CN106924240A - 包含槲皮素的药物组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本申请公开了槲皮素或其药学上可接受的盐、或包含槲皮素或其药学上可接受的盐的组合物在制备用于治疗或预防个体的肾囊肿性疾病的药物中的用途。

Description

包含槲皮素的药物组合物及其用途

发明领域

本申请涉及包含槲皮素的组合物及其用途。具体地，本申请涉及槲皮素或包含槲皮素的药物组合物在治疗或预防肾脏相关疾病中的用途。

发明背景

肾囊肿性疾病是以肾脏出现内覆上皮细胞囊肿为特征的囊性疾病。囊肿可有单个或多个，内含液体或半固体碎片，多为遗传性，也可为后天获得性。

肾囊肿性疾病包括多囊肾病。多囊肾病又名PotterⅠ综合征、Perlmann综合征、先天性肾囊肿瘤病、囊胞肾、双侧肾发育不全综合征、肾脏良性多房性囊瘤、多囊病，本病临床并不少见。多囊肾有两种类型，常染色体隐性遗传型(婴儿型)多囊肾，发病于婴儿期，临床较罕见；常染色体显性遗传型(成年型)多囊肾，常于青中年时期被发现，也可在任何年龄发病。常染色体显性遗传型多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)是一种常见的单基因遗传性疾病，发病率约为1/400～1/1000，多在成年以后发病且预后不良，以双肾多发性进行性囊泡为主要特征，最终可导致终末期肾病ESRD，也是国际肾脏疾病研究的热点之一。

目前，临床上主要采用肾移植和透析治疗多囊肾病导致的终末期肾衰，所以开发新的有效治疗药物至关重要。

槲皮素(Quercetin，Qu)是一种广泛存在于植物界的黄酮类化合物，其化学名为3,3’,4’,5,7-五羟基黄酮，多以苷的形式在植物界分布广泛，广泛存在于植物的花、叶、果实中。发明人在本申请中提供了槲皮素对肾囊肿性疾病，特别是多囊肾病的防治作用。

发明概述

第一方面，本申请提供了槲皮素或其药学上可接受的盐或者包含槲皮素或其药学上可接受的盐的组合物在制备用于治疗或预防个体的肾囊肿性疾病的药物中的用途。

在一些实施方案中，所述肾囊肿性疾病为多囊肾病。在一些实施方案中，所述多囊肾病为常染色体显性遗传型多囊肾病。

在一些实施方案中，所述槲皮素或其药学上可接受的盐和/或所述槲皮素或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体一起被配制成药学上可接受的剂型。在一些实施方案中，所述剂型优选为注射剂、口服液、胶囊、片剂、颗粒剂。

在一些实施方案中，包含槲皮素或其药学上可接受的盐的药物经皮下、口服、肌肉内或腹腔内给药。在一些实施方案中，以上所述药物优选经皮下给药。

在一些实施方案中，所述槲皮素或其药学上可接受的盐的给药剂量为每天100-250mg/kg体重。在一些实施方案中，所述槲皮素或其药学上可接受的盐的给药剂量优选为每天200mg/kg体重。

在一些实施方案中，所述治疗或预防个体的肾囊肿性疾病包括抑制个体的肾脏囊泡形成和/或生长、降低个体的肾脏囊肿程度、降低个体的肾脏体重比和/或降低个体的肾脏囊肿指数。

在一些实施方案中，所述个体为哺乳动物，其包括非灵长类和灵长类动物。

第二方面，本申请提供了治疗肾囊肿性疾病的组合物，其包含抑制肾脏囊肿的活性成分以及药学上可接受的载体，其中所述活性成分包含槲皮素或其药学上可接受的盐。

第三方面，本申请提供了治疗或预防个体肾囊肿性疾病例如多囊肾病的方法，其包括给予个体治疗有效量或预防有效量的槲皮素或其药学上可接受的盐或者包含槲皮素或其药学上可接受的盐的组合物。

