蛋白酶消化后，用含10％小牛血清的RPMI1640培养液配制成2×104个/mL的细胞悬液，接种于96孔培养板中，在37℃，5％CO2、95％湿度的条件下培养24h，加入溶剂对照(0.1％DMSO)和不同浓度的受试样品，使最终浓度分别为200、100、50μg/mL，继续培养72h。按MTT法于酶标仪上570nm下测定吸光度。根据吸光度值计算出竹叶兰联苄提取物在不同浓度下对肿瘤细胞的抑制率。
竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物对胃癌和肝癌细胞的毒性大小见表1。
表1 不同剂量的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物对胃癌和肝癌细胞的抑制率(n＝5)
从表1中得知，不同剂量的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物对肿瘤细胞的生长均有一定的抑制作用，抑制率与提取物浓度呈正相关。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)竹叶兰干燥粉碎，按每克原料药1～100mL的用量加入体积浓度40％～100％乙醇溶剂浸泡0～24h，热回流提取1～4次，每次0.5～5h，过滤，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得竹叶兰乙醇提取物浓缩液；
(2)将步骤(1)得的竹叶兰乙醇提取物浓缩液依次用石油醚或氯仿、乙酸乙酯萃取1～5次；
(3)合并步骤(2)得的乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，干燥，即得到竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物。
2.根据权利要求1所述的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的粉碎为粉碎至2～3cm长度的小段。
3.根据权利要求1所述的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的乙醇溶剂的体积浓度为60～95％。
4.根据权利要求1所述的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的乙醇溶剂的用量为6～12mL/g竹叶兰。
5.根据权利要求1所述的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的浸泡的时间为0.5～12h；
步骤(1)中所述的提取是提取次数1～3次，每次2h。
6.根据权利要求1所述的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物的制备方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的石油醚或氯仿萃取次数为2～4次，乙酸乙酯萃取次数为2～4次。
7.一种竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，其特征在于通过权利要求1～6任一项所述的制备方法制备得到。
8.根据权利要求7所述的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，其特征在于：
所述的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物，该联苄类提取物含有多种活性化合物，包括但不局限于arundinan，arundinaol，orchinol，coelonin，shancidin，batatasinⅢ，其结构式如下：
9.权利要求7或8所述的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物在医药方面的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：
所述的竹叶兰抗肿瘤联苄类提取物在制备抗肿瘤的产品中的应用。
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