第四方面，本申请提供了槲皮素或其药学上可接受的盐或者包含槲皮素或其药学上可接受的盐的组合物，其用于治疗或预防个体肾囊肿性疾病例如多囊肾病。

附图简要说明

图1为槲皮素的化学结构式。

图2为显示在10μM佛司可林(forskolin)的持续刺激下，MDCK囊泡形成的图。

图3为显示槲皮素对MDCK囊泡形成的抑制作用的图。

图4为显示不同浓度的槲皮素对囊泡生长的抑制作用的图，其中图4A表示仅用含10μM佛司可林的培养液培养的结果，图4B表示用含2.5x10^-6M的槲皮素和10μM佛司可林的培养液培养的结果，图4C表示用含5x10^-6M的槲皮素和10μM佛司可林的培养液培养的结果，以及图4D表示用含1x10^-5M的槲皮素和10μM佛司可林的培养液培养的结果。

图5为不同浓度的槲皮素对囊泡生长的抑制作用曲线。

图6显示利用CCK-8法检测的槲皮素对MDCK细胞的细胞毒性作用，其中对照为含有细胞、相同浓度化合物的溶解介质、培养基、CCK-8，但不包含槲皮素的对照孔。

图7为显示Ksp-Cre；Pkd1^f/f小鼠模拟人类ADPKD疾病表型的图，其中图A为显示在Pkd1^f/f小鼠模型中的肾脏表型的图；图B为显示Ksp-Cre；Pkd1^f/f小鼠模型中的肾脏表型的图。图8为显示Ksp-cre；Pkd1^f/f小鼠基因型的PCR检测结果的图。

图9为显示对照组和治疗组Ksp-Cre；Pkd1^f/f小鼠的肾脏HE染色结果的图，其中治疗组小鼠从出生后第4天至出生后第10天，连续7天背部皮下注射DMSO溶解的槲皮素，施用剂量为每天200mg/kg体重；对照组小鼠每天注射等体积的DMSO。

图10为显示小鼠的肾脏囊肿指数测定结果的图。

发明详述

本申请的发明人意外地发现槲皮素或者包含槲皮素的药物组合物能够治疗或预防肾囊肿性疾病，特别是多囊肾病。

除非另外指明，本申请中所有的术语均具有本领域技术人员通常所理解的含义。

本申请提供了槲皮素或其药学上可接受的盐或者包含槲皮素或其药学上可接受的盐的组合物在制备用于治疗或预防个体的肾囊肿性疾病的药物中的用途。

肾脏囊肿性疾病包括一组可在肾脏不同部位出现的单个或多个囊肿性疾病。在一些实施方案中，所述肾囊肿性疾病为多囊肾病。在具体实施方案中，所述多囊肾病为常染色体显性遗传型多囊肾病(ADPKD)。

ADPKD的发病原因是PKD1或PKD2基因发生突变，此两种基因编码的蛋白分别称为多囊蛋白1(polycystin-1,PC1)和多囊蛋白2(polycystin-2,PC2)。PC1是一种上皮细胞膜受体，PC2是一种非选择性钙离子通道，两者表达于肾小管上皮细胞纤毛部位，PC1和PC2可相互作用，调节细胞外Ca²⁺的内流。PKD1或PKD2基因发生突变导致的后果就是引起囊泡形成、囊泡上皮细胞异常增殖和囊泡液体过度分泌，继而导致多囊肾病理学改变。

本申请发明人意外地发现槲皮素能够抑制囊泡形成和生长，明显抑制肾囊肿程度，对肾囊肿性疾病特别是多囊肾病具有很好的治疗和/或预防作用。

本文所用的“治疗”包括抑制、治愈、减轻、缓解或延缓肾囊肿性疾病(例如多囊肾病)以及相关症状。

在一些实施方案中，槲皮素或其药学上可接受的盐和/或所述槲皮素或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体一起被配制成药学上可接受的剂型，优选为注射剂、口服液、胶囊、片剂、颗粒剂。

本申请所述的“药学上可接受的载体”指不干扰活性成分的生物活性有效性的载体，包括制药领域常规使用的那些。本申请的药学上可接受的载体可以为固体或液体，包括药学上可接受的赋形剂、缓冲剂、乳化剂、稳定剂、防腐剂、稀释剂、封装剂、填充剂等。例如，药学上可接受的缓冲剂进一步包括磷酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐以及碳酸盐等。

本申请的药物组合物可以呈现为单位剂量形式，并且可以通过任一制药领域公知的方法制备。所有方法均包括将本申请的活性成分与一种或几种药学上可接受的载体结合的步骤。通常，通过将活性成分与液体载体、固体载体或二者结合来制备组合物，随后根据需要来定型制备的产物。具体的配制方法依赖于选择的给药途径。在一些实施方案中，药物组合物可以通过常规的混合、溶解、制粒、制锭、研磨、乳化、包封、捕获或冻干方法制造。

在一些实施方案中，所述药物经口、皮下、肠胃外、静脉内、动脉内、颅内、鞘内、腹腔内、局部、鼻内或肌肉内给药。在具体的实施方案中，所述药物经皮下给药。

在一些实施方案中，本文公开的组合物可以配制成注射剂，比如皮下、静脉内和肌内注射剂。制备注射制剂时，根据需要将有效成分与pH调节剂、缓冲液、助溶剂、悬浮剂、稳定剂和/或防腐剂混合，然后按照常规方法制备成皮下、静脉内或肌内注射制剂。例如，可以将槲皮素或其药学可接受的盐等活性成分配制进水溶液中，优选用生理学上可接受的缓冲液，例如Hank’s溶液、林格氏液或生理盐水或醋酸缓冲液(以减轻注射位点处的不适)来配制。或者，所述药物组合物可以是用于在使用前用合适的载体(例如无菌无热源水)复原的粉末形式。

在一些实施方案中，对于经口给药，可以将诸如槲皮素或其药学可接受的盐的活性成分与药学上可接受的载体一起配制为片剂、丸剂、锭剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆体、悬浮液等。对于口服固体配制物例如粉末、胶囊和片剂而言，合适的赋形剂包括填充剂例如糖，如乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇；纤维素制剂例如玉米淀粉、小麦淀粉、稻淀粉、马铃薯淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚维酮；制粒剂和粘合剂等。如果需要，可以添加崩解剂，例如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或者海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。如果需要，可以使用标准技术对固体剂型进行糖包裹或肠溶衣包裹。对于口服液体制剂例如悬浮液、酏剂和溶液而言，合适的载体、赋形剂或稀释剂包括水、甘油、油、醇。另外，可以添加调味剂、防腐剂、着色剂等。

除了前述制剂外，还可以将槲皮素或其药学上可接受的盐配制成储存制剂。可以通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射来施用这类长效制剂。因此，例如可将化合物与合适的多聚体材料或疏水材料(例如配制为可接受的油中的乳剂)或离子交换树脂配制在一起，或配制为略溶的衍生物，例如配制为略溶的盐。

本领域已知，治疗或预防肾囊肿性疾病例如多囊肾病所用的槲皮素的给药剂量取决于被治疗的受试者、受试者的体重、疾病的严重性、给药方式等。医生可以根据具体情况确定给药剂量。本文中所用的“治疗有效量”或“预防有效量”可以根据具体情况而定，本领域普通技术人员根据实际所需药量可以很容易地掌握，如可根据患者体重、年龄和病症情况等来确定。

本申请使用的槲皮素或其药学上可接受的盐能够提供治疗益处而没有明显的毒性。例如，可以通过CCK-8方法来测定槲皮素的细胞毒性。毒性效应和治疗效应的剂量比例是治疗指数。实验证实本申请施用的槲皮素无明显的细胞毒性。

在一些实施方案中，本申请所述的槲皮素或其药学上可接受的盐的给药剂量为每天给予100-250mg/kg体重。在一些实施方案中，所述槲皮素或其药学上可接受的盐的给药剂量为每天给予100mg/kg体重、110mg/kg体重、120mg/kg体重、130mg/kg体重、140mg/kg体重、150mg/kg体重、160mg/kg体重、170mg/kg体重、180mg/kg体重、190mg/kg体重、200mg/kg体重、210mg/kg体重、220mg/kg体重、230mg/kg体重、240mg/kg体重、250mg/kg体重或者上述任意两值之间的剂量。在一些实施方案中，所述槲皮素或其药学上可接受的盐的给药剂量优选为每天200mg/kg体重。

在一些实施方案中，上述治疗或预防个体的肾囊肿性疾病包括抑制个体的肾脏囊泡形成和/或生长、降低个体的肾脏囊肿程度、降低个体的肾脏体重比或者降低个体的肾脏囊肿指数。

在一些实施方案中，本申请的槲皮素或其药学上可接受的盐或者包含槲皮素或其药学上可接受的盐的药物组合物能够用于抑制细胞形成囊泡和/或抑制囊泡生长。在具体实施方案中，细胞为哺乳动物细胞，例如为犬肾细胞或人肾细胞。在一些具体的实施方案中，槲皮素明显抑制犬肾细胞(MDCK)囊泡形成和生长，且呈剂量效应关系。实验表明，槲皮素无细胞毒性作用，其抑制囊泡形成和生长的作用与其细胞毒性无关。

在一些实施方案中，本申请的槲皮素或其药学上可接受的盐或者包含槲皮素或其药学上可接受的盐的药物组合物能够用于降低个体的肾脏囊肿程度。在具体实施方案中，所述个体患有多囊肾病，例如ADPKD。

在一些实施方案中，本申请的槲皮素或其药学上可接受的盐或者包含槲皮素或其药学上可接受的盐的药物组合物能够用于降低个体的肾脏体重比。在具体实施方案中，所述个体患有多囊肾病，例如ADPKD。在具体的实施方案中，肾脏体重比的计算公式为：双侧肾脏重量(g)/体重(g)。

在一些实施方案中，本申请的槲皮素或其药学上可接受的盐或者包含槲皮素或其药学上可接受的盐的药物组合物能够用于降低个体的肾脏囊肿指数。在具体实施方案中，所述个体患有多囊肾病，例如ADPKD。在具体的实施方案中，肾脏囊肿指数为肾脏囊肿区域面积的总和与肾脏面积的比值。

本申请所述的“个体”，是指包含鸟类、爬行类和哺乳类的动物。在一些实施方案中，所述动物是哺乳动物，包括灵长类和非灵长类动物，例如人、黑猩猩、牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫，以及诸如大鼠和小鼠的啮齿类动物。

本说明书和权利要求书中，词语“包括”、“包含”和“含有”意指“包括但不限于”，且并非意图排除其他部分、添加物、组分、或步骤。

应当理解，以上详细描述仅为了使本领域技术人员更清楚地了解本申请的内容，而并非意图在任何方面加以限制。本领域技术人员能够对所述实施方案进行各种改动和改变。

实施例

提供以下实施例仅是对本申请的一些实施方案进行举例说明，没有任何限制的目的或性质。

下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1：槲皮素对囊泡形成和生长的抑制作用

1.囊泡形成抑制实验

犬肾细胞(MDCK)在含有佛司可林(forskolin)的三维基质胶中培养可形成囊泡，并可持续生长，其囊泡特性与多囊肾病囊泡的特性相似，是筛选治疗肾囊肿性疾病的有效化合物并进行药理学活性评价的最佳体外模型。

首先将对数生长期的MDCK细胞(购自中国科学院上海生命科学研究院，商品目录号GNO23)制成细胞混悬液，在24孔板中每孔给予0.4ml含1000个左右细胞的混悬液，混悬液成分包括2.655×的MEM培养液、3.2mg/ml基质胶(PureCol,Advanced BioMatrix)、1MHEPES、5％NaHCO₃、1N NaOH、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素。30分钟后，含基质胶的混悬液凝固，每孔给予0.75ml含10μM佛司可林(购自Sigma公司，货号F6886)或者含10μM佛司可林和槲皮素(购自Sigma公司，货号Q4951)的DMEM与F-12混合培养液(1:1)(购自HyClone公司，货号SH30023.013)，培养12天。每天更换新鲜培养液以维持药物活性，每组设3个复孔。在培养第12天计数圆形囊泡和非囊泡细胞集落，计算囊泡数占总细胞集落(囊泡和非囊泡集落)数的百分率，以此评价待测药物对囊泡形成的抑制作用。囊泡的形成如图2所示，在佛司可林的持续刺激下，囊泡不断增大。槲皮素对MDCK囊泡形成的抑制作用如图3所示，结果显示槲皮素可以明显减少佛司可林诱导的MDCK的囊泡数目，说明槲皮素对MDCK囊泡形成具有明显的抑制作用。

2.囊泡生长抑制实验

MDCK细胞在三维基质胶中可形成细胞集落，若给予佛司可林刺激可形成圆形囊泡，且囊泡不断增大。在给予佛司可林刺激的同时分别给予2.5x10^-6M、5x10^-6M和1x10^-5M的槲皮素，共同培养细胞。每天更换新鲜培养液以维持药物活性。分别在培养第4天、第6天、第8天、第10天对囊泡进行原位跟踪照相并测量囊泡直径以评价槲皮素抑制囊泡生长的效果。每组设3个复孔，每孔计数10个以上囊泡并作囊泡生长曲线。槲皮素对囊泡生长的抑制作用如图4所示。图4A表示仅用含10μM佛司可林的培养液培养的结果，图4B表示用含2.5x10^-6M的槲皮素和10μM佛司可林的培养液培养的结果，图4C表示用含5x10^-6M的槲皮素和10μM佛司可林的培养液培养的结果，图4D表示用含1x10^-5M的槲皮素和10μM佛司可林的培养液培养的结果。槲皮素对囊泡生长的抑制作用曲线如图5所示，以上结果表明，槲皮素能够明显抑制囊泡的生长。

实施例2：槲皮素的细胞毒性作用测定

通过CCK-8法确定槲皮素对细胞有无毒性作用。

首先将对数生长期的MDCK细胞悬液接种于96孔培养板(8x10³个细胞/孔)，每孔给予100μl DMEM/F12(1:1)培养液，置于37℃、5％CO₂培养箱中培养24小时。用含0.4％FBS的混合培养基同步化12小时。弃去旧培养液，然后在96孔板中加入分别含0、2.5x10^-6M、5x10^{- 6}M、1x10^-5M以及2x10^-5M浓度的槲皮素的新鲜培养液，继续培养24小时，每孔给予10μl CCK-8检测液，并于37℃避光孵育60分钟。酶标仪检测各孔的OD值(检测波长为450nm)。设置调零孔(包含培养基和CCK-8)和对照孔(包含细胞、相同浓度化合物的溶解介质、培养基和CCK-8)，每组设定6个复孔，实验重复三次。槲皮素的细胞毒性的测定结果如图6所示，结果表明，1x10^-5M及其以下浓度的槲皮素对MDCK细胞无细胞毒性作用，说明槲皮素对囊泡的形成和生长的抑制与其细胞毒性无关。

实施例3：槲皮素对体内多囊肾发展的抑制作用

利用Ksp-Cre；Pkd1^f/f小鼠模型确定槲皮素对多囊肾发展的抑制作用。

Ksp-Cre；Pkd1^f/f小鼠是利用Cre-loxp系统建立的条件性肾脏敲除Pkd1的小鼠模型，其可产生与人类常染色体显性遗传型多囊肾病类似的临床症状，Ksp-Cre；Pkd1^f/f小鼠早期在出生后20天前死于肾衰竭，而同窝的Pkd1^f/f小鼠则表型正常，结果如图7所示。因此Ksp-Cre；Pkd1^f/f小鼠可作为ADPKD动物模型。

1.Ksp-Cre；Pkd1^f/f小鼠模型的基因鉴定

Ksp-Cre；Pkd1^f/+小鼠由北京大学基础医学院药理学系赠与。

提取小鼠脚趾基因组，以其为模板，分别对Pkd1基因和Cre基因进行PCR鉴定，其中针对Pkd1基因的PCR所用引物序列如下：

5’-CCGCTGTGTGTCTCAGTGTCTG-3’(SEQ ID NO.:1)；

5’-CAAGAGGGCTTTTCTTGCTG-3’(SEQ ID NO.:2),

针对Cre基因的PCR所用引物序列如下：

5’-CCGGGCTGCCACGACCAA-3’(SEQ ID NO.:3)；

5’-GGCGCGGCAACACCATTTTT-3’(SEQ ID NO.:4)

当用针对Pkd1基因的两条引物进行PCR扩增时，如果得到大小为400bp和200bp的两个条带，则对应的子代小鼠的Pkd1-LoxP基因杂合(Pkd1^f/+)，如果得到大小400bp的单一条带，则对应的子代小鼠的Pkd1-LoxP基因纯合(Pkd1^f/f)；当用针对Cre基因的两条引物进行PCR扩增时，如果得到大小为400bp条带，则对应的子代小鼠表达Ksp-Cre，如果没有400bp的条带，则对应的子代小鼠不表达Ksp-Cre。结果如图8所示，图A中的Pkd1^f/f为Pkd1-LoxP基因纯合，图B中的Ksp-Cre为小鼠可表达Ksp-Cre。经过以上鉴定，子代小鼠中得到的Pkd1-LoxP基因纯合，同时可表达Ksp-Cre，即为Ksp-Cre；Pkd1^f/f小鼠。

2.槲皮素对Ksp-Cre；Pkd1^f/f小鼠的处理和作用效果

以Ksp-Cre；Pkd1^f/f小鼠作为ADPKD动物模型，来研究槲皮素对多囊肾病的作用。

实验方法

1.实验分组及处理

槲皮素溶液：用DMSO溶解槲皮素，终浓度为100mg/ml。

分组及处理：实验分为对照组和治疗组，每组7只Ksp-Cre；Pkd1^f/f小鼠。从小鼠出生后第4天开始到出生后第10天，连续7天给药，给药方式为背部皮下给药，治疗组每只小鼠每天给药剂量为200mg/kg体重，对照组小鼠每天注射等体积的DMSO。

2.各组小鼠治疗情况分析

(1)HE染色分析两组小鼠的肾囊肿表型

在小鼠出生后第10天，处死小鼠并摘除双侧肾脏。用电子天平精确称重，计算肾脏体重比(g/g)，即双侧肾脏重量(g)/体重(g)。随后用10％中性福尔马林溶液固定48小时，然后梯度乙醇脱水，用石蜡包埋机常规包埋，随后将蜡块切片并进行HE染色。

上述脱水、包埋、切片及HE染色的具体操作步骤如下所述。

A.脱水和包埋的具体步骤为：

①70％乙醇中脱水1h→75％乙醇中静置1h→80％乙醇中静置1h→85％乙醇中静置1h→90％乙醇中静置1h→95％乙醇中静置1h→100％乙醇中静置1h→二甲苯中静置15min×2；

②包埋：石蜡包埋机进行包埋。

B.切片的具体步骤为：

将肾脏蜡块在轮转式切片机上切成3μm厚度的连续肾组织切片，用毛笔轻轻扶起，在42℃温水中将其充分展开，再用病理级粘附玻片捞起肾组织切片，60℃恒温烘烤2小时，以使组织切片与玻片紧密粘连，置于盒中备用。

C.HE染色的原理以及具体步骤

HE染色的原理：苏木素染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着粉色。

HE染色的步骤：二甲苯Ⅰ(65℃)中静置2分钟→二甲苯Ⅱ(65℃)中静置2分钟→二甲苯Ⅲ(室温)中静置2分钟→无水乙醇中静置1分钟→95％乙醇Ⅰ中静置1分钟→95％乙醇Ⅱ中静置1分钟→水洗→苏木素中静置2分钟→水洗→1％HCl分化→水洗→Li₂CO₃饱和溶液蓝化→水洗→85％乙醇中静置1分钟→伊红中静置2分钟→80％乙醇中静置1分钟→90％乙醇中静置1分钟→95％乙醇中静置1分钟→无水乙醇Ⅰ中静置2分钟→无水乙醇Ⅱ中静置2分钟→二甲苯Ⅰ中静置1分钟→二甲苯Ⅱ中静置1分钟→二甲苯Ⅲ中静置1分钟。

中性树胶封片，用数字切片扫描系统(Olympus VS120)进行扫描，分析结果。

(2)两组小鼠的肾囊肿指数的分析

将对照组和治疗组两组小鼠HE染色的肾脏切片扫描后，应用Image-Pro Plus软件计算肾脏囊肿区域的面积总和与肾脏面积，并计算两者的比值，计算结果即为肾脏囊肿指数。

实验结果

1.两组小鼠的肾囊肿表型

HE染色结果如图9所示，从图中可以看出，治疗组小鼠与对照组小鼠相比具有更多的肾实质。

2.两组小鼠的肾脏囊肿指数

两组小鼠的肾脏囊肿指数测定结果如图10所示，相比对照组小鼠，治疗组小鼠的肾脏囊肿指数显著降低(p＝0.008)，具有明显的统计学差异。

本实施例的实验结果表明，槲皮素显著抑制了肾脏囊肿的发展，能够用于治疗多囊肾病，如常染色体显性遗传型多囊肾病。

在不偏离本申请公开的实质和范围的情况下，可对本申请公开的各实施方案进行多种改变和等同替换。除非上下文中另有说明，否则本公开的实施方案的任何特征、步骤或实施方案都可以与任何其他特征或实施方案组合使用。

序列表

<110> 印小星

孙莹

朱杨杨

杨宝学

滕田

<120> 包含槲皮素的药物组合物及其用途

<130> 17C10214CN

<160> 4

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

ccgctgtgtg tctcagtgtc tg 22

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

caagagggct tttcttgctg 20

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

ccgggctgcc acgaccaa 18

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

ggcgcggcaa caccattttt 20

Claims (10)

1.槲皮素或其药学上可接受的盐或者包含所述槲皮素或其药学上可接受的盐的组合物在制备用于治疗或预防个体的肾囊肿性疾病的药物中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其中所述肾囊肿性疾病为多囊肾病。

3.如权利要求2所述的用途，其中所述多囊肾病为常染色体显性遗传型多囊肾病。

4.如权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述槲皮素或其药学上可接受的盐和/或所述槲皮素或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体一起被配制成药学上可接受的剂型，优选为注射剂、口服液、胶囊、片剂、颗粒剂。

5.如权利要求1-4任一项所述的用途，其中所述药物经皮下、口服、肌肉内或腹腔内给药。

6.如权利要求5所述的用途，其中所述药物经皮下给药。

7.如权利要求1-6任一项所述的用途，其中所述槲皮素或其药学上可接受的盐的给药剂量为每天给予100-250mg/kg体重，优选为200mg/kg体重。

8.如权利要求1-7任一项所述的用途，其中所述治疗或预防个体的肾囊肿性疾病包括抑制个体的肾脏囊泡形成和/或生长、降低个体的肾脏囊肿程度、降低个体的肾脏体重比和/或降低个体的肾脏囊肿指数。

9.如权利要求1-8任一项所述的用途，其中所述个体为哺乳动物，包括非灵长类和灵长类动物。

10.治疗肾囊肿性疾病的组合物，其包含抑制肾脏囊肿的活性成分，以及药学上可接受的载体，其中所述活性成分包含槲皮素或其药学上可接受的盐